Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-20T16:55:33Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 232626 bytes, checksum: 3d71a89873b7240693ecafd0c807a8fd (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-20T16:55:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 232626 bytes, checksum: 3d71a89873b7240693ecafd0c807a8fd (MD5) Previous issue date: 2002-06-21 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Cento e dezessete actinomicetos, sendo 96 obtidos de diferentes amostras de rizosfera e rizoplano de tomateiro e 21 culturas pré-selecionadas por Moura (1996), pela ação contra Ralstonia solanacearum, foram avaliados no controle biológico de Pseudomona syringae pv. tomato e Alternaria solani através microbiolização de sementes de tomateiro (Santa Cruz 'Kada'), seguindo-se o plantio em solo não-tratado e inoculação como os patógenos. A seleção massal, realizada em casa de vegetação, permitiu selecionar, pela contagem do número de lesões, o antagonista mais promissor (RD-01). Paralelamente, foram conduzidos teste de colonização de raízes de tomateiro em tubos contendo ágar- água, não inclinados, e testes de antibiose com os 117 antagonistas contra os patógenos Pseudomonas syringae pv. tomato, Xanthomonas campestris pv. vesicatoria e Alternaria solani, pelo método da sobre-camada. Cerca de 88% dos antagonistas não tiveram nenhum efeito inibitório contra os patógenos testados apesar de 70% destes terem sido capazes de colonizar raízes em condições gnotobióticas. Em testes para o controle de Corynespora cassiicola, Stemphylium solani, Xanthomonas campestris pv. vesicatoria e Ralstonia solanacearum em casa de vegetação, o isolado RD-01 demonstrou incapacidade em reduzir sintomas incitados pelo patógeno de solo, Ralstonia solanacearum, mas apresentou potencial como agente de biocontrole dos patógenos foliares. Através de um ensaio de promoção de crescimento, realizado em casa de vegetação com os cento e dezessete isolados, pode-se concluir a inexistência de uma relação entre o efeito de promoção de crescimento vegetal para os isolados testados com os resultados de biocontrole observados em experimento anterior. Em experimento de campo para o controle de Phytophthora infestans e Alternaria solani, dois actinomicetos pré-selecionados (RD-01 e SON-17) foram aplicados através da microbiolização de sementes de tomateiro e pela colonização do filoplano, respectivamente. Apesar de o controle químico ter sido mais efetivo que os actinomicetos, estes revelaram sua potencialidade como medida passível de utilização em procedimentos de manejo integrado, a qual precisa ser mais explorada. / One hundred and seventeen actinomycetes were used in the microbiolization of tomato seeds, followed by the sowing in non-treated soil. From these, 96 were isolated from samples of tomato rizosfere, and 21 cultures had been pre-selected by Moura (1996) for their action against Ralstonia solanacearum. At the same time, root colonization tests with tomato grown in test tubes containing water-agar and antibioses tests were conducted with the antagonists against the pathogens Pseudomonas syringae pv. tomato, Xanthomonas campestris pv. vesicatoria and Alternaria solani. Nearly 88% of the antagonits had no inhibitory effect against the tested pathogens despite 70% of these had been able to colonize the roots in gnotobiotic conditions. Mass selection, to control P. s. pv. tomato and A. solani, allowed the selection of the most promising antagonist (RD-01), though the reduction of the number of lesions. In a greenhouse test for the control of Corynespora cassiicola, Stemphylium solani, X. c. pv. vesicatoria e R. solanacearum, the isolate RD-01 was unable to reduce symptoms incited by the soilborne pathogen, R. solanacearum, but presented potential as biocontrol agent of the foliar pathogens. A greenhouse essay was conducted to evaluate the plant-growth promotion by the 117 rhizobacteria, and no correlation could be observed between the effect of growth promotion and the biocontrol effect observed in a previous experiment. In a field experiment to control Phytophthora infestans and A. solani, two pre- selected actinomyces (RD-01 e SON-17) were applied through tomato seed microbiolization and phylloplan colonization, respectively. Even though the chemical control was more effective than the actinomycetes, these showed their potential of use in integrated disease management, which needs to be more explored. / Dissertação importada do Alexandria

A influência de variáveis do banho na composição, microestrutura e nas propriedades magnéticas de filmes de CoB preparados por deposição química foi estudada. Dois diferentes tipos de agentes complexantes foram utilizados: citrato de sódio e Glicina. Filmes com menor teor de boro foram obtidos com o uso de Glicina como complexante. A deposição de Co é acelerada em presença de Glicina ou de amônia no banho, porque ambos evitam a diminuição do pH na interface solução/filme de CoB em crescimento. A coercividade dos filmes variou em função do teor de boro, sendo que filmes com maior teor de boro apresentaram mais baixa coercividade. Catalisadores de Co/Al2O3 são utilizados na síntese de combustíveis à partir de derivados do Gás Natural (Síntese de Fischer-Tropsch - SFT). O processo usual de preparação destes catalisadores, denominado impregnação úmida, consiste na impregnação do substrato em solução de sal de Co(II), secagem/calcinação e redução com H2 a 300/350 °C. Uma fração considerável do Co não é reduzida à fase metálica na etapa de redução, o que resulta em perdas de área ativa para a catálise da SFT. Normalmente pequenas quantidades de metais preciosos tais como Pt, Ru ou Pd são adicionadas para catalisar a redução dos óxidos de cobalto e aumentar a área superficial ativa do catalisador, o que representa um grande incremento no custo destes catalisadores. Nesta tese, foram investigadas duas propostas alternativas de solução para este problema: a preparação de catalisadores de Co por deposição química sobre Al2O3 e a preparação pelo método usual, mas com adição de pequenas quantidades de Cu,Ag e Au, dos quais Cu e Ag têm custo mais baixo do que os metais preciosos normalmente utilizados. Co foi depositado quimicamente sobre γ-Al2O3, previamente ativada com pequenas quantidades de Pd, utilizando NaBH4 como redutor. Uma amostra de catalisador de CoB/PdAl2O3 (contendo 13,4 % em massa de Co e c.a. 25% at. de boro) foi obtida e caracterizada por RTP, Quimissorção de H2 e XRD, assim como foram efetuados testes de SFT sob diferentes temperaturas de ativação. Para efeito de comparação, foi preparado por impregnação úmida uma amostra de Co/PdAl2O3 contendo 11% em massa de Co, sobre a mesma alumina ativada com Pd utilizada na preparação dos catalisadores de CoB/PdAl2O3. Embora a amostra de catalisador de CoB/PdAl2O3 tenha tido menor área superficial ativa do que a amostra de catalisador de Co/PdAl2O3, sua atividade catalítica foi sensivelmente maior. Essa diferença pode ser explicada supondo-se que o boro é solubilizado durante a reação, deixando uma fase de Co metálico altamente dispersa. Catalisadores de Co/Al2O3 promovidos por metais do grupo 11 foram preparados por impregnação úmida. Além da caracterização por RTP, Quimissorção de H2/titulação de O2 e XRD, a estrutura das amostras de catalisador foi estudada por XANES/EXAFS. Dos resultados de EXAFS e do fato de que altos teores de Cu e Au levaram à desativação do catalisador, é sugerido que durante a redução, o promotor é segregado para a superfície das partículas de Co. Dos três metais testados, Ag e Au apresentaram maior efeito promotor da atividade catalítica, proporcionando maior área superficial ativa para catálise da SFT. Não houve modificações importantes na seletividade dos catalisadores por conta da presença destes metais. / The influence of bath composition on the boron content, microstructure and magnetic properties CoB films deposited by chemical deposition was studied. Two different complexing agents were used in this study: sodium citrate and Glycine. CoB films with lower boron content were obtained with the use of a Glycine containing bath. The Co deposition is accelerated when either Glycine or ammonia is present in the solution because both substances prevent the decrease of the pH in the region near the CoB film/solution interface. The coercivity of the films varied in function of the boron content, as films with larger boron contents showed lower coercivities. Co/Al2O3 is used as a catalyst for the synthesis of liquid fuels from either coal or natural gas derivatives (Fischer Tropsch Synthesis FTS). The usual preparation procedure of such catalysts, known as wet impregnation, consists in the Al2O3 impregnation with a Co(II) aqueous solution, water evaporation/calcination and reduction with H2 at 300/350 °C. A considerable fraction of the cobalt oxides formed during calcination is not reduced to Co0 during reduction and this leads to active area loss. Normally, small quantities of precious metals like Pt, Ru or Pd are added to promote the reduction of cobalt oxides and therefore increase the active area of the Co/Al2O33 catalyst, yet these metals are extremely expansive. In this thesis, two different approaches to solve this problem are presented: the preparation of Co/Al2O3 by chemical deposition of the metallic phase and the use of Cu, Ag or Au (from which, Cu and Ag are cheaper metals) as promoters on wet impregnation prepared Co/Al2O3 catalysts. Cobalt was chemically deposited on γ-Al2O3, activated with a small quantity of Pd, with NaBH4 as a reducing agent. The resulting CoB/PdAl2O3 sample (with 13,4 % wt. Co and approximately 25 % at. of boron) was characterized by TPR, H2 Chemisorption and XRD, as well as SFT tests were made with the catalyst at different pre-reduction temperatures. For the sake of comparison a Co/PdAl2O3 catalyst sample with almost the same Co loading (11 % wt.) was prepared by wet impregnation on the same Pd-activated Al2O3 used to prepare the CoB/PdAl2O3 sample. Although the CoB/PdAl2O3 has a smaller active surface area (measured by H2 Chemisorption) than that of the Co/PdAl2O3 sample, it presented a much higher catalytic activity for the SFT. This difference may be explained assuming that boron impurities (present in the catalyst as boron oxides) is solubilized during the reaction leaving a highly dispersed Co phase. Group 11 promoted Co/Al2O3 catalysts were prepared by wet impregnation and characterized by TPR, H2 Chemisorption/O2 pulse oxidation, XRD and XANES/EXAFS. From the EXAFS results and from the fact that higher loadings of Cu and Au lead to catalyst deactivation, it is proposed that in the reduced catalyst the SFT inactive promoter is segregated to the surface. Silver and Gold were the most active in promoting Co reduction and therefore increasing catalytic activity for the SFT. No important modification in the selectivity of the reaction was observed.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-04-09T00:26:04Z No. of bitstreams: 1 StefanoPupeJohann_TESE.pdf: 36592987 bytes, checksum: f44357f3110776cf9f7cb628b2d65a95 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-04-09T00:36:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 StefanoPupeJohann_TESE.pdf: 36592987 bytes, checksum: f44357f3110776cf9f7cb628b2d65a95 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-09T00:36:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 StefanoPupeJohann_TESE.pdf: 36592987 bytes, checksum: f44357f3110776cf9f7cb628b2d65a95 (MD5) Previous issue date: 2015-03-20 / Os neurocientistas tem uma diversidade de perspectivas com as quais podem classificar diferentes partes do c?rebro. Com o surgimento de t?cnicas baseadas na gen?tica, como a optogen?tica, se torna cada vez mais importante identificar se um grupo de c?lulas, definidas atrav?s de morfologia, fun??o ou posi??o anat?mica possui um padr?o caracter?stico de express?o de um ou mais promotores gen?ticos. Isso permitiria melhores formas de estudar essas popula??es de neur?nios definidas geneticamente. Neste trabalho, eu apresento uma discuss?o te?rica e tr?s estudos experimentais nos quais essa foi a principal quest?o sendo abordada. O Estudo I discute as quest?es envolvidas em selecionar um promotor para estudar estruturas e subpopula??es na ?rea Tegmental Ventral. O Estudo II caracteriza uma subpopula??o de c?lulas na ?rea Tegmental Ventral que compartilha a express?o de um promotor, que ? anatomicamente muito restrita, e que induz avers?o quando estimulada. O Estudo II utiliza uma estrat?gia similar para investigar a subpopula??o no n?cleo subtal?mico que expressa PITX2 e VGLUT2 que, quando inativada, causa hiperlocomo??o. O Estudo IV explora o fato de que um grupo de c?lulas previamente identificadas no Hipocampo Ventral expressa CHRNA2, e indica que essa subpopula??o pode ser necess?ria e suficiente para o estabelecimento do ritmo teta (2-8 Hz) no Hipocampo Ventral de camundongos anestesiados. Todos esses estudos foram guiados pela mesma estrat?gia de identificar um promotor gen?tico capaz de permitir o controle de uma popula??o de neur?nios identificada geneticamente, e eles demonstram as diferentes formas em que essa abordagem pode generar novas descobertas. / Neuroscientists have a variety of perspectives with which to classify different parts of the brain. With the rise of genetic-based techniques such as optogenetics, it is increasingly important to identify whether a group of cells, defined by morphology, function or anatomical location possesses a distinct pattern of expression of one or more genetic promoters. This would allow for better ways to study of these genetically defined subpopulations of neurons. In this work, I present a theoretical discussion and threeexperimental studies in which this was the main question being addressed. Paper I discusses the issues involved in selecting a promoter to study structures and subpopulations in the Ventral Tegmental Area. Paper II characterizes a subpopulation of cells in the Ventral Tegmental Area that shares the expression of a promoter and is anatomically very restricted, and induces aversion when stimulated. Paper III utilizes a similar strategy to investigate a subpopulation in the subthalamic nucleus that expresses PITX2 and VGLUT2 which, when inactivated, causes hyperlocomotion. Paper IV exploits the fact that a previously identified group of cells in the ventral hippocampus expresses CHRNA2, and indicates that this population may be necessary and sufficient for the establishment of the theta rhythm (2-8 Hz) in the Local Field Potential of anesthetized mice. All of these studies were guided by the same strategy of characterizing and studying the role of a genetically defined subpopulation of cells, and they demonstrate the different ways in which this approach can generate new discoveries.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Diante das atuais exigÃncias ambientais e uma possÃvel instabilidade no mercado internacional de petrÃleo, o processo de SÃntese de Fischer-Tropsch (SFT) representa uma nova trajetÃria tecnolÃgica na busca de combustÃveis alternativos limpos. A SFT Ã uma reaÃÃo de polimerizaÃÃo, na qual o gÃs de sÃntese (H2 + CO) reage na presenÃa de um catalisador produzindo uma mistura de hidrocarbonetos. A fim de se estudar o efeito das condiÃÃes operacionais (temperatura e pressÃo) e do teor de lÃtio como promotor em catalisadores de ferro para a (SFT) foram sintetizados trÃs catalisadores suportados em sÃlica. A composiÃÃo desses catalisadores em base molar seguiu o padrÃo: 100Fe/5Cu/24K/240SiO2, variando apenas a concentraÃÃo de lÃtio, em 06Li, 12Li e 24Li. Os catalisadores foram caracterizados atravÃs das tÃcnicas de fluorescÃncia de raios-X, difraÃÃo de raios-X, anÃlise termogravimÃtrica, anÃlise textural e reduÃÃo a temperatura programada. Foi realizado um planejamento experimental fatorial para cada catalisador e as variÃveis respostas selecionadas foram o nÃmero mÃdio de carbono (Nm), a dispersÃo e a curtose da distribuiÃÃo dos produtos. A pressÃo variou de 240 a 270ÂC e a pressÃo de 20 a 30 atm. As reaÃÃes foram conduzidas em um reator de leito de lama de alta pressÃo e os produtos gerados foram analisados por cromatografia gasosa e identificados atravÃs de padrÃes internos e quantificados a partir de balanÃos molares e programa computacional de estimativa de Ãrea dos picos. A distribuiÃÃo de hidrocarbonetos resultantes da reaÃÃo da SÃntese de Fischer-Tropsch apresentou comportamento de uma distribuiÃÃo normal para fraÃÃo diesel e graxa, semelhante ao comportamento de uma Gaussiana para todos os catalisadores nas condiÃÃes estudadas. Os produtos lÃquidos obtidos nas corridas experimentais da SFT sÃo constituÃdos principalmente de n-parafinas. Os resultados de todos os experimentos para os trÃs tipos de catalisador apresentaram quantidades significativas de n-parafinas na faixa de 20 a 36 Ãtomos de carbono. A anÃlise estatÃstica da perturbaÃÃo das variÃveis independentes do processo (temperatura, pressÃo e concentraÃÃo de lÃtio no catalisador) sobre o nÃmero mÃdio de carbonos mostra que apenas a concentraÃÃo de lÃtio no catalisador tem um efeito significativo para um intervalo de confianÃa de 90%. A concentraÃÃo de lÃtio apresenta influÃncia negativa, indicando que sua utilizaÃÃo desfavorece a produÃÃo de hidrocarbonetos de maior peso molecular. / New environmental regulations and a possible instability in the international oil market have led to a renewal interest in the Fischer-Tropsch Synthesis (FTS), which is an alternative to produce more environmental friendly fuels. The FTS is a polymerization reaction, in which syngas (H2 + CO) reacts in the presence of catalyst to produce hydrocarbons. Three iron-based catalysts supported in silica and promoted with lithium were synthesized and the effects of lithium content and operating conditions (temperature and pressure) were studied. The composition of the catalysts was based on 100Fe/5Cu/24K/240SiO2 (molar basis) with varying lithium concentration 06Li, 12Li e 24Li. The catalysts were characterized by X-ray fluorescence, X-ray diffraction, thermogravimetric analysis, textural analysis and temperature programming reduction. An experimental planning was carried out for each catalyst, varying the temperature from 240 to 270 ÂC and the pressure from 20 to 30 atm. The answer variables were the average carbon number (Nm), dispersion and curtosis of the product distribution. The reactions were carried out in a slurry bed reactor and the products were analyzed by gas chromatography. The products were identified by means of internal standards and quantified by mass balance. The product distribution of the FTS presented a normal distribution in the diesel and wax region. The distribution was similar to a Gaussian curve for all catalysts. The liquid products consisted mainly of n-parafins. The results for all catalysts presented significant quantities of n-parafins in the range of 20 to 36 carbons. The perturbation analysis of the independent variables (temperature, pressure and lithium content) showed that only the lithium content has a significant effect over the average carbon number, at a 90% confidence level. The lithium content presented a negative effect over the average carbon number.

Os óleos essenciais da Pimenta pseudocaryophyllus (Gomes) Landrum de planta de populações naturais de três ecossistemas, localizados na Ilha de Cananéia, região de restinga, no Morro da Cataia, cidade de Cajati, região de encosta, ambas em área de Mata Atlântica, e na Reserva Natural Morro Grande, cidade de Caldas, região de campos montanos, foram avaliados como promotores de permeação cutânea do diclofenaco de potássio. Os óleos essenciais foram extraídos de partes aéreas das plantas e o rendimento do processo foi entre 0,90% (p/p) e 2,7% (p/p). A análise da composição química mostrou diferenças, indicando tratar-se de três quimiotipos diferentes. A interação dos óleos essenciais e dos componentes majoritários com membrana biológica natural foi avaliada por FT-Raman e ATR- FTIR, indicando a interação com as porções lipídicas do tecido. Foram desenvolvidas seis membranas biológicas artificiais, compostas por ceramidas, ácidos graxos e colesterol em proporções equimolares, que foram caracterizadas por espectroscopia Raman confocal e foram consideradas semelhantes. As membranas foram utilizadas no desenvolvimento do sistema PAMPA (Parallel Artificial Membrane Permeability Assay) para avaliar a segurança e eficácia dos óleos essenciais e componentes majoritário como promotores de permeação do diclofenaco de potássio. Os resultados dos ensaios com o sistema PAMPA foram estatisticamente avaliados. A segurança foi avaliada com o critério de permeação mínima dos óleos através das membranas do sistema PAMPA, verificada pela absorbância mínima do eugenol na solução aceptora. Os óleos essenciais e componentes majoritários foram utilizados no pré-tratamento das membranas, nas concentrações de 0,125%, 0,25%, 0,50% e 2,00% (v/v) em etano!. Ensaios de permeação do diclofenaco de potássio no sistema PAMPA indicaram efeito de promoção da permeação para todos os compostos avaliados. O método de doseamento do fármaco por UV foi validado e utilizado para os ensaios de permeação de formulações de gel em base aquosa contendo o diclofenaco de potássio (1,0% p/p). As amostras de gel foram preparadas com o óleo procedente de Morro Grande, selecionado na etapa de avaliação de segurança, a 0,125% (p/v). Adicionalmente, foram preparadas formulações com citronelol e etanol, na mesma concentração. O óleo essencial da Reserva Natural Morro Grande teve efeito de promoção da permeação superior ao do citronelol e etanol, que foram equivalentes. / The essential oils of the species Pimenta pseudocaryophyllus (Gomes) Landrum collected from natural populations of three existing ecosystems in the Cananéia Island, located at sea level, Cajati city, located in hillside region, both in the Atlantic Forest areas, as well as species collected in the Morro Grande Natural Reserve, region of montane fields, were evaluated as skin permeation enhancers of potassium diclofenac. Essential oils were extracted from the aerial parts of the plants and the process yield was between of 0.90% (w/w) and 2.7% (w/w). The chemical composition analysis showed differences between the plants of three origins, indicating that they are different chemotypes. The interaction of the essential oils and their major components with natural biological membrane was evaluated by FT- Raman and ATR-FTIR, indicating interaction with the Iipid portions of the natural membrane. Six artificial biological membranes have been developed, consisting of ceramides, cholesterol and fatty acids in equimolar proportions, which were characterized by confocal Raman spectroscopy and found to be similar. The membranes were used in developing the PAMPA (Parallel Artificial Membrane Permeability Assay) system to evaluate the safety of the potential permeation enhancers. The test results with PAMPA system were statistically evaluated. Safety was evaluated with the criterion of minimum permeation of the essential oil through the membranes, checked by the minimum absorbance of eugenol in the acceptor solution. The essential oils and the major components were used in the pretreatment of the membranes, at concentrations of 0.125%, 0.25%, 0.50% and 2.00% (v/v) in ethanol. Results indicated permeation enhancement effect for ali compounds evaluated. The analytical method for the quantification of potassium diclofenac was validated and used for the evaluation of the permeation of aqueous based gel formulations containing potassium diclofenac (1.0% w/w). The gel samples were prepared with the oil from Morro Grande Natural Reserve, selected in the safety evaluation step, at 0.125% (w/v). In addition, formulations were prepared with citronellol and ethanol at the same concentration. The essential Gil of Morro Grande Natural Reserve was more efficient as permeation enhancer than citronellol and ethanol under the test conditions.

O Brasil é o maior produtor de laranja doce do mundo, mas a história da citricultura brasileira é marcada por sucessivas perdas devido a pragas e doenças que atacam os pomares. Entre as doenças que afetam os pomares de citros, o huanglongbing (HLB) tem merecido destaque nos últimos anos. O HLB já é conhecido desde 1900 na China, mas no Brasil essa doença está presente desde 2004 e tem causado perdas significativas a citricultura. Essa doença é associada a três espécies de \"Candidatus Liberibacter\", mas no Brasil a espécie Candidatus Liberibacter asiaticus (CLas) é a mais comum. Devido à ausência de plantas de laranja doce resistentes a essa doença, a busca por plantas transgênicas que apresentem resistência a essa doença têm se intensificado nos últimos anos. Uma estratégia para projetar uma construção gênica visando a CLas é a utilização de promotores floema-específico, pois a CLas coloniza o floema das plantas de citros infectadas. Entretanto, para provar que uma sequência promotora funciona é preciso desafiar a construção gênica na presnça da CLas. Portanto, conduziu-se este trabalho com o objetivo de multiplicar plantas de Citrus sinensis Osbeck (L.) cv. \'Hamlin\' transgênicas contendo o gene uidA sob controle dos promotores floema-específicos Arabidopsis thaliana phloem protein 2 (AtPP2), Citrus phloem protein 2 (CsPP2) e Arabidopsis thaliana sucrose transporter 2 (AtSUC2), inocular com CLas por Diaphorina citri, avaliar a interdependência entre a expressão do transgene (gene uidA) e a concentração de CLas, para poder inferir sobre o controle da expressão dos promotores quando as plantas são inculadas com CLas. Para isso, cinco eventos de transformação de cada construção gênica, contendo apenas uma cópia do transgene foram selecionados, multiplicados e inoculados com CLas por Diaphorina citri, dezoito meses após a inoculação, o DNA e o RNA das plantas foram coletados. Foi realizada análise para verificar a concentração de CLas em todas as plantas inoculadas e a expressão do gene uidA foi realizada em uma linhagem transgênica de cada construção gênica. Com o auxílio da análise de coeficiente de correlação de Person, foi possível classificar qualitativamente a interdependência entre a concentração bacteriana e a expressão gênica. A frequência média de inoculação de CLas por Diaphorina citri foi de 30 %, demostrando que é possível incular CLas via Diaphorina citri. A análise de coeficiente de correlação de Person mostrou que nas construções com promotores AtPP2 e CsPP2 há baixa interdependência entre o controle da expressão gênica e a concentração de CLas. A construção sob controle do promotor AtSUC2 apresentou correlação forte e positiva, mostrando que quanto maior a concentração de CLas maior a expressão do transgene. / Brazil is the largest producer of sweet oranges in the world, however the Brazilian citrus history is marked by successive losses due to pests and diseases attacking orchards. Among the diseases affecting citrus groves, the huanglongbing (HLB) has been highlighted in recent years. The HLB is known in China since 1900, although in Brazil this disease has been present since 2004 and has caused significant losses to citrus industry. This disease is associated with three species of \"Candidatus Liberibacter\", however, in Brazil Candidatus Liberibacter asiaticus species (CLas) is the most common. Due to the absence of sweet orange plants resistant to this disease, the search for transgenic plants with resistance to this disease have intensified in recent years. One strategy to design a genetic construct targeting the CLas includes the use of phloem-specific promoters, because the CLas colonizes the phloem of infected citrus plants. On the other hand, to prove that a promoter sequence works it is necessary to challenge the genetic construct in the presence of CLas. Therefore, we conducted this study with the objectives of multiplying transgenic Citrus sinensis Osbeck (L.) cv. \'Hamlin\' bearing the uidA gene under the control of the phloem-specific promoters Arabidopsis thaliana phloem protein 2 (AtPP2), Citrus phloem protein 2 (CsPP2) and Arabidopsis thaliana sucrose transporter 2 (AtSUC2), inoculate CLas with Diaphorina citri, and evaluate the interdependence between the expression of the transgene (uidA gene) and the concentration of CLas, to infer the promoter expression when the plants are inoculated with CLas. Five events processing of each gene construct, containing only one copy of the transgene, and inoculated with CLas by Diaphorina citri. The DNA and RNA of plants were collected after eighteen months of inoculation. The concentration of CLas in the inoculated plants and the expression of the uidA gene were performed in each transgenic line of each gene construct, with the aid of the analysis of Person correlation coefficient. Thus it was possible to classify qualitatively the interdependence between bacterial concentration and gene expression. The average frequency of CLas inoculation by Diaphorina citri was 30%, demonstrating that it was possible to inoculate CLas via Diaphorina citri. Person correlation coefficient values suggested low interdependence between the control of gene expression and the concentration of CLas in constructions with promoters AtPP2 and CsPP2. The construction under AtSUC2 promoter control showed strong positive correlation, indicating that the higher the concentration of CLas the greater is the transgene expression.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_otavio_brod.pdf: 418993 bytes, checksum: 32f13d3584050e87ad3df6842a8e5496 (MD5) Previous issue date: 2008-11-17 / Antibiotics used for the last decades as growth promoters for animals, were banned in several countries because of the risk of inducing the appearance of antibiotic resistant bacteria. Probiotics, live microorganisms that benefit health promoting the stability of the gut microbiota, are their most promising substitutes. The objective of this research was to determine the probiotic properties of Pichia pastoris and a recombinant P. pastoris containing the Clostridium perfringens fosfolipase C gene. Ross® P8 female chicks were randomly distributed in four groups of ten each, in three repeats, and fed with a commercial food devoid of antibacterials. Group 1 was fed with un-supplemented food; group 2 was supplemented with 1x106 viable P. pastoris strain KM71H gr-1; group 3 with 1x106 viable recombinant P. pastoris containing the C. perfringens fosfolipase C gene gr-1 and group 4 with 1x106 viable spores of Bacillus cereus var. Toyoi gr-1. Water and food were supplied ad libitum. Weight gain of each animal and food conversion of each group at 49 days of age, were estimated. Individual seroconversions against C. perfringens &#945; toxin at days 1, 10, 20, 30 and 49 were estimated. At the end of the experiment the animals were slaughtered and samples from different organs examined histologically. Mean live weights at 49 days of age were 2.172, 2.228, 2.410 and 2.333 Kg for groups 1, 2, 3 and 4, respectively, different at P<0.05. Mean food conversions were 2.58, 2.41, 2.35 and 2.50 for groups 1, 2, 3 and 4, respectively. Seroconversions at 49 days of age were 1.1, 1.4, 1.5 and 1.3 for groups 1, 2, 3 and 4, respectively, different at P<0.05. Histological alterations were not detected. It was concluded that P. pastoris and recombinant P. pastoris may be used as probiotics for broilers due to their capacity of increasing food efficiency and seroconversion without undesirable effects. / Os antibióticos utilizados como promotores de crescimento nas últimas décadas foram banidos em vários países devido ao risco de induzir o surgimento de bactérias resistentes. Entre as alternativas para sua substituição, os probióticos, suplementos alimentares compostos de microrganismos vivos que beneficiam a saúde do hospedeiro através do equilíbrio da microbiota intestinal, aparecem como a mais plausível. Este trabalho objetivou determinar as propriedades como probiótico da levedura Pichia pastoris e sua variante recombinante contendo o gene da fosfolipase C de Clostridium perfringens. Frangas de um dia de idade da linhagem Ross® P8 foram distribuídas aleatoriamente em quatro grupos de dez animais cada, em três repetições, e alimentadas com ração comercial isenta de antibacterianos. O grupo 1 (Controle) recebeu ração não suplementada, o grupo 2 recebeu a mesma ração suplementada com 1x106 células viáveis gr-1 de P. pastoris cepa KM71H, o grupo 3 ração suplementada com 1x106 gr-1 de células viáveis de P. pastoris recombinante contendo o gene da toxina &#945; de C. perfringens, e o grupo 4 ração suplementada com 1x106 gr-1 de esporos viáveis de Bacillus cereus var. Toyoi. Ração e água foram oferecidos ad libitum. Estimou-se o ganho de peso de cada animal aos 49 dias de idade, e a conversão alimentar de cada grupo. Determinou-se a soroconversão individual por ELISA, utilizando como antígeno a toxina &#945; padrão de C. perfringens, a partir de amostras de sangue coletadas aos 1, 10, 20, 30 e 49 dias de idade. Ao término do experimento os animais foram abatidos e amostras de órgãos submetidos a análise histopatológica. No dia 49, os pesos vivos médios foram 2,172, 2,228, 2,410 e 2,333 kg, significativamente diferentes (P<0,05) ao grupo controle, para os grupos 1, 2, 3 e 4, respectivamente. As conversões alimentares médias foram 2,58, 2,41, 2,35 e 2,5 para os grupos 1, 2, 3 e 4, respectivamente. As soroconversões ao dia 49 foram 1,1, 1,4, 1,5 e 1,3 para os grupos 1, 2, 3 e 4, respectivamente, significativamente diferentes (P<0,05) ao grupo controle. Nos estudos histopatológicos não foram encontradas alterações. Concluiu-se que P. pastoris e P. pastoris recombinante podem ser utilizadas como probiótico em frangos de corte por aumentar a eficiência alimentar e a soroconversão, sem apresentar contraindicações.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The ban on the use of industrial antibiotics as performance-enhancing additives by the European Union has stimulated the studies to replace these additives in animal production with other alternatives additives. Among these studies, are the studies that evaluate the essential oils of aromatic plants that can present similar effects to the conventional additives. The objective of this trial was to evaluate the essential oil of Lippia gracilis as an antimicrobial agent against the bacteria Salmonella sp and Escherichia coli, and as a possible performance enhancer in growing Japanese quail diets. The experiment was conducted in a completely randomized design and the birds distributed within six treatments, seven replicates and twelve birds per plot. The treatments were: increasing levels of essential oil (0.0, 100, 200, 300 and 400mg/kg of feed) and a treatment with bacitracin (BMD). An antibiogram test, performance evaluation and quantitative microbiology of the intestinal contents of the birds were evaluated. The antibiogram and the microbiology were analyzed descriptively. For performance, linear and quadratic regressions were used. In addition, the Dunnett Test was used to evaluate with BMD treatment against the others. It was observed that in the in vitro test (antibiogram), the essential oil was effective in inhibiting the growth of Escherichia coli and Salmonella sp. In initial phase, there was reduction in feed intake and an improvement in feed conversion with an increase in the inclusion of Lippia gracilis essential oil in diets. The treatment containing BMD presented higher feed intake from to 200mg/kg of essential oil and greater weight gain from to 100mg/kg of essential oil. In the period from 2 to 35 days, the relative weight of the proventriculus, gizzard and intestine were increased with the inclusion of the essential oil in the diet compared to the BMD treatment. On the other hand, treatment content BMD presented higher feed intake and worse feed conversion compared to other treatments. Concluded that the increase in the levels of Lippia gracilis essential oil from the plateau up to 200 mg/kg reduced feed intake and weight gain from 2 to 21 days of age. In the period from 2 to 35 days of age, the treatment containing BMD provided an increase in feed intake and an improvement in feed conversion compared to the other treatments. / A proibição do uso de antibióticos industriais como aditivos melhoradores de desempenho pela União Europeia estimulou diversas pesquisas objetivando substituir esses aditivos na produção animal por outros naturais. Dentre essas pesquisas, encontram-se os estudos que avaliam os óleos essenciais de plantas aromáticas que podem apresentar efeitos similares aos aditivos convencionais. Com isso, este trabalho teve como objetivo avaliar o óleo essencial do alecrim como agente antimicrobiano frente às bactérias Salmonella sp e Escherichia coli, e como possível melhorador de desempenho em dietas de codornas japonesas em crescimento. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualizado e às aves distribuídas dentro de seis tratamentos, sete repetições e doze aves por parcela. Os tratamentos foram: cinco níveis crescentes de óleo essencial (0,0, 100, 200, 300 e 400mg/kg de ração) e um tratamento com bacitracina (BMD). Foi realizado teste de antibiograma, avaliação de desempenho e microbiologia quantitativa do conteúdo intestinal das aves. O antibiograma e a microbiologia foram analisados descritivamente. Para o desempenho, foram realizadas regressões linear e quadrática. Além disso, realizou-se o Teste de Dunnett a fim de avaliar o tratamento BMD frente aos demais. Observou-se que no teste in vitro (antibiograma), o óleo essencial foi efetivo ao inibir o crescimento de Escherichia coli e Salmonella sp. Na fase inicial, houve redução do consumo de ração e melhora na conversão alimentar com o aumento da inclusão do óleo essencial do alecrim às dietas. O tratamento contendo BMD apresentou maior consumo de ração a partir 200mg/kg de óleo essencial e maior ganho de peso a partir de 100mg/kg de óleo essencial. Já no período de 2 a 35 dias, o peso relativo do proventrículo, moela e do intestino foram aumentados com a inclusão do óleo essencial na ração frente ao tratamento contendo BMD. Já o tratamento contendo BMD apresentou maior consumo de ração e pior conversão alimentar em comparação aos demais tratamentos. Conclui-se que o aumento nos níveis do óleo essencial do alecrim da chapada a partir dos 200 mg/kg reduziu o consumo de ração e o ganho de peso na fase de 2 a 21 dias de idade. Já no período de 2 a 35 dias de idade o tratamento contendo BMD proporcionou aumento do consumo de ração e a melhora na conversão alimentar frente aos demais tratamentos. Conclui-se que o aumento nos níveis do óleo essencial do alecrim (Lippia gracilis Shauer) reduziu o consumo de ração e o ganho de peso na fase de 2 a 21 dias de idade. Já no período de 2 a 35 dias de idade, o melhor nível estimado foi de 196,5mg/kg de inclusão do óleo essencial de alecrim na dieta de codornas japonesas. / São Cristóvão, SE

Vetores lentivirais são ferramentas fundamentais para modificação celular. Sua utilização ganhou destaque devido à capacidade desses em integrar ao genoma de células que estão ou não em divisão. Grande parte dos vetores desenvolvidos são derivados do genoma do Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV-1), portanto, modificações foram necessárias a fim de evitar a formação de Partículas Competentes em Replicação (RCLs) e garantir uma utilização segura. Com as modificações, foram produzidos os vetores lentivirais de terceira geração utilizados atualmente. Esses vetores podem ser usados para expressão constitutiva de genes, produção de proteínas recombinantes, produção de animais transgênicos e terapia gênica. Com isso, torna-se necessário o desenvolvimento de vetores lentivirais para aplicação em pesquisa básica e ensaios clínicos. Dessa forma, o presente estudo teve por objetivo a construção de vetores de expressão lentivirais aplicáveis à: 1- expressão constitutiva de genes de interesse e 2-vetores com promotores específicos para expressão de proteínas em megacariócitos. Esse trabalho descreve a construção desses vetores, sua importância e discute suas possíveis aplicações. As sequências selecionadas para produção dos vetores foram: os genes Runx1C e VkorC1 e os promotores proPF4 e proITGA2b. Todas as sequências encontram-se clonadas em vetor de clonagem e estoques de bactérias com esses vetores congeladas em glicerol foram confeccionados. Para a confecção dos vetores lentivirais, o gene Runx1C foi subclonado no vetor lentiviral base p1054-CIGWS sob controle do promotor forte CMV, enquanto o promotor proITGA2b foi subclonado no vetor base p1054-FVIII, em substituição ao promotor CMV, de forma a controlar a expressão de FVIII. Os dois vetores produzidos apresentam ainda o gene para proteína verde GFP precedida do sítio de ligação do ribossomo IRES, com expressão controlada pelo mesmo promotor interno do vetor. O trabalho possibilitou, portanto, a produção de dois vetores lentivirais bi-cistrônicos: p1054-Runx1C e pL-proITGA2b-FVIII. A construção p1054-Runx1C ainda não foi sequenciada, mas foi confirmada por restrição enzimática e apresenta potencial para aplicação em estudos de diferenciação hematopoética. Já a construção pL-proITGA2b-FVIII foi sequenciada, porém sem confirmação da região de ligação do proITGA2b ao vetor. Reações de PCR e de restrição enzimática confirmaram a ligação e sequenciamento mostrou 67% de similaridade entre a região sequenciada e o promotor ITGA2b depositado no banco de dados. Análise funcional foi realizada através da transfecção desse vetor em células HEK-293T. As células transfectadas apresentaram expressão positiva para GFP e secreção de FVIII no sobrenadante celular, evidenciando que o promotor proITGA2b clonado no vetor encontra-se ativo. Esse vetor apresenta potencial para aplicação em terapia gênica para hemofilias, pois apresenta expressão do fator de coagulação direcionado a megacariócitos e plaquetas, células que estão diretamente relacionadas ao processo de coagulação, representando grandes veículos para secreção desses fatores. Ainda, os dois vetores lentivirais gerados apresentam segurança e eficiência elevadas, pois são vetores de terceira geração auto-inativantes (SIN) e apresentam elementos regulatórios que melhoram o transporte e integração do DNA ao genoma hospedeiro. / Lentiviral vectors are fundamental tools for cell modification that gained prominence due to their ability to integrate the genome of non-dividing cells. Most of developed lentiviral vectors are derived from the genome of Human Immunodeficiency Virus (HIV-1), so modifications were necessary in order to avoid the formation of Competent Replication Particles (RCLs) and ensure safer operations. The modifications led to development of third generation lentiviral vectors currently used. These vectors can be used for constitutive gene expression, production of recombinant protein, production of transgenic animals and gene therapy. It\'s evident the need to develop lentiviral vectors for application in basic research and clinical trials. Thus this study aimed to construct lentiviral expression vectors applicable to: 1- constitutive expression of genes of interest and 2-vectors with specific promoters for expression of proteins in megakaryocytes and platelets. This paper describes the construction of these vectors, their importance and discuss their possible applications. Sequences were selected for production of the vectors: genes Runx1C and VkorC1 and proPF4 and proITGA2b promoters. All four sequences are cloned into cloning vectors and stocks of bacteria with these vectors frozen in glycerol were prepared. Lentiviral vectors were engineered from subcloning the sequence Runx1C into the basic lentiviral vector p1054- CIGWS under control of the strong CMV promoter, and from subcloning proITGA2b promoter into p1054-FVIII basic vector, replacing the CMV promoter in order to control the expression of FVIII. Both vectors exhibit the green fluorescence protein GFP gene preceded by a ribosome binding site IRES under control of vector\'s internal promoter. Therefore, this work resulted in the production of two bi-cistronic lentiviral vectors: p1054-Runx1C and pLproITGA2b-FVIII. The p1054-Runx1C construction has not yet been sequenced, but it was confirmed by digestion and has potential for use in hematopoietic differentiation studies. Though, pL-proITGA2b-FVIII construct was sequenced, but the technique didn\'t allow to confirm the binding region between proITGA2b and the vector. Although PCR reaction and digestion confirmed the construction. Sequence analysis showed 67% similarity between the sequenced region and ITGA2b promoter deposited in the database. Functional analysis was performed by transfection of this vector in HEK-293T cells. The transfected cells showed positive expression of GFP and FVIII secretion in cell supernatant, indicating that the proITGA2b promoter cloned into the vector is active. This vector has potential usage in gene therapy for hemophilia, since it can be used to express coagulation factors in megakaryocytes and platelets and these cells are directly related to the clotting process, representing great vehicles for secretion of these factors. Even more, the two lentiviral vectors generated have higher safety and efficiency, as they are self-inactivating (SIN) third-generation vectors and have regulatory elements that enhance transport and integration of DNA into the host genome.

Em ultimas décadas, a conversão de alcanos leves em suas correspondentes olefinas tem sido objeto de intensas pesquisas, impulsionadas inclusive pelo aumento crescente da demanda do propileno como um importante produto petroquímico. A desidrogenação oxidativa (ODH) do propano representa uma via alternativa promissor para a produção de propeno, ao apresentar-se como uma reação exotérmica e não limitada termodinamicamente. Diferentes óxidos suportados ou mistos têm sido desenvolvidos com a finalidade de aumentar a atividade e seletividade em relação as olefinas. Metais alcalinos são importantes agentes promotores que proporcionam uma melhor seletividade as olefinas devido a redução da acidez e aumento da basicidade da superfície do catalisador. A proposta deste presente trabalho foi desenvolver metodologias de síntese de catalisadores de oxido de vanádio suportado em aluminas de diferentes fases cristalinas e dopados com sódio ou potássio a fim de avalia-los em testes catalíticos de desidrogenação oxidativa do propano. Para tanto, foram utilizadas as seguintes técnicas de caracterização: volumetria N2, difratometria de raios X (DRX) e redução a temperatura programada (RTP). As características acidas e/ou básicas dos suportes e catalisadores foram avaliadas pelas reações de decomposição de isopropanol. / In recent decades, the conversion of light alkanes to their corresponding olefins has been the subject of intense research, mainly driven by the increasing demand of propylene as an important petrochemical product. Oxidative dehydrogenation (ODH) propane is a promising alternative way to propylene production, which it is presented as an exothermic reaction and not limited thermodynamically. Different supported or mixed oxides have been developed in order to increase the activity and selectivity to olefins. Alkali metals are important promoters, which provide improved selectivity to olefins due to reduction of acidity and increasing basicity of the catalyst surface. The purpose of the present study was to develop synthesis methods of vanadium oxide catalysts supported on alumina of the different crystalline phases and doped with sodium or potassium in order to evaluate them in catalytic tests of propane oxidative dehydrogenation. For in such a way, the following characterization techniques were used: N2 volumetry, X-ray diffractometry (XRD) and temperature programmed reduction (TPR). The properties acid and/or basic of supports and catalysts were evaluated by the isopropanol decomposition reaction.