Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2017-01-02T16:51:48Z No. of bitstreams: 2 Tese - Bruno Junior Neves - 2016.pdf: 19331549 bytes, checksum: a7cd8b65a0a68a6cc99718604d4a6aa4 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-03T09:47:27Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Bruno Junior Neves - 2016.pdf: 19331549 bytes, checksum: a7cd8b65a0a68a6cc99718604d4a6aa4 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-03T09:47:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Bruno Junior Neves - 2016.pdf: 19331549 bytes, checksum: a7cd8b65a0a68a6cc99718604d4a6aa4 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-11-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Schistosomiasis is a serious endemic disease caused by trematodes of the genus Schistosoma. Currently the control of this disease is based solely on the administration of praziquantel. However, its extensive use has raised concerns about the emergence of resistant worms and the need of discovering new anti-schistosomal drugs. Given the above, the main goal of this study was to design new S. mansoni thioredoxin glutathione reductase (SmTGR) inhibitors showing antischistosomal activity through cheminformatics tools and to repurpose new drugs for schistosomiasis employing bioinformatics tools. At the stage of drug design, binary QSAR models were constructed and validated to predict inhibitory activity of SmTGR, a validated target in schistosomes. From the individual models, consensus and consensus rigor models and were generated (CCRs = 0.87 and 0.91, respectively) and used for the virtual screening of 150,000 compounds. At the end of this process, 29 compounds were prioritized and purchased for biological evaluation. As a result, two new hits representing new molecular scaffolds showed EC 50 ≤ 3.5 µM to schistosomula and ≤ 6.0 µM for adult female worms, low cytotoxicity against WSS-1 mammalian cells (IC50 > 16 µM) and low reactivity with cysteine proteases (IC50 > 100 µM). In the second part of this work, that is drug repositioning, 2,114 proteins of S. mansoni were used in a search for orthologs in therapeutic drug target databases (DrugBank, TTD and STITCH). As a result, 215 drugs were predicted to interact with 49 schistosome proteins, of which 47 had already anti-schistosomal activity reported in the literature. Then, principal component analysis (PCA) and k-means showed that 115 drugs were in the chemical space of known anti-schistosomal agents, increasing the overall confidence of predictions. Among them, paroxetine (PAR), an antidepressant drug predicted to inhibit serotonin transporter proteins of S. mansoni (SmSERTs) presented antischistosomal activity against schistosomula (EC50 = 2.5 µM) and adult worms (EC50 = 5.1 µM and 9.9 µM for males and females respectively) of S. mansoni. Lastly, molecular docking studies with SmSERT-A and its ortholog in humans (hSERT) explored the molecular basis for antischistosomal activity of PAR and provided information for the design of more potent and selective analogs. / A esquistossomose é uma doença endêmica grave causada por trematódeos do gênero Schistosoma. Atualmente o controle desta doença é baseado exclusivamente no uso do fármaco praziquantel. Todavia, seu uso extensivo tem levantado a preocupação quanto ao surgimento de vermes resistentes e a necessidade de descobrir novos fármacos esquistossomicidas. Face ao exposto, o objetivo deste trabalho foi planejar novos inibidores da enzima tiorredoxina glutationa redutase de S. mansoni (SmTGR) com atividade esquistossomicida utilizando ferramentas de quimioinformática e reposicionar novos fármacos para esquistossomose utilizando ferramentas de bioinformática. No estudo de planejamento de fármacos, modelos de QSAR binários foram construídos e validados para predição da atividade inibitória da SmTGR, um alvo validado em esquistossomos. A partir dos modelos individuais, modelos de consenso e consenso rigoroso foram construídos (CCRs = 0,87 e 0,91, respectivamente) e utilizados na triagem virtual de 150 mil compostos. Ao final deste processo, 29 compostos foram priorizados e adquiridos para avaliação biológica. Como resultado, dois novos hits representando novos scaffolds moleculares apresentaram EC50 ≤ 3,5 µM para esquistossômulos e ≤ 6,0 µM para fêmeas de vermes adultos, baixa citotoxicidade em células WSS-1 de mamíferos (IC50 > 16 µM) e baixa reatividade com cisteíno proteases (IC50 > 100 µM). No estudo de reposicionamento de fármacos, 2.114 proteínas de S. mansoni foram utilizadas em uma busca por ortólogos em bases de dados de alvos terapêuticos de fármacos (DrugBank, TTD e STITCH). Como resultado, 215 fármacos foram preditos para interagir com 49 proteínas do esquistossomo, dos quais 47 já tinham atividade esquistossomicida reportada na literatura. Em seguida, a análise de componentes principais (PCA) e k-means demonstrou que 115 fármacos estavam dentro do espaço químico de agentes esquistossomicidas conhecidos, atribuindo maior confiabilidade as predições. Dentre eles, a paroxetina (PAR), um fármaco antidepressivo predito para inibir proteínas transportadoras de serotonina do S. mansoni (SmSERTs), apresentou atividade esquistossomicida em esquistossômulos (EC50 = 2,5 µM) e vermes adultos (EC50 = 5,1 μM e 9,9 μM para machos e fêmeas) de S. mansoni. No final, estudos de docagem molecular com a SmSERT-A e seu ortólogo em humanos (hSERT) exploraram as bases moleculares para a atividade esquistossomicida da PAR e forneceram informações para o planejamento de novos análogos mais potentes e seletivos.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2015-03-31T12:49:26Z No. of bitstreams: 2 Tese - Marcos Gontijo da Silva - 2014.pdf: 2095303 bytes, checksum: e0c68d61bd86477538fe635074cde244 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-04-02T10:30:55Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Marcos Gontijo da Silva - 2014.pdf: 2095303 bytes, checksum: e0c68d61bd86477538fe635074cde244 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-02T10:30:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Marcos Gontijo da Silva - 2014.pdf: 2095303 bytes, checksum: e0c68d61bd86477538fe635074cde244 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-12-10 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / INTRODUCTION: Toxoplasmosis is a parasitic disease caused by the protozoan Toxoplasma gondii. This disease becomes important when present in pregnant women because of the imminent risk of congenital transmission and can promote immediate and late sequelae of concepts, among which stand out the neurological and ocular manifestations. Knowledge of the prevalence and risk factors for its spread are of great relevance. OBJECTIVES: To evaluate the prevalence of gestational and congenital toxoplasmosis and risk factors for transmission of toxoplasmosis in pregnant women Gurupi, Tocantins. METHODS: The study population consisted of 487 pregnant women of which were extracted using a standardized form, sociodemographic, dietary and cultural habits. It was also made of peripheral blood collection performed by serological anti-anti IgM and IgG ELISA. PCR and IgG avidity levels in women and their newborn babies where the mother was IgM was performed. Data were analyzed by comparing the seropositivity with risk factors by means of the odds ratio. RESULTS: The prevalence of IgG antibodies was 68.37% and 5.75% for IgM antibodies. The sociodemographic characteristics associated with risk for toxoplasmosis were; education greater than or equal to eight years, family income at or below minimum wage. Regarding eating habits, there was a significant association between seropositivity and the variables: eating meat, cut raw meat and do not wash the knife and board before cutting the vegetables and frequent intake of vegetables. There were seven cases of vertical transmission and a case of abortion. DISCUSSION: The results confirm the studies carried out in Brazil and abroad as the prevalence of toxoplasmosis and as to the factors involved in the transmission, where the variables studied, meat intake, intake of raw vegetables and use the unwashed cutting board and knife after cutting raw meat, are important risk factors for the pregnant woman acquires toxoplasmosis during pregnancy. CONCLUSION: Gurupi proved to be a municipality with high endemicity of this parasite. / INTRODUÇÃO: A toxoplasmose é uma enfermidade com risco de transmissão congênita, podendo promover sequelas imediatas ou tardias no concepto. OBJETIVOS: Avaliar a prevalência da toxoplasmose gestacional e congênita e os fatores de risco associados a transmissão da toxoplasmose em mulheres grávidas de Gurupi, Tocantins. METODOLOGIA: A população do estudo foi formada por 487 gestantes nas quais foi aplicado formulário padronizado para a obtenção de dados sociodemográficos, hábitos alimentares e culturais. Também foi feita coleta de sangue periférico, realizada sorologia por meio de ELISA anti-IgG e Anti-IgM. Foi realizada a técnica de PCR e Avidez de IgG nas mulheres e seus respectivos recém nascidos onde a mãe era IgM reagente. Os dados foram analisados confrontando a soropositividade com os fatores de risco por meio do odds ratio. RESULTADOS: A prevalência de anticorpos IgG na população estudada foi de 68,37% e de anticorpos IgM de 5,75%. As características sociodemográficas associadas a risco para toxoplasmose foram; menor ou igual a oito anos de escolaridade, renda familiar igual ou inferior a um salário mínimo. Quanto aos hábitos alimentares, houve associação significativa da soropositividade com as variáveis: comer carne, cortar a carne crua e não lavar a faca e tábua antes de cortar as verduras e ingestão frequente de verduras. Houve sete casos de transmissão vertical, comprovados por sorologia e PCR e um caso de aborto. CONCLUSÕES: Os dados corroboram aos estudos realizados no Brasil e no exterior quanto à prevalência da toxoplasmose e quanto aos fatores envolvidos na transmissão, onde as variáveis pesquisadas, ingestão de carne, ingestão de verduras cruas e uso de tábua e faca não lavada após cortar carne crua, são importantes fatores de risco para que a gestante adquira a toxoplasmose durante a gestação. Gurupi mostrou ser um município com elevada endemicidade deste parasito.

Made available in DSpace on 2016-08-17T15:00:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paulo Adriano Dias.pdf: 333147 bytes, checksum: 43e74d9d8545a20d163895a21cf14b1b (MD5) Previous issue date: 2008-01-25 / This list of species is the first study dealing with bat flies in the Maranhão State. The work was done at seven different areas in the cities Bacabeira, São Luis, Santa Inês and Tufilândia. The bats were captured in mists nets and the parasites were collected with tweezers. A total of 559 bat flies belonging to 25 species, (22 species of the family Streblidae and 2 of Nycteribiidae), were colleted from 118 bats belonging to 22 species, 13 genera and 4 families. Trichobius joblingi Wenzel, 1966 was the most frequent species with 28.7% of the collected individuals. This study registered a high number of species of bat flies in the state, evidencing the importance of the area for studies of biodiversity, as well as aspects related to host-parasite relationships. / Esta lista preliminar de espécies de moscas ectoparasitas de morcegos é o primeiro estudo com esse grupo no Estado do Maranhão. O levantamento foi realizado em sete localidades nos municípios Bacabeira, São Luis, Santa Inês e Tufilândia. Os morcegos foram capturados em redes de neblina e os parasitas retirados destes com pinças. No total foram capturadas 559 moscas pertencentes a 25 espécies (11 gêneros), sendo 22 espécies da família Streblidae e duas da Nycteribiidae. Trichobius joblingi Wenzel, 1966 foi a espécie mais freqüente, representando 28.7% dos indivíduos coletados. As moscas encontravam-se infestando 118 morcegos pertencentes a 22 espécies, 13 gêneros e 4 famílias. Este estudo registrou uma alta riqueza de espécies de moscas e de morcegos no estado, evidenciando a importancia da região para estudos em biodiversidade, bem como aspectos relacionados à relação parasito-hospedeiro.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_juliana_nunes_vieira.pdf: 749761 bytes, checksum: d10f921e3d83dd0cb845cc767149a9f3 (MD5) Previous issue date: 2012-03-14 / The rapid development of resistance to gastrointestinal parasites anthelmintics has shown the limited efficiency of this method in the suppression of endoparasitoses in ruminants, and has furthered research in alternative control methods. The use of chemicals in animal anthelmintic treatment, in association with nematophagous fungi used for biological control, is a strategy that has proven to be effective in reducing the nematode population density of farm animals. This study aims to verify the in vitro susceptibility of the nematophagous fungi Arthrobotrys oligospora, Duddingtonia flagrans, Paecilomyces fumosoroseus, Paecilomyces lilacinus, Paecilomyces marquandii and Paecilomyces variotii against the antiparasitic drugs albendazole, thiabendazole, ivermectin (100%), levamisole (7.5%) and closantel (10%) by using the Minimum Inhibitory Concentration (MIC). MICs ranged between 4 and 0,031µg/mL for albendazole, thiabendazole and ivermectin, between 0,937 and 0,117µg/mL for levamisole, and between 0,625 and 0,034 for closantel. The results obtained showed that all antiparasitic drugs tested had an in vitro inhibitory effect on nematophagous fungi, being able to jeopardize the fungus action as a biological control bioagent. / O rápido desenvolvimento de resistência de parasitos do trato gastrintestinal a antihelmínticos tem demonstrado limitada eficiência desse método para o controle de determinadas endoparasitoses em ruminantes, incentivado assim, pesquisas com métodos alternativos de controle parasitário. A utilização de compostos químicos no tratamento anti-helmíntico de animais, em associação com fungos nematófagos usados no controle biológico, é uma estratégia que vem se mostrando eficaz para a redução da densidade populacional de nematódeos nos animais de produção e pouco se sabe sobre seu emprego simultâneo. Este trabalho teve por objetivo verificar, através da Concentração Inibitória Mínima (CIM), a suscetibilidade in vitro dos fungos nematófagos Arthrobotrys oligospora, Duddingtonia flagrans, Paecilomyces fumosoroseus, Paecilomyces lilacinus, Paecilomyces marquandii e Paecilomyces variotii aos antiparasitários albendazol, tiabendazol e ivermectina (100%), levamisol (7,5%) e closantel (10%). As CIMs variaram de 4 a 0,031µg/mL para albendazol, tiabendazol e ivermectina, de 0,937 a 0,117µg/mL para o levamisol e de 0,625 a 0,039µg/mL para o closantel, dependendo do fungo testado. Os resultados mostram que todos os antiparasitários testados tiveram efeito inibitório in vitro sobre os fungos nematófagos, podendo comprometer suas ações como bioagentes de controle biológico.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_diego_silva_da_silva.pdf: 847370 bytes, checksum: 90471f7041bf3867ac4fbfcf7ad3df29 (MD5) Previous issue date: 2012-03-02 / The meat of the wild boar has always been regarded noble, possessing a distinctive flavor, and has low fat and cholesterol. These characteristics give the meat a great potential gastronomic, so the commercial breeding boars may be considered a promising market. This study aimed to identify the species of helminths that inhabit the digestive and respiratory tract of Sus scrofa scrofa from commercial breeding. Were collected and individually the digestive and respiratory tracts of 40 wild boars from commercial breeding during the slaughter process in the slaughterhouse. Of the 40 animals analyzed, 87.5% were parasitized by helminths, they being, with their respective prevalence, Trichuris suis (67,5%), Ascaris suum (47,5%), Trichostrongylus colubriformes (45%), which has first recorded parasitizing wild boars, and Oesophagostomum dentatum (5.0%). With respect to the parasites of the respiratory tract, the genus Metastrongylus was recorded in the bronchi and bronchioles in 60% of animals tested, with the occurrence of three species with their respective prevalence, M. apri (52,5%), M. salmi (20%) and M. pudendotectus (7,5%), registering the highest prevalence of Metastrongylus in wild boars from commercial breeding of so far. With the exception of O. dentatum, the other parasites have their first record parasitizing wild boar in a subtropical region. / A carne do javali sempre foi considerada nobre, possuindo um sabor característico e apresentando baixos teores de gordura e colesterol. Tais características conferem a essa carne um grande potencial gastronômico, logo, a criação comercial de javalis pode ser considerada um mercado promissor. O presente estudo teve por objetivo identificar as espécies de helmintos que habitam o trato gastrointestinal e respiratório de Sus scrofa scrofa provenientes de criatório comercial. Foram coletados e individualizados os tratos gastrointestinais e respiratórios de 40 javalis oriundos de criatório comercial durante o processo de abate em frigorífico. Dos 40 animais analisados, 87,5% estavam parasitados por helmintos gastrointestinais, sendo eles com suas respectivas prevalências, Trichuris suis (67,5%), Ascaris suum (47,5%), Trichostrongylus colubriformes (45%), o qual é registrado pela primeira vez parasitando javalis e Oesophagostomum dentatum (5,0%). Com relação aos parasitos do trato respiratório, o gênero Metastrongylus foi registrado nos brônquios e bronquíolos de 60% dos animais analisados, com ocorrência de três espécies com suas respectivas prevalências, M. apri (52,5%), M. salmi (20%) e M. pudendotectus (7,5%), registrando-se a maior prevalência de Metastrongylus em javalis oriundos de criatório comercial até o momento. Com exceção de O. dentatum, os demais parasitos têm seu primeiro registro parasitando javalis em uma região de clima subtropical.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_eliane_machado_pereira.pdf: 4235511 bytes, checksum: 28dcd80ec8888a8603565a7809054107 (MD5) Previous issue date: 2012-03-15 / This study verified helminth parasites infection in gastrointestinal tract, lungs, heart, and kidneys of southern sea lions, Otaria flavescens, from south coast of Rio Grande do Sul State, Brazil. Twenty-nine sea-lions were found dead on the beaches, whose carcasses had mild state of decomposition, were necropsied. The organs were collected during field necropsies for laboratory analyses were 24 small and large intestines, 24 livers including parenchyma and gall bladder, 29 stomachs, 24 hearts, and 24 pairs of kidneys. The organs were maintained frozen at -20°C until their processing. A sieve with 150µm mesh was used for screening the parasites. All content retained was analyzed under stereomicroscope. The helminthes were collected, counted, fixed in AFA, stained with carmine, and clarified in beechwood creosote. The small intestines were divided into three segments that were separately analyzed to record the distribution of helminthes by preference sites. Kolmorogov-Smirnov test was used to verify the type of data distribution. Comparison of mean abundance of infection between age classes was performed through Wilcoxon test at significant level of 0.05. Correlations between infection intensity, sex, total length of the individual, and length of small and large intestines were determined using Pearson s Correlation. Action® software version 1.1 was applied for statistical analyses. Among 29 specimens of O. flavescens 23 were males, three females, and three individuals whose sex could not be determined. The average length of the animals was 2.14±0.31m (1.58 to 2.64m) including 13 sub-adults and 16 adults. A total of 996 specimens of Contracaecum ogmorhini were recorded, especially in the stomach (10.34% of prevalence), 42,145 specimens of Corynosoma australe (100% of prevalence) and 512 of Bolbosoma turbinella (50% of prevalence) were found. Two species of trematodes were found: Stephanophrora uruguayense (Prev. 4.17%) and Ascocotyle (Phagicola) longa (Prev. 33.33% ), a estimated total of 1,988.202 specimens. Cestodes were found in only one of the hosts (4.16% of prevalence) which presented four scoleces. Macroscopically, liver, gall bladder, heart, lungs, and kidneys did not contain parasites. No significant correlation was observed between infection intensity, mean abundance, sex, total length of the host, or length of intestines. Infections levels were similar between sub-adults and adults sea lions. This is the first record of Diphyllobothrium sp., Bolbosoma turbinella, Contracaecum ogmorhini, Ascocotyle (Phagicola) longa, and Stephanoprora uruguayense in O. flavescens in Brazilian waters. As regards parasite fauna of O. flavescens, our data are different from those previously reported for specimens from Pacific coast of South America. / Este estudo analisou os helmintos parasitos gastrointestinais, pulmonares, cardíacos e renais do O. flavescens no litoral sul do Rio Grande do Sul, Brasil. Foram necropsiados 29 leões-marinhos, cujas carcaças apresentavam baixo estado de decomposição. Os órgãos coletados mediante necropsia a campo para análise em laboratório foram 24 intestinos delgado e grosso, 24 fígados incluindo parênquima e vesícula biliar e 29 estômagos, 24 corações e 24 pares de rins. Os órgãos foram congelados a 20oC até o seu processamento. Para a triagem dos parasitos foi usada peneira com malha de 150 µm e todo o conteúdo retido foi analisado sob microscópio estereoscópico. Os helmintos foram fixados em AFA, corados com Carmin e clarificados com creosoto de Faia. Os intestinos delgados foram divididos em três segmentos que foram analisados separadamente para registrar a distribuição dos helmintos por sítios de preferência. Teste de Kolmorogov-Smirnov foi utilizado para verificar tipo de distribuição dos dados. A comparação da abundância média de infecção entre classes etárias foi realizada através do teste de Teste de Wilcoxon usando nível de significância de 0.05. As correlações entre intensidade de infecção, sexo, comprimento total do individuo e comprimento dos intestinos delgado e grosso foram verificadas usando a Correlação de Pearson. Para as análises estatísticas usou-se o software Action® versão 1.1. De 29 espécimes de O. flavescens 23 eram machos, três fêmeas e em três indivíduos o sexo não pode ser determinado. A média do comprimento total dos animais foi 2,14±0,31m (1,58 - 2,64m), sendo 13 subadultos e 16 adultos. Foram registrados 996 espécimes de Contracaecum ogmorhini presentes principalmente no estômago, (prevalência 10%). Registrou-se 42.145 espécimes de Corynosoma australe (Prev. 100%) e 512 de Bolbosoma turbinella (Prev. 50%). Duas espécies de trematódeos foram coletados: Stephanophrora uruguayense (Prev. 4.17% ) e Ascocotyle (Phagicola) longa (Prev. 33.33% ) totalizando 1.988.202 espécimes. Cestódeos foram encontrados em apenas um hospedeiro (Prev. 4,16%) que apresentou 4 escóleces. Macroscopicamente, fígado, vesícula biliar, coração, pulmões e rins examinados não estavam parasitados. Nenhuma correlação significativa foi observada entre a intensidade de infecção, sexo, comprimento total ou comprimento dos intestinos. Este é primeiro registro de Diphyllobothrium sp., Bolbosoma turbinella e Contracaecum ogmorhini em O. flavescens em águas brasileiras. No que se diz respeito à fauna parasitária de O. flavescens, as espécies encontradas no presente estudo não são as mesmas previamente citadas para leãomarinho-do-sul da costa pacífica da América do Sul.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_francine_sinnott.pdf: 966836 bytes, checksum: 31b75fbc3400564832438403aff0c6e0 (MD5) Previous issue date: 2014-02-25 / Neosporosis is a disease caused by the obligate intracellular parasite Neospora caninum, causing reproductive disorders, such abortions and sltillbirths in several animals, being considered a major cause of abortion in cattle worldwide. The serological standard diagnosis is indirect fluorescent-antibody test (IFAT), but due to morphological and antigenic similarities of N. caninum with other protozoa of the phylum Apicomplexa, such as Toxoplasma gondii and Sarcocystis spp., false positive results may occur. To improve the diagnosis of this disease and reduce cross-reactions with other coccidian, the use of specific recombinant proteins of N. caninum has been described. The Nc-p43 surface protein encoded by the gene NcSRS2 is specific of the parasite and is present in tachyzoites and bradyzoites of N. caninum. Indirect ELISA format assays have been developed for the diagnosis of neosporosis, however the blocking ELISA may present additional level of specificity. In this context, the objective of this study was develop and standardize a blocking ELISA (b-ELISA) for the diagnosis of bovine neosporosis. To this end, NcSRS2 gene, previously cloned into plasmid vector, was used to produce the recombinant protein (rNc-p43) in prokaryotic expression system Escherichia coli. The purified protein was used to produce a polyclonal antibody (pAb/rNc-p43) in rabbit and this was further purified and characterized by indirect ELISA. For the development of the b-ELISA were used a total of 152 cattle sera (71 negative and 81 positive) and 10 positive cattle sera for toxoplasmosis, all previously confirmed by IFI. As controls, a pool of all positive sera and a pool of all negative sera were used, in addition to a normal calf serum, confirmed by IFAT, used with negative reference sera. The percent inhibition for each sample was determined by comparing the optical density (OD) mean of test sera to the OD mean of negative reference sera. The cut-off value was determined as the percent inhibition of negative pool. The results suggest that the b-ELISA is a tool that can be used for diagnosis of bovine neosporosis, with a sensitivity of 98.7% and specificity of 88.7% when compared with the IFAT. Antibodies against T. gondii present in positive samples for toxoplasmosis were not able to recognize the rNc-p43. The b-ELISA showed that serum samples positive for N. caninum is able to prevent the binding of pAb/rNc-p43, enabling detect different class of antibodies in a single assay. This technique is / Neosporose é a doença causada pelo parasito intracelular obrigatório Neospora caninum, causando problemas reprodutivos, como abortos e mortalidade neonatal em diversos animais, sendo considerada uma das principais causas de abortos em bovinos em todo o mundo. O diagnóstico sorológico padrão é a imunofluorescência indireta (IFI), porém devido a semelhanças morfológicas e antigênicas de N. caninum com outros protozoários do filo Apicomplexa, como Toxoplasma gondii e Sarcocystis spp., pode ocorrer resultados falsos positivos. Para melhorar o diagnóstico desta parasitose e diminuir as reações cruzadas com outros coccídeos, à utilização de proteínas recombinantes específicas de N. caninum vem sendo descrita. A proteína de superfície Nc-p43 codificada pelo gene NcSRS2 é específica do parasito e está presente em taquizoítos e bradizoítos de N. caninum. Ensaios no formato ELISA indireto vêm sendo desenvolvidos para o diagnóstico da neosporose, no entanto os ELISAs de bloqueio podem apresentar nível adicional de especificidade. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi desenvolver e padronizar um ELISA no formato bloqueio (b-ELISA) para o diagnóstico da neosporose bovina. Para tal, o gene NcSRS2, previamente clonado em vetor plasmidial, foi utilizado para produzir a proteína recombinante (rNc-p43) em sistema de expressão procarioto Escherichia coli. A proteína purificada foi utilizada para produzir um anticorpo policlonal (pAb/rNc-p43) em coelho e este foi posteriormente purificado e caracterizado através de ELISA indireto. Para o desenvolvimento do b-ELISA foram utilizados um total de 152 soros bovinos (71 negativos e 81 positivos) e 10 soros bovinos positivos para toxoplasmose, todos previamente confirmados por IFI. Como controles, um pool de todos os soros positivos e um pool de todos os soros negativos foi utilizado, além de um soro normal de terneiro, confirmado através de IFI, utilizado como controle negativo referencial. O percentual de inibição de cada amostra foi determinado pela comparação da média da densidade óptica (DO) de cada soro teste com a média da DO do controle negativo referencial. O ponto de corte foi determinado pelo percentual de inibição do pool negativo. Os resultados obtidos sugerem que o b-ELISA é uma ferramenta que pode ser utilizada no diagnóstico da neosporose bovina, com sensibilidade de 98.7% e especificidade de 88.7%, quando comparado com a IFI. Os anticorpos contra T. gondii presentes nas amostras positivas para toxoplasmose não foram capazes de reconhecer a rNc-p43. O b-ELISA demonstrou que as amostras de soros positivas para N. caninum são capazes de impedir a ligação do pAb/rNc-p43, possibilitando a detecção de diferentes classes de anticorpos em um único ensaio. Esta técnica pode ser uma alternativa de triagem para a detecção de anticorpos contra N. caninum em populações de bovinos.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_diene_de_borba_pacheco.pdf: 1130271 bytes, checksum: e77a03d669b55e89749bb0d6922531eb (MD5) Previous issue date: 2014-02-21 / Neosporosis is a disease caused by the apicomplexan parasite Neospora caninum, which is closely related to Toxoplasma gondii. N. caninum infection represents an important cause of reproductive failure in sheep, goats, horses, and cattle worldwide. The diagnosis of neosporosis is based on the detection of pathogen-specific antibodies in animal sera or the presence of tissue cysts. However, morphological similarities and serological cross-reactivity between N. caninum and T. gondii can result in the misdiagnosis. In this study, the N. caninum tachyzoite surface protein Ncp-43 was expressed in a recombinant form to elicit polyclonal antibodies (pAb) response. The pAb was purified and conjugated to horseradish peroxidase (HRP) or fluorescein isothiocyanate (FITC) to detect the recombinant and native Ncp-43 proteins, respectively. The pAb and pAb/HRP were able to recognize rNcp-43 by Dot blot and ELISA, and pAb/FITC immunolabeled the apical complex of tachyzoites. A blocking enzyme-linked immunosorbent assay (b-ELISA) was performed to evaluate pAb/HRP as a diagnostic tool. The mean percent inhibition for the positive and negative serum samples from cattle with neosporosis was significantly different (P < 0.0001). These results suggest that the pAb may bind to the same epitopes of Ncp-43 as anti-N. caninum antibodies in the positive samples tested. The b-ELISA using the pAb/HRP can facilitate diagnostic testing for neosporosis, since fewer steps are involved and cross-reactivity with secondary antibodies is avoided. In summary, this report describes the production of antibodies against N. caninum, and evaluates the potential of these tools for the development of new diagnostic tests for neosporosis. / Neosporose é a doença causada pelo parasito apicomplexa Neospora caninum, o qual é intimamente relacionado a Toxoplasma gondii. A infecção por N. caninum representa uma importante causa de falha reprodutiva em ovinos, caprinos, equinos e bovinos ao redor do mundo. O diagnóstico da neosporose é baseado na detecção de anticorpos específicos contra o patógeno em soros, ou a presença de cistos teciduais em animais. No entanto, as semelhanças morfológicas e a possível reatividade sorológica cruzada entre N. caninum e T. gondii pode resultar no diagnóstico errôneo. Neste estudo, a proteína de superfície Ncp-43 de taquizoítos de N. caninum, foi expressa de forma recombinante em Escherichia coli e utilizada para produção de anticorpos policlonais (pAb). O pAb foi purificado e conjugado a peroxidase (HRP) e isotiocianato de fluoresceína (FITC) para detectar as proteínas recombinantes e nativas Ncp-43, respectivamente. pAb e pAb/HRP foram capazes de reconhecer rNcp-43, o que foi avaliado pelas técnicas de Dot blot e ELISA enquanto pAb/FITC se mostrou eficiente na imunomarcação do complexo apical de taquizoítos. Um ensaio imunoenzimático de bloqueio (b-ELISA) foi realizado para avaliar a performance do pAb/HRP como ferramenta de diagnóstico. A porcentagem de inibição média para as amostras de pool de soros positivos e o pool de negativos de bovinos com neosporose foi significativamente diferente (P <0,0001). Estes resultados sugerem que o pAb pode ligar-se aos mesmos epítopos da Ncp-43 que os anticorpos anti-N. caninum de amostras positivas testadas. O b-ELISA utilizando o pAb/HRP representa uma opção interessante aos testes de diagnóstico disponíveis para a neosporose, uma vez que menos passos estão envolvidos na sua realização e seu formato evita a reatividade cruzada com anticorpos anti-espécie específicos. Em resumo, este trabalho descreve a produção de anticorpos contra N. caninum, e avalia o potencial dessas ferramentas para o desenvolvimento de novos testes diagnósticos para neosporose.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_jacqueline_radin.pdf: 589146 bytes, checksum: 57a338810c6c34920d4047b74e163eaf (MD5) Previous issue date: 2011-03-11 / The Toxoplasma gondii is a protozoan which causes opportunistic infections in individuals with a compromised immune system. There exist a lot of studies correlating toxoplasmosis with immunosuppressed patients, however, in neoplasia carriers, who may suffer a process of immunosuppression during the chemotherapy, few studies were conducted. The aim of the present study was to evaluate, through serological profile, the risk of acute infection (or reactivation) of T.gondii in cancer patients who had chemotherapy treatment in the School Hospital of Pelotas Federal University and in the Radiotherapy and Cancer Center of Pelotas Santa Casa de Misericórdia , as well as to correlate such cancer with toxoplasmosis, through clinical and epidemiological data. A longitudinal cohort prospective study was carried out with a total of 95 patients, who were followed during the antineoplastic treatment by approximately two cycles, from March to November of 2010. The serological search was performed through Indirect Immunofluorescence Techniques (IFI) and Enzyme Linked Immunosorbent Assays (ELISA), and positive results to antibodies IgM anti-T. gondii were confirmed through Electrochemiluminescence Immunoassay (ECLIA). The epidemiological data were obtained through a questionnaire and the clinical, from the analysis of previously authorized patient dossiers. It was verified that the seropositive rate for IgG anti-T.gondii antibodies was of 84.21% at the pre-treatment chemotherapy sample, and of 83.33% at the post-treatment sample through the IFI technique, observing the low titration of antibodies, while through ELISA, 100% of the samples in both analysis were reagents. Class M antibodies were detected in six of the patients (6.3%) through IFI or ELISA and confirmed by ECLIA in one of them. In the risk factor analysis, it was noted a significant association (p<0.05) among seropositive patients for IgM in relation to the variables death (OR= 4.78) and race (OR= 10.88), respectfully. The results obtained point towards the necessity to perform the monitoring toxoplasmosis in cancer patients who are undergoing chemotherapy treatment, in order to avoid grave or even fatal consequences. / Toxoplasma gondii é um protozoário oportunista causador de infecções em indivíduos com o sistema imunológico comprometido. Existem vários estudos correlacionando a toxoplasmose com pacientes imunocomprometidos, porém, em portadores de neoplasias, que podem vir a sofrer um processo de imunodepressão durante o tratamento quimioterápico, poucos estudos foram realizados. O objetivo deste trabalho foi avaliar, através do perfil sorológico, o risco de infecção aguda ou reativação de T. gondii em pacientes oncológicos, que realizaram tratamento quimioterápico no Hospital Escola da Universidade Federal de Pelotas e no Centro de Radioterapia e Oncologia da Santa Casa de Misericórdia de Pelotas, além de correlacionar o câncer com a toxoplasmose, através de dados clínicos e epidemiológicos. Foi realizado um estudo de coorte longitudinal prospectivo, com um total de 95 pacientes, os quais foram acompanhados por pelo menos duas sessões de quimioterapia, no período de março a novembro de 2010. A pesquisa sorológica foi realizada através das técnicas de Imunofluorescência Indireta (IFI) e ensaio imunoenzimático (ELISA), e os resultados positivos para IgM anti-T.gondii foram confirmados pela eletroquimioluminescência (ECLIA). Os dados epidemiológicos foram obtidos pela aplicação de um questionário e os clínicos através da análise dos prontuários dos pacientes, previamente autorizados. Constatou-se que a taxa de soropositivos para IgG anti-T.gondii foi de 84,21% na amostra pré-tratamento quimioterápico e 83,33% na amostra pós-tratamento pela técnica de IFI, observando-se baixas titulações de anticorpos, enquanto que por ELISA, 100% das amostras, nas duas análises, foram reagentes. Anticorpos da classe M foram detectados em seis pacientes (6,3%) através da técnica de IFI ou ELISA e confirmado por ECLIA em um dos pacientes. Na análise dos fatores de risco, foi verificada associação significativa entre os pacientes soropositivos para IgM em relação às variáveis óbito (OR=4,78) e raça (OR=10,88), respectivamente. Os resultados obtidos indicam a necessidade de se realizar o monitoramento da toxoplasmose em pacientes oncológicos, que estão realizando tratamento quimioterápico, para evitar consequências graves e até mesmo fatais.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_dani_araujo.pdf: 981441 bytes, checksum: 2de9e835165e500d623b9edd351edb76 (MD5) Previous issue date: 2011-06-08 / Synantropic flies frequently reach the status of plague in urban and rural areas, assuming an important role regarding its vectorial ability and nuisance to men and animals. Therefore, it is necessary to know their natural enemies in order to achieve a satisfactory control of these dipterans. The success of the biological control as an alternative to the Integrated Pest Management depends on the evaluation of enemies as potential control agents through the development of breeding techniques and laboratory evaluations. Considering that, this study had as objective to understand the phenology of Spalangia endius as well as the parasitoidism of this species using M. domestica, Muscina stabulans and Chrysomya megacephala as hosts, being the last two potential alternative hosts. Colonies of S. endius, M. domestica, M. stabulans e C. megacephala were kept in climatized chamber, at 26ºC ± 2, relative air humidity ≥70% and 12 hours photophase. In order to know the phenology of S. endius, 360 pupae of Musca domestica with ages ranging from 24 to 48 hours were exposed to 15 couples of S. endius for a period of 48 hours at 26ºC ± 2. These pupae were kept in B.O.D chambers at the same conditions of the climatized chamber, where 15 specimens were dissecated to observe the stage and the development time of the hymenopteran. The phenology allows concluding that S. endius presents a development cycle (egg-adult) of 19 to 31 days, with an incubation period of 24 hours, the development of the larvae of S. endius occurred in the 12 subsequent days, in which a series of morphological alterations were observed. The pre-pupae stage occurred in the tenth day where the movement ceased and the meconium elimination begun. The pupal stage occurred in at least 8 and at maximum 12 days, ending the cycle with the emergence of males and around 24 hours later, the emergence of females. The parasitoidism on thet host species was higher in M. domestica with 63%, followed by M. stabulans and C. megacephala with 27,5% and 16,5% respectively. The morphometrical measures confirmed the preference for M. domestica due to the higher size of the parasitoids that developed in this host. There was no significant difference regarding to the size of the parasitoids that developed in pupae of M. stabulans and C. megacephala as well as there was no influence of the sex in the size of the parasitoid. The data here obtained on the parasitoidism of S. endius in the different hosts show that under the studied conditions the best host is M. domestica. Based on the phenology of S. endius, further detailed studies can be carried out in order to optimize the breeding of this parasitoid in laboratory conditions, allowing the biological control of M. domestica as well as M. stabulans e C. megacephala. / Moscas sinantrópicas frequentemente atingem status de praga em áreas urbana e rural, assumindo um papel importante quanto ao incômodo e capacidade vetorial para o homem e animais.Portanto, para um controle satisfatório destes dípteros é necessário conhecer seus inimigos naturais. O sucesso do controle biológico como uma técnica inserida em um programa de Manejo Integrado de Pragas depende da avaliação de inimigos, como potenciais agentes para controle biológico, através do desenvolvimento de técnicas de criação e avaliações em laboratório. Por estas razões este estudo objetivou conhecer a fenologia de Spalangia endius bem como o parasitoidismo desta espécie utilizando como hospedeiros M. domestica, Muscina stabulans e Chrysomya megacephala, sendo as duas últimas potenciais hospedeiros alternativos. Para realização dos experimentos foram mantidas colônias de S. endius, M. domestica, M. stabulans e C. megacephala em câmara climatizada, 26ºC ± 2°C, umidade relativa ≥70% e fotofase de 12 horas. Para conhecer a fenologia de S. endius, 360 pupas de Musca domestica com idade de 24 a 48 horas foram expostas a 15 casais de S. endius por um período de 48 horas a 26ºC ± 2°C. Estas pupas foram mantidas em estufa B.O.D nas mesmas condições da câmara de criação, onde diariamente dissecava-se 15 espécimes para observar o estágio e tempo de desenvolvimento do himenóptero. A fenologia de S. endius em pupas de M. domestica apresentou um ciclo de desenvolvimento (ovo-adulto) de 19 a 31 dias, cujo período de incubação foi de 24 horas, o desenvolvimento de larvas de S. endius ocorreu nos 12 dias subsequentes nos quais, uma série de modificações morfológicas foi observada. O estágio de pré-pupa deu-se no décimo dia onde cessa a movimentação e inicia a eliminação de mecônio. O estágio pupal ocorreu em no mínimo oito e máximo 12 dias, finaliza o ciclo com a emergência de machos e cerca de vinte quatro horas após, há emergência das fêmeas. O parasitoidismo sobre as espécies hospedeiras foi maior em M. domestica com 63% seguido de M. stabulans e C. megacephala com 27,5% e 16,5%, respectivamente. As medidas morfométricas confirmaram a preferência por M. domestica devido ao maior tamanho dos espécimes desenvolvidos neste hospedeiro. Não houve diferença significativa quanto ao tamanho dos parasitóides que se desenvolveram em pupas de M. stabulans e C. megacephala bem como não houve influencia no tamanho do parasitóide em relação ao sexo. Os dados obtidos sobre o parasitismo de S. endius nos diferentes hospedeiros indicam que nas condições deste estudo o hospedeiro mais adequado é M. domestica. Com base na fenologia de S. endius estudos pormenorizados poderão ser conduzidos afim de aprimorar a criação deste parasitóide em condições de laboratório permitindo viabilizar o controle biológico de M. domestica bem como de M. stabulans e C. megacephala.