Submitted by lariza Maza (lariza.maza@hotmail.com) on 2018-04-16T14:40:41Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Final Mestrado Lariza Maza pdf.pdf: 2708028 bytes, checksum: d776645b08f3ecce08017c07afc27ae3 (MD5) / Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2018-04-17T13:47:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 maza_l_me_bot.pdf: 2708028 bytes, checksum: d776645b08f3ecce08017c07afc27ae3 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-17T13:47:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 maza_l_me_bot.pdf: 2708028 bytes, checksum: d776645b08f3ecce08017c07afc27ae3 (MD5) Previous issue date: 2018-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Introdução. A Paracoccidioidomicose (PCM) é micose sistêmica causada por fungos termo dimórficos do gênero Paracocidioides. A associação sulfametoxazol trimetoprim, também denominada Cotrimoxazol (CMX), é uma das principais opções terapêuticas. No atual tratamento da PCM, o CMX é utilizado na dose de 2400 mg de sulfametoxazol, o que corresponde a seis comprimidos, divididos em duas tomadas diárias, fato que tem levado a menor adesão do paciente à terapia antifúngica. Estudos experimentais têm observado que a dose única diária pode ser suficiente para tratar a PCM. Objetivo. Este estudo teve como objetivo avaliar a eficácia do tratamento da PCM Murina com CMX administrado em uma e duas doses diárias. Material e métodos. Utilizou-se camundongos machos, isogênicos da linhagem Balb/c e o isolado Pb 326, de uma paciente atendida no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu em 2012 com a forma aguda e subaguda. Este estudo apresentou três experimentos. No experimento I, 100 animais foram sorteados em 4 grupos: controle saudável (G1), controle infectado (G2) e os grupos infectados que receberam CMX uma vez (G3) e duas vezes ao dia (G4). Após 28 dias da infecção, iniciou-se o tratamento, com avaliação da recuperação fúngica em pulmão e baço, exame histopatológico dos pulmões e pesquisa de anticorpos séricos específicos anti P. brasiliensis, pela imunodifusão dupla em gel de ágar (IDD) nas semanas 8, 12, 16 e 20 após a infecção. No experimento II, os mesmos animais foram avaliados quanto a sobrevida cumulativa em 140 dias. No experimento III, 40 camundongos infectados e tratados por 10 dias com dose única diária e com duas tomadas ao dia foram avaliados quanto ao perfil sérico de sulfametoxazol em quatro medidas durante o dia e foi determinado a concentração inibitória mínima deste isolado utilizado no estudo. Os testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney foram utilizados para comparação de medianas, regressão linear para analisar os parâmetros nos sucessivos momentos de sacrifício e Kaplan-Meier para a avaliação de sobrevida. Foi considerado significativo os valores de p menores que 0,05. Resultados. Os dois grupos tratados com CMX (G3 e G4) apresentaram resposta ao tratamento, caracterizada pela melhora do aspecto e do comportamento do animal, queda dos níveis de anticorpos séricos pela IDD (G3: p=0,005; G4: p=0,01), redução da carga fúngica pulmonar, analisada pelo exame histopatológico, na 16ª e 20ª se- manas comparadas com a 8ª e 12ª (p<0,01) e menor porcentagem de fibras colágenas por área peribronquiolar na 20ª semana comparados com a 12ª semana (p<0,05). Não houve diferença na recuperação fúngica em pulmões e baço, na carga fúngica contada pelo exame histopatológico de pulmão e nem na porcentagem de fibra colágena por área peribronquiolar entre G3 e G4 nas semanas 8, 12, 16 e 20. No entanto, os níveis de IDD tenderam a ser mais baixos no G4 do que no G3 na 8ª semana de tratamento (1:4 vs 1:16, p = 0,08). O grupo G4 apresentou menor recuperação fúngica dos pulmões na 8ª e 12ª semanas e no baço nas semanas 16 e 20 quando comparado ao controle infectado. Não houve diferença na mortalidade cumulativa entre G3 e G4 (0,0% vs 4,0%). Conclusões. Esses achados demonstram eficácia em ambos os esquemas de tratamento da PCM Murina com CMX. Embora não se observou diferenças diretas entre os dois esquemas de tratamento com CMX, o grupo que recebeu duas doses ao dia apresentou maior resposta quando comparado com o controle infectado, fato que não ocorreu com o grupo tratado com dose única diária. Isto sugere que diferenças podem existir entre os dois esquemas e que estudo futuros são necessários para se conhecer melhor a eficácia destes esquemas terapêuticos. / Introduction. Paracoccidioidomycosis (PCM) is systemic mycosis caused by termodimorphic fungi of the genus Paracoccidioides. The association of sulfamethoxazole-trimethoprim, also called cotrimoxazole (CMX), is one of the main therapeutic options. In the current treatment of PCM, CMX is used in the dose of 2,400 mg of sulfamethoxazole, which corresponds to six tablets divided into two daily doses, a fact that has led to the patient's lesser adherence to anti-fungal therapy. Experimental studies have observed that the single daily dose may be suffi-cient to treat PCM. Goal. This study aimed to evaluate the efficacy of murine PCM treatment with CMX administered in one and two daily doses. Material and methods. Male, isogenic mice of the Balb / c gem line and Pb 326 isolate were collected from a patient attended at the Hospital das Clínicas of the Faculty of Medicine of Botucatu in 2012 with the acute and sub-acute form. This study presented three experiments. In the experiment I, 100 animals were randomly assigned to 4 groups: healthy control (G1), infected control (G2) and infected groups receiving CMX once (G3) and twice daily (G4). After 28 days of infection, treatment with the evaluation of fungal recovery in the lung and spleen, histopathological examination of the lungs and the detection of specific serum antibodies to P. brasiliensis by double agar gel immunodiffusion (IDD) in the weeks 8, 12, 16 and 20 after infection. In Experiment II, the same animals were evaluated for cumulative survival at 140 days. In Experiment III, 40 mice infected and treated for 10 days with single daily dose and with two intakes per day were evaluated for the serum sulfamethoxazole profile in four measures during the day and the minimum inbred concentration of this isolate used in the study. The Kruskal-Wallis and Mann-Whitney tests were used for comparison of medians, linear regression to analyze the parame-ters in the successive moments of sacrifice and Kaplan-Meier for the evaluation of survival. P value of less than 0.05 was considered significant. Results. The two groups treated with CMX (G3 and G4) presented a response to treatment, characterized by an improvement in the ap-pearance and behavior of the animal, a decrease in serum antibody levels by IDD (G3: p = 0.005, G4: p = 0.01), reduction of lung fungal load, analyzed by histopathological examination, at the 16th and 20th week periods compared with the 8th and 12th days (p <0.01), and a low-er percentage of collagen fibers by peribronchiolar area at week 20 compared to at week 12 (p <0.05). There was no difference in fungal recovery in the lungs and spleen, in the fungal load counted by histopathological examination of the lung, nor in the percentage of collagen fiber per peri-brachial area between G3 and G4 at weeks 8, 12, 16 and 20. However, levels of IDD tended to be lower in G4 than in G3 at week 8 of treatment (1: 4 vs. 1:16, p = 0.08). The G4 group presented lower fungal recovery of the lungs at the 8th and 12th weeks and in the spleen at weeks 16 and 20 when compared to the infected control. There was no difference in cumulative mortality between G3 and G4 (0.0% vs 4.0%). Con-clusions. These findings demonstrate efficacy in both murine PCM treatment regimens with CMX. Although there were no direct differences between the two treatment regimens with CMX, the group receiving two doses per day presented a higher response when compared to the infected control, a fact that did not occur with the single daily dose group. This suggests that differences may exist between the two schemes and that future studies are needed to better understand the efficacy of these therapeutic regimens

Orientador: Ricardo de Souza Cavalcante / Resumo: Introdução. A Paracoccidioidomicose (PCM) é micose sistêmica causada por fungos termo dimórficos do gênero Paracocidioides. A associação sulfametoxazol trimetoprim, também denominada Cotrimoxazol (CMX), é uma das principais opções terapêuticas. No atual tratamento da PCM, o CMX é utilizado na dose de 2400 mg de sulfametoxazol, o que corresponde a seis comprimidos, divididos em duas tomadas diárias, fato que tem levado a menor adesão do paciente à terapia antifúngica. Estudos experimentais têm observado que a dose única diária pode ser suficiente para tratar a PCM. Objetivo. Este estudo teve como objetivo avaliar a eficácia do tratamento da PCM Murina com CMX administrado em uma e duas doses diárias. Material e métodos. Utilizou-se camundongos machos, isogênicos da linhagem Balb/c e o isolado Pb 326, de uma paciente atendida no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu em 2012 com a forma aguda e subaguda. Este estudo apresentou três experimentos. No experimento I, 100 animais foram sorteados em 4 grupos: controle saudável (G1), controle infectado (G2) e os grupos infectados que receberam CMX uma vez (G3) e duas vezes ao dia (G4). Após 28 dias da infecção, iniciou-se o tratamento, com avaliação da recuperação fúngica em pulmão e baço, exame histopatológico dos pulmões e pesquisa de anticorpos séricos específicos anti P. brasiliensis, pela imunodifusão dupla em gel de ágar (IDD) nas semanas 8, 12, 16 e 20 após a infecção. No experimento II, os mesmos animais fo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Introduction. Paracoccidioidomycosis (PCM) is systemic mycosis caused by termodimorphic fungi of the genus Paracoccidioides. The association of sulfamethoxazole-trimethoprim, also called cotrimoxazole (CMX), is one of the main therapeutic options. In the current treatment of PCM, CMX is used in the dose of 2,400 mg of sulfamethoxazole, which corresponds to six tablets divided into two daily doses, a fact that has led to the patient's lesser adherence to anti-fungal therapy. Experimental studies have observed that the single daily dose may be suffi-cient to treat PCM. Goal. This study aimed to evaluate the efficacy of murine PCM treatment with CMX administered in one and two daily doses. Material and methods. Male, isogenic mice of the Balb / c gem line and Pb 326 isolate were collected from a patient attended at the Hospital das Clínicas of the Faculty of Medicine of Botucatu in 2012 with the acute and sub-acute form. This study presented three experiments. In the experiment I, 100 animals were randomly assigned to 4 groups: healthy control (G1), infected control (G2) and infected groups receiving CMX once (G3) and twice daily (G4). After 28 days of infection, treatment with the evaluation of fungal recovery in the lung and spleen, histopathological examination of the lungs and the detection of specific serum antibodies to P. brasiliensis by double agar gel immunodiffusion (IDD) in the weeks 8, 12, 16 and 20 after infection. In Experiment II, the same animals were evaluated f... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Eduardo Bagagli / Coorientador: / Banca: Angela Maria Victoriano de Campos Soares / Banca: Raquel Cordeiro Theodoro / Banca: Julhiany de Fatima da Silva / Banca: Gilda Maria Barbaro Del Negro / Resumo: A paracoccidioidomicose, uma das mais importantes micoses sistêmicas da América Latina, é causada pelas espécies crípticas Paracoccidioides brasiliensis e P. lutzii. Ainda não é claro como o processo de especiação dentro do gênero Paracoccidioides influi em aspectos como virulência e patogenia da doença. O objetivo deste trabalho é caracterizar algumas dessas diferenças entre as duas espécies crípticas, utilizando-se de modelo experimental alternativo, as larvas da traça de cera Galleria mellonella. Este modelo tem sido utilizado em estudos envolvendo outros patógenos, porém ainda é pouco explorado em Paracoccidioides spp. No presente estudo, G. mellonella refletiu diferenças entre a virulência de cargas fúngicas distintas, bem como dentre isolados variados e destes com os grupos controle. Além disso, foi possível a recuperação do patógeno a partir de larvas experimentalmente infectadas. Isolados P. lutzii apresentaram níveis de virulência variáveis, sendo pertencentes a esta espécie os isolados com maior e menor virulência observadas neste estudo (8334 e Pb01, respectivamente). Já os isolados pertencentes a espécie P. brasiliensis (Pb339, Pb192 e T15LN1) apresentaram taxas de mortalidade mais homogêneas e intermediárias. Tais resultados credenciam as larvas de G. mellonella como modelo de experimentação adequado para o estudo do processo de virulência em Paracoccidioides spp. Ainda, foi realizado knockdown do gene codificador da gp43 (PbGP43), o antígeno imunodominante em P. brasiliensis e do seu homólogo em P. lutzii (PlP43) utilizando-se a estratégia de RNA antisense combinada com transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens. Foram obtidos três transformantes P. brasiliensis com expressão de PbGP43 de cerca de 8%, 14% e 36% quando comparados com a expressão do isolado selvagem original Pb192. Além disso foram obtidos dois transformante P. lutzii com expressão de PlP43 por volta de 23% e... / Abstract: Paracoccidioidomycosis (PCM), an important systemic mycosis in Latin America, is caused by the cryptic species Paracoccidioides brasiliensis and P. lutzii. How these species differ in their virulence factors is still unknown and needs to be properly evaluated. While the role of PbGP43, which codes gp43, as a virulence factor is relatively well established for P. brasiliensis, the same is not true for its ortholog in P. lutzii, namely PlP43. PbGP43 and PlP43 present differences in their nucleotide sequences, expression levels, epitope occurrence and influences on PCM diagnosis. Herein, we obtained PbGP43 and PlP43 knockdown strains by antisense RNA technology combined with ATMT, in order to comparatively evaluate their effects on virulence, employing the alternative experimental host Galleria mellonella larvae. Our results suggest that p43 is important in the P. lutzii infectious process, as previously demonstrated by gp43 in P. brasiliensis. We confirmed G. mellonella as a useful model for studying P. brasiliensis and P. lutzii virulence, since it reflects variation between inoculum size and different strains, as well as between wild-type and respective knockdown transformant strains. Virulence levels may vary among isolates of the same species, probably reflecting that the physiological condition is more important than the species effect. Re-isolation of Paracoccidioides from experimentally infected G. mellonella larvae is possible and might be useful for epigenetic studies related to infection / Doutor

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica de natureza profunda e granulomatosa, que afeta preferencialmente o tecido pulmonar causada pelo Paracoccidioides brasiliensis, um fungo que exibe dimorfismo térmico. O P. brasiliensis interage com células apresentadoras de antígenos (APCs), alterando suas principais funções biológicas. Entre as APCs, os macrófagos são células que desempenham um papel importante na indução e regulação da resposta imune e/ou inflamatória. São células do sistema fagocítico mononuclear que podem discriminar entre o que é próprio do organismo e os patógenos, através da expressão de receptores de reconhecimento padrão (PRR) que reconhecem padrões moleculares associados à patógenos (PAMPs), sendo células importantes no processo de fagocitose controlando o crescimento destes patógenos. Recentemente tem sido demonstrada a importância dos receptores Notch na regulação da atividade de macrófagos e do sistema imune. Os ligantes de Notch estão envolvidos nas locais inflamatórios de infecção devido ao aumento da expressão dos mesmos na superfície de células envolvidas neste processo. Considerando que a sinalização Notch pode estar envolvida na modulação da função de macrófagos, nós avaliamos se P. brasiliensis tem a capacidade de modular a ativação desta via e interferir na produção de citocinas pró-inflamatórias. Para isso, macrófagos J774, pré-estimulados com LPS ou não, foram interagidos com leveduras do fungo, seguido por análise de PCR em tempo real e citometria de fluxo, dosagem de citocinas e índice de fagocitose. Nossos dados revelaram que na presença do fungo existe aumento dos níveis de transcrição do receptor Notch 1 e diminuição da transcrição do ligante Delta 4 em macrófagos pré-estimulados com LPS. Entretanto, verificamos que o fungo sozinho não é capaz de induzir a transcrição de NF-&#954;B, nem na presença do LPS, mas quando os macrófagos são estimulados com LPS e sofrem inibição da via de Notch existe aumento dos níveis de transcritos após interação com o fungo, sugerindo que esse fator é ativado na ausência de Notch. Nesse contexto de inibição de Notch, evidenciamos que a fagocitose de leveduras do fungo por macrófagos tornou-se mais eficiente, visto que houve aumento do índice de fagocitose na ausência de Notch. Foi possível verificar que o fungo tem a capacidade de promover a produção de IL-6 via TLR-Notch, fazendo-nos supor que essa citocina seja importante para o estabelecimento da doença ao ser benéfica para o fungo e prejudicar o hospedeiro. E concomitantemente ao aumento de IL-6 existe diminuição da produção de TNF-&#945;. Com base nesses resultados, podemos sugerir que o P. brasiliensis utiliza a via de sinalização Notch como um mecanismo de escape. A interação entre as leveduras do fungo e os macrófagos promove a ativação dessa via, através do receptor Notch 1, induzindo maior produção de IL-6, citocina importante para o crescimento do fungo no hospedeiro, conjuntamente com a diminuição de TNF-&#945; prejudicando a atividade fungicida dos macrófagos. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis and deep granulomatous in nature, which affects mainly the lung tissue caused by Paracoccidioides brasiliensis, a fungus that exhibits thermal dimorphism. The P. brasiliensis interacts with antigen presenting cells (APCs), changing its main biological functions. Among the APCs, macrophages are cells that play an important role in the induction and regulation of the immune response and/or inflammatory response. They are cells of the mononuclear phagocytic system that can discriminate between what is characteristic of the organisms and pathogens, by expression of pattern recognition receptors (PRR) that recognizes the pathogen-associated molecular pattern (PAMPs), and are considered cells important in phagocytosis for controlling the growth of these pathogens. It has been recently demonstrated the importance of the Notch receptor in regulating the activity of macrophages and of the immune system. The ligands of Notch are involved in inflammatory sites of infection because there are increased expression of these ligands on cell surface involved in this process. Whereas the Notch signaling may be involved in modulating macrophage function, we evaluated whether P. brasiliensis has the ability to modulate the activation of this pathway and interfere with the production of pro-inflammatory cytokines. For this, J774 macrophages, pre-stimulated with LPS or not, are interacted with yeast fungus, followed by Real Time PCR analysis and flow cytometry, cytokine and phagocytosis index. Our data showed that the presence of the fungus exists increased levels of transcription of the Notch 1 receptor, and a decrease in ligand Delta 4 transcription on macrophages pre-stimulated with LPS. However, we found that the fungus itself is not able to induce transcription NF-&#954;B, even in the presence of LPS, but when macrophages are stimulated with LPS and suffer inhibition of the Notch signaling, exists increased levels of transcripts after interaction with the fungus, suggesting that this factor is activated in the absence of Notch. Within the context of inhibition of Notch, we found that phagocytosis of yeasts by macrophages become more efficient, since the increased rate of phagocytosis in the absence of Notch. It was verified that the fungus has the ability to promote the production of IL-6 via TLR-Notch, making us suppose that this cytokine is important for the establishment of the disease to be beneficial for the fungus and damage the host. And concurrently with increased IL-6 there is decreased production of TNF-&#945;. Based on these results, we suggest that P. brasiliensis uses the Notch signaling pathway as an escape mechanism. The interaction between the yeasts with macrophages promotes the activation of this pathway, by means of a Notch 1 receptor, inducing increased production of IL-6 cytokine important for the growth of fungus on host, together with a reduction of TNF-&#945;, contributing with a damaging fungicidal activity of macrophages.

Identificamos em 12 pacientes deficientes de CD40L uma incidência de infecções fúngicas de 83%, incluindo os primeiros casos de paracoccidioidomicose (PCM) e aspergilose. As células dendríticas imaturas (DCs) dos pacientes apresentaram expressão reduzida das moléculas HLA-DR, CD80 e CD86 e as DCs maduras (mDCs) pulsadas com os fungos P. brasiliensis ou C albicans apresentaram baixa expressão das moléculas HLA-DR e CD80. As mDCs dos pacientes secretaram baixa concentração de IL-12 e alta de IL-10. Nas co-culturas das mDCs com os linfócitos autólogos, observamos que a produção de IFN-<font face=\"Symbol\">g foi reduzida e a produção de IL-4 e IL-5 foi aumentada. Após tratamento com CD40L solúvel os defeitos observados foram revertidos. Os neutrófilos dos pacientes falharam na atividade fungicida em resposta ao P. brasiliensis, reduzida produção de H2O2 e sinalização via TLR1/TLR2 e TLR2/TLR6 foram observadas. Falhas na resposta de DCs e neutrófilos sugerem que esses são mecanismos imunopatológicos subjacentes à suscetibilidade às infecções fúngicas em pacientes deficientes de CD40L. / We identified 12 CD40L-deficient patients with an incidence of fungal infections of 83%, including the first case of paracoccidioidomycosis and aspergillosis. The immature DCs (iDCs) from the patients present reduced protein expression of HLA-DR, CD80 and CD86 and mature DCs (mDCs) pulsed with P. brasiliensis (mDCs) presented low expression of HLA-DR and CD80 molecules The mDCs from the patients secreted low levels of IL-12 and high of IL-10. In co-cultures of mDCs and autologous T lymphocytes we found low production of IFN-<font face=\"Symbol\">g and high production of IL-4 and IL-5. After treatment with soluble CD40L, the defects were reversed. The neutrophils from these patients showed impaired fungicidal activity in response P. brasiliensis and low production of H2O2. Additionally defective TLR1/TLR2 and TLR2/TLR6 signaling were observed. Failure in DCs and neutrophils responses are imunophatological mechanisms underlying the suscetibility to fungal infections in CD40L-deficient patients.

Orientador: Eduardo Mello de Capitani / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T19:31:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cerqueira_ElzaMariaFigueirasPedreirade_M.pdf: 18712156 bytes, checksum: 7f2620dcabd247de06998a15e4784d3f (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar as anormalidades torácicas na fase ativa da forma clínica crônica de paracoccidioidomicose através da tomografia computadorizada de alta resolução. Trinta e três pacientes (31 homens, 2 mulheres), com idade entre 32 e 69 anos, com diagnóstico confirmado de paracoccidioidomicose e em tratamento há menos de 30 dias, realizaram tomografia computadorizada de alta resolução. Dois radiologistas determinaram o grau de profusão (ausente, discreto, moderado e acentuado) de 25 achados pulmonares, a distribuição dos achados nos eixos pulmonares vertical e horizontal e a presença de aprisionamento aéreo, espessamento pleural, derrame pleural e linfonodomegalias Os achados mais freqüentes foram vidro fosco (97%), espessamento do interstício interlobular (93,9%), nódulo (75,8%), cavidade (71,2%), enfisema (69,7%), linfonodomegalias (69,7%), pequenos nódulos centrolobulares (66,7%), espessamento intersticial peribroncovascular (63,6%), consolidação (57,6%), e distorção arquitetural (57,6%). Diferentes graus de profusão foram observados na maioria dos achados, e dentre os achados pulmonares mais freqüentemente observados apenas consolidação não apresentou grau de profusão acentuado Predominam as alterações pulmonares distribuídas difusamente no eixo vertical pulmonar, comprometendo indistintamente a região central e periférica, poupando as regiões anteriores dos campos inferiores, e com marcante predomínio posterior no campo inferior (78,8%). São diversos os achados observados na tomografia computadorizada de tórax de alta resolução na fase ativa da PCM, não sendo possível caracterizar um padrão tomográfico específico da doença. Estão presentes sinais de comprometimento alveolar e intersticial, nódulos e fibrose que se manifesta principalmente por distorção arquitetural e bronquiectasias e/ou bronquioloectasias de tração / Abstract: Our purpose is to evaluate the pulmonary abnormalities on high-resolution CT in the active phase of chronic clinical form of paracoccidioidomycosis.Thirty-three patients (31 men, 2 women) carrying a confirmed diagnosis of paracoccidioidomycosis and under less than 30 days of treatment, have been submitted to high-resolution chest CT. Twenty-five pulmonary high-resolution CT findings have been graduaded by a four-point scale (0 to 3). The grade of each pulmonary finding, their distribution into transverse and longitudinal axes, and the frequency of air-trapping, pleural thickening , pleural effusion, and lymph nodes enlargement have been determinated by two radiologists Findings present at more than 50% of the patients have been ground-glass opacity (97% of patients), interlobular interstitial thickening (93,9%), nodule (75,8%), cavitation (71,2%), emphysema (69,7%), lymph nodes enlargement (69,7%), small centrilobular nodules (66,7%), peribronchovascular interstitial thickening (63,6%), consolidation (57,6%), and architectural distortion (57,6%). The majority of findings have been presented in all three profusion grades (discrete, moderate and severe). Among those that have been observed at more than 50% of the patients, consolidation is the only, which has not been observed in severe grade of profusion The HRCT findings regarding anterior versus posterior predominance have shown more frequently an indifferent distribution in upper and middle lung fields, and more frequently posterior predominance in lower lung field (78,8%). No predominance regarding central versus peripheral distribution have been observed in the majority of the fields. No specific high-resolution CT pattern was found in the active phase of chronic clinical form of paracoccidioidomycosis. Findings related to alveolar and interstitial disease, nodules and fibrosis, represented mainly by architectural distortion and bronchiectasis and bronchiolectasis have been seen / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

A paracoccidioidomicose (PCM) é um a micose profunda de natureza granulomatosa, causada pelo fungo Paracoccidioides brasiliensis (P. brasiliensis) e que compromete preferencialmente o tecido pulmonar. O P. brasiliensis sintetiza várias substâncias, dentre estas, destaca-se a glicoproteína de 43 kDa (gp43), a qual é considerada o principal componente antigênico do fungo. Dada a importância da gp43, anticorpos monoclonais (Mabs) contra esta glicoproteína foram obtidos e posteriormente caracterizados. Baseado na hipótese da rede idiotípica, Jerne (1974) propôs que cada anticorpo, quando produzido em resposta a um antígeno, induz a formação de outros anticorpos dirigidos contra sua região variável, na qual é única. Anticorpos anti-idiotípicos, que reconhecem o paratopo, contendo a imagem interna do antígeno, são denominados de Ab2-&#946; e seu potencial terapêutico tem sido explorado em diferentes sistemas. Apesar da molécula de anticorpo ser complexa estruturalmente, sabemos que a região Fab, é a responsável pelo mimetismo do antígeno. Então, nosso grupo de pesquisa construiu uma nova molécula de anticorpo à partir do Mab anti-idiotípico Ab2-&#946;, que mimetiza o antígeno gp43 de P. brasiliensis, denominada de fragmento variável de cadeia única (scFv). A transfecção dessa molécula em células dendríticas (DCs) mostrou ser promissora na PCM experimental, visto que estes transfectomas foram eficientes em apresentar a proteína scFv às células dos linfonodos, induzindo linfoproliferação, além de diminuírem a carga fúngica pulmonar. Visto que a molécula de scFv que possui a região de reconhecimento e ativação de linfócitos T mostrou eficiência no modelo de terapia na PCM experimental, o principal objetivo deste trabalho foi analisar os mecanismos pelos quais os transfectomas de DCs ativam a resposta imune em camundongos infectados com o fungo, para que possamos entender melhor a capacidade destas células em modular a resposta imune na PCM experimental. Dessa maneira, avaliamos a capacidade das DCs trasfectadas com pMAC/PS-scFv em migrar para os linfonodos regionais e induzirem uma resposta protetora com produção de IgG, bem como, analisamos o fenótipo destas células e produção de citocinas. Nosso modelo de terapia com pMAC/PS-scFv mostrou-se eficiente, uma vez que observamos diminuição de células T regulatórias nos linfonodos regionais, bem como aumento da produção de citocinas como IFN-&#947; e IL-12. Ainda, observamos aumento do isotipo IgG2b, sugerindo a modulação de resposta imune para o tipo Th1, importante na proteção da PCM. / The paracoccidioidomycosis (PCM) is the nature of granulomatous mycosis caused by Paracoccidioides brasiliensis (P. brasiliensis) and preferentially compromises lung tissue. The P. brasiliensis synthesizes various substances, among these, there is a 43 kDa glycoprotein (gp43), which is considered a major antigenic component of the fungus. Given the importance of gp43 monoclonal antibodies (Mabs) against this glycoprotein were obtained and further characterized. Based on the idiotypic network hypothesis, Jerne (1974) proposed that each antibody, when produced in response to an antigen, induces the several of other antibodies production against its variable region, which is unique. Anti-idiotypic antibodies that recognize the paratope containing the internal image of the antigen are called Ab2 &#946; and their therapeutic potential has been explored in different systems. Although the antibody molecule is structurally complex, we know that the Fab region, is responsible for antigen mimicking. Therefore, our research group has engineered a new molecule from the antibody Mab-anti-idiotypic Ab2 &#946; that mimics the antigen gp43 of P. brasiliensis, known as single chain variable fragment (scFv). Transfection of this molecule on dendritic cells (DCs) has shown promise in experimental PCM, since these transfection were effective scFv protein present in the cells of the lymph nodes, inducing lymphoproliferation, in addition to reducing fungal burden in the lung. Since the scFv molecule that has the region recognition and activation of T lymphocytes showed efficiency in therapy model in experimental PCM, the main objective of this study was to analyze the mechanisms by which transfected DCs activate the immune response in infected mice with the fungus, so that we can better understand the ability of these cells to modulate the immune response in experimental PCM. Thus, the capacity of transfected DCs with pMAC / PS-scFv to migrate to regional lymph nodes and induce a protective response with IgG production, as well as analyze the phenotype of these cells and cytokine production. Our therapy model with pMAC / PS-scFv was efficient, since we observed decrease of regulatory T cells in regional lymph nodes, as well as increased production of cytokines such as IFN-&#947; and IL-12. Furthermore, we observed increased IgG2b isotype, suggesting modulation of the immune response to a Th1 response, the protect model of experimental PCM.

Às condições crônicas podem causar alterações físicas, psíquicas e sociais progressivas requerendo em alguns casos mudanças permanentes no estilo de vida dos indivíduos. A paracoccidioidomicose é uma micose sistêmica, que exige tratamento prolongado, cuja maior prevalência encontra-se na América Latina com diversas áreas endêmicas no Brasil. Este estudo teve como objetivo caracterizar os clientes portadores de paracoccidioidomicose cutânea mucosa e identificar os motivos da não adesão ao seguimento clínico terapêutico. Foram consultados 74 prontuários de clientes adultos com diagnóstico de paracoccidioidomicose cutâneo mucosa atendidos e ou internados em um hospital escola terciário do interior paulista, no período de janeiro de 2000 a junho de 2006. O projeto foi encaminhado ao Comitê de Ética em Pesquisa do referido hospital. A maioria dos sujeitos é do sexo masculino (86,5%), com idade médica de 44,5 anos, 67,6% dos casos foram internados de uma a oito vezes, em 50,0% dos casos a internação se deu em decorrência de recidivas e 74,3% fizeram uso irregular das medicações e houve o abandono do tratamento por 54% dos clientes. O enfermeiro enquanto elemento essencial nos serviços de saúde pode propor estratégias individuais e coletivas para a assistência, visando estimular o cliente a lidar com as mudanças e consquentemente melhorar os níveis de adesão ao seguimento. / The chronical conditions can cause physical, emotional and social progressive alterations, requiring in some situations permanent changes in people life style. Paracoccidioidomycosis is a systemic mycosis, that requires a long-term treatment and its higher prevalence is in Latin America with different endemic areas in Brazil. This study aimed to characterize the clients carrie cuataneous mucosal paracoccidioidomycosis and to identify the reasons of non adhesion to clinical therapeutical follow-up. A total of 74 patient file were consulted of adults clients cared and/or interned is a teaching hospital of the interior of São Paulo State, in the period January 2000 through June 2006. The project was approved by the Ethical and Research Commitment of the hospital. Most of the participants was male (86,5%), with average age of 44,5 years old, 67,6% of the cases were interned from one to eight times and in 50,0% of the cases the hospitalization occurred due to recidives and 74,3% took the medicine in a irregular way, there was also the abandonment of the treatment in 54,0%. The nurse as the essencial member of health services can propose individual and collective strategies to the caring, in order to incentivate the client to deal with the changes and in consequence to improve the levels of adhesion to the follow-up.

Orientadores: Ronei Luciano Mamoni, Maria Heloisa de Souza Lima Blotta / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T00:10:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_MariaCarolina_D.pdf: 3693187 bytes, checksum: 65dcd416d067ae66b391e67841a7b240 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A paracoccidioidomicose (PCM), causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis (Pb), é a micose sistêmica de maior incidência no Brasil. Estudos anteriores demonstraram que a resistência ou suscetibilidade a essa infecção podem ser associadas, respectivamente, a padrões de resposta Th1 ou Th2. Recentemente, foram descritas novas subpopulações de linfócitos T, dentre elas as células Th17, que tem se mostrado importantes na proteção contra infecções fúngicas, mas cujo papel ainda não foi estudado na PCM humana. A diferenciação de células T CD4+ é modulada após o reconhecimento do patógeno por células dendríticas (DCs) por meio de vários receptores de reconhecimento padrão (PRRs), os quais modulam a diferenciação de células Th1, Th2 e Th17. Neste trabalho investigamos o papel dos receptores TLR2, TLR4 e Dectina-1 no reconhecimento de células leveduriformes de P. brasiliensis (Pb) por DCs derivadas de monócitos, assim como, a capacidade dessas DCs em modular a diferenciação de linfócitos T CD4+. Observamos que DCs expostas a células leveduriformes de Pb apresentam um fenótipo maduro (expressão de CCR7, CD83, CD86 e MHC II) e produzem citocinas (IL- ?, IL-6, IL-23, TNF-? e TFG- ?), levando à diferenciação de linfócitos T CD4+ produtores de IL-17, IFN-?, IL-22, IL-17/IL-22 e IL-17/IFN- ?. Também observamos que DCs estimuladas com células leveduriformes de Pb apresentam ativação de moléculas envolvidas na sinalização via TLRs e Dectina-1 (JNK, p38, Akt e ERK para os TLRs e Syk para Dectina-1), e que o bloqueio de Dectina-1 e/ou TLR2 resultou em um número menor de células Th17. Ao analisar a produção de citocinas por células mononucleares do sangue periférico, observamos que pacientes com a FJ da PCM apresentam produção aumentada de IL-4 e que pacientes com a FA apresentam produção elevada de IL-17 e IFN- ?. Em conjunto nossos resultados demonstram que a Dectina-1 e TLR2 são os receptores mais importantes para o reconhecimento de leveduras de Pb por células dendríticas e que esse reconhecimento pode levar à diferenciação de linfócitos T efetores produtores de IL-17 e IFN- ?. Além disso, podemos concluir que a FA da PCM apresenta uma resposta imunológica mista, com participação de linfócitos Th17 / Abstract: Paracoccidioidomycosis (PCM), caused by the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis (Pb), is the most prevalent systemic mycosis in Brazil. Previous studies showed that resistance or susceptibility to PCM can be associated to a Th1 or Th2 responses respectively. More recently, Th17 response was showed to be protective in fungal infections, but there is no data about Th17 cells in human PCM. T CD4+ differentiation is elicited and shaped after pathogen recognition by dendritic cells (DCs) through several PRRs, which modulate Th1, Th2 and Th17 generation. In this study we evaluated the role of TLR-2, TLR-4 and Dectin-1 in the recognition of Pb yeast cells by monocytes derived DCs, as well as, the capability of these DCs to modulate T CD4+ lymphocytes differentiation. We observed that DCs exposed to Pb presented a mature phenotype (expression of CCR7, CD83, CD80, CD86 and MHC II) and produce cytokines (IL-1, IL-6, IL-23, TNF-? and TGF- ) that promote the differentiation of TCD4+ lymphocytes producing IL- 7, IFN-?, IL-22, IL-17/IL-22 and IL-17/IFN-?. We also observed that DCs stimulated by Pb presented activation of molecules involved in the TLRs and dectin-1 signaling (JNK, p38, AKT, ERK - for TLRs and Syk for dectin- The blockage of dectin-1 and/or TLR2 diminished the differentiation of Th17 cells. We also analyzed PBMCs from patients with the acute/juvenile form (JF) or the chronic/adult form (AF) of PCM. Our results showed that patients with JF present elevated production of IL-4 and AF patients present higher production of IL-17. Altogether our results showed that Dectin-1 and TLR-2 are the most important receptors for human DCs to recognize Pb yeast cells and to produce cytokines such as IL- , IL- ? and TNF-?. After DC activation and cytokine production these cells are able to induce Th1 and Th17 differentiation through these receptors. Also we showed that Th17 cells are a major population in AF patients / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutora em Ciências Médicas

Paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica causada por Paracoccidioides brasiliensis (P. brasiliensis), que acomete preferencialmente o pulmão, sendo este um dos poucos órgãos que está em continua e intensa interação com o meio ambiente e o sistema imune. O grande desafio para o sistema imune pulmonar é discriminar o que é nocivo e reagir de acordo. As células dendríticas (DCs) são apresentadoras de antígenos \"profissionais\" capazes de fazer o processamento do antígeno e a apresentação de peptídeos a linfócitos T e são ideais para manter este equilíbrio delicado entre a tolerância e uma resposta imune efetora. Sabendo da importância dessas células no sistema imune e que a infecção por P. brasiliensis ataca preferencialmente o pulmão, células de lavado broncoalveolar (BAL), após infecção experimental com leveduras de P. Brasiliensis, foram analisadas. Nós observamos um significante aumento de DCs no BAL após 24hrs da infecção intratraqueal com 104 leveduras de P. brasiliensis. A caracterização das DCs mostraram que essas células expressaram CD11c, MHC-II e DEC205. A fim de verificar a capacidade de migração das DCs, as mesmas foram diferenciadas a partir de células de medula óssea e pulsadas com leveduras de P. brasiliensis, marcadas com CFSE e injetadas intratraquealmente em camundongos. Como controle negativo, utilizamos PBS e DCs não pulsadas com o fungo. Os resultados mostraram, que após 12 horas de infecção, as DCs (CFSE+CD11c+), migraram para os linfonodos torácicos. No entanto, a quantidade destas células diminui discretamente após 24 horas de infecção. Além disso, não observamos DCs nos linfonodos regionais, quando analisamos os grupos controle. Dessa forma, as células pulmonares também foram marcadas in vivo injetando-se intratraquealmente o corante CFSE juntamente com leveduras de P. brasiliensis. Verificamos que após 12 horas, as DCs pulmonares, dos animais infectados com o fungo, migraram para os linfonodos regionais. Esses resultados comprovam que o fungo P. brasiliensis foi capaz de ativar as DCs, induzindo sua migração para linfonodos regionais, e induziu nesse órgão uma resposta por células T evidenciada pela produção preferencial de IL-10. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis caused by Paracoccidioides brasiliensis (P. brasiliensis), which mainly affects the lungs. They are one of the few organs that are in constant and intense interaction with the environment and the immune system. The great challenge for the pulmonary immune system is to discriminate what is harmful and react accordingly. Dendritic cells (DCs) are \"professionals\" antigen-presenting cells and they can do the antigen processing. They can also do the presentation of peptides to T lymphocytes and are ideal for maintaining this delicate balance between tolerance and an effector immune response. Knowing the importance of these cells in the immune system and that the infection by P. brasiliensis preferentially attacks the lungs, cells from bronchoalveolar lavage (BAL), after experimental infection with yeasts of P. Brasiliensis, were analyzed. We observed a significant increase of DCs in BAL after 24 hours of intratracheal infection with 104 of yeast cells of P. brasiliensis. The characterization of these cells showed that DCs expressed CD11c, MHC-II and DEC205. In order to verify the ability of migration of DCs, they were differentiated from bone marrow cells and pulsed with yeasts of P. brasiliensis, they were also labeled with CFSE and injected intratracheally into mice. As a negative control, we used PBS and DCs that were not pulsed with the fungus. The results showed that after 12 hours of infection, the DCs (CFSE + CD11c +), migrated to the thoracic lymph nodes. However, the quantity of these cells decreases slightly after 24 hours of infection. Furthermore, we observed no DCs in regional lymph nodes when we analyzed the control groups. Thus, the lung cells were also labeled in vivo by injecting the CFSE dye intratracheally with yeasts of P. brasiliensis. We found that after 12 hours, pulmonary DCs of the animals infected with the fungus migrated to regional lymph nodes. These results indicate that the fungus P. brasiliensis was able to activate DCs, inducing their migration to regional lymph nodes, and inducing a response in that organ by T cells as evidenced by preferential production of IL-10.