Made available in DSpace on 2014-06-11T19:34:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-23Bitstream added on 2014-06-13T20:25:35Z : No. of bitstreams: 1 rodrigues_j_dr_araiq.pdf: 2215400 bytes, checksum: 0fd02af147bd646153b8c1d9da06c642 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo desse trabalho foi a investigação da composição química de plantas do Cerrado, aplicando técnicas que permitam uma análise quali e quantitativa rápida e eficaz. As espécies estudadas neste projeto foram Miconia rubiginosa e Miconia stenostachya, pertencentes à família Melastomataceae. As espécies foram coletadas no Estado de São Paulo e os infusos foram preparados e particionados com acetato de etila e água. A fração acetato de etila da M. rubiginosa foi fracionada por Cromatografia em Contracorrente de Alta Velocidade (HSCCC), sendo isolados os compostos (-)-(2R,3R)-epicatequina (Mr1), casuarictina (Mr2), canferol-3-O-β-galactopiranosídeo (Mr3) e schizandrisídeo (Mr4). A fração acetato de etila da M. stenostachya foi fracionada por cromatografia de permeação em gel utilizando Sephadex LH-20, que possibilitou o isolamento da (+)-(2R,3S)-4’-O-metilgalocatequina (Ms1), (-)-(2R,3R)-4’-O-metilepigalocatequina (Ms2), miricetina-3-O-α-rhamnopiranosídeo (Ms3) e (-)-(2R,3R)-epicatequina (Ms4). Foram desenvolvidos métodos de separação dos enantiômeros da naringenina e catequinas por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência acoplada a detectores de Dicroísmo Circular e Arranjo de Diodos (HPLC-CD-DAD). Os métodos desenvolvidos forneceram separação adequada com boa resolução. Foram obtidos os espectros de dicroísmo circular (CD) de todas as substâncias isoladas, permitindo a identificação dos enantiômeros. Uma metodologia de clean-up foi desenvolvida para a preparação de amostras para análise por cromatografia quiral. O método que utiliza cartucho de C18 (STRATA Phenomenex®) foi o que apresentou melhor seletividade. O método desenvolvido no HPLC-CD-DAD permitiu identificar a (-)-(2R,3R)-epicatequina no infuso de M. rubiginosa. O mesmo método foi aplicado para investigar a espécie Maytenus obtusifolia... / The objective of this project was to investigate the chemical composition of Cerrado plants, using techniques that allow a quick and efficient qualitative and quantitative analysis. In this project we studied the species Miconia rubiginosa and Miconia stenostachya which belong to the Melastomataceae family. Miconia species were collected at São Paulo State and water infusions were prepared and partitioned with EtOAc and water. The ethyl acetate fraction of M. rubiginosa was fractioned by High Speed Countercurrent Chromatography (HSCCC), and afforded (-)-(2R,3R)-epicatechin (Mr1), casuarictin (Mr2), kaempferol-3-O-β-galactopyranoside (Mr3), and schizandriside (Mr4). The ethyl acetate fraction of M. stenostachya was submitted to gel permeation chromatography over Sephadex LH-20, that led to the isolation of (+)-(2R,3S)-4'-O-methylgallocatechin (Ms1), (-)-(2R,3R)-4'-O-methylepigallocatechin (Ms2), myricetin-3-O-α-rhamnopyranoside (Ms3), and (-)-(2R,3R)-epicatechin (Ms4). Methods were developed for the enantiomeric separation of naringenin and catechins by High Performance Liquid Chromatography with Circular Dichroism and Diode Array Detectors (HPLC-CD-DAD). The developed methods provided good separation and resolution. CD spectra of all these substances were obtained, allowing the identification of the enantiomers. A clean-up methodology was developed for the preparation of plant samples previous to the chiral HPLC analysis. The method using C18-cartridge (Phenomenex STRATA®) showed the best selectivity. The method developed using HPLC-CD-DAD allowed to identify (-)-(2R,3R)-epicatechin in the infusion of M. rubiginosa. The same method was applied to investigate the commonly used... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-09-24Bitstream added on 2014-06-13T20:26:04Z : No. of bitstreams: 1 zanardi_gj_dr_araiq.pdf: 7757680 bytes, checksum: 124090a2cfedea428566b448f77acc17 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho descreve o isolamento de 43 fungos endofíticos associados à espécie vegetal Senna spectabilis, e a triagem química e biológica destes. Os extratos brutos em AcOEt produzidos pelos fungos foram avaliados quimicamente por CCDC, CLAE-DAD e RMN de 1H, e submetidos a bioensaios para avaliação da potencialidade antifúngica, antioxidante e anticolinesterásica, onde se mostram promissores. A partir dos resultados obtidos os fungos Myrothecium gramineum e Acremonium sp. foram selecionados para crescimento em escala ampliada, em meio de cultivo MBD, visando a obtenção do extrato bruto para isolamento e determinação estrutural dos metabólitos produzidos. Nesta etapa foram utilizados dois modos de incubação (estático e sob agitação) para avaliação da influência do modo de crescimento na produção metabólica, evidenciando que não ocorreram mudanças significativas na produção dos metabólitos secundários. Do extrato bruto obtido de M. gramineum foi isolada a Verrucarina A, como um precipitado, durante a solubilização do extrato em MeOH. O sobrenadante foi então submetido a fracionamento cromatográfico e levou ao isolamento de 3 dicetopiperazinas, sendo a ciclo (Pro-Tyr), ciclo (L-Pro-L-Leu) e a ciclo(D-Pro-D-Phe), e 4 tricotocenos, a Verrucarina A (já isolada como precipitado), Roridina A e Isororidina A e a Verrucarina L. Durante o processo de concentração para a obtenção do extrato bruto de Acremonium sp., ocorreu a formação de cristais em forma de filetes que ficaram aderidos ao balão. Os cristais foram separados e identificados como a Citocalasina D. O extrato bruto resultante da separação destes cristais foi submetido a fracionamento cromatográfico levando ao isolamento de 7 substâncias: uma xantona (Fusaridina), 4 isocumarinas [(R)-8-metoxi-meleina; (3S, 4S)-5-carbometoxi-4-hidroximeleína; (3R)-5-carbometoximeleina e (3S)-5-carboetoxi-mele... / This work reports the isolation of 43 endophytic fungi associated with Senna spectabilis, and the chemical and biological screening of their extracts. The AcOEt crude extracts produced by fungi were submitted to chemical analysis by TLC, DAD-HPLC, NMR and bioassays to evaluation of antifungal, antioxidant and anticholinesterase potential, which showed promising. The results enabled us to select the fungi Myrothecium gramineum and Acremonium sp. to growth on a large scale for isolation and structural determination of metabolites produced. The fungal strains were cultivated in liquid media PDB to obtaining the crude extracts. In this stage, we used two modes of incubation (static mode and under agitation), to evaluate the influence of the growing mode in production of the secondary metabolites, showing that there were no significant changes in metabolic production. The crude extract of M. gramineum yielded the substance Verrucarin A, as a white precipitated during solubilization of the extract in MeOH. The supernatant was fractioned by CC and preparative HPLC yielding three diketopiperazines [(cicle (Pro-Tyr), cicle (L-Pro-L-Leu) and cicle (D-Pro-D-Phe)] and four trichothecenes [Verrucarin A (already isolated as substance), Roridin A and Isororidin A and Verrucarin L. During the process of concentration of solvents to obtain crude extract of Acremonium sp., there was the formation of crystals in the form of fillets that were attached to the balloon. The crystals were separated and identified like Citocalasin D. The resulting crude extract was submitted to chromatographic fractionation yielding seven substances: one xanthone [Fusaridin, four isocoumarins [(R)-8-methoxi-mellein, (3S, 4S)-5-carbomethoxi-4-hydroximellein, (3R)-5-carbomethoximellein and (3S)-5-carboethoxi-mellein] and the griseofulvin and 7-dechlorogriseofulvin. The substances (3S, 4S)-5-carbomethoxi-4-hydroximellein... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-04-20Bitstream added on 2014-06-13T19:24:30Z : No. of bitstreams: 1 arantes_gm_dr_araiq.pdf: 3204389 bytes, checksum: 943381dc6f7b8ec6f43d6e41ad7b3cd8 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A família Fabaceae é subdividida em 3 subfamílias: Faboideae, Caesalpinoideae e Mimosoideae, que englobam mais de 700 gêneros e 18000 espécies, bem distribuídas nas regiões tropicais e subtropicais. Inclui espécies de alta relevância econômica, como a soja, feijão, cerejeira, angelim e sucupira, além do pau-brasil, de importância histórica para o Brasil. Neste trabalho, os extratos etanólicos das folhas de Sclerolobium aureum, S. denudatum e S. paniculatum mostraram forte potencial antioxidante, sendo selecionados para investigação fitoquímica detalhada. O fracionamento cromatográfico destes extratos evidenciou sua composição química, destacando-se a presença de esqualeno, tocoferóis e lupenona, identificados por CG-EM, predominantes nas frações de baixa polaridade. O extrato hidroalcoólico de S. aureum foi submetido a etapas de purificação, incluindo o uso de CLAE-UV-DAD, evidenciando a presença majoritária de ácido gálico, flavonoides monoglicosilados e catequina, identificados por RMN, EM e UV. Os extratos hidroalcoólicos de S. denudatum e S. paniculatum foram submetidos a partição líquido-líquido e as frações resultantes foram analisadas por CLAE-UV-DAD e CLAE-EM-EM para identificação dos seus constituintes por desreplicação, ou seja, evitando-se procedimentos de purificação de substâncias conhecidas. Esta estratégia permitiu conhecer os metabólitos secundários das três espécies, que apresentaram perfis químicos semelhantes com a predominância de flavonoides monoglicosilados. As frações semipurificadas e substâncias isoladas mostraram elevado potencial de sequestro de radicais livres frente ao DPPH, destacando-se a presença de antioxidantes lipofílicos e hidrofílicos, atrativa para aplicações em cosméticos. Adicionalmente, foi observado potencial imunomodulador... / Fabaceae family comprises 3 subfamilies: Faboideae, Caesalpinoideae and Mimosoideae, with more than 700 genera and 18000 species, widespread in tropical and subtropical regions. It includes economically important species as soybean, beans, angelim, sucupira, in addition to pau-brasil (Caesalpinea echinata), which has historical importance in Brazil for its wood pigments. In this work, ethanol extracts of Sclerolobium aureum, S. denudatum and S. paniculatum leaves were investigated and showed strong antioxidant potential, and were selected for further investigation. Their chromatographic fractionation evidenced the presence of squalene, tocopherols and lupenone as major compounds in low polarity fractions, by GC-MS analysis. The hydroalcoholic extract of S. aureum was submitted to purification procedures, including the use of HPLC-UV-DAD, which evidenced gallic acid, flavonoid monoglucosides and catechin as major compounds, identified mainly by NMR, MS and UV techniques. HPLC-UV-DAD and LC-MS-MS analysis were further carried out on the hydroalcoholic extract of S. denudatum and S. paniculatum, leading to the identification of their major constituents by dereplication, avoiding the purification of known compounds. Such strategy evidenced a similar chemical profile for the three Sclerolobium species, with flavonoid monoglucosides as major compounds. Strong free radical scavenging potential was observed for the fractions and isolated compounds towards DPPH, evidencing the presence of lipophilic and hydrophilic antioxidants, which might be important for cosmetics development. In addition, the immunomodulatory potential of the hexane and ethyl acetate fractions from S. denudatum were evidenced through the dose-dependent inhibition of nitrite release by pre-treated macrophages, which might... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-08-17Bitstream added on 2014-06-13T20:26:07Z : No. of bitstreams: 1 cafeu_mc_dr_araiq.pdf: 2687839 bytes, checksum: 6f78bffb8a9f427b48e9b75f8cda9db6 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho descreve a triagem de 21 fungos endofíticos associados a espécies vegetais de Cerrado e Mata Atlântica. Os extratos brutos fornecidos por estes fungos foram avaliados quimicamente (CLAE e RMN1H) e submetidos a bioensaios para avaliação da potencialidade antifúngica, antioxidante e anticolinesterásica, onde se mostraram promissores. Após esta triagem, os fungos Xylaria sp. E Colletotrichum crassipes, associados a Casearia sylvestris, foram selecionados para o estudo químico/biológico. Estes fungos foram cultivados nos meios líquido (MDB) e sólido (milho) para obtenção dos extratos brutos. O extrato bruto de Xylaria sp. em milho foi submetido a fracionamento cromatográfico e levou ao isolamento da griseofulvina, 7-desclorogriseofulvina e citocalasina B, enquanto que o extrato obtido do meio líquido conduziu ao isolamento da citocalasina D, citocalasina C e 5-carbóxi-6-hidroxi-3-metil-3,4- diidroisocumarina. Após fracionamento do extrato bruto do endófito C. crassipes no meio líquido MDB foram isoladas 8 substâncias da classe de dicetopiperazinas, N-(2-feniletil)acetamida, tirosol e as substâncias inéditas 1-hidroxi-1-feniletil-tirosol e (6-metil-3- (feniletóxi)-1,4-dioxan-2-il)metanol. Algumas substâncias puras foram submetidas à bioensaios e apresentaram potencial bioatividade frente aos fungos fitopatogênicos Cladosporium cladosporioides e C. sphaerospermum e nos ensaios antioxidante e anticolinesterásico. As citocalasinas D e B isoladas durante este trabalho e outras 5 citocalasinas isoladas anteriormente foram submetidas à avaliação da citotoxicidade utilizando linhagens de células de adenocarcinoma murino e se mostraram muito ativas. Os fungos endofíticos Xylaria sp. e C. crassipes foram utilizados em biotransformação do substrato 4-etilciclohexanona. Este experimento foi realizado através do cultivo... / This work describes the screening of 21 endophytic fungi from plant species from Cerrado and Atlantic Forest. The crude extracts produced by these fungi after fermentation in potato dextrose broth (PDB) were evaluated by HPLC, 1HNMR and potential biological activities: antifungal, antioxidant and anticholinesterasic. After screening, the extracts of Xylaria sp. and Colletotrichum crassipes, isolated from Casearia sylvestris, were selected, based on the chemical/biological results. These endophytic fungi were cultivated in PDB and corn for crude extract preparation. The crude corn extract of Xylaria sp. led to isolation of griseofulvin, 7- dechlorogriseofulvin and cytochalasin B while the crude PDB extract led to isolation of cytochalasin C, cytochalasin D and 5-carboxy-6- hidroxy-3-methyl-3,4-dihydroisocoumarin. The crude PDB extract of Colletotrichum crassipes led to isolation of eight diketopiperazines, N-(2-phenylethyl)acetamide, tyrosol, 1-hidroxy-1- phenylethyl-tyrosol and (6-methyl-3-(phenethyloxy)-1,4-dioxan-2- yl)methanol. The some of them pure compounds showed potential antifungal activity against Cladosporium cladosporioides and C. sphaeropermum, antioxidant and anticholinesterasic activities. The Cytochalasins D and B, isolated in this work, and other five cytochalasins produced by Xylaria sp.1 showed potential activity for cytotoxic activity against adenocarcinomatous murine cells. The fungi Xylaria sp. and C. crassipes were evaluated as biocatalysts for biotransformation of 4-ethylcyclohexanone. Four biotransformation products were isolated. Their structures were established by spectroscopic methods, including the application of bidimensional NMR techniques and comparison with published data.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-04-13Bitstream added on 2014-06-13T18:46:26Z : No. of bitstreams: 1 rodrigues_cm_dr_araiq.pdf: 2519844 bytes, checksum: 035aaa12ecc407645fd4ebd88fc3a8cb (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho trata da caracterização química de espécies de plantas brasileiras usadas no tratamento de disfunções gástricas. Nossa proposta envolve a investigação de extratos orgânicos polares e infusões por técnicas analíticas. Extração em fase sólida (SPE) e/ou extração líquido-líquido (LLE) foram utilizadas na etapa de clean-up para que açúcares livres e oligômeros de proantocianidinas fossem separados da matriz vegetal bruta. As amostras pré-tratadas foram então analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência (HLPC) acoplada com detector de arranjo de fotodiodos (PAD) ou por espectrometria de massas em tandem acoplado a um ion trap com interface de ionização por electrospray, usando o modo de inserção direta da amostra (FIA-ESI-IT-MS). Esta estratégia permitiu conhecer os metabólitos secundários de plantas pertencentes às famílias Dilleniaceae (Davilla elliptica e D. nitida: flavonóides, catequinas, isoprenóides e ácidos fenólicos), Apocynaceae (Hancornia speciosa: catequinas, ácidos fenólicos, procianidinas e oligômeros de procianidinas C-glucosiladas) e Malpighiaceae (Byrsonima basiloba, B. coccolobifolia, B. crassa, B. fagifolia e B. intermedia: flavonóides, biflavonóides, ácidos fenólicos, oligômeros de proantocianidinas e ácidos galoilquínicos). A determinação quantitativa dos principais metabólitos secundários também foi realizada, permitindo então a completa caracterização da composição química dos extratos de plantas. Assim, nossa proposta levou a uma caracterização química rápida e eficiente de espécies de plantas brasileiras usadas na medicina popular como antiúlcera. Estes resultados são úteis para um melhor entendimento das atividades farmacológicas das espécies de plantas acima mencionadas. / This work deals with the chemical characterization of Brazilian plant species used to treat gastric disfunctions. Our approach involved the investigation of organic polar extracts and infusions by using analytical techniques. Solid-phase extraction (SPE) and/or liquid-liquid extraction (LLE) were used in the clean-up step, so that free sugars and proanthocyanidin oligomers were separated from the bulk of the vegetable matrix. The pre-treated samples were then analyzed by using high performance liquid chromatography (HPLC) coupled to photodiode array (PAD) detector or by direct flow analysis - electrospray ionization - ion trap - tandem mass spectrometry (FIA-ESI-IT-MS). This strategy allowed to recognize the secondary metabolites from plants belonging to the families Dilleniaceae (Davilla elliptica and D. nitida: flavonoids, catechins, isoprenoids and phenolic acids), Apocynaceae (Hancornia speciosa: catechins, phenolic acids, procyanidins and C-glycosilated procyanidins oligomers) and Malpighiaceae (Byrsonima basiloba, B. coccolobifolia, B. crassa, B. fagifolia and B. intermedia: flavonoids, biflavonoids, phenolics acids, proanthocyanidins oligomers and galloylquinic acids). Quantitative determination of the main secondary metabolites was also performed, thus allowing to fully characterization of the chemical composition of plant extracts. Thus, our approach led to a fast and efficient chemical characterization of Brazilian plant species used in folk medicine as antiulcer. These results are useful to the better understanding of the pharmacological activities of the above mentioned plant species.

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-05-30Bitstream added on 2014-11-10T11:58:21Z : No. of bitstreams: 1 000780628_20150530.pdf: 1232261 bytes, checksum: 1fcdc8b27d6b7f069b061d68e9fdc284 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-06-03T11:42:50Z: 000780628_20150530.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-03T11:44:13Z : No. of bitstreams: 1 000780628.pdf: 4798058 bytes, checksum: bc09d90a93d28449c35350bd001e0c2c (MD5) / O perfil químico de folhas e frutos de Piper fuligineum foi analisado por cromatografia líquida de alta eficiência. A composição química de média polaridade dos dois órgãos vegetais apresentou semelhança. As análises demonstraram também que os frutos apresentavam composição química complexa, principalmente devido a presença de substâncias de maior polaridade. Essas análises permitiram selecionar as folhas de P. fuligineum para dar continuidade aos estudos químicos. Estes estudos resultaram no isolamento de cinco substâncias, sendo duas kavalactonas: (E)-6-(8-feniletil)-4-metoxi-2H-piran-2-ona e 6-(2-fenil-7,8-diidroxetil)-4-metoxi-2H-piran-2-ona; uma cromanona: (2,2-dimetil-4-oxocromano-6-carboxilato de metila) e dois derivados prenilados do acido benzoico: 4-hidroxi-3-(3-metilbutil-2-en-1-il)benzoato de metila e 4-metoxi-3-(3-metil-1-oxobut-2-en-1-il) benzoato de metila. As estruturas químicas das substâncias foram determinadas utilizando técnicas espectrométricas, incluindo RMN 1D e 2D. Todas as substâncias estão sendo descritas pela primeira vez em Piper fuligineum. A substância 4 é inédita como produto natural. O extrato etanolico das folhas e as frações obtidas de P. fuligineum foram avaliadas quanto ao potencial tripanocida frente à forma epimastigota da cepa Y de Trypanosoma cruzi, mostrando promissora atividade do extrato etanólico com IC50 de 26,67 g.mL-1 quando comparado com o controle positivo, benznidazol, com IC50 de 11,11 g.mL-1. O extrato acetato de etila, a fração clorofórmica e a substância 1 foram submetidos a testes antifúngicos frente aos fungos Candida albicans, C.krusei, C. tropicalis, C. parapsilosis e a levedura Cryptococcus neoformans. O extrato apresentou forte atividade frente ao fungo Candida tropicalis e moderada atividade frente aos fungos C. krusei, C. parapsilosis e a levedura Cryptococcus neoformans, enquanto a fração clorofórmica apresentou forte atividade frente ao... / The chemical profile of leaves and fruits of Piper fuligineum was analyzed by high performance liquid chromatography. The chemical composition of medium polarity related to leaves and fruits showed great similarity. The analysis also showed that the chemical composition of the fruits was more complex, mainly due to the presence of more polar substances. These analyzes allowed the selection of the leaves of P. fuligineum to continue the chemical studies. The chemical studies of the leaves of Piper fuligienum resulted in the isolation of six compunds, including two kavalactones (4- methoxy-6- [(E)-2-phenyl -vinyl] -2H-pyran-2-one and 6-(1,2-dihydroxy-2-phenyl- ethyl)-4-methoxy-2H- pyran-2-one), one chromanone (methyl-2,2-dimethyl-4-oxo-6- cromanacarboxylate) and two prenylated derivatives of benzoic acid (methyl-4-hydroxy-3-(3-methyl-2- buten-1-yl) benzoate and methyl-4-methoxy-3-(3-methyl -2-butenoyl) benzoate. The chemical structures of the isolated compounds were determined using spectrometric techniques, including 1D and 2D NMR. All compounds were described for the first time in Piper fuligineum, and the compound 4 is a new natural product. The ethanolic leaf extract and fractions obtained from P. fuligineum were evaluated for trypanocidal potential against epimastigote form of Trypanosoma cruzi Y strain, showing promising activity of the ethanol extract with IC50 of 26.67 g.mL-1 compared with the positive control benznidazole, with IC50 of 11.11 g.mL-1. The ethyl acetate extract, the chloroform fraction and substance 1 underwent antifungal drugs against fungi Candida albicans, C.krusei, C. tropicalis, C. parapsilosis and Cryptococcus neoformans yeast. The extract showed strong activity against the fungus Candida tropicalis and moderate activity against fungi C. krusei, C. parapsilosis and Cryptococcus neoformans yeast while the chloroform fraction showed strong activity against the fungus C. krusei, and moderate activity against...

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-05-23Bitstream added on 2014-11-10T11:58:21Z : No. of bitstreams: 1 000780665_20141212.pdf: 471530 bytes, checksum: 4caf8af5e7a25683e6f215abf496cf81 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-12-19T18:32:51Z: 000780665_20141212.pdf,Bitstream added on 2014-12-19T18:33:36Z : No. of bitstreams: 1 000780665.pdf: 2214381 bytes, checksum: 2b6028f457456d1fdcf9cf8978637f54 (MD5) / O aumento na demanda pela descoberta de novos fármacos de origem vegetal levou os químicos orgânicos a intensificarem estudos para a elucidação da rota metabólica de formação dos metabólitos de interesse. Muitas vezes, esses metabólitos mostram baixo acúmulo nas matrizes vegetais e/ou apresentam complexidade estrutural, que impossibilitam a obtenção dos mesmos por síntese ou semi-síntese. Com isso, o entendimento dos processos biossintéticos envolvidos em sua formação pode facilitar a obtenção dos mesmos por técnicas biotecnológicas. Para tanto, a espécie Piper tuberculatum, conhecida por acumular amidas piperidínicas, piperidônicas e isobutílicas, com potenciais atividades antitumoral, carrapaticida, antifúngica, inseticida entre outros, se configura em um excelente modelo para tais estudos funcionais. À partir do extrato de folhas e frutos foram isoladas as amidas piplartina e piperina, majoritárias na planta. A síntese dos precursores fenilpropanoídicos: ácido 3’,4’-metilenodióxicinâmico e ácido ferúlico, bem como os mesmos marcados com isótopos estáveis: ácido [1-OD, 2-D]-3’,4’-metilenodióxicinâmico e ácido [1-OD, 2-D]-ferúlico, foi realizada para os estudos biossintéticos. Os precursores, L-lisina, ácido 3’,4’-metilenodióxicinâmico e ácido malônico foram incorporados na fração solúvel do extrato enzimático das folhas de Piper tuberculatum. Foram determinadas as condições ótimas de extração da enzima baseadas em três parâmetros; temperatura (31 °C), tempo de reação (90 minutos) e concentração de precursores (10 mM). Os produtos formados foram avaliados por cromatografia líquida e espectrometria de massas. As análises foram monitoradas utilizando a piperina como padrão, observando a sua formação. Para a determinação da concentração protéica foi utilizado o método de Bradford e a análise das proteínas presentes foi feita utilizando gel de eletroforese... / The increase in demand for discovery of new drugs from plant origin has led also to increase organic studies to elucidate the metabolic pathway of the secondary metabolites of interest. Often, these metabolites show low concentration in plant as well structural and configurational complexity distinguishes them from synthetic products and prohibit their synthesis or semi - synthesis. Thus, understanding the biosynthetic processes involved in their formation can facilitate to obtain them by biotechnology techniques. Therefore, the Piper tuberculatum species known to accumulate piperidinic, piperidonic and isobutyl amides that show potential antitumoral, acaricidal, antifungal and insecticidal activities, is set in an excellent model for such functional studies. From leaves and fruits extract two compounds were isolated, the piperine and piplartine, main amides found in Piper tuberculatum. The synthesis of phenylpropanoids precursors: 3'-4'- methylenedioxycynamic acid and ferulic acid as well the same compounds labeled with stable isotopes: acid [1 -OD , 2- D]-3'-4'- methylenedioxycynamic acid and [1 -OD , 2- D]- ferulic acid were performed for the biosynthetic studies. The precursors, L–lysine, 3'-4'- methylenedioxycynamic acid and malonic acid were incorporated in the soluble enzyme fraction of Piper tuberculatum. The optimum conditions for extraction of the enzyme were based on three parameters; temperature (31 ° C), time of reaction (90 minutes) and concentration of precursors (10 mM). The products were analyzed by liquid chromatography and mass spectrometry. The analyzes were monitored using piperine as standard and its formation was determined. For determination of protein concentration the Bradford method was used. The analyze of the proteins was performed by using one-dimensional electrophoresis (SDS- PAGE).

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-03-28Bitstream added on 2014-11-10T11:58:20Z : No. of bitstreams: 1 000796531.pdf: 5589932 bytes, checksum: 23400d4937d9c4df5a1ed4c87d102fff (MD5) / Os produtos naturais são uma importante fonte de inspiração para o desenvolvimento de novos fármacos. O presente trabalho visou identificar produtos naturais bioativos que pudessem ser usados como modelo para o planejamento de novos compostos com propriedades antitumorais. A falta de dados organizados é ainda uma das dificuldades das áreas de produtos naturais e química medicinal. Portanto, a compilação de dados disponíveis sobre os metabólitos secundários sejam de espécies vegetais ou de outras fontes é de grande valor. Esse fato nos motivou a propor como primeiro objetivo deste projeto, a criação de uma base de dados contendo informações botânicas, químicas e biológicas dos metabólitos secundários obtidos e publicados pelo NuBBE durante 15 anos. A base de dados poderá ser útil não apenas para a pesquisa em química de produtos naturais atual do grupo, mas para todos interessados em estudos de planejamento de moléculas bioativas, metabolômica e dereplication, já que está disponível para acesso livre na internet. Um artigo científico descrevendo a criação da base de dados foi publicado na revista Journal of Natural Products em 2013. Os compostos da base de dados foram utilizados como fonte de moléculas para uma triagem virtual baseada na estrutura do receptor com a proteína tubulina para a identificação de moduladores dessa proteína. Baseado nos resultados de triagem virtual foi realizada a avaliação biológica in vitro das substâncias utilizando a proteína tubulina e ensaios de migração celular (wound healing e câmara de Boyden). Os ensaios biológicos indicaram uma série de guanidinas e a piplartina como principais compostos bioativos dentre os avaliados. A piplartina foi selecionada como modelo para o planejamento de novos compostos, pois apresentou relevante inibição de migração celular, além de estar descrito na literatura como citotóxico e... / Natural products are an important source for the design of new drugs. This thesis aimed at the identification of bioactive natural products to be used as models for the design of compounds with antitumor properties. The lack of organized data is still one of the drawbacks in the natural products and medicinal chemistry area. Therefore, the compilation of accessible data of secondary metabolites from plant species or other sources is of great value, especially for the identification of molecular leads. This fact inspired us to propose as first objective of this thesis, the creation of the NuBBE database (NuBBEDB) containing botanical, chemical, and biological information of the secondary metabolites obtained and published by NuBBE in 15 years. This database can be useful not only for the current research in natural products of the group, but for the scientific society interested in bioactive compounds, metabolomics, and dereplication. A scientific paper describing the creation of the database was published in the Journal of Natural Products in 2013. NuBBEDB compounds were used as molecular source for the virtual screening with the protein tubulin. Based on the results of the virtual screening the biological evaluation of selected compounds was performed with the protein tubulin, and cell migration assays (Wound Healing and Boyden Chamber). The results of the biological assays indicated a series of guanidines and piplartine as active compounds. Piplartine was selected to be a model for the design of new compounds because it inhibited cell migration and is described in the literature as cytotoxic and selective, an interesting profile for this project. A series of 5 analogue compounds were designed and synthesized aiming at a better understanding of structure activity relationship and improvement of the biological activity. The compound designed by molecular simplification showed activity in the cell...

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-28Bitstream added on 2015-03-03T12:07:18Z : No. of bitstreams: 1 000806902_20150828.pdf: 529126 bytes, checksum: 0ba8a9d77911f516559558294b02f40f (MD5) Bitstreams deleted on 2015-08-28T16:08:57Z: 000806902_20150828.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-28T16:10:00Z : No. of bitstreams: 1 000806902.pdf: 2067465 bytes, checksum: 40c8b4a1cf5b96c8d6428c73cac91c66 (MD5) / A abordagem reducionista na busca por substâncias bioativas em produtos naturais nem sempre é capaz de compreender em sua totalidade a dinâmica envolvida nas respostas farmacológicas de matrizes complexas como extratos vegetais. Inserido neste paradigma, este trabalho visou ao desenvolvimento de métodos e abordagens racionais que permitissem o entendimento das relações moleculares em produtos naturais bioativos. Para tanto, espécies vegetais da família Chrysobalanaceae com potencial citotóxico, depositadas na extratoteca do NuBBE, foram os objetos de estudo na aplicação de metodologias para a determinação de sua composição metabólica e para a avaliação do potencial citotóxico. Os extratos hidroalcoólicos de Couepia grandiflora, Hirtella hebeclada, Licania hoehnei, Licania kunthiana, Licania huminis e Parinari excelsa foram analisados por CG-EM, CLAE-DAD-EM/EM e CLAE-autoEM/EM para a identificação in situ de sua composição metabólica, através de comparação dos dados espectrais a uma base de dados contendo valores de massas de alta resolução e espectros de UV de todos os metabólitos secundários já relatados para a família Chrysobalanaceae. O uso de ferramentas de análise multivariada, como a deconvolução empírica proposta pelo software AMDIS e a extração espectral desenvolvidas pelos algoritmos RAMSY e MCR-ALS, assistiram à desreplicação ao extrair os espectros dos compostos, mesmo em baixa resolução cromatográfica. A desreplicação das espécies de Chrysobalanaceae permitiu a detecção in situ de metabólitos primários (aminoácidos, ácidos e açúcares) e secundários (flavonoides-O-glicosilados e polímeros de proantocianidinas). Adicionalmente ao estudo de determinação metabólica das matrizes vegetais, realizaram-se ensaios de atividade citotóxica. Resultados preliminares da bioatividade ante diferentes linhagens de Saccharomyces cereviceae, obtidos... / The reductionist approach for the search of bioactive compounds in natural products is not always being able to understand the complete dynamics involved in the pharmacological responses of complex matrices such as plant extracts. Based on this paradigm, this study aimed to develop rational methods approaches to runderstand the molecular relationships present in bioactive natural products. Chrysobalanaceae plant species with cytotoxic potential, deposited NuBBE`s bank of extracts, were the objects of study in the application of methodologies for defining the metabolic composition and evaluate their cytotoxic potential. Couepia grandiflora, Hirtella hebeclada, Licania hoehnei, Licania kunthiana, Licania huminis and Parinari excelsa ethanol extracts were analyzed by GC-MS, HPLC-DAD-MS/MS and HPLC-autoMS/MS for in situ metabolic identification based on spectral comparison with a high resolution mass spectra and UV spectral database developed using previously reported data for Chrysobalanaceae. The use of multivariate analysis tools, the empirical deconvolution software AMDIS and the spectral extraction algorithms RAMSY and MCR-ALS assisted the dereplication by extracting spectral data for pure compounds even at low chromatographic resolution. The dereplication of Chrysobalanaceae species allowed the in situ detection of primary metabolites (amino acids, and sugars) and secondary (O-glycosylated-flavonoids and proanthocyanidins polymers). In addition to the metabolic determination of Chrysobalanaceae extracts, were performed cytotoxicity bioassays. Preliminary results of cytotoxicity against Saccharomyces cereviceae, carried out during the construction of the bank of extracts, indicated cytotoxic potential, especially for Hirtella hebeclada and Parinari excelsa. However, the cytotoxic assay against different tumor cell lines showed that the extracts were not active, which may be related to which may be...

Orientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Clelia Akiko Hiruma Lima / Banca: Rosemeire Cristina Linhares Rodrigues Pietro / Resumo: Os produtos naturais, incluindo aqueles derivados de plantas superiores, têm contribuído para o desenvolvimento da terapêutica moderna. Atualmente existe um interesse renovado na investigação de plantas medicinais como alternativa ao tratamento de doenças como câncer e inflamações crônicas. Qualea multiflora Mart (Q. multiflora) família Vochysiacea é uma planta utilizada na medicina popular no tratamento de úlceras, gastrites, amebíase, diarréia com sangue, cólicas intestinais e inflamações. O sistema imunológico é um notável sistema de defesa que evoluiu nos vertebrados para protegê-los de agentes agressores. Neste sistema, os macrófagos têm um papel central, pois são células capazes de secretar mais de cem produtos biologicamente ativos, entre esses, espécies reativas de nitrogênio e citocinas que atuam no contexto da resposta imunológica e/ou inflamatória. Neste trabalho, foram avaliadas as atividades antiinflamatória e antitumoral de uma fração terpenoídica e da substância b- sitosterol, isoladas a partir da planta Q. multiflora. Experimentos in vitro foram realizados para determinar as atividades destes componentes no sistema imune através de ensaios de determinação de citotoxicidade (MTT), óxido nítrico (NO), determinação do fator de transcrição NF-kB, das citocinas IL-1, IL-6, IL-12, TNF- e IL-10. Além disto, também foram realizados testes com o objetivo de avaliar a atividade antitumoral dos compostos testados frente às linhagens tumorais murinas LM3 e LP07. Os resultados mostraram intensa inibição da produção de NO e das citocinas IL-1, IL-12 e TNF- ; moderada inibição do fator de transcrição NF-kB pelos macrófagos peritoneais estimulados com a fração terpenoídica e com b-sitosterol. Por outro lado, não houve inibição da produção de IL-6. De maneira contrária às outras citocinas testadas, houve uma grande estimulação da produção da citocina pró-inflamatória IL-10, ... / Abstract: Natural products, including those derived from upper plants, have contributed to a large extent for the development of modern therapeutics. Lately, there is a renewed interest in the investigation of medicinal plants as an alternative for the treatment of diseases such as cancer and chronical inflammations. Qualea multiflora Mart (Vochysiacea) is a plant used in popular medicine for the treatment of ulcers, grastritis, amoebiesis, diarrhea with blood, intestinal colics and inflammations. The immune system is a remarkable defense mechanism that evolved in the vertebrate animals to protect them against pathogenic micro-organisms and cancer, among other functions. In this system, macrophages have a central role, since they are capable of secreting more than 100 biologically active products, among which, nitrogen reactive intermediaries and cytokines which act in the context of the immune and/or antiinflammatory response. In this work, it was evaluated the anti-inflammatory and anti-tumoral activities of a terpenoidic fraction and of the b-sitosterol substance, obtained from Q. multiflora. In vitro experiments were performed in order to determine the activities of those samples upon the immune system through assays for the determination of cytotoxicity (MTT), nitric oxide (NO), transcription factor NF-kB, and cytokines IL-1, IL-6, IL-10, IL-12 and TNF- . Furthermore, tests were also performed with tumoral lineages LM3 and LP07, in order to evaluate the antitumoral activites of those samples. The results evidenced intense inhibition of the production of NO and IL-1, IL-12 e TNF- ; moderate inhibition of transcripition factor NF-kB by the peritoneal murine macrophages when stimulated with the terpenoidic fraction and with the b-sitosterol substance. On the other hand, it was not inhibition of the IL-6 production. Inversely, there was a great stimulation of the production of anti-inflammatory cytokine IL-10, a desirable effect in anti- ... / Mestre