Made available in DSpace on 2015-02-27T17:39:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 46.pdf: 1731488 bytes, checksum: e102af3d41575936ba17db558854d0cc (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / Uma pesquisa foi realizada para testar a aplicação de ferramentas de garantia da qualidade em ensaios de potência da vacina oral contra poliomielite (OPV) e testar novas abordagens para validação de métodos analíticos, levando em conta a maior variabilidade de ensaios biológicos, com a finalidade de traçar o perfil deste ensaio. Foram adotadas duas abordagens para a validação do ensaio: a abordagem Clássica da "International Conference on Harmonization" aplicada aos ensaios biológicos de acordo com as recomendações descritas pela comissão da "Societé Française des Sciences et Techniques Pharmaceutiques" (SFSTP) e a abordagem do Conceito do Erro Total seguindo as recomendações da para esta abordagem também da SFSTP. As principais características avaliadas no estudo de validação, por se tratar de um ensaio quantitativo, foram a Exatidão e a Precisão. O Cpk, um índice gerencial de capacidade de processos, foi calculado para avaliar a capacidade do ensaio de potência e a adequação à regra 4-6-20 foi avaliada. Para cada componente viral da OPV, gráficos de controle da diferença entre os resultados dos dois laboratórios foram utilizados para detectar tendências não aleatórias nos resultados e a média das variâncias entre os resultados obtidos em cada laboratório, por amostra, foram utilizada para calcular o coeficiente de variação geométrico % geral em uma abordagem prática para determinar a reprodutibilidade do ensaio. O ensaio foi considerado Exato e Preciso nas duas abordagens de validação. / Uma pesquisa foi realizada para testar a aplicação de ferramentas de garantia da qualidade em ensaios de potência da vacina oral contra poliomielite (OPV) e testar novas abordagens para validação de métodos analíticos, levando em conta a maior variabilidade de ensaios biológicos, com a finalidade de traçar o perfil deste ensaio. Foram adotadas duas abordagens para a validação do ensaio: a abordagem Clássica da "International Conference on Harmonization" aplicada aos ensaios biológicos de acordo com as recomendações descritas pela comissão da "Societé Française des Sciences et Techniques Pharmaceutiques" (SFSTP) e a abordagem do Conceito do Erro Total seguindo as recomendações da para esta abordagem também da SFSTP. As principais características avaliadas no estudo de validação, por se tratar de um ensaio quantitativo, foram a Exatidão e a Precisão. O Cpk, um índice gerencial de capacidade de processos, foi calculado para avaliar a capacidade do ensaio de potência e a adequação à regra 4-6-20 foi avaliada. Para cada componente viral da OPV, gráficos de controle da diferença entre os resultados dos dois laboratórios foram utilizados para detectar tendências não aleatórias nos resultados e a média das variâncias entre os resultados obtidos em cada laboratório, por amostra, foram utilizada para calcular o coeficiente de variação geométrico % geral em uma abordagem prática para determinar a reprodutibilidade do ensaio. O ensaio foi considerado Exato e Preciso nas duas abordagens de validação.

Diversos trabalhos têm demonstrado a presença de peptídeos bioativos em hemolinfa de insetos e seu potencial uso como agentes terapêuticos. Este trabalho buscou identificar e isolar proteínas da hemolinfa de Lonomia obliqua com ação antiviral. A adição de hemolinfa antes da infecção reduziu o título de poliovírus de 1,5x107 TCID50/mL no cultivo controle para 4x105 TCID50/mL e em aproximadamente 100 vezes o título do sarampo. Após cromatografia de gel filtração, foram obtidos 3 pools de proteína. O pool responsável pela ação antiviral foi identificado (Pool 2), uma vez que reduziu em 87 vezes o título de poliovírus, e de 1,6x106 TCID50/mL para 2,7x105 TCID50/mL o título do sarampo. O Pool 2 foi fracionado por cromatografia de troca iônica. A fração responsável pela ação antiviral da hemolinfa de Lonomia obliqua frente ao poliovírus e sarampo foi identificada (RQ 3-4), esta proteína, de aproximadamente 20 kDa, tem ação sobre vírus envelopado (sarampo) e vírus desprovido de envelope viral (poliovírus). / Several works have demonstrated the presence of bioactive peptides in insect hemolymph and their potential use as therapeutic agents. This work sought to identify and purify proteins from Lonomia obliqua hemolymph with antiviral activity. The analyses demonstrated that the best time for hemolymph addition in the cell culture is before the infection, the poliovirus titer had reduced from 1.5x107 TCID50/mL to 4x105 TCID50/mL and for measles, the virus titer was about 100 times lower than the control. After gel filtration chromatography, the hemolymph was divided into 3 pools of protein. The pool responsible for the antiviral activity was identified (Pool 2), once it reduced to 87 times the poliovirus titer, and the measles titer from 1.6x106 TCID50/mL to 2.7x105 TCID50/mL. The Pool 2 was fractionated by ion-exchange chromatography. The fraction from Lonomia obliqua hemolymph responsible for the antiviral activity was identified - RQ 3-4, this protein of approximately 20 kDa, has antiviral effect on enveloped virus (measles) and on non enveloped virus (poliovirus).

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-17T13:17:37Z No. of bitstreams: 1 Hugo Leonardo2 OK.docx.pdf: 1727936 bytes, checksum: 9b422dec3434e2e337a66ba7ab57e26b (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-17T13:17:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hugo Leonardo2 OK.docx.pdf: 1727936 bytes, checksum: 9b422dec3434e2e337a66ba7ab57e26b (MD5) Previous issue date: 2012-08-30 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os enterovírus humanos ( Picornaviridae ) são vírus de transmissão predominantemente ent érica, possuem distribuição cosmopolita, estando entre os agentes mais prevalentes como causadores de patogenias em humanos. Atualmente, já foram descritos mais de 100 sorotipos para os enterovírus humanos e em grande parte dos casos as infecções associada s são assintomáticas. Surtos e casos esporádicos de enteroviroses são frequentemente notificados em diversas regiões do mundo causando conjuntivite hemorrágica aguda, meningite asséptica, doença de mão pé e boca e poliomielite. A poliomielite é uma doença infecciosa de caráter agudo, que pode assumir desde formas assintomáticas até formas paralíticas (paralisia flácida aguda ou PFA), causada em geral por um dos três sorotipos de poliovírus (PV). O PV selvagem está eliminado do Brasil desde 1989, atualmente sendo restrito a apenas quatro países (Nigéria, Afeganistão, Paquistão, Índia). Entretanto surtos de PFA associados à PV de origem vacinal e a enterovírus não pólio recombinantes tem sido notificados. A caracterização de EVNP é de extrema importância para a investigação da diversidade de vírus co - circulantes, e para relacionar os sintomas clínicos com o sorotipo viral envolvido, incluindo a investigação de vias de transmissão de enterovírus, durante a ocorrência de surtos, além de contribuir para estudos ep idemiológicos e com a evolução de enterovírus. Neste estudo foram analisadas amostras relacionadas à PFAs, utilizando RT - PCR e PCR com o objetivo de identificar quais são as espécies de enterovírus humanos associadas. Os membros da espécie C foram sequenci ados para a identificação de sorotipo. De um total de 190 amostras, 79 eram da espécie C, 78 da espécie B, 32 da espécie A e 1 amostra era correspondente as espécies A e C,não sendo encontradas amostras da espécie D. Entre as amostras da espécie C,58 cor respondiam a PV.Os dados obtidos apresentam similaridades com estudos similares na Europa e Ásia, cobrindo um aspecto pouco observado na epidemiologia dos enterovírus em território brasileiro. / The human enterovirus es (Picornaviridae) are predominantly enteric virus transmission, have a cosmopolitan distribution, being among the most prevalent agents as causing pathogens in humans. Currently, have been described more than 100 serotypes for human enteroviruses and in mo st cases associated infections are asymptomatic. Outbreaks and sporadic cases of enteroviruses are frequently reported in several regions of the world causing acute hemorrhagic conjunctivitis, aseptic meningitis, hand foot and mouth disease and poliomyelit es. Poliomyelites is an infectious disease of acute character, which may take from asymptomatic to paralytic form (acute flaccid paralysis or PFA), usually caused by one of three poliovirus serotypes (PV). The PV is eliminated wild in Brazil since 1989, cu rrently restricted to only four countries (Nigeria, Afghanistan, Pakistan and India). However PFA outbreaks associated with PV source vaccine and recombinant Non - polio enteroviruses has been reported. The characterization of EVNP is extremely important to investigate the diversity of co - circulating viruses, and to correlate clinical symptoms with viral serotype involved, including the investigation of routes of transmission of enteroviruses, during outbreaks, besides contributing for epidemiological studies and the evolution of enteroviruses. We analyzed samples related to AFP, using RT - PCR and PCR in order to identify which species of human enteroviruses associated. Members of the species C were sequenced for identification of serotype. From a total of 190 samples, 79 were of type C, 78 type B, 32 type A and one sample was corresponding for A and C, were not found samples of type D. Among the samples of species C, 58 corresponded to PV.Os data show similarities with similar studies in Europe and Asia, coveri ng a little noticed aspect of the epidemiology of enteroviruses in Brazilian territory.

Diversos trabalhos têm demonstrado a presença de peptídeos bioativos em hemolinfa de insetos e seu potencial uso como agentes terapêuticos. Este trabalho buscou identificar e isolar proteínas da hemolinfa de Lonomia obliqua com ação antiviral. A adição de hemolinfa antes da infecção reduziu o título de poliovírus de 1,5x107 TCID50/mL no cultivo controle para 4x105 TCID50/mL e em aproximadamente 100 vezes o título do sarampo. Após cromatografia de gel filtração, foram obtidos 3 pools de proteína. O pool responsável pela ação antiviral foi identificado (Pool 2), uma vez que reduziu em 87 vezes o título de poliovírus, e de 1,6x106 TCID50/mL para 2,7x105 TCID50/mL o título do sarampo. O Pool 2 foi fracionado por cromatografia de troca iônica. A fração responsável pela ação antiviral da hemolinfa de Lonomia obliqua frente ao poliovírus e sarampo foi identificada (RQ 3-4), esta proteína, de aproximadamente 20 kDa, tem ação sobre vírus envelopado (sarampo) e vírus desprovido de envelope viral (poliovírus). / Several works have demonstrated the presence of bioactive peptides in insect hemolymph and their potential use as therapeutic agents. This work sought to identify and purify proteins from Lonomia obliqua hemolymph with antiviral activity. The analyses demonstrated that the best time for hemolymph addition in the cell culture is before the infection, the poliovirus titer had reduced from 1.5x107 TCID50/mL to 4x105 TCID50/mL and for measles, the virus titer was about 100 times lower than the control. After gel filtration chromatography, the hemolymph was divided into 3 pools of protein. The pool responsible for the antiviral activity was identified (Pool 2), once it reduced to 87 times the poliovirus titer, and the measles titer from 1.6x106 TCID50/mL to 2.7x105 TCID50/mL. The Pool 2 was fractionated by ion-exchange chromatography. The fraction from Lonomia obliqua hemolymph responsible for the antiviral activity was identified - RQ 3-4, this protein of approximately 20 kDa, has antiviral effect on enveloped virus (measles) and on non enveloped virus (poliovirus).

Arrabidaea chica Verlot (Bignoniaceae), conhecida como crajiru, fornece pigmentos vermelhos utilizados pelos índios no Brasil como corante e agente cicatrizante. Este estudo visou otimizar a extração de compostos fenólicos de A. chica e avaliar sua atividade farmacológica. Extratos de A. chica foram obtidos através de tratamento com xilanases de Bacillus pumilus previamente à extração. Os ensaios foram monitorados por CLAE e ESI-MS. O tratamento enzimático forneceu extratos enriquecidos em antocianidinas. Extratos sem tratamento enzimático apresentaram maior teor de antocianosídeos. O estudo farmacológico demonstrou que as atividades anticâncer e antioxidante in vitro estão diretamente relacionadas ao maior teor de agliconas. O ensaio in vitro de indução de crescimento de fibroblastos indicou que o maior teor da aglicona carajurina é inversamente proporcional à ação cicatrizante. Portanto, foi desenvolvida uma metodologia inovadora, através de processos biotecnológicos, para extração de antocianidinas que apresentam propriedades corantes e terapêuticas. / Arrabidaea chica Verlot (Bignoniaceae), known as crajiru, produces red pigments used by Brazilian indians as dye and as healing agent. This study has aimed the optimization of phenolic compounds extraction from A. chica and to evaluate its pharmacological activities. Extracts from A. chica were obtained through treatment with xylanases from Bacillus pumilus before the extraction. The assays were monitored by HPLC and ESI/MS-MS. The enzymatic treatment has produced more concentrated in anthocyanidins extracts. Those obtained without enzymatic treatment have presented higher glycosilated anthocyanins content. The pharmacologic study has demonstrated that the antitumoral and the antioxydant in vitro properties for A. chica are directly related to the higher contents of aglycones. In vitro assay for fibroblasts growth induction has demonstrated that a higher content of carajurin is inversely proportional to the healing action. In conclusion, a novel approach has been developed, through biotechnological process, aiming the extraction of anthocyanidins presenting dye and therapeutic properties.

Arrabidaea chica Verlot (Bignoniaceae), conhecida como crajiru, fornece pigmentos vermelhos utilizados pelos índios no Brasil como corante e agente cicatrizante. Este estudo visou otimizar a extração de compostos fenólicos de A. chica e avaliar sua atividade farmacológica. Extratos de A. chica foram obtidos através de tratamento com xilanases de Bacillus pumilus previamente à extração. Os ensaios foram monitorados por CLAE e ESI-MS. O tratamento enzimático forneceu extratos enriquecidos em antocianidinas. Extratos sem tratamento enzimático apresentaram maior teor de antocianosídeos. O estudo farmacológico demonstrou que as atividades anticâncer e antioxidante in vitro estão diretamente relacionadas ao maior teor de agliconas. O ensaio in vitro de indução de crescimento de fibroblastos indicou que o maior teor da aglicona carajurina é inversamente proporcional à ação cicatrizante. Portanto, foi desenvolvida uma metodologia inovadora, através de processos biotecnológicos, para extração de antocianidinas que apresentam propriedades corantes e terapêuticas. / Arrabidaea chica Verlot (Bignoniaceae), known as crajiru, produces red pigments used by Brazilian indians as dye and as healing agent. This study has aimed the optimization of phenolic compounds extraction from A. chica and to evaluate its pharmacological activities. Extracts from A. chica were obtained through treatment with xylanases from Bacillus pumilus before the extraction. The assays were monitored by HPLC and ESI/MS-MS. The enzymatic treatment has produced more concentrated in anthocyanidins extracts. Those obtained without enzymatic treatment have presented higher glycosilated anthocyanins content. The pharmacologic study has demonstrated that the antitumoral and the antioxydant in vitro properties for A. chica are directly related to the higher contents of aglycones. In vitro assay for fibroblasts growth induction has demonstrated that a higher content of carajurin is inversely proportional to the healing action. In conclusion, a novel approach has been developed, through biotechnological process, aiming the extraction of anthocyanidins presenting dye and therapeutic properties.