Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_vanusa_hora.pdf: 894481 bytes, checksum: 1cff4e13f238f761e9054b5864d2655e (MD5) Previous issue date: 2006-10-30 / Schistosomiasis, caused by Schistosoma mansoni, is the second most prevalent parasitic disease worldwide causing chronic disease in millions of people in developing countries. Similarly, fascioliasis, caused by the trematode Fasciola hepatica, represents a recognized unsolved agricultural problem responsible for economic losses as well as causing a significant number of human infections worldwide. Although chemotherapy for both parasites has been available, this approach has limitations, including high reinfection rates in endemic areas. Vaccines represent the most attractive long-term alternative to invert this scenario. Accordingly, the World Health Organization selected S. mansoni fatty acid-binding protein 14kDa (Sm14) as one out of two anti-schistosome vaccine priority candidates for human clinical trials. Furthermore, Sm14 is the only vaccine candidate to have been shown to afford significant immune protection against both of the above-mentioned helminthes. The objective of this study was to develop and evaluate in mice a recombinant subunit vaccine containing the Sm14 fused to the B subunit of the heat-labile enterotoxin of Escherichia coli (LTB), which is a potent immunoadjuvant; furthermore, was describe the production and characterization of monoclonal antibodies (MAbs) against the Sm14 for use as a tool to detect and characterize Sm14 and for development of future diagnostic test. The ltb and sm14 gene were obtained by PCR amplification from E. coli DNA and plasmid pAESm14, respectively, and fused by PCR. The recombinant chimera was expressed in E. coli and purified by nickel affinity chromatography. Groups of outbreed Swiss mice were immunized with three footpad doses of either rLTB/Sm14, rLTB/Sm14 plus aluminum hydroxide (Al(OH)3), rSm14 plus Al(OH)3, rLTB or Al(OH)3. Levels of protection were determined by number of worms recovered after S. mansoni cercarial challenge. The pooled sera of immunized mice were evaluated by ELISA and Western blot. The results showed that the chimera protein was able to elicit specific antibody production to rSm14 and rLTB, however the use of LTB as adjuvant to rSm14 immunization failed to enhance protection against challenge. Furthermore, seven MAbs were obtained after immunization of BALB/c mice with rLTB/Sm14. MAbs isotyping revealed that five were of the isotype IgG1, one belonged to the IgG2b isotype and another to the IgM isotype. These MAbs will be usefull for monitoring protein expression in recombinant systems, protein stability and may have potential for developing diagnostic test. / A esquistossomose, causada por Schistosoma mansoni, é a segunda doença parasitária mais prevalente no mundo causando doença crônica em milhões de pessoas em países em desenvolvimento. Semelhantemente, a fasciolose, causada pelo trematódeo Fasciola hepatica, representa um reconhecido problema agrícola responsável por perdas econômicas assim como causa um significante número de infecções em humanos por todo mundo. Embora a quimioterapia para ambos os parasitas esteja disponível, ela tem apresentado limitações, incluindo altas taxas de reinfecção em áreas endêmicas. Vacinas representam a alternativa mais atraente para inverter este cenário. Assim, a Organização Mundial da Saúde selecionou a proteína ligadora de ácidos graxos 14kDa de S. mansoni (Sm14) como uma de duas candidatas à vacina anti-esquistossomose prioritárias para triagem clínica em humanos. Além disso, a Sm14 é a única proteína candidata a vacina que induz imunidade protetora significativa contra ambos os helmintos acima mencionados. O objetivo deste estudo foi desenvolver e avaliar em camundongos uma vacina de subunidade contendo a Sm14 fusionada com a subunidade B da enterotoxina termolábil de Escherichia coli (LTB), a qual é um potente imunoadjuvante; além disso, foi descrever a produção e caracterização de anticorpos monoclonais (MAbs) contra a Sm14 para usa-los como uma ferramenta para detectar e caracterizar a Sm14 e para o desenvolvimento de futuro teste diagnóstico. Os genes ltb e sm14 foram amplificados por PCR a partir do DNA de E. coli e do plasmídeo pAESm14, respectivamente, e fusionados por PCR. A quimera recombinante foi expressa em E. coli e purificada por cromatografia de afinidade em coluna com níquel. Grupos de camundongos suíços não singênicos foram imunizados por via subcutânea com três doses de rLTB/Sm14, rLTB/Sm14 mais hidróxido de alumínio (Al(OH)3), rSm14 plus Al(OH)3, rLTB ou Al(OH)3. Os níveis de proteção foram determinados através do número de parasitas recuperados após desafio com cercárias de S. mansoni. O pool de soros dos camundongos imunizados foi avaliado por ELISA e Western blot. Os resultados mostraram que a proteína quimera foi capaz de estimular a produção de anticorpos específicos para Sm14 e LTB, contudo o uso de LTB como adjuvante para imunização de rSm14 falhou em aumentar a proteção contra o desafio. Além disso, sete MAbs foram obtidos após imunização de um camundongo BALB/c com rLTB/Sm14. A isotipagem dos MAbs revelou que cinco foram do isotipo IgG1, um pertencente ao isotipo IgG2b e outro ao isotipo IgM. Estes MAbs serão úteis para monitorar a expressão da proteína em sistemas recombinantes, a estabilidade protéica e pode ter potencial para desenvolver teste diagnóstico.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_flavia_vasconcellos.pdf: 444073 bytes, checksum: 28496ede24da5ffceb810c4c3dfa434f (MD5) Previous issue date: 2007-04-27 / Leptospirosis is an infectious disease caused by pathogenic spirochetes of the genus Leptospira that can affect vital organs such as lungs, liver and kidneys. The illness is characterized by an acute bacteremic phase of approximately one week, followed by an immune phase in which specific antibodies are found in blood and leptospires are eliminated in urine. Clinical signs in the initial phase of leptospirosis can be confused with other feverish diseases, making laboratory diagnosis of extreme importance to start antibiotic treatment. The existing laboratory tests for early diagnosis of leptospirosis are based on IgM detection and are of low sensitivity. Thus, there is an urgent need for development of new diagnostic strategies for use in the acute phase of leptospirosis. In the present work monoclonal antibodies (MAbs) and polyclonal IgY were used in the standardization of three different antigen capture ELISA formats for direct detection of leptospires in blood during the acute phase of the disease. Detection limit of leptospires in human sera experimentally contaminated ranged from 10 5 to 10 7 cells per millilitre in the different formats. The ELISA format with the best performance was able to detect 10 5 leptospires per millilitre of human sera, using as capture antibody a MAb against LipL32, the major outer membrane protein of pathogenic leptospires, and as detection antibody biotinilated policlonal IgY against a pathogenic serovar of Leptospira interrogans. Although this format did not present the adequate sensitivity for detection of circulating leptospires at the levels existing in blood in the initial phase of the disease, it can be improved in order to do so. / A leptospirose é uma doença infecciosa causada por espiroquetas do gênero Leptospira que pode afetar diversos órgãos vitais como pulmões, fígado e rins. A doença caracteriza-se por uma fase inicial bacterêmica de aproximadamente uma semana, seguida de uma fase imune na qual anticorpos específicos são detectados no sangue e leptospiras são eliminadas na urina. Os sinais clínicos da fase inicial da leptospirose podem ser confundidos com diversas doenças febris, o que torna o diagnóstico laboratorial extremamente importante para decidir sobre o início do tratamento com antibióticos. Os testes laboratoriais existentes para o diagnóstico na fase inicial da doença são todos baseados na detecção de IgM e apresentam baixa sensibilidade. Assim, há uma necessidade urgente de desenvolvimento de novas estratégias de diagnóstico precoce da leptospirose. Neste trabalho foram utilizados anticorpos monoclonais (MAbs) e anticorpo policlonal (IgY) para padronizar três formatos de ELISA de captura de antígeno para uso na detecção direta de leptospiras no sangue durante a fase aguda da doença. O limite de detecção de leptospiras em soro humano experimentalmente contaminado variou entre 10 5 e 10 7 células por mililitro nos diferentes formatos. O formato que apresentou melhor desempenho detectou 10 5 leptospiras por mililitro de soro, e utilizou como anticorpo de captura um MAb contra LipL32, a principal proteína de membrana externa de leptospiras patogênicas, e como anticorpo de detecção IgY biotinilada, produzida contra um sorovar patogênico de Leptospira interrogans. Embora este formato não apresente ainda a sensibilidade adequada para detectar o nível de leptospiras circulantes no sangue na fase inicial da doença, ele possui potencial para ser aperfeiçoado de forma a atingir aquele nível.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Two studies were carried out to evaluate, trough meta-analysis, the relationship between parasitosis and animal performance of broiler and growing pigs. Databases totaled 43,976 broilers (69 articles published between 1982 and 2010) and 1,279 growing pigs (18 articles published between 1971 and 2010). Meta-analyses followed three sequential analyses: graphic, correlation and variance-covariance. Pigs challenged by endoparasites presented reduction (P<0.001) of 5% on feed intake and 31% on weight gain. Broilers challenged by E. acervulina and E. tenella presented feed intake similar (P>0.05) to control group. However, the groups challenged by E. maxima and Pool presented increase on feed intake by 27% and 5% compared to control group. In relation to broilers weight gain, all challenged groups presented reduction (P<0.05) compared to control group. The average reduction was 10%, with the exception of the group challenged by E. maxima which showed a 23% reduction in daily weight gain compared to control group. The average age and average body weight of challenged animals, and the crude protein intake were the variables that most adjusted the determination coefficient in the equations for estimating the weight gain of parasitized pigs. Considering parasitized broilers, the reduction in feed intake was the variable that best explains the reduction in weight gain. Variance decomposition showed that parasitosis were responsible by a 6% reduction in weight gain for pigs and coccidiosis were associated by less than 1% for broilers. In addition, this analysis showed that most of the variation in weight gain was explained by the variation in feed intake (59% in pigs and 91% in broilers, on average). Parasitosis influences the performance of broilers and pigs. However, the magnitude of these effects varies with the parasite species, sex, age and line of the animal as well as nutritional factors. / Dois trabalhos foram desenvolvidos com o objetivo de estudar, através de meta-análise, a relação das parasitoses com o desempenho de frangos de corte e suínos. As bases de dados totalizaram 43.976 frangos de corte (69 artigos, publicados entre 1982 e 2010) e 1.279 suínos (18 artigos, publicados entre 1971 e 2010). A meta-análise foi realizada através de três análises sequenciais: estudos gráficos, de correlação e de variância-covariância. Suínos desafiados por endoparasitas apresentaram (P<0,001) redução de 5% no consumo de ração e de 31% no ganho de peso. Frangos de corte desafiados por E. acervulina e E. tenella apresentaram consumo de ração semelhante (P>0,05) em relação ao grupo controle. Já os grupos desafiados por E. maxima e Pool apresentaram aumento (P<0,05) no consumo de ração de 27% e 5% em relação ao grupo controle. Em relação ao ganho de peso dos frangos, todos os grupos desafiados apresentaram redução (P<0,05) quando comparados com o controle, A redução foi em média de 10%, com exceção do grupo desafiado por E. maxima que apresentou 23% de redução no ganho diário de peso em relação ao grupo controle. A idade média e o peso médio dos animais desafiados, bem como o consumo de proteína bruta, foram as variáveis que mais ajustaram o coeficiente de determinação nas equações para estimar o ganho de peso dos suínos parasitados. Para os frangos de corte parasitados, a redução no consumo de ração foi a variável que melhor explicou a redução no ganho de peso. Por decomposição da variância, foi verificado que as endoparasitoses foram responsáveis por 6% da redução no ganho de peso para os suínos, e as coccidioses foram responsáveis por menos de 1% para as aves. Além disso, a decomposição da variância mostrou que a maior parte da variação no ganho de peso foi explicada pela variação no consumo de ração (59% nos suínos e, em média, 91% nas aves). As parasitoses influenciam o desempenho dos frangos de corte e suínos. No entanto, a magnitude destes efeitos varia com o a espécie de parasita; o sexo, a idade e a linhagem do animal; bem como com fatores nutricionais.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Tuberculosis (TB) is caused by Mycobacterium tuberculosis and is a global public health problem and is considered one of the deadliest infectious diseases of the world. It is estimated that about one third of the world population is infected. TB in Central Nervous System (CNS) is one of the most severe forms of the disease, more common in children aged six months to five years old and among individuals with immunosuppression, particularly those with Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS). Neurotuberculosis (NTB) is associated with a high rate of mortality in children and permanent neurological sequelae in many survivors. Currently, the way to prevent TB is BCG (Bacilo Calmette-Guérin) vaccination, however, it has limitations because it only protects children and only prevents severe forms of TB, besides presenting variable protection of 0-75%. This shows the need to develop a more effective vaccine to fight TB. One of the most promising alternatives for TB is the DNA-hsp65 vaccine, made of a plasmid DNA containing the gene encoding the heat shock protein 65 kDa of mycobacteria (M. leprae). Although, it has not studied the protective effect of DNA-hsp65 vaccine against TB in the CNS, which is the most severe form of the disease and compromises the neural tissue. Thus, we evaluated the prophylactic effect of DNA-hsp65 vaccine in experimental neurotuberculosis. C57BL/6 mice were used by three experimental groups, where one of them was immunized only with plasmideal pVAX vector (vector group) by intramuscular administration of three doses every two weeks, another group received only PBS (PBS group) and the third group DNA was immunized with hsp65-pVAX plasmideal (vaccinated group). Thirty days after the last dose, the animals of each group were challenged with H37Rv laboratorial strain of Mycobacterium tuberculosis intracerebroventricularly by stereotaxy. Thirty days after the challenge with the bacilli, the mice were sacrificed and their brains and lungs removed. These organs were analyzed using histological sections stained with hematoxylin and eosin. It was also determined amounts of colony forming units (CFU) present in the brains of animals in all groups. The results show that animals of the vaccinated group exhibited brain and lung with discrete lesions of the vector and PBS groups. Furthermore, we noticed a reduced number of bacilli in the brains of animals in the vaccinated group. Therefore, our results suggest that DNA-hsp65 vaccine (pVAX-hsp65) is promising in the prevention of injuries caused by bacillus in the CNS. / A tuberculose (TB) é causada pelo Mycobacterium tuberculosis e representa um problema de saúde pública global, sendo considerada uma das doenças transmissíveis mais mortais do mundo. Estima-se que cerca de um terço da população mundial esteja infectada. A TB no Sistema Nervoso Central (SNC) é uma das formas mais graves da doença, sendo mais incidente em crianças de seis meses a cinco anos de idade e entre os indivíduos com imunodepressão, particularmente os portadores da Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (AIDS). A Neurotuberculose (NTB) está associada a uma alta taxa de mortalidade em crianças e permanentes sequelas neurológicas em muitos sobreviventes. Atualmente, a forma de prevenção à TB é a vacina BCG (Bacilo Calmette-Guérin), porém, a mesma apresenta limitações, pois protege apenas as crianças e previne somente as formas graves de TB, além de apresentar proteção variável de 0 a 75%. Isso aponta a necessidade do desenvolvimento de uma vacina mais efetiva para o combate da TB. Uma das alternativas mais promissoras para o combate da TB é a vacina de DNA-hsp65, constituída por um plasmídeo de DNA contendo o gene que codifica a proteína de choque térmico de 65 kDa de micobactéria (M. leprae). Ainda não foi estudado o efeito protetor da vacina de DNA-hsp65 contra a TB no SNC, que é a forma mais grave da doença e compromete o tecido neural. Dessa forma, avaliamos o efeito profilático da vacina de DNA-hsp65 na neurotuberculose experimental. Foram utilizados camundongos C57BL/6 através de três grupos experimentais, onde um deles foi imunizado apenas com o vetor plasmideal pVAX (Grupo Vetor) através da administração de três doses quinzenais intramusculares, outro grupo recebeu apenas PBS (Grupo PBS) e o terceiro grupo foi imunizado com o DNA plasmideal pVAX-hsp65 (Grupo Vacinado). Trinta dias após a última dose, os animais de cada grupo foram desafiados com a cepa laboratorial H37Rv de Mycobacterium tuberculosis via intracerebroventricular através de estereotaxia. Passados trinta dias do desafio com o bacilo, os camundongos foram sacrificados e foram removidos cérebro e pulmão. Esses órgãos foram analisados através de cortes histológicos corados com hematoxilina e eosina. Também foram determinadas as quantidades de unidades formadoras de colônias (UFC) presentes nos cérebros dos animais de todos os grupos. Os resultados demonstram que os animais do grupo vacinado apresentaram cérebro e pulmão com lesões mais discretas do que os grupos vetor e PBS. Além disso, percebemos um número reduzido de bacilos nos cérebros dos animais do grupo vacinado. Portanto, nossos resultados sugerem que a vacina de DNA-hsp65 (pVAX-hsp65) é promissora na prevenção das lesões causadas pelo bacilo no SNC. / São Cristóvão, SE

A fauna edáfica de ácaros, apesar de abundante e muito diversa em ambientes naturais, ainda é pouco conhecida no Estado de São Paulo. O presente estudo foi realizado em duas partes. A primeira parte teve como objetivo avaliar a abundância e diversidade dos ácaros da superfamília Rhodacaroidea na Mata Atlântica (Pariquera-Açu, Cananéia, Piracicaba e São Pedro) e no Cerrado (Luiz Antonio, Pirassununga e São Carlos), em amostras de solo (0-5 cm) e folhedo tomadas à base de plantas das famílias Arecaceae e Myrtaceae, respectivamente. Para extração dos ácaros, as amostras foram processadas através de um equipamento do tipo Berlese-Tullgren modificado. Obteve-se um total de 969 Rhodacaroidea adultos, sendo 913 na Mata Atlântica e 56 no Cerrado. Foram encontrados 776 e 193 Rhodacaroidea no folhedo e no solo, respectivamente. Os ácaros encontrados pertencem a 15 gêneros diferentes. Os gêneros mais comuns na Mata Atlântica foram Neogamasellevans Loots & Ryke e Ologamasus Berlese, no folhedo, e Rhodacarus Oudemans, no solo. No Cerrado, Rhodacarus foi o gênero mais comum em ambos os substratos. Trinta e uma morfoespécies de Rhodacaroidea foram encontradas na Mata Atlântica, e cinco, no Cerrado. A uniformidade das freqüências de ocorrência de morfoespécies foi maior na Mata Atlântica que no Cerrado. A uniformidade também foi maior no folhedo que no solo da Mata Atlântica. Na segunda parte deste estudo, avaliaram-se a diversidade, a abundância e a distribuição dos ácaros edáficos no folhedo e em diferentes profundidades (0-5, 10-15, 20-25 e 30-35 cm) do solo. Avaliaram-se também os mesmos parâmetros para os fitonematóides presentes no solo às diferentes profundidades mencionadas. As coletas foram realizadas em Pariquera-Açu e Cananéia, na base da palmeira Euterpe edulis Mart. A extração dos ácaros foi realizada como indicado anteriormente. A extração dos fitonematóides foi realizada pelo método de Jenkins. Nesta parte, coletaram-se 2717 ácaros, 80% dos quais, do folhedo. No solo, a maior quantidade de ácaros foi encontrada na camada de 0-5 cm, exceto no outono. A maior abundância de ácaros no solo e no folhedo foi verificada no inverno. As ordens encontradas foram: Oribatida (80%), Mesostigmata (18%), Prostigmata e Astigmata, (juntos 2%). Os Oribatidas não foram identificados em níveis taxonômicos mais baixos no presente estudo. No folhedo, foram identificados 14 famílias, 19 gêneros e 32 morfoespécies de ácaros. No solo, foram encontradas 17 famílias, 19 gêneros e 27 morfoespécies. Neogamasellevans e Ologamasus foram os gêneros mais abundantes e diversos dentre os ácaros identificados. Dezesseis gêneros de fitonematóides foram encontrados. O número total de fitonematóides encontrados em cada profundidade, para todas as plantas amostradas, variou de 10 a 7340 indivíduos. Helicotylenchus Steiner foi o gênero mais abundante, seguido de Discocriconemella Grisse & Loof e Aorolaimus Sher. Os fitonematóides foram abundantes em todas as profundidades consideradas. Considerando-se a predominância dos ácaros na camada mais superior do solo, é de se esperar que os ácaros que por ventura estejam predando aqueles nematóides possam apresentar alguma eficiência apenas na camada mais superficial do solo. O aprofundamento nas pesquisas sobre a fauna de Rhodacaroidea em ambientes naturais gera informações que poderão ser utilizadas em futuros estudos, para o controle biológico de ácaros-praga no solo. / Although abundant and very diverse in the natural environments, the fauna of edaphic mites is still poorly known in the State of São Paulo. The present study was conducted in two parts. The objective of the first part was to evaluate the abundance and diversity of mites of the superfamily Rhodacaroidea in the Mata Atlântica (Pariquera-Açu, Cananéia, Piracicaba and São Pedro) and in the Cerrado (Luiz Antonio, Pirassununga and São Carlos) ecosystems, in soil (0-5 cm) and litter samples taken at the base of plants of the families Arecaceae and Myrtaceae, respectively. For extraction of the mites, the samples were processed through a modified Berlese-Tullgren equipment. A total of 969 adult Rhodacaroidea were obtained, 913 from Mata Atlântica and 56 from Cerrado. In relation to the substrate, 776 Rhodacaroidea were found in the litter and 193 in the soil. Those mites belong to fifteen different genera. The most common genera in Mata Atlântica were Neogamasellevans Loots & Ryke and Ologamasus Berlese, in the litter, and Rhodacarus Oudemans, in the soil. In Cerrado, Rhodacarus was the most common genus in both substrates. Thirty one morphospecies of Rhodacaroidea were found in Mata Atlântica, and five, in Cerrado. The equitability of the frequencies of occurrence of the morphospecies was higher in Mata Atlântica than in Cerrado. It was also higher in the litter than in the soil of Mata Atlântica. In the second part of this study, the diversity, abundance and distribution of edaphic mites in litter and soil samples of different depths (0-5, 10-15, 20-25 and 30-35 cm) were studied. The same parameters were also evaluated for plant nematodes present in soil samples at those different depths. Samples were taken in Pariquera-Açu and Cananéia, at the base of Euterpe edulis Mart (Arecaceae). Mites were extracted as indicated previously. Nematodes were extracted by Jenkins method. A total of 2717 mites was collected, 80% of which in the litter samples. In the soil, the largest number of mites was collected between 0 and 5 cm from the surface, except in the fall. Highest abundance of mites in the litter and soil was observed in the winter. The mite orders found were: Oribatida (80%), Mesostigmata (18%), Prostigamata and Astigamata (combined, 2%). Oribatida were not identified at lower taxonomic levels in this study. In the litter, 14 families, 19 genera and 32 morphospecies of mites were identified. In the soil, 17 families, 19 genera and 27 morphospecies were identified. Neogamasellevans and Ologamasus were the most abundant and diverse genera. Sixteen genera of plant nematodes were identified. The total number of plant nematodes found at each depth, for the combined samples, varied between 10 and 7340. Helicotylenchus Steiner was the most abundant genus, followed by Discocriconella Grisse & Loof and Aorolaimus Sher. Nematodes were abundant at all considered depths. Considering the predominance of the mites between 0 and 5 cm from the soil surface, it is conceived that predation on the former by the predatory mites may have some significance only at that depth. Further research on the fauna of Rhodacaroidea in natural environments generate information that could be used in future studies for the biological control of edaphic pest mites and nematodes.

Os isolados de nematóides entomopatogênicos provenientes do solo de Monte Negro (RO) receberam o prefixo LPP seguido de um número sequencial. As linhagens de bactérias simbiontes receberam o prefixo MN como referência ao local de isolamento. As culturas dos isolados de nematóides entomopatogênicos LPP foram estabelecidas em nosso laboratório, sendo necessário cultivar também o lepidóptero Galleria mellonella para as infeções visando manter os nematóides em cultura. Os isolados, tanto de nematóides como das bactérias, foram identificados através do sequenciamento de genes ribossômicos (ITS 1 e 2 além do 5.8S para os nematóides e 16S para as bactérias). Análises integradas, abrangendo morfologia (em colaboração com a Dra. Claudia Dolinski e Inês Machado) e análises filogenéticas permitiram a identificação dos nematóides. Essas análises morfomoleculares mostram que as linhagens não podem ser descritas como novas espécies, baseadas apenas no local de isolamento, mas como pertencentes à espécies já descritas e bem caracterizadas. As linhagens de nematóides foram identificadas como pertencentes a duas espécies do gênero Heterorhabditis (Rhabditida): Heterorhabditis baujardi (LPP5, 7, 8, 10 e 11) Heterorhabditis indica (LPP1, 2, 3, 4, 9). A bactéria entomopatogênica simbionte isolada a partir do nematoide Heterorhabditis baujardi linhagem LPP7 foi identificada como pertencente à espécie Photorhabdus luminescens subsp. luminescens linhagem MN7. Análises filogenéticas mostram que há similaridade entre o isolado bacteriano e as outras linhagens já descritas de Photorhabdus luminescens subsp. luminescens. Ao mesmo tempo em que eram isoladas as bactérias simbiontes, ocorreu o isolamento de outra espécie de bactéria forética dos nematóides entomopatogênicos, identificada após sequenciamento parcial do 16S, como pertencentes ao gênero Ochrobactrum. As linhagens isoladas foram denominadas OMN2, OMN3, OMN4. / The entomopathogenic nematodes isolates from Monte Negro (RO) soils received the prefix LPP followed by a sequential number. The strains of bacterial symbionts received the prefix MN as a reference to its isolation site. Cultures of LPP entomopathogenic nematodes were established in our laboratory and the need for suitable hosts were supplied by cultivating the lepidopteran Galleria mellonella. Nematode and bacterial isolates were identified through ribosomal genes (ITS 1 and 2, 5.8S for nematodes and 16S for bacteria) sequencing. Integrated analysis, including morphology (in collaboration with Dr. Claudia Dolinski and Inês Machado) and a phylogenetic approach allowed the identification of nematodes. These morpho-molecular analysis clearly showed that our strains can not be described as new species, solely based on the isolation site critheria. It should be described as belonging to previously described and well characterized species. The nematode strains were identified as belonging to two species of the genus Heterorhabditis (Rhabditida): Heterorhabditis baujardi (LPP5, 7, 8, 10 and 11) Heterorhabditis indica (LPP1, 2, 3, 4, 9). The entomopathogenic bacterial symbiont isolated from the nematode Heterorhabditis baujardi strain LPP7 was identified as belonging to the species Photorhabdus luminescens subsp. luminescens strain MN7. Phylogenetic analysis showed similarities between isolated bacterial strains and other previously described Photorhabdus luminescens subsp. luminescens strains. In paralel work, along with bacterial symbionts isolation, other entomopathogenic nematodes foretic bacteria were isolated and identified after partial sequencing of 16S, as belonging to the genus Ochrobactrum. The isolated strains were named OMN2, OMN3, OMN4.

O estudo dos teores protéicos oferecidos aos animais possui crucial importância, pois estes exercem influência determinante no desenvolvimento da infecção parasitária. Investigou-se o efeito da utilização de dois diferentes teores protéicos (18,5% e 8,6% de PB na MS) sobre as alterações fisiopatológicas desenvolvidas por bezerros primo infectados com o nematóide intestinal Cooperia punctata. Objetivando determinar se a suplementação possibilitaria aos animais infectados responderem mais prontamente ao desafio parasitário, realizaram-se estudos de composição corporal, retenção de compostos nitrogenados, acompanhamento clínico completo, avaliação de peso e carcaça, avaliação quantitativa e qualitativa da carga parasitária e exames histopatológicos. Os animais que receberam suplementação apresentaram um quadro clínico menos severo, perderam menos peso, tiveram um maior rendimento de carcaça, apresentaram lesões teciduais mais exuberantes, maiores taxas de excreção urinária de nitrogênio, expulsaram os parasitos para porções distais do trato gastrointestinal e demonstraram uma eficiência de retenção de nitrogênio 3,6 vezes maior que os animais mantidos na dieta basal. Demonstrou-se que a suplementação protéica resultou em efeitos positivos para os animais infectados. / The study of protein levels offered to cattle is very important when one aims at nematode control, since they can effectively affect the development of parasitic infection. The effect of two different levels - 18.5% and 8.6% CP on DM basis on the pathophysiology of Cooperia punctata infection on naive calves was examined. Aiming at determine if protein supplementation allow animals to better withstand parasitic challenge, several parameters were evaluated: body composition, nitrogen retention, clinical evolution, weight gain, carcass yeld, quantitative and qualitative assessment of parasitic burden and histopathology. Supplemented animal presented a milder clinical signs, lost less weight, had higher carcass yeld, greater tecidual lesions, higher urinary nitrogen excretion, expelled parasites to distal parts of gastrointestinal tract and showed a 3.6 greater efficiency for nitrogen retention than animal kept on basal diet. It became clear that protein supplementation resulted in benefits to infected animals.

Nesse trabalho avaliamos a sensibilidade a drogas in vitro de alguns isolados obtidos de pacientes brasileiros com leishmaniose cutânea. O microteste de MTT modificado mostrou-se eficaz para avaliação da sensibilidade in vitro de promastigotas de Leishmania e macrófagos de medula como modelo de infecção por L. (V.) braziliensis. A atividade de tamoxifeno e anfotericina B foi similar entre os isolados de Leishmania avaliados. Foi observada uma variação maior da sensibilidade ao Glucantime®, sendo que os isolados de L. (V.) braziliensis apresentaram maior sensibilidade a essa droga. Não foi observada correlação da resposta clínica dos pacientes ao tratamento com a atividade in vitro. Avaliamos também a eficácia de tamoxifeno no tratamento de camundongos BALB/c infectados com L. (V.) braziliensis. Observamos que 20 ou 30 mg/kg/dia de tamoxifeno por 15 dias resultou em redução no tamanho das lesões e carga parasitária em comparação com animais controle.Um isolado apresentou morfologia flagelar distinta daquela observada em promastigotas típicos de Leishmania. / In this work we evaluated the in vitro sensitivity to drugs of some isolates from Brazilian patients with cutaneous leishmaniasis. The modified MTT microtest was effective for evaluation of in vitro sensitivity of Leishmania promastigotes and macrophages from bone marrow as a model of infection by L. (V.) braziliensis. The activity of tamoxifen and amphotericin B was similar among isolates of Leishmania evaluated. Sensitivity to Glucantime®, was more variable with isolates of L. (V.) braziliensis presenting higher sensitivity to the drug. There was no correlation between clinical response to treatment with in vitro activity. We have also evaluated the effectiveness of tamoxifen in the treatment of BALB/c mice infected with L. (V.) braziliensis and observed that 20 or 30 mg/kg/day of tamoxifen for 15 days resulted in reduction in the size of lesions and parasite load when compared with control animals. One of the isolates presented atypical flagellar morphology.

Neste estudo foram isolados e caracterizados flagelados de 20 amostras de solo e água do Brasil classificados no gênero Euglena por parâmetros taxonômicos tradicionais, e distribuídos em 5 grupos de acordo com características morfológicas. Análises filogenéticas do gene SSUrDNA das 20 amostras resultou em 25 seqüências posicionadas nos grupos A2 e A3 do gênero Euglena definidos em estudos anteriores, separando as seqüências obtidas em 7 clados distintos, revelando uma maior diversidade que a obtida por parâmetros taxonômicos tradicionais. A fim de resolver os relacionamentos intra-específicos do grupo A3, realizamos uma análise filogenética restrita deste grupo, que apresentou árvores congruentes e subclados bem suportados. Representantes de cada espécie foram analisados por microscopia eletrônica de varredura, revelando dois padrões principais de estrias e poros da película. Os isolados caracterizados neste estudo são os primeiros do Brasil estabelecidos em cultura, validados por análises filogenéticas e morfologicamente caracterizados. / In this study we isolated and characterized flagellates from 20 soil and water samples of Brazil, classified in the genus Euglena based on traditional taxonomic parameters and distributed in 5 groups according to morphological characteristics. Phylogenetic analyses of the SSUrDNA of the 20 samples resulted in 25 sequences that where positioned in previously defined groups A2 and A3 of the genus Euglena, separating the obtained sequences in 7 distinct clades, revealing a larger diversity than defined by traditional taxonomic parameters. To better resolve the intra-specific relationships of group A3, we conducted a phylogenetic analyses restricted to this group, generating congruent trees and well supported sub-clades. A representative of each species was selected and analyzed by scanning electron microscopy, revealing two major patterns of strip and pellicle pores. The isolates characterized in this study are the first in Brazil to be established in culture, validated by phylogenetic analyses and morphologically characterized.

As espécies Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa são responsáveis por infecções neonatais hospitalares. Lipopolissacarídeo (LPS) é o principal indutor de respostas inflamatórias. Os objetivos foram avaliar a transferência placentária de IgG reativa ao LPS de K. pneumoniae, E. coli O111, O26 e O6 e P. aeruginosa empregando ELISA para dosar IgG em soro materno e de cordão de 29 neonatos pré-termos e 32 a termo; analisar IgM total e específica no soro materno; e investigar a influência das patologias apresentadas pelas mães na transferência placentária. Concentrações de IgG total foram reduzidas em pré-termos como esperado, porem índices de transferência placentária de IgG total e IgG anti-LPS foram sistematicamente reduzidos quando comparados aos neonatos a termo. Níveis de IgM total e anti-LPS foram equivalentes em mães de ambos os grupos. As patologias das mães influenciaram os níveis de IgM no grupo de mães de pré-termos. Estes resultados indicam uma imunidade adquirida deficiente pelo grupo pré-termo aumentando os riscos de infecção. / Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa species are responsible for neonatal nosocomial infections. Bacterial lipopolysaccharide (LPS) is the major inducer of the inflammatory responses. The aims were to evaluate the placental transfer of IgG reactive to LPS present in K. pneumoniae, in E. coli O111, O26 and O6 and in P. aeruginosa employing ELISA to detect IgG in maternal and cord sera from 29 preterm and 32 term neonates; to analyze total and specific IgM on the mothers sera; and to investigate the influence of the pathologies presented by some mothers in the placental transfer. Total IgG concentrations were reduced in preterm neonates as expected, but placental transfer indexes of total and anti-LPS IgG were systematically reduced when compared with term neonates. Total and anti-LPS IgM levels were equivalent on mothers of both groups. The mothers pathologies influenced only the IgM levels in the preterm mothers group. These results indicate a deficient acquired immunity by the preterm group increasing the risk of infection.