Estima-se que os EUA gastem por ano cerca de 100 milhões de dólares anuais para tratar e reabilitar pacientes com doenças na coluna vertebral. Aproximadamente 15% dos pacientes que são operados da coluna vertebral, não obtêm melhora clínica e irão necessitar de outros procedimentos cirúrgicos. Entre as principais causas de insucesso nos procedimentos cirúrgicos da coluna vertebral está a fibrose epidural, também chamada de peridural, e a utilização de um de material inibidor desta fibrose, nesse tipo de cirurgia, vem sendo pesquisada, mas até o momento não existe nenhum produto comercial, nacionalmente produzido, destinado à prevenção desta fibrose. O objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento e caracterização químico-física e microbiológica de um hidrogel à base de Carboximetilcelulose de sódio (NaCMC) e própolis. Foram preparados 4 géis de NaCMC e própolis (1%, 2% e 8% e ausência de própolis) e caracterizados através da espectroscopia vibracional na região infravermelho, microscopia eletrônica de varredura e também teste microbiológico. A espectroscopia vibracional da região do infravermelho identificou a formação de banda característica da ligação própolis com carboximetilcelulose de sódio. A estrutra microscópica manteve-se inalterada, mesmo na concentração de 8% de própolis. O gel de NaCMC própolis 8% demostrou possuir excelente atividade antimicrobiana em relação aos demais géis e abre novas possibilidades de trabalhos futuros in vivo que poderão fornecer informações sobre a eficácia antiaderente e sua possível aplicação em procedimentos neurocirúrgicos. / It is estimated that the United States annually spend around 100 million dollars annually to treat and rehabilitate patients with spinal diseases. Approximately 15% of patients who are operated on the spine, does not obtain clinical improvement and will require other surgical procedures. Among the main causes of failure in surgical procedures of spinal epidural fibrosis is also called the epidural and the use of an inhibitor material of fibrosis in this type of surgery, has been researched, but so far there is no commercial product, nationally produced, for the prevention of fibrosis. The objective of this work was the development and characterization and chemical-physical microbiological analysis of a hydrogel made of NaCMC and propolis. Gels were prepared in four NaCMC and propolis (1%, 2% and 8% and the absence of propolis) and characterized by infrared vibrational spectroscopy, scanning electron microscopy and also microbiological testing. The vibrational spectroscopy identify the characteristic of propolis connection with carboxymethylcellulose. The structure microscopic remained unchanged, even at a concentration of 8% propolis. The NaCMC gel 8% propolis have demonstrated excellent antimicrobial activity compared to other gels and opens new possibilities for future work in vivo that might provide information on the effectiveness nonstick and its possible application to neurosurgical procedures.

O gênero Acanthamoeba compreende protozoários que pertencem ao grupo das amebas de vida livre e estão amplamente dispersos na natureza. São conhecidos por causarem duas graves doenças, a Encefalite Amebiana Granulomatosa, em pacientes imunodeprimidos e a Ceratite Amebiana, principalmente em usuários de lentes de contatos imunocompetentes. A própolis verde é uma substância resinosa e balsâmica, conhecida na medicina alternativa por apresentar diversas atividades biológicas. Neste trabalho foi avaliada a atividade amebicida de um extrato aquoso de própolis verde contra trofozoítos e cistos de A. castellanii . Nas concentrações de 10 e 20 mg/mL, o extrato foi capaz de inativar 100% dos trofozoítos em 24 e 48 horas. A dose de 5 mg/mL inativou 100% dos trofozoítos em 72 horas. Os cistos foram inativados na concentração de 40 mg/mL após 24 horas de exposição ao extrato. O efeito citotóxico do extrato foi avaliado sobre células VERO e HCE através do ensaio MTT. O extrato não causou efeito citotóxico significativo nas concentrações 0,312, 0,625, 1,25 e 2,5 mg/mL sobre as células HCE e nas concentrações 2,5 e 5 sobre as células VERO. O ensaio de adesão realizado mostrou que a ligação de Acanthamoeba às células HCE possui comportamento dose-dependente em relação ao extrato de própolis verde. Assim, o presente estudo demonstrou a atividade antiparasitária da própolis verde frente a ambas às formas de Acanthamoeba, mostrando-se uma substância promissora para o desenvolvimento de fármaco alternativo, bem como para utilização na composição de soluções de limpeza de lentes de contato ou superfícies. Entretanto, mais estudos são necessários para compreender seus mecanismos de ação. / The genus Acanthamoeba comprises protozoa belonging to the group of free-living amoebas and it is widely scattered in nature. These protozoa are known to cause two serious diseases, Granulomatous Amebic Encephalitis in immunocompromised patients and amebic keratitis, especially in immunocompetent contact lens wearers. Green Propolis is a resinous and balsamic substance, known in alternative medicine because of its several biological activities. In this study we evaluated the amoebicide activity of an aqueous extract of propolis against trophozoites and cysts of A. castellanii. At concentrations of 10 and 20 mg/mL, the extract was able to inactivate 100% of trophozoites within 24 and 48 hours. The dose of 5 mg/mL inactivated 100% of trophozoites within 72 hours. The cysts were inactivated at a concentration of 40 mg/mL after 24 hours of exposure to the extract. The cytotoxic effect of the extract was evaluated on VERO and HCE cells by MTT assay. The extract had no significant cytotoxic effect at concentrations of 0.312, 0.625, 1.25 and 2.5 mg/ml about HCE cells and at concentrations of 2.5 and 5 on VERO cells. The adhesion test performed showed that the attachment of Acanthamoeba to HCE cells have dose-dependent behavior in relation to the propolis extract. Thus, this study demonstrated the antiparasitic activity of propolis against both forms of Acanthamoeba and proved to be a promising substance for the development of an alternative drug, as well as its use in the formulation of cleaning solutions for contact lenses or surfaces. However, more studies are needed to understand their mechanisms of action.

Orientador: Pedro Luiz Rosalen / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-20T05:32:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cunha_MarcosGuilhermeda_M.pdf: 1227167 bytes, checksum: 25d919b2d0f5ad38707288d6c4b58718 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: O presente estudo sobre a geoprópolis de Melipona scutellaris teve como objetivo avaliar suas atividades antimicrobiana contra Streptococcus mutans Staphylococcus aureus, S. aureus resistente à meticilina, Enterococcus faecalis, Actinomyces naeslundii, Pseudomonas aeruginosa e também antiproliferativa sobre linhagens celulares, além de caracterizar quimicamente o seu extrato etanólico e a fração química bioativa. Analisou-se também a capacidade desta fração bioativa de atuar sobre S. mutans organizado na forma de biofilme in vitro. Inicialmente obteve-se o extrato etanólico de geoprópolis (EEGP), que foi fracionado, resultando nas frações hexânica (FH), clorofórmica (FC) e acetato de etila (FAc). O EEGP e frações foram submetidos a testes antimicrobianos para determinação das concentrações inibitória mínima (CIM) e bactericida mínima (CBM). Verificada a ação antimicrobiana, o EEGP e fração bioativa foram avaliados quanto a sua citotoxicidade por meio da atividade antiproliferativa contra linhagens de células normais e tumorais. A caracterização química foi realizada por meio de análises por cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (CLAE-FR) e cromatografia gasosa com espectrometria de massas (CG-EM). A fração bioativa selecionada teve a ação sobre biofilme de S. mutans testada pelos ensaios de inibição de formação de biofilme, time kill, queda de pH e por microscopia eletrônica de varredura (MEV). O EEGP foi capaz de inibir o crescimento de S. mutans e da maioria das cepas bacterianas, sendo a FH, que apresentou menor CIM. Com relação à atividade antiproliferativa, tanto o EEGP quanto a FH inibiram o crescimento de forma mais seletiva para as linhagens tumorais, porém a FH em concentrações mais baixas. A análise química do EEGP e FH indicou a presença de compostos de baixa polaridade, ausência de flavonóides e de derivados do ácido cinâmico. A FH foi efetiva na diminuição da biomassa do biofilme em ambas as concentrações estudadas (250 e 400 ?g/mL), quando comparada com o controle (p<0,05), porém não alterou a viabilidade bacteriana (time kill), nem a produção de ácidos pela bactéria (p>0,05). As análises por MEV demonstraram uma modificação na matriz do biofilme tratado com FH, verificada pela aparente perda de homogeneidade superficial. Tais dados sugerem que a geoprópolis é uma promissora fonte de compostos ativos contra algumas bactérias, com citotoxicidade maior para células tumorais que normais e também capaz de atuar sobre biofilme de S. mutans, podendo ser útil no controle de doenças biofilme dependentes, relacionadas a este microrganismo / Abstract: The present study concerning Melipona scutellaris geopropolis aimed to evaluate their antimicrobial activity against Streptococcus mutans and other pathogens of clinical importance, the antiproliferative activity on normal and tumor cell lines and to chemically characterize the ethanol extract and its bioactive chemical fraction. Further, also it analyzed the ability of this bioactive fraction acting on in vitro S. mutans biofilm. Initially it was obtained the ethanolic extract of geopropolis (EEGP), which was split, resulting in the hexane (HF), chloroform (CF) and ethyl acetate (FAC) fractions. The EEGP and fractions were tested to determine the minimum inhibitory (MIC) and minimum bactericidal concentrations (MBC) against S. mutans UA159 and five bacterial strains of clinical interest. After checked for antimicrobial activity, the EEGP and bioactive fraction were evaluated for their cytotoxicity through antiproliferative activity against normal and also tumor cells lines. The chemical characterization was performed by reverse phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC) and gas chromatography with mass spectrometry (GC-MS). The action of selected bioactive fraction on S. mutans biofilms was evaluated by inhibition of biofilm formation, time kill, drop in pH assays, and scanning electron microscopy (SEM). The EEGP and HF were able to inhibit the growth of S. mutans and most bacterial strains, and HF presented the lowest MIC among the tested fractions. Concerning the antiproliferative activity, both EEGP and HF selectively inhibited the growth of tumor lines, but the HF at lower concentrations. Chemical analysis of EEGP and fraction indicated the presence of bioactive compounds of low polarity and the absence of flavonoids and cinnamic acid derivatives. The HF effectively reduced the biofilm biomass at both concentrations studied (250 and 400 mg / ml) compared with control (p<0.05), but did not affect bacterial viability (time kill), nor acid production by bacteria (p>0.05). The SEM analysis showed a change in the biofilm matrix treated with FH verified by the apparent loss of surface homogeneity. These data suggest that geopropolis is a promising source of active compounds against some bacteria, with more cytotoxicity to tumor cells than normal and also able to act on S. mutans biofilms, which may be useful controlling biofilm dependent diseases related to this microrganism / Mestrado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Mestre em Odontologia

Orientadores: Jacks Jorge Junior, Ana Lucia Carrinho Ayroza Rangel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-28T02:10:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nobre_JoseaneRodriguesdaSilva_D.pdf: 900740 bytes, checksum: 396aa1db6f094ebb31435e4b1acc479f (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: A interface prótese-mucosa é o meio ideal para a formação de biofilme e este processo é favorecido pela diminuição do fluxo salivar, por irregularidades da superfície do material e pela temperatura bucal. Os microrganismos presentes no biofilme atuam como uma fonte de infecção e, em situações especiais, podem ser aspirados causando doenças sistêmicas importantes. Candida spp é a levedura mais frequentemente encontrada em próteses totais, sendo relacionada com o desenvolvimento de diversas lesões bucais. O método mais popular para a remoção do biofilme da prótese é a escovação com dentifrício. Recentemente o gel de própolis brasiliensis passou a ser indicado para o controle de microrganismos presentes na cavidade oral. Diante da necessidade de controle da colonização por Candida spp, e como alternativa ao uso de medicações antifúngicas convencionais em pacientes idosos portadores de próteses totais, julgamos oportuno estudar o efeito deste gel na colonização da prótese total destes pacientes. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da utilização de dentifrício à base de própolis brasiliensis, comparado a outras técnicas de higienização, quanto a presença de Candida spp na saliva total de pacientes idosos portadores de prótese. Foram selecionados 36 pacientes, randomizados por sorteio e distribuídos em três grupos experimentais: G1 (Grupo CONV) ¿ Os pacientes foram instruídos a realizar higienização mecânica da prótese total superior com escova dental de cabeça média e cerdas macias e dentifrício sem abrasivos, 3 vezes ao dia; G2 (Grupo PROP) - Os pacientes foram instruídos a realizar higienização mecânica da prótese total, com escova dental de cabeça média e cerdas macias e dentifrício à base de própolis Proporalcare® (Pharma Nectar, Belo Horizonte-MG, Brasil), 3 vezes ao dia; G3 (Grupo COTA), pacientes foram orientados a higienizar a prótese total com escova dental de cabeça média e cerdas macias e dentifrício convencional, 3 vezes ao dia, além de imergi-las em solução com pastilhas efervescentes (Corega Tabs®), em recipiente plástico padronizado fornecido pelos pesquisadores. Amostras de saliva não estimulada foram coletadas em T0 (0 dias, consulta inicial); T1 (30 dias de acompanhamento) e T2 (60 dias de acompanhamento), diretamente em frascos estéreis. Alíquotas de 10?L de amostras de saliva puras foram semeadas em placas de Agar-Sabouraud-dextrose. O reconhecimento das colônias foi realizado considerando as características morfológicas da Candida albicans. Os resultados foram submetidos ao teste de normalidade de Shapiro-Wilk, e ao teste não paramétrico de Friedman para amostras emparelhadas, considerando p< 0,05. Após a análise estatística dos resultados foi possível observar que a escovação mecânica utilizando dentifrício convencional ou a base de própolis apresentaram resultados similares nos tempos avaliados, enquanto a utilização de pastilhas efervescentes resultaram em menor número de colônias de Candida spp após 60 dias. Concluímos que a utilização de dentifrício à base de própolis brasiliensis demonstrou resultados similares a utilização do dentifrício convencional e resultados inferiores a utilização associada entre pastilhas efervescentes e dentifrício convencional / Abstract: The denture-mucosa interface is the ideal way to form biofilm and this process is favored by the decrease in salivary flow, irregularities on the surface of the material and oral temperature. The microorganisms in the biofilm act as a source of infection and, in special situations, may be aspirated causing major systemic diseases. Candida spp is the most found yeast in full dentures, being related to the development of several oral lesions. The most popular method to remove biofilm from the denture is brushing with dentrifice. Brasiliensis propolis gel has become an indication for the control of microrganisms in the oral cavity. Faced with the need to control the colonization by Candida spp, and as an alternative to the use of conventional antifungal medications in elderly patients with full dentures, we believe it is appropriate to study the effect of this gel in the colonization of the full dentures of these patients. Thus, the aim of this study was to evaluate the effect of using brasiliensis propolis based dentrifice, compared to other cleaning techniques, as the presence of Candida spp in the saliva total of elderly patients with prosthesis We selected 36 patients, sorted randomly and distributed in three experimental groups: G1 (CONV Group) ¿ The patients were instructed to perform mechanical cleaning of the upper total denture with a toothbrush of medium-size head and soft bristles and dentrifice without abrasives, 3 times a day; G2 (PROP Group) - The patients were instructed to perform mechanical cleaning of the total denture, with a toothbrush of medium-size head and soft bristles and Proporalcare® propolis based dentrifice (Pharma Nectar, Belo Horizonte-MG, Brazil), 3 times a day; G3 (COTA Group) - patients were instructed to perform the cleaning of the total denture with a toothbrush of medium-size head and soft bristles and conventional dentrifice, 3 times a day, and immerse them in solution with effervescent tablets (Corega Tabs®), in a standardized plastic container provided by the researchers. Samples of unstimulated saliva were collected in T0 (0 days, initial consultation); T1 (30-day follow-up) and T2 (60-day follow-up), directly in sterile bottles. 10mL aliquots of pure saliva samples were seeded on Sabouraud-dextrose-Agar plates. The recognition of the colonies was performed considering the morphological characteristics of Candida albicans. The results were submitted to the Shapiro-Wilk normality test, and Friedman nonparametric test for paired samples, considering p< 0.05. After statistical analysis it was possible to observe that the mechanical brushing using conventional dentrifice or propolis based showed similar results in the evaluated times, while the use of effervescent tablets resulted in fewer Candida spp colonies after 60 days. We conclude that the use of brasiliensis propolis based dentrifice showed similar results using conventional dentrifice and inferior results to the ones with combined use of conventional toothpaste and effervescent tablets / Doutorado / Patologia / Doutora em Estomatopatologia

Propolis (bičių pikis, bičių klijai) yra sakinga medžiaga, kurią bitės surenka nuo tuopų, beržų, liepų ar kitų augalų (priklausomai nuo tos geografinės zonos augmenijos). Propolio farmakologinis poveikis yra labai įvairus, todėl jis nuo seno populiarus liaudies medicinoje ir traukia mokslininkų dėmesį (ypač nuo XX a. 7 dešimtmečio). Viena iš svarbiausių propolio savybių yra stiprus antioksidacinis aktyvumas. Tyrimo tikslas - nustatyti bei palyginti pagrindinių veikliųjų medžiagų kiekius propolio etanoliniuose ekstraktuose, įvertinti jų antioksidacinį aktyvumą. Pritaikius maceracijos metodą, buvo pagaminti skystieji propolio etanoliniai ekstraktai (etanolis 50%, 60%, 70%, 80% ir 96% koncentracijos). Buvo įvertinta ekstraktų kokybė gravimetriniu, spektrofotometriniu bei efektyviosios skysčių chromatografijos su diodų matricos ir masių spektrometrijos detektoriais (ESCh-DAD-MS) metodais. Pritaikius efektyviosios skysčių chromatografijos ir masių spektrometrijos metodą, nustatyta, kad viena iš dominuojančių fenolinių rūgščių propolio etanoliniuose ekstraktuose yra ferulo rūgštis. Todėl nustatant fenolinių junginių kiekį propolio etanoliniuose ekstraktuose spektrofotometriškai, kaip standartas buvo panaudota ferulo rūgštis. Bendras fenolinių junginių kiekis gautas apie 10 kartų didesnis, nei naudojant pinocembrino ir galangino mišinį (2:1). Daugiausiai fenolinių junginių nustatyta ekstraktuose, gautuose ekstrahuojant 70%, 80% bei 96% etanoliu. Buvo atliktas antioksidacinio... [toliau žr. visą tekstą] / Propolis (bee glue) is a resinous material that honeybees collect from poplar, birch or other plants (the plant source depends on the geographic origin of propolis). Because of its popularity in folk medicine, propolis has become the subject of intense pharmacological and chemical studies for the last 30 years. Numerous studies have proven its versatile pharmacological activities. One of the most important is its antioxidant activity. The objective of this study was to identify and compare the main active substances in the ethanolic extracts of propolis and to evaluate their antioxidant activity. The classical maceration method was used for the production of liquid ethanolic extracts of propolis (the concentration of used ethanol: 50%, 60%, 70%, 80% and 96%). The quality of popolis was evaluated by gravimetric, spectrophotometric and High Performance Liquid Chromatography with Diode Array and Mass Spectrometric detectors (HPLC-DAD-MS) methods. The results of the HPLC-DAD-MS analysis showed that one of the main phenolic acids in the ethanolic extracts of propolis is ferulic acid. That was the reason for using it as a standard in the spectrometric analysis of total phenolic compounds. Spectrophotometric method showed about 10 times higher results than the analysis with the standard of pinocembrin and galangin mixture (2:1). The highest concentrations of phenolic compounds were found in the extracts made with the ethanol of 70%, 80% and 96% concentrations. The antioxidant... [to full text]

Os extratos obtidos a partir da própolis vermelha brasileira (PVB) têm sido investigados devido às suas amplas atividades biológicas. Recentemente, em nosso grupo de pesquisa, demonstramos a viabilidade da incorporação de um extrato n-hexânico de PVB em nanoemulsões de uso tópico, bem como sua permeação/retenção em pele de orelha suína. No presente estudo, avaliamos as propriedades físico-químicas e reológicas de hidrogéis contendo essas nanoemulsões visando a obtenção de um produto semissólido adequado para aplicação tópica. Em uma primeira fase, foram preparadas nanoemulsões compostas de núcleo oleoso contendo extrato n–hexânico de PVB, miristato de isopropila, lecitina de ovo (NE) e DOTAP (NE/DT), e fase externa aquosa. O polímero gelificante hidroxietilcelulose foi incorporado às formulações após a sua obtenção por emulsificação espontânea (H-NE e H-NE/DT). As formulações apresentaram-se monodispersas com diâmetro médio na faixa de 200-300 nm, confirmado por microscopia eletrônica de transmissão. H-NE apresentou um potencial zeta negativo (-38mV), enquanto o mesmo parâmetro para H-NE/DT foi positivo (+36mV), devido à presença do lipídeo catiônico DOTAP na formulação. O teor de benzofenonas totais, determinado por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), foi de cerca de 85 mg/g de extrato. Esses parâmetros mantiveram-se constantes durante 90 dias de armazenamento a 4C. As formulações H/NE e H-NE/DT apresentaram um comportamento não-Newtoniano pseudoplástico. Estudos de permeação/retenção das benzofenonas através da pele de orelha suína foram realizados utilizando células de difusão do tipo Franz. A maior retenção das benzofenonas na pele (18,11 μg/cm² após 8h) foi observada para a formulação H-NE/DT, demonstrando o efeito do lipídeo catiônico DOTAP nesse parâmetro. Em uma última etapa, investigou-se a capacidade das formulações de conferirem proteção à pele de orelha suína frente ao dano oxidativo gerado pela sua exposição à luz UVA/UVB. A proteção da pele de orelha suína foi evidenciada pelas técnicas de TBARS, carbonilação de proteínas e grupamentos tióis totais. Os resultados obtidos sugerem que os Hidrogéis contendo extrato de PVB apresentam propriedades físico-químicas e reológicas adequadas para serem utilizadas topicamente para a prevenção do dano oxidativo causado pela exposição à luz UVA/UVB. / Brazilian red propolis (BRP) extracts have been investigated due to their extensive biological activities. Recently, in our research group, we demonstrated the feasibility of incorporating an n-hexane extract of BRP into topical nanoemulsions, as well as the permeation/retention of these compounds in porcine ear skin. In the present study, we evaluated the physicochemical and rheological properties of hydrogels containing these nanoemulsions in order to obtain a semi-solid product suitable for topical application. In a first step, nanoemulsions composed of an oil nucleus containing BRP n-hexane extract, isopropyl myristate, egg lecithin (NE) and DOTAP (NE/DT), and an aqueous external phase were prepared. The hydroxyethylcellulose gelling polymer was incorporated into the formulations after being obtained by spontaneous emulsification (H-NE and H-NE/DT). The formulations were monodisperse exhibiting a mean diameter in the 200-300 nm range, confirmed by transmission electron microscopy. H-NE presented a negative zeta potential (-38mV), while H-NE/DT showed a positive value (+ 36mV) due to the presence of the cationic lipid DOTAP in the formulation. The total benzophenone content, determined by high performance liquid chromatography (HPLC), was about 85 mg/g extract. These parameters were maintained constant for 90 days of storage at 4°C. The formulations H/NE and H-NE/DT presented a non-Newtonian pseudoplastic behavior. Permeation/retention studies of benzophenones through porcine ear skin were performed using Franz type diffusion cells. The highest retention of benzophenones in the skin (18.11 μg/cm² after 8h) was observed for the H-NE/DT formulation, demonstrating the effect of the DOTAP cationic lipid on this parameter. In a last step, the ability of the formulations to confer protection of porcine ear skin against oxidative damage, generated by its exposure to UVA/UVB light, was investigated. The protection was evidenced by the TBARS, carbonylation of proteins, and total thiol groups techniques. The results obtained suggest that the hydrogels containing BRP have adequate physicochemical and rheological properties to be used topically for the prevention of oxidative damage caused by exposure to UVA/UVB light.

L’infection urinaire (IU) est un problème majeur de Santé publique. La cystite aiguë touchant principalement les femmes est la plus fréquente des IU. La bactérie la plus fréquemment isolée au cours de ces IU est Escherichia coli. Une des particularités de la cystite est sa propension à récidiver. Le traitement préconisé pour ces infections est la prise d’antibiotiques, qui peut être fréquente en cas de cystites récidivantes. C’est dans ce contexte que de nouvelles stratégies doivent être développées afin de prévenir et traiter les IU récidivantes. Parmi ces différentes stratégies, l’utilisation de produits naturels tels que la canneberge (Vaccinium macrocarpon) apparaît comme prometteuse. En effet, des études précédentes ont montré que la canneberge a un effet négatif sur l’adhésion des bactéries aux cellules superficielles de l’épithélium vésical facilitant l’élimination des bactéries par le flux urinaire. Cette activité est portée par la proanthocyanidine de type A (PAC-A). D’autre part, une étude menée par notre équipe a montré que l’effet de la canneberge sur l’adhésion et la virulence de souches d’E. coli uropathogènes pouvait être potentialisé par l’ajout d’un autre composé naturel : la propolis. Depuis l’Antiquité ses propriétés anti-bactériennes sont reconnues et des études plus récentes ont démontré son impact sur des bactéries à Gram positif mais également sur deux bactéries à Gram négatif : E. coli et Pseudomonas aeruginosa. Ce travail de thèse a permis : i) de décrire l’impact de la canneberge, de la propolis et de leur association sur le transcriptome d’une souche clinique d’E. coli uropathogène (G50). Cette analyse transcriptomique a montré que la canneberge entrainait une sous-expression de gènes liés à l’adhésion, mais également de gènes liés à la mobilité et à la formation de biofilm. En revanche, la canneberge augmentait l’expression des gènes liés au métabolisme du fer ainsi qu’à la réponse au stress. Ces effets étaient potentialisés par l’ajout de la propolis. En parallèle, des tests phénotypiques menés sur une collection de souches d’E. coli uropathogènes sur la mobilité et la formation de biofilm ont confirmé les résultats précédents ; ii) de développer un test, basé sur les précédents travaux de transcriptomique, permettant une évaluation standardisée de l’effet de la PAC-A sur E. coli, indépendamment de sa concentration car il n’existe pas de techniques standardisées pour doser cette molécule. C’est ainsi que 4 gènes (tsr, ftnA, fecB, feoB) ont été sélectionnés, le suivi de leur expression permettant une mesure de l’activité anti-bactérienne de la canneberge; iii) de mesurer l’effet potentialisateur de la propolis sur l’activité des antibiotiques utilisés dans le traitement des IU. C’est ainsi qu’il a été montré que l’ajout de la propolis permettait d’augmenter l’activité bactéricide des antibiotiques testés et de diminuer les concentrations minimales inhibitrices de ces antibiotiques. / Urinary Tract Infection (UTI) is a major problem of public health. Acute cystitis which touches mostly women is the most common form of UTI. The bacteria which is mostly isolated in an UTI is Escherichia coli. A particularity of cystitis is to come back. In this context news strategies have to be developed to prevent and cure recurrent UTI. One of these strategies is the utilization of natural products like the cranberry (Vaccinium macrocarpon) which is promising. Indeed, previous studies showed the negative impact of cranberry on the adhesion of bacteria on the superficial cells of bladder which help the elimination of bacteria by the urinary flux. This activity is carried by the type A proanthocyanidin (PAC-A). Moreover, a study lead by our team has demonstrated an improvement of the activity of cranberry on the adhesion and the virulence of uropathogenic E. coli (UPEC) by another natural product: the propolis. Since Antiquity its antibacterial activities have been recognize and more recent studies have demonstrated its impact of Gram positive bacteria and also on two Gram negative bacteria: E. coli and Pseudomonas aeruginosa. This thesis has allowed for: i) the description of the impact of cranberry, propolis and its association on the transcriptome of a clinical strain of UPEC (G50). This transcriptomic analyze have shown that the cranberry down regulated genes linked to the adhesion and also genes linked to the motility and biofilm formation. However the cranberry up regulated genes linked to the iron metabolism and the stress response. These effects are improve by the addition of propolis. Concurrently phenotypics tests have been conducted on a collection of UPEC on the motility and the biofilm formation and they confirmed the previous results; ii) the development of a test, based on our transcriptomic results, enable to performed a standardized evaluation of the impact of PAC-A on E. coli, independently of its concentration. Indeed, this molecule cannot be measure in a standard way. Four genes have been selected (tsr, ftnA, fecB, feoB), the monitoring of their expression allow us to measure the anti-bacterial efficiency of the cranberry; iii) the measurement of the potential effect of the propolis of the antibiotic’s activities used to treat UTIs. Thus it have been observed that the addition of propolis improve the bactericide activity of the antibiotics tested and reduces the minimal inhibitory concentration of these antibiotics.

Iš pirmo žvilgsnio odos terapija atrodo paprasta, tačiau moksliškai pagrįstas pusiau kietų vaisto formų vartojamų ant odos modeliavimas yra vienas sudėtingiausių technologijos aspektų. Gaminant pusiau kietą vaisto formą skirtą vartoti ant odos, vienas svarbiausių uždavinių yra pagrindo parinkimas. Remiantis reologiniais (klampos rodiklio) tyrimais, galima numatyti pusiau kieto preparato stabilumą saugojimo metu. Įvertinant kremų gamybos sudėtingumą ir ypač tirštųjų ekstraktų įvedimo į pagrindą problemas, aktualu pagaminti kremo pagrindą iš tokių komponentų, kad būtų galima išvengti ilgo šildymo proceso. Darbo tikslas yra propolio emulsinio (vanduo aliejuje) kremo sudėties parinkimas, įvertinant fizikines-chemines savybes. Remiantis literatūra ir fizikinių-cheminių savybių tyrimais, parinkta v/a kremo pagrindo sudėtis (polietileno ir vazelino aliejaus mišinys, izopropilo palmitato ir poliglicerolio esterio mišinys, glicerolis ir išgrynintas vanduo) ir pritaikyta technologija stabilios v/a emulsijos gamybai. Tyrimų rezultatai parodė, kad optimali propolio tirštojo ekstrakto koncentracija, kurią galima įterpti į pasirinktą emulsinį pagrindą yra 1% – klampa kito ne daugiau 29%, lyginant su kitų propolio kremų klampa. Kremo pH reikšmė artima odos pH reikšmei. Kremas išlieka stabilus kambario temperatūroje, yra homogeniškas, pasižymi priimtinomis juslinėmis savybėmis. / At first sight cutaneous therapeutics seems simple, but the formulation of semi-solid preparations for cutaneous application are reasonable scientifically. It‘s one of the most complicated technological aspects. The choice of basis is one the most important tasks, produced semi-solid preparations for cutaneous application. It‘s possible to suppose a stability of semi-solid preparation during storage time, supported the rheologicals (value of viscosity) researches. It‘s topical to produce the basis of the cream from such components, that would be possible to avoid the long heating process, appreciated a complication of the manufacture of creams and particularly an insertion of softs extracts to the basis problems. The aim of the work is a choice of the composition of propolis emulsion (water in oil) cream, appreciated the physico-chemical properties. A composition of basis of w/o cream (mixture of liquid paraffin and polyethylene, mixture of isopropyl palmitate and polyglycerine ester, glycerine and water) was selected and the technology for manufacture of stable w/o emulsion was fitted, supported a literature and the researches of physico-chemical properties. The results of the researches showed that the optimal concentration of soft extracts of propolis, which is possible to insert to the choiced emulsion basis is 1%. The viscosity varied no more 29%, compared with the viscosity of other propolis creams. The value of cream pH is close to a skin pH. The cream remains stable... [to full text]

Os extratos obtidos a partir da própolis vermelha brasileira (PVB) têm sido investigados devido às suas amplas atividades biológicas. Recentemente, em nosso grupo de pesquisa, demonstramos a viabilidade da incorporação de um extrato n-hexânico de PVB em nanoemulsões de uso tópico, bem como sua permeação/retenção em pele de orelha suína. No presente estudo, avaliamos as propriedades físico-químicas e reológicas de hidrogéis contendo essas nanoemulsões visando a obtenção de um produto semissólido adequado para aplicação tópica. Em uma primeira fase, foram preparadas nanoemulsões compostas de núcleo oleoso contendo extrato n–hexânico de PVB, miristato de isopropila, lecitina de ovo (NE) e DOTAP (NE/DT), e fase externa aquosa. O polímero gelificante hidroxietilcelulose foi incorporado às formulações após a sua obtenção por emulsificação espontânea (H-NE e H-NE/DT). As formulações apresentaram-se monodispersas com diâmetro médio na faixa de 200-300 nm, confirmado por microscopia eletrônica de transmissão. H-NE apresentou um potencial zeta negativo (-38mV), enquanto o mesmo parâmetro para H-NE/DT foi positivo (+36mV), devido à presença do lipídeo catiônico DOTAP na formulação. O teor de benzofenonas totais, determinado por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), foi de cerca de 85 mg/g de extrato. Esses parâmetros mantiveram-se constantes durante 90 dias de armazenamento a 4C. As formulações H/NE e H-NE/DT apresentaram um comportamento não-Newtoniano pseudoplástico. Estudos de permeação/retenção das benzofenonas através da pele de orelha suína foram realizados utilizando células de difusão do tipo Franz. A maior retenção das benzofenonas na pele (18,11 μg/cm² após 8h) foi observada para a formulação H-NE/DT, demonstrando o efeito do lipídeo catiônico DOTAP nesse parâmetro. Em uma última etapa, investigou-se a capacidade das formulações de conferirem proteção à pele de orelha suína frente ao dano oxidativo gerado pela sua exposição à luz UVA/UVB. A proteção da pele de orelha suína foi evidenciada pelas técnicas de TBARS, carbonilação de proteínas e grupamentos tióis totais. Os resultados obtidos sugerem que os Hidrogéis contendo extrato de PVB apresentam propriedades físico-químicas e reológicas adequadas para serem utilizadas topicamente para a prevenção do dano oxidativo causado pela exposição à luz UVA/UVB. / Brazilian red propolis (BRP) extracts have been investigated due to their extensive biological activities. Recently, in our research group, we demonstrated the feasibility of incorporating an n-hexane extract of BRP into topical nanoemulsions, as well as the permeation/retention of these compounds in porcine ear skin. In the present study, we evaluated the physicochemical and rheological properties of hydrogels containing these nanoemulsions in order to obtain a semi-solid product suitable for topical application. In a first step, nanoemulsions composed of an oil nucleus containing BRP n-hexane extract, isopropyl myristate, egg lecithin (NE) and DOTAP (NE/DT), and an aqueous external phase were prepared. The hydroxyethylcellulose gelling polymer was incorporated into the formulations after being obtained by spontaneous emulsification (H-NE and H-NE/DT). The formulations were monodisperse exhibiting a mean diameter in the 200-300 nm range, confirmed by transmission electron microscopy. H-NE presented a negative zeta potential (-38mV), while H-NE/DT showed a positive value (+ 36mV) due to the presence of the cationic lipid DOTAP in the formulation. The total benzophenone content, determined by high performance liquid chromatography (HPLC), was about 85 mg/g extract. These parameters were maintained constant for 90 days of storage at 4°C. The formulations H/NE and H-NE/DT presented a non-Newtonian pseudoplastic behavior. Permeation/retention studies of benzophenones through porcine ear skin were performed using Franz type diffusion cells. The highest retention of benzophenones in the skin (18.11 μg/cm² after 8h) was observed for the H-NE/DT formulation, demonstrating the effect of the DOTAP cationic lipid on this parameter. In a last step, the ability of the formulations to confer protection of porcine ear skin against oxidative damage, generated by its exposure to UVA/UVB light, was investigated. The protection was evidenced by the TBARS, carbonylation of proteins, and total thiol groups techniques. The results obtained suggest that the hydrogels containing BRP have adequate physicochemical and rheological properties to be used topically for the prevention of oxidative damage caused by exposure to UVA/UVB light.

Os extratos obtidos a partir da própolis vermelha brasileira (PVB) têm sido investigados devido às suas amplas atividades biológicas. Recentemente, em nosso grupo de pesquisa, demonstramos a viabilidade da incorporação de um extrato n-hexânico de PVB em nanoemulsões de uso tópico, bem como sua permeação/retenção em pele de orelha suína. No presente estudo, avaliamos as propriedades físico-químicas e reológicas de hidrogéis contendo essas nanoemulsões visando a obtenção de um produto semissólido adequado para aplicação tópica. Em uma primeira fase, foram preparadas nanoemulsões compostas de núcleo oleoso contendo extrato n–hexânico de PVB, miristato de isopropila, lecitina de ovo (NE) e DOTAP (NE/DT), e fase externa aquosa. O polímero gelificante hidroxietilcelulose foi incorporado às formulações após a sua obtenção por emulsificação espontânea (H-NE e H-NE/DT). As formulações apresentaram-se monodispersas com diâmetro médio na faixa de 200-300 nm, confirmado por microscopia eletrônica de transmissão. H-NE apresentou um potencial zeta negativo (-38mV), enquanto o mesmo parâmetro para H-NE/DT foi positivo (+36mV), devido à presença do lipídeo catiônico DOTAP na formulação. O teor de benzofenonas totais, determinado por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), foi de cerca de 85 mg/g de extrato. Esses parâmetros mantiveram-se constantes durante 90 dias de armazenamento a 4C. As formulações H/NE e H-NE/DT apresentaram um comportamento não-Newtoniano pseudoplástico. Estudos de permeação/retenção das benzofenonas através da pele de orelha suína foram realizados utilizando células de difusão do tipo Franz. A maior retenção das benzofenonas na pele (18,11 μg/cm² após 8h) foi observada para a formulação H-NE/DT, demonstrando o efeito do lipídeo catiônico DOTAP nesse parâmetro. Em uma última etapa, investigou-se a capacidade das formulações de conferirem proteção à pele de orelha suína frente ao dano oxidativo gerado pela sua exposição à luz UVA/UVB. A proteção da pele de orelha suína foi evidenciada pelas técnicas de TBARS, carbonilação de proteínas e grupamentos tióis totais. Os resultados obtidos sugerem que os Hidrogéis contendo extrato de PVB apresentam propriedades físico-químicas e reológicas adequadas para serem utilizadas topicamente para a prevenção do dano oxidativo causado pela exposição à luz UVA/UVB. / Brazilian red propolis (BRP) extracts have been investigated due to their extensive biological activities. Recently, in our research group, we demonstrated the feasibility of incorporating an n-hexane extract of BRP into topical nanoemulsions, as well as the permeation/retention of these compounds in porcine ear skin. In the present study, we evaluated the physicochemical and rheological properties of hydrogels containing these nanoemulsions in order to obtain a semi-solid product suitable for topical application. In a first step, nanoemulsions composed of an oil nucleus containing BRP n-hexane extract, isopropyl myristate, egg lecithin (NE) and DOTAP (NE/DT), and an aqueous external phase were prepared. The hydroxyethylcellulose gelling polymer was incorporated into the formulations after being obtained by spontaneous emulsification (H-NE and H-NE/DT). The formulations were monodisperse exhibiting a mean diameter in the 200-300 nm range, confirmed by transmission electron microscopy. H-NE presented a negative zeta potential (-38mV), while H-NE/DT showed a positive value (+ 36mV) due to the presence of the cationic lipid DOTAP in the formulation. The total benzophenone content, determined by high performance liquid chromatography (HPLC), was about 85 mg/g extract. These parameters were maintained constant for 90 days of storage at 4°C. The formulations H/NE and H-NE/DT presented a non-Newtonian pseudoplastic behavior. Permeation/retention studies of benzophenones through porcine ear skin were performed using Franz type diffusion cells. The highest retention of benzophenones in the skin (18.11 μg/cm² after 8h) was observed for the H-NE/DT formulation, demonstrating the effect of the DOTAP cationic lipid on this parameter. In a last step, the ability of the formulations to confer protection of porcine ear skin against oxidative damage, generated by its exposure to UVA/UVB light, was investigated. The protection was evidenced by the TBARS, carbonylation of proteins, and total thiol groups techniques. The results obtained suggest that the hydrogels containing BRP have adequate physicochemical and rheological properties to be used topically for the prevention of oxidative damage caused by exposure to UVA/UVB light.