Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-01Bitstream added on 2014-06-13T19:02:40Z : No. of bitstreams: 1 paiva_ghrg_dr_botib.pdf: 1701322 bytes, checksum: d1fa5b5c562a2a6ce8ad0d14ab948d4a (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O câncer de próstata (CaP) é a neoplasia mais comumente diagnosticada entre homens no ocidente. Embora tratamentos efetivos para a doença localizada estejam disponíveis atualmente, não há terapia curativa para tumores metastáticos. Além disso, os marcadores diagnósticos utilizados na clínica não conseguem discriminar totalmente a evolução diferencial da doença. Desta forma, o conhecimento das diferenças biológicas entre tumores primários confinados ao órgão e metástases é essencial para o desenvolvimento de novos marcadores e identificação de alvos terapêuticos. Neste estudo a análise baseada na metodologia de HR-CGH cromossômico foi realizada para identificar alterações de ganhos e perdas genômicas em três grupos de amostras: o grupo I, que compreende amostras pareadas de tumor primário e respectivas metástases (11 casos); o grupo II, constituído de pacientes que apresentaram seguimento clínico favorável por mais de 10 anos (5 casos); e o grupo III, constituído por diferentes biópsias do mesmo paciente (5 pacientes com 2 biópsias cada). As amostras foram microdissecadas (amostras a fresco: a partir de lâminas de referência; em blocos de parafina: a laser) e após a obtenção de DNA foram amplificadas (amostras de arquivo: PCR-SCOMP) ou marcadas por nick-translation para a realização de HR-CGH. Os resultados de HR-CGH foram comparados com os dados obtidos da análise de CGH-array num subgrupo de amostras e revelaram concordâncias significativas. Os resultados obtidos na presente investigação revelaram perdas dos cromossomos 1p, 2, 3q, 4p, 5q, 7, 8, 9q, 10q, 11q, 12q, 14q, 15q, 16q, 17q, 18q, 19, 20q e 22q em 80% dos casos avaliados. Além disso, perdas em 17q11.2-25, por exemplo, foram detectadas exclusivamente nos tumores do grupo I e nas suas metástases, e não nos tumores do grupo II, sugerindo que esta alteração deve ser importante... / Prostate cancer (PCa) is the most commonly diagnosed non-cutaneous malignancy and the second leading cause of cancer mortality in men from Occident. Although effective treatments for the localized disease are available, there is no efficient therapy for metastatic tumors. Additionally, clinical diagnostic markers are not able to completely discriminate the differential evolution of the disease. The knowledge of biological differences between localized primary tumors and metastasis can establish new molecular markers and therapeutic targets. In this study, an analysis based on HR-CGH methodology was performed to identify imbalances genomic in three groups of samples: group I, paired samples of primary tumors and its metastasis (11 cases); group II, patients that exhibited favorable follow-up over 10 years (5 cases); and group III, different biopsies from the same patient (5 patients with 2 biopsies each). The tumor samples were submitted to microdissection procedures (fresh samples: from reference slides; paraffin embedded samples: laser), DNA extracted and amplified (archive sample: PCR-SCOMP) or labeled by nick-translation to HR-CGH. The HRCGH results were compared with data obtained from CGH-array analysis of a subgroup of samples and revealed significant concordances. In the present investigation, there were observed losses on chromosomes 1p, 2, 3q, 4p, 5q, 7, 8, 9q, 10q, 11q, 12q, 14q, 15q, 16q, 17q, 18q, 19, 20q and 22q in 80% of the cases. Losses in 17q11.2-25, for instance, were detected exclusively in tumor from group I and its metastasis, but were not found in tumors from group II, suggesting that this alteration must be important in the progression of the disease. Five genes were selected after the comparison between the HR-CGH and CGH-array data. The tumor suppressor genes ARID1A, MTSS1, NME1 and S100A4 and TOP2A (oncogenes) were evaluated by quantitative real time... (Complete abstract click electronic access below)

Introdução: O câncer de próstata (CaP) é uma neoplasia muito freqüente entre os homens em todo o mundo. No Brasil, o estado do Rio Grande do Sul possui uma alta incidência desta neoplasia. A idade, história familiar, diferenças étnicas, exposição aos androgênios e fatores relacionados à dieta constituem-se em fatores de risco para o CaP. O câncer de próstata hereditário está ligado a genes de alta concordância entre os familiares afetados, porém de baixa freqüência na população. A busca por genes que influenciam a carcinogênese prostática e que estejam presentes com maior freqüência na população poderá ajudar na identificação de pacientes com maior chance de desenvolver a neoplasia. Os polimorfismos são variações alélicas de um mesmo gene, resultando em diferenças significativas na expressão de proteínas em diferentes indivíduos. O gene do receptor de androgênios (RA) possui variantes polimórficas localizadas no exon 1. O número de repetições CAG nesta região está inversamente associada a atividade transcricional do receptor de androgênios e com um maior risco de CaP. Objetivos: Verificar a associação entre o número de repetições do polimorfismo CAG do gene do receptor de androgênios e o risco de CaP em uma amostra da população brasileira. Pacientes e métodos: Foram avaliados 50 pacientes com câncer de próstata e 77 controles. Foi realizada a extração do DNA por sangue periférico e a região do gene do RA foi amplificada por reação em cadeia da polimerase (PCR). O produto da PCR foi analisado no seqüenciador ABI3100 Avant e a seqüência do polimorfismo analisada pelo software Genemapper. A análise estatística foi feita através do teste t para amostras independentes, teste de qui-quadrado e análise de regressão linear múltipla. Para variáveis sem distribuição normal foi utilizado o teste U de Wilcoxon-Mann-Whitney. Resultados: A média de repetições CAG foi de 21,58±3,32 nos pacientes e 22,19±3,09 no grupo controle (p=0,28). Variáveis clínicas e anátomo-patológicas também não se correlacionaram com o polimorfismo. A testosterona sérica diferiu significativamente entre os grupos (p<0,001). Conclusão: Estes resultados sugerem que não há correlação entre o número de repetições CAG e o risco de CaP na amostra estudada. Outros fatores, tais como idade de diagnóstico e estadiamento do tumor também não estiveram associados com o polimorfismo no presente estudo. A variação da testosterona sérica precisa ser melhor avaliada em estudos específicos. / Background: Prostate cancer (PCa) is very frequent among men worldwide. In Brazil, Rio Grande do Sul state has one of the greatest incidence of this neoplasia. Age, family history, ethnicity, androgens and diet factors are involved in a higher risk for Pca. Hereditary prostate cancer is linked to high penetrance and low frequency genes in general population. Looking for genetic alterations with higher frequency among individuals could help identify patients under risk of developing PCa. Polymorphisms are allelic variations of a single gene, resulting in significant diferences in proteins expression. The androgen receptor (AR) has polymorphic forms located on exon 1. The CAG repeat length in this region is inversely associated with the AR transcriptional activity and with a higher risk of PCa. Objectives: To verify the association between CAG repeat length and PCa risk in a sample of the Brazilian population. Patients and Methods: We included 50 PCa patients and 77 controls. DNA was extracted from peripheral leucocytes and the AR gene was amplified by PCR. PCR product was analysed with ABI 3100 avant sequencer and Genemapper software. Statistical methods were Student T test, Qui-square test and Linear Regression analysis. For variables without normal distribution, it was used the Wilcoxon-Mann- Whitney U test. Results: CAG mean length was 21,58±3,32 in cases and 22,19±3,09 in control group (p=0,28). Clinical and pathological variables did not correlated with CAG polymorphisms either. Serum total testosterone differed significantly between groups (p<0,001). Conclusion: Our results suggest that there is no correlation between the androgen receptor CAG repeat length and prostate cancer. Other factors, such as age of diagnosis and tumor stage are not associated with this polymorphism in this study. Serum total testosterone variation needs to be better explained in further reports.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2015. / Submitted by Andrielle Gomes (andriellemacedo@bce.unb.br) on 2015-07-01T13:57:13Z No. of bitstreams: 1 2015_CinthiaGabrielMeireles.pdf: 1121380 bytes, checksum: 2b8cfc07567c1725573bf650a4d1e128 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-07-03T14:04:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_CinthiaGabrielMeireles.pdf: 1121380 bytes, checksum: 2b8cfc07567c1725573bf650a4d1e128 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-03T14:04:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_CinthiaGabrielMeireles.pdf: 1121380 bytes, checksum: 2b8cfc07567c1725573bf650a4d1e128 (MD5) / O câncer é uma doença que acomete diferentes órgãos do organismo, com comportamento biológico variável. O adenocarcinoma de próstata corresponde a 10% do total de cânceres. O feocromocitoma é um tumor neuroendócrino derivado de células cromafins que se encontram na medula da glândula supra-renal. Tem sido descrito efeito inibidor da metformina sobre sobrevivência e crescimento celular, in vitro, em algumas linhagens celulares de câncer. O presente estudo tem como objetivo investigar o efeito citotóxico da metformina em linhagens celulares de adenocarcinoma de próstata humano e de feocromocitoma de ratos. Foram utilizadas duas linhagens de adenocarcinoma de próstata humano, LNCaP (andrógeno-sensível) e PC3 (andrógeno-resistente) e células de feocromocitoma, PC12-Adh. Foi utilizado o ensaio de MTT para a determinar a viabilidade celular antes, após tratamentos e na associação de fármacos. Para avaliar se metformina altera o ciclo celular da linhagem PC12-Adh foi realizado ensaio com citometria de fluxo, usando concentrações de 20,85mM de metformina e 8,23μM de sunitinib. Por meio de Western Blot, foi avaliado se a metformina altera a expressão de proteínas pró-apoptóticas. Os resultados mostraram que a metformina inibiu a viabilidade de ambas as linhagens celulares de adenocarcinoma de próstata, LNCaP e PC3. A metformina também inibiu a viabilidade das células PC12-Adh, com efeito de magnitude semelhante ao sunitinib. Não foi observado efeito sinérgico ou potencialização do efeito do sunitinib sobre a inibição da viabilidade celular em células de feocromocitoma, quando foi adicionada metformina. Esse resultado sugeriu possível interação entre os dois fármacos, onde o efeito do sunitinib foi aparentemente impedido quando as células foram tratadas com metformina concomitantemente. O tratamento com metformina na concentração de 20,85mM por 48h não alterou o ciclo celular. Contudo, nessas mesmas condições, houve um aumento da expressão de proteína caspase 3, sugerindo indução de apoptose. Os resultados sugerem que a metformina inibe a viabilidade das células LNCaP de forma mais intensa que das células PC3, sugerindo que esse efeito possa ser mediado pelo receptor de andrógeno. A metformina inibe a viabilidade das células PC12-Ahc, nas concentrações utilizadas, em magnitude semelhante à induzida pelo sunitinib. Observou-se possível interação entre metformina e sunitinib, in vitro, caracterizada pela interferência com o efeito do sunitinib induzida pela adição de metformina nas menores concentrações. A metformina não interfere no ciclo celular das células PC12-Adh após 48 horas de tratamento, porém induz aumento da expressão caspase 3, sugerindo efeito pró-apoptótico. / Cancer is a disease that affects different organs and displays with variable biological behavior. Prostate adenocarcinoma accounts for 10% of all cancers. Pheochromocytoma is a neuroendocrine tumor derived from chromaffin cells situated in adrenal medulla. It has been reported inhibitory effect, in vitro, of metformin on survival and growth of some cancer cell lines. The present study aims to investigate the cytotoxic effect of metformin on human prostate adenocarcinoma and rats pheochromocytoma cell lines. Were used two human prostate adenocarcinoma cells lines, LNCaP (androgen-sensitive) and PC3 (androgen-resistant), and pheochromocytoma cell line PC12-Adh. The MTT assay is used to determined cell viability before and after treatment and metformin with sunitinib combination. To assess whether metformin changes cell cycle of PC12-Adh, the flow cytometry was performed, using metformin 20,85mM and sunitinib 8,23μM in PC12-Adh cells. Western blot was used to determinate if metformin alter the expression of pro-apoptotic proteins. The results show that metformin inhibited the cell viability in both prostate adenocarcinoma cell lines, LNCaP and PC3. Metformin also inhibited PC12-Adh cells viability similarly to sunitinib. There was no change in the inhibition of viability in pheochromocytoma cells induced by sunitinib when metformin was added, suggesting an inhibitory effect of metformin upon suntinib. This result suggested a possible interaction between these two drugs, where the effect of sunitinib was apparently prevented when the cells were concurrently treated with metformin. Treatment with metformin in the concentration of 20,85mM for 48 hours did not alter the cell cycle. However, under these same conditions, there was an increase in caspase-3 protein expression, suggesting apoptosis. The results that metformin inhibits the viability of LNCaP cells more intensely compared to PC3 cells, suggesting that this effect may be mediated by the androgen receptor. Metformin inhibits viability of PC12-Adh cells, in similar concentrations those induced by sunitinib. We propose a possible interaction between metformin and sunitinib in vitro, characterized by interference with the effect of sunitinib induced by the addition of metformin in lower concentrations and although metformin does not interfere with PC12-Adh cell cycle after 48 hours of treatment, it leads to increased expression of caspase 3, suggesting a pro-apoptotic effect.

Orientador: Prof. Dr. Renato Tambara Filho / Co-orientador: Prof. Dr. Antônio Carlos L. Campos / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Clínica Cirúrgica. Defesa: Curitiba, 04/09/2009 / Bibliografia: f. 50-62 / Resumo: INTRODUÇÃO: A neoplasia prostática é a mais incidente nos homens, apresentando um curso clínico variável. Procuram-se métodos que melhor identifiquem estas variáveis, melhorando a acurácia prognóstica e facilitando a escolha do tratamento. OBJETIVOS: Avaliar a expressão imuno-histoquímica do MIB-1, CD34 e p27 no carcinoma localizado de próstata. Correlacionar a expressão desses marcadores com PSA, escore de Gleason, e estádio patológico; e analisar os fatores envolvidos com recidiva tumoral. MATERIAL E MÉTODOS: Foram estudados 100 pacientes submetidos à prostatectomia radical com doença localizada (T1c a T2c), cujos blocos histológicos foram analisados e submetidos ao preparo imuno-histoquímico para os três marcadores. RESULTADOS: Dos 100 pacientes, 26 % recidivaram num seguimento médio de 36,7±18,8 meses. A recidiva estava relacionada de forma significativa com o PSA (p=0,002), escore de Gleason (p=0,006), estádio patológico (p<0,0001) e com a maior expressão do CD34 na área tumoral(p=0,025). A expressão tecidual foi negativa: 63% e 40% respectivamente para o MIB-1 e p27. O MIB-1 e o CD34 correlacionaram-se com o PSA, escore de Gleason, estadiamento patológico e com maior chance de recidiva. O p27 correlacionou-se apenas com o escore de Gleason. CONCLUSÃO: O MIB-1 e o CD34 mostraram-se, similares aos fatores prognósticos essenciais, preditores para a recidiva da doença. / Abstract: INTRODUCTION: Prostate cancer is the most frequent in men, with a variable clinical course. We are searching for methods to better identify these variables, improving prognostic accuracy and facilitating the choice of treatment. OBJECTIVES: To evaluate the immuno-histochemical tissue expression of MIB-1, CD34 and p27 in localized prostate carcinoma. To correlate the expression of these markers with: PSA, Gleason score and pathological stage, and analyze the factors involved with tumor relapse. MATERIAL AND METHODS: We studied 100 patients who went radical prostatectomy with localized disease (T1c to T2c). The surgical specimens were properly prepared and evaluated for expression of three markers immuno-histochemical. RESULTS: Of the 100 patients, 26% relapsed in a median follow up of 36.7 ± 18.8 months. The relapse was related significantly with PSA (p = 0.002), Gleason score (p = 0.006), pathological stage (p <0.0001) and with the highest expression of CD34 in tumor area (p = 0.025). The tissue expression was negative in 63% and 40% respectively for the MIB-1 and p27. The MIB-1 and CD34 correlated with the PSA, the Gleason score and pathological stage and with greater chance of relapse. The p27 correlated only with the Gleason score. CONCLUSION: The MIB-1 and CD34 showed up, similar to the key prognostic factors, to be predictors for disease relapse.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2014. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2014-10-16T17:52:23Z No. of bitstreams: 1 2014_RafaelaSalgadoFontenele.pdf: 2451245 bytes, checksum: d7204757e42ab3fbfadafd3651c181fd (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2014-10-16T17:53:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_RafaelaSalgadoFontenele.pdf: 2451245 bytes, checksum: d7204757e42ab3fbfadafd3651c181fd (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-16T17:53:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_RafaelaSalgadoFontenele.pdf: 2451245 bytes, checksum: d7204757e42ab3fbfadafd3651c181fd (MD5) / O câncer de próstata é a segunda neoplasia mais frequente em homens no mundo e também no Brasil. Os fatores de risco mais consolidados para o seu desenvolvimento são a idade avançada, histórico familiar e fatores ambientais. Um dos fatores ambientais mais estudados é a inflamação, que pode ser desencadeada por agentes infecciosos, hábitos alimentares, mudanças hormonais, alterações fisiológicas como refluxo de urina ou traumas físicos. Entretanto, em alguns casos, amostras histopatológicas da próstata podem apresentar infiltrado inflamatório sem motivo aparente. Neste contexto, a proposta foi avaliar o papel dos mediadores inflamatórios presentes no microambiente inflamatório tumoral e a sua relação com a dinâmica celular do câncer de próstata. Para simular o microambiente inflamatório tumoral, foi utilizado meio condicionado de células mononucleares de sangue periférico humano, estimuladas ou não com moduladores inflamatórios, nas linhagens celulares de câncer de próstata DU145 e LNCaP. Das citocinas avaliadas, foi detectada a secreção de IL-1β e IL-6. A secreção de IL-1β indica que há formação do inflamassoma e ativação de caspase1. Observou-se aumento da expressão do receptor NLRP3 nas linhagens celulares DU145 e LNCaP e também aumento ou diminuição na clivagem de PARP1 dependendo do estímulo inflamatório. Esses dados juntamente com a observação de fragmentação de DNA, indicam que pode estar ocorrendo morte celular por piroptose. O estímulo inflamatório também levou à modulação da expressão de PPAR-γ nas linhagens tumorais, no entanto essa modulação parece não estar correlacionada a nenhum dos outros eventos observados. Quanto às propriedades tumorais, observou-se após estímulos inflamatórios um aumento na população de células tronco tumorais na linhagem DU145 e aumento de células CD44+/CD24+ na linhagem LNCaP, o que indica um maior potencial metastático nessas células. Foi observado também, uma redução da taxa de proliferação celular apenas na linhagem LNCaP e não foram identificadas mudanças significativas na dinâmica do ciclo celular em ambas as linhagens estudadas. Com base nestes resultados podemos sugerir que o microambiente inflamatório exerce um papel regulatório nas linhagens tumorais de próstata DU145 e LNCaP. Esse processo parece estar relacionado à ativação do inflamassoma e consequente secreção IL-1β aumentando a população de células tronco tumorais, o que está diretamente relacionado com o agravo da doença. Desta forma nossos dados sugerem que os processos inflamatórios no câncer da próstata podem levar a eventos de impacto negativo para os portadores da doença, favorecendo fenótipos associados à metástase. Por outro lado, nossos resultados também mostram um provável horizonte a ser explorado no tratamento do câncer de próstata com o uso de agentes anti-inflamatórios adjuvantes aos tratamentos tradicionais. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Prostate cancer is the second leading cause of cancer in men worldwide and also in Brazil. The most well known risk factors for the development of this cancer are advanced age, family history and environmental factors. Inflammation is one of the most studied environmental factors and can be triggered by infections, dietary factors, hormonal changes and others environmental factors such as physical trauma or urine reflux. However, in some cases, histopathological prostate cancer samples can exhibit immune infiltrate without any apparent reason. In this context, our proposal was to evaluate the role of inflammatory mediators observed in the inflammatory tumor microenvironment and its relationship with the prostate cancer cell dynamics. To simulate the inflammatory tumor microenvironment, conditioned medium of human peripheral blood mononuclear cells stimulated or not with inflammatory modulators was used. From the cytokines evaluated, the secretion of IL-1β and IL-6 was detected. The secretion of IL-1β indicates inflammasome assemble and caspase1 activation. We observed increased expression of NLRP3 receptor in DU145 and LNCaP cells and also increase or decrease in PARP1 cleavage depending on the inflammatory stimuli. These data plus the DNA fragmentation detected, indicates that cell death may be occurring by pyroptosis. The inflammatory stimuli also led to modulation of PPAR-γ expression in the prostate cancer cell lines, however this modulation does not appears to be correlated with any of the others analyzed properties. Regarding the tumor properties, after inflammatory stimuli it was observed a population increase of cancer stem cells from DU145 and CD44+/CD24+ phenotype increase in LNCaP cells, which indicates an amplified metastatic potential in these cells. It was also observed in LNCaP, a reduction in cell proliferation rates and no significant changes were identified in the cell cycle dynamics from both cell lines studied. Based on these results we can suggest that the inflammatory microenvironment plays a regulatory role in prostate cancer cell lines. This process seems to be related to the inflammasome activation and consequent IL-1β secretion leading to increased cancer stem cells population, which is directly related to a poor prognostic for this disease. Thus our data indicated that inflammatory processes in prostate cancer might lead to adverse events with negative disease impact for patients, favoring phenotypes associated with metastasis. Furthermore, indirectly our results also suggest that the use of anti-inflammatory drugs as adjuvants to traditional treatments for prostate cancer may improve the patient’s prognostic.

Introdução: O câncer de próstata (CaP) é uma neoplasia muito freqüente entre os homens em todo o mundo. No Brasil, o estado do Rio Grande do Sul possui uma alta incidência desta neoplasia. A idade, história familiar, diferenças étnicas, exposição aos androgênios e fatores relacionados à dieta constituem-se em fatores de risco para o CaP. O câncer de próstata hereditário está ligado a genes de alta concordância entre os familiares afetados, porém de baixa freqüência na população. A busca por genes que influenciam a carcinogênese prostática e que estejam presentes com maior freqüência na população poderá ajudar na identificação de pacientes com maior chance de desenvolver a neoplasia. Os polimorfismos são variações alélicas de um mesmo gene, resultando em diferenças significativas na expressão de proteínas em diferentes indivíduos. O gene do receptor de androgênios (RA) possui variantes polimórficas localizadas no exon 1. O número de repetições CAG nesta região está inversamente associada a atividade transcricional do receptor de androgênios e com um maior risco de CaP. Objetivos: Verificar a associação entre o número de repetições do polimorfismo CAG do gene do receptor de androgênios e o risco de CaP em uma amostra da população brasileira. Pacientes e métodos: Foram avaliados 50 pacientes com câncer de próstata e 77 controles. Foi realizada a extração do DNA por sangue periférico e a região do gene do RA foi amplificada por reação em cadeia da polimerase (PCR). O produto da PCR foi analisado no seqüenciador ABI3100 Avant e a seqüência do polimorfismo analisada pelo software Genemapper. A análise estatística foi feita através do teste t para amostras independentes, teste de qui-quadrado e análise de regressão linear múltipla. Para variáveis sem distribuição normal foi utilizado o teste U de Wilcoxon-Mann-Whitney. Resultados: A média de repetições CAG foi de 21,58±3,32 nos pacientes e 22,19±3,09 no grupo controle (p=0,28). Variáveis clínicas e anátomo-patológicas também não se correlacionaram com o polimorfismo. A testosterona sérica diferiu significativamente entre os grupos (p<0,001). Conclusão: Estes resultados sugerem que não há correlação entre o número de repetições CAG e o risco de CaP na amostra estudada. Outros fatores, tais como idade de diagnóstico e estadiamento do tumor também não estiveram associados com o polimorfismo no presente estudo. A variação da testosterona sérica precisa ser melhor avaliada em estudos específicos. / Background: Prostate cancer (PCa) is very frequent among men worldwide. In Brazil, Rio Grande do Sul state has one of the greatest incidence of this neoplasia. Age, family history, ethnicity, androgens and diet factors are involved in a higher risk for Pca. Hereditary prostate cancer is linked to high penetrance and low frequency genes in general population. Looking for genetic alterations with higher frequency among individuals could help identify patients under risk of developing PCa. Polymorphisms are allelic variations of a single gene, resulting in significant diferences in proteins expression. The androgen receptor (AR) has polymorphic forms located on exon 1. The CAG repeat length in this region is inversely associated with the AR transcriptional activity and with a higher risk of PCa. Objectives: To verify the association between CAG repeat length and PCa risk in a sample of the Brazilian population. Patients and Methods: We included 50 PCa patients and 77 controls. DNA was extracted from peripheral leucocytes and the AR gene was amplified by PCR. PCR product was analysed with ABI 3100 avant sequencer and Genemapper software. Statistical methods were Student T test, Qui-square test and Linear Regression analysis. For variables without normal distribution, it was used the Wilcoxon-Mann- Whitney U test. Results: CAG mean length was 21,58±3,32 in cases and 22,19±3,09 in control group (p=0,28). Clinical and pathological variables did not correlated with CAG polymorphisms either. Serum total testosterone differed significantly between groups (p<0,001). Conclusion: Our results suggest that there is no correlation between the androgen receptor CAG repeat length and prostate cancer. Other factors, such as age of diagnosis and tumor stage are not associated with this polymorphism in this study. Serum total testosterone variation needs to be better explained in further reports.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:52:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4551_1.pdf: 792198 bytes, checksum: 66dc0ae441af627e69db8dd1d8cfdc94 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Criptatos de lantanídeos são amplamente usados como marcadores luminescentes e lectinas têm sido utilizadas para investigar e caracterizar resíduos de carboidratos em glicoconjugados. Neste trabalho Con A foi conjugada ao criptato de Európio (crip(Eu)) para ser usado como marcador em histoquímica para a identificação de resíduos de glicose/manose em tecido prostático humano transformado (hiperplasia prostática benigna e carcinoma prostático). Os resultados indicaram que a Con A-crip(Eu) apresentou o mesmo padrão de marcação da Con A-FITC para o estroma e células epiteliais de glândulas prostáticas observadas por microscopia confocal de fluorescência. Os tecidos foram previamente incubados com solução de Azul de Evans para supressão da fluorescência intrínseca do tecido depois da incubação com a lectina advinda, confirmando que a fluorescência deve-se ao crip(Eu) ou FITC. A manutenção das propriedades luminescentes e o padrão de marcação da Con A-crip (Eu) quando comparada aos da Con A-FITC, indicaram que o crip(Eu) pode ser utilizado como um marcador histoquímico eficiente para tecido prostático

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:24:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1415_1.pdf: 2099434 bytes, checksum: 46d2f0d4ffefe64a9e17aec4a842d622 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Secretaria de Saúde de Pernambuco / Introdução: O câncer de próstata, atualmente, é o câncer de maior incidência em homens e o segundo em causa de morte. Com o advento do PSA na década de 80, houve um aumento do número de casos diagnosticados, sendo na maioria, doença localizada. A prostatectomia radical, cirurgia em que se extirpa próstata e vesículas em monobloco e se anastomosa a uretra à bexiga, é o tratamento mais empregado para doença localizada. Entre as suas complicações, a incontinência urinária é a mais temida e a de maior impacto na qualidade de vida. Tem sua fisiopatologia na deficiência esfincteriana e sua ocorrência é muito variável. Menos de 5% dos pacientes irão precisar de tratamento intervencionista. O esfíncter artificial AS 800 é o dispositivo mais usado, estudado e com melhores resultados até o momento. Pelo alto custo, complexidade e taxas de reoperações altas ainda não é o dispositivo ideal. Outras modalidades de tratamento ainda estão sendo usadas, como as injeções periuretrais e os slings masculinos. Este estudo teve como objetivo avaliar retrospectivamente os resultados da implantação do Constrictor Peri-uretral em pacientes com incontinência urinária pós-prostatectomia (IUPP). Material e Métodos: Foram estudados 56 homens com IUPP grave, com média de idade de 68,5 anos. Cinqüenta e um tinham IUPP por cirurgia radical, com o dispositivo implantado via perineal na uretra bulbar e cinco por adenomectomia (hiperplasia prostática benigna), cuja implantação se deu por via abdominal ao nível do colo vesical. O tempo de seguimento médio foi de 82,2 meses. Resultados: Vinte e dois pacientes (39,28%) ficaram socialmente continentes (0 a 1 absorvente ao dia) e 34 (60,72%) ficaram incontinentes (demais achados). As complicações observadas foram: erosão uretral em 15 (26,78%); defeito mecânico em dois (3,5%); infecção em dois (3,5%); fístula urinária em um (1,7%); estenose uretral em um (1,7%). Vinte e três pacientes necessitaram remover o dispositivo (41,07%). A taxa de sucesso (continentes e com dispositivo in situ) foi de 30,35%. Conclusão: O Constrictor Periuretral não se mostrou eficaz no tratamento da IUPP severa com resultados a longo prazo, na presente série

Submitted by Priscila Nascimento (priscila.nascimento@bio.fiocruz.br) on 2016-04-11T17:27:57Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado em Oncologia - INCa Ana Emília Goulart.pdf: 3332973 bytes, checksum: abe7cedda85b0558a252f168374ab1f4 (MD5) / Approved for entry into archive by Priscila Nascimento (priscila.nascimento@bio.fiocruz.br) on 2016-04-11T17:28:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado em Oncologia - INCa Ana Emília Goulart.pdf: 3332973 bytes, checksum: abe7cedda85b0558a252f168374ab1f4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-11T17:28:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado em Oncologia - INCa Ana Emília Goulart.pdf: 3332973 bytes, checksum: abe7cedda85b0558a252f168374ab1f4 (MD5) / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Tecnológico em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Introdução: O PCA3 é um RNA não codificante (ncRNA), expresso especificamente na próstata, estando envolvido no controle da sobrevivência de células de carcinoma de próstata (CaP), através da via de sinalização do receptor de androgênio (AR). Objetivo: Investigar se diversos genes relacionados ao câncer – incluindo os envolvidos na Transição Epitelial Mesenquimal (EMT), os que apresentam potencial stemness e os co-reguladores do AR – podem estar envolvidos no processo de resposta ao silenciamento do PCA3. Além disso, objetivamos promover o silenciamento estável do PCA3 através da construção de um vetor lentiviral carreando short hairpin RNA (shRNA) específico para este ncRNA, vislumbrando estratégias terapêuticas para o CaP. Metodologia: Empregamos small interfering RNA (siRNA) ou shRNA com expressão baseada em vetores lentivirais para diminuir a expressão de PCA3 em células LNCaP e avaliar os efeitos deste silenciamento na sobrevivência destas células. Para isto, analisamos por qRT-PCR a expressão do PCA3 e de diversos genes relacionados ao câncer. Utilizamos microscopia confocal para analisar a expressão da proteína vimentina. Empregamos citometria de fluxo para verificar o percentual de células LNCaP GFP+ e, azul de tripan para avaliar o número de células viáveis, após o silenciamento estável do PCA3. Resultados: Dentre os co-reguladores do AR, ARA 70, ARA 54, Smad3 e EBP1 apresentaram expressão aumentada nas células LNCaP interferidas com siPCA3 em relação às células LNCaP interferidas com siScrbl, enquanto Smad 4 e ciclina D1 apresentaram expressão diminuída. Dentre 84 genes relacionados ao câncer, 16 apresentaram expressão alterada em células LNCaP- siPCA3 em relação ao controle. Destes, 30% codificam moléculas de transdução de sinais e fatores de transcrição. Observou-se expressão aumentada de E-caderina, Claudina-3, Citoqueratina-18, Snail, Twist e Slug em células LNCaP -siPCA3 em relação ao controle, enquanto observou-se expressão diminuída de Claudina-4, Citoqueratina-8 e Vimentina. O padrão de marcação de vimentina foi similar em células LNCaP – siPCA3 e células LNCaP – siScrbl. Não foi detectada a expressão de genes com potencial stemness nas condições testadas. Células transduzidas com vetores lentivirais carreando shPCA3 apresentaram diminuição estável da expressão do PCA3. Foi observada redução estável de cerca de 60% de células LNCaP GFP+ transduzidas com shPCA3, além de redução no número de células viáveis. Conclusão: O silenciamento do PCA3 reduz o número de células viáveis, através de um processo que envolve moléculas de transdução de sinais e fatores de transcrição que podem orquestrar a sobrevivência das células de CaP. A diminuição no número de células viáveis após a transfecção com siPCA3 parece não ser modulada pelo programa EMT clássico, embora a reversão parcial deste programa possa estar regulando a diminuição da sobrevivência celular induzida por siPCA3. A desregulação da expressão de coreguladores do AR observada pode estar envolvida na inibição da expressão dos genes alvo do AR. Nossos dados sugerem que este ncRNA desempenha papel regulador na transcrição gênica, sendo capaz de modular a expressão de genes de diversas vias de sinalização relacionadas ao câncer. Nossos resultados sugerem ainda que a redução estável do PCA3 apresenta potencial aplicação em estratégia terapêuticas que visem modular negativamente a sobrevivência das células de CaP. / Introduction: PCA3 is a prostate specific non coding RNA (ncRNA), involved in the control of prostate cancer (PCa) cell survival, through modulating androgen receptor (AR) signaling. Objective: In order to better characterize the molecular mechanisms by which PCA3 is controlling LNCaP cell survival, we aimed to investigate whether several cancer related genes, including those involved in epithelial-mesenchymal transition (EMT), stemness potential and AR co-regulators could be involved in this process in response to PCA3 downregulation. Moreover, we aimed to promote PCA3 stable silencing through a lentiviral vector containing a PCA3 short hairpin RNA (shRNA) specific sequence. Methodology: We used small interfering RNA (siRNA) or lentivirus vectorbased shRNA to downregulate PCA3 expression and evaluate the effects of this ncRNA knockdown on LNCaP cell survival. After PCA3 downregulation, cells were analyzed by qRT-PCR to investigate PCA3 and several cancer related genes expression. Confocal microscopy was performed to analyze vimentin expression. Flow cytometry was performed to analyze the percentage of LNCaP GFP positive cells and trypan blue staining to analyse the number of viable cells after PCA3 stable silencing. Results: Among AR co-regulators genes investigated, ARA70, ARA54, Smad 3 and EBP1 were upregulated in siPCA3- transfected cells in relation to scramble sequence LNCaP transfected cells, while Smad 4 and cyclin D1 were downregulated. We found that among 84 cancer-related genes tested, 16 were differentially expressed in LNCaP siPCA3-transfected cells when compared to transfected cells with a scramble sequence. Of these, 30% are genes coding for signal transduction molecules and transcription factors. Gene expression profile of EMT-related genes revealed that E-cadherin, Claudin-3, Cytokeratin-18, Snail, Twist and Slug are upregulated in LNCaP siPCA3-transfected cells compared to control, while Claudin-4, Cytokeratin-8 and Vimentin are downregulated. Vimentin expression staining patterns were similar between LNCaP siPCA3-transfect cells and control. Expression of stemness markers were not detected in these tested conditions. LNCaP cells transduced with lentiviral vectors carrying the GFP gene and shPCA3 stably dowregulated PCA3 expression, producing a reduction of 60% of LNCaP GFP+ cells compared to shScrbl transduced or non-transduced LNCaP cells. In addition, the number of viable cells was reduced after PCA3 stable silencing. Conclusion: PCA3 downregulation by RNAi leads to a loss of viability, through a process that involves key signal transduction molecules and transcription factors that could orchestrate PCa cells survival. Our results also suggested that the decrease in the number of LNCaP viable cells, observed after siPCA3 transfection, seems to don´t be modulated by the classical EMT program, although a partial reversion of this program could regulate the reduction of cell survival induced by siPCA3. Observed deregulated expression of AR co-regulators could be involved in the inhibition of the AR target genes expression. Our data suggest that that this ncRNA perform a regulatory role in gene expression, being able to modulate gene expression of several signaling pathways related to cancer. Moreover, our results suggest that the stable downregulation of PCA3 expression shows potential as a PCa therapeutic approach by negatively modulation cell survival.

INTRODUÇÃO: O câncer de próstata é responsável por 15% dos casos novos de câncer que acometem os homens e pela 5ª causa de morte. As técnicas minimamente invasivas, sobretudo a cirurgia robótica tornou-se a técnica comumente empregada nos Estados Unidos. Muitos artigos tentam demonstrar a curva de aprendizado necessária para a estabilização dos resultados, mas a implementação de novas tecnologias passa por diversos desafios, além da avaliação de seus resultados e dos custos, o que em países em desenvolvimento pode ter um importante impacto no sistema de saúde. OBJETIVO: Avaliar a curva de aprendizado da prostatectomia radical laparoscópica robótica assistida (PRRA) para o tratamento do câncer de próstata, de acordo com a continência urinária, a potência sexual, o tempo cirúrgico e o controle oncológico. MÉTODOS: Duzentos pacientes com neoplasia de próstata localizada submetidos à PRRA por um único cirurgião foram divididos em quatro grupos de acordo com a sequência das cirurgias. Foram avaliados os dados intra-operatórios, como: tempo cirúrgico, perda sanguínea estimada e as margens cirúrgicas. Também durante o pósoperatório foram avaliadas a potência (IIEF) e a continência (ICIQ). RESULTADOS: Os pacientes apresentaram idade média de 60,6 anos (59,72-61,61), volume prostático ao toque retal de 40 gramas e valor do PSA 6,95 ng/ml (5,79-8,10) semelhantes em todos os grupos (p > 0,05). A biópsia prostática pré-operatória mostrou diferença no escore de Gleason e no tamanho da próstata, sendo que o escore 6 foi menos frequente no grupo 4, representado por 23 pacientes (46%) e no grupo 1, com 39 pacientes (78%) (p < 0,01). Já o tamanho prostático avaliado pelo USTR foi de 39,6 gramas (29,75-48,7) no grupo 4 e 30,5 gramas (23,0-38,15) no grupo 2. A curva de aprendizado estabelecida demonstrou uma diminuição no tempo cirúrgico de 157 minutos (145-170) no grupo 1, para 132 minutos (119-140) no grupo 2 (p < 0,01). A perda sanguínea estimada também se reduziu aproximadamente pela metade: de 395 ml (250-500) no grupo 1, para 200 ml (150-250) no grupo 3 (p < 0,01). As margens positivas reduziram de 16% para apenas 8%, mas se mostraram estatisticamente semelhantes (p=0,236). A capacidade de penetração com doze meses praticamente dobrou de 38% (19 pacientes) no grupo 1 para 80% (40 pacientes) no grupo 4 (p=0,003). A continência avaliada com um ano mostrou-se melhor no grupo 4 (98%) quando comparado aos pacientes do grupo 1 (94%) (p=0,001). As complicações foram estatisticamente semelhantes entre os quatro grupos (p = 0,668). A análise da recidiva bioquímica não demonstrou diferença (p > 0,05). CONCLUSÕES: A curva de aprendizado da PRRA é variável de acordo com o parâmetro a ser avaliado, e apesar do equipamento e da tecnologia, à medida que se aumenta a experiência do cirurgião, melhores resultados são obtidos. O tempo de cirurgia e o sangramento estabilizaram-se, respectivamente, após 50 e 100 PRRA. A potência e a continência, por sua vez, estabilizaram-se após 150 PRRA. É importante ressaltar que o controle oncológico necessita de um período de acompanhamento mais longo para ser avaliado / BACKGROUND: Prostate cancer is responsible for 15% of new cases of male cancer and is the fifth leading cause of death. Minimally invasive and mainly, robotic surgery technique became the technique most widely utilized in the United States. Many articles have tried to demonstrate the required learning curve to achieve the plateau. Although, new techniques implementation go through many challenges besides the evaluation of its results, costs also became an issue, which may impact in developing countries health system. OBJECTIVE: We aim to evaluate the learning curve of robot-assisted radical prostatectomy (RARP) for the treatment of prostate cancer, according to continence, potency, surgical time and oncologic control. METHODS: Two hundred patients with localized prostate cancer that underwent RARP by a single surgeon were divided into four groups according to its surgical sequence. Intraoperative data, such as surgical time, estimated blood loss and margins were recorded. Also postoperative functional parameters as continence and potency were gathered using validated questionnaires (ICIQ and IIEF). RESULTS: Patients mean age were 60.6 years (59.72- 61.61), mean prostate volume at digital rectal examination was 40 grams and PSA value 6.95 ng/ml (5.79-8.10) were similar in all groups (p > 0.05). Pre-operative prostate biopsy showed difference in Gleason score and prostate size. Gleason score 6 was less frequent in group 4, 23 patients (46%), than group 1, 39 patients (78%)(p <0.01) and prostate size at TRUS was 39.6 grams (29.75- 48.7) in group 4 and 30.5 grams (23.0- 38.15) in group 2. The established learning curve showed a reduction on surgical time from 157 minutes (145-170) in group 1 to 132 minutes (119-140 min) in group 2 (p < 0.01). The estimated blood loss also decreased almost to half, from 395 ml (250-500) in group 1 to 200 ml (150-250) in group 3 (p < 0.01). Positive margins decreased from 16% to only 8 %, but were statistically similar (p=0.236). Nineteen patients (38%) could have sexual intercourse at an year after the surgery, in the first group but latest, in the fouth group, it doubled to 40 patients (80%) (p=0.003). Also continence improved in group 4(98%) when compared with group 1 (94%) (p=0.001). Complications were similar between groups (p=0.668). Biochemical recurrence also showed no difference (p > 0.05). CONCLUSIONS: Therefore, the learning curve of the RARP is variable according to the evaluated parameter and obviously, despite the equipment and technology, the increase of surgical experience the best the outcome. Surgery time plateau were achieved at 50 RARP, estimated blood loss stabilized after 100 surgeries, sexual function and urinary continence after 150 RARP. Cancer control requires a longer follow-up period for review