Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Passiflora alata Curtis, comumente conhecida como maracujá-doce, é uma das espécies do gênero Passiflora cultivadas comercialmente, sendo consumida in natura devido ao seu gosto adocicado. Ela também é utilizada em todo o mundo como ornamental e na medicina popular. O objetivo deste trabalho foi o estabelecimento de diferentes estratégias para a cultura in vitro de P. alata e a análise da produção de substâncias antioxidantes nos materiais obtidos in vitro, em comparação com as plantas in vivo. Diferentes tratamentos visando à quebra da dormência das sementes foram avaliados para a germinação in vitro ou in vivo, além da incubação das sementes sob tipos distintos de luz. Para o estabelecimento das culturas primárias, apices caulinares e segmentos nodais das plântulas derivadas da germinação in vitro foram cultivados em meio MSM . A taxa de alongamento dos brotos e o número de nós por brotos das culturas primárias foram aumentados pela adição de água de coco ao meio. Plantas derivadas dessas culturas foram utilizadas como fontes de explantes nodais, internodais e foliares. O potencial morfogênico de sementes sem tegumento foi também avaliado. Calos friáveis foram induzidos a partir de segmentos nodais e foliares na presença de PIC, e aqueles obtidos a partir de folhas em meio suplementado com PIC a 28,9 μM foram selecionados para o estabelecimento de culturas de células em suspensão. Após o desenvolvimento de diferentes estratégias in vitro para P. alata, folhas de plantas in vivo foram utilizadas para a avaliação de parâmetros que afetam a extração de substâncias antioxidante. O potencial antioxidante foi determinado pelo ensaio DPPH e o conteúdo de fenóis totais foi determinado utilizando o método Folin-Ciocalteau. Após o desenvolvimento do protocolo de extração, a atividade antioxidante dos diferentes materiais in vitro foi também avaliada. A eficiência antirradicalar variou entre os sistemas de cultura estudados, sendo diretamente proporcional ao conteúdo de fenóis totais dos extratos. Esses resultados indicam que as estratégias para cultura in vitro de P. alata desenvolvidas neste trabalho representam alternativas para a multiplicação de plantas e produção de substâncias fenólicas com ação antioxidante. / Passiflora alata Curtis, commonly known as sweet passion fruit, is one of the commercially cultivated species of the genus Passiflora, being consumed in natura due to its sweet taste. It is also used worldwide as an ornamental and in folk medicine. The goal of this work was the establishment of different strategies for in vitro culture of P.alata and the analysis of the production of antioxidant substances by in vitro materials, in comparison with in vivo-grown plants. Different treatments aiming at seed dormancy breakage were evaluated for in vitro or in vivo germination, in addition to the incubation of seeds under distinct types of light. For the establishment of primary cultures, shoot tips and nodal segments excised from plantlets derived from in vitro germination were cultured on MSM . Shoot elongation rate and number of nodes per shoot of the primary cultures were improved by adding coconut water to the medium. Plants derived from these cultures were used as sources of nodal, internodal and leaf explants. The morphogenic potential of decoated seeds was also evaluated. Friable calluses were induced from nodal and leaf segments in the presence of PIC, and those obtained from leaves on medium supplemented with 28.9 μM PIC were selected for the establishment of cell suspension cultures. After the development of different in vitro strategies for P. alata, leaves of in vivo plants were used for the evaluation of the distinct parameters affecting the extraction of antioxidant substances. The antioxidant potential was determined by the DPPH assay and total phenolic content of the extract was determined using the Folin- Ciocalteau method. Following the development of the extraction protocol, the antioxidant activity of the different in vitro materials was also evaluated. The antiradicalar efficiency varied among the culture systems, being directly proportional to the total phenolic content of the extracts. These results indicate that the strategies of in vitro culture of P. alata developed in this study represent an alternative to plant multiplication and production of phenolic substances with antioxidant action.

Orientador: Ricardo de Lima Zollner / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T11:47:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Figueiredo_Daniellade_M.pdf: 3504963 bytes, checksum: 2a5ced4957aa0233b6b6f5417ad31dc3 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A procura por novos fármacos a partir de plantas medicinais tem motivado a busca alternativa de substâncias com potencial antiinflamatório que possam auxiliar no tratamento das doenças inflamatórias, como no caso do diabetes mellitus tipo1. Como ferramenta para estudar essas substâncias que modulam a inflamação, é comum o uso de animais com propensão a desenvolver a doença, como os camundongos NOD (diabéticos não obesos). Dentre os constituintes das folhas de Passiflora alata Curtis, conhecido popularmente por maracujá doce, os flavonóides são compostos que podem atuar como antioxidantes e antiproliferativos, podendo modular a expressão de substâncias reguladoras do ciclo celular promovendo, desta forma, a sua interrupção em células em proliferação. Como resultados, nós obtivemos no grupo tratado com extrato aquoso das folhas de P. alata, redução na incidência do diabetes, aumento da expressão de insulina e diminuição do infiltrado inflamatório, estresse oxidativo e células CDK6+ em ilhotas pancreáticas. Como neste modelo animal a expressão de CDK6 está presente no infiltrado inflamatório, a sua diminuição no grupo tratado sugere que componentes nas folhas de P. alata possam atuar na inibição do ciclo celular de células inflamatórias ativadas promovendo efeito antiinflamatório e, consequentemente, diminuição na incidência do diabetes tipo 1. Visto os efeitos antiinflamatórios e consequente preservação de células beta, o estudo visa investir no desenvolvimento de novas drogas com potencial de interferir na evolução da doença, atuando desta forma como suporte no tratamento do diabetes autoimune / Abstract: The search for new medicinal drugs from plants has motivated the search for alternative potential anti-inflammatory substances that may assist in the treatment of inflammatory diseases, such as type 1 diabetes mellitus. As a tool to study these substances that modulate inflammation, is common to use animals with a propensity to develop the disease, such as NOD mice (non-obese diabetic). Among the constituents of Passiflora alata Curtis leaves, known popularly as sweet passion fruit, flavonoids are compounds that can act as antioxidants and anti-proliferative, which can modulate the expression of cell cycle regulatory substances promoting in this way, the cell cycle arrest in proliferating cells. As a result, we have obtained in the treated group with P. alata leaves aqueous extract, reduction in the incidence of diabetes, increased expression of insulin and decreased inflammatory infiltrate, oxidative stress and CDK6+ cells in pancreatic islets. As in this animal model the marking of CDK6 is present in the inflammatory infiltrate, the decreased expression of this protein in the treated group suggests that components in the leaves of P. alata may act on cell cycle inhibition of activated inflammatory cells promoting anti-inflammatory effect and reduction in the incidence of type 1 diabetes. Since the anti-inflammatory effects and consequent preservation of beta cells, the study intend to investing in the development of new drugs with the potential to interfere with the course of the disease, acting as a support in the treatment of autoimmune diabetes / Mestrado / Clinica Medica / Mestra em Clínica Médica

O maracujá, nome popular atribuído ao fruto das diversas espécies do gênero Passiflora, da família Passifloraceae, é amplamente comercializado e consumido no mundo, sendo o Brasil um dos maiores produtores do fruto. Alguns estudos apontam possível toxicidade relacionada às espécies de Passiflora, principalmente P. incarnata. No entanto, há pouco conhecimento acerca das espécies P. edulis e P. alata, sobretudo em relação à polpa e sementes. Os extratos da polpa e das sementes dos frutos dessas duas espécies de \"maracujá\", Passiflora alata e Passiflora edulis, foram estudados com o objetivo de identificar alcaloides harmânicos, pelo preparo das amostras por extração por sorção em barra magnética recoberta com polidimetilsiloxano (SBSE-PDMS) e SBSE recoberta com polietilenoglicol silicone (SBSE-EG Silicone) e análise por cromatografia líquida de alta eficiência com detector por fluorescência (CLAE-Flu) e cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada à espectrometria de massas sequencial (CLUE-EM/EM). A análise dos alcaloides harmana e harmina nos extratos da polpa de P. alata foi feita por meio do método de adição de padrão e mostrou menor quantidade destes alcaloides, em comparação com os resultados da análise dos extratos da polpa dos frutos de P. edulis, no trabalho de Pereira e colaboradores. As análises CLUE-EM e CLUE-EM/EM possibilitaram a identificação dos alcaloides nos extratos: nas sementes de P. alata, os alcaloides harmana, harmina, harmol, harmalol e harmalina foram identificados, enquanto que na polpa, harmana e harmina tiveram a confirmação da sua presença. Nos extratos da polpa dos frutos de P. edulis observou-se os alcaloides harmana, harmina e harmalina. E nas sementes de P. edulis harmina foi encontrada, porém há indícios da presença de harmana. A literatura sobre as barras de SBSE-EG Silicone Twister&®; não relata nenhum estudo relacionado ao seu uso para extração e concentração de alcaloides harmânicos nos extratos de P. alata e P. edulis. Por isso foi proposto inicialmente a aplicação do planejamento fatorial fracionário para otimização do método de extração, utilizando os padrões comerciais dos alcaloides harmana e harmina. O planejamento experimental revelou as variáveis principais e seus níveis de importância, e a partir destes resultados foi realizado o estudo cinético dos tempos de extração e de dessorção das barras de SBSE-EG Silicone. Porém, os resultados mostraram que as barras de SBSE-EG Silicone não são adequadas para a extração dos alcaloides harmana e harmina, uma vez que a recuperação obtida foi baixa, na ordem de 30%. / \"Maracujá\" is the popular name given to the fruit of several species of Passiflora genus, from Passifloraceae family, it is widely commercialized and consumed around the world, and Brazil is one of the largest producers of this fruit. Some studies pointed out the possible toxicity related to Passiflora species, mainly P. incarnata. Although, there is a lack of knowledge about the P. edulis and P. alata species, especially with regards to the pulp and seeds. The extracts of pulp and seeds from the \"maracujá\" species Passiflora alata and Passiflora edulis, were studied in order to identify harman alkaloids. The samples were prepared by extraction with sorptive stir bar coated with polydimethylsiloxane (SBSE-PDMS) and SBSE coated with polyethylene glycol silicon (SBSE-EG Silicone). The samples were analyzed by high performance liquid chromatography with fluorescence detector (HPLC-Flu), and ultra-high pressure liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (UHPLC-MS/MS). Harmane and harmine alkaloids in P. alata pulp extracts were analyzed using the standard addition method and the results showed a lower amount of these alkaloids, compared with the test results for the extracts from the P. edulis pulp in the work of Pereira et al. UHPLC-MS and UHPLC-MS/MS analysis enabled to identify the alkaloids amount present in the extracts. In the P. alata seeds extract the following alkaloids were identified harmane, harmine, harmol, harmalol and harmaline, while in the pulp extract, harmane and harmine were confirmed. In the extracts of P. edulis pulp the alkaloids identified were harmane, harmine and harmaline. And in the P. edulis seeds extract the harmine alkaloid was found, some indications of the presence of harmana were observed. The literature about SBSE-EG Silicone Twister® bars reports no study related to their use for extraction and concentration of harman alkaloids in P. alata and P. edulis. Thus, it was initially proposed the application of fractional factorial design to optimize the extraction method using commercial standards of harmane and harmine alkaloids. The experimental design revealed the main variables and their importance levels, and from these results kinetic studies were performed for the extraction and desorption times of SBSE-EG Silicone bars. However, the results showed SBSE-EG Silicone bars are not suitable for the extraction of harmane and harmine alkaloids, since the recovery obtained was low, on the order of 30%.

Um dos desafios atuais da pesquisa em frutíferas tropicais é incorporar abordagens baseadas em marcadores moleculares nos programas convencionais de melhoramento. O maracujá-doce (Passiflora alata) é uma espécie diploide, de fecundação cruzada e pouco explorada. Recentemente, nosso grupo construiu um mapa de ligação de P. alata composto de diferentes tipos de marcadores moleculares. Além disso, dispõe-se de um conjunto de transcritos de Passiflora edulis, obtidos a partir de duas bibliotecas de expressão: forward e reverse onde foram isolados transcritos diferencialmente expressos na planta inoculada com Xanthomonas axonopodis (Xap) (672) e na planta controle, não inoculada (310), respectivamente. Assim, neste estudo, este conjunto de transcritos foi explorado visando ao desenvolvimento de marcadores SSR e SNP com o intuito de enriquecer, posteriormente, o mapa de ligação de P. alata com marcadores funcionais putativos. Para o desenvolvimento dos marcadores SSRs, as 672 sequências da biblioteca forward foram investigadas e em 91 delas foram encontrados 115 SSRs. Como esperado, a classe de repetições trinucleotídicas foi a mais abundante, sendo o motivo (AG)n o mais comum entre as repetições dinucleotídicas. Desenhou-se primers para amplificar 42 desses SSRs. Dois acessos de P. edulis e seis indivíduos da população de mapeamento de P. alata foram usados nos testes de transferibilidade e avaliação do polimorfismo. Trinta e quatro pares de primers apresentaram bom padrão de amplificação, porém apenas 10 deles revelaram polimorfismo em P. alata. Para o desenvolvimento dos marcadores SNPs, 118 sequências selecionadas das bibliotecas de expressão forward e reverse foram usadas para o desenho de primers; 37 delas foram usadas para avaliar o polimorfismo no mesmo set de indivíduos de P. alata. Foram encontrados 34 locos contendo SNPs bialélicos em 16 fragmentos gênicos, cujas sequencias variaram em tamanho de 332 a 872 pb. Considerando todos os fragmentos gênicos (16), foi analisado um total de 10.003 pb; a frequência de SNPs foi estimada como sendo 1 a cada 294 pb. Observou-se a mesma ocorrência de SNPs (50%, 17/34) em regiões codantes e não-codantes. Uma função putativa pôde ser atribuída a todos os fragmentos gênicos de P. alata, sendo que 82% mostraram homologia com as mesmas proteínas das sequências de origem, isoladas de P. edulis. No geral, os locos marcadores apresentaram baixo nível de polimorfismo molecular. Este é o primeiro trabalho sobre o desenvolvimento de locos marcadores funcionais putativos em Passiflora usando transcritos expressos em resposta à Xap. / One of the current challenges of tropical fruit research is to incorporate molecular marker-based approaches into conventional breeding programs. The sweet passion fruit (Passiflora alata) is a diploid, outcrossing and underexploited species. Recently, our group has constructed a P. alata linkage map consisted of different types of molecular markers. Moreover, we have a set of transcripts of Passiflora edulis obtained from two expression libraries: the forward and the reverse where differentially expressed transcripts were isolated from a plant inoculated with Xanthomonas axonopodis (Xap) (672), and from the control plant, uninoculated (310), respectively. Thus, in this study, this set of transcripts were exploited aiming at the development of SNP and SSR markers for future enrichment of the P. alata linkage map with putative functional markers. For the development of SSR markers, the 672 sequences from the forward library were investigated and 91 of them were found to have 115 SSRs. As expected, the trinucleotide class of repeats was the most abundant, and the (AG)n motif was the most common among the dinucleotide repeats. Primers were designed to amplify 42 of these SSRs. Transferability tests and polymorphism investigation were carried out using two accessions of P. edulis and six individuals of the mapping population of P. alata. Thirty-four primer pairs showed a good amplification pattern but only 10 loci revealed polymorphism in P. alata. For the development of SNP markers, 118 sequences selected from forward and reverse expression libraries were used for designing primers; 37 were used to assess the polymorphism in the same set of individuals of P. alata. Thirty-four biallelic SNPs were found in 16 gene fragment sequences that ranged in size from 332 to 872 bp. Considering all gene fragments, a total of 10,003 bp was obtained; the frequency of SNPs was estimated to be 1 every 294 bp. The same prevalence of SNPs (50%, 17/34) was observed within coding and non-coding regions. A putative function was assigned to all gene fragments of P. alata; 82% of them have shown homology to the original protein sequences isolated from P. edulis. Overall, the marker loci showed a low level of molecular polymorphism. This is the first report on the development of putative functional marker loci in Pasiflora using transcripts induced in response to Xap.

O maracujá, nome popular atribuído ao fruto das diversas espécies do gênero Passiflora, da família Passifloraceae, é amplamente comercializado e consumido no mundo, sendo o Brasil um dos maiores produtores do fruto. Alguns estudos apontam possível toxicidade relacionada às espécies de Passiflora, principalmente P. incarnata. No entanto, há pouco conhecimento acerca das espécies P. edulis e P. alata, sobretudo em relação à polpa e sementes. Os extratos da polpa e das sementes dos frutos dessas duas espécies de \"maracujá\", Passiflora alata e Passiflora edulis, foram estudados com o objetivo de identificar alcaloides harmânicos, pelo preparo das amostras por extração por sorção em barra magnética recoberta com polidimetilsiloxano (SBSE-PDMS) e SBSE recoberta com polietilenoglicol silicone (SBSE-EG Silicone) e análise por cromatografia líquida de alta eficiência com detector por fluorescência (CLAE-Flu) e cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada à espectrometria de massas sequencial (CLUE-EM/EM). A análise dos alcaloides harmana e harmina nos extratos da polpa de P. alata foi feita por meio do método de adição de padrão e mostrou menor quantidade destes alcaloides, em comparação com os resultados da análise dos extratos da polpa dos frutos de P. edulis, no trabalho de Pereira e colaboradores. As análises CLUE-EM e CLUE-EM/EM possibilitaram a identificação dos alcaloides nos extratos: nas sementes de P. alata, os alcaloides harmana, harmina, harmol, harmalol e harmalina foram identificados, enquanto que na polpa, harmana e harmina tiveram a confirmação da sua presença. Nos extratos da polpa dos frutos de P. edulis observou-se os alcaloides harmana, harmina e harmalina. E nas sementes de P. edulis harmina foi encontrada, porém há indícios da presença de harmana. A literatura sobre as barras de SBSE-EG Silicone Twister&®; não relata nenhum estudo relacionado ao seu uso para extração e concentração de alcaloides harmânicos nos extratos de P. alata e P. edulis. Por isso foi proposto inicialmente a aplicação do planejamento fatorial fracionário para otimização do método de extração, utilizando os padrões comerciais dos alcaloides harmana e harmina. O planejamento experimental revelou as variáveis principais e seus níveis de importância, e a partir destes resultados foi realizado o estudo cinético dos tempos de extração e de dessorção das barras de SBSE-EG Silicone. Porém, os resultados mostraram que as barras de SBSE-EG Silicone não são adequadas para a extração dos alcaloides harmana e harmina, uma vez que a recuperação obtida foi baixa, na ordem de 30%. / \"Maracujá\" is the popular name given to the fruit of several species of Passiflora genus, from Passifloraceae family, it is widely commercialized and consumed around the world, and Brazil is one of the largest producers of this fruit. Some studies pointed out the possible toxicity related to Passiflora species, mainly P. incarnata. Although, there is a lack of knowledge about the P. edulis and P. alata species, especially with regards to the pulp and seeds. The extracts of pulp and seeds from the \"maracujá\" species Passiflora alata and Passiflora edulis, were studied in order to identify harman alkaloids. The samples were prepared by extraction with sorptive stir bar coated with polydimethylsiloxane (SBSE-PDMS) and SBSE coated with polyethylene glycol silicon (SBSE-EG Silicone). The samples were analyzed by high performance liquid chromatography with fluorescence detector (HPLC-Flu), and ultra-high pressure liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (UHPLC-MS/MS). Harmane and harmine alkaloids in P. alata pulp extracts were analyzed using the standard addition method and the results showed a lower amount of these alkaloids, compared with the test results for the extracts from the P. edulis pulp in the work of Pereira et al. UHPLC-MS and UHPLC-MS/MS analysis enabled to identify the alkaloids amount present in the extracts. In the P. alata seeds extract the following alkaloids were identified harmane, harmine, harmol, harmalol and harmaline, while in the pulp extract, harmane and harmine were confirmed. In the extracts of P. edulis pulp the alkaloids identified were harmane, harmine and harmaline. And in the P. edulis seeds extract the harmine alkaloid was found, some indications of the presence of harmana were observed. The literature about SBSE-EG Silicone Twister® bars reports no study related to their use for extraction and concentration of harman alkaloids in P. alata and P. edulis. Thus, it was initially proposed the application of fractional factorial design to optimize the extraction method using commercial standards of harmane and harmine alkaloids. The experimental design revealed the main variables and their importance levels, and from these results kinetic studies were performed for the extraction and desorption times of SBSE-EG Silicone bars. However, the results showed SBSE-EG Silicone bars are not suitable for the extraction of harmane and harmine alkaloids, since the recovery obtained was low, on the order of 30%.

Um dos desafios atuais da pesquisa em frutíferas tropicais é incorporar abordagens baseadas em marcadores moleculares nos programas convencionais de melhoramento. O maracujá-doce (Passiflora alata) é uma espécie diploide, de fecundação cruzada e pouco explorada. Recentemente, nosso grupo construiu um mapa de ligação de P. alata composto de diferentes tipos de marcadores moleculares. Além disso, dispõe-se de um conjunto de transcritos de Passiflora edulis, obtidos a partir de duas bibliotecas de expressão: forward e reverse onde foram isolados transcritos diferencialmente expressos na planta inoculada com Xanthomonas axonopodis (Xap) (672) e na planta controle, não inoculada (310), respectivamente. Assim, neste estudo, este conjunto de transcritos foi explorado visando ao desenvolvimento de marcadores SSR e SNP com o intuito de enriquecer, posteriormente, o mapa de ligação de P. alata com marcadores funcionais putativos. Para o desenvolvimento dos marcadores SSRs, as 672 sequências da biblioteca forward foram investigadas e em 91 delas foram encontrados 115 SSRs. Como esperado, a classe de repetições trinucleotídicas foi a mais abundante, sendo o motivo (AG)n o mais comum entre as repetições dinucleotídicas. Desenhou-se primers para amplificar 42 desses SSRs. Dois acessos de P. edulis e seis indivíduos da população de mapeamento de P. alata foram usados nos testes de transferibilidade e avaliação do polimorfismo. Trinta e quatro pares de primers apresentaram bom padrão de amplificação, porém apenas 10 deles revelaram polimorfismo em P. alata. Para o desenvolvimento dos marcadores SNPs, 118 sequências selecionadas das bibliotecas de expressão forward e reverse foram usadas para o desenho de primers; 37 delas foram usadas para avaliar o polimorfismo no mesmo set de indivíduos de P. alata. Foram encontrados 34 locos contendo SNPs bialélicos em 16 fragmentos gênicos, cujas sequencias variaram em tamanho de 332 a 872 pb. Considerando todos os fragmentos gênicos (16), foi analisado um total de 10.003 pb; a frequência de SNPs foi estimada como sendo 1 a cada 294 pb. Observou-se a mesma ocorrência de SNPs (50%, 17/34) em regiões codantes e não-codantes. Uma função putativa pôde ser atribuída a todos os fragmentos gênicos de P. alata, sendo que 82% mostraram homologia com as mesmas proteínas das sequências de origem, isoladas de P. edulis. No geral, os locos marcadores apresentaram baixo nível de polimorfismo molecular. Este é o primeiro trabalho sobre o desenvolvimento de locos marcadores funcionais putativos em Passiflora usando transcritos expressos em resposta à Xap. / One of the current challenges of tropical fruit research is to incorporate molecular marker-based approaches into conventional breeding programs. The sweet passion fruit (Passiflora alata) is a diploid, outcrossing and underexploited species. Recently, our group has constructed a P. alata linkage map consisted of different types of molecular markers. Moreover, we have a set of transcripts of Passiflora edulis obtained from two expression libraries: the forward and the reverse where differentially expressed transcripts were isolated from a plant inoculated with Xanthomonas axonopodis (Xap) (672), and from the control plant, uninoculated (310), respectively. Thus, in this study, this set of transcripts were exploited aiming at the development of SNP and SSR markers for future enrichment of the P. alata linkage map with putative functional markers. For the development of SSR markers, the 672 sequences from the forward library were investigated and 91 of them were found to have 115 SSRs. As expected, the trinucleotide class of repeats was the most abundant, and the (AG)n motif was the most common among the dinucleotide repeats. Primers were designed to amplify 42 of these SSRs. Transferability tests and polymorphism investigation were carried out using two accessions of P. edulis and six individuals of the mapping population of P. alata. Thirty-four primer pairs showed a good amplification pattern but only 10 loci revealed polymorphism in P. alata. For the development of SNP markers, 118 sequences selected from forward and reverse expression libraries were used for designing primers; 37 were used to assess the polymorphism in the same set of individuals of P. alata. Thirty-four biallelic SNPs were found in 16 gene fragment sequences that ranged in size from 332 to 872 bp. Considering all gene fragments, a total of 10,003 bp was obtained; the frequency of SNPs was estimated to be 1 every 294 bp. The same prevalence of SNPs (50%, 17/34) was observed within coding and non-coding regions. A putative function was assigned to all gene fragments of P. alata; 82% of them have shown homology to the original protein sequences isolated from P. edulis. Overall, the marker loci showed a low level of molecular polymorphism. This is the first report on the development of putative functional marker loci in Pasiflora using transcripts induced in response to Xap.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-09-20T12:27:34Z No. of bitstreams: 1 suzanameiraribeiro.pdf: 1332777 bytes, checksum: b4c35efe19a33f78ca2cec41c685e844 (MD5) / Approved for entry into archive by Diamantino Mayra (mayra.diamantino@ufjf.edu.br) on 2016-09-26T20:24:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 suzanameiraribeiro.pdf: 1332777 bytes, checksum: b4c35efe19a33f78ca2cec41c685e844 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-26T20:24:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 suzanameiraribeiro.pdf: 1332777 bytes, checksum: b4c35efe19a33f78ca2cec41c685e844 (MD5) Previous issue date: 2010-06-12 / Doenças causadas por patógenos, incluindo bactérias e fungos podem gerar muitos problemas à saúde humana e à agricultura. Em cultivares economicamente importantes, tais patógenos podem contribuir para perdas significativas no rendimento da produção agrícola. Um fator agravante para esses dois cenários é o uso intensivo de compostos convencionais para combater esses patógenos, levando à seleção de microrganismos extremamente resistentes. Além disso, tais compostos podem trazer severas conseqüências ao meio ambiente bem como à saúde humana e animal. Desta forma, a busca por novos compostos capazes de controlar efetivamente bactérias e fungos patogênicos resistentes, têm sido prioritária. Por estas razões, este trabalho reporta o isolamento de uma nova proteína heterodimérica (Pa-AFP1) de sementes de Passiflora alata com propriedades antifúngicas. Pa-AFP1 foi purificada utilizando precipitação com sulfato de amônio 70-100%, subseqüente cromatografia de troca aniônica em Q-Sepharose e cromatografia de HPLC fase reversa em coluna C4. Análise da massa molecular por meio de gel Tricina-SDS-PAGE revelou uma massa molecular de aproximadamente 4.500 Da para a cadeia menor e cerca de 7.000 Da para cadeia maior totalizando um heterodímero com cerca de 11.500 Da. A massa da forma oligomérica também foi obtida por espectrometria de massa (11569. 63 Da). Análise da seqüência N-terminal mostrou alta identidade entre Pa-AFP1 e albuminas 2S, adicionando assim uma nova proteína à pequena lista de albuminas 2S com atividade antimicrobiana. Além disso, Pa-AFP1 foi capaz de inibir eficientemente o fungo filamentoso Colletotrichum gloeosporiodes, mas foi incapaz de inibir bactérias e fungos leveduriformes. Em suma, Pa-AFP1 poderá futuramente contribuir para o desenvolvimento de produtos biotecnológicos contra fungos fitopatogênicos. / Diseases caused by pathogens, including bacteria and fungi can generate many problems to human health and agriculture. In important economically cultivars, such pathogens may contribute to significant losses in yield of agricultural production. The aggravating factor for these two scenarios is the intensive use of conventional compounds to combat these pathogens, leading to selection of highly resistant microorganisms. Furthermore, these compounds can bring severe consequences to the environment, human and animal health. Thus the search for new compounds capable of effectively controlling bacteria and fungi resistant has been a priority. In this report a heterodimeric antifungal protein named Pa-AFP1, showing higher identity with the 2S albumin family, was purified by using 70-100% ammonium sulfate saturation and further purification steps such as anionic exchange Q-Sepharose chromatography associated with HPLC reversed-phase C4 chromatography. Analysis by Tricine-SDS-PAGE revealed two peptide molecular masses of approximately 4,500 Da and 7,000 Da, in the presence of β-mercapthoetanol, while by removing the reducing agent, a single protein with molecular mass of about 11,500 Da was obtained. Moreover, dimeric mass was confirmed by MALDI-TOF analyses (11,569.76 Da). The antifungal protein, named Pa-AFP1, efficiently inhibited the growth of filamentous fungi Colletotrichum gloeosporiodes, and was added to a short list of 2S albumins with antimicrobial properties. Otherwise, this same peptide showed no activity toward bacteria and yeasts. In summary, this compound could be used in the future to develop biotechnological products for the control of phytopathogenic fungi.

Made available in DSpace on 2016-04-28T14:58:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2004 - Cristiane Magela Floriano.pdf: 765031 bytes, checksum: a9dc1e79d63d53940ee5a888798748c5 (MD5) Previous issue date: 2004-02-20 / Brazil has been highlighted as a major producer of fruits, especially tropical and subtropical. The passion fruit belongs to the family PASSIFLORACEAE and order PASSIFLORALES. The gender PASSIFLORAS is composed of at least 400 species, all originated from Tropical America and belongs to the sub-gender GRANADILLA, Quadrangles serie. The PASSIFLORA ALATA CURTIS is a native species and fairly widespread occurrence in Brazil where it is also commonly known by passion sweetfruit among other names. In Brazil, the species is found from the State Bahia all the way to the State of Rio Grande do Sul, showing good adaptation to the conditions EDAFOCLIM?TICAS. Considering the market potential, special attention should be given in post-harvest of passion sweet-fruit. This task aims to evaluate the behavior post-harvest of the passion sweet-fruit (PASSIFLORA ALATA CURTIS) submitted to the application of different doses of radiation gamma aimed at increasing the conservation period, with maintenance of quality and health. This work was developed in post-harvest in the laboratory of the Department of FITOTECCNIA - Institute of Agriculture UFRRJ with fruits collected at the Site of Passion sweet-fruit, in the municipality of Paty do Alferes. After being selected, they were transported to the Office of Research and Development to be irradiated. The fruits received the following treatments: Irradiation with source of C?sio 137 (137Cs) at doses of 0.1, 0.2, 0.5 and 1.0 kGy. After treatment, all fruits were stored at a temperature of 12 C and 90% UR. Assessments were made every 4 days through determinations of appearance, loss of fresh weight, firmness equatorial and apical, soluble solids, pH, total titratable acidity, ascorbic acid and longevity of the fruits. All fruits, regardless of the dose of gamma radiation that were submitted showed changes in appearance during the period of storage and tended to loss both firmness as well firmness apical and equatorial. There was a small variation in levels of soluble solids, and the process of irradiation led the fruits of sweet passion fruit to no traditional behavior, not only showing a trend of accumulation or reduction of soluble solids total. It follows that the lower doses favored to increase the conservation period with maintaining the health and quality of the fruits of fresh passion fruit during the 28 days of storage fruits. / O Brasil tem se destacado como grande produtor de frutas, especialmente as tropicais e subtropicais. O maracujazeiro pertence ? fam?lia Passifloraceae e ? ordem Passiflorales. O g?nero Passifloras ? composto de pelo menos 400 esp?cies, todas elas originadas da Am?rica Tropical e pertence ao sub-g?nero Granadilla, s?rie Quadrangulares. A Passiflora alata Curtis ? uma esp?cie ind?gena e de ocorr?ncia bastante generalizada no Brasil onde ? tamb?m conhecida vulgarmente por maracuj?-doce entre outros nomes. No Brasil, a esp?cie ? encontrada da Bahia at? o Rio Grande do Sul, apresentando boa adapta??o ?s condi??es edafoclim?ticas. Considerando o potencial de mercado, uma especial aten??o deve ser dada na p?s-colheita de maracuj?-doce. Este trabalho tem como objetivo avaliar o comportamento p?s-colheita de frutos do maracujazeiro-doce (Passiflora alata Curtis) submetidos ? aplica??o de diferentes doses de radia??o gama visando aumento do per?odo de conserva??o com manuten??o de qualidade e sanidade. O presente trabalho foi desenvolvido no Laborat?rio de P?s-Colheita do Departamento de Fitotecnia Instituto de Agronomia da UFRRJ com frutos obtidos no S?tio do Maracuj?-doce, no munic?pio de Paty do Alferes. Ap?s serem selecionados, os mesmos foram transportados at? o Instituto de Pesquisa e Desenvolvimento para serem irradiados. Os frutos receberam os seguintes tratamentos: Irradia??o com fonte de C?sio 137 (137Cs) nas doses de 0,1; 0,2; 0,5 e 1,0 kGy. Ap?s o tratamento, todos os frutos foram armazenados em temperatura de 12?C e 90% de UR. Foram feitas avalia??es de 4 em 4 dias atrav?s de determina??es de apar?ncia, perda de massa fresca, firmeza apical e equatorial, s?lidos sol?veis totais, pH, acidez total titul?vel, ?cido asc?rbico e longevidade dos frutos. Todos os frutos, independente da dose de radia??o gama a que foram submetidos apresentaram altera??es na apar?ncia no decorrer do per?odo de armazenamento e tiveram tend?ncia a perda de firmeza tanto firmeza apical quanto firmeza equatorial. Houve uma pequena varia??o no teor de s?lidos sol?veis totais, sendo que o processo de irradia??o levou os frutos de maracuj?-doce a um comportamento n?o tradicional, n?o apresentando a uma tend?ncia ?nica de ac?mulo ou de redu??o de s?lidos sol?veis totais. Conclui-se que as doses mais baixas favoreceram ao aumento do per?odo de conserva??o com manuten??o da qualidade e sanidade dos frutos do maracujazeiro doce durante o per?odo de 28 dias de armazenamento dos frutos.

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Entretanto, para um melhor entendimento, são necessários mais estudos em locais diferentes daqueles de cultivo comercial. As condições edafoclimáticas do Sul do Rio Grande do Sul, apresentam algumas especificidades edafoclimáticas em relação às regiões tropicais de cultivo tradicional. Para que o produtor possa diversificar a sua produção com o maracujá, são necessários estudos que possam adequar os genótipos já existentes no mercado para um novo local. Portanto, objetivou-se avaliar aspectos produtivos, a qualidade físico-química e os compostos bioativos do suco, da farinha da casca e das folhas dos genótipos de maracujazeiros comerciais cultivados em Pelotas, RS. A tese compreende três artigos e foram desenvolvidos na UFPel/FAEM, entre os anos de 2013 e 2015. O Artigo 1 foi intitulado de produção e qualidade de frutos de maracujazeiros em condições de clima temperado. Foram avaliados os genótipos: Passiflora edulis ‘Catarina’; Passiflora edulis ‘BRS Sol do Cerrado’ e, Passiflora edulis ‘BRS Rubi do Cerrado’. Todos os genótipos avaliados demonstram potencial para produção na região de Pelotas, RS. A qualidade físico-química dos frutos dos genótipos estão dentro dos parâmetros aceitáveis. O Artigo 2 foi intitulado de compostos bioativos das folhas, casca e frutos de genótipos de maracujazeiros. Foram avaliados os genótipos: ‘Catarina Roxo’ (Epagri); ‘Catarina’ (Epagri); ‘Urussanga’ (Epagri); ‘BRS Gigante Amarelo’; ‘BRS Rubi do Cerrado’; ‘BRS Sol do Cerrado’. Para as avaliações das folhas, o genótipo ‘BRS Gigante Amarelo’ não foi avaliado. Houve diferença entre os genótipos para todos os compostos bioativos avaliados. Pode-se concluir que os genótipos de maracujazeiros avaliados no presente estudo, apresentam potencial como fonte de compostos bioativos. O Artigo 3 foi intitulado de produção e qualidade de frutos do maracujazeirodoce seleção ‘Urussanga’ em condições de clima temperado. O genótipo caracterizado foi a seleção Urussanga selecionado pela Epagri, oriundo de seleções de maracujá-doce (Passiflora alata Curtis.). De uma maneira geral o maracujá-doce seleção Urussanga, demonstra potencial produtivo e frutos de qualidade físicoquímica adequados quando cultivados em condições de clima temperado. Contudo, com base nos resultados obtidos e discutidos nesta tese, pode-se concluir que a produção, a qualidade e os compostos bioativos dos genótipos de maracujazeiros avaliados podem ser explorados comercialmente por produtores que desejam diversificar a produção em região não-tradicional de cultivo. Conclui-se que a presente tese cumpriu com a justificativa inicial, que portanto , comprova a existência do potencial para a produção de maracujá em condições de clima temperado. / The fruticulture is an important activity in Brazil and is very adapted to family farming and the proposed diversification of small areas of production. The passion fruit (Passifloras) are plants that play an important role for many family farmers due to high demand of manpower and considerable income for small farms. In Brazil, the cultivated species featured include the yellow passion fruit (Passiflora edulis Sims.), the purple passion fruit (Passiflora edulis Sims.) and sweet passion fruit (Passiflora alata Curtis.). With edaphoclimatic adaptability cultural diversity of Brazil, it is possible the yellow passion fruit production in all regions of the country. However, for a better understanding, it is necessary to further studies in different locations from those of commercial cultivation. Soil and climatic conditions of southern Rio Grande do Sul (State of Brazil), has some specific soil and climate in relation to the tropical regions of traditional cultivation. So, to that the growers can diversify their production with passion fruit, it is necessary studies to adapt the genotypes already on the market, for a new location. Therefore, this work aimed to evaluate productive aspects, the physicochemical quality and bioactive compounds from juice, flour from the peel and leaves of the genotypes of commercial passionfruit grown in Pelotas, Brazil. The thesis comprises three articles and were developed in UFPel/FAEM, between the years 2013 and 2015. The Article 1 was titled production and fruit quality of passion fruit in temperate conditions. Were evaluated genotypes: Passiflora edulis ‘Catarina’; Passiflora edulis ‘BRS Sol do Cerrado’ e, Passiflora edulis ‘BRS Rubi do Cerrado’. All genotypes showed potential for production in the region of Pelotas, RS. The physicochemical quality of the fruits of genotypes are within acceptable parameters.The Article 2 was titled bioactive compounds from leaves, peel and juice of genotypes of passion fruit. Were evaluated genotypes: ‘Catarina Roxo’ (Epagri); ‘Catarina’ (Epagri); ‘Urussanga’ (Epagri); ‘BRS Gigante Amarelo’; ‘BRS Rubi do Cerrado’; ‘BRS Sol do Cerrado’. For evaluations of leaves ‘BRS Gigante Amarelo’ genotype was not evaluated. There were differences among genotypes for all bioactive compounds evaluated. It can be concluded that the genotypes of passion fruit evaluated in this study, have potential as a source of bioactive compounds. The Article 3 was entitled production and fruit quality of sweet passion fruit selection ‘Urussanga’ in temperate climate. The genotype characterized was selection Urussanga selected by Epagri, derived from sweet passion fruit (Passiflora alata Curtis.). Overall the sweet passion fruit selection Urussanga, shows productive potential and fruit physicochemical quality adequate when grown in temperate conditions. However, based on the results obtained and discussed in this thesis, it can be concluded that the production, quality and bioactive compounds of genotypes evaluated passionfruit can be commercially exploited by producers who wish to diversify production in non-traditional area of cultivation. It is concluded that this thesis comply with the initial justification, which therefore proves the existence of potential for passion fruit production in temperate climate conditions.

Passiflora alata Curtis e P. nitida Kunth, espécies brasileiras, foram submetidas ao estudo farmacognóstico comparativo. P. alata tem sido utilizada há tempos na medicina tradicional e em preparações farmacêuticas. No estudo farmacobotânico, as folhas das duas espécies apresentaram semelhança na forma, no tamanho e na ausência de indumento. Diferem quanto ao número de glândulas peciolares. P. alata apresenta geralmente dois pares de glândulas e P. nitida, um par. Anatomicamente, as duas espécies mostraram características comuns ao gênero Passiflora: mesofilo dorsiventral; drusas no mesofilo, na nervura mediana, na região cortical, medular e floemática do caule; feixes vasculares colaterais. Embora as duas espécies apresentem nervura mediana biconvexa, a de P. alata evidencia as carenas pronunciadamente salientes, principalmente na face abaxial. Outro aspecto diferencial observa-se na forma do caule: em P. alata é quadrangular e, em P. nitida, arredondada. A seqüência de tecidos assemelha-se, com exceção do maior desenvolvimento de colênquima nas arestas de P. alata. A triagem fitoquímica evidenciou a presença de flavonóides nas duas espécies e a ausência de alcalóides em ambas, tanto na droga vegetal quanto nos extratos. Formação de espuma persistente foi observada com a droga vegetal preparada com P. alata. A hemólise foi observada com a droga e o extrato desta espécie. Os flavonóides foram quantificados como 0,42% ± 0,01 em P. alata e 0,10% ± 0,01 em P. nitida. No ensaio da atividade antioxidante, a EC50 de P. alata foi de 1061,2 ± 8,5 µg/mL e a de nitida 128,0 ± 0,9 µg/mL, no ensaio do DPPH, e de 1076 ± 85 µµmol de Trolox/g de extrato e de 1985 ± 104 µmol de Trolox/g de extrato no ensaio de ORAC, respectivamente. No ensaio de atividade antiúlcera aguda P. alata exibiu, na área total de lesão (ATL), proteção contra as lesões gástricas de 100%, P. nitida de 84% e lansoprazol, o controle positivo, de 76%. Quanto à área relativa de lesão (ARL), alata exibiu proteção contra as lesões de 99,45%; P. nitida, de 82,27% lansoprazol, de 81,44%, no ensaio de lesão gástrica induzida por etanol/HCI com 300 mmol/L de HCI e extratos na dose de 400 mg/kg. As doses de 100,200 e 400 mg/kg dos extratos foram testadas nas mesmas condições com 150 mmol/L de HCI. P. alata apresentou, na ATL, 100% de proteção contra as lesões gástricas nas três concentrações e lansoprazol, de 75%. Na ARL, P. alata exibiu 100% de proteção lansoprazol, de 76,92%. P. nitida apresentou, na ATL, proteção contra as lesões gástricas de 25%, 74% e 94% nas três concentrações, respectivamente e, lansoprazol, de 80%. Na ARL, P. nitida exibiu 27,40%, 74,00% e 91,78% de proteção, respectivamente e lansoprazol, de 78,08%. Baseando-se neste estudo possível distinguir as duas espécies através de características morfoanatômicas das folhas e dos caules e, através do perfil cromatográfico. Ambas as espécies apresentaram atividade antiúlcera promissora. / Passiflora alata Curtis and P. nitida Kunth, Brazilian species, were selected for the comparative pharmacognostic study. P. alata has been used for a long time folk medicine and pharmaceutical preparations. In the pharmacobotanic study, leaves from both species showed similarities in shape, size and in the absence indumenta. They differ by the number of petiolar glands. P. alata presents generally two pairs of glands and P. nitida, one pair. Anatomically, both species showed common characteristics to the Passiflora genera: dorsiventral mesophyll; druses the mesophyll, midrib, cortex, medulla and phloem; collateral vascular bundles. Both species\' midrib presented a biconvex shape, but P. alata\'s was prominently shaped, notably in the abaxial surface. Another differential aspect was observed the stem shape: P. alata was quadrangular and P. nitida was rounded. The tissues sequence presented similarity, with exception to larger collenchyma development in P. alata\'s edges. The phytochemical screening showed presence of flavonoids and absence of alkaloids in both species, in the crude drug and extracts. Formation persistent foam was observed with the crude drug of P. alata. Hemolisis was observed with the crude drug and extract of this species. Flavonoids were quantified as 0.42% ± 0.01 in P. alata and 0.10% ± 0.01 in P. nitida. In the antioxidant activity assay, the EC50 of P. alata was 1061.2 ± 8.5 µg/mL and of P. nitida , 128.0 ± 0.9 µg/mL, in the DPPH assay, and 1076 ± 85 µmol Trolox/g extract and 1985 ± 104 µmol Trolox/g extract in the ORAC assay, respectively. In the antiulcer activity assay P. alata showed, in total lesion area (TLA), protection against gastric lesions 100%, P. nitida 84% and lansoprazole, the positive control, 76%. In relative lesion area (RLA), P. alata showed protection against lesions of 99.45%, P. nitida82.27% and lansoprazole 81.44%, in the HCl/ethanol-induced gastric lesion assay, with HCI 300 mmol/L and extracts at doses of 400 mg/kg. Doses of 100, 200 e 400 mg/kg extracts were tested in the same conditions with HCl 150 mmol/L. P. alata showed, TLA, protection against gastric lesions of 100% in the three concentrations and lansoprazole 75%. In RLA, P. alata showed 100% of protection and lansoprazole 76.92%. P. nitida showed, in TLA, protection against gastric lesions of 25%,74% and 94% in the three concentrations, respectively and lansoprazole 80%. In RLA, nitida showed 27.40%, 74.00% and 91.78% of protection, respectively and lansoprazole 78.08%. Based upon this study it is possible to distinguish both species by leaf and stem morphoanatomic characters and by chromatographic profile. Both species presented promising antiulcer activity.