Made available in DSpace on 2016-08-15T20:31:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JoselenaMF_DISSERT.pdf: 1780661 bytes, checksum: 4b3479303097e19fd07024f10fea488f (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Surveys of propolis have shown how this product has the potential for various therapeutic purposes. However, it has been found that this resin has a variability of compounds and biological activities depending on their place of origin, due to differences in vegetation from one location to another. The objective of this study was to verify the organoleptic, physico-chemical, and antimicrobial and antioxidant activity of propolis produced in different cities in the state of Rio Grande do Norte (Mossoró, Areia Branca, Alto do Rodrigues, Afonso Bezerra and Cerro Cora). Was identified the months of highest production in the apiaries of Mossoró and Alto do Rodrigues and variations in their properties to be assessed in two different periods of the year (post- rainy and dry). The propolis samples were collected in the five apiaries, each with 9 beehives of Langstroth type containing colonies of Apis mellifera bees. The method of production occurred after the introduction of a wooden bar with dimensions of 370 x 20 x 20 mm in the front and one at the rear, between the nest and the supers, creating a space of approximately 20 mm on each side where propolis produced was collected. After harvesting, the propolis samples were weighed, evaluated when the organoleptic characteristics (color and consistency) and stored in a freezer. For extraction in ethanol, were made set of propolis samples collected from colonies per apiary, 4 for sample Mossoró, 2 of Alto do Rodrigues, one of Areia Branca and 1 Afonso Bezerra and 1 Cerro Cora, totaling 9 sets sample. Thereupon, ethanolic extracts were made to quantify these phenols, flavonoids, total waxes, antimicrobial and antioxidant activities. For the antioxidant, free radical DPPH tests were performed and β-carotene system / linoleic acid. In the evaluation of the antimicrobial activity, the extracts were tested on the bacteria Staphylococcus aureus and Escherichia coli. Propolis of the county Alto do Rodrigues had the highest means of production compared to the apiary in Mossoró. The extracts showed significant results in all tests, with makeup and diverse biological activity. Seven of the nine samples analyzed possessed levels of waxes according to the required by law. There was a significant correlation between the levels of waxes and total phenolic content (R2> 0.5). Samples of propolis Afonso Bezerra and Mossoro had higher levels of flavonoids commonly found in the Brazilian propolis samples. The High extracts of Rodrigues, Afonso Bezerra and Mossoro were more promising in physical chemistry evaluation and antioxidant and antimicrobial activity. The antioxidant activity of the sample Alto do Rodrigues (52%) along with the sample Areia Branca (75%) had the highest percentage by methods DPPH system and β-carotene / Linoleic acid, respectively. The antimicrobial activity tests to S. aureus and E. coli, samples of Alto do Rodrigues and Afonso Bezerra performed better in antimicrobial activity, for having formed halos of inhibition at all concentrations tested in both the strains. In general, the samples had diverse biological activity and physical-chemical profile / As pesquisas com a própolis têm demonstrado o quanto esse produto tem potencial para diversos fins terapêuticos. No entanto, já foi verificado que essa resina possui uma variabilidade de compostos e atividades biológicas dependendo do seu local de origem, devido a diferenças nas vegetações de um local para outro. O objetivo deste estudo foi verificar as características organolépticas, físico-químicas, e as atividades antimicrobiana e antioxidante da própolis produzida em diferentes cidades do estado do Rio Grande do Norte (Mossoró, Areia Branca, Alto do Rodrigues, Afonso Bezerra e Cerro Corá). Foi identificado os meses de maior produção nos apiários de Mossoró e Alto do Rodrigues e as variações em suas propriedades ao serem avaliadas em dois períodos distintos do ano (pós-chuvoso e seco). As amostras de própolis foram coletadas nos cinco apiários, cada um com 9 colmeias do tipo Langstroth contendo colônias de abelhas Apis mellifera. O método de produção ocorreu a partir da introdução de uma barra de madeira com dimensões de 370 mm x 20 mm x 20 mm na parte frontal e outra na traseira, entre o ninho e a melgueira, criando um espaço de aproximadamente 20 mm nas duas laterais, onde a própolis produzida foi coletada. Após as coletas, as amostras de própolis foram pesadas, avaliadas quando as características organolépticas (cor e consistência) e armazenadas em freezer. Para a extração em etanol, foram feitos conjunto de amostras das própolis coletadas das colônias por apiário, sendo 4 para amostras de Mossoró, 2 de Alto do Rodrigues, 1 de Areia Branca e 1 de Afonso Bezerra e 1 de Cerro Corá, totalizando 9 conjuntos amostrais. Logo após, foram feitos extratos etanólicos destes para quantificação de fenóis, flavonóides, ceras totais, atividades antimicrobiana e antioxidante. Para a atividade antioxidante, foram realizados os testes do radical livre DPPH e o sistema β-caroteno/ácido linoleico. Na avaliação da atividade antimicrobiana, os extratos foram testados frente às bactérias Staphylococcus aureus e Escherichia coli. A própolis do município de Alto do Rodrigues obteve maiores médias de produção quando comparada a do apiário em Mossoró. Os extratos apresentaram resultados significativos em todos os testes, com composição e atividade biológica diversificada. Sete das nove amostras avaliadas possuíram teores de ceras de acordo com o exigido pela legislação. Houve correlação significativa entre os níveis de ceras e os teores de fenóis totais (R2 > 0,5). As amostras de própolis de Afonso Bezerra e Mossoró apresentaram níveis de flavonóides superior aos comumente encontrados em amostras de própolis brasileiras. Os extratos de Alto do Rodrigues, Afonso Bezerra e Mossoró foram mais promissores na avaliação físico-química e atividade antioxidante e antimicrobiana. Na atividade antioxidante, a amostra de Alto do Rodrigues (52%), juntamente com a amostra de Areia Branca (75%) obtiveram os melhores percentuais pelos métodos do DPPH e sistema β-caroteno/ácido linoleico, respectivamente. Nos testes de atividade antimicrobiana frente à S. aureus e E.coli, as amostras de Alto do Rodrigues e Afonso Bezerra tiveram um melhor desempenho na atividade antimicrobiana, por terem formado halos de inibição em todas as concentrações testadas em ambas às cepas. Em geral, as amostras apresentaram atividade biológica e perfil físico-químico diversificado

Red Propolis northeastern Brazil (Alagoas, Brazil) has been widely studied for their biological activity against parasites, microorganisms. The composition of propolis varies according to geographic region and seasonality. Currently only isoflavanas, isoflavones and some propolones / guttiferones identified in propolis in Alagoas. The aim of this study was to apply modern methods of analysis of fingerprinting and screening (Screening), using LC-Orbitrap-FTMS in combination with MZmine software for extracting data from molecular ions to carry out such studies of propolis. Four propolis samples collected in two different towns of state of Alagoas and two of Pernambuco -. Brazil in the month of June / July 2012 The 2 samples of red propolis originating Alagoas (5.0 g) were subjected to extraction with ethanol to obtain their crude extracts, the remaining sample were already sold in the form of crude extract. The extracts solubilized in ethanol, diluted to a concentration of 1mg/mL, and injected directly into the LC-Orbitrap-FTMS, MS data extracted using the software MZmine 02.10. The precise masses of the components of the extracts compared with a database of online data. The LC-FTMS analysis combined with extraction and search database online with MZmine showed the presence of over 2,000 ion in the extract but only 210 could be a probable identification. In the Histogram, analysis showed phenolic groups/chalcones acids; isoflavones/isoflavans/ pterocarpans; propolones/guttiferones/bflavonoids specific mass of bands of common substances such as propolis, present as major compounds. Samples showed differences in the chemical profile, but all showed a high frequency of propolonas, isoflavones, terpenes and guttiferones / terpenosideos. Software MZmine and techniques of LC-FTMS and are extremely applicable for the testing fingerprint and identification of new phenolic compounds, not idetificavéis by conventional techniques phytochemical present in complex matrices. / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Alagoas / A Própolis vermelha do nordeste brasileiro (Alagoas, Brasil) tem sido amplamente pesquisada por sua atividade biológica contra diversos tipos de microrganismos. A composição da própolis varia de acordo com a região geográfica e a sazonalidade. Atualmente isoflavonoides e algumas propolonas/guttiferonas foram identificados na própolis vermelha de Alagoas. O objetivo deste estudo foi aplicar métodos modernos de análise de Impressão digital e triagem (Screening), usando LC-Orbitrap-FTMS em combinação com o software MZmine para a extração de dados dos íons. Quatro amostras de própolis foram coletadas: duas na cidade Marechal Deodoro no estado de Alagoas e duas na cidade de Igarassu no estado de Pernambuco – Brasil durante o mês de Junho/Julho de 2012. As amostras de Própolis vermelha de Alagoas, cinco gramas de cada amostra, foram submetidas a extração com etanol para obtenção de seus extratos brutos, as demais foram cedidas sob a forma de extrato bruto. Os extratos foram solubilizados em etanol e diluídos para a concentração de 1mg/mL e injetados diretamente no LC-Orbitrap-FTMS. Os dados de MS foram extraídos usando o software MZmine 2.10. As Massas exatas dos componentes dos extratos foram comparadas com um banco de dados on-line. A análise de LC-FTMS combinada com extração e pesquisa em banco de dados on-line com MZmine demonstrou presença de mais de 2.000 íons no extrato, onde 210 puderam ter uma identificação provável. A análise do Histograma de frequência íons mostrou agrupamentos de ácidos fenólicos/chalconas; isoflavonoides/ isoflavanas/pterocarpanos; propolonas/guttiferonas/ biflavonoides em faixas de massas específicas como substâncias comuns a própolis vermelha e presentes como substâncias majoritárias. Apesar das amostras apresentarem diferenças no perfil químico, todas continham alta frequência dos agrupamentos vistos no histograma. O software MZmine e as técnicas de LC-FTMS são extremamente aplicavéis para identificação de novos compostos fenólicos, não idetificavéis por técnicas convencionais de fitoquímica presentes em matrizes complexas.

Submitted by MELYNA MARQUES DE ALMEIDA (melyna.almeida@gmail.com) on 2016-05-02T11:46:04Z No. of bitstreams: 1 Versão final 18-04-2016.pdf: 3201486 bytes, checksum: dfb6438b759c1eff830f342f90b4860a (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-05-02T11:51:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 almeida_mm_me_araca.pdf: 3201486 bytes, checksum: dfb6438b759c1eff830f342f90b4860a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-02T11:51:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 almeida_mm_me_araca.pdf: 3201486 bytes, checksum: dfb6438b759c1eff830f342f90b4860a (MD5) Previous issue date: 2016-03-11 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Na avulsão dentária ocorre o rompimento do feixe vásculo-nervoso que nutre a polpa e, após o reimplante tardio, existe a necessidade do tratamento endodôntico. A pasta de hidróxido de cálcio (Ca (OH)2) é a medicação intracanal mais empregada em razão de suas excelentes propriedades biológicas, porém várias substâncias têm sido associadas a este na tentativa de melhorar a sua ação antimicrobiana. O objetivo do estudo foi avaliar o efeito do uso de curativo intracanal de hidróxido de cálcio (Ca (OH)2) associado à própole a 10% seguida da agitação ultrassônica em reimplante tardio de dentes de rato. Vinte e quatro ratos tiveram o incisivo superior direito extraído e deixado em bancada por uma hora. Em seguida, foram removidos: papila dentária, polpa dentária e ligamento periodontal. Os dentes foram imersos em solução de fluoreto de sódio fosfato acidulado a 2%. Na sequencia os canais radiculares foram secos e os animais divididos em quatro grupos experimentais: Grupo Ca (OH)2, Grupo Ca (OH)2 seguido da agitação ultrassônica, Grupo Ca(OH)2 e própole, Grupo Ca(OH)2 e própole seguido da agitação ultrassônica. Após a colocação do curativo, foi confeccionado um plug apical de MTA. Os alvéolos foram irrigados com soro fisiológico e os dentes reimplantados. Decorridos 60 dias do reimplante, os animais sofreram eutanásia. Quanto ao infiltrado inflamatório agudo no ligamento periodontal, houve diferença estatisticamente significante entre os grupos Ca(OH)2 e Ca(OH)2 e própole. Com relação ao infiltrado inflamatório crônico no ligamento periodontal, houve diferença significante entre os grupos Ca(OH)2 seguido da agitação ultrassônica e Ca(OH)2 e própole. A reabsorção radicular estava presente em todos os grupos sem diferença estatística. Conclui-se que o uso do curativo intracanal de hidróxido de cálcio associado à própole a 10% seguido da agitação ultrassônica não se mostrou mais efetivo que o Ca(OH)2 no processo de reparo do reimplante tardio de dentes de rato.

Rica em compostos bioativos, a própolis é amplamente utilizada na medicina alternativa como agente preventivo e/ou terapêutico. Neste trabalho, avaliamos o impacto de frações ricas em polifenóis de diferentes própolis no processo de angiogênese na aterosclerose. Foram utilizadas as seguintes amostras de própolis: Red (vermelho, Alagoas-Brasil), Green (verde, Minas Gerais-Brasil) e Brown (marrom, Temuco-Chile), com concentrações semelhantes de polifenóis totais (~32%), porém com diferentes perfis de compostos fenólicos. A suplementação (250 mg/Kg/dia) de camundongos knockout para o receptor de LDL (LDLr-/-) com os polifenóis demonstrou que no protocolo de lesão inicial (LI) os grupos suplementados apresentaram menor (p<0,05) área de lesão (Green, 726&#181;m2; Red, 519&#181;m2; Brown, 698&#181;m2) em relação ao controle (GC, 1184&#181;m2). Em contraste, no protocolo de lesão avançada (LA) apenas o grupo Red (1082&#181;m2) apresentou menor (p<0,05) área de lesão em relação ao GC (1598&#181;m2). Em ambos os protocolos (LI e LA) observou-se redução (p<0,05) na expressão de importantes genes envolvidos no processo de angiogênese (VEGF, MMP9, PDGF e PECAM). No entanto, apenas o grupo tratado com a própolis Red foi capaz de aumentar (p<0,05) a expressão de TIMP-1 no protocolo de LI. Todos os tratamentos inibiram (p<0,05), em cerca de 45%, a migração de células endoteliais (CE), bem como cerca de 55% do brotamento de tubos de anéis de aorta, em relação ao controle e ao redor de 50% da formação de novos vasos na membrana corioalantóica de embrião de galinha (CAM). Ao investigar o mecanismo de ação dos polifenóis, observamos que os polifenóis da própolis Red (PRP) mostraram-se mais eficazes em modular a expressão do Fator induzido por Hipóxia-1 alfa (HIF-1&#945;), de modo dose/tempo dependente em células endoteliais. Adicionalmente, os polifenóis da própolis Red (PRP) reduziram a expressão de genes alvos regulados por HIF-1&#945; como GLUT-1 e ADM, além de inibir a expressão gênica e a secreção de VEGF em meio de cultura. Em presença dos PRP, a degradação de HIF-1&#945; foi exarcebada e, utilizando-se células RCC4/pVHL (células de carcinoma renal com VHL reintroduzido), observou-se que PRP induzem a desestabilização de HIF-1&#945; acelerando sua degradação dependente de pVHL. Em células endoteliais, pVHL foi superexpresso devido à inibição de Cdc42, um repressor de pVHL. Conclui-se que os polifenóis oriundos das própolis Green, Red e Brown possuem potencial anti-aterogênico através da inibição da expressão de moléculas inflamatórias e angiogênicas, principalmente quando suplementados ao início do desenvolvimento da lesão aterosclerótica. Além disso, os polifenóis da própolis Red inibem o processo de angiogênese, aumentando a desestabilização de HIF-1&#945; pelo aumento da degradação via pVHL e induzindo sua expressão em função da repressão de Cdc42. / Propolis is rich in bioactive compounds and widely used in alternative medicine as a preventive agent and/or in therapy. We evaluate the impact of polyphenol-rich fractions of propolis from different origins and types in the angiogenesis process in atherosclerotic lesions. The following samples of propolis were used: Red (red, Alagoas, Brazil), Green (green, Minas Gerais, Brazil) and Brown (brown, Temuco, Chile), with similar concentrations of total polyphenols (~ 32%) but with different profiles of phenolic compounds. Supplementation (250 mg / kg / day) of knockout mice for the LDL receptor (LDLr-/ -) with polyphenols showed that in the initial lesion (LI) protocol supplemented groups had lower (p<0.05) lesion area (Green, 726&#181;m2; Red, 519&#181;m2; Brown 698&#181;m2) compared to control (GC, 1184&#181;m2). In contrast, in the advanced lesions (LA) protocol only the Red group (1082&#181;m2) had smaller lesion area (p<0.05) compared to GC (1598&#181;m2). In both protocols (LI and LA) a reduction (p<0.05 of important genes expression involved in angiogenesis (VEGF, MMP9, PDGF and PECAM) was observed. However, only the group treated with Red propolis was able to increase (p <0.05) the expression of TIMP-1 in the LI protocol. The treatments with all types of propolis inhibited (p<0.05), about 45% the migration of endothelial cells (EC), approximately 55% of tubes formation in aortic rings and almost 50% of formation of new vessels in the chorioallantoic membrane of chick embryo (CAM) compared to the control. While investigating the mechanism of polyphenols action, it was found that polyphenols from Red propolis (PRP) were more effective in modulating the expression of hypoxia-induced factor-1 alpha (HIF-1&#945;) in a dose/time dependent way in EC. Additionally, the polyphenols from red propolis (PRP) reduced the expression of target genes regulated by HIF-11&#945; as GLUT-1, ADM, VEGF besides the VEGF protein secretion in the EC culture medium. In the presence of PRP, the degradation of HIF-11&#945; was exacerbated in RCC4/pVHL cells (renal cell carcinoma with VHL reintroduced); moreover, PRP induced destabilization of HIF-11&#945; accelerating the degradation of this transcription factor by a pVHL-dependent patway. In EC, pVHL was over expressed by inhibition of Cdc42, a repressor of pVHL. We conclude that the polyphenols from Green, Red and Brown propolis have anti-atherogenic potential by inhibiting the expression of angiogenic and inflammatory genes, especially when supplemented at an early stage of the atherosclerotic lesion development. In addition, the polyphenols from Red propolis inhibit the angiogenesis process by increasing the destabilization of HIF-11&#945; via over expression of pVHL-degradation induced by repressed Cdc42 function.

Submitted by JOÃO EMMANUEL RIBEIRO GUIMARÃES null (extensao@feituverava.com.br) on 2016-08-02T19:17:30Z No. of bitstreams: 1 TESE FINAL.docx: 2614804 bytes, checksum: a139a52a90fe92755ccac9e4b609eb0c (MD5) / Rejected by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: A versão final da dissertação/tese deve ser submetida no formato PDF (Portable Document Format). O arquivo PDF não deve estar protegido e a dissertação/tese deve estar em um único arquivo, inclusive os apêndices e anexos, se houver. Por favor, corrija o formato do arquivo e realize uma nova submissão. Agradecemos a compreensão. on 2016-08-02T19:33:29Z (GMT) / Submitted by JOÃO EMMANUEL RIBEIRO GUIMARÃES (jerguimaraes@uol.com.br) on 2016-08-02T19:38:17Z No. of bitstreams: 1 TESE FINAL.pdf: 2357812 bytes, checksum: aa12a27f8cac4f4de61f6f2ccb80c925 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-08-03T17:17:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 guimaraes_jer_dr_jabo.pdf: 2357812 bytes, checksum: aa12a27f8cac4f4de61f6f2ccb80c925 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-03T17:17:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 guimaraes_jer_dr_jabo.pdf: 2357812 bytes, checksum: aa12a27f8cac4f4de61f6f2ccb80c925 (MD5) Previous issue date: 2016-07-01 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo do trabalho foi avaliar produtos alternativos, considerados naturais, como o extrato de própolis verde e óleos essenciais, no controle pós-colheita da antracnose em mangas ‘Palmer’. Foram extraídos dez óleos essenciais de plantas e avaliados, inicialmente, quanto ao potencial antifúngico contra o Colletotrichum gloeosporioides in vitro. Dentre os óleos testados, os de Thymus vulgaris, Cymbopogon citratus e Eucalyptus globulus foram selecionados pelos seus destacados efeitos inibitórios. Na etapa in vitro foram realizados quatro experimentos, em que foram testadas concentrações de extrato de própolis verde e dos óleos, utilizando seis repetições por tratamento. Na etapa in vivo, foram realizados quatro experimentos em que mangas ‘Palmer, foram imersas em cera associada a diferentes concentrações de extrato de própolis verde e dos três óleos essenciais selecionados na etapa anterior. Após a secagem e formação dos revestimentos, os frutos tratados com própolis foram armazenados 12 ºC por 12 dias e mais 3 dias em temperatura de ambiente (22± 2 ºC e 65± 5% UR), e os tratados com óleos essenciais por 14 dias sob refrigeração, e por mais 3 dias a temperatura de ambiente. Os resultados foram submetidos à análise de variância e o efeito dos tratamentos, quando significativo, por meio do Teste F. As médias foram comparadas pelo teste de Tukey (P≤0,05). O própolis verde a partir de 2%, o óleo de capim-limão a partir de 250 ppm e o de tomilho a partir de 10 ppm, se mostraram eficientes em controlar o crescimento do C. gloeosporioides in vitro. O óleo de eucalipto comum retardou, mas não inibiu o crescimento do C. gloeosporioides in vitro. Todos os óleos se mostraram eficientes em inibir a germinação de esporos de C. gloeosporioides. Os tratamentos com cera e cera associada aos óleos ou extrato de própolis reduziram o crescimento da lesão in vivo, sendo que a maior inibição (70%) do patógeno foi conseguida com o extrato de própolis verde na concentração de 2,5%. Todos os produtos testados se mostraram eficientes na manutenção da qualidade de frutos de mangas ‘Palmer’ inoculadas com C. gloeosporioides. / The objective was to evaluate alternative products, considered natural such as green propolis extract and essential oils, in the post-harvest control of anthracnose in 'Palmer' mangos. Ten essential oils from plants were extracted and evaluated, initially, for their potential as antifungal agents against Colletotrichum gloeosporioides in vitro. Among the oils tested, the Thymus vulgaris, Cymbopogon citratus and Eucalyptus globulus were selected for their outstanding inhibitory effects. In the in vitro stage four experiments were conducted, in which green propolis extract and oil concentrations were tested using six replicates per treatment. In the in vivo phase, four experiments were performed in which ‘Palmer’ mangos were dipped in wax associated with different concentrations of green propolis extract and the three essential oils selected in the previous step. After the drying process and formation of coatings, the fruits treated with propolis were stored at 12°C for 12 days and then another 3 days at room temperature (22 ± 2°C and 65 ± 5% RH), and those treated with essential oils were stored for 14 days under refrigeration and for 3 days at room temperature. The results were subjected to variance analysis and a review of the effect of treatments, when significant, by test F. Means were compared by Tukey test (p ≤ 0.05). The green propolis from 2%, lemongrass oil from 250 ppm and thyme from 10 ppm were effective in controlling the growth of C. gloeosporioides in vitro. Common eucalyptus oil was inhibited, but it did not inhibit the growth in vitro of C. gloeosporioides. The procedures with wax and associated wax with oil or propolis extract reduced the growth in vivo of the injury, and the greater inhibition (70%) of the pathogen was achieved with green propolis extract at 2,5% concentration. All products tested have proven effective in maintaining fruit quality of 'Palmer' mangos inoculated with C. gloeosporioides. / FAPESP: 2013/10397-5

Resumo: Foi avaliado o efeito do extrato hidroalcoólico de própolis (0,0; 0,2; 0,5; 1,0; e 1,5 %) misturado em ração comercial (45 % Proteína Bruta), em girinos de rã-touro. Foram utilizados 1400 girinos no estágio 26 da tabela de Gosner (1960), distribuídos em 20 tanques experimentais com 70 litros de água, na densidade de um girino por litro. O arraçoamento foi realizado quatro vezes ao dia. Para análise dos dados do ganho de peso, comprimento, sobrevivência, conversão alimentar, consumo de ração e metamorfose, foi utilizado um delineamento inteiramente casualizado com cinco tratamentos e quatro repetições. No final do experimento, foi colhido sangue do vaso caudal, de cinco girinos de cada repetição. A contagem diferencial de leucócitos foi realizada em extensões coradas pelo método de Rosenfeld (1947), em microscopia de luz. Foram contadas 100 células por lâmina. Para avaliar o efeito do extrato hidroalcoólico de própolis na porcentagem de leucócitos, usou-se um delineamento inteiramente casualizado com cinco tratamentos e três repetições. Para análise histológica no final do experimento foram sacrificados três girinos de cada repetição e retirada amostras do rim, fígado e intestino para lâminas histológicas. As amostras foram fixadas em formol, desidratadas em uma série de álcool, coradas com HE, analisadas e fotomicrografadas com fotomicroscópio Axiophot- Zeiss em microscópio óptico e medido com micrometro ocular a espessura do epitélio intestinal. Para análise estatística dos dados foi usado um delineamento inteiramente casualizado com cinco tratamentos e três repetições. A sobrevivência, consumo de ração, conversão alimentar e comprimento dos girinos, não foram influenciados pelo extrato hidroalcoólico de própolis. O ganho de peso foi influenciado significativamente (P < 0,05) observando-se... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The effect of the propolis hidroalcoolic extract was evaluated (0.0; 0.2; 0.5; 1.0; and 1.5 %) mixed to the commercial ration (45 % CP) in bullfrog tadpoles. 1,400 tadpoles were used at stage 26 (Gosner ,1960), distributed in twenty experimental tanks with 70 liters of water, in the density of one tadpole per liter. The feding was four times a day. For analysis of the data of the weight gain, length, survival, feed conversion, ration consumption and metamorphosis were used a completely randomized design with five treatments and four repetitions. In the end of the experiment, it was picked the blood of the vase flow, of five tadpoles of each repetition. The differential counting of leuccytes was accomplished in red-faced extensions by the method of Rosenfeld (1947), in light microscopia. To evaluate the effect of the propolis hidroalcoolic extract in the percentage of leucocytes, were used a completely randomized design with five treatments and three repetitions. They were counted 100 cells for sheet. For histological analysis in the end of the experiment three tadpoles of each repetition were sacrificed and samples of the kidney, liver and intestine were removed for you laminate histological. The samples were fastened in formol, dehydrated in one serializes of alcohol, red-faced with HE analyzed and fotomicrographed with fotomicroscópio Axioskop-Zeiss in optical and measured microscope with ocular micrometer the espessor of the intestinal epithelium. For statistical analysis of the data were used a completely randomized design with five treatments and three repetitions. The survival, ration consumption, feed conversion and length of the tadpoles, were not influenced by the propolis hidroalcoolic extract. The weight gain was influenced significantly (P< 0,05) being observed a worse in the tadpoles... (Complete abstract click electronic access below) / Orientadora: Marta Verardino Arauco / Coorientador: Laura Satiki Okada Nakaghi / Banca: Lucia Helena Vasques / Banca: Luís Gustavo Tavares Braga / Banca:Edanir dos Santos / Banca: João batista Kochenborger Fernandes / Doutor

Orientador: José Maurício Sforcin / Banca: Alexandrina Sartori / Banca: Sueli Calvo / Banca: Daniel Araki Ribeiro / Banca: Maria Lúcia Zaidan Gagli / Resumo: Não disponível. / Abstract: Several studies have shown that stress affects the immune system, promoting the progression of cancer. Since propolis is a honeybee product showing immunomodulatory and antitumoral activities, the goal of this work was to evaluate propolis effect on Th1 (IL-2 and IFN-) and Th2 (IL-4 and IL-10) cytokines' expression and production by melanoma-bearing mice submitted to immobilization stress. In groups without melanoma, stress did not affect IL-2, IL-4 and IL-10 gene expression. Propolis treatment of stressed animals did not influence these cytokines expression as well. On the other hand, IL-2 and IL-10 expression was inhibited in melanoma-bearing mice, stressed or not. Th1 cytokines production was also inhibited in melanoma-bearing mice. Propolis administration to melanoma-bearing mice submitted to stress stimulated IL-2 expression, as well as Th1 (IL-2 and IFN-) production, indicating the activation of antitumor cell-mediated immunity. Propolis also stimulated IL-10 expression and production, what may be related to immunoregulatory effects. Our data indicate that propolis showed an immunomodulatory activity in this assay, what may be related to its antitumoral action in vivo. Further investigation will help to understand propolis usefulness during stress. / Doutor

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC) causa a redução da capacidade respiratória e seu desenvolvimento é associado à fumaça de cigarro. O cigarro possui mais de 4800 substâncias tóxicas e causa a morte de seis milhões de pessoas por ano no mundo. Estudos buscam meios de reverter os males causados pela fumaça de cigarro. A própolis (P) é um produto produzido por abelhas que possui várias propriedades. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos antioxidantes da P em macrófagos murinos e na inflamação pulmonar aguda induzida pela fumaça de cigarro (CS) em camundongos. A análise dos compostos fitoquímicos do extrato alcóolico da P (EAP) foi feita por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massa (GC-MS). Células da linhagem RAW 264.7 foram tratadas em diversas concentrações de P durante 24 horas. Após tratamento, as seguintes análises foram realizadas: polifenóis totais; viabilidade celular (MTT); potencial redutor (DPPH); espécies reativas de oxigênio totais (ROS) e de malondialdeído (MDA). Trinta camundongos C57BL/6 foram divididos em 3 grupos (n=10/grupo): Controle+P, CS e CS+P. Ambos os grupos CS foram expostos a 6 cigarros/dia durante 5 dias. O grupo CS foi tratado com veículo. O pulmão e o lavado broncoalveolar (BAL) foram coletados para análise histológica e contagem diferencial de células. As análises para mieloperoxidase (MPO), superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx), glutationa reduzida (GSH) e oxidada (GSSG), MDA, nitrito e western blotting para TNF-alfa foram realizadas. A análise fitoquímica do EAP mostrou a presença dos ácidos hidrocinâmicos e coumárico, a artepilina C e a drupanina. Foi observado o aumento concentração-dependente dos níveis de polifenóis totais (p<0,001), do MTT (p<0,001) e do DPPH (p<0,001), e o inverso com o MDA (p<0,001). Os níveis de ROS diminuem nas concentrações de 15,6 e 31,2 mg/mL (p<0,05, ambos). A histologia pulmonar do grupo Controle+P foi similar ao do CS+P e foi observado um influxo de macrófagos e neutrófilos no grupo CS (p<0,01 e p<0,001, respectivamente). Os níveis de MPO foram aumentados no grupo CS (526,534,72 mU/mg ptn, p<0,01), mas houve uma redução no grupo CS+P (385,127,64 mU/mg ptn, p<0,05) comparável ao Controle+P (13412,99 mU/mg ptn, p<0,001), o mesmo aconteceu com as enzimas antioxidantes: SOD (Controle+P: 523,529,6 U/mg ptn; CS: 523,529,6 U/mg ptn, p<0,001; CS+P: 246,815,69 U/mg ptn, p<0,001); CAT (Controle+P: 37,383,39 U/mg ptn; CS: 92,686,24 U/mg ptn, p<0,001; CS+P: 59,844,55 U/mg ptn, p<0,05); GPx (Controle+P: 2,230,17 (M/min/mg ptn) x 10-1; CS: 4,510,31 (M/min/mg ptn) x 10-1, p<0,001; CS+P: 2,640,19 (M/min/mg ptn) x 10-1, p<0,05). O inverso ocorreu com a relação GSH/GSSG (Controle+P: 1,0880,17; CS: 0,7360,07, p<0,05; CS+P: 1,2580,10, p<0,05). Os níveis de MDA (Controle+P: 0,2660,05 nMol/mg ptn; CS: 0,940,076 nMol/mg ptn, p<0,001; CS+P: 0,4980,06 nMol/mg ptn, p<0,01) e de nitrito (Controle+P: 50,014,19 Mol/mg ptn; CS: 108,77,73 Mol/mg ptn, p<0,001; CS+P: 58,843,42 nMol/mg ptn, p<0,01) estavam aumentados no CS que em outros grupos. A expressão de TNF-&#945; foi observada no grupo CS. O tratamento da P apresentou ação anti-inflamatória e antioxidante em macrófagos e em camundongos expostos à fumaça de cigarro, possivelmente pela ação dos polifenóis presentes nela / Chronic obstructive pulmonary disease (DPOC) causes a respiratory capacity reduction and its development is be associated with cigarette smoke. Cigarette has more than 4800 toxic substances in your composition and it causes death of six million people in the world. Studies had been made to find methods to change cigarette-induced health problems. Propolis (P) has been reported as a natural product with several properties. Here, we used two types of experiments, in vitro and in vivo, to study the potential antioxidant use of P. Phytochemical analyze was made to evaluate which compounds are within P. Murine macrophages, RAW 264.7 cell line, are exposed to different concentrations of propolis and following analyses were made: total polyphenols levels; cell viability (MTT); reduction potential (DPPH); total reactive oxygen species levels (ROS) and malondialdehyde (MDA). Thirty C57BL6 mice were divided into 3 groups: Control+P, CS and CS+P. Both CS groups were exposed to 6 cigarettes per day for 5 days. CS group was treated with vehicle. Lung and bronchoalveolar lavage (BAL) were collected for histological analysis and differential cell counts. Analysis for mieloperoxidase (MPO), superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GPx), reduced glutathione (GSH), oxidized glutathione (GSSG), MDA, nitrite and western blotting for TNF-alpha were performed. Phytochemical analyses of P showed which possesses four main compounds: hydrocinnamic and coumaric acids; artepillin C and drupanin. P showed an increase in total polyphenols (p<0.001), cell viability (p<0.001) and DPPH levels (p<0.001) in concentration-dependent manner, different from MDA (p<0.001) which was inverse pattern. P decreased ROS levels in 15.6 and 31.2 mg/mL groups (p<0.05). Lung histology of Control+P group was similar to CS and CS+P groups, however significant inflammatory cell influx was observed in CS group. Propolis administration reduced significantly macrophages and neutrophils compared with CS group (p<0.01 e p<0.001, respectively). MPO levels was increased in CS (526.534.72 mU/mg ptn, p<0.01), but was shown to be reduced in CS+P (385.127.64 mU/mg ptn, p<0.05) compared with Control+P (13412.99 mU/mg ptn, p<0.001), similar pattern was found in antioxidant enzymes: SOD (Controle+P: 523.529.6 U/mg ptn; CS: 523.529.6 U/mg ptn, p<0.001; CS+P: 246.815.69 U/mg ptn, p<0.001), CAT (Controle+P: 37.383.39 U/mg ptn; CS: 92.686.24 U/mg ptn, p<0.001; CS+P: 59.844.55 U/mg ptn, p<0.05) and GPx (Controle+P: 2.230.17 (M/min/mg ptn) x 10-1; CS: 4.510.31 (M/min/mg ptn) x 10-1, p<0.001; CS+P: 2.640.19 (M/min/mg ptn) x 10-1, p<0.05) and different from GSH/GSSG ratio (Controle+P: 1.0880.17; CS: 0.7360.07, p<0.05; CS+P: 1.2580.10, p<0.05). MDA (Controle+P: 0.2660.05 nMol/mg ptn; CS: 0.940.076 nMol/mg ptn, p<0.001; CS+P: 0.4980.06 nMol/mg ptn, p<0.01) and nitrite levels (Controle+P: 50.014.19 Mol/mg ptn; CS: 108.77.73 Mol/mg ptn, p<0.001; CS+P: 58.843.42 nMol/mg ptn, p<0.01) increased in CS group when compared with other groups. TNF-&#945; expression was observed in CS only. P administration showed an antioxidant action in murine macrophages and reduced cigarette smoke-induced lung inflammation and oxidative stress, probably, by action of its phytochemical compounds actions

Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 6176997 bytes, checksum: 84882ba9517a6db053cc7c655b0e9d39 (MD5) Previous issue date: 2014-08-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Propolis is an heterogeneous mixture of substances, produced by melliferous bees from plants in close proximity with the bee´s hives. It is usually classified according to its botanical origin and chemical composition that vary according to geographical origin. Studies have shown that red propolis have physicochemical and biological properties that are diverse from other propolis types. There is a scarcety of studies with Brazilian red propolis, and no study with the red propolis from Igarassu (PE, Brazil), and thus its botanical origin, chemical characterization, and pharmacological activities have not been determined. The aim of this study was to perform a bioassay-guided fractionation of two propolis samples, collected from Igarassu, in order to determine the substances responsible for its antimicrobial, antioxidant, antileukemic and leishmanicidal activities, as well as its palynological profile. The samples of propolis were collected in Igarassu-PE, in natura, in May 2012 in two apiaries. They were submitted to palynological analyses to identify the pollen types and their frequency in the samples. Then, samples in natura were powdered, extracted with 96% ethanol and concentrated to obtain the crude ethanol extract. This extract was dissolved in a mixture of methanol:water (1:1, v/v) and partitioned with hexane and ethyl acetate, obtaining the hexane, ethyl acetate and hydroalcoholic fractions. The acetate fraction was submitted to column chromatography with Sephadex LH20 for isolation of the compounds. The propolis in natura was subjected to preliminary phytochemical screening. The ethanol extract was evaluated for identification of compounds by HPLC-MS. The propolis in natura, ethanol extract, hexane fraction, ethyl acetate and hydroalcoholic were submitted to HPLC analysis for identification and quantification of phenolic compounds. A total of 28 different pollen types belonging to 16 families and 30 genera were found in the samples. The most frequent were: Serjania and Dalbergia (sample 1 April 2011), Fabaceae 1 and Dalbergia (sample 2 April 2011), Stigmaphyllon (sample 1 and 2 May 2012). It was found the presence of flavonoids and steroids in propolis in natura. Twenty five compounds were identified in the crude ethanol extract of the samples 1 and 2. The major compounds belong to the class of flavonols, flavanas, isoflavones and prenylated benzophenones pterocarpans, demonstrating the usefulness of the technique of LC - Orbitrap - FTMS. The chemical profile of samples 1 and 2 of propolis are characterized by the presence of benzophenone. In propolis in natura, ethanol extract, hexane fraction, ethyl acetate and hydroalcoholic, we were able to identify and quantify 8 substances, 1 phenolic acid and 7 flavonoids. In the ethyl acetate fraction of sample 1 the isoflavone formononetin was isolated. It is observed that during the fractionation, starting from propolis in natura crushed to formononetin isolated substance, there was an increase in fungistatic power. It is observed that with fractionation, starting from propolis in natura to formononetin isolated substance, there was an increase in fungistatic power. Regarding antioxidant activity against DPPH radical, it was observed that all samples showed antioxidant power, with the exception of isolated formononetin. In descending order, in relation to antioxidant power, the most nonpolar samples had higher activity than polar samples. Both propolis in natura as crude ethanol extract showed strong activity against Leishmania promastigotes of L. amazonensis. The antileukemic activity on the cell line HL- 60 also increased with fractionation. / A própolis é uma mistura heterogênea de compostos e é produzida por abelhas a partir de vegetais encontrados próximos às colmeias. É classificada de acordo com a origem botânica e a composição química que pode variar entre as regiões. Estudos têm demonstrado que a própolis vermelha possui características físico-químicas e biológicas diferenciadas. No estado de Pernambuco, até o momento são poucos os trabalhos realizados com a própolis vermelha, e não há na literatura estudos com a própolis vermelha de Igarassu PE, com isso sua origem botânica, caracterização química e suas atividades farmacológicas, ainda não estão definidas. O objetivo deste estudo foi realizar um fracionamento biomonitorado de duas amostras de própolis vermelha, coletadas em Igarassu PE, a fim de determinar os compostos responsáveis pelas atividades antimicrobiana, antioxidante, antileucêmica e antileishmania, além de traçar um perfil palinológico. As amostras de própolis vermelha foram coletadas em Igarassu-PE, na forma in natura, em maio de 2012, em dois apiários. Foram submetidas à análise palinológica, para identificação dos grãos de pólen e dos tipos polínicos presentes. Em seguida, as amostras in natura foram trituradas, extraídas em etanol 96% e concentradas obtendo-se o extrato etanólico bruto seco. Esse extrato foi suspenso em uma mistura de metanol-água (1:1) e fracionado por separação líquido-líquido com hexano e acetato de etila, obtendo-se as frações hexânica, acetato de etila e hidroalcoólica. A fração acetato foi refracionada em coluna de Sephadex LH-20 para isolamento dos compostos. A própolis in natura foi submetida ao screening fitoquimico preliminar. O extrato etanólico foi avaliado para identificação dos compostos por CLAE-EM. A própolis in natura, extrato etanólico, frações hexânica, acetato de etila e hidroalcoólica foram submetidas a análise do perfil cromatográfico por CLAE, análise do perfil fenólico, identificação e quantificação de compostos fenólicos e avaliação das atividades farmacológicas. Nas amostras in natura, foram encontrados 28 tipos polínicos, pertencentes a 16 famílias e 30 gêneros botânicos. Os tipos polínicos que apareceram em maior frequência foram: Serjania e Dalbergia (amostra 1- abril de 2011), Fabaceae 1 e Dalbergia (amostra 2-abril de 2011), Stigmaphyllon (amostra 1 e 2-maio de 2012). Verificou-se a presença de flavonoides e esteroides na própolis in natura. Foram identificados 25 compostos no extrato etanólico bruto das amostras 1 e 2 de própolis vermelha, onde as principais substâncias identificadas pertencem à classe dos flavonols, flavanas, isoflavonas, pterocarpanos e benzofenonas preniladas, demonstrando a utilidade da técnica de LC - Orbitrap - FTMS. O perfil químico das amostras 1 e 2 de própolis vermelha são caracterizados pela presença de benzofenonas. Na própolis in natura, extrato etanólico, frações hexânica, acetato de etila e hidroalcoólica, foram identificadas e quantificadas 8 substâncias, sendo 1 ácido fenólico e 7 flavonoides. Na fração acetato de etila da amostra 1, foi isolada a isoflavona formononetina. Observa-se que ao longo do fracionamento, partindo da própolis in natura triturada até a substância isolada formononetina, houve um aumento no poder fungistático. Em relação a atividade antioxidante, medida pelo método de DPPH, observou-se que todas as amostras apresentaram poder antioxidante, com exceção da substância isolada. Em ordem decrescente, em relação ao poder antioxidante, as amostras mais apolares tiveram maior atividade que as amostras polares. Tanto a própolis in natura triturada assim como o extrato etanólico bruto apresentaram forte atividade antileishmania sobre as formas promastigotas de L. amazonensis. A atividade antileucêmica também aumentou ao longo do fracionamento, sobre a linhagem celular HL-60.

É crescente o interesse dos consumidores por produtos naturais com apelo funcional. Por isso tem se estudado novos veículos de liberação de compostos bioativos, como por exemplo, os filmes de desintegração oral. A própolis é uma fonte natural rica em compostos ativos, como por exemplo, os compostos fenólicos, que lhe confere atividade antimicrobiana e antioxidante. O colágeno hidrolisado pode apresentar diversos benefícios quando ingerido, como aumento da densidade óssea e representa uma boa fonte de peptídeos. Este trabalho teve como objetivo desenvolver e caracterizar os filmes de desintegração oral à base de gelatina aditivados com colágeno hidrolisado (CH) e extrato etanólico de própolis (EEP). Os filmes foram produzidos pela técnica de casting mantendo constante a massa de gelatina(mG) colágeno hidrolisado(mCH) em 2 g de mG+CH (g/100g de solução filmogênica), e a concentração de sorbitol em 30g (g/100g de mG+CH). Foram avaliadas diferentes concentrações de CH (0, 10, 20 e 30 g/100 g de mG+CH) e de EEP (0, 100 e 200 g /100 g de mG+CH). Os filmes foram caracterizados em relação à cor e opacidade, matéria total solúvel, umidade, propriedades mecânicas (tensão na ruptura e elongação), microscopia eletrônica de varredura, mucoadesividade, ângulo de contato, tempo de desintegração, grau de intumescimento, concentração de compostos fenólicos, liberação in vitro, cinética de liberação, calorimetria diferencial de varredura, espectroscopia de infravermelho com transforma de Fourier (FTIR), atividade antimicrobiana e estabilidade dos compostos fenólicos em função do tempo armazenamento. O aumento da concentração de CH provocou aumento significativo da solubilidade. Nas propriedades mecânicas foi observado aumento da elongação para os filmes com adição de colágeno em relação ao filme controle e redução significativa da tensão na ruptura com o aumento da concentração de CH. Não foi observado variação da microestrutura com a adição de colágeno e os filmes com maior concentração de CH foram mais mucoadesivos. O aumento da concentração de CH provocou redução do tempo de desintegração, apresentando uma liberação mais rápida dos compostos fenólicos. Em relação ao aumento da concentração de EEP foram observados alterações nos parâmetros de cor e opacidade devido a cor característica do extrato. Observou-se redução da solubilidade e aumento na tensão de ruptura com o aumento de EEP. Para filmes aditivados com EEP foi observada uma microestrutura menos compacta e desordenada e aumento da mucoadesividade. O aumento da concentração de EEP provocou aumento do tempo de desintegração, com redução do grau de intumescimento, e uma liberação mais lenta dos compostos fenólicos. O processo de produção dos filmes não provocou degradação dos compostos fenólicos e os filmes aditivados apresentaram atividade antimicrobiana contra Staphylococcus aureus. Os filmes de desintegração oral mantiveram a concentração de compostos fenólicos após 84 dias de armazenamento. Desta forma, os filmes de desintegração oral aditivados com extrato etanólico de própolis e colágeno hidrolisado representam uma boa alternativa como veículo de compostos fenólicos na cavidade oral. / There is an increase in the interest of consumers for natural products with functional appeal. Therefore, it has been studied new vehicles for release of bioactive compounds, such as orally disintegrating films. Propolis is a rich natural source of active compounds, such as phenolic compounds, responsible for antimicrobial and antioxidant activity. Hydrolyzed collagen may have several benefits when ingested, such as increased bone density and it is a good source of peptides. This study aimed the development and characterization of orally disintegrating films gelatin-based additives with hydrolyzed collagen (CH) and ethanol extract of propolis (EEP). The films were produced by casting, keeping mass constant of gelatin (mG) and hydrolyzed collagen (mCH) at 2 g of mG+CH/100 g filmogenic solution, and the concentration of sorbitol at 30 g/100 g mG+CH. It was evaluating different concentrations of CH (0, 10, 20 and 30 g/100 g of mG+CH) and EEP (0, 100 and 200 g/100 g of mG+CH). The films were characterized regarding color and opacity, total soluble matter, moisture, mechanical properties (tensile strength and elongation), scanning electron microscopy, mucoadhesion, contact angle, disintegration time, swelling degree, concentration of phenolic compounds, in vitro release, release kinetics, differential scanning calorimetry, Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR), antimicrobial activity and stability of phenolic compounds were evaluated during the storage time. Increasing in concentration of CH caused a significant increase of solubility. For mechanical properties was observed increased at elongation for films with collagen in relation to control film and significant reduction of tensile strength with increasing of CH. It was not observed difference in microstructure because of CH addition and the films with higher concentrations of CH showed higher mucoadhesive. The increased of CH concentration promoted a reduction in disintegration time, showed a faster release of phenolic compounds. The increased of EEP concentration influenced color parameters and opacity due to color of the extract. It was observed a reduction of the solubility and an increase in tensile strength with the increase of EEP. The addition of EEP promoted a microstructure less compact and more disordered structure and increased mucoadhesion. Increased in EEP concentration increased disintegration time, reduced swelling degree, and caused a slower release of phenolic compounds. The production process did not cause degradation of phenolic compounds and additives films exhibited antimicrobial activity against Staphylococcus aureus. The orally disintegrating films remained the concentration of phenolic compounds after 84 days of storage. Thus, the orally disintegrating film additives with ethanol extract of propolis and hydrolyzed collagen represent a good alternative as a vehicle of phenolic compounds in the oral cavity.