La communauté Rurale de Mont-Rolland (région de Thiès, Sénégal) est un foyer endémique de leishmaniose canine décrit depuis 1970. Des études épidémiologiques récentes ont montré que l'agent étiologique est Leishmania (Leishmania) infantum et que le cycle de transmission est bien établi sur l'ensemble de la commune, avec plus de 30% des chiens et plus de 20% des hommes séropositifs. Néanmoins, malgré les différentes études épidémiologiques, le vecteur reste toujours inconnu. Jusqu'à présent, aucune espèce de Phlebotomus, connue pour être vecteur de L. infantum (sous genre Larroussius et secondairement Adlerius), n'a été identifiée au Sénégal. Dans ce contexte, l'objectif principal de cette thèse était d'identifier les vecteurs potentiels de la maladie et de caractériser le cycle de transmission de la leishmaniose canine par des études écologiques, parasitologiques et moléculaires des populations de phlébotomes. Ainsi, 7442 spécimens de phlébotomes ont été récoltés par piégeage adhésif, piégeage lumineux et par pulvérisations intradomiciliaires d'insecticides pyréthrinoïdes. Neuf espèces de phlébotomes ont été identifiées : deux appartiennent au genre Phlebotomus, P. duboscqi (vecteur de la leishmaniose cutanée au Sénégal) et P. rodhaini, les autres espèces appartiennent au genre Sergentomyia, S. adleri, S. clydei, S. antennata, S. buxtoni, S. dubia, S. schwetzi, et S. magna. La distribution spatiale des phlébotomes est hétérogène selon le village, selon l'écosystème et l'environnement de capture. Les études parasitologiques et les études moléculaires (PCR diagnostique de Leishmania) ont révélé trois espèces de Sergentomyia infectées par L. infantum, S. dubia (dissection et PCR), S. schwetzi (dissection et PCR) et S. magna (PCR). Il faut noter que plus de 2% des individus femelles à jeun testées étaient PCR positives, soulignant la survie des parasites chez ces espèces après la digestion. Toutes les autres espèces étaient négatives aussi bien en dissection qu'en PCR. Les analyses statistiques ont montré : que la distribution de S. dubia est significativement associée à la séroprévalence chez les chiens, que les individus de S. schwetzi positifs en PCR sont significativement associés à la séroprévalence chez le chien, qu'il y a un effet significatif du nombre de phlébotomes positifs en PCR (les 3 espèces confondues) sur la séroprévalence chez l'homme. Toutes ces données démontrent pour la première fois que 3 espèces du genre Sergentomyia, S. dubia, S. schwetzi et probablement S. magna, sont les vecteurs de la leishmaniose canine dans le foyer de Mont-Rolland. Ces résultats remettent en question le dogme qui stipule que seul le genre Phlebotomus serait capable de transmettre le parasite Leishmania dans l'Ancien-Monde. L'étude du comportement et de la distribution de ces trois espèces et de leurs spécimens infectés nous ont permis de proposer un modèle de transmission dans ce foyer. / AbstractThe rural community of Mont-Rolland (Thiès, Sénégal) is an endemic focus of canine leishmaniasis described since 1970. Recent epidemiological studies showed that the causative agent is Leishmania infantum with well established transmission cycle throughout the area. However, despite the several epidemiological studies, the vector species is still unknown. So far, no species of Phlebotomus belongs to Larroussius and Adlerius subgenera, known as vector of L. infantum, was identified in Senegal. In this context, the main objective of this thesis was to identify potential vectors of the disease and to characterize the cycle of canine leishmaniasis transmission by ecological, parasitological and molecular studies on sandfly populations. Thus, 7442 specimens were collected by sticky traps, light traps and indoor spraying with pyrethroid insecticide from different environments (intradomiciliary, peridomiciliary, culture area, isolated area) and different villages and ecosystems (sandy soils, lateritic gravel soils and sandy clay soils). Nine species of sand flies were identified; two belong to the Phlebotomus genus, P. duboscqi (vector of cutaneous leishmaniasis in Senegal) and P. rodhaini, the other species belong to the Sergentomyia genus, S. adleri, S. clydei, S. antennata, S. buxtoni, S. dubia, S. schwetzi, and S. magna. Two species of the Phlebotomus genus were significantly underrepresented (292 specimens) compared to species of the Sergentomyia genus (7150 specimens). The spatial distribution of sand flies is heterogeneous depending on the village, the ecosystem and environment, suggesting that several species are capable of transmitting the parasite. Parasitological and molecular studies (diagnostic PCR of Leishmania) revealed that three species of Sergentomyia were infected with L. infantum, S. dubia (dissection and PCR), S. schwetzi (dissection and PCR) and S. magna (PCR). It is worth noting that more than 2% of un-fed females of these species were PCR-positive, emphasizing the survival of parasites after digestion. All other species were found to be negative in both PCR and dissection. In addition, statistical analysis showed that 1) the distribution of S. dubia is significantly associated with seroprevalence in dogs, 2) PCR-positive individuals of S. schwetzi are significantly associated with seroprevalence in dogs, 3) there is a significant effect of PCR-positive sand flies (all species considered) on seroprevalence in humans. All these data demonstrated for the first time that three species of Sergentomyia, S. dubia, S. schwetzi and probably S. magna, are the vectors of the canine leishmaniasis in the Mont-Rolland commune. The results presented in this study challenge the dogma which states that only the Phlebotomus genus would be capable of transmitting Leishmania parasites in the Old World. The behaviour and distribution of these three species and their infected specimens allowed us to propose a model of transmission in the focus.

Resumo. Foi realizado um estudo epidemiológico para avaliação dos fatores determinantes para a transmissão da LTA. O estudo foi realizado na área urbana, periurbana e rural da cidade de Itambaracá, incluindo a Vila Rural e as localidades de Porto Almeida e São Joaquim do Pontal, as duas últimas próximas à área impactada pelas hidrelétricas de Canoas I e II, no rio Paranapanema. Capturou-se de fevereiro de 2004 a junho 2006, 3.187 flebotomíneos. As espécies predominantes foram Nyssomyia neivai (34,36%), Pintomyia pessoai (32,57%), Migonemya migonei (11,61%), Nyssomyia whitmani (8,82%) e Pintomyia fischeri (2,73%) todas elas com capacidade de transmissão da doença. Para Ny neivai, houve predominância de machos e para as outras espécies vetoras, as fêmeas prevaleceram, com diferença estatística significante (p<0,001). As espécies mais abundantes, segundo o índice de abundância das espécies padronizado, foram Ny neivai, Pi. pessoai, Ny whitmani, Br. brumpti, Mg migonei e Pi fischeri. As maiores freqüências e diversidade das espécies foram encontradas na localidade de Porto Almeida (PA), seguida por São Joaquim do Pontal (SJP). Ny neivai apresentou médias sazonais mais elevadas e na distribuição mensal, picos em fevereiro, maio e outubro. A maior média horária desta espécie foi registrada das 19:00 às 20:00 h (1,2) mas mostrou-se ativa das 23:00 às 10:00 h da manhã. A prevalência de Acs da classe IgG para LTA em RIFI, na população humana foi de 6,73%, nos caninos de 1,75% e nos equídeos de 16,0 %. Em EIE/ELISA, a prevalência para os caninos foi de 16,49%. Na PCR, todos os cremes leucocitários correspondentes à soros reagentes a Acs da classe IgG (humanos), e Ac totais (eqüinos e caninos) foram negativos para Leishmania sp. No inquérito sócio econômico, verificou-se que a população entrevistada em sua maioria pertence à etnia branca e à faixa etária de 30-50 anos, recebem em torno de dois salários mínimos, possuem ocupações voltadas à agricultura e pecuária, nível de escolaridade fundamental (1º grau), habita casas de alvenaria, possuem animais domésticos com seus abrigos próximos às casas. Realizam atividades de trabalho e lazer em áreas de risco em proximidades às matas, áreas com animais silvestres e domésticos e com presença de matéria orgânica, que são fatores atrativos aos flebotomíneos. A população entrevistada, de uma forma geral, desconhece os aspectos da transmissão da LTA. Observou-se em todas as localidades amostradas a presença de flebotomíneos, com predominância de cinco espécies com capacidade vetorial de agentes da LTA, destacando-se Ny. Neivai , incluindo os peridomicílios. Houve transmissão ativa da doença, ocorrendo dois casos notificados e autóctones, em área de baixa freqüência de espécimes. A soroprevalência na população humana (6,73%) foi considerável, embora seja uma área de baixa ocorrência da doença. Nas localidades onde havia um foco mais recente da doença, em SJP, os cães e eqüinos apresentaram sorologia positiva. A alta prevalência de reagentes na sorologia observada em eqüídeos sugere que estes animais poderiam ser usados como sentinela para a detecção precoce da circulação do agente da LTA nas áreas estudadas. / Abstract. An epidemiological study was carried out in the urban area of Itambaracá and rural areas of the same municipality, including Vila Rural, Porto Almeida and São Joaquim do Pontal, to investigate the phlebotomine fauna and behavioral aspects of its species and also some determining factors of the transmission of American cutaneous leishmaniasis (ACL). The last two localities mentioned are situated close to the areas impacted by the Canoas I and II hydroelectric plants on the Paranapanema river. A total of 3,187 phlebotomines were captured between February 2004 and June 2006. Nyssomyia neivai predominated (34.36%), followed by Pintomyia pessoai (32.6%), Migonemyia migonei (11.6%), Nyssomyia whitmani (8.8%) and Pintomyia fischeri (2.7%), all of them implicated in the transmission of the disease. Regarding Ny. neivai, males predominated over females which may indicate the proximity of its breeding places to the capture sites. As for all the other vector species, the females were predominant, with significant statistical differences (p < 0,001). Ny neivai, Pi. pessoai, Ny. whitmani, Br. brumpti, Mg. migonei and Pi. fischeri presented the highest values for the species standardized abundance index. The greatest frequencies and diversity of the species were found at Porto Almeida (PA), a locality situated close to a well preserved forest fragment and secondly at São Joaquim do Pontal (SJP), with degraded forest. Of all the species, Ny. neivai presented the highest monthly averages with the main peak occurring in successive months of April. Its greatest hourly average was registered at 19:00-20:00 hours, but the species presented activity from 23:00 p.m. to 10:00 a.m. The prevalence of Ac IgG class, serum-reagents for Leishmania obtained with RIFI from the human, canine and equine populations was 6.73% (20/297), 1.75% (5/285) and 16% (8/50), respectively. A prevalence of 16.4% was observed by the EIE/ELISA test only for the canine population. The buffy-coat of all the reagent human and animal blood samples was tested by the polymerase chain reaction (PCR) to investigate the presence of Leishmania, with negative results. In the socioeconomic survey, it was found that the majority of the people interviewed belonged to the white ethnic and 30-50 year-old groups, earning two minimum salaries, exercising occupations associated with agriculture and livestock breeding, of fundamental school level, inhabiting brick houses and keeping pets and domestic animals in and around them. They exercise their work and leisure activities in risk areas close to forest fragments, thus in areas containing both wild and domestic animals with the presence of organic matter, which attract the sandflies. The population interviewed was, in general, ignorant of the facts involved in ACL transmission. Sandflies were observed at all the sites sampled, with the predominance of five vectors of the ACL agents, with Ny. neivai, the main vector in all three areas, also being captured in the peridomiciles. Active transmission of the disease, with two cases registered, was observed at sites with very low frequency of this sandfly. The serum prevalence in the human population (6.73%) was considerable, despite this being an area of few registered ACL cases. In the localities in which there was a more recent focus of the disease, in SJP, the dogs and equines presented positive serology. The high prevalence of equine serum reagents suggests that these animals could be used as sentinels for the early detection of the presence of the ACL agent in the area studied.

Introdução. A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma endemia de importância em saúde pública na Amazônia Brasileira, onde possui diferentes perfis de transmissão com a participação de diversas espécies de vetores e de protozoários do gênero Leishmania. O Estado do Acre apresenta altos índices de LTA e, no ano de 2015, apresentou o mais alto coeficiente de detecção de casos (137,7/100.000 hab.) da doença no Brasil. Objetivo. Analisar aspectos epidemiológicos da LTA no município de Xapuri, Estado do Acre, Brasil, envolvendo população humana, cães domésticos, vetores e identificação de Leishmania. Materiais e Métodos. Para a avaliação epidemiológica, foram analisadas fichas de notificação dos casos humanos no período de 2008 a 2014 obtidas do sistema de vigilância epidemiológica do município. Foram analisadas as variáveis: sexo, grupo etário, escolaridade, forma clínica, diagnóstico, tratamento e evolução clínica. Os dados foram submetidos à análise descritiva e teste estatístico do qui-quadrado de Pearson utilizando o pacote estatístico STATA. Também foram obtidas amostras de material de pacientes (escarificação das lesões fixadas em lâminas) atendidos no centro médico do município, durante o período de novembro de 2014 a janeiro de 2016. As amostras foram submetidas à análise molecular para diagnóstico de Leishmania spp. O inquérito canino foi realizado em áreas urbanas e rurais; nestas, predominantemente, em seringais, onde a doença foi reportada em humanos. Após avaliação clínica dos animais para busca de lesões e sinais característicos de leishmanioses, foram coletadas amostras de sangue venoso por punção jugular ou cefálica, e quando havia lesões sugestivas da doença, foram anestesiados e submetidos à biopsia para colheita do fragmento de lesão. Amostras destes fragmentos foram submetidas a técnicas parasitológicas, inoculação em meio de cultura Neal, Novy e Nicolle, exame direto e técnicas moleculares para detecção do parasita. A identificação de Leishmania spp. foi realizada por técnicas moleculares. Os flebotomíneos foram coletados em ambiente domiciliar e florestal de dois seringais (Floresta e Cachoeira) e na área urbana, com armadilhas luminosas tipo CDC, instaladas mensalmente, no período de agosto de 2013 a julho de 2015. Neste período, apenas no seringal Cachoeira, também foram feitas coletas utilizando armadilhas de Shannon nas cores branca e preta, e de janeiro a maio de 2016, coletas em trocos de árvores com aspiradores manuais. Uma amostra de fêmeas coletadas pelas diferentes técnicas foi dissecada viii para investigação da presença de flagelados. Para a análise do comportamento da fauna flebotomínea foram utilizados índices ecológicos como de Shannon, Pielou e Abundância das Espécies Padronizado, média geométrica de Williams e análise dos componentes principais. Para estimar a atratividade dos flebotomíneos pelas cores branca e preta foi utilizado o teste de Mann-Whitney (p<0,05). Análises morfométricas utilizando o teste de Gabriel (teste F, p <0,05) foram feitas para distinguir alguns táxons. Para as análises moleculares dos parasitas foi empregada a técnica de Nested-PCR SSU rRNA utilizando os iniciadores S4/S12 e S17/S18 e sequenciamento. Resultados. No estudo de casos humanos, constatou-se que a doença ocorre predominantemente em populações rurais e isoladas do município, em indivíduos de ambos os sexos, com as incidências mais elevadas em crianças e adolescentes. Em 33 dos 45 pacientes com clínica positiva para LTA foram detectadas a presença de DNA de Leishmania spp. Nos cães domésticos, verificou-se alta taxa de infecção (20,0 por cento ) por Leishmania (Viannia) sp. Nos estudos de flebotomíneos, foram coletados 21.197 espécimes (14.210 fêmeas e 7.107 machos) com armadilhas CDC, e 6.309 (864 machos e 5.445 fêmeas) com armadilhas de Shannon. As frequências, abundâncias e densidades mais elevadas foram dos gêneros Nyssomyia, Psychodopygus e Trichophoromyia, coletados em ambientes silvestres, peri e intradomiciliares. Em ambiente rural foram coletados 99,9 por cento dos espécimes e no urbano apenas 0,1 por cento . Nyssomyia shawi predominou no Seringal Cachoeira, e Trichophoromyia spp. (Th. auraensis/Th. ruifreitasi) no Seringal Floresta. Espécies do gênero Psychodopygus predominaram no período chuvoso, enquanto as de Nyssomyia, no período seco. Infecções por Leishmania spp. foram detectadas em Brumptomyia sp., Nyssomyia antunesi, Ny. shawi, Lutzomyia sherlocki, Psathyromyia aragaoi, Psychodopygus carrerai carrerai, Ps. davisi, Ps. hirsutus hisutus, Ps. llanosmartinsi, Ps. lainsoni, Thrichophoromyia ubiquitalis e Trichophoromyia spp. Por meio de análises morfológicas e morfométricas das fêmeas de Trichophoromyia sugeriu-se a distinção de Th. octavioi de Trichophoromyia spp. (Th. auraensis/Th. ruifreitasi) e descreveu-se, Psathyromyia elizabethdorvalae sp. n. Conclusões. A LTA em Xapuri apresenta um perfil de transmissão silvestre e outro domiciliar. As populações humanas e caninas que frequentam ambientes florestais estão expostas a uma alta diversidade de vetores e de agentes etiológicos, o que aumenta o risco de infecção de LTA. As informações aqui apresentadas podem nortear as medidas de controle, planejamento das ações e definição de prioridades dos órgãos de vigilância epidemiológica do Estado do Acre, visando o diagnóstico precoce e tratamento adequado dos casos de leishmanioses da população humana de Xapuri / Introduction. American cutaneous leishmaniasis (ACL) is an endemic disease that deserves the attention of public health in the Brazilian Amazon, where it has various transmission profiles with the participation of several species of vectors and protozoa of the genus Leishmania. The state of Acre registers high rates of ACL, having in 2015 the highest coefficient of detection of cases (137.7 / 100,000 inhab.) in Brazil. Objective. To analyze the epidemiological aspects of LTA in the municipality of Xapuri, State of Acre, Brazil, involving the human population, domestic dogs, vectors and the identification of Leishmania ssp. Materials and Methods. For the epidemiological evaluation, records of the human cases notified between 2008 and 2014 obtained from the epidemiological surveillance system of the municipality, were analyzed. The following variables were selected for analysis: sex, age group, schooling, clinical form, diagnosis, treatment and clinical evolution. The data were submitted to descriptive analysis and the Pearson chi-squared statistical test using the statistical package STATA. Samples of patient material (scarification of lesions fixed on slides) were also obtained from the medical center of the city during the period from November 2014 to January 2016. These samples were submitted to molecular analysis for the diagnosis of Leishmania spp. The canine survey was carried out in both urban and rural areas, in the latter rubber plantations where the disease had been reported in humans predominated. After a clinical evaluation to search for lesions and characteristic signs of leishmaniasis, samples of venous blood were collected by jugular or cephalic puncture, and when the animals presented lesions suggestive of cutaneous leishmaniasis, they were anesthetized and submitted to biopsy to harvest the lesion fragment. Samples of these fragments were submitted to parasitological techniques, inoculation in Neal, Novy and Nicolle culture medium, direct examination and molecular techniques to detect Leishmania spp. The samples were submitted to molecular analysis for the diagnosis of Leishmania spp. The phlebotomine survey was carried out in forest and the domiciliary environment of the city and in two rubber plantation areas (Seringal Cachoeira and Seringal Floresta), monthly using CDC light traps, from August 2013 to July 2015. In this period, only in the Seringal Cachoeira were collections also made using black and white Shannon traps. Collections in tree trunks and among tree roots with manual aspirators were also undertaken from January to May 2016. xi Samples of females collected by different techniques were dissected to investigate the presence of flagellates. For the analysis of the behavior of the phlebotomine fauna, ecological indexes such as Shannon, Pielou, and Standardized Species Abundance, Williams geometric mean and main component analysis were used. The Mann-Whitney test (p <0.05) was used to estimate the attractiveness of the black and white colors to sandflies. Morphometric analyses using the Gabriel test (test F, p <0.05) were made to distinguish between some taxa. For the molecular analyses of the parasites the Nested-PCR SSU rRNA technique was used using primers S4 / S12 and S17 / S18 and sequencing. Results. In the study of human cases, it was found that the disease occurs in rural and isolated populations and in individuals of both sexes, especially in children and adolescents. In 33 of the 45 patients with positive ACL, the presence of Leishmania spp DNA was detected. The domestic dogs have shown a high infection rate (20.0 per cent ) attributed to Leishmania (Viannia) sp. In the sandfly studies, 21,197 specimens (14,210 females and 7,107 males) were collected in CDC traps, and 6,309 (864 males and 5,445 females) were collected in Shannon traps. The highest frequencies, abundances and densities were of the genera Nyssomyia, Psychodopygus and Trichophoromyia collected in wild, peri and intradomiciliary environments. Nyssomyia shawi predominated in the Seringal Cachoeira, and the Trichophoromyia spp. (Th. auraensis/Th. ruifreitasi) in the Seringal Floresta. Species of the genus Psychodopygus predominated in the rainy season while those of Nyssomyia in the dry period. Natural infections by Leishmania spp were detected in Brumptomyia sp., Nyssomyia antunesi, Ny. shawi, Lutzomyia sherlocki, Psathyromyia aragaoi, Psychodopygus carrerai carrerai, Ps. davisi, Ps. hirsutus hirsutus, Ps. llanosmartinsi, Ps. lainsoni, Trichophoromyia ubiquitalis and Trichophoromyia sp. Morphological and morphometric analyses of Trichophoromyia females were suggested to distinguish Th. octavioi from Trichophoromyia spp (Th. auraensis/Th. ruifreitasi), Pa. elizabethdorvalae being described for the first time. Conclusions. ACL in Xapuri presents one profile of wild transmission and another of domiciliar transmission. Both populations, human and canine, because they live in forest environments are exposed to a high diversity of vectors and etiological agents, which increases the risk of ACL infection. The information presented here may guide the measures of control, planning of actions and definition of priorities taken by the organs of surveillance and epidemiology of the State of Acre, aiming at the early diagnosis and appropriate treatment of the human cases in Xapuri

Resumo. Foi realizado um estudo epidemiológico para avaliação dos fatores determinantes para a transmissão da LTA. O estudo foi realizado na área urbana, periurbana e rural da cidade de Itambaracá, incluindo a Vila Rural e as localidades de Porto Almeida e São Joaquim do Pontal, as duas últimas próximas à área impactada pelas hidrelétricas de Canoas I e II, no rio Paranapanema. Capturou-se de fevereiro de 2004 a junho 2006, 3.187 flebotomíneos. As espécies predominantes foram Nyssomyia neivai (34,36%), Pintomyia pessoai (32,57%), Migonemya migonei (11,61%), Nyssomyia whitmani (8,82%) e Pintomyia fischeri (2,73%) todas elas com capacidade de transmissão da doença. Para Ny neivai, houve predominância de machos e para as outras espécies vetoras, as fêmeas prevaleceram, com diferença estatística significante (p<0,001). As espécies mais abundantes, segundo o índice de abundância das espécies padronizado, foram Ny neivai, Pi. pessoai, Ny whitmani, Br. brumpti, Mg migonei e Pi fischeri. As maiores freqüências e diversidade das espécies foram encontradas na localidade de Porto Almeida (PA), seguida por São Joaquim do Pontal (SJP). Ny neivai apresentou médias sazonais mais elevadas e na distribuição mensal, picos em fevereiro, maio e outubro. A maior média horária desta espécie foi registrada das 19:00 às 20:00 h (1,2) mas mostrou-se ativa das 23:00 às 10:00 h da manhã. A prevalência de Acs da classe IgG para LTA em RIFI, na população humana foi de 6,73%, nos caninos de 1,75% e nos equídeos de 16,0 %. Em EIE/ELISA, a prevalência para os caninos foi de 16,49%. Na PCR, todos os cremes leucocitários correspondentes à soros reagentes a Acs da classe IgG (humanos), e Ac totais (eqüinos e caninos) foram negativos para Leishmania sp. No inquérito sócio econômico, verificou-se que a população entrevistada em sua maioria pertence à etnia branca e à faixa etária de 30-50 anos, recebem em torno de dois salários mínimos, possuem ocupações voltadas à agricultura e pecuária, nível de escolaridade fundamental (1º grau), habita casas de alvenaria, possuem animais domésticos com seus abrigos próximos às casas. Realizam atividades de trabalho e lazer em áreas de risco em proximidades às matas, áreas com animais silvestres e domésticos e com presença de matéria orgânica, que são fatores atrativos aos flebotomíneos. A população entrevistada, de uma forma geral, desconhece os aspectos da transmissão da LTA. Observou-se em todas as localidades amostradas a presença de flebotomíneos, com predominância de cinco espécies com capacidade vetorial de agentes da LTA, destacando-se Ny. Neivai , incluindo os peridomicílios. Houve transmissão ativa da doença, ocorrendo dois casos notificados e autóctones, em área de baixa freqüência de espécimes. A soroprevalência na população humana (6,73%) foi considerável, embora seja uma área de baixa ocorrência da doença. Nas localidades onde havia um foco mais recente da doença, em SJP, os cães e eqüinos apresentaram sorologia positiva. A alta prevalência de reagentes na sorologia observada em eqüídeos sugere que estes animais poderiam ser usados como sentinela para a detecção precoce da circulação do agente da LTA nas áreas estudadas. / Abstract. An epidemiological study was carried out in the urban area of Itambaracá and rural areas of the same municipality, including Vila Rural, Porto Almeida and São Joaquim do Pontal, to investigate the phlebotomine fauna and behavioral aspects of its species and also some determining factors of the transmission of American cutaneous leishmaniasis (ACL). The last two localities mentioned are situated close to the areas impacted by the Canoas I and II hydroelectric plants on the Paranapanema river. A total of 3,187 phlebotomines were captured between February 2004 and June 2006. Nyssomyia neivai predominated (34.36%), followed by Pintomyia pessoai (32.6%), Migonemyia migonei (11.6%), Nyssomyia whitmani (8.8%) and Pintomyia fischeri (2.7%), all of them implicated in the transmission of the disease. Regarding Ny. neivai, males predominated over females which may indicate the proximity of its breeding places to the capture sites. As for all the other vector species, the females were predominant, with significant statistical differences (p < 0,001). Ny neivai, Pi. pessoai, Ny. whitmani, Br. brumpti, Mg. migonei and Pi. fischeri presented the highest values for the species standardized abundance index. The greatest frequencies and diversity of the species were found at Porto Almeida (PA), a locality situated close to a well preserved forest fragment and secondly at São Joaquim do Pontal (SJP), with degraded forest. Of all the species, Ny. neivai presented the highest monthly averages with the main peak occurring in successive months of April. Its greatest hourly average was registered at 19:00-20:00 hours, but the species presented activity from 23:00 p.m. to 10:00 a.m. The prevalence of Ac IgG class, serum-reagents for Leishmania obtained with RIFI from the human, canine and equine populations was 6.73% (20/297), 1.75% (5/285) and 16% (8/50), respectively. A prevalence of 16.4% was observed by the EIE/ELISA test only for the canine population. The buffy-coat of all the reagent human and animal blood samples was tested by the polymerase chain reaction (PCR) to investigate the presence of Leishmania, with negative results. In the socioeconomic survey, it was found that the majority of the people interviewed belonged to the white ethnic and 30-50 year-old groups, earning two minimum salaries, exercising occupations associated with agriculture and livestock breeding, of fundamental school level, inhabiting brick houses and keeping pets and domestic animals in and around them. They exercise their work and leisure activities in risk areas close to forest fragments, thus in areas containing both wild and domestic animals with the presence of organic matter, which attract the sandflies. The population interviewed was, in general, ignorant of the facts involved in ACL transmission. Sandflies were observed at all the sites sampled, with the predominance of five vectors of the ACL agents, with Ny. neivai, the main vector in all three areas, also being captured in the peridomiciles. Active transmission of the disease, with two cases registered, was observed at sites with very low frequency of this sandfly. The serum prevalence in the human population (6.73%) was considerable, despite this being an area of few registered ACL cases. In the localities in which there was a more recent focus of the disease, in SJP, the dogs and equines presented positive serology. The high prevalence of equine serum reagents suggests that these animals could be used as sentinels for the early detection of the presence of the ACL agent in the area studied.

Introdução. A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma endemia de importância em saúde pública na Amazônia Brasileira, onde possui diferentes perfis de transmissão com a participação de diversas espécies de vetores e de protozoários do gênero Leishmania. O Estado do Acre apresenta altos índices de LTA e, no ano de 2015, apresentou o mais alto coeficiente de detecção de casos (137,7/100.000 hab.) da doença no Brasil. Objetivo. Analisar aspectos epidemiológicos da LTA no município de Xapuri, Estado do Acre, Brasil, envolvendo população humana, cães domésticos, vetores e identificação de Leishmania. Materiais e Métodos. Para a avaliação epidemiológica, foram analisadas fichas de notificação dos casos humanos no período de 2008 a 2014 obtidas do sistema de vigilância epidemiológica do município. Foram analisadas as variáveis: sexo, grupo etário, escolaridade, forma clínica, diagnóstico, tratamento e evolução clínica. Os dados foram submetidos à análise descritiva e teste estatístico do qui-quadrado de Pearson utilizando o pacote estatístico STATA. Também foram obtidas amostras de material de pacientes (escarificação das lesões fixadas em lâminas) atendidos no centro médico do município, durante o período de novembro de 2014 a janeiro de 2016. As amostras foram submetidas à análise molecular para diagnóstico de Leishmania spp. O inquérito canino foi realizado em áreas urbanas e rurais; nestas, predominantemente, em seringais, onde a doença foi reportada em humanos. Após avaliação clínica dos animais para busca de lesões e sinais característicos de leishmanioses, foram coletadas amostras de sangue venoso por punção jugular ou cefálica, e quando havia lesões sugestivas da doença, foram anestesiados e submetidos à biopsia para colheita do fragmento de lesão. Amostras destes fragmentos foram submetidas a técnicas parasitológicas, inoculação em meio de cultura Neal, Novy e Nicolle, exame direto e técnicas moleculares para detecção do parasita. A identificação de Leishmania spp. foi realizada por técnicas moleculares. Os flebotomíneos foram coletados em ambiente domiciliar e florestal de dois seringais (Floresta e Cachoeira) e na área urbana, com armadilhas luminosas tipo CDC, instaladas mensalmente, no período de agosto de 2013 a julho de 2015. Neste período, apenas no seringal Cachoeira, também foram feitas coletas utilizando armadilhas de Shannon nas cores branca e preta, e de janeiro a maio de 2016, coletas em trocos de árvores com aspiradores manuais. Uma amostra de fêmeas coletadas pelas diferentes técnicas foi dissecada viii para investigação da presença de flagelados. Para a análise do comportamento da fauna flebotomínea foram utilizados índices ecológicos como de Shannon, Pielou e Abundância das Espécies Padronizado, média geométrica de Williams e análise dos componentes principais. Para estimar a atratividade dos flebotomíneos pelas cores branca e preta foi utilizado o teste de Mann-Whitney (p<0,05). Análises morfométricas utilizando o teste de Gabriel (teste F, p <0,05) foram feitas para distinguir alguns táxons. Para as análises moleculares dos parasitas foi empregada a técnica de Nested-PCR SSU rRNA utilizando os iniciadores S4/S12 e S17/S18 e sequenciamento. Resultados. No estudo de casos humanos, constatou-se que a doença ocorre predominantemente em populações rurais e isoladas do município, em indivíduos de ambos os sexos, com as incidências mais elevadas em crianças e adolescentes. Em 33 dos 45 pacientes com clínica positiva para LTA foram detectadas a presença de DNA de Leishmania spp. Nos cães domésticos, verificou-se alta taxa de infecção (20,0 por cento ) por Leishmania (Viannia) sp. Nos estudos de flebotomíneos, foram coletados 21.197 espécimes (14.210 fêmeas e 7.107 machos) com armadilhas CDC, e 6.309 (864 machos e 5.445 fêmeas) com armadilhas de Shannon. As frequências, abundâncias e densidades mais elevadas foram dos gêneros Nyssomyia, Psychodopygus e Trichophoromyia, coletados em ambientes silvestres, peri e intradomiciliares. Em ambiente rural foram coletados 99,9 por cento dos espécimes e no urbano apenas 0,1 por cento . Nyssomyia shawi predominou no Seringal Cachoeira, e Trichophoromyia spp. (Th. auraensis/Th. ruifreitasi) no Seringal Floresta. Espécies do gênero Psychodopygus predominaram no período chuvoso, enquanto as de Nyssomyia, no período seco. Infecções por Leishmania spp. foram detectadas em Brumptomyia sp., Nyssomyia antunesi, Ny. shawi, Lutzomyia sherlocki, Psathyromyia aragaoi, Psychodopygus carrerai carrerai, Ps. davisi, Ps. hirsutus hisutus, Ps. llanosmartinsi, Ps. lainsoni, Thrichophoromyia ubiquitalis e Trichophoromyia spp. Por meio de análises morfológicas e morfométricas das fêmeas de Trichophoromyia sugeriu-se a distinção de Th. octavioi de Trichophoromyia spp. (Th. auraensis/Th. ruifreitasi) e descreveu-se, Psathyromyia elizabethdorvalae sp. n. Conclusões. A LTA em Xapuri apresenta um perfil de transmissão silvestre e outro domiciliar. As populações humanas e caninas que frequentam ambientes florestais estão expostas a uma alta diversidade de vetores e de agentes etiológicos, o que aumenta o risco de infecção de LTA. As informações aqui apresentadas podem nortear as medidas de controle, planejamento das ações e definição de prioridades dos órgãos de vigilância epidemiológica do Estado do Acre, visando o diagnóstico precoce e tratamento adequado dos casos de leishmanioses da população humana de Xapuri / Introduction. American cutaneous leishmaniasis (ACL) is an endemic disease that deserves the attention of public health in the Brazilian Amazon, where it has various transmission profiles with the participation of several species of vectors and protozoa of the genus Leishmania. The state of Acre registers high rates of ACL, having in 2015 the highest coefficient of detection of cases (137.7 / 100,000 inhab.) in Brazil. Objective. To analyze the epidemiological aspects of LTA in the municipality of Xapuri, State of Acre, Brazil, involving the human population, domestic dogs, vectors and the identification of Leishmania ssp. Materials and Methods. For the epidemiological evaluation, records of the human cases notified between 2008 and 2014 obtained from the epidemiological surveillance system of the municipality, were analyzed. The following variables were selected for analysis: sex, age group, schooling, clinical form, diagnosis, treatment and clinical evolution. The data were submitted to descriptive analysis and the Pearson chi-squared statistical test using the statistical package STATA. Samples of patient material (scarification of lesions fixed on slides) were also obtained from the medical center of the city during the period from November 2014 to January 2016. These samples were submitted to molecular analysis for the diagnosis of Leishmania spp. The canine survey was carried out in both urban and rural areas, in the latter rubber plantations where the disease had been reported in humans predominated. After a clinical evaluation to search for lesions and characteristic signs of leishmaniasis, samples of venous blood were collected by jugular or cephalic puncture, and when the animals presented lesions suggestive of cutaneous leishmaniasis, they were anesthetized and submitted to biopsy to harvest the lesion fragment. Samples of these fragments were submitted to parasitological techniques, inoculation in Neal, Novy and Nicolle culture medium, direct examination and molecular techniques to detect Leishmania spp. The samples were submitted to molecular analysis for the diagnosis of Leishmania spp. The phlebotomine survey was carried out in forest and the domiciliary environment of the city and in two rubber plantation areas (Seringal Cachoeira and Seringal Floresta), monthly using CDC light traps, from August 2013 to July 2015. In this period, only in the Seringal Cachoeira were collections also made using black and white Shannon traps. Collections in tree trunks and among tree roots with manual aspirators were also undertaken from January to May 2016. xi Samples of females collected by different techniques were dissected to investigate the presence of flagellates. For the analysis of the behavior of the phlebotomine fauna, ecological indexes such as Shannon, Pielou, and Standardized Species Abundance, Williams geometric mean and main component analysis were used. The Mann-Whitney test (p <0.05) was used to estimate the attractiveness of the black and white colors to sandflies. Morphometric analyses using the Gabriel test (test F, p <0.05) were made to distinguish between some taxa. For the molecular analyses of the parasites the Nested-PCR SSU rRNA technique was used using primers S4 / S12 and S17 / S18 and sequencing. Results. In the study of human cases, it was found that the disease occurs in rural and isolated populations and in individuals of both sexes, especially in children and adolescents. In 33 of the 45 patients with positive ACL, the presence of Leishmania spp DNA was detected. The domestic dogs have shown a high infection rate (20.0 per cent ) attributed to Leishmania (Viannia) sp. In the sandfly studies, 21,197 specimens (14,210 females and 7,107 males) were collected in CDC traps, and 6,309 (864 males and 5,445 females) were collected in Shannon traps. The highest frequencies, abundances and densities were of the genera Nyssomyia, Psychodopygus and Trichophoromyia collected in wild, peri and intradomiciliary environments. Nyssomyia shawi predominated in the Seringal Cachoeira, and the Trichophoromyia spp. (Th. auraensis/Th. ruifreitasi) in the Seringal Floresta. Species of the genus Psychodopygus predominated in the rainy season while those of Nyssomyia in the dry period. Natural infections by Leishmania spp were detected in Brumptomyia sp., Nyssomyia antunesi, Ny. shawi, Lutzomyia sherlocki, Psathyromyia aragaoi, Psychodopygus carrerai carrerai, Ps. davisi, Ps. hirsutus hirsutus, Ps. llanosmartinsi, Ps. lainsoni, Trichophoromyia ubiquitalis and Trichophoromyia sp. Morphological and morphometric analyses of Trichophoromyia females were suggested to distinguish Th. octavioi from Trichophoromyia spp (Th. auraensis/Th. ruifreitasi), Pa. elizabethdorvalae being described for the first time. Conclusions. ACL in Xapuri presents one profile of wild transmission and another of domiciliar transmission. Both populations, human and canine, because they live in forest environments are exposed to a high diversity of vectors and etiological agents, which increases the risk of ACL infection. The information presented here may guide the measures of control, planning of actions and definition of priorities taken by the organs of surveillance and epidemiology of the State of Acre, aiming at the early diagnosis and appropriate treatment of the human cases in Xapuri

Circulation des Phlébovirus en Turquie, l'Iran et l'Algérie a été étudiée. L'isolement, la caractérisation génomique, les relations phylogénétiques de six virus ont été présentées: le virus Adana (ADAV), deux souches de virus Toros (TORV), le virus Zerdali (ZERV) de la Turquie; le virus Dashli (DASHV) de l'Iran; le virus Toscana (TOSV) d'Algérie. Cette étude a commencé avec la collection de 38,131 phlébotomes de la nature. La méthode de séquençage de nouvelle génération (NGS) à haut débit nous à été utilisée pour l’analyse des génomes complet des virus isoles. En conclusion, cette étude a d'importantes contributions sur phlébovirus négligées. Voici quelques-unes des contributions significatives; (i) ZERV et TORV qui sont étroitement apparentés au virus Tehran (THEV) et le virus Corfou (CFUV), respectivement, ont été isolés depuis 56 et 30 ans des premiers isolements de THEV et CFUV, respectivement, (ii) Détection du virus ADAV un animal domestique et sur quelques sérums humain par test de neutralisation. Ce virus ADAV constitue avec le virus le virus (SALV), le virus Arbia (ARBV), et le virus (ADRV) le groupe Salehabad. Seul le virus ADRV a été détectée dans le liquide cérébro-spinal auparavant landais que avec les autres, aucune preuve pathogène n’a été détectée, (iii) Nous avons découvert la plus récente circulation phlébovirus en Iran après 56 années, (iv) TOSV a été isolé en Algérie pour la première fois et la circulation a été confirmée par séropositivités dans le sérum humain. / Sandfly-borne phlebovirus circulation in Turkey, Iran, and Algeria was investigated. The isolation, genomic characterization, phylogenetic relationships of 6 viruses was presented: Adana virus (ADAV), two strains of Toros virus (TORV), Zerdali virus (ZERV) from Turkey; Dashli virus (DASHV) from Iran; Toscana virus (TOSV) from Algeria. This study has begun with the collection of 38,131 sandflies from nature. The well established, high-throughput methodology was applied for the discovery of viruses including PCR tools and cell culture methods. Next generation sequencing (NGS) technology facilitated to perform complete genome analysis of the isolated viruses. In conclusion, this study has contributions to the neglected sandfly-borne phlebovirus group and filled some gaps about the circulation of these agents in Turkey, Iran, and Algeria. Following are some significant contributions; (i) ZERV and TORV which are closely related to Tehran virus (THEV) and Corfou virus (CFUV), respectively were isolated after 56 and 30 years of the first isolations of THEV and CFUV, respectively, (ii) There was no evidence of the pathogenicity of Salehabad virus (SALV) and Arbia virus (ARBV) except the detection of Adria virus (ADRV) in CSF until ADAV which belongs to the Salehabad serocomplex was detected in domestic animal and very few human sera by neutralization assay, (iii) We have discovered the most recent sandfly-borne phlebovirus circulation in Iran after 56 years, (iv) TOSV was isolated in Algeria for the first time and circulation was confirmed by seropositivities in human sera.