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Prevalência de parasitas intestinais e caracterização genotípica de Giardia duodenalis em creche do município de Pratânia, estado de São Paulo

David, Érica Boarato [UNESP] 24 February 2011 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-24Bitstream added on 2014-06-13T19:30:55Z : No. of bitstreams: 1 david_eb_me_botfm.pdf: 680578 bytes, checksum: 9ccd08f14d2896ddd592fa21e3bcaaba (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O presente estudo foi realizado para investigar a prevalência de enteroparasitas em crianças e funcionários da creche do município de Pratânia, Estado de São Paulo, e caracterizar geneticamente os isolados de Giardia duodenalis obtidos dos indivíduos desse grupo empregando gdh e tpi como genes-alvo. Para isso, amostras de fezes de 141 crianças com idade de zero a seis anos e de 18 colaboradores foram colhidas e processadas pelo método de centrífugo-flutuação e pelo kit TF-test®. Nas 141 crianças, parasitas e/ou comensais intestinais foram diagnosticados em 64 (45,4%), das amostras, sendo Giardia (22%) e Cryptosporidium (22%) os parasitas mais freqüentes. Nos funcionários, Giardia foi diagnosticada em apenas uma amostra (5,5%) e o protozoário comensal Entamoeba coli (22,2%) foi o mais prevalente. Empregando técnicas baseadas em PCR, o DNA extraído de 86 (31 amostras positivas e 55 negativas para Giardia no exame microscópico) foi amplificado e os produtos obtidos foram seqüenciados. A análise de 35 seqüências revelou a ocorrência de infecção pelos genótipos A (28,6%) e B (71,4%), subtipos AI, AII, BIII/BSI e BIV, no entanto, associações entre os genótipos e fatores de risco para a infecção não foram observadas. O alinhamento das seqüências de gdh e tpi, revelou a presença de um a 12 SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms) em isolados dos genótipos A e B, sendo que em alguns deles, as mutações foram responsáveis por alterações nas seqüências de aminoácidos. A infecção de seis crianças de um mesmo grupo e de uma funcionária por isolados classificados como genótipo B e apresentando seqüências nucleotídicas 100% idênticas entre si sugere a ocorrência de transmissão antroponótica na população estudada. Além disso, a maior prevalência do genótipo B, grupo predominante nas infecções humanas, reforça o fato de que a transmissão... / The present study was conducted to investigate the prevalence of intestinal parasites in children and employees of a daycare center of Pratania, São Paulo State, and to evaluate the genotypes Giardia duodenalis isolates obtained from individuals in this group by using gdh and tpi genes as targets. Fecal samples of 141 children aged zero to six years and 18 employees were processed by a flotation method and the TF-Test® kit. Of the 141 children samples, parasites and/or commensal organisms were diagnosed in 64 (45.4%) samples, and Giardia (22%) and Cryptosporidium (22%) were the most frequent parasites. In employees, Giardia was diagnosed in only one sample (5.5%) and the commensal protozoan Entamoeba coli (22.2%) was the most prevalent. DNA extracted from 86 samples (31 samples positive and 55 negative for Giardia by microscopic examination) was amplified by PCR and the products were sequenced. The analysis of 35 sequences revealed the occurrence of infection with genotypes A (28.6%) and B (71.4%) subtypes AI, AII, BIII / BIV and BSI, however, associations between genotypes and risk factors for infection were not observed. The alignment of the sequences revealed SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms) in both genotypes A and B, altering the amino acid sequence of some isolates. Among isolates identified as genotype B, six obtained from children of the same group and one from the only one employee infected with Giardia showed gdh and tpi sequences different from reference ones, but 100% identical to each other. This data is suggestive of anthroponotic transmission in the studied population. In addition this finding, the higher prevalence of genotype B, the main group associated to human infections, reinforces the fact that anthroponotic transmission has importance in collective environments that meet children at an age that they still have not practice the basic precepts of hygiene.
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Efeito da exposição neonatal a extrato parasitário sobre a resposta pulmonar alérgica em camundongos

Ponzi, Daniela January 2009 (has links)
Made available in DSpace on 2013-08-07T19:07:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000423252-Texto+Completo-0.pdf: 3176835 bytes, checksum: f047be27c11502eb5aa36cd715f80816 (MD5) Previous issue date: 2009 / Introduction: Studies on novel therapies for atopic asthma should focus on modulating the immune response before diseases expression, with drugs or products capable of modifying T-cell phenotypes in early life. The best moment for therapeutical interventions with this objective is not clear and well established. Aims: To analyze the effect of exposition to Angiostrongylus cantonensis extract in different moments on a murine model of allergic pulmonary response to ovalbumin. Methods: Angiostrongylus cantonensis extract was injected intraperitoneally in adult BALB/c mice, in 3 different moments of ovalbumin (OVA) protocol: 3 weeks prior (early intervention; neonatal period), 1 week prior (pre-sensitization) and 3 weeks after OVA protocol (post-sensitization). Total and differential cell counts were measured in bronchoalveolar lavage (BAL). Eosinophil peroxidase (EPO) and histological analisys from lung tissue were perfomed. Results: In the early intervention group, total cell counts (p=0. 01), neutrophils (p=0. 015), lymphocytes (p=0. 01) from BAL and EPO (p=0. 008) in lung tissue were reduced, when compared to the control group. Histological analysis showed a marked reduction in eosinophil infiltration in the airways of animals with early intervention. Conclusions: Neonatal period was the moment when parasite extract was more efficacious to inhibit eosinophilic pulmonary inflammation in mice. The first months of life seem to be the best period to test novel immunomodulatory therapies in atopic asthma. / Introdução: Pesquisas sobre novas terapias em asma deveriam ter como alvo a mudança na resposta imune antes da expressão da doença, com fármacos ou substâncias capazes de modificar os fenótipos das células T no início da vida. O melhor momento para intervenções terapêuticas em asma, com este objetivo, ainda não está claro e estabelecido. Objetivos: analisar o efeito da exposição de extrato parasitário de Angiostrongylus cantonensis em diferentes momentos do modelo murino de resposta pulmonar alérgica a ovalbumina. Métodos: Extrato de Angiostrongylus cantonensis foi injetado por via intraperitoneal (i. p) em camundongos BALB/c adultos, em 3 diferentes momentos do protocolo de resposta pulmonar alérgica a ovalbumina (OVA): 3 semanas antes (intervenção precoce; período neonatal), 1 semana antes (pré-sensibilização), e 3 semanas depois do início do protocolo de OVA (pós-sensibilização). Foram mensuradas a contagem total e diferencial de células no lavado broncoalveolar (LBA), os níveis de peroxidase eosinofílica (EPO) e alterações histológicas no tecido pulmonar. Resultados: No grupo com intervenção neonatal houve redução significativa da contagem total de células (p=0,01), de neutrófilos (p=0,015) e linfócitos (p=0,01) no LBA e de EPO no tecido pulmonar (p=0,008). A análise histológica demonstrou uma redução do infiltrado pulmonar eosinofílico peribrônquico e perivascular mais acentuada no grupo com intervenção precoce. Conclusões: O período neonatal foi o momento onde o extrato parasitário foi mais eficaz em inibir a resposta pulmonar alérgica em camundongos. O melhor momento para testar novas terapias imunomoduladoras em asma de origem atópica parece ser os primeiros meses de vida.
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Efeito da exposição de diferentes extratos parasitários na resposta pulmonar alérgica em modelo murino

Sudbrack, Simone January 2009 (has links)
Made available in DSpace on 2013-08-07T19:07:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000412451-Texto+Completo-0.pdf: 927067 bytes, checksum: ec73648f4eb167d149ba89190dcd21c2 (MD5) Previous issue date: 2009 / Background: Results from epidemiological studies are controversial regarding the effect of helminth exposition on the development of asthma. It is not currently clear whether different parasites have distinct effects on the immune response in asthma. Aims: To analyze the effect of different parasite extracts on pulmonary allergic response in a murine model. Methods: Extracts of three different helminths (Angiostrongylus costaricensis, Angiostrongylus cantonensis and Ascaris lumbricoides) were injected intraperitoneally (i. p. ) in female adult BALB/c mice. Ovalbumin (OVA) sensitization and pulmonary challenge was performed 7 days after helminth extract. Mice with no extract parasite exposition was used as the control group. Total and differential cell counts, IL-5, INF-U and IL-10 levels were measured in bronchoalveolar lavage (BAL) fluid. Results: Airway cellular influx (cell counts, eosinophils and lymphocytes) induced by OVA was significantly suppressed by extracts of A. cantonensis and A. lumbricoides, when compared to the control group (p=0. 001, p=0. 001 and p<0. 001, respectively). Extracts of A. costaricensis and A. lumbricoides also led to a marked reduction of IL-5 in BAL (p<0. 001). INF- U levels in BAL samples were not different from the studied groups. Exposition to A. lumbricoides led to increased production of IL-10 in the lungs (p<0. 001). Conclusions: Distinct helminths present different immune responses in mice with OVA pulmonary sensitization. Our findings suggest that controversies on epidemiological data may be explained by different immune responses triggered by distinct parasites in human populations. / Introdução: Resultados de estudos epidemiológicos são controversos em relação ao desenvolvimento de asma após a exposição por helmintos. Ainda não está claro se diferentes parasitas têm efeitos distintos na resposta imune em asma. Objetivo: Analisar o efeito de diferentes extratos parasitários na resposta pulmonar alérgica em um modelo animal murino. Métodos: Extrato de três diferentes parasitas (Angiostrongylus costaricensis, Angiostrongylus cantonensis e Ascaris lumbricoides) foram injetados intraperitonealmente em camundongos fêmeas adultas BALB/c. A sensibilização com ovalbumina intraperitoneal e pulmonar foi realizada sete dias após a sensibilização com extrato parasitário. BALB/c sem extrato parasitário fizeram parte do grupo controle. No lavado broncoalveolar (LBA) foram analisados: número total de células, células diferenciais, IL-5, IL-10 e INF-U. Resultados: O número total de células, eosinófilos e linfócitos foram suprimidos pelos extratos dos parasitas Angiostrongylus cantonensis e Ascaris lumbricoides quando comparado ao grupo controle (p=0. 001, p=0. 001 e p<0. 001, respectivamente) no LBA. Extratos de A. lumbricoides e Angiostrongylus costaricensis também induziram uma marcada redução de IL-5 no lavado broncoalveolar (p<0. 001). Níveis de INF- U no lavado broncoalveolar não foram diferentes nos grupos estudados. Exposição à A. lumbricoides levou a um aumento dos níveis de IL-10 no pulmão de camundongos (p<0. 001). Conclusão: Diferentes helmintos apresentam respostas imunes distintas em camundongos sensibilizados com OVA intrapulmonar. Nossos achados sugerem que controvérsias publicadas em estudos epidemiológicos podem ser explicadas pelas diferenças nas respostas imunes induzidas pelos diferentes parasitas na população humana.
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Clonagem, expressão e purificação de antígeno recombinante no imunodiagnóstico da angiostrongilíase abdominal

Silva, Ana Cristina Arámburu da January 2007 (has links)
Made available in DSpace on 2013-08-07T19:11:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000389286-Texto+Completo-0.pdf: 1859740 bytes, checksum: 5056bcedea79433eb88e0c64523c9659 (MD5) Previous issue date: 2007 / Abdominal angiostrongyliasis is a zoonotic infection caused by Angiostrongylus costaricensis, a nematode with an intra-vascular location in the mesentery. The diagnosis is only achieved with a pathological examination of tissue fragments ressected during surgical treatment in complicated clinical courses (intestinal perforation and/or obstruction). Immunodiagnostic test show many difficulties with cross-reacting antibodies and diversity of the humoral reactivity. Therefore, efforts have been directed towards identification and purification of parasite specific antigens for development of serodiagnosis methods. In the present study we analized the use of recombinant A. costaricensis heat shock protein (HSP) 20 in ELISA for the serodiagnosis. One of the cDNA clones, obtained and expressed a small heat shock protein HSP 20 with 147 amino acids, which had high sequence identity with other nematode small heat shock proteins. The gene enconding the HSP 20 was sub-cloned using PCR technique. The sequence corresponding was subcloned in the pET-23a-d (+) expression vector, to construct a recombinant HSP 20 protein containing six histidine residues at the Nterminal. High level expression of the HSP 20 by Escherichia coli BL21 (DE3) harbouring the HSP 20 gene and containing its expression vector was observed upon induction with 1 mM IPTG at 37 °C. One-step purification of the recombinant HSP 20 was achieved with Ni-NTA resin. Western blot analysis, using sera from patients with confirmed angiostrongyliasis abdominal, indicated that the purified HSP 20 expression product was immunogenic. Sensitivity of ELISA-HSP 20 was 33%. However, 100% specificity of this recombinant protein suggests its usefullness in combination with other antigen molecules, in an approach of multiple screening tests for the most accurate serodiagnosis of abdominal angiostrongyliasis. / Angiostrongilíase abdominal é uma infecção zoonótica causada por Angiostrongylus costaricensis, um nematódeo com uma localização intra-vascular no mesentério. O diagnóstico é realizado somente com exame patológico de fragmentos do tecido ressecado, durante o tratamento cirúrgico de curso clínico complicado (perfuração intestinal e/ou obstrução). Métodos de imunodiagnóstico mostram muitas dificuldades com reação cruzada de anticorpos e a diversidade de resposta humoral. Esforços têm sido direcionados para uma contribuição na identificação e purificação de antígenos específicos de parasitos no desenvolvimento de métodos sorodiagnósticos. No presente estudo, foi analisado o uso de uma proteína recombinante de A. costaricensis, a proteína de choque térmico (HSP 20), em ELISA como sorodiagnóstico. Um dos clones de cDNA, obtido e expresso como uma pequena proteína de choque térmico HSP 20 com 147 aminoácidos, apresentou identidade com seqüências de pequenas proteínas de choque térmico de outros nematódeos. A seqüência correspondente foi sub-clonada no vetor de expressão pET-23a-d (+), utilizando a técnica de PCR para a construção da proteína recombinante HSP 20. O alto nível de expressão de HSP 20 em Escherichia coli BL 21 (DE3), clonado no vetor de expressão, foi observado após indução com 1 mM de IPTG a 37 ºC. A etapa da purificação do recombinante HSP 20 foi realizada com a resina de Ni-NTA. Análise do Western blot utilizando soro de um paciente com diagnóstico confirmado para angiostrongilíase abdominal, indicou que o produto de expressão purificado foi imunogênico. A sensibilidade da HSP 20 foi de 33%. Entretanto, 100% de especificidade da proteína recombinante sugere o uso de um painel de antígenos, na tentativa de múltiplos testes de varredura, para um sorodiagnóstico melhor e preciso da angiostrongilíase abdominal.
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Estudo de proteínas de Angiostrongylus cantonensis para o entendimento da relação parasito-hospedeiro e análise de alvos para o diagnóstico das angiostrongilíases

Morassutti, Alessandra Loureiro January 2011 (has links)
Made available in DSpace on 2013-08-07T19:12:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000437829-Texto+Completo-0.pdf: 3097644 bytes, checksum: 63052063f3fb08648c7ca5a4506262bc (MD5) Previous issue date: 2011 / The genus Angiostrongylus Kamensky, 1905 belongs to the Phylum Nematode, with round shape as its main feature. Two species have medical importance, A. costaricensis living in mesenteric arteries of wild mice and causing abdominal angiostrongyliasis in human and A. cantonensis which lives in pulmonary arteries of rats and may cause eosinophilic meningoencephalitis in humans. The diagnosis of both diseases is difficult due to absence of parasite in feces in case of the infection by A. costaricensis and seldom detected larvae in the cerebrospinal fluid in case of eosinophilic meningoencephalitis. Several studies have been performed to improve the diagnosis of angiostrongyliasis which should be able to differentiate in a specific and sensitive way among other parasitic infections. The 31kDa antigen has been considered the main antigen for eosinophilic meningoencephalitis diagnosis due to A. cantonensis infection. However this antigen is obtained from crude extracts of the worm by a laborious process of purification with low yielding and insufficient amount for large distribution to other diagnostic centers. In order to improve the serologic diagnostic of angiostrongyliasis and make the antigens widely available the present work aimed to identify new antigenic targets and also characterize the 31kDa antigen for further recombinant production. Besides that, essential molecules for parasite survival were investigated which in the future may be targets for disease treatment. Two sources of antigen from female worms were used: excretion and secretion products (ES) and total extract (TE). In ES, sample antioxidant enzymes activity were detected such as catalase and superoxide dismutase. Also was identified by Western blot and Mass spectrometry (MS), 17 proteins target for disease diagnosis and treatment like hemoglobinases, heat shock proteins and proteases inhibitors. In TE sample antioxidant enzymes as well as glutathione transferases (GST) which is another kind of defense enzyme were also detected. GSTs were purified by affinity chromatography and analyzed by MS. Peptide sequences from this experiment matched with homologous sequences of sigma class GST. In TE samples was possible to characterize the 31kDa and after two-dimensional electrophoresis was shown to be composed of four spots around 4. 5 of isoelectric point (pI) and being recognized by sera from patients infected with Angiostrongylus spp. The spots were analyzed by MS and three different proteins were identified: 14-3-3 protein, NAC domain containing protein, and epsilon subunit of the coatomer protein complex isoform 2. The 31kDa antigen was characterized as a glycoprotein through studies of oxidation of carbohydrate where it was observed that the antigenicity of four spots was dependent on sugar residues. The DNA sequences of the antigens were obtained by random sequencing of the genome for 454 platform (Roche) and deposited in Genbank. The data generated in this study contribute significantly to the development of recombinant antigens that may be widely distributed for independent diagnostic validation. / O gênero Angiostrongylus Kamensky, 1905 agrupa animais pertencentes ao filo Nematoda, cuja característica marcante é a forma corporal cilíndrica. Duas espécies possuem importância médica: A. costaricensis cujo habitat natural são as artérias mesentéricas de camundongos silvestres e na infecção humana pode levar ao desenvolvimento de angiostrongilíase abdominal; e A. cantonensis que habita as artérias pulmonares de roedores e na infecção humana pode causar meningoencefalite eosinofílica. O diagnóstico de ambas as doenças é dificultado pela ausência de formas parasitárias nas fezes, no caso de infecções por A. costaricensis e raramente encontradas no líquido cefaloraquidiano no caso de meningoencefalite eosinofílica. Muitos estudos vêm sendo desenvolvidos para o aprimoramento da detecção das angiostrongilíases visando testes que sejam capazes de discernir das diferentes infecções parasitárias de forma sensível e específica. O antígeno de 31kDa é considerado atualmente o principal antígeno para o diagnóstico da meningoencefalite eosinofílica, causada por A. cantonensis, entretanto é proveniente da purificação de extratos brutos do parasito o que acarreta num processo laborioso e dispendioso que em última análise gera quantidades insuficientes para que haja ampla distribuição e compartilhamento entre os centros de diagnóstico. Com o intuito de aprimorar o diagnóstico sorológico das angiostrongilíases e tornar os antígenos disponíveis globalmente o presente trabalho buscou identificar novos alvos antigênicos e caracterizar o antígeno de 31kDa para posterior propagação de formas recombinantes. Além disso, foram estudadas moléculas que podem ser fundamentais na manutenção do parasitismo, que futuramente poderão ser alvos para o tratamento das angiostrongilíases. Duas fontes de antígenos a partir de vermes adultos fêmeas foram empregadas: produtos de excreção e secreção (ES) e extrato bruto (TE). Nos ES foi detectada a atividade de enzimas antioxidantes como catalase e superóxido dismutase e identificadas, por western blot e espectrometria de massas (MS), 17 proteínas alvo para o diagnóstico e tratamento das angiostrongilíases dentre elas hemoglobinases, proteínas de choque térmico e inibidores de proteases. Nas amostras de TE além da identificação de enzimas antioxidantes, estavam presentes glutationas transferases (GST), outra classe de enzimas de defesa. Estas proteínas foram purificadas por cromatografia de afinidade e analisadas por MS o que revelou sequencias peptídicas homólogas a GST de classe sigma. Em TE também foi possível a caracterização do antígeno de 31kDa que quando submetido a eletroforese bidimensional mostrou-se ser composto por 4 spots com ponto isoelétrico (pI) em torno de 4,5 sendo reconhecidos pelo soro de pacientes infectados com Angiostrongylus spp. Os spots foram analisados por MS e três diferentes proteínas foram identificadas: 14-3-3; proteína com domínio NAC e a subunidade épsilon do coatamero. O antígeno de 31kDa foi caracterizado como uma glicoproteína através de estudos de oxidação de glicídeos, onde se observou que a antigenicidade dos 4 spots foi dependente de resíduos de açúcar. As sequências de DNA dos antígenos foram obtidas pelo sequenciamento aleatório do genoma pela plataforma 454 (Roche) e depositadas no Genbank. Os dados gerados no presente trabalho contribuem de forma significativa para o desenvolvimento de antígenos recombinantes que poderão ser amplamente distribuídos para validação e aplicação em diagnóstico.
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Mecanismo de interação magnética dos ovos de Schistosoma spp. e características biológicas da cepa Esteio, Rio Grande do Sul

Maurer, Rafael Lucyk January 2012 (has links)
Made available in DSpace on 2013-08-07T19:13:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000438925-Texto+Completo-0.pdf: 2580010 bytes, checksum: 0e9447a94974bf6d2f3258aa956986f9 (MD5) Previous issue date: 2012 / The autochthonous transmission of schistosomiasis in Rio Grande do Sul was confirmed for the first time in 1998, establishing the southernmost focus in Americas. Although no morphological differences were detected in a previous study, the investigation of biological characteristics of the parasite in the current study showed some peculiarities that may be relevant for a better understanding of transmission dynamics in the Esteio focus and adequacy of control measures. The epidemiological study of this focus led to the development of a diagnostic method, Helmintex, more sensitive than the traditional methods for detecting small number of eggs shed in the patients’ feces. In this method eggs are isolated through magnetic interaction with paramagnetic beads and this mechanism could be related to the presence of iron in the eggshell. Schistosoma mansoni worms ingest large amounts of blood and requires specialized metabolic pathway for iron elimination. When analyzed by energy dispersive spectroscopy iron and small crystal structures probably magnetite were identified in the eggshell.The presence of structures with potentially magnetizing properties led to the magnetic characterization of Schistosoma eggs and demonstration of ferromagnetic and paramagnetic behavior. Eggs were also analyzed to see if other helminth eggs compositional differences were related to different taxonomic groups and habitat types. These findings stimulate further research on the metabolic pathway involving iron, development of new treatment modalities and diagnostic tools. / A transmissão autóctone da esquistossomose no município de Esteio, Rio Grande do Sul foi confirmada pela primeira vez em 1998, constituindo o foco mais meridional das Américas. Embora não tenham sido detectadas diferenças morfológicas do parasito em estudo prévio, a abordagem das características biológicas neste trabalho evidenciou algumas peculiaridades, tais como a baixa infectividade do miracídios e a alta taxa de infecção unissexual por machos, que podem ter importância para uma melhor compreensão da dinâmica de transmissão no foco de Esteio e adequação das medidas de controle. O estudo epidemiológico do foco conduziu ao desenvolvimento de um método de diagnóstico, Helmintex, mais sensível que os métodos coprológicos clássicos para detectar o baixo número de ovos eliminados nas fezes dos pacientes. O método utiliza a interação magnética com microesferas paramagnéticas para o isolamento dos ovos. O mecanismo de interação dos ovos com o campo magnético poderia estar relacionado com a presença de ferro na casca do ovo. O Schistosoma mansoni ingere grande quantidade de sangue e necessita de rota metabólica especializada para eliminação do ferro. O objetivo do trabalho foi investigar a presença de ferro na casca do ovo por análise por espectroscopia por dispersão de energia.Os resultados possibilitaram a identificação do elemento químico ferro presente no ovo, além de pequenas estruturas cristalinas, provavelmente magnetita. A presença de estruturas com propriedades magnéticas suscetíveis de magnetização foram motivo para caracterização magnética dos ovos de Schistosoma com o encontro de comportamento ferromagnético e paramagnético. Também foram analisados ovos de outros helmintos para verificar se diferenças composicionais dos ovos estavam associadas a diferentes grupos taxonômicos e tipos de habitat. Os achados estimulam novas investigações sobre a rota metabólica envolvendo o ferro, desenvolvimento de novas modalidades de tratamento e recursos diagnósticos.
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Ação do Glucantime sobre macrófagos de camundongos / Glucantime action on mice macrophage

Larissa Moreira Siqueira 16 April 2014 (has links)
Os antimoniais pentavalentes, tais como o Glucantime, são geralmente usados como fármacos de primeira escolha para o tratamento das leishmanioses, no entanto seu mecanismo de ação não é completamente esclarecido. Atua contra formas amastigotas intracelulares de Leishmania sp, comprometendo o potencial redox levando danos ao DNA do parasito. Alguns trabalhos sugerem que o Glucantime aumenta a capacidade fagocítica e a produção de TNF-alfa por fagócitos. O objetivo deste estudo foi avaliar a capacidade do Glucantime modular a atividade do macrófago, a principal célula hospedeira da Leishmania. Inicialmente, a toxicidade do Glucantime foi testada sobre macrófagos peritoneais de camundongos BALB/c, tratando as monocamadas in vitro por 48 horas. A viabilidade celular foi avaliada pelo método do MTT. A capacidade do Glucantime (0,1, 1 e 10 mg/ml) modular os macrófagos foi avaliada tratando as monocamadas de macrófagos peritoneais por 24 horas antes da infecção com Leishmania braziliensis. Após 48 horas de incubação com meio de cultura foi avaliado o índice de infecção por contagem. Antes e após a infecção foram analisados a produção de óxido nítrico (NO) pelo método de Griess, espécies reativas de oxigênio (EROS) por fluorimetria usando a sonda H2DCFDA e a produção de citocinas por ELISA. Para avaliar se o Glucantime seria capaz de modular macrófagos in vivo, camundongos suíços foram tratados por 5 dias consecutivos com 8 mg de Glucantime pela via intraperitoneal. Macrófagos peritôneais foram avaliados quanto a sua capacidade de controlar a infecção in vitro com L. braziliensis. Os resultados mostraram que nas concentrações até 10 mg/ml, o Glucantime não alterou a viabilidade dos macrófagos in vitro. O pré-tratamento dos macrófagos com Glucantime nas concentrações de 0.1mg/mL, 1mg/mL e 10mg/mL, foi capaz de reduzir o índice de infecção em 49%, 74% e 85%, respectivamente. Em macrófagos não infectados a produção de NO foi aumentada na concentração de 10mg/ml de Glucantime. O tratamento com 1 e 10 mg/ml de Glucantime foi capaz de aumentar significativamente a produção de EROs (p<0,05 e p<0.01, respectivamente) e a produção IL-12 (p<0,05), mas a IL-10 não foi alterada. Não houve alterações significativas desses parâmetros em relação ao controle após a infecção com L. braziliensis. Os macrófagos oriundos dos animais tratados com Glucantime foram capazes de reduzir o índice de infecção por L. braziliensis (p<0,05). Esses resultados sugerem que o Glucantime é capaz de ativar os macrófagos e esse efeito pode contribuir para o mecanismo de ação desse fármaco. / The pentavalent antimonial drugs, such as Glucantime, are generally used as first choice for the treatment of leishmaniasis, however its mechanism is not fully understood. It has activity against intracellular amastigotes of Leishmania sp, compromising the redox potential and causing damage to the DNA of the parasite. Some studies suggesting that Glucantime enhances phagocytosis and TNF-&#945; production by phagocytes. The aim of this study is to evaluate the modulation of Glucantime on macrophages, the major host cell of Leishmania. Initially, Glucantimes toxicity was tested on peritoneal macrophages from BALB/c mice, by treating the monolayers in vitro for 48 hours. Cell viability was evaluated by MTT method. The capacity of Glucantime (0,1, 1 and 10 mg/ml) of modulate macrophages was evaluated by treating the monolayers of peritoneal macrophages for 24 hours before the infection with Leishmania braziliensis. After 48 hours of incubation with culture medium the infection index was evaluated by counting. Before and after the infection were analyzed the production of nitric oxide (NO) by Griess method, reactive oxygen species (ROS) by fluorimetry using the H2DCFDA dye and cytokines by ELISA. To evaluate if Glucantime could modulate macrophages in vivo, Swiss Webster mice were treated for 5 consecutive days with 8 mg Glucantime by intraperitoneal route. Peritoneal macrophages were evaluated about its capacity of control the in vitro infection with L. braziliensis. Results showed that until the concentration of 10 mg/ml, Glucantime did not alter the macrophages viability in vitro. The pre-treatment of macrophages with Glucantime at 0.1mg/mL, 1mg/mL and 10mg/mL was able to reduce the infection index in 49%, 74% and 85%, respectively. On non-infected macrophages the NO production was increased at 10mg/ml of Glucantime. The treatment with 1 and 10 mg/ml de Glucantime was able to significantly increase the ROS production (p<0,05 and p<0.01, respectively) and IL-12 production (p<0,05), however the IL-10 production was not altered. There were no significant changes of these parameters comparing to control after the L. braziliensis infection. The macrophages from the treated mice were capable of reduce the infection index by L. braziliensis (p<0,05). These results suggest that Glucantime is capable of activate macrophages and this effect could contribute to the mechanism of action of this drug.
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Aspectos sanitários da ovinocultura leiteira: um estudo de caso em Santa Catarina, Brasil / Sanitary aspects of dairy sheep: a case study in Santa Catarina, Brazil

Escopelli, Karla Scola January 2014 (has links)
A criação de ovinos para produção de leite no Brasil tem crescido nos últimos anos. Este trabalho teve como objetivo avaliar a sanidade de ovinos leiteiros. Para tanto, utilizou-se como metodologia o estudo de caso exploratório e selecionou-se como população o maior rebanho ovino com produção leiteira do país, no município de Chapecó, SC. Avaliaram-se aspectos sanitários relacionados à produção leiteira determinando-se a ocorrência de mastites e a composição do leite; determinou-se a prevalência de resposta imune para Toxoplasma gondii e Neospora caninum utilizando RIFI, em ovelhas em idade reprodutiva e cordeiras; avaliou-se o status parasitológico de parasitoses gastrintestinais em fêmeas lactantes e não lactantes pelo teste de Gordon & Whitlock (OPG) e, pela técnica de Robert & O'Sullivan (Coprocultura), identificaram-se os principais parasitos de ocorrência para o rebanho em estudo. Das 24 ovelhas analisadas, 3 (12,5%) apresentaram resposta (3 cruzes) ao California Mastitis Test em um dos tetos, pelo menos uma vez, durante a lactação. Embora nenhum animal tenha apresentado quadro clínico, verificou-se crescimento bacteriano em (22) 12,3% amostras de leite, com predomínio de Staphylococcus coagulase negativa. Verificou-se variabilidade na CCS (2,3x104 a 9,5x106 células.mL-1) entre os animais e entre os meses de lactação. No leite de mistura determinou-se acidez de 25 e 26 ⁰D, estabilidade ao álcool entre 52 a 56⁰GL, CCS de 9,7x105 a 1,7x106 cél.mL-1 e contagem bacteriana de 2x103 a 3x103 ufc.mL-1. Verificou-se resposta imune para T. gondii nas diluições de 1:64 (24,58%), 1:128 (12,29%), 1:256 (6.64%), 1:512 (3,32%) e 1:1024 (2,32%). As ovelhas foram sororreagentes, também, para N. caninum (10,63%) na diluição de 1:50. Determinou-se que a parasitemia foi significativamente (p=0,0018) maior nas fêmeas lactantes e Haemonchus spp. foi o parasito de maior ocorrência, sendo observado em 100% dos animais parasitados. Os resultados observados permitem concluir que as infecções da glândula mamária devem ser melhor estudadas para o estabelecimento, inclusive, de parâmetros de normalidade do leite para espécie ovina. Entretanto, as enfermidades de origem parasitária destacam-se como problema sanitário na produção de ovinos leiteiros. Estudos sobre enfermidades de repercussão na produtividade de ovinos leiteiros ainda são escassos no Brasil e necessitam cada vez mais de atenção, tendo em vista o crescimento desta cadeia produtiva no país. / Sheep raising for milk production in Brazil has grown in recent years. This study aimed to evaluate the dairy sheep sanity. For this purpose, the methodology used was exploratory case study and the population selected was the largest sheep herd in milk production of the country, in the municipality of Chapecó, SC. Sanitary aspects related to milk production were evaluated by determining the occurrence of mastites and milk composition; the imunne response prevalence to Toxoplasma gondii and Neospora caninum was determined with RIFI technique, in sheep reproductive age and female lamb parasitological status of gastrointestinal parasitosis in lactating and non-lactating females was evaluated using Gordon & Whitlock test (OPG) and, using Robert & O'Sullivan technique (Coproculture). And the main parasites of occurence to the herd studied were identified. In the 24 sheep analyzed, 3 of them (12.5%) had response (3 crosses) to the California Mastitis Test in one of the teats at least once during the lactation. Although no animal has shown clinical feature, bacterial growth was detected in 24 milk samples, with predominance of coagulase negative Staphylococci. SCC from each animal was evaluated during the lactation months, which varied from 2.3x104 a 9.5x106 cells.mL-1. Acidity of 25 and 26 ⁰D, alcohol stability between 52 and 56⁰GL, SCC of 9.7x105 to 1.7x106 cél.mL-1 and bacterial counting of 2x103 to 3x103 ufc.mL-1 were determined in the mixture milk. Imunne response to T. gondii in dilutions of 1:64 (24.58%), 1:128 (12.29%), 1:256 (6,64%), 1:512 (3.32%) and 1:1024 (2.32%) was verified. The sheep were positive for N. caninum (10.63%) in dilution 1:50 too. It was determined that the parasitemia was significantly (p=0,0018) higher in lactating females and Haemonchus was the most frequent parasite being observed in 100% of infected animals. The results observed allow to conclude that mammary gland infections should be more studied to establish the normal parameters for milk sheep. However, the diseases caused by parasites stand out as a sanitary problem in the dairy sheep production. Studies about diseases with implications on dairy sheep productivity are still scarce in Brazil and increasingly need more attention, in view of the growth of this productive chain in the country.
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Patogenicidade de Pratylenchus brachyurus e Pratylenchus zeae (nemata, pratylenchidae) a duas variedades de cana-de-açúcar (Saccharum sp.) / not available

Leila Luci Dinardo Miranda 06 August 1990 (has links)
Os danos causados por Pratylenchus brachyurus e P. zeae às variedades de cana-de-açúcar SP70-1143 e SP71-1406 foram avaliados em dois ensaios em vasos de 150 litros. Cada ensaio constou da inoculação de 0, 200, 400 ou 800 nematóides por litro de solo de uma ou outra espécie de Pratylenchus. As populações de nematóides nas raízes e parâmetros de crescimento e produção foram avaliados ao longo do ciclo e por ocasião do corte, aos 17 meses. P. braghyurus se multiplicou nas raízes das duas variedades sem causar prejuízos a nenhuma delas, que foram consideradas tolerantes ao nematóide. Na variedade SP70-1143, P. zeae só se multiplicou nas plantas inoculadas com 200 nematóides por litro de solo, porém não causou reduções nos pesos frescos dos colmos e total da parte aérea, em relação às demais. SP71-1143 foi tida como resistente a P. zeae. Na variedade SP71-1406, as maiores populações de P. zeae foram registradas nas plantas que receberam 400 ou 800 nematóides por litro de solo. Estas plantas também mostraram reduções significativas nos pesos frescos dos colmos e total da parte aérea, em relação as demais. SP71-1406 foi considerada susceptível a P. zeae / Damage to two sugarcane varieties resulting from infestation by Pratylenchus brachyurus and P. zeae were evalueted in two experiments. Each experiment consisted of inoculation with 0, 200, 400 or 800 nematodes/l soil from one or another Pratylenchus species on the varieties SP70-1143 and SP71-1406, the most cultivated in São Paulo State, nowadays. Single buds from both varieties were grown in 150 l pots, containing sterilized sandy soil and were inoculated 30 days after planting. Nematode population in roots and parameters were evalueted along the plant growth cicle and at the harvest, 17 months after planting. P. brachyurus reproduction was observed at the roots of two varieties, but no growth reduction was caused by the parasities. Both varieties were considered tolerant to P. brachyurus. On SP70-1143, P. zeae reproduction ocurred only at initial population of 200 nematodes/l soil. At the harvest, these plants only showed significant decreases in fresh weight of top cane plus leaves and dry weight of roots when compared with the plants without nematodes. SP-1143 was classified as resistant to P. zeae. As far as SP71-1406 is concerned, the higher P. zeae populations were observed in the pots inoculated with 400 or 800 nematodes/l soil. In these cases, significant reduction on fresh weight of shoots and fresh weight of aerial parts observed. SP71-1406 was considered susceptible to P. zeae
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Aspectos sanitários da ovinocultura leiteira: um estudo de caso em Santa Catarina, Brasil / Sanitary aspects of dairy sheep: a case study in Santa Catarina, Brazil

Escopelli, Karla Scola January 2014 (has links)
A criação de ovinos para produção de leite no Brasil tem crescido nos últimos anos. Este trabalho teve como objetivo avaliar a sanidade de ovinos leiteiros. Para tanto, utilizou-se como metodologia o estudo de caso exploratório e selecionou-se como população o maior rebanho ovino com produção leiteira do país, no município de Chapecó, SC. Avaliaram-se aspectos sanitários relacionados à produção leiteira determinando-se a ocorrência de mastites e a composição do leite; determinou-se a prevalência de resposta imune para Toxoplasma gondii e Neospora caninum utilizando RIFI, em ovelhas em idade reprodutiva e cordeiras; avaliou-se o status parasitológico de parasitoses gastrintestinais em fêmeas lactantes e não lactantes pelo teste de Gordon & Whitlock (OPG) e, pela técnica de Robert & O'Sullivan (Coprocultura), identificaram-se os principais parasitos de ocorrência para o rebanho em estudo. Das 24 ovelhas analisadas, 3 (12,5%) apresentaram resposta (3 cruzes) ao California Mastitis Test em um dos tetos, pelo menos uma vez, durante a lactação. Embora nenhum animal tenha apresentado quadro clínico, verificou-se crescimento bacteriano em (22) 12,3% amostras de leite, com predomínio de Staphylococcus coagulase negativa. Verificou-se variabilidade na CCS (2,3x104 a 9,5x106 células.mL-1) entre os animais e entre os meses de lactação. No leite de mistura determinou-se acidez de 25 e 26 ⁰D, estabilidade ao álcool entre 52 a 56⁰GL, CCS de 9,7x105 a 1,7x106 cél.mL-1 e contagem bacteriana de 2x103 a 3x103 ufc.mL-1. Verificou-se resposta imune para T. gondii nas diluições de 1:64 (24,58%), 1:128 (12,29%), 1:256 (6.64%), 1:512 (3,32%) e 1:1024 (2,32%). As ovelhas foram sororreagentes, também, para N. caninum (10,63%) na diluição de 1:50. Determinou-se que a parasitemia foi significativamente (p=0,0018) maior nas fêmeas lactantes e Haemonchus spp. foi o parasito de maior ocorrência, sendo observado em 100% dos animais parasitados. Os resultados observados permitem concluir que as infecções da glândula mamária devem ser melhor estudadas para o estabelecimento, inclusive, de parâmetros de normalidade do leite para espécie ovina. Entretanto, as enfermidades de origem parasitária destacam-se como problema sanitário na produção de ovinos leiteiros. Estudos sobre enfermidades de repercussão na produtividade de ovinos leiteiros ainda são escassos no Brasil e necessitam cada vez mais de atenção, tendo em vista o crescimento desta cadeia produtiva no país. / Sheep raising for milk production in Brazil has grown in recent years. This study aimed to evaluate the dairy sheep sanity. For this purpose, the methodology used was exploratory case study and the population selected was the largest sheep herd in milk production of the country, in the municipality of Chapecó, SC. Sanitary aspects related to milk production were evaluated by determining the occurrence of mastites and milk composition; the imunne response prevalence to Toxoplasma gondii and Neospora caninum was determined with RIFI technique, in sheep reproductive age and female lamb parasitological status of gastrointestinal parasitosis in lactating and non-lactating females was evaluated using Gordon & Whitlock test (OPG) and, using Robert & O'Sullivan technique (Coproculture). And the main parasites of occurence to the herd studied were identified. In the 24 sheep analyzed, 3 of them (12.5%) had response (3 crosses) to the California Mastitis Test in one of the teats at least once during the lactation. Although no animal has shown clinical feature, bacterial growth was detected in 24 milk samples, with predominance of coagulase negative Staphylococci. SCC from each animal was evaluated during the lactation months, which varied from 2.3x104 a 9.5x106 cells.mL-1. Acidity of 25 and 26 ⁰D, alcohol stability between 52 and 56⁰GL, SCC of 9.7x105 to 1.7x106 cél.mL-1 and bacterial counting of 2x103 to 3x103 ufc.mL-1 were determined in the mixture milk. Imunne response to T. gondii in dilutions of 1:64 (24.58%), 1:128 (12.29%), 1:256 (6,64%), 1:512 (3.32%) and 1:1024 (2.32%) was verified. The sheep were positive for N. caninum (10.63%) in dilution 1:50 too. It was determined that the parasitemia was significantly (p=0,0018) higher in lactating females and Haemonchus was the most frequent parasite being observed in 100% of infected animals. The results observed allow to conclude that mammary gland infections should be more studied to establish the normal parameters for milk sheep. However, the diseases caused by parasites stand out as a sanitary problem in the dairy sheep production. Studies about diseases with implications on dairy sheep productivity are still scarce in Brazil and increasingly need more attention, in view of the growth of this productive chain in the country.

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