Made available in DSpace on 2016-06-28T12:15:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 320.pdf: 1676340 bytes, checksum: 711128ac80440a81a6bb4dc9ff8ef57b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / Made available in DSpace on 2016-07-05T22:00:06Z (GMT). No. of bitstreams: 3 320.pdf.txt: 125592 bytes, checksum: 94d4fa2436a2862cb43733491b5ab4ce (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 320.pdf: 1676340 bytes, checksum: 711128ac80440a81a6bb4dc9ff8ef57b (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / A Filariose Linfática (FL) no Brasil é causada pela espécie Wuchereria bancrofti e consiste em um problema de saúde pública. O principal foco ativo de transmissão atualmente no país é a Região Metropolitana do Recife - PE, que desde 2003 iniciou o Programa de Controle/Eliminação da FL, tendo como estratégia principal o Tratamento Coletivo (TC) com Dietilcarbamanzina (DEC). Este trabalho, aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa do Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães, analisou o TC nessas áreas, acompanhando 30 moradores, no período de 2003 a 2009. Para essa análise além das ferramentas tradicionais da pesquisa filarial - Filtração (MF/mL de sangue) e Antígeno Circulante Filarial (Og4C3) - também foi utilizada a pesquisa de anticorpos através de um antígeno recombinante (Bm14). Essa nova metodologia desenvolvida é recomendada para ser empregada como uma forma de avaliar o progresso dos programas de controle e eliminação da FL nas áreas sob intervenção. Os resultados obtidos indicam redução na positividade para a FL pelas três metodologias: o Bm14 reduziu de 90 por cento para 80,00 por cento, o Og4C3 de 100 por cento para 60,00 por cento e a microfilaremia (MF) de 100 por cento para 0 por cento. A análise da densidade de MF/mL de sangue e a positividade para o Bm14 revelou que o grupo com maior densidade de MF/mL no sangue (= 57 MF/mL) apresentou maior percentual de redução na positividade para o anticorpo do que o grupo de menor densidade ( 57 MF/mL) em 2009. A taxa de anticorpos-positivos apresentou um percentual de redução de 11,11 por cento no último ano. A diminuição nas taxas de positividade apresentadas pelo Bm14 e o padrão de decaimento observado na análise das Densidades Óticas média e mediana do anticorpo durante os seis anos da pesquisa indicam que o monitoramento dos anticorpos com o antígeno recombinante Bm14 foi capaz de reconhecer indivíduos infectados e também de identificar redução dos níveis de anticorpos produzidos por eles após exposição aos parasitos filariais. Sugerindo que o TC com DEC teria surtido efeito na eliminação dos vermes adultos e conseqüente desaparecimento das microfilárias da circulação sanguínea

Trichomonas vaginalis é o agente etiológico da doença sexualmente transmissível não viral mais comum no mundo, sendo registrados aproximadamente 276 milhões de novos casos de tricomonose a cada ano. O estabelecimento da infecção se deve principalmente à capacidade de adesão do parasito às células epiteliais vaginais, cervicais ou de próstata, seguida pela intensa reação inflamatória, resultado da infiltração de neutrófilos no sítio da infecção. Nucleotídeos e nucleosídeos, especialmente ATP e adenosina, são liberados para o espaço extracelular por células em situações de estresse ou injúria tecidual e desenvolvem seus efeitos sinalizadores através da ativação de purinoceptores. Ainda, as ectonucleotidases, NTPDase e ecto-5’-nucleotidase, são capazes de hidrolisar os nucleotídeos gerando adenosina e finalmente, a enzima adenosina deaminase (ADA) é responsável pela conversão de adenosina em inosina. A expressão gênica de cinco NTPDases putativas presentes no genoma de T. vaginalis foram investigadas, assim como o envolvimento da sinalização purinérgica na relação parasito-hospedeiro. Nossos resultados mostraram que diferentes isolados de T. vaginalis expressam os genes TvNTPDase1, 2, 3, 4 e 5, sendo observado o maior número de transcritos para TvNTPDase1, 2 e 4. A sequência preditiva de aminoácidos revelou a presença das cinco regiões conservadas da apirase, domínios transmembrana, sítios de fosforilação, peptídeos sinais e os prováveis sítios ativos da enzima. A análise filogenética demonstrou maior similaridade das TvNTPDases com as formas intracelulares da enzima, como as NTPDases 4 e 7 humanas e a de Saccharomyces cerevisiae. Além disso, a restrição de soro promoveu aumento significativo da atividade da NTPDase de T. vaginalis, no entanto sem corresponder com o aumento de expressão gênica de determinada(s) sequência(s). Quanto à participação da sinalização purinérgica na resposta inflamatória de células do hospedeiro frente ao parasito, foram utilizados como modelos celulares as células epiteliais vaginais (HMVII), cervicais (HeLa) e neutrófilos humanos. As linhagens HMVII e HeLa mostraram expressar todos os subtipos de receptores P1, P2X e P2Y e XI os diferentes isolados de T. vaginalis, que foram cocultivados com as células, mostraram hidrolisar eficientemente os nucleotídeos ATP, ADP e AMP. Ainda, o isolado clínico fresco TV-LACM6 foi o único a apresentar elevada citotoxicidade frente às células epiteliais vaginais e cervicais, no entanto não foi detectado aumento da liberação de ATP pelas células após o cocultivo, provavelmente devido à alta atividade da enzima NTPDase observada nesse isolado. Os trofozoítos de T. vaginalis não foram capazes de aumentar a produção de IL-8 e IL-6 pelas linhagens HMVII e HeLa, e apenas os isolados ATCC30236 e TV-LACM6 causaram aumento na secreção da citocina MIP-3α pelas células epiteliais cervicais. Finalmente, o nucleotídeo ATP e o nucleosídeo adenosina não modularam a produção dos mediadores inflamatórios investigados. Em relação aos neutrófilos, estes mostraram aumentar a produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) e IL-8 após incubação com os trofozoítos de T. vaginalis. Os nucleotídeos e nucleosídeos da adenina e guanina não produziram efeito na produção de ERO e IL-8; no entanto, quando o nucleosídeo adenosina foi incubado junto com o inibidor da enzima ADA (EHNA) observou-se uma redução significativa da produção de ERO e IL-8 pelos neutrófilos, devido à inibição da ADA e consequentemente, ao aumento da concentração de adenosina disponível no meio extracelular. Os nossos resultados indicaram a ativação do receptor A1 dos neutrófilos nessa condição. O conjunto de dados aqui obtidos contribuiu para uma melhor caracterização da família de enzimas NTPDases de T. vaginalis assim como para um maior conhecimento acerca da influência da sinalização purinérgica na relação parasito-hospedeiro. / Trichomonas vaginalis is the agent of the most common non-viral sexually transmitted disease worldwide, causing 276.4 million new cases a year. The establishment of the infection is closely related to the parasite ability to adhere to vaginal, cervical and prostate epithelial cells, followed by an intense inflammatory response as result of neutrophil infiltration. Nucleotides and nucleosides, mainly ATP and adenosine, are released into the extracellular space by cells under stress or injury and they exert their signaling effects through activation of the purinoceptors. Moreover, the ectonucleotidases, NTPDase and ecto-5'-nucleotidase, are capable of hydrolyzing the nucleotides producing adenosine and finally, the adenosine deaminase (ADA) is responsible for the conversion of adenosine to inosine. We investigated the gene expression of five putative NTPDases found in T. vaginalis genome as well as the involvement of purinergic signaling on the host-parasite relationship. Our results showed that different T. vaginalis isolates are able to express TvNTPDase1, 2, 3, 4 and 5 and that TvNTPDase1, 2 and 4 are the most expressed genes. Predictive amino acid sequence revealed the presence of the five apyrase conserved regions, transmembrane domains, phosphorylation sites, signal peptides and the active sites. Phylogenetic analysis showed that TvNTPDases share more similarity with the intracellular enzymes, such as human NTPDase 4 and 7 and Saccharomyces cerevisiae NTPDase. In addition, the serum limitation caused a significant increase in NTPDase activity, but without association with the gene expression of a specific TvNTPDase sequence. Regarding the participation of purinergic signaling on the inflammatory responses against the parasite, the vaginal (HMVII) and cervical (HeLa) epithelial cells and the human neutrophils were used as cellular models. HMVII and HeLa cell lines showed to express all subtypes of P1, P2X and P2Y receptors and the different T. vaginalis isolates, which were co-cultured with the cells, showed to hydrolyze efficiently ATP, ADP and AMP. Furthermore, only the fresh clinical isolate, TV-LACM6, caused a profound cytotoxicity against the vaginal and cervical epithelial cells. Interestingly, it was not detected an increase in ATP release by the cells after cocultivation, probably due to the high NTPDase activity dislplayed by TV-LACM6 isolate. The T. vaginalis trophozoites were not able to increase the production of IL-8 and IL-6 by HMVII and HeLa cells and only ATCC30236 and TV-LACM6 isolates enhanced MIP-3α secretion by the cervical epithelial cells. Finally, neither ATP nor adenosine has modulated the production of the inflammatory mediators here investigated. Considering the neutrophils, T. vaginalis stimulated the production of reactive oxygen species (ROS) and IL-8 by these immune cells and both adenine as guanine nucleotides and nucleosides did not cause any effect on ROS and IL-8 levels. However, when adenosine was incubated with an ADA inhibitor (EHNA) we observed a significant reduction of ROS and IL-8 production by neutrophils, due to inhibition of ADA with a subsequent increase of adenosine concentration in the extracellular milieu. . Our results suggested the participation of A1 receptor in this condition. The data set obtained in this study contributed to the characterization of T. vaginalis NTPDases family as well as to a better understanding of the influence of purinergic signaling on host-parasite relationship.

Trichomonas vaginalis é um protozoário flagelado parasita do trato urogenital humano, agente etiológico da tricomonose - a DST não viral mais frequente no mundo. No processo inflamatório promovido pela infecção, a infiltração leucocitária é principal mudança citológica observada. Considerando o impacto da doença na saúde pública e a importância em investigar novos alvos terapêuticos para o tratamento da tricomonose, o estudo de aspectos bioquímicos do parasito torna-se fundamental. Nucleotídeos extracelulares, especialmente ATP, são liberados pelas células em situações de estresse, anóxia ou lesão, sequencialmente, as ectonucleotidases são capazes de hidrolizá-los, levando à produção de adenosina. De forma importante, T. vaginalis não realiza síntese de novo de purinas e as enzimas participam das vias de salvação. Avaliando-se o perfil das ectonucleotidases de T. vaginalis em uma condição de limitação de soro bovino, o qual representa a fonte de adenosina aos trofozoítos, observou-se um aumento significativo da hidrólise de ATP, ADP e AMP, assim como da expressão gênica da NTPDase e do metabolismo dos nucleotídeos extracelulares. Além disso, essa situação promoveu atraso do ciclo celular dos parasitos nos estágios G0/G1, sugerindo um aumento do pool intracelular de nucleotídeos da adenina. Na tentativa de melhor compreender os mecanismos envolvidos no recrutamento de leucócitos para o sítio da infecção, investigou-se a produção de óxido nítrico (NO) por neutrófilos estimulados com T. vaginalis. Os trofozoítos promoveram aumento dos níveis de NO, o qual, provavelmente, é sintetizado pela forma induzível da enzima óxido nítrico sintase. Os nucleotídeos da adenina não foram capazes de modular a produção de NO, diferentemente da adenosina, que provocou significativa redução da secreção do mediador, provavelmente através da ativação de receptores A2A. Os resultados obtidos nesta dissertação demonstram a importância das ectonucleotidases de T. vaginalis na geração de adenosina, e contribuem para o entendimento de mecanismos envolvidos com a imunidade na tricomonose. / Trichomonas vaginalis is a flagellated protozoan parasite of human urogenital tract that causes trichomonosis - the most common non-viral STD in the world. In the inflammatory process promoted by infection, the leukocytic infiltration is the main cytological change observed. Considering the disease impact on public health and the search for new therapeutic targets to trichomonosis treatment, it is important to investigate the biochemical aspects of the parasite. Extracellular nucleotides, especially ATP, are released by cells under stress, anoxia or injury and they can be degraded to adenosine by ectonucleotidases. Importantly, T. vaginalis lacks the ability to synthesize purines de novo, and the enzymes act on the salvage pathways generating the nucleosides. Evaluating the profile of T. vaginalis ectonucleotidases in a serum limitation condition, a significant increase in ATP, ADP and AMP hydrolysis was observed. NTPDase gene expression and the metabolism of extracellular nucleotides were also increased. Moreover, the serum limitation promoted cell cycle arrest at G0/G1 phases, suggesting an increase in intracellular pool of adenine nucleotides. To better understand the mechanisms involved in leukocyte recruitment to infection site, the nitric oxide (NO) production by neutrophils stimulated with T. vaginalis was investigated. The trophozoites caused increase in NO synthesis, which is probably performed by nitric oxide synthase. The adenine nucleotides were not able to modulate the NO production. In contrast, the adenosine promoted a significant reduction in the compound levels, likely through of A2A receptors activation. The results obtained in this study evidence the importance of T. vaginalis ectonucleotidases on adenosine generation and contribute to the host-parasite interactions as well as the immunity in trichomonosis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-10-04Bitstream added on 2014-06-13T18:53:46Z : No. of bitstreams: 1 zanette_mf_me_araca.pdf: 477117 bytes, checksum: 33b9b6dcc94d610c9edaafc75071b1a8 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A importância do diagnóstico da leishmaniose visceral canina no Brasil reside no fato de que, dentre as estratégias de controle da doença indicadas pela Fundação Nacional de Saúde, encontra-se a eliminação do cão doméstico sorologicamente positivo. Desta forma, torna-se necessário o conhecimento da sensibilidade e da especificidade das provas sorológicas utilizadas para a correta identificação destes animais. Para avaliar o desempenho dos métodos sorológicos no diagnóstico da leishmaniose visceral canina, foram determinadas e comparadas as características dos métodos de ELISA, reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e imunocromatografia, adotando-se como padrão o método parasitológico. Para tanto, foram utilizados 50 cães naturalmente acometidos por leishmaniose visceral e 45 cães sadios provenientes de área não endêmica para a doença. A RIFI revelou sensibilidade de 98% e especificidade de 91,1%, além de ótima concordância com o método parasitológico (Kappa = 0,893). Os métodos de ELISA e de imunocromatografia apresentaram boa concordância com o método parasitológico (coeficientes Kappa de 0,788 e 0,769, respectivamente) e valores de sensibilidade de 94% e 86% e especificidade de 84,4% e 91,1%, respectivamente. Com relação à ocorrência de reações cruzadas com leishmaniose visceral, das 14 amostras de soro positivas para doença de Chagas, nove (64,3%) foram consideradas positivas pela técnica de ELISA e seis (42,9%) pela RIFI, não se observando resultados positivos por imunocromatografia. Das 13 amostras de soros de animais portadores de erliquiose, uma (7,7%) apresentou resultado positivo por meio dos métodos de ELISA e de imunocromatografia. / The importance of canine visceral leishmaniasis diagnosis in Brazil is based on the fact that, according to the Ministry of Health, a seropositive dog must be culled. Thus, itþs important to know the sensitivity and specificity values of the methods employed for the diagnosis of the disease. To evaluate the performance of the available sorological tests for the diagnosis of canine leishmaniasis it was determined and compared the sensitivity and specificity of ELISA, indirect immunofluorescent antibody test (IFAT) and immunochromatographic test using the parasitological test as the gold standard. For this purposal, the study was carried out with a group of 50 naturally infected dogs from an endemic area and 45 healthy dogs from a non endemic area for visceral leishmaniasis. The IFAT was 98% sensitive and 91,1% specific, and showed a very good concordance with the parasitiological test (k = 0,893). The ELISA showed a sensitivity of 94% and specificity of 84,4% and when kappa index was analysed, a good concordance was obseved (k = 0,788). The immunochromatographic test was 86% sensisitive and 91,1% specific and showed a good concordance with the parasitiological test (k = 0,769). About the occurrence of cross reaction with visceral leishmaniasis, nine (64,3%) out of 14 positive samples for Chagas disease were positive by ELISA and six (42,9%) out of 14 were positive by IFAT, while the immunocromatographic test didn t yield any positive result. One (7,7%), out of 13 positive samples for ehrlichiosis, was positive by ELISA and immunocromatografic test. Five (83,3%) out of six positive samples for ehrlichiosis and babesiosis were positive by ELISA and three (50%) by immunocromatography, while IFAT didnþt yield any positive result. Five (50%) out of 10 positive samples for toxoplasmosis were positive by IFAT and one (10%) by immunocromatography.

Foi determinada a frequência de anticorpos para Babesia bovis e Babesia bigemina em bovinos de 6-11 meses em 6 propriedades rurais da região de Encruzilhada do Sul, RS, Brasil e sua correlação com a infecção da hemolinfa de teleóginas de Boophilus microplus. A pesquisa dos anticorpos foi realizada através da técnica de Imunofluorescência Indireta e o exame nas teleóginas através de esfregaço de hemolinfa corado com Giemsa. Ambas técnicas foram efetuadas no Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor (IPVDF). Das 379 amostras de soros bovinos, 179 (47,23%) foram positivas para B. bovis e/ou B. bigemina. O trabalho foi realizado num total de 6 propriedades de Encruzilhada do Sul, entre as quais a propriedade 5 obteve mais animais positivos, enquanto que a propriedade 1 obteve o maior número de animais negativos.Nos esfregaços de hemolinfa nenhum resultado positivo foi encontrado, assim sendo, não houve correlação entre a sorologia e a infecção da hemolinfa das teleóginas por vermículos de Babesia spp. Na análise estatística, comparou-se os resultados obtidos nas diferentes propriedades. Com base nestes resultados, pode-se concluir que a frequência de anticorpos para Babesia spp detectada neste trabalho foi de 47,23%, ficando abaixo do índice que caracteriza uma zona de instabilidade enzoótica para Tristeza Parasitária Bovina (TPB). / Was determined the frequency of antibodies for Babesia bovis and Babesia bigemina in cattle between 6-11 months of age in six farms of Encruzilhada do Sul, RS, Brazil and its correlation with the female ticks Boophilus microplus hemolymph infection. All laboratory thecniques were done at Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor (IPVDF). From the 379 cattle analysed samples, 179 (47,23%) were positive for B. bovis and/or B. bigemina. In hemolymph tests, all samples were negative. Based on those results, did not heve any correlation between sorologic results and hemolymph infection and the frequency of antibodies for Babesia spp. detected at this work was 47,23%, caracterizing a instability zone for Tristeza Parasitária Bovina (TPB).

O Toxoplasma gondii é um parasito coccídio que se localiza intracelularmente em vários órgãos e tecidos de uma ampla gama de hospedeiros. O estudo da soroepidemiologia, deste parasito, na espécie felina é de grande relevância, pois o estreito convívio de seres humanos com esses animais pode acarretar na transmissão de algumas doenças como a toxoplasmose. Com o objetivo de contribuir com dados sobre a freqüência de anticorpos para Toxoplasma gondii em felinos domiciliados da cidade de Porto Alegre, os soros desses animais foram avaliados pelas técnicas de Hemaglutinação Indireta (HAI) e Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). A freqüência de anticorpos de T. gondii para a amostragem em 245 soros felinos foi de 26,94% pela técnica de HAI e 37,96% pela técnica de RIFI. Dados epidemiológicos foram incluídos no trabalho, como gênero, raça, idade, acesso ou não à rua e tipo de alimentação. Estes parâmetros foram analisados estatisticamente para mensurar suas influências nos resultados obtidos com os testes. A percentagem de co-positividade e co-negatividade nas duas técnicas foi de 56% e 90%, respectivamente, e uma percentagem de concordância total de 77,5%, enquanto que o valor Kappa foi de 0.49. Este estudo mostra que os valores encontrados são relativamente altos, levando-nos a crer, que estes felinos, em algum momento de sua existência poderiam ser fonte de contaminação ambiental, como potenciais eliminadores de oocistos, principalmente aqueles que têm livre acesso à rua. / Toxoplasma gondii is an intracellular coccidian parasite that infects several organs and tissues in a large variety of hosts. Its seroepidemiology in feline species is of great value since the close relationship between human beings and cats may serve as a vector for the transmission of some diseases such as toxoplasmosis. The sera of 245 cats from Porto Alegre, southern Brazil, were submitted to indirect hemagglutination antibody (IHA) test and to indirect immunofluorescence (IIF) assay in order to determine the frequency of antibodies against Toxoplasma gondii. The IHA test showed that 26.94% of the cats had antibodies against Toxoplasma gondii compared to 37.96% in the IIF assay. Epidemiological data such as gender, race, age, access or not to the street and eating behavior were assessed. These parameters were statistically analyzed to measure the influence on test results. The co-positive and co-negative values amounted to 56 and 90% for the IHA test and IIF assay, respectively, yielding an overall agreement of 77.5% and a kappa coefficient of 0.49. The rates obtained by this study are relatively high, leading us to the assumption that these cats, mainly those with free access to the street, could be a source of environmental contamination, due to oocyst shedding, at some time over the course of their lifetime.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-12-14Bitstream added on 2014-06-13T19:35:11Z : No. of bitstreams: 1 coelho_nmd_me_araca.pdf: 406925 bytes, checksum: b4d17da85b8093f899383793bd8d1c81 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (FUNDUNESP) / O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrência de Cryptosporidium spp. em crianças e seus respectivos cães e gatos de estimação residentes no Município de Andradina, SP, por meio do Teste de Imunoadsorção Enzimática (ELISA). Durante o período de janeiro a agosto de 2009, foram analisadas 188 amostras fecais de crianças, bem como de seus respectivos cães e gatos de estimação para pesquisa de Cryptosporidium spp. O teste quiquadrado (χ2) foi utilizado para verificar a associação entre as variáveis: sexo, idade, raça e consistência fecal, com nível de significância de 5%. Pelo ELISA foi detectado Cryptosporidium spp. em em amostras fecais de 2,1% (4/188) das crianças com idade inferior a sete anos. Entre os animais examinados, 6,8% (9/132) dos cães e 5,4% (3/56) felinos apresentaram amostras positivas para este coccídeo. Tanto nas crianças como nos animais não houve influencia do sexo e da idade na detecção do Cryptosporidium spp. sendo que nestes últimos a raça também não influenciou (P> 0,05). Neste trabalho foi evidenciada uma baixa ocorrência deste parasito nas crianças, assim só será possível determinar com precisão a relação entre a infecção das crianças com dos animais, com a posterior caracterização molecular deste protozoário. / The objective this study was to evaluate the occurrence of Cryptosporidium spp. in children and their dogs and pet cats in the city of Andradina, SP. through Test-linked immunosorbent assay (ELISA), during the period from January to August 2009, we analyzed 188 fecal samples from children, as well as their dogs and pet cats for detection of Cryptosporidium spp. The chi-square test (χ2) was used to verify the association between gender, age, race and fecal consistency, with a significance level of 5%. Using ELISA was detected Cryptosporidium spp. in stool samples in 2.1% (4/188) of children under the age of seven years. Among the animals examined, 6.8% (9/132) of dogs and 5.4% (3/56) cats had positive samples for this coccidium. Both children and animals there was no influence of sex and age on the detection of Cryptosporidium spp. being that in these last race did not influence (P> 0.05). This study demonstrated a low occurrence of this parasite in children, so only you can accurately determine the relationship between the infection of children with the animal with the molecular characterization of this parasite.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-01-20Bitstream added on 2014-06-13T19:30:25Z : No. of bitstreams: 1 metzger_b_me_botfmvz.pdf: 819148 bytes, checksum: 26a92a8f8879a45e826beca01ff7b6a5 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O trabalho teve como objetivo investigar a ocorrência de Hepatozoon spp., piroplasmas e hemoplasmas em felídeos neotropicais nascidos em vida livre. Amostras sanguíneas foram colhidas de 11 Leopardus pardalis, 10 Leopardus tigrinus, oito Puma yagouaroundi, um Leopardus wiedii e um Puma concolor, provenientes dos Estados do Pará, Maranhão, Piauí, Ceará e Minas Gerais. Esfregaços sangüíneos foram realizados para observação dos hemoparasitas e a extração de DNA foi feita para utilização em técnicas moleculares. Hepatozoon spp. e piroplasmas foram diagnosticados pela Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) e hemoplasmas felinos foram pesquisados pela PCR- RFLP e “Nested”-PCR. A caracterização molecular dos isolados obtidos foi feita após o sequenciamento e a análise filogenética. A ocorrência de pelo menos um hemoparasita diagnosticado pela técnica do esfregaço sanguíneo foi de 6,45% (2/31) e pela PCR foi de 45,16% (14/31), sendo observadas, 16,12% (5/31), 3,22% (1/31) e 38,70% (12/31) de infecções por Hepatozoon sp., Cytauxzoon felis e hemoplasmas (das espécies Mycoplasma haemofelis e/ou Candidatus Mycoplasma haemominutum), respectivamente. Foram encontradas infecções únicas e mistas nos felídeos. O diagnóstico positivo foi maior nos adultos (92,85%) (p=0,007) e na espécie L. pardalis (57,14% - 8/14). A detecção de C. felis em exemplar juvenil de P. concolor, recém capturado na natureza, indica sua presença na população de felídeos neotropicais de vida livre no Brasil. A caracterização molecular de Hepatozoon sp. em felídeos neotropicais e os relatos das infecções por este hemoparasita em L. tigrinus e por M. haemofelis e Candidatus M. haemominutum em P. yagouaroundi são inéditos no mundo. / The aim of this study was to investigate the occurrence of Hepatozoon spp., piroplasms and hemoplasms in wild caught neotropical felids. Blood samples were drawn from 11 Leopardus pardalis, 10 Leopardus tigrinus, eight Puma yagouaroundi, one Leopardus wiedii and one Puma concolor coming from the States of Para, Maranhão, Piauí, Ceará and Minas Gerais. Blood smears were evaluated for parasites and DNA was extracted for molecular techniques. Hepatozoon spp. and piroplasms were diagnosed by Polymerase Chain Reaction (PCR) and feline hemoplasms were examined by both RFLP-PCR and Nested- PCR. Molecular characterization of the isolates obtained was performed after sequencing and phylogenetic analyses. The occurrence of at least one hemoparasite diagnosed by blood smear technique was 6.45% (2/31) and by PCR was 45.16% (14/31). Infections of Hepatozoon sp., Cytauxzoon felis and feline hemoplasms (from species Mycoplasma haemofelis and/or Candidatus Mycoplasma haemominutum) were observed, respectively, in 16.12% (5/31), 3.22% (1/31) and 38.70% (12/31) from the total of animals studied. Infections and co-infections were found among felids. The positive diagnosis were higher in adults (92.85%) (p= 0,007) and in L. pardalis (57.14% - 8/14). The detection of C. felis in a juvenile, recently wild caught P. concolor, indicates the presence of this piroplasm in the wild felid population of Brazil. The molecular characterization of Hepatozoon sp. in neotropical felids and the report of this hemoparasite infection in L. tigrinus as well as the report of M. haemofelis and Candidatus M. haemominutum in P. yagouaroundi are novelties in the world.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 205677 bytes, checksum: 93ca0cf3833e543ffed5592e081337ba (MD5) Previous issue date: 2006-03-23 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / The viability of the formulation with nematophagous fungi D. flagrans was evaluated in the biological control of cattle gastrointestinal nematodes. Two groups, with eight Holsteinzebu calves each, it was placed in two lots grazed with Brachiaria decumbens on four hectare each one. The experiment started in March of 2005 and turn off in September of 2005. In the control group (A), each animal received 20 grams without fungus of the pellets; in the treated group (B), the animals received 20 grams of with D. flagrans fungus pellets. The counting of the infective larvae recovered in the paddock of the group B, it harvested until 20 centimeters of the distance in the dung pats, it was lower than in the plot A (P<0.01) harvested until 20 centimeters in the distance in the dung pat), there was significative reduction in the larvae recovered in the pasture in 53, 71, 65 e 85 %, respectably, in the April, July, August and September months. The genera Cooperia was the most prevalence (59.9 %). The monthly averages of the weight were bigger in the group B (P<0.05), there was difference between the group B and A in relation in profit weight, in June, July, August and September in de 21, 13, 8,5 e 20 %, respectably. The accountings of the egg per grams of the feces were obtained by the of the Gordon & Whitlock; modified by Lima, and of the Wisconsin of the Cox & Todd, for dairy cattle, modified by Ito techniques and they present differences in the value of the eggs per grams counts for control and treated group (P<0.05). It was observed significative reduction in the count eggs obtained by Gordon & Whitlock technique in May, June, July and August months in treated group in the 35, 46, 36 e 30 % , respectably e do not significative reduction in September (26 %). By Wisconsin modified technique, it there were difference in the June, July and August months in 58, 47 e 51 %, in the treated group, in relation in the control group and do not significative reduction in May (26 %) and September (25 %). It can to conclude that the application of the sodium alginate pellets with nematophagous fungus D. flagrans is effective in the control of the infective larvae of the bovine. / A viabilidade de uma formulação de fungo nematófago Duddingtonia flagrans foi avaliada no controle biológico de nematóides parasitos gastrintestinais de bovinos. Dois grupos de oito bezerros cada, mestiços Holandês-zebu foram colocados em duas pastagens de Brachiaria decumbens de 4 hectares cada. O experimento foi realizado no período de março a setembro de 2005. No grupo controle (A), os animais receberam 20 gramas de péletes sem fungo; no grupo tratado (B), os animais receberam 20 gramas de péletes com o fungo D. flagrans via oral. As contagens de larvas infectantes encontradas na pastagem B, coletadas até 20 centímetros de distância do bolo fecal, foram significativamente menores (P < 0,01) que na pastagem A (até 20 cm), sendo que houve redução no número de larvas recuperadas nas pastagens de 53, 71, 65 e 85 %, respectivamente nos meses de abril, julho, agosto e setembro do grupo tratado em relação ao controle. sendo que o gênero Cooperia foi o mais prevalente (59,96 %). As médias mensais de peso foram maiores significativamente no grupo B (P < 0,05), sendo que houve diferença no ganho de peso entre os grupos tratado e controle nos meses de junho, julho, agosto e setembro de 21, 13, 8,5 e 20 %. As contagens de ovos por gramas de fezes (OPG) foram obtidas pelas técnicas de Gordon & Whitlock, modificada por Lima e de Wisconsin, de Cox & Todd, modificada por Ito e apresentaram diferenças para valores de contagens de ovos por gramas entre grupo tratado e controle (P<0,05). Foi observada redução significativa nos valores da contagem no grupo tratado obtidos pela técnica de Gordon & Whitlock nos meses de maio, junho, julho e agosto de 35, 46, 36 e 30 % respectivamente e redução não significativa no mês de setembro de 26 %. E os dados obtidos pela técnica de Wisconsin houve redução significativa nos meses de junho, julho e agosto respectivos de 58, 47 e 51 % no grupo tratado em relação ao controle e redução não significativa nos meses de maio (26 %) e setembro (25 %). Pode se concluir que a aplicação de péletes de alginato de sódio contendo o fungo nematófago D. flagrans é efetiva no controle de larvas infectantes de bovinos.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 644915 bytes, checksum: d059fb831fbd9168fde56d0f1948a13a (MD5) Previous issue date: 2005-05-25 / During the past ten years, the protozoan Neospora caninum has been described and associated as an ethyological agent of infected abortions in cattle. This disease in dogs also has an abortive character, but since dogs are definitive hosts, they have relevant importance in the life cycle of this parasite, acting as a source of the disease. Other diseases such as leptospirosis and brucelosis are also disseminated in Brazil and are associated to reproductive disturbances. The objective of this study was to evaluate the presence of infection for N. caninum in cattle and dogs of rural properties in two municipalities, Viçosa and Mercês, located in the macro-region of Zona da Mata in the state of Minas Gerais, as well as to analyze the existing risk factors for the infection. Serum samples of female cattle and dogs were collected for research of anti-N. caninum antibodies, using the indirect immunofluorescence technique; Brucella abortus selective test (Buffered Acidified Antigen - BAA) and corroborative tests (2-ME and SAT) and Leptospira sp., Microscopic Agglutination Technique (MAT) without and with sera dilution. The bovine sera were tested for the three pathogenic bioagents and the canine sera for N. caninum and Leptospira sp. In addition, information was collected by applying a structured questionnaire on type of exploration, production system and reproductive problem history in cattle and habits, type of food, demographic characteristics in dogs. The prevalence of positive properties was of 54.3% and 18.5% for N. caninum in cattle and dogs, respectively; 15.2% for Brucella abortus and 6.5% for Leptospira sp. in cattle and 7.4% for Leptospira sp.in dogs. The prevalence of positive animals presented lower results: 23.3% of N. caninum in cattle and dogs, respectively; 15.2% for Brucella abortus and 6.5% for Leptospira sp. in cattle and 7.4% for Leptospira. However, it should be emphasized that the prevalence for N. caninum in cattle was significantly higher, compared to Brucella abortus (p < 0.01) and Leptospira sp. (p < 0.01). Positive properties for bovine neosporosis were associated to the presence of reproductive disturbances in the animals (p < 0.01), when the analysis considered the type of disturbance, abortion (OR = 5.2; IC 95% = 1.32-20.54) and prenatal mortality (OR = 6.0; IC 95% = 1.22 - 29.95) presented significant association. The occurrence of positive serology for N. caninum in cattle was associated to the presence of positive dogs in the property (p<0.01); however, reproductive problem in cattle was not associated with canine neosporosis (p = 0.1046). Significant association was also verified between bovine osteoporosis and type of exploration, serum positive cattle having, approximately, three times more chance (OR = 2.82 and IC 95% = 1.05 - 9.52) of belonging to a milk production system rather than mixed. The characterization of canine neosporosis did not show significant association with the variables sex (p = 0.55), age (p = 0.34), animal habit (p = 0.03; OR = 0.00; IC 95% = 0.0-1.06) and type of food (p = 0.11). The results suggest that sanitation in neosporosis has become of utmost importance in bovine herds, especially when reproductive problems resulting from the infection are considered. Therefore, it becomes evident the need for animal health authorities and institutions to fight this disease. / Durante os últimos dez anos o protozoário Neospora caninum tem sido descrito e associado como agente etiológico de abortamentos infecciosos em bovinos. Esta doença em cães também tem caráter abortivo, mas como os caninos são hospedeiros definitivos, possuem relevante importância no ciclo de vida deste parasita, funcionando como reservatório da doença. Outras doenças como a leptospirose e a brucelose também são disseminadas em nosso país e também estão associadas a transtornos reprodutivos. O objetivo deste estudo foi avaliar a presença de infecção para N. caninum em bovinos e cães existentes em propriedades rurais de dois municípios, Viçosa e Mercês, pertencentes à Macrorregião Zona da Mata do Estado de Minas Gerais, bem como analisar a existência de fatores de risco para a infecção. Foram coletadas amostras de soro de bovinos fêmeas e cães para pesquisa de anticorpos anti-N. caninum, pela técnica de imunofluorescência indireta; Brucella abortus prova seletiva (Antígeno Acidificado Tamponado - AAT) e provas confirmatórias (2-ME e SAT) e Leptospira sp., Técnica de Aglutinação Microscópica (MAT) sem e com diluição dos soros. Os soros bovinos foram testados para os três bio-agentes patogênicos e os de cães para N. caninum e Leptospira sp. Adicionalmente, foram coletadas informações, utilizando-se questionário estruturado, relativas ao tipo de exploração, sistema de produção e histórico de problemas reprodutivos em bovinos e hábitos, tipo de alimentação, características demográficas dos cães. As prevalências de propriedades positivas foram de 54,3% e 18,5% para N. caninum em bovinos e cães, respectivamente; 15,2% para Brucella abortus e 6,5% para Leptospira sp. em bovinos e 7,4% para Leptospira sp. em cães. As prevalências de animais positivos apresentaram resultados menores: 23,3% de N. caninum em bovinos e cães, respectivamente; 15,2% para Brucella abortus e 6,5% para Leptospira sp. em bovinos e 7,4% para Leptospira, entretanto, é de se destacar que, para os bovinos, a prevalência para N. caninum, significativamente superior quando comparada a Brucella abortus (p < 0,01) e Leptospira sp. (p < 0,01). Propriedades positivas para neosporose bovina estiveram associadas à presença de distúrbios reprodutivos nos animais (p < 0,01), quando a análise considerou o tipo de distúrbio, abortamento (OR = 5,2; IC 95% = 1,32-20,54) e mortalidade perinatal (OR = 6,0; IC95% = 1,22 - 29,95) apresentaram associação significativa. A ocorrência de sorologia positiva para N. caninum em bovinos esteve associada à presença de cães positivos na propriedade (p < 0,01), entretanto, problema reprodutivo em bovinos não esteve associado à neosporose canina (p = 0,1046). Associação significativa também foi verificada entre a neosporose bovina e o tipo de exploração, sendo que os bovinos soropositivos tiveram, aproximadamente, três vezes mais chance (OR = 2,82 e IC 95% = 1,05 - 9,52) de pertencerem a sistema de produção tipo leite do que tipo misto. A caracterização da neosporose canina não revelou associação significativa com as variáveis sexo (p = 0,55), idade (p = 0,34), hábito do animal (p = 0,03; OR = 0,00; IC 95% = 0,0-1,06) e tipo de alimentação (p = 0,11). Os resultados sugerem o significado sanitário que a neosporose vem assumindo em rebanhos bovinos, notadamente quando se considera a ocorrência de problemas reprodutivos decorrentes da infecção. Nesse sentido, evidencia-se a atenção necessária das autoridades e instituições de saúde animal, no combate a esta enfermidade.