Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 432345.pdf: 979099 bytes, checksum: 820bba184bdc3f509975d4086e7aaeb4 (MD5) Previous issue date: 2011-03-23 / Angiostrongylus cantonensis ? um nemat?deo de roedores, seus hospedeiros definitivos. Ao infectar o ser humano, um hospedeiro n?o habitual, causa meningoencefalite eosinof?lica. A droga indicada para o tratamento ? o albendazol, por?m n?o existe, at? o presente momento, droga de efic?cia cl?nica demonstrada para o tratamento das angiostrongil?ases. Assim, a id?ia de buscar uma subst?ncia que reduza ou previna a morbidade ? uma alternativa ? abordagem usual de drogas vermicidas. Neste sentido, o presente estudo objetivou verificar o efeito de tr?s subst?ncias com potencial capacidade de inibi??o da oviposi??o em A. cantonensis. Roedores da esp?cie Rattus norvegicus foram inoculados com 100 larvas L3 de A. cantonensis e ap?s 42 dias de infec??o larvas L1 come?aram a ser eliminadas nas fezes. As subst?ncias foram administradas aos animais com 42 dias de infec??o durante 5 dias para a lovastatina (400 mg/Kg) pela via oral, 4 dias para a fenantrolina (20 mg/Kg) pela via intraperitoneal diluindo-se em carboximetilcelulose (CMC) a 1% como coadjuvante e 3 dias, de 12 em 12 horas, para a nitazoxanida (8,3 mg/Kg) pela via oral. Os resultados mostraram um decl?nio na elimina??o de larvas por R. norvegicus quando foi utilizada a nitazoxanida em rela??o aos animais infectados e n?o tratados demonstrando um potencial efeito na inibi??o da oviposi??o deste parasito. Estes resultados demonstram que esta id?ia deve ter continuidade e mais estudos devem ser realizados para aprimorar essa nova hip?tese

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 432505.pdf: 1390397 bytes, checksum: 39fab4614d11925a0667ad6e40789290 (MD5) Previous issue date: 2011-03-22 / Em focos de introdu??o recente da esquistossom?se, como Esteio na regi?o metropolitana de Porto Alegre, a parasitose ocorre com baixas preval?ncias e cargas parasit?rias, resultando em dificuldades para o diagn?stico parasitol?gico, em virtude da sensibilidade inadequada dos m?todos cl?ssicos. O principal objetivo deste trabalho foi otimizar o desempenho de m?todos de diagn?stico, em situa??es que os ovos nas fezes s?o um evento raro. A estrat?gia foi examinar grandes quantidades de fezes, o que resultou na descri??o e avalia??o de um novo m?todo de diagn?stico para detec??o de ovos de Schistosoma mansoni nas fezes denominado Helmintex. Este ? um m?todo de concentra??o, onde as fezes passam por uma sequ?ncia de sedimenta??o espont?nea, tamisagem, centrifuga??o com acetato de etila (Ritchie) e uma etapa final onde os ovos s?o isolados atrav?s de intera??o com part?culas paramagn?ticas em um campo magn?tico. Ap?s a concentra??o, na etapa de detec??o dos ovos todo o sedimento resultante ? analisado atrav?s de microscopia ?ptica. Na segunda etapa deste trabalho o objetivo foi avaliar o desempenho da PCR em tempo real (tecnologia Taqman) como alternativa de m?todo de detec??o no sedimento final do Helmintex, substituindo a an?lise microsc?pica. Para realiza??o da primeira etapa, ovos de S. mansoni foram adicionados em 30 g de fezes negativas para a infec??o, formando suspens?es de 0,1 a 1,34 ovos por grama de fezes (opg), e as fezes foram submetidas a todas as etapas de concentra??o do m?todo. Para cada suspens?o testada foi encontrado pelo menos 1 ovo em 20% (0.1 opg); 50% (0.24); 50% (0.34); 60% (0.67); 80% (1.0) e 100% (1.34) das tentativas testadas para cada suspens?o. Para a avalia??o do desempenho da PCR, "primers" e sonda para o gene da citocromo-C oxidase subunidade 1 foram desenhados para a amplifica??o do DNA de S. mansoni. Para a extra??o do DNA foram avaliados 4 protocolos diferentes. Foram preparadas suspens?es de ovos em ?gua destilada e fezes, contendo 1, 10, 20, 40 e 80 ovos. E amostras de 1000 ovos foram extra?das para a constru??o de uma curva padr?o da estimativa de concentra??o de DNA, para verifica??o do limite de detec??o da rea??o. A amplifica??o do DNA do parasito pode ser vista em todas as suspens?es testadas, inclusive a que continha 1 ovo. Dos 4 protocolos de extra??o avaliados, o Illustra Tissue and Cell GenomicPrep Mini Spin Kit (GE Healthcare), um kit de extra??o comercial, foi o que apresentou o melhor rendimento. A curva padr?o constru?da a partir de 1000 ovos apresentou um limite de detec??o de 1 pg com reprodutibilidade de 13,8%. Considerando 100% de reprodutibilidade, a rea??o apresentou limite de detec??o de 100 pg. O novo m?todo Helmintex descrito neste trabalho representa grande avan?o no diagn?stico da esquistossom?se em infec??es com baixas cargas parasit?rias, al?m disso, apresentam-se 2 op??es de m?todos de detec??o (visualiza??o microsc?pica e amplifica??o de DNA dos ovos pela PCR em tempo real). Estes avan?os contribuem para o esfor?o em curso de reduzir mundialmente a morbidade e a dissemina??o das ?reas de transmiss?o das esquistossom?ases

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 444377.pdf: 376897 bytes, checksum: 468537059cc3bd01ae14fdd8d9e9222a (MD5) Previous issue date: 2012-04-27 / Rhipicephalus microplus is a tick that parasite bovines, damaging the milk and meat production, and constituting a vector for agents of various diseases. R. microplus cause serious losses in countries that depend on cattle production, and the control methods used are based on the use of acaricides, which present high cost and contaminate milk and meat, generating impacts on the environment. Therefore, new methods of control, as vaccines, have been suggested. Anti-parasite protective antigens can be divided into two groups: exposed, which interact with host immune system, and concealed, that do not interact with host immune system. Paramyosin (PRM) is a protein present in invertebrates primarily characterized by muscle function, but in various parasites it has been localized in nonmuscle regions, suggesting that it may also perform functions involved in the evasion of the host immune system. The Taenia solium paramyosin inhibits in vitro the classical pathway of complement system by binding to C1, and R. microplus paramyosin (RmPRM) has been shown to bind immunoglobulins. This study aimed to evaluate the recognition of RmPRM by the sera of animals infected with R. microplus and determine the levels of paramyosin gene expression in tissues and different developmental stages of the tick, as well as to analyze the anti-complement activity of the recombinant protein. The results showed that sera from naturally infected Bos indicus and B. taurus were able to recognize the recombinant PRM. Antibodies levels found among the bovines have considerable variation, but with higher titers predominating among B. indicus individuals. The RmPRM gene transcription was detected in most tissues, organs, eggs and larvae tested, with higher levels of expression found in the fat body, an organ without muscle tissue prominence. Furthermore, this study shows that RmPRM is able to inhibit the complement system, indicating that that this protein should be an important component for the parasite survival, possibly involved in modulation of the host immune system. Corroborating other studies in parasites, these results suggest that RmPRM performs other functions than those classically described in the musculature. / Rhipicephalus microplus ? um carrapato que parasita bovinos, prejudicando a produ??o de leite e carne, al?m de ser um vetor para agentes de diversas doen?as. O R. microplus causa s?rios preju?zos em pa?ses que dependem da pecu?ria, e os m?todos de controle utilizados s?o baseados no uso de acaricidas, os quais apresentam alto custo e contaminam o leite e a carne, al?m de causarem impactos ao meio ambiente. Desta forma, novos m?todos de controle, como o desenvolvimento de vacinas, t?m sido sugeridos. Ant?genos protetores ao gado t?m sido divididos em dois grupos: expostos, que interagem com o sistema imune do hospedeiro, e ocultos, que n?o interagem com o sistema imune do hospedeiro. A paramiosina (PRM) ? uma prote?na presente em invertebrados primariamente caracterizada pela sua fun??o muscular, por?m em diversos parasitos tem sido localizada em regi?es n?o musculares, sugerindo que a mesma tamb?m possa apresentar fun??es envolvidas com a evas?o do sistema imune do hospedeiro. A PRM de Taenia solium inibe in vitro a via cl?ssica do sistema complemento, por meio do bloqueio da fun??o de C1, e a de R. microplus liga a por??o Fc de imunoglobulinas. Este estudo teve por objetivo avaliar o reconhecimento da paramiosina de R. microplus (RmPRM) por bovinos infectados com o carrapato e determinar os n?veis de express?o do gene da paramiosina em tecidos e diferentes est?gios de desenvolvimento do carrapato, tendo sido tamb?m avaliada a atividade anti-complemento da prote?na recombinante. Os resultados mostraram que o soro de bovinos Bos indicus e B. taurus naturalmente infectados foram capazes de reconhecer paramiosina recombinante. Os n?veis de anticorpos encontrados entre os bovinos apresentaram varia??es consider?veis, por?m com os maiores t?tulos predominando entre indiv?duos B. indicus. A transcri??o do gene da RmPRM foi constatada na maioria dos tecidos, ?rg?os, ovos e larvas testados, com maior n?vel de express?o encontrado no corpo gorduroso, um ?rg?o sem predomin?ncia de tecido muscular. Al?m disso, este trabalho mostra que a RmPRM ? capaz de inibir o sistema complemento, indicando que esta prote?na deve ser um importante componente para a sobreviv?ncia do parasito, possivelmente envolvida na modula??o do sistema imune do hospedeiro. Corroborando com outros trabalhos em parasitos, estes resultados sugerem que a RmPRM desempenha outras fun??es al?m das classicamente descritas na musculatura.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 444695.pdf: 624430 bytes, checksum: e4547549fd33f8db2dfcdef98c9ca071 (MD5) Previous issue date: 2012-08-31 / The two parasites in the genus Angionstrongylus that cause disease in humans are Angiostrongylus costarisensis and Angiostrongylus cantonensis. They have different target organs: A. costarisensis is located in the mesentery and causes eosinophilic ileocolitis, whereas A. cantonensis is a neurotropic parasite responsible for eosinophilic meningoencephalitis. Based on several indications that the sexual maturation is associated with increased pathogenesis in angiostrongylid worms, proteomic analysis was performed on A. cantonensis protein samples, to describe differential protein expression between 21 and 42 days post infection. Triplicated bidimensional electrophoresis was submitted to analysis and 11 proteins were found to be exclusively expressed after sexual maturation. Acetate kinase was the only protein that could be identified after mass spectrometry (LC-MS/MS). Since acetate is an important end-product of the energy metabolism among many parasites but not among their mammalian hosts, acetate formation is an attractive target for the development of new anti-parasitic drugs. Furthermore, studying the adaptations in parasite metabolisms can result in an increased understanding of the host-parasite interaction. This data open opportunities for control interventions and new strategies for molecular diagnosis. / Os principais parasitos do g?nero Angionstrongylus que causam doen?a nos seres humanos s?o Angiostrongylus costarisensis e Angiostrongylus cantonensis. Eles t?m distintos ?rg?os alvos: A. costarisensis est? localizado no mesent?rio e causa ileocolite eosinof?lica, enquanto que A. cantonensis ? um parasita neurotr?pico respons?vel pela meningoencefalite eosinof?lica. Com base em v?rias evid?ncias de que a matura??o sexual est? associada ao aumento da patog?nese em vermes deste g?nero, uma an?lise prote?mica foi realizada em vermes de A. cantonensis para descrever a express?o diferencial de prote?nas entre 21 e 42 dias ap?s a infec??o. Eletroforese bidimensional em triplicata foi submetida ? an?lise e 11 prote?nas foram encontradas exclusivamente expressas ap?s a matura??o sexual. A acetato quinase foi a ?nica prote?na identificada por espectrometria de massa (LC-MS/MS). O acetato ? um importante produto final do metabolismo energ?tico de muitos parasitos, mas n?o de seus hospedeiros mam?feros. Sendo assim, ? um alvo atrativo para o desenvolvimento de novas drogas anti-parasit?rias. Al?m do mais, o estudo das adapta??es no metabolismo do parasito pode resultar em uma maior compreens?o da rela??o parasito-hospedeiro. Este trabalho abre oportunidades para interven??es de controle e novas estrat?gias de diagn?stico molecular.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:08:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 341115.pdf: 850841 bytes, checksum: fc50feef6db1a22bda86f5ef243d4f44 (MD5) Previous issue date: 2005-10-11 / A esquistossomose mans?nica foi detectada no Rio Grande do Sul pela primeira vez em 1997, constituindo o foco mais meridional das Am?ricas. A partir daquela data, v?rios trabalhos foram desenvolvidos para caracterizar epidemiologicamente este foco de transmiss?o de ultra baixa endemicidade e de recente introdu??o. O objetivo desse trabalho ? caracterizar morfologicamente o parasito e analisar a estrutura populacional atrav?s de marcadores microssat?lites, comparando com as cepas de laborat?rio LE e MAP. Dois isolados de campo chamados de Esteio e JV foram obtidos, respectivamente, a partir de fezes e moluscos naturalmente infectados e de um paciente. Os vermes adultos, obtidos de camundongos experimentalmente infectados, foram fixados, clarificados e corados para as mensura??es com aux?lio de um microsc?pio ?ptico. A an?lise molecular foi realizada com 4 marcadores microssat?lites. Morfologicamente, o parasito, quando comparado com dados obtidos da bibliografia, n?o apresentou diferen?as not?veis. As pequenas varia??es observadas podem ser atribu?das ? plasticidade fenot?pica das popula??es desse tremat?deo. O uso de 4 marcadores microssat?lites nos permitiu encontrar um n?mero menor de alelos nos isolados de campo quando comparado com as cepas de laborat?rio. H? uma grande diverg?ncia gen?tica encontrada (RST<0,253) quando comparados os isolados de campo e as cepas de laborat?rio.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:09:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 424923.pdf: 645382 bytes, checksum: 25070e3ec621e54c54f5013c978ddf8d (MD5) Previous issue date: 2010-02-19 / A esquistossomose mans?nica ? uma infec??o parasit?ria cr?nica end?mica que ocorre em pa?ses na ?frica, Am?rica do Sul, no Caribe e no Mediterr?neo Oriental. A principal patologia ? o granuloma, uma resposta imune contra os ant?genos secretados pelos ovos do parasito principalmente no f?gado e intestinos. Estes ant?genos est?o crucialmente envolvidos na modula??o das respostas imunol?gica celular e humoral do hospedeiro e podem estar envolvidos na estrat?gia de passagem do ovo atrav?s da mucosa intestinal. Este trabalho teve origem nos resultados de um experimento realizado por Candida Fagundes Teixeira do Grupo de Parasitologia Biom?dica da PUCRS, cujas tentativas de se obter anticorpos do ovo que interagissem com part?culas paramagn?ticas, revelaram alguma dificuldade em obter n?veis elevados de anticorpos contra a superf?cie do ovo. O objetivo principal do presente trabalho foi verificar a produ??o de anticorpos contra a superf?cie do ovo de Schistosoma mansoni. O S. mansoni, isolado Esteio, foi mantido em laborat?rio atrav?s de passagens em Biomphalaria glabrata e camundongos da cepa Swiss. Os vermes foram recuperados, lavados com tamp?o e utilizados para a produ??o de ant?geno sol?vel de membrana de vermes adultos. Os ovos foram coletados de fezes humanas infectadas e utilizados para a imuniza??o de camundongos e produ??o de ant?genos secretados pelo ovo (SEA). Os grupos experimentais foram divididos em 4 grupos com 6 camundongos cada, da seguinte forma: grupo 1 imunizado com solu??o salina 0,9%; grupo 2 imunizado com ovos sonicados e adjuvante; grupo 3 imunizado com ovos sonicados sem adjuvante e grupo 4 imunizado com ovos inteiros. Atrav?s da t?cnica de ELISA e imunofluoresc?ncia indireta foi verificada reatividade na imuniza??o com ovos sonicados, e n?o foi verificada reatividade na imuniza??o com ovos inteiros. A abordagem sist?mica e complexa da intera??o parasito-hospedeiro ? uma proposta interessante de estudo e permanece aberta para futuras investiga??es que poder?o auxiliar na compreens?o e tratamento da patogenia.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:09:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 438925.pdf: 2580010 bytes, checksum: 0e9447a94974bf6d2f3258aa956986f9 (MD5) Previous issue date: 2012-03-16 / The autochthonous transmission of schistosomiasis in Rio Grande do Sul was confirmed for the first time in 1998, establishing the southernmost focus in Americas. Although no morphological differences were detected in a previous study, the investigation of biological characteristics of the parasite in the current study showed some peculiarities that may be relevant for a better understanding of transmission dynamics in the Esteio focus and adequacy of control measures. The epidemiological study of this focus led to the development of a diagnostic method, Helmintex, more sensitive than the traditional methods for detecting small number of eggs shed in the patients feces. In this method eggs are isolated through magnetic interaction with paramagnetic beads and this mechanism could be related to the presence of iron in the eggshell. Schistosoma mansoni worms ingest large amounts of blood and requires specialized metabolic pathway for iron elimination. When analyzed by energy dispersive spectroscopy iron and small crystal structures probably magnetite were identified in the eggshell. The presence of structures with potentially magnetizing properties led to the magnetic characterization of Schistosoma eggs and demonstration of ferromagnetic and paramagnetic behavior. Eggs were also analyzed to see if other helminth eggs compositional differences were related to different taxonomic groups and habitat types. These findings stimulate further research on the metabolic pathway involving iron, development of new treatment modalities and diagnostic tools. / A transmiss?o aut?ctone da esquistossomose no munic?pio de Esteio, Rio Grande do Sul foi confirmada pela primeira vez em 1998, constituindo o foco mais meridional das Am?ricas. Embora n?o tenham sido detectadas diferen?as morfol?gicas do parasito em estudo pr?vio, a abordagem das caracter?sticas biol?gicas neste trabalho evidenciou algumas peculiaridades, tais como a baixa infectividade do mirac?dios e a alta taxa de infec??o unissexual por machos, que podem ter import?ncia para uma melhor compreens?o da din?mica de transmiss?o no foco de Esteio e adequa??o das medidas de controle. O estudo epidemiol?gico do foco conduziu ao desenvolvimento de um m?todo de diagn?stico, Helmintex, mais sens?vel que os m?todos coprol?gicos cl?ssicos para detectar o baixo n?mero de ovos eliminados nas fezes dos pacientes. O m?todo utiliza a intera??o magn?tica com microesferas paramagn?ticas para o isolamento dos ovos. O mecanismo de intera??o dos ovos com o campo magn?tico poderia estar relacionado com a presen?a de ferro na casca do ovo. O Schistosoma mansoni ingere grande quantidade de sangue e necessita de rota metab?lica especializada para elimina??o do ferro. O objetivo do trabalho foi investigar a presen?a de ferro na casca do ovo por an?lise por espectroscopia por dispers?o de energia. Os resultados possibilitaram a identifica??o do elemento qu?mico ferro presente no ovo, al?m de pequenas estruturas cristalinas, provavelmente magnetita. A presen?a de estruturas com propriedades magn?ticas suscet?veis de magnetiza??o foram motivo para caracteriza??o magn?tica dos ovos de Schistosoma com o encontro de comportamento ferromagn?tico e paramagn?tico. Tamb?m foram analisados ovos de outros helmintos para verificar se diferen?as composicionais dos ovos estavam associadas a diferentes grupos taxon?micos e tipos de habitat. Os achados estimulam novas investiga??es sobre a rota metab?lica envolvendo o ferro, desenvolvimento de novas modalidades de tratamento e recursos diagn?sticos.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:09:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 389724.pdf: 1507104 bytes, checksum: d66164492503d9b8044243e149198bf8 (MD5) Previous issue date: 2007-03-23 / O triatom?neo Panstrongylus megistus ? um dos mais importantes vetores na transmiss?o secund?ria da doen?a de Chagas no Brasil. Nos estados do sul, esta esp?cie ocorre principalmente em ec?topos silvestres, ao contr?rio de Minas Gerais, Bahia e algumas ?reas da regi?o nordeste, onde ? encontrado em ec?topos artificiais, apresentando maior valor epidemiol?gico. O presente estudo buscou avaliar os ?ndices de infec??o por Trypanosoma cruzi em P. megistus e no gamb?, Didelphis albiventris, o mais importante reservat?rio silvestre do protozo?rio, bem como as fontes alimentares utilizadas por estes insetos. A ?rea de coleta est? inserida em um fragmento de floresta, localizado no bairro Ponta Grossa, zona periurbana do munic?pio de Porto Alegre. As coletas ocorreram entre outubro de 2005 e setembro de 2006, onde foram investigados anexos no peridomic?lio e tocas, principalmente de gamb?s, no ambiente silvestre. Para o encontro das tocas utilizaram-se as t?cnicas de carretel de rastreamento e transecto. Os transectos foram tra?ados no sentido norte sul do fragmento, considerando tocas encontradas at? 5 metros da linha estipulada. A infec??o dos gamb?s foi determinada por xenodiagn?stico e a amostra de T. cruzi caracterizada por rea??o de polimeriza??o em cadeia (PCR). A an?lise de fonte alimentar dos barbeiros coletados foi realizada atrav?s do teste de preciptina. Os P. megistus adultos foram capturados apenas no ambiente peridomiciliar. Dos 33 encontrados, 28 foram analisados e 18 (64%) estavam infectados por T. cruzi. Os triatom?neos foram observados de outubro a fevereiro e o m?s de dezembro foi o de maior ocorr?ncia. A amostragem do ambiente natural indicou 61 tocas, sendo que, no total, 10 (16%) apresentaram ninfas ou vest?gios de barbeiros. A presen?a do barbeiro foi constatada somente em tocas de ?rvores, o que indica uma prefer?ncia arbor?cola da esp?cie. Nestas tocas foram obtidas 27 ninfas, onde 19 (73%), das 26 analisadas, estavam infectadas por T. cruzi. Entre os 43 gamb?s capturados, 39 foram analisados e 27 (69%) estavam infectados pelo protozo?rio. A an?lise de preciptina resultou em sete fontes alimentares utilizadas pelos barbeiros adultos: ave (13/28 46,4%), roedor (8/28 28,6%), gamb? (4/28 14,3%), tatu (3/28 10,7%), gato (3/28 10,7%), c?o (3/28 10,7%) e lagarto (2/28 7,1%); e seis associadas a ninfas: ave (12/26 46,2%), roedor (9/26 34,6 %), gamb? (7/26 26,9%), tatu (1/26 3,8%), cavalo (1/26 3,8%) e boi (1/26 3,8%). O n?mero de fontes alimentares encontradas indica o ecletismo alimentar tanto em ninfas como em adulto de P. megistus. Os altos ?ndices de infec??o por T. cruzi encontrados, tanto nos barbeiros como nos gamb?s, e a presen?a de ninfas alimentadas em gamb?s nos ocos de ?rvores do ambiente natural, indicam que ambos os indiv?duos s?o respons?veis pela manuten??o do ciclo silvestre do protozo?rio no local. A aus?ncia de col?nias peridomiciliares e a semelhan?a entre as fontes alimentares dos adultos e das ninfas mostram a baixa tend?ncia invasiva da esp?cie no local, possivelmente devido ao estado de preserva??o da mata somado ao clima ?mido.

A distribuição familial da resposta ao extrato antigênico da Leishmania foi analisada sobre o prisma da epidemiologia genética. O exame utilizado para medir a resposta do organismo ao antígeno estudado foi a intradermorreação de Montenegro (IDRM). O presente trabalho utilizou uma amostra de 313 indivíduos do município de Monte Negro, RO, com o objetivo de detectar a evidência de um componente genético importante na determinação da expressão da característica em estudo. As análises estatísticas foram realizadas por meio do programa SPSS e as análises de segregação foram feitas utilizando o programa de computador POINTER. Os resultados indicaram que as variáveis idade e sexo estão correlacionadas com a resposta ao extrato antigênico da Leishmania. Cálculos de correlação sugeriram a existência de agregação familial significante com forte componente genético. Esta agregação familial foi confirmada pela análise de segregação complexa, que sugeriu que o modelo mais adequado para explicar a transmissão do fenótipo, na população estudada, foi o monogênico recessivo. / The familal distribuition of the response to an antigenic extract of Leishmania was analyzed by applying genetic epidemiologic methods. The test used to measure the response of the organism to a Leishmania antigen went to Montenegro skin test. The present study tested a sample of 313 individuals from the Monte Negro, RO, with the objective to ascertain the relative importance of genetic components in the determination of the expression of the characteristic studied. Statistical analyses of sample were made through of SPSS program and complex segregation analysis was made using the computer program POINTER. The results showed that age and gender affect significantly the response to antigenic extract of Leishmania. Correlations suggested the existence of a significant familial aggregation with a strong genetic component. This familial aggregation was confirmed by complex segregation analysis, which suggested that the best model to explain the phenotype transmission in the Monte Negro population was the recessive monogenic one.

A invasão de eritrócitos por merozoítas de Plasmodium é um processo bastante complexo em que várias proteínas do parasita interagem com receptores presentes na célula hospedeira. É nossa hipótese que o Antígeno 1 de Membrana Apical (AMA-1) e a Proteína 1 da Superfície do Merozoíta (MSP1) estejam envolvidas na adesão ao eritrócito, no momento da invasão. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a capacidade de ligação de proteínas de merozoítas de P. vivax a eritrócitos humanos utilizando um novo ensaio de citometria de fluxo e o clássico ensaio de citoaderência. Para tanto, a ligação das proteínas recombinantes correspondentes à região C-terminal de 19 kDa da MSP1 (PvMSP119), ao ectodomínio (PvAMA-1E) e aos domínios I-II e II de AMA-1 (PvAMA-1DI-II e PvAMA-1DII) foi avaliada por citometria de fluxo utilizando anticorpo fluorescente contra cauda de histidina. A proteína recombinante baseada na região II da Proteína Ligante de Duffy (PvDBP-RII) foi utilizada como controle positivo e a tioredoxina humana como controle negativo. Os dados foram expressos pela média da intensidade de fluorescência (MIF). Os resultados dos ensaios de citometria de fluxo confirmaram a ligação de PvDBP-RII a eritrocitos Duffy A (MIF=1997&#177;405) e Duffy B (MIF= 5760&#177;303). No entanto, não foi possível detectar a ligação de PvMSP119 (MIF=201&#177;47), de PvAMA-1E (MIF=536&#177;99) e dos domínios PvAMA- 1DI-II (MIF=120&#177;12) e PvAMA-1DII (MIF=179&#177;30). Soro policlonal de camundongos BALB/c imunizados com PvDBP-RII foi capaz de inibir a ligação da proteína aos eritrócitos em até 66%. Tais resultados foram confirmados pelo ensaio clássico de citoaderência. Para tanto, células COS-7 foram transfectadas com plasmídeos recombinantes codificando as proteínas PvDBPRII, PvMSP119, PvAMA-1DI-II e PvAMA-1DIII em fusão com GFP. A eficiência de transfecção e a expressão destas proteínas na superfície das células foram confirmadas por citometria de fluxo, utilizando anticorpos policlonais produzidos em camundongos. A ligação foi avaliada pela formação de rosetas entre as células transfectadas e eritrócitos humanos por microscopia de fluorescência. Observamos que as células transfectadas expressando PvDBP-RII foram capazes de se ligar a eritrócitos humanos Duffy A (274&#177;144 rosetas/25 campos) e Duffy B (356&#177;129 rosetas/25 campos). No entanto, não foram visualizadas rosetas nos ensaios realizados com células expressando PvMSP119, PvAMA-1E, PvAMA-1DI-II e PvAMA-1DIII, indicando a ausência de ligação destas proteínas a eritrócitos humanos. Soro de camundongos imunizados com PvDBP-RII foi capaz de inibir a ligação aos eritrócitos em até 99%. Os resultados obtidos nesse trabalho demonstram que fomos capazes de desenvolver um ensaio baseado em citometria de fluxo para avaliação da ligação de proteínas a eritrócitos humanos, cujos resultados foram confirmados pelo ensaio clássico de citoaderência. No entanto, não foi possível detectar a ligação das proteínas PvMSP119 e PvAMA-1 a eritrócitos humanos. / The invasion of erythrocytes is a complex process in which the Merozoite Surface Proteins (MSPs) are responsible for initial adhesion and the P. vivax Duffy Binding Protein (PvDBP) is involved on junction formation. In addition, there are evidences that the Apical Membrane Antigen (AMA-1) plays a fundamental role on invasion; however, the exact mechanism is still being investigated. The aim of the present study was to evaluate the ability of P. vivax merozoite antigens to bind to human erythrocytes using a new flow cytometry assay and the classical cytoaherence assay. The binding assay was performed by flow cytometry using fluorescent antibody against histidine tag present on recombinant proteins based on 19 kDa C-terminal fragment of MSP1 (PvMSP119), the ectodomain (PvAMA-1E) and domains I-II and II of AMA-1 (PvAMA-1DI-II and PvAMA-1DII). The recombinant protein based on the region II of DBP (PvDBP-RII) was used as positive control and human thioredoxin as negative control. Data were expressed as mean of fluorescent intensity (MFI). The results of flow cytometry assays confirmed the binding of PvDBP-RII to human Duffy A (MFI=1997&#177;405) and Duffy B (MFI= 5760&#177;303) erythrocytes. However, we were not able to detect the binding of PvMSP119 (MFI=201&#177;47), PvAMA-1E (MFI=536&#177;99), PvAMA-1DI-II (MFI=120&#177;12) or PvAMA-1DII (MFI=179&#177;30). Sera from BALB/c mice immunized with PvDBP-RII inhibited binding up to 66%. These results were confirmed by classic cytoadherence assay. COS-7 cells were transfected with plasmids encoding the proteins PvDBP-RII, PvMSP119, PvAMA-1DI-II or PvAMA-1DIII fused to GFP. The transfection efficiency and expression of proteins on cell surface were confirmed by flow cytometry using polyclonal antibodies raised on mice. The binding was evaluated by the number of rosettes formed between transfected cells and human erythrocytes using fluorescent microscope. The cells expressing PvDBP-RII were able to bind Duffy A (274&#177;144 rosettes/25 fields) and Duffy B (356&#177;129 rosettes/25 fields) human erythrocytes. On the other hand, PvMSP119, PvAMA1E, PvAMA-1DI-II and PvAMA-1DIII failed to bind human erythrocytes and specific rosettes were not observed. Sera from immunized mice inhibited binding of PvDBP-RII up to 99%. In conclusion, we developed a binding assay using flow cytometry which can be extremely useful to evaluate the binding of proteins to erythrocytes whose results were confirmed by classic cytoadherence assays, as observed the binding of PvDBP-RII to human erythrocytes. Using both biding assays, we were not able to determine the binding of PvMSP119, nor PvAMA-1 and their domains to human erythrocytes.