Orientador: Júlio Defaveri / Resumo: A paracoccidioidomicose (Pbmicose) é micose sistêmica causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis, que acomete principalmente trabalhadores rurais do sexo masculino. A doença tem como principais manifestações clínicas a forma aguda/subaguda e a forma crônica. Métodos sorológicos têm considerável valor na Pbmicose e diferentes testes têm sido utilizados no diagnóstico e monitoramento da resposta do paciente ao tratamento. O objetivo deste estudo foi avaliar a IFI, a ID e o ELISA antes e após introdução do tratamento de pacientes com a forma aguda/subaguda e a forma crônica da Pbmicose. Para cada teste, os seguintes parâmetros foram avaliados: sensibilidade (SE), especificidade (EP), valor preditivo positivo (VPP), valor preditivo negativo (VPN) e eficiência (EF). No período pré-tratamento a IFI teve SE=92,3%, VPP= 87,5%, VPN= 92% e EF=88,6%. A ID teve SE=94,93%, VPP=97,4%, VPN=95% e EF=96,2%. Para o ELISA, SE=100%, VPP=95%, VPN=100% e EF=97,4%. No grupo de doadores de sangue, a EP da IFI, da ID e do ELISA foram, respectivamente, de 93,3%, 100% e 100%. Em soros de pacientes com outras micoses sistêmicas (histoplasmose, criptococose, actinomicose, aspergilose e adiaspiromicose), as EP para os testes foram de 60%, 90% e 80%, respectivamente. Durante o tratamento, maior correlação foi obtida entre a ID e o ELISA (r= 0,61591, p<0,05), obtendo-se baixas correlações com a IFI. O tempo necessário para negativar o ELISA (Md= 20,0 meses) foi maior do que a ID (Md= 13,5 meses). O ELISA se negativou em geral nove meses após a ID, o que sugere que este teste passe a ser um referencial para suspensão do tratamento de manutenção. Devido à sua elevada sensibilidade, especificidade, VPP, VPN e eficiência, o ELISA deve ser incluído na rotina sorológica de pacientes com Pbmicose. / Abstract: Pararaccidioidomycosis (Pbmycosis) is a systemic mycosis caused by the dimorphic fungus Paracoccidioiodes brasiliensis, which often affects rural workers, usually male adults. The overt disease is manifested by two clinical forms, acute/subacute and chronic forms. Serological methods are of considerable value in Pbmycosis, and various tests has been utilized in the diagnostic and monitoring the patient's response to treatment. The aim of this study was to evaluated the reliability of the double immunodiffusion test (ID), indirect immunofluorescence (IIF) and immunoenzymatic assay (ELISA) in the pre-treatment and during the period of treatment of patients with acute/subacute and chronic forms of Pbmycosis. For each test the following parameters were evaluated: Sensitivity (SE), Specificity (SP), Positive and Negative Predictive Values (PPV and NPV) and Efficiency (EF). In the pre-treatment period these values for IFI were SE=92.3%, PPV=87.5%, NPV=92% and EF=88.6%. For ID: SE=94.9%, PPV=97.4%, NPV=95% EF=96.2%. For ELISA: SE=100%, PPV=95%, NPV=100% and EF=97.4%. In the group of blood donors, for IFI, ID and ELISA the ES were, respectively, 93.3%, 100% and 100%. In patients with other deep mycosis (histoplasmosis, cryptococcosis, actinomycosis, aspergillosis and adiaspiromycosis) the ES for these tests were respectively 60%, 90% and 80%. During the period of treatment, the highest correlation was observed between ID and ELISA (r= 0,61591, p<0,05), and the lowest correlations with IFI. The time elapsed to negative the ELISA was larger (Md=20 months) than for ID (Md= 13,5 meses). In overall, the ELISA negativated nine months after ID. This result suggests that the ELISA may be a referential test to monitoring the time for interruption of the treatment in Pbmycosis. Moreover, owing to its high values of SE, SP, PPV, NPV and EF, ELISA should be included in the serological routine for patients with Pbmycosis. / Mestre

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose granulomatosa sistêmica, que tem como agentes etiológicos fungos dimórficos do gênero Paracoccidioides. A produção de melanina por vários fungos interfere no mecanismo da patogênese, como ocorre na paracoccidioidomicose. O presente projeto visou avaliar a produção de melanina pelos isolados de P. lutzii, e seus efeitos in vitro, avaliando o processo de fagocitose. Os resultados obtidos durante este trabalho mostraram que os isolados de P. lutzii (Pb01, Pb66, ED01, Pb1578 e Pb8334) melanizam de formas diferenciadas entre eles e quando comparados com isolados de P. brasiliensis (Pb60855, Pb18 e Pbcão). Ensaios de fagocitose, com os isolados Pb18, Pb60855 e Pb01, mostraram que a melanina reduziu a porcentagem de fagocitose das leveduras não tratadas de Pb18 e Pb60855, e o contrário aconteceu com Pb01. As análises dos perfis proteicos e enzimáticos dos isolados Pb18, Pb60855 e Pb01, permitiram determinar que o isolado Pb01 produz uma menor quantidade de proteínas que Pb18 e Pb60855 nas condições ensaiadas. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a granulomatous systemic mycosis, whose etiological agents are dimorphic fungi of the genus Paracoccidioides. Melanin production by various fungi interferes in the mechanism of pathogenesis, as in paracoccidioidomycosis. Thus, this project aimed to evaluate the production of melanin by isolates of P. lutzii and its in vitro effects by assessing the process of phagocytosis. The results obtained during this work showed that the isolates of P. lutzii (Pb01, Pb66, ED01, Pb1578 and Pb8334) produce melanin in different ways between them and also when compared with isolates of P. brasiliensis (Pb60855, Pb18 and Pbcão). Phagocytosis assays, with Pb18, Pb60855 and Pb01, showed that melanin reduced the percentage of phagocytosis of untreated yeast of Pb60855 and Pb18 and the opposite happened with Pb01. The analysis of the protein and enzymatic profiles, of the isolates Pb18, Pb60855 and Pb01, enabled to determine that the isolated Pb01 produces a smaller amount of proteins compared with Pb18 and Pb60855 in the tested conditions.

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma infecção sistêmica causada pelo fungo Paracoccidioides sp. A doença é endêmica na maior parte dos países da América Latina, sendo os pulmões os órgãos mais afetados. O diagnóstico de PCM é feito com base na história clínica e epidemiológica, e confirmado pela visualização microscópica das estruturas fúngicas do Paracoccidioides a partir de secreções ou tecidos. Por vezes, a apresentação clínica e os achados histopatológicos da PCM simulam os de outras doenças, como a sarcoidose, e ocasionalmente são encontradas nas lesões formas excepcionalmente pequenas do Paracoccidioides, que podem ser confundidas com outros fungos, como o Histoplasma capsulatum. O presente trabalho objetivou identificar e caracterizar os casos que simularam sarcoidose e os que apresentaram formas pequenas de Paracoccidioides dentre os 856 casos de paracoccidioidomicose diagnosticados no Laboratório de Micologia do Complexo Hospitalar Santa Casa de Porto Alegre, no período de 1981 a dezembro de 2013. Foram identificados 8 casos mimetizando a sarcoidose e 12 apresentando formas pequenas de Paracoccidoides. Dos casos que simularam a sarcoidose, todos eram fumantes do sexo masculino, com idades variando entre 27 e 59 anos (média = 42,5 anos) e apresentaram tosse produtiva, infiltrado fibronodular bilateral aos exames de imagem e granulomas sarcoides na biópsia pulmonar, recebendo prednisona como tratamento inicial. O diagnóstico de PCM, nestes casos, foi realizado por meio de cortes histológicos corados ao GMS (n=8), exame direto do escarro (n=2) e imunodifusão (n=4). Dentre os casos que apresentaram formas pequenas do Paracoccidioides, todos eram fumantes, tinham idades variando entre 33 e 68 anos (média = 55,58 anos), 10 eram do sexo masculino, e 10 apresentavam sintomas consistentes com os da PCM (dois pacientes eram assintomáticos). O diagnóstico etiológico, em todos os casos, foi realizado por meio de cortes histológicos seriados corados ao GMS (que revelaram as formas multibrotantes patognomônicas do Paracoccidioides) e corroborado por exame direto do escarro (n=3), imunodifusão (n=6) e cultura (n=1). Com isto, ressalta-se a importância da consideração dos diagnósticos diferenciais da paracoccidioidomicose. Visto que a sarcoidose é um diagnóstico de exclusão, o achado de granulomas epitelioides sem necrose deve incitar a busca ativa por agentes etiológicos com a utilização das colorações de ZN e GMS. E nos casos em que se encontram formas pequenas ou pouco usuais do Paracoccidioides, devem-se realizar cortes histológicos seriados e escalonados corados ao GMS e utilizar técnicas laboratoriais complementares, como imunodifusão e cultura, para assegurar o seu diagnóstico. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic infection caused by the fungus Paracoccidioides sp. The disease is endemic in most Latin American countries, and the lungs are the most affected organs. The diagnosis of PCM is based on clinical and epidemiological features, and confirmed by the microscopic visualization of yeasts of Paracoccidioides from clinical specimens. Sometimes the clinical presentation and histopathological findings of PCM mimic those of other diseases, such as sarcoidosis, and occasionally exceedingly small forms of Paracoccidioides are found in lesions, which can be confused with other fungi, such as Histoplasma capsulatum. This study aimed to identify and characterize the cases that simulated sarcoidosis and those with small forms of Paracoccidioides among the 856 cases of paracoccidioidomycosis diagnosed in the Mycology Laboratory of the Hospital Complex Santa Casa de Porto Alegre, from 1981 to December 2013. 8 cases were identified mimicking sarcoidosis and 12 with small forms of Paracoccidoides. All the cases that mimicked sarcoidosis were male smokers, aged between 27 and 59 years (mean = 42.5 years) and had productive cough, bilateral fibronodular infiltrates on X-ray and sarcoid granulomas in the lung biopsy, receiving prednisone as initial treatment. The diagnosis of PCM in these cases was carried out by histological sections stained with GMS (n = 8), direct examination of sputum (n = 2) and immunodiffusion (n = 4). Among the cases with small forms of Paracoccidioides, all were smokers, aged between 33 and 68 years (mean = 55.58 years), 10 were male, and 10 had symptoms consistent with PCM (two patients were asymptomatic). The etiologic diagnosis in all the 12 cases was made by serial tissue sections stained with GMS (which revealed the multibudding pathognomonic forms of Paracoccidioides) and confirmed by direct examination of sputum (n = 3), immunodiffusion (n = 6) and culture (n = 1). In conclusion, it is emphasized the importance of considering the differential diagnosis of paracoccidioidomycosis. Since sarcoidosis is a diagnosis of exclusion, the finding of epithelioid granulomas without necrosis should encourage the active search for etiologic agents with the use of ZN and GMS stains. And in cases in which small or unusual forms of Paracoccidioides are found, serial histological sections stained with GMS and complementary laboratory techniques such as immunodiffusion and culture should be performed to ensure their diagnosis.

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:09:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-01-16. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:26:47Z : No. of bitstreams: 1 000841564.pdf: 864815 bytes, checksum: 4cde1b89b450b0cd1c443e2033a259ce (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A paracoccidioidomicose (PCM) é uma doença infecciosa causada por espécies do gênero Paracoccidioides, um patógeno intracelular cujo controle depende de uma resposta imune celular efetiva por parte do hospedeiro. Neste contexto, o ambiente peritoneal emerge como um possível local para a imunoterapia, uma vez que os fagócitos peritoneais apresentam plasticidade de funções biológicas que vão de indução/regulação da inflamação, angiogenese e processos de remodelação tecidual à migração para tecidos inflamados e infectados. Recentemente, foi relatado que células peritoneais estimuladas com Concanavalina-A (Con- A) exibem um aumento da ativação de células peritoneais, caracterizada por uma elevada atividade fagocítica, aumento da produção de TNF-α e expressão do receptor de manose. Assim, este estudo teve como objetivo identificar uma possível ação da Con-A sobre a migração de células e perfil de resposta imune por fagócitos peritoneais em modelo murino de paracoccidioidomicose pulmonar. Para tanto, foram utilizados camundongos BALB/c naive ou infectados por via intratraqueal com o fungo. Para avaliação da migração de fagócitos peritoneais foi utilizado o corante vital fluorescente PKH26 PCL. O tratamento com Con-A foi realizado por via intraperitoneal, as doses foram administradas com um intervalo de quatro dias (pico da ativivação macrofágica) e os fagócitos peritoneais foram analisados in vitro quanto à produção de IL-6, IL-10, TNF-α, MCP-1, IFN-γ e IL -12p70 e espécies reativas de oxigênio e nitrogênio. Os resultados demostraram que o tratamento com três doses de Con-A em animais não infectados induziu a migração de células peritoneais para o pulmão e, ainda, um perfil de resposta pró-Th1 por essas células. Além disso, o tratamento com três doses de Con-A induziu, o desenvolvimento de resposta imune protetora por fagócitos peritoneais de camundongos BALB/c infectados com... / The paracoccidioidomycosis (PCM) is an infectious disease caused by species of the genus Paracoccidioides, an intracellular pathogen that depends on an effective and protective specific-host cellular immune response. In this context, the peritoneal environment emerges as a possible site for immunotherapy, since phagocytes exhibit plastic biological functions related to induce/regulate inflammation, angiogenesis and tissue remodeling processes as well as to migrate to inflamed and infected tissue. Recently, it was reported that peritoneal cells stimulated with Concanavalin A (Con-A) show an increased cell activation characterized by high phagocytic activity, increased production of TNF-α and expression of mannose receptor. Thus, this study aimed to identify a possible action of Con-A in the peritoneal cavity, specifically the migration of peritoneal phagocytes and the profile of the response by peritoneal phagocytes in a murine model of pulmonary paracoccidioidomycosis. To this, BALB/c mice were used, infected intratracheally with the fungus or no. Assessment of migration of peritoneal phagocytes was by vital dye PKH26. The treatment with Con-A was by intraperitoneal route, the doses were given with an interval of four days (peak of macrophage activity) and the peritoneal phagocytes were analyzed in vitro for production of IL-6, IL-10, TNF-α, MCP-1, IFN-γ e IL -12p70 and reactive oxygen species by. Our findings showed that the treatment with three doses of Con-A in no-infected mice induces migration of peritoneal cells to the lung and also a pro-Th1 profile by peritoneal phagocytes. Furthermore, the treatment with three doses of Con-A lead a protective immune response in mice infected with P. brasiliensis, characterized by increased production of H2O2 in the presence or absence of P. brasiliensis antigens and in the production of IFN-γ and NO in the presence of fungal antigen. Despite of these findings, no changes were observed in the ...

Submitted by Simone Souza (simonecgsouza@hotmail.com) on 2017-09-19T14:26:24Z No. of bitstreams: 1 DISS_2014_Hugo Luciano de Almeida.pdf: 1172796 bytes, checksum: 9c0975c9c6f7cc479c0aa477d23d2b47 (MD5) / Approved for entry into archive by Jordan (jordanbiblio@gmail.com) on 2017-09-26T12:35:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISS_2014_Hugo Luciano de Almeida.pdf: 1172796 bytes, checksum: 9c0975c9c6f7cc479c0aa477d23d2b47 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-26T12:35:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISS_2014_Hugo Luciano de Almeida.pdf: 1172796 bytes, checksum: 9c0975c9c6f7cc479c0aa477d23d2b47 (MD5) Previous issue date: 2014-05-26 / A paracoccidioidomicose (PCM) é uma doença de caráter sistêmico cujas manifestações orais são bastante frequentes e muitas vezes o primeiro sinal da doença constituindo, portanto infecção fúngica de bastante interesse para a Odontologia. Foram coletados dados sobre gênero, idade, ocupação e procedência dos 230 pacientes atendidos no Hospital Universitário Júlio Muller (HUJM) e Laboratório Público do Estado de Mato Grosso (MT Laboratório), sobre a sintomatologia, localização anatômica das lesões, hábitos associados como tabagismo, etilismo e uso de drogas ilícitas, comorbidades, métodos diagnósticos, o tratamento instituído, tipo de entrada se caso novo, recidiva ou reentrada após abandono, sazonalidade e o encerramento de cada caso. Os resultados encontrados mostraram que a PCM é endêmica em Mato Grosso sendo mais frequente nas mesorregiões Norte e Centro-Sul do estado acometendo em sua maioria, indivíduos adultos do sexo masculino que tem ou tiveram sua atividade laboral relacionada ao meio rural ou que pela natureza do trabalho estão mais expostos à inalação de poeira. As lesões orais foram as mais frequentemente encontradas. Como conduta terapêutica a associação sulfametoxazol-trimetoprim continua sendo a droga mais empregada devido ao baixo custo e disponibilidade no Sistema Único de Saúde (SUS) no estado de Mato Grosso. Há alto índice de abandono e descontinuidade de tratamento dos pacientes atendidos no HUJM. O índice de tabagismo e etilismo associado a PCM foi bastante elevado. Observou-se que a maioria dos Cirurgiões Dentistas (CDs) não se sente apta para o diagnóstico da PCM e desconhecem os serviços de referência. / The paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic disease whose oral manifestations are quite common and often the first sign of the disease and, thus constituting fungal infection of great interest in dentistry. Data such as gender, age, occupation and origin of 230 patients seen in Public Laboratory of Mato Grosso and Julio Muller University Hospital (JMUH), about symptoms, anatomical location of the lesions, associated habits like smoking, drinking and illicit drug use, comorbidities, laboratory diagnosis, treatment instituted, the type of entry if new case, relapse or re-entry after abandonment, seasonality and closure of each case were collected. The results showed that the PCM is endemic in Mato Grosso being more frequent in North and Central South mesoregions of state and affecting mostly adult males who have or have had their work activities related to rural areas or that the nature of work are more exposed to inhalation of dust. Oral lesions were most frequently found. As therapeutic conduct to trimethoprim-sulfamethoxazole remains the most used drug due to the low cost and availability in the Unified Health System – SUS (the public health system in Brazil) in the state of Mato Grosso. There is high rate of abandonment and discontinuance of treatment of patients seen at JMUH. The rate of smoking and alcohol consumption associated with PCM was quite high. It was observed that most dentists do not feel able to diagnose PCM and they ignore the reference services.

Orientador: Rinaldo Poncio Mendes / Coorientador: Maria Sueli Parreira de Arruda / Banca: Eiko Nakagawa Itano / Banca: Ionice Felipe / Resumo: A paracoccidioidomicose (PCM) é uma doença infecciosa causada por espécies do gênero Paracoccidioides, um patógeno intracelular cujo controle depende de uma resposta imune celular efetiva por parte do hospedeiro. Neste contexto, o ambiente peritoneal emerge como um possível local para a imunoterapia, uma vez que os fagócitos peritoneais apresentam plasticidade de funções biológicas que vão de indução/regulação da inflamação, angiogenese e processos de remodelação tecidual à migração para tecidos inflamados e infectados. Recentemente, foi relatado que células peritoneais estimuladas com Concanavalina-A (Con- A) exibem um aumento da ativação de células peritoneais, caracterizada por uma elevada atividade fagocítica, aumento da produção de TNF-α e expressão do receptor de manose. Assim, este estudo teve como objetivo identificar uma possível ação da Con-A sobre a migração de células e perfil de resposta imune por fagócitos peritoneais em modelo murino de paracoccidioidomicose pulmonar. Para tanto, foram utilizados camundongos BALB/c naive ou infectados por via intratraqueal com o fungo. Para avaliação da migração de fagócitos peritoneais foi utilizado o corante vital fluorescente PKH26 PCL. O tratamento com Con-A foi realizado por via intraperitoneal, as doses foram administradas com um intervalo de quatro dias (pico da ativivação macrofágica) e os fagócitos peritoneais foram analisados in vitro quanto à produção de IL-6, IL-10, TNF-α, MCP-1, IFN-γ e IL -12p70 e espécies reativas de oxigênio e nitrogênio. Os resultados demostraram que o tratamento com três doses de Con-A em animais não infectados induziu a migração de células peritoneais para o pulmão e, ainda, um perfil de resposta pró-Th1 por essas células. Além disso, o tratamento com três doses de Con-A induziu, o desenvolvimento de resposta imune protetora por fagócitos peritoneais de camundongos BALB/c infectados com... / Abstract: The paracoccidioidomycosis (PCM) is an infectious disease caused by species of the genus Paracoccidioides, an intracellular pathogen that depends on an effective and protective specific-host cellular immune response. In this context, the peritoneal environment emerges as a possible site for immunotherapy, since phagocytes exhibit plastic biological functions related to induce/regulate inflammation, angiogenesis and tissue remodeling processes as well as to migrate to inflamed and infected tissue. Recently, it was reported that peritoneal cells stimulated with Concanavalin A (Con-A) show an increased cell activation characterized by high phagocytic activity, increased production of TNF-α and expression of mannose receptor. Thus, this study aimed to identify a possible action of Con-A in the peritoneal cavity, specifically the migration of peritoneal phagocytes and the profile of the response by peritoneal phagocytes in a murine model of pulmonary paracoccidioidomycosis. To this, BALB/c mice were used, infected intratracheally with the fungus or no. Assessment of migration of peritoneal phagocytes was by vital dye PKH26. The treatment with Con-A was by intraperitoneal route, the doses were given with an interval of four days (peak of macrophage activity) and the peritoneal phagocytes were analyzed in vitro for production of IL-6, IL-10, TNF-α, MCP-1, IFN-γ e IL -12p70 and reactive oxygen species by. Our findings showed that the treatment with three doses of Con-A in no-infected mice induces migration of peritoneal cells to the lung and also a pro-Th1 profile by peritoneal phagocytes. Furthermore, the treatment with three doses of Con-A lead a protective immune response in mice infected with P. brasiliensis, characterized by increased production of H2O2 in the presence or absence of P. brasiliensis antigens and in the production of IFN-γ and NO in the presence of fungal antigen. Despite of these findings, no changes were observed in the ... / Mestre

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma doença sistêmica de caráter granulomatoso, causada pelo fungo termodimórfico Paracoccidioides brasiliensis. A PCM é endêmica nas Américas do Sul e Central. Vacina de DNA é uma abordagem promissora e atual na imunoterapia. O peptídeo P10 contem um epítopo da gp43 reconhecido por linfócitos T-CD4+ e é protetor contra a PCM experimental. No presente trabalho analizamos o uso de vacinas de DNA usando vetores de expressão de P10, IL-12 e HSP60 em camundongos infectados intratraquealmente (i.t.) com P. brasiliensis. Esquema Profilático: camundongos BALB/c foram imunizados com pCDNA3 com sequências codificadoras de P10, HSP60 ou IL-12 e foram infectados i.t com 3x105 leveduras do isolado Pb18. Esquema Terapêutico: Camundongos BALB/c e B10.A foram infectados i.t. e após 30 dias foram submetidos à imunização por 4 semanas, ou 5 meses somente para B10.A, com pCDNA3 codificando P10 e/ou IL-12. Níveis de anticorpos, unidades formadoras de colônias (UFC) e produção de citocinas foram analizados. Foi observada redução significativa de UFC nos pulmões dos camundongos imunizados com vetor contendo P10/IL-12. A histopatologia dos pulmões mostrou áreas preservadas e redução de inflamação nestes animais. O nível de citocinas nos pulmões mostrou aumento de IFN-g e IL-12 caracterizando uma resposta Th1. Tratamento de animais B10. A com pP10 até 5 meses, reduziu o número de leveduras infectantes perto de esterilização. / Paracoccidiodomycosis (PCM) is a systemic granulomatous disease caused by the thermo-dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis. It is widespread in South and Central America. Gene therapy is a promising approach to Ag-specific immunotherapy. Peptide 10 contains the T-cell epitope of gp43 and is protective against experimental infection in mice. Presently, we analyzed the used of DNA-based vaccine encoding P10, IL-12 and HSP60 in mice intratracheally infected with P. brasiliensis. Prophylactic protocol: BALB/c mice were immunized with pCDNA3 encoding P10, HSP60 or IL-12 prior to intratracheal infection with 3x105 yeast cells of isolate Pb18. Therapeutic protocol: BALB/c and B10. A mice were infected and after 30 days, they were immunized for 4 weeks, or 5 months for B10.A only, with pCDNA3 encoding P10 and/or IL-12. Antibody titers in sera, colony forming units (CFU) and cytokine production were measured. A significant reduction of CFU in the lungs of mice immunized with plasmid encoding P10/IL-12 was observed. The lung histopathology confirmed the results showing preserved areas and reduction of inflammation in vaccinated animals. The cytokine levels in lungs showed enhanced levels of IFN-g and IL-12 characterizing a Th1 response. Further treatment of B10.A mice up to 5 months with pP10 reduced the number of infective yeasts close to sterilization.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001Bitstream added on 2014-06-13T19:57:02Z : No. of bitstreams: 1 sene_mg_me_botfm.pdf: 956728 bytes, checksum: fe9e35a9180c7ad377bc30cbf9974ccd (MD5) / A paracoccidioidomicose (Pbmicose) é micose sistêmica causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis, que acomete principalmente trabalhadores rurais do sexo masculino. A doença tem como principais manifestações clínicas a forma aguda/subaguda e a forma crônica. Métodos sorológicos têm considerável valor na Pbmicose e diferentes testes têm sido utilizados no diagnóstico e monitoramento da resposta do paciente ao tratamento. O objetivo deste estudo foi avaliar a IFI, a ID e o ELISA antes e após introdução do tratamento de pacientes com a forma aguda/subaguda e a forma crônica da Pbmicose. Para cada teste, os seguintes parâmetros foram avaliados: sensibilidade (SE), especificidade (EP), valor preditivo positivo (VPP), valor preditivo negativo (VPN) e eficiência (EF). No período pré-tratamento a IFI teve SE=92,3%, VPP= 87,5%, VPN= 92% e EF=88,6%. A ID teve SE=94,93%, VPP=97,4%, VPN=95% e EF=96,2%. Para o ELISA, SE=100%, VPP=95%, VPN=100% e EF=97,4%. No grupo de doadores de sangue, a EP da IFI, da ID e do ELISA foram, respectivamente, de 93,3%, 100% e 100%. Em soros de pacientes com outras micoses sistêmicas (histoplasmose, criptococose, actinomicose, aspergilose e adiaspiromicose), as EP para os testes foram de 60%, 90% e 80%, respectivamente. Durante o tratamento, maior correlação foi obtida entre a ID e o ELISA (r= 0,61591, p<0,05), obtendo-se baixas correlações com a IFI. O tempo necessário para negativar o ELISA (Md= 20,0 meses) foi maior do que a ID (Md= 13,5 meses). O ELISA se negativou em geral nove meses após a ID, o que sugere que este teste passe a ser um referencial para suspensão do tratamento de manutenção. Devido à sua elevada sensibilidade, especificidade, VPP, VPN e eficiência, o ELISA deve ser incluído na rotina sorológica de pacientes com Pbmicose. / Pararaccidioidomycosis (Pbmycosis) is a systemic mycosis caused by the dimorphic fungus Paracoccidioiodes brasiliensis, which often affects rural workers, usually male adults. The overt disease is manifested by two clinical forms, acute/subacute and chronic forms. Serological methods are of considerable value in Pbmycosis, and various tests has been utilized in the diagnostic and monitoring the patient's response to treatment. The aim of this study was to evaluated the reliability of the double immunodiffusion test (ID), indirect immunofluorescence (IIF) and immunoenzymatic assay (ELISA) in the pre-treatment and during the period of treatment of patients with acute/subacute and chronic forms of Pbmycosis. For each test the following parameters were evaluated: Sensitivity (SE), Specificity (SP), Positive and Negative Predictive Values (PPV and NPV) and Efficiency (EF). In the pre-treatment period these values for IFI were SE=92.3%, PPV=87.5%, NPV=92% and EF=88.6%. For ID: SE=94.9%, PPV=97.4%, NPV=95% EF=96.2%. For ELISA: SE=100%, PPV=95%, NPV=100% and EF=97.4%. In the group of blood donors, for IFI, ID and ELISA the ES were, respectively, 93.3%, 100% and 100%. In patients with other deep mycosis (histoplasmosis, cryptococcosis, actinomycosis, aspergillosis and adiaspiromycosis) the ES for these tests were respectively 60%, 90% and 80%. During the period of treatment, the highest correlation was observed between ID and ELISA (r= 0,61591, p<0,05), and the lowest correlations with IFI. The time elapsed to negative the ELISA was larger (Md=20 months) than for ID (Md= 13,5 meses). In overall, the ELISA negativated nine months after ID. This result suggests that the ELISA may be a referential test to monitoring the time for interruption of the treatment in Pbmycosis. Moreover, owing to its high values of SE, SP, PPV, NPV and EF, ELISA should be included in the serological routine for patients with Pbmycosis.

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma infecção sistêmica causada pelo fungo Paracoccidioides sp. A doença é endêmica na maior parte dos países da América Latina, sendo os pulmões os órgãos mais afetados. O diagnóstico de PCM é feito com base na história clínica e epidemiológica, e confirmado pela visualização microscópica das estruturas fúngicas do Paracoccidioides a partir de secreções ou tecidos. Por vezes, a apresentação clínica e os achados histopatológicos da PCM simulam os de outras doenças, como a sarcoidose, e ocasionalmente são encontradas nas lesões formas excepcionalmente pequenas do Paracoccidioides, que podem ser confundidas com outros fungos, como o Histoplasma capsulatum. O presente trabalho objetivou identificar e caracterizar os casos que simularam sarcoidose e os que apresentaram formas pequenas de Paracoccidioides dentre os 856 casos de paracoccidioidomicose diagnosticados no Laboratório de Micologia do Complexo Hospitalar Santa Casa de Porto Alegre, no período de 1981 a dezembro de 2013. Foram identificados 8 casos mimetizando a sarcoidose e 12 apresentando formas pequenas de Paracoccidoides. Dos casos que simularam a sarcoidose, todos eram fumantes do sexo masculino, com idades variando entre 27 e 59 anos (média = 42,5 anos) e apresentaram tosse produtiva, infiltrado fibronodular bilateral aos exames de imagem e granulomas sarcoides na biópsia pulmonar, recebendo prednisona como tratamento inicial. O diagnóstico de PCM, nestes casos, foi realizado por meio de cortes histológicos corados ao GMS (n=8), exame direto do escarro (n=2) e imunodifusão (n=4). Dentre os casos que apresentaram formas pequenas do Paracoccidioides, todos eram fumantes, tinham idades variando entre 33 e 68 anos (média = 55,58 anos), 10 eram do sexo masculino, e 10 apresentavam sintomas consistentes com os da PCM (dois pacientes eram assintomáticos). O diagnóstico etiológico, em todos os casos, foi realizado por meio de cortes histológicos seriados corados ao GMS (que revelaram as formas multibrotantes patognomônicas do Paracoccidioides) e corroborado por exame direto do escarro (n=3), imunodifusão (n=6) e cultura (n=1). Com isto, ressalta-se a importância da consideração dos diagnósticos diferenciais da paracoccidioidomicose. Visto que a sarcoidose é um diagnóstico de exclusão, o achado de granulomas epitelioides sem necrose deve incitar a busca ativa por agentes etiológicos com a utilização das colorações de ZN e GMS. E nos casos em que se encontram formas pequenas ou pouco usuais do Paracoccidioides, devem-se realizar cortes histológicos seriados e escalonados corados ao GMS e utilizar técnicas laboratoriais complementares, como imunodifusão e cultura, para assegurar o seu diagnóstico. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic infection caused by the fungus Paracoccidioides sp. The disease is endemic in most Latin American countries, and the lungs are the most affected organs. The diagnosis of PCM is based on clinical and epidemiological features, and confirmed by the microscopic visualization of yeasts of Paracoccidioides from clinical specimens. Sometimes the clinical presentation and histopathological findings of PCM mimic those of other diseases, such as sarcoidosis, and occasionally exceedingly small forms of Paracoccidioides are found in lesions, which can be confused with other fungi, such as Histoplasma capsulatum. This study aimed to identify and characterize the cases that simulated sarcoidosis and those with small forms of Paracoccidioides among the 856 cases of paracoccidioidomycosis diagnosed in the Mycology Laboratory of the Hospital Complex Santa Casa de Porto Alegre, from 1981 to December 2013. 8 cases were identified mimicking sarcoidosis and 12 with small forms of Paracoccidoides. All the cases that mimicked sarcoidosis were male smokers, aged between 27 and 59 years (mean = 42.5 years) and had productive cough, bilateral fibronodular infiltrates on X-ray and sarcoid granulomas in the lung biopsy, receiving prednisone as initial treatment. The diagnosis of PCM in these cases was carried out by histological sections stained with GMS (n = 8), direct examination of sputum (n = 2) and immunodiffusion (n = 4). Among the cases with small forms of Paracoccidioides, all were smokers, aged between 33 and 68 years (mean = 55.58 years), 10 were male, and 10 had symptoms consistent with PCM (two patients were asymptomatic). The etiologic diagnosis in all the 12 cases was made by serial tissue sections stained with GMS (which revealed the multibudding pathognomonic forms of Paracoccidioides) and confirmed by direct examination of sputum (n = 3), immunodiffusion (n = 6) and culture (n = 1). In conclusion, it is emphasized the importance of considering the differential diagnosis of paracoccidioidomycosis. Since sarcoidosis is a diagnosis of exclusion, the finding of epithelioid granulomas without necrosis should encourage the active search for etiologic agents with the use of ZN and GMS stains. And in cases in which small or unusual forms of Paracoccidioides are found, serial histological sections stained with GMS and complementary laboratory techniques such as immunodiffusion and culture should be performed to ensure their diagnosis.

A paracoccidioidomicose é uma micose sistêmica caracterizada por ser uma doença granulomatosa. As formas benignas da doença são caracterizadas por uma infecção localizada, contendo granulomas compactos com poucos fungos; já nas formas mais graves, ocorre um processo granulomatoso frouxo com focos de necrose e intensa disseminação fúngica. Objetivou-se avaliar o desenvolvimento de lesões granulomatosas em baço, fígado, pulmão e epiplon de camundongos, após infecção pela via intraperitoneal com o isolado de alta virulência, Pb18, em diferentes períodos de infecção após tratamento com fármacos, os quais possuem mecanismo de ação relacionado com a alteração no balanço entre a síntese e degradação dos produtos do colágeno, interferindo diretamente na formação do granuloma A citocina IFN-<font face=\"Symbol\">g, o antibiótico Tetraciclina e as drogas antiinflamatórias Lumiracoxib e Celecoxib. Avaliamos a presença de alguns componentes do granuloma (colágeno, células do infiltrado inflamatório, de citocinas primordiais para sintese/degradação da MEC do granuloma, presença de P. brasiliensis). / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis that is endemic in Latin America, whose causative agent is the thermal dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis (Pb). PCM is a granulomatous disease, and the formation of granulomas can be understood as a mechanism of the body to block and limit the invasiveness of the fungus or its antigenic components, once unable to lyse them. Bening forms of the disease are characterized by a localized infection, where granulomasa are compact and contain few fungi. More severe forms present loose granulomatous processes with foci of necrosis and severe fungal. Studies in which granulomatous response was developed in resistant (A/J) and susceptible (B10.A) mice to the high virulence isolate Pb18 showed the presence of different patterns of injuries related to the type of extracellular matrix (ECM) components and the different cells types in the area, suggesting a important role of these elements in the formation and constitution of the granuloma and thus the outcome of infection. In our project, we aimed to evaluate the development of granulomatous lesions in the spleen, liver, lung and omentum of mice susceptible to PCM after intraperitoneal infection with Pb18, at different periods of infection (acute and chronic) with or without treatment with drugs. These drugs have mechanisms of action closely related to the change in the balance between synthesis and degradation of collagen Thus, they interfere directly in the granuloma formation and in maintaining the viability of fungi and also with the development of fibrosis. Which is a common and devastating sequelae of numerous infections including the PCM, with the characteristic proliferation of fibroblasts and deposition of ECM. The treatments were chosen based on prior knowledge on their effects on the course of experimental murine PCM. IFN-<font face=\"Symbol\">g was chosen due to its antifibrotic effect, being an activator of macrophages in infection by P. brasiliensis and increasing the fungicidal effect of neutrophils. The antibiotic tetracycline was used because of its inhibitory effect on the synthesis of extracellular matrix, limiting antimicrobial activity and the ability of collagenase to degrade ECM. Finally, the antiinflammatory drugs Celecoxib and Lumiracoxib (inhibitors of the COX-2 enzyme) 11 were used because they cause an increase in the expression of collagen type III and type IV. We analyzed the components of the granuloma (collagen, inflammatory cells, cytokines essential for synthesis / degradation of the ECM of the granuloma, the presence of P. brasiliensis). Among the cytokines analyzed, we studied the importance of TNF-<font face=\"Symbol\">&#945 in the formation of granulomas and regulation of matrix metalloproteinases (MMP) synthesis and function. We analyzed TGF-<font face=\"Symbol\">b because it negatively modulate the secretion of nitric oxide by macrophages and promote the accumulation of ECM and is believed to be the central mediator of the process of fibrosis in several pathologies. IFN-<font face=\"Symbol\">g was studied because of its correlation to the preferential Th1 immune response in diseases and infectious processes of fungal and bacterial infections, and also because it modulates fibroblast function.