Submitted by RAFAEL TOMODA SATO null (rt.sato@yahoo.com.br) on 2018-03-27T20:29:26Z No. of bitstreams: 1 Dissertação FINAL Rafael Sato.pdf: 597893 bytes, checksum: 8e3c7ee0dff2d6c1ba511a0fb8eba69e (MD5) / Rejected by Alexandra Maria Donadon Lusser Segali null (alexmar@fcav.unesp.br), reason: Solicitamos que realize correções na submissão seguindo as orientações abaixo: No arquivo pdf submetido ao repositório não consta o certificado de aprovação (documento obrigatório). Peço que insira o mesmo no arquivo pdf e depois faça uma nova submissão. Agradecemos a compreensão on 2018-03-28T13:03:19Z (GMT) / Submitted by RAFAEL TOMODA SATO null (rt.sato@yahoo.com.br) on 2018-03-28T13:35:29Z No. of bitstreams: 1 Dissertação FINAL Rafael Sato.pdf: 711685 bytes, checksum: 2baeec3c6f8697936d52cc1949c35ac2 (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandra Maria Donadon Lusser Segali null (alexmar@fcav.unesp.br) on 2018-03-28T16:48:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 sato_rt_me_jabo.pdf: 711685 bytes, checksum: 2baeec3c6f8697936d52cc1949c35ac2 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-28T16:48:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 sato_rt_me_jabo.pdf: 711685 bytes, checksum: 2baeec3c6f8697936d52cc1949c35ac2 (MD5) Previous issue date: 2018-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Pró-Reitoria de Pesquisa (PROPe UNESP) / O principal objetivo deste trabalho foi determinar as concentrações plasmáticas de 17α,20β-dihidroxi-4-pregnen-3-one (DHP), Estradiol 17β (E2), Testosterona (T) e Prostaglandina F2α (PGF2α) e a distribuição percentual dos diferentes tipos de ovócitos presentes nos ovários ao longo do processo de hipofisação de pacu (Piaractus mesopotamicus) com ou sem uso de PGF exógena. Para isto, 23 fêmeas foram distribuídas em cinco tratamentos, com indução dividida em duas doses com intervalo de 24 horas: (0,2 mL.kg-1 solução salina) + (0,2 mL.kg-1 solução salina) (T1); (0,2 mL.kg-1 solução salina) + (0,2 mL.kg-1 solução salina e 2 ml PGF2α) (T2); (0,6 mg.kg-1 EBHC (extrato bruto de hipófise de carpa)) + (0,2 mL.kg-1 solução salina e 2 mL PGF2α) (T3); (0,6 mg.kg-1 EBHC) + (5,4 mg.kg-1 EBHC) (T4); (0,6 mg.kg-1 EBHC) + (5,4 mg.kg-1 EBHC e 2 mL PGF2α) (T5). Foram coletadas amostras de sangue e ovócitos para análise dos níveis plasmáticos de PGF2α, DHP, E2 e T e avaliação dos tipos de ovócitos em quatro períodos após a segunda dose. O uso de PGF2α exógena provocou um pico plasmático de PGF2α uma hora após a segunda dose hormonal. A hipofisação, com ou sem o uso de PGF2α exógena, provocou pico plasmático de PGF2α no momento da desova. O uso de PGF2α exógena juntamente hipofisação (T5) eleva a taxa de ovulação de pacu em relação a fêmeas apenas hipofisadas (T4), provavelmente em função de níveis de GVBD e de PGF2α superiores de T5, quatro horas após a segunda dose hormonal. / The main objective of this study was to determine the plasma concentrations of 17α, 20β-dihydroxy-4-pregnen-3-one (DHP), 17β-Estradiol (E2), Testosterone (T) and Prostaglandin F2α (PGF2α) and the different types of oocytes present in the ovaries throughout the pacu (Piaractus mesopotamicus) hypophysation process with or without the use of exogenous PGF2α. To that, 23 females were distributed in five treatments, with induction divided into two doses with a 24-hour interval: (0.2 mL.kg-1 saline) + (0.2 mL.kg-1 saline) (T1); (0.2 mL.kg-1 saline) + (0.2 mL.kg-1 saline and 2 mL PGF2α) (T2); (0.6 mg.kg-1 CPE (crude pituitary extract)) + (0.2 mL.kg-1 saline and 2 mL PGF2α) (T3); (0.6 mg.kg-1 CPE) + (5.4 mg.kg-1 CPE) (T4); (0.6 mg.kg-1 CPE) + (5.4 mg.kg-1 CPE and 2 ml PGF2α) (T5). Blood and oocyte samples were collected for analysis of plasma levels of PGF2α, DHP, E2 and T in four periods after the second dose. The use of exogenous PGF2α caused a plasma peak of PGF2α one hour after the second hormonal dose. Hypophysation, with or without the use of exogenous PGF2α, caused a plasma peak of PGF2α at the time of spawning. The use of exogenous PGF2α together with hypophysation (T5) increased the pacu ovulation rate in relation to hypophysation only (T4), probably as a result of higher GVBD and PGF2α levels of T5, four hours after the second hormonal dose. / FAPESP: 16/20741-3

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-08-15T15:39:39Z No. of bitstreams: 1 Doralice Pereira Falcao.pdf: 338402 bytes, checksum: baedcabbb203c9b4109d690827db3671 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-15T15:39:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Doralice Pereira Falcao.pdf: 338402 bytes, checksum: baedcabbb203c9b4109d690827db3671 (MD5) Previous issue date: 2009-08-18 / This work aimed to study the effect of PGF2α administration on anestrous post-partum period in 80 goats, with continuos or controlled suckled, rised in semiextensive system with water and mineral salt ad libitum. The females, with age between two and six years, were randomly distributed in three groups (GI, GII e GIII). The females of GI (n = 30) received 250 μg of PGF2 α in vulvar muscle on days 6th and 12th after delivery. The females of GII (n = 30) received the treatment of Group I, but every day from days 6th to 10th after delivery. The GIII (n = 20) was the control group. The estrous detection was made by using teasers and the mating with bucks with confirmed fertility. The obtained data were analyzed by ANOVA and by analysis of standard errors of difference among proportions. Difference in the occurrence of estrous among the three experimental groups was not observed (P > 0,05), however the average time of post partum anestrous was not observed (P < 0,05) in animals treated with of post PGF2 α. It was also detected a relevant reduction (P > 0,05) of post-partum anestrous in females with controlled suckled. Difference was not registered (P > 0,05) on pregnant percentages among the different groups. It may be concluded that the administration of PGF2α in the beginning of puerperium in caprine is efficient to reduce the anestrous pos-partum period, specially in females controlled suckled; however do not influence the fertility in meat goats. In the second study the objective was to verify the viability of the PGF2α administration association or not with dexamethasone in the induction of birth in milk goats and its implication in the delivering of the afterbirth placenta,puerperal disturb and viability you create of them. This work was lead in the Pendencia Experimental Station, EMEPA, located at Soledade – PB. A total of 80 milk goats from different races had been used such as Anglo Nubian, Brown Alpine and British Alpine, presenting age between two and six years and gestational period between 143 and 146 days. Two experiments had been made, being experiment1 (n = 40) carried through in the dry period and experiment 2 (n = 40) carried through in the rainy period. The females had been randomly distributed in eight experimental groups (GI, GII, GII, GIII e GIV) for each experimental type. The GI ( n= 10) received 5,0 mg from PGF2α byintramuscular to vulvae way; the GII (n = 10) received 5,0 mg from associated PGF2 α the 8,0 mg of corticoids saw to intramuscular; the GII ( n= 10) was submitted the administration of 0,125 mg of PGF2 α by intramuscular to vulvae way and the GIV (n = 10) received 0,125 mg from the PGF2α by intramuscular to vulvae way, associated the 8,0 mg of dexamethasone by intramuscular way. On the other hand group GII presented difference statistics in the dry period, however it did not present difference statistic between groups in the different periods. It was concluded that the use of the synthetic prostaglandins associated or not to dexamethasone do not promote the artificial induction of the births without compromise the viability of the kids and the deliver of the afterbirth placenta. / Foram conduzidos dois experimentos para avaliar a eficácia do d-cloprostenol na redução do anestro pós-parto e a indução do parto com d-cloprostenol, Dinoprost trometamina e dexametasona em cabras. No primeiro estudo objetivou-se avaliar os efeitos da administração da PGF2α sobre o período de anestro pós-parto de 80 cabras, em aleitamento contínuo ou controlado, criadas em sistema semi-intensivo com acesso a água e sal mineral ad libitum. As fêmeas, com idade entre dois e sis anos, foram aleatoriamente distribuídas em três grupos experimentais (GI, GII e GIII). As do GI (n = 30) receberam, na musculatura vulvar, 250 μg de PGF2α no 6º e 12º dias após o parto. As do GII (n =30) foram tratadas, pela mesma via e com a mesma dose de PGF2α, no 6º, 7º, 8º, 9º e 10º dias do pós-parto e as do GIII (n=20) serviram de controle. A detecção do estro foi realizada por rufião com auxílio de pessoal habilitado e as coberturas efetuadas com reprodutores de fertilidade comprovada. Os dados foram analisados através da ANOVA e do cálculo do erro padrão da diferença entre proporções. Não foi verificada diferença (P>0,05) das porcentagens de estro entre os três grupos experimentais, todavia, a duração média do anestro pós-parto foi significativamente reduzida (P<0,05) nos animais tratados com PGF2α. Houve redução significativa (P<0,05) do anestro pós-parto das fêmeas em aleitamento controlado. Não foi registrada diferença (P<0,05) nas porcentagens de prenhez entre os diferentesgrupos. Os dados obtidos permitem concluir que a administração da PGF2α no início do puerpério é eficiente para reduzir o período de anestro pós-parto, especialmente nas fêmeas em aleitamento controlado, contudo, não exerce influência sobre a fertilidade de cabras SRD com aptidão para produção de carne. No segundo experimento objetivou-se verificar a viabilidade da administração da PGF2α associada ou não a dexametasona na indução de parto em cabras leiteiras e sua implicação no delivramento das secundinas,distúrbios puerperais e viabilidade das crias. Este trabalho foi conduzido na Estação Experimental de Pendência, pertencente à EMEPA, no município de Soledade-PB. Foram utilizadas 80 cabras de aptidão leiteira das raças Anglo-Nubiana, Parda Alpina e Alpina Britânica, apresentando idade entre dois e seis anos e período gestacional entre 143 e 146 dias. Foram feitos dois experimentos, sendo o experimento 1 (n = 40) realizado no período chuvoso. As fêmeas foram aleatoriamente distribuídas em oito grupos experimentais, sendo quatro grupos (GI, GII, GIII e GIV) para cada tipo experimental. O GI (n = 10) recebeu 5,0 mg de PGF2α, via intramuscular; o GII (n = 10) recebeu 5,0 mg de PGF2α associada a 8,0 mg de corticóides, via intramuscular; o GIII (n = 10) foi submetido à administração de 0,125 mg de PGF2α via intramuscular vulvar e o GIV (n = 10) recebeu 0,125 mg de PGF2α via intramuscular vulvar, associado a 8,0 mg de dexametasona via intramuscular. Apenas o GII apresentou diferença estatística no período seco, porém não apresentou diferença estatística nos diferentes períodos. O intervalo entre o parto e nos diferentes períodos. Conclui-se que os protocolos avaliados mostraram-se eficientes na indução artificial dos partos, as prostaglandinas sintéticas foram eficazes na promoção da luteólise e o tempo do delivramento das secundinas não foi afetado bem como a viabilidade dos cabritos.

A modulação das respostas imunológicas em modelos experimentais infectados por Trypanosoma cruzi tem contribuído de maneira importante nas investigações de novas terapias contra a doença de Chagas. Neste estudo, avaliamos a produção de citocinas Th1 e Th2 relevantes na fase aguda da doença, assim como, níveis de prostaglandina E2, nitrito, parasitemia sanguínea e parasitemia tecidual cardíaca em ratos Wistar machos infectados pela cepa Y de T. cruzi. Foram investigados nos 7°, 14° e 21° dias de infecção, as citocinas padrão Th1: IL-2, IFN-, TNF- e padrão Th2: IL-4, IL-10. Os parâmetros foram dosados e interpretados após a administração, ou não, de meloxicam, melatonina ou ambos. A administração de melatonina contribuiu na proteção do hospedeiro submetido à infecção experimental por T. cruzi devido às ações imunomodulatórias previamente atribuídas a esta substância. O bloqueio da síntese de PGE2 atribuído à administração de meloxicam e/ou melatonina durante a fase aguda da infecção foi seguido por uma modulação de citocinas pertencentes aos padrões Th-1 e Th-2. Houve um aumento da síntese de citocinas importantes na proteção do hospedeiro durante a fase aguda da infecção, tais como IFN-, IL-2 e NO. Estes efeitos demonstrados no estudo foram benéficos, sendo evidenciados pela diminuição da carga parasitária dos animais experimentais. Os resultados poderão auxiliar a estabelecer mecanismos alternativos de tratamento na infecção chagásica aguda através de um melhor entendimento das respostas imunológicas anti-T cruzi. / The modulation of the immune responses in experimental models infected with Trypanosoma cruzi has effectively contributed for the investigations of new therapies used to treat Chagas disease. In this study, it was evaluated the production of Th1 and Th2 cytokines, which play a role during the acute phase of the disease, as well as prostaglandin E2 and nitrite, number of blood parasites and cardiac tissue parasitism in male Wistar rats infected with the Y strain of T. cruzi. Experiments were performed on 7, 14 and 21 days after infection in which Th1 cytokines such IL-2, IFN-, TNF- were done and Th2 cytokines as IL-4 and IL-10. The parameters were evaluated with/without the administration of meloxicam, melatonin or both. Melatonin contributed for the hosts protection in animals experimentally infected with T. cruzi through its immunomodulator actions. The blockage of PGE2 synthesis was attributed to the administration of meloxicam and/or melatonin during the acute phase of infection, followed by a modulation of the Th1 and Th2 cytokines. In this work enhanced levels of IFN-, IL-2 and NO were observed. The analysis of these data was beneficial for the hosts protection through a reduced number of amastigote nests in heart tissue. These results permit to establish alternative mechanisms to treat the acute chagasic infection through a better understanding of the immune responses against T cruzi.

Em estudo anterior, observamos que o Met-RANTES, antagonista de receptores CCR1 e CCR5 para quimiocinas, injetado pela via endovenosa (i.v.) reduziu a resposta febril induzida pelo lipopolissacarídeo (LPS) de E. coli, demonstrando o envolvimento da quimiocina RANTES (Regulada sob ativação, expressa e secretada por células T normais) nesta resposta. Além disso, a injeção intrahipotalâmica (i.h.) da RANTES dose-dependentemente aumentou a temperatura corporal de ratos, o qual foi caracterizado como febre, pois foi acompanhada de redução da temperatura da cauda, uma resposta termorregulatória para retenção de calor. Observamos também, que a RANTES aumenta a concentração de prostaglandinas no fluido cerebroespinhal (CSF) e que a febre por ela induzida é sensível aos inibidores não-seletivos para as ciclooxigenases e seletivo para COX-2 (Machado et al., 2007). No presente estudo, aprofundamos a investigação sobre os mediadores, incluindo as prostaglandinas, envolvidos na resposta febril induzida pela RANTES. Verificamos que o paracetamol reduziu, enquanto o diclofenaco de sódio aboliu a resposta febril induzida pela RANTES. Ainda, a injeção i.h. da RANTES promoveu significativa expressão do RNAm para COX-2 no hipotálamo, confirmando ser a COX-2 a enzima responsável pela síntese de prostaglandinas envolvidas no efeito pirogênico desta quimiocina. Através da administração de corante in situ e de cortes histológicos, pode-se averiguar o trajeto da cânula bem como a profundidade alcançada pela agulha durante a injeção na área pré-óptica hipotalâmica anterior (AH/POA). Padronizamos a dose do Met-RANTES (i.h.) que não seria capaz de alterar a temperatura retal dos animais. Posteriormente, avaliou-se o efeito de diferentes doses do Met-RANTES, administrado via intrahipotalâmica, na resposta febril induzida pelo LPS ou pela RANTES. Entretanto, nas doses administradas o pré-tratamento com o antagonista não foi capaz de reduzir a febre induzida por ambos os estímulos. Contudo, o Met-RANTES (i.v.) reduziu a febre induzida pelo TNF-alfa (i.h.), reproduzindo resultados anteriores. O pré-tratamento com Met-RANTES (i.v.) não modificou a febre induzida pela injeção central de interleucina (IL)-6, fator liberador de corticotropina (CRF) e bradicinina (BK). Adicionalmente, a injeção de LPS (i.v.) ou TNF-alfa (i.h.) elevou a concentração da RANTES no tecido hipotalâmico. Antalarmina (antagonista de receptores CRF1) e alfa-helical CRF9-41 (antagonista de receptores CRF1 e CRF2) que reduziram a febre induzida pelo CRF, não alteraram a febre induzida pela administração i.h. da RANTES. O antagonista de receptores B1 (DALBK) que reduziu a segunda fase da resposta febril induzida pela BK, não foi capaz de modificar a febre induzida pela RANTES. Da mesma forma, o antagonista de receptores B2 (Hoe-140) que reduziu a resposta febril induzida pela BK durante todo o período de experimentação, não modificou a febre promovida pela RANTES. Por outro lado, verificamos que o anticorpo anti-IL-6 administrado i.h. reduziu a febre induzida pela IL-6 e pela RANTES. Ainda, a injeção de LPS (i.v.) ou RANTES (i.h.) elevou a concentração de IL-6 no CSF, mas não de IL-1 e TNF-. A RANTES promoveu ativação do fator nuclear-kB (NF-kB) e aumentou a expressão do RNAm para as citocinas IL-1beta, TNF-alfa e IL-6 no hipotálamo dos animais. O pré-tratamento com Met-RANTES reduziu, na 2,5 e 6 h, a neutrofilia induzida pelo LPS. Em síntese, nossos resultados demonstram que durante a resposta febril induzida pelo LPS, este induz a síntese de TNF-alfa o qual promove a síntese da quimiocina RANTES que, ativando os receptores CCR1 e CCR5 promove a transmigração do NF-kB do citoplasma para o núcleo e a subseqüente síntese de IL-6 e de COX-2, esta última, a responsável pela síntese de prostaglandina E2 (PGE2), um dos mediadores finais da resposta febril induzida pelo LPS. Além disso, a RANTES parece ser um mediador da resposta de fase aguda, uma vez que, promove dois sinais importantes desta resposta, febre e neutrofilia. / We showed before that Met-RANTES, CCR1 and CCR5 receptor antagonist, intravenously injected (i.v.) reduced fever induced by lipopolysaccharide (LPS, E. coli), demonstrating the involvement of RANTES (Regulated on activation, normal T cells expressed and secreted) in this response. Also, intrahypothalamic (i.h.) injection of RANTES dose-dependently increased body temperature of rats, this increase was characterized as fever, because it was accompanied of a reduction in the tail skin temperature, a thermoregulatory response for heat retention. We also verified that RANTES increased the concentration of prostaglandin (PG)E2 in the cerebrospinal fluid (CSF), which was sensible to non-selective and selective blockers to cyclooxygenase (COX)-2 (Machado et al., 2007). In the present study, it was investigated which others mediators, including prostaglandins, are involved in the RANTES-induced fever. The effect of paracetamol and sodium diclofenac on fever induced by RANTES was also investigated. Paracetamol reduced, while sodium diclofenac abolished the RANTES-induced fever. The intrahypothalamic (i.h.) RANTES injection promoted a significant COX-2 mRNA expression in the hypothalamus, confirming the role of the COX-2 enzyme in the synthesis of prostaglandin involved in the pyrogenic effect of this chemokine. Through administration of dye in situ and histological analyses, we confirmed that the injection in the preoptic area of the anterior hypothalamus (AH/POA) was correct. Subsequently, we evaluated the effect of different doses of Met-RANTES (i.h.) in the fever induced by both LPS and RANTES. Centrally injected, Met-RANTES did not modify the fever induced by LPS or RANTES. On the other hand, Met-RANTES (i.v.) reduced TNF-alpha-induced fever, but did not modify the fever induced by interleukin (IL)-6, corticotrophin releasing factor (CRF) and bradykinin (BK). Additionally, the injection of LPS (i.v.) or TNF-alpha (i.h.) increased RANTES concentration in the hypothalamus. Antalarmin (a CRF receptor 1 antagonist) and alpha-helical CRF9-41 (CRF 1 and 2 receptor antagonist) that reduced CRF-induced fever did not modify the fever induced by RANTES (i.h.). DALBK (bradykinin B1 receptor antagonist) that reduced the second phase of BK-induced fever did not modify RANTES-induced fever. In the same way, Hoe-140 (bradykinin B2 receptor antagonist) that reduced the fever induced by BK during the whole period of observation, did not modify RANTES-induced fever. On the other hand, we verified that anti-rat IL-6 antibody (i.h.) reduced the fever induced by both IL-6 and RANTES. In addition, the administration of LPS (i.v.) or RANTES (i.h.) increased the CSF IL-6 concentration, but not of IL-1 and TNF-. RANTES promoted nuclear factor-kB (NF-kB) activation and increased IL-1beta, TNF-alpha and IL-6 mRNA expression in the hypothalamus. Pretreatment of the animals with Met-RANTES reduced the LPS-induced neutrophilia. In synthesis, our results suggest that in the fever induced by LPS, RANTES induces TNF- synthesis, which promotes the synthesis of RANTES that, activating CCR1/CCR5 receptors, promotes NF-kB transmigration of cytoplasm to the nucleus and subsequent synthesis of IL-6 and COX-2. The latter, in turn, is responsible by (PGE2) synthesis, one of the final mediators of the febrile response induced by LPS. Moreover, RANTES seem to be a mediator of the acute phase response since it promoted two important signs of this response, fever and neutrophilia.

Os mecanismos que conferem resistência do Mycobacterium tuberculosis (Mtb) à destruição pelo hospedeiro, além da sua capacidade em permanecer e/ou multiplicar-se no interior das células fagocitárias são ainda pouco compreendidos. Nosso grupo de pesquisa tem contribuído para o entendimento do papel dos mediadores lipídicos, que incluem prostaglandinas (PGs) e leucotrienos (LTs) na tuberculose. PGs inibem a resposta imune celular TH1, a produção de citocinas e a fagocitose, e assim facilita a infecção. LTs estão envolvidos no recrutamento de leucócitos, e na modulação da síntese de citocinas, no aumento da fagocitose e dos mecanismos microbicidas, e assim contribui para a eliminação da micobactéria. Neste projeto, avaliamos in vivo e in vitro a produção dos mediadores lipídicos induzidos por cepas de Mtb isolados de pacientes com tuberculose ativa. Demonstramos neste trabalho que macrófagos alveolares infectados com os bacilos da cepa SV009 levam a maior produção de TNF- e nitrito, do que aqueles infectados com a cepa SV068. Em contraste, macrófagos alveolares infectados com os bacilos da cepa SV068 induzem a produção de muito mais LTB4, quando comparado aos bacilos da cepa SV009. Obtivemos maior recuperação de unidades formadoras de colônia (UFC) de macrófagos alveolares tratados com MK886 e infectados com bacilos da cepa SV068; enquanto que mais UFCs foram recuperadas após o tratamento com ácido caféico e infecção com a cepa SV009. Com relação a formação de corpúsculos lipídicos (CLs), observamos um maior número destes quando macrófagos alveolares foram infectados com bacilos da cepa SV068. Ainda, observamos diminuição de CLs quando tratados com MK886 ou ácido caféico. Os bacilos da cepa SV068 foram mais fagocitados, mas os macrófagos não foram muito eficazes na atividade microbicida dos mesmos. Nos experimentos in vivo vimos que camundongos balb/c infectados com a cepa SV068 morrem mais e o tratamento com MK886 parcialmente os protege e a mortalidade não está relacionada com a maior carga bacilar no pulmão ou baço. Houve aumento no recrutamento de neutrófilos induzido pela infecção especialmente após infecção com os bacilos da cepa SV068, sendo que o tratamento com MK886 inibe significativamente o recrutamento quando comparado à infecção com os bacilos da cepa SV009. Células mononucleares também foram recrutadas e permaneceram aumentadas até o final do período observado, sem muitas diferenças significativas quando comparamos a infecção com os isolados SV009 e SV068. A produção de nitrito também encontrou-se elevada em animais infectados com bacilos da cepa SV068. A análise histopatológica dos pulmões dos animais infectados mostrou intensa reação inflamatória com maior comprometimento do parênquima pulmonar dos camundongos infectados bacilos da cepa SV068, com intensa deposição de colágeno e multiplicação bacilar. Encontramos diferenças significativas em relação à producão de citocinas IL-6, IL-10, IL-1, IFN-, TNF- and IL-12 após infecção de 30 e 60 dias com as cepas SV009 e SV068. Também mostramos que há diferenças na produção de LTB4 e PGE2 após 30 e 60 dias de infecção com as cepas SV009 e SV068 em células do camundongos balb/c. Experimentos com animais 129 e 5LO-/- infectados com as duas cepas também foram realizados, e vimos que os animais 5LO-/- são mais suscetíveis à infecção especialmente quando infectados com a cepa SV068. Sugerimos que as cepas são diferentes, mas dependentes de um conjunto de fatores, e nossos dados sugerem que dentre estes mecanismos a produção de TNF- e também de mediadores lipídicos (LTB4 e PGE2) estão envolvidos. / The mechanisms that confer resistance to Mycobacterium tuberculosis (Mtb) for destruction by the host, in addition to its ability to retain and/or multiply within phagocytic cells are still poorly understood. Our research group has contributed to the understanding of the role of lipid mediators, including prostaglandins (PGs) and leukotrienes (LTs) in tuberculosis. PGs inhibit Th1 cell immune response, cytokine production and phagocytosis, thus facilitating the infection. LTs are involved in the leukocytes recruitment, and modulation of cytokine synthesis, phagocytosis and microbicidal mechanisms enhancement, and contribute to the elimination of the mycobacteria. In this project, we evaluated in vivo and in vitro the lipid mediators production induced by Mtb strains isolated from patients with active tuberculosis. We demonstrated in this study that alveolar macrophages infected with bacilli from SV009 strain lead to an increase of TNF- production and nitrite, than those infected with the strain SV068. In contrast, alveolar macrophages infected with bacilli from SV068 strain induced more LTB4 production when compared to SV009 infection. We obtained higher recovery colony forming units (CFU) of alveolar macrophages treated with MK886 and infected with bacilli from SV068 strain; while more CFUs were recovered after treatment with caffeic acid and infection with bacilli from SV009 strain. Regarding the lipid bodies (LBs) formation, we observed a greater number of these structures, when alveolar macrophages were infected with bacilli from SV068 strain. Still, we observed a decrease of LBs when the macrophages were treated with MK886 and caffeic acid. Bacilli from SV068 strain were more phagocytosed, but macrophages were not very effective in the microbicidal activity. In the in vivo experiments we found that mice infected with SV068 strain die more than the other and MK886 treatment partially protects the mice, besides, the mortality is not related to the higher bacterial load in the lung or spleen. There was an increase in neutrophil recruitment induced after infection, especially after infection with SV068 strain, and treatment with MK886 significantly inhibits recruitment when compared to infection with SV009 strain. Mononuclear cells were also recruited and remained increased until the end of the observed period, without many significant differences when comparing infection with SV009 and SV068 strains. The nitrite production was also found greater in animals infected with bacilli from SV068 strain. Histopathological analysis of the infected mice lungs showed an intense inflammatory reaction with greater impairment of the mice lungs when infected with bacilli from SV068 strain with an intense collagen deposition and multiplication of bacilli. We suggest that the SV068 strain is more virulent and participates of the immune response by lipid mediators dependent mechanisms.

A grande procura da humanidade por meios que favoreçam uma vida saudável tem impulsionado as pesquisas por novas substâncias capazes de satisfazer tais necessidades, e entre estas substâncias encontram-se os fitoestrógenos. Processos biológicos relacionados a Doenças Cardiovasculares (DCV) e outras doenças podem ser afetados por essas substâncias presentes em plantas. O fitoestrógeno resveratrol é um polifenol especialmente encontrado na uva e seus derivados, e sua ingestão tem sido associada à baixa taxa de mortalidade por câncer e DCV. Os fitoestrógenos das plantas possuem semelhança estrutural e funcional com o estrógeno, com propriedades que beneficiam o metabolismo celular através de ação antioxidante e antiagregante plaquetária. O endotélio é o principal alvo da ação dos estrógenos. Eles promovem a redução do engrossamento da parede vascular, aceleram o processo de reconstrução do endotélio após injúria vascular e favorecem a angiogênese. Os estrógenos diminuem a expressão de moléculas de adesão em resposta à citocinas e possuem efeito anti-apoptótico nas células endoteliais. Polifenóis são fitoestrógenos com alto potencial antioxidante presentes em frutas, grãos, vegetais, nozes e raízes. Estes compostos vêm sendo amplamente estudados por seus efeitos na supressão de tumores e na prevenção de DCV em modelos animais. Neste estudo, temos como objetivo geral avaliar a ação do resveratrol na produção de óxido nítrico e prostaglandina E2 em modelo in vitro de células endoteliais da linhagem ECV 304, bem como atividade antioxidante. O objetivo específico é determinar a melhor concentração do resveratrol em que se observa uma potente liberação de substâncias vasoativas e maior proteção contra radicais livres, conferindo proteção e prevenção de DCV. / The vast search of humanity for ways that favors a healthy life has driven the researches for substances capable of meeting such needs, and among these substances there are the phytoestrogens. Biological processes related to Cardiovascular Disease (CVD) and other illness can be affected by these substances present in plants. The phytoestrogen resveratrol is a polyphenol specially found in grapes and derivates, and its ingestion has been associated to low mortality rates by cancer and CVD. The plants phytoestrogens are similar structurally and functionally with estrogens, with properties that benefit cellular metabolism through their antioxidant and antiplatelet action. The endothelium is estrogen´s major target. They reduce thickening of the vascular wall, accelerate the reconstruction process of vascular endothelial after injury and promote angiogenesis. The estrogens decrease the expression of adhesion molecules in response to cytokines and have antiapoptotic effect on endothelial cells, and promotes raising in nitric oxide (NO) production. Polyphenols are phytoestrogens with high antioxidant effect present in fruits, grains, vegetables, nuts and roots. These compounds have been extensively studied due to their effect on tumors suppression and CVD prevention in animal models. In this study, we evaluated resveratrol´s action in nitric oxide production and prostaglandin E2 in in vitro model of endothelial cells ECV304, as well as it´s antioxidant activity. The specific objective is to determine the best concentration of resveratrol in which observes a potent liberation of vasoactive factors and the best anti free radical activity, leading to protection and prevention of CVD.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Methylmalonic acidemias comprehend a group of innate error of the metabolism (EIM)characterized clinically and biochemically for the tissue accumulation of acid methylmalonic (MMA)and neurological dysfunction, including seizures. The clinical experience suggests that infections precipitate metabolic crises in methylmalonic acidemic patients. Since it has been demonstrated that MMA cause seizures, and that inflammation facilitates the occurrence of seizures in some animal models, is possible that inflammatory mediators, such as the prostaglandins, also facilitate MMAinduced seizures. Ciclooxigenase (COX) is the rate-limiting enzyme in the metabolic route by which the arachidonic acid is converted to prostaglandins. COX-2 is an isoform of cicloooxigenase that is induced at sites of injury / inflammation, and that is also constitutively expressed in some tissues, such as the central nervous system (CNS). It has been suggested that prostaglandin E2 (PGE2), the main product of COX-2 in the CNS, plays an important role in some neurodegenerative diseases, including epilepsy. However, no study has evaluated whether inflammatory mediators, such as the PGE2, facilitates MMA-induced seizures, to date. Thus, in this study we investigated the role of COX-2 and of PGE2 in seizures induced by MMA (2,5 µmol/2,5 µL, i.c.v.). While PGE2 (100 ng/2 μL, i.c.v.) facilitated, the selective COX-2 inhibitor celecoxib, attenuated MMA-induced seizures, assessed by electroencephalographic recordings in the hippocampus and cerebral cortex of rats. The ´protective effect of celecoxib against MMA-induced seizures was prevented by the PGE2. The results of this study support a facilitatory role for COX-2/PGE2 pathway in the MMA-induced seizures. / A acidemia metilmalônica é um erro inato do metabolismo (EIM) caracterizado bioquimicamente e clinicamente pelo acúmulo tecidual de ácido metilmalônico (MMA) e disfunção neurológica, que inclui convulsões. A experiência clínica sugere que infecções precipitam crises metabólicas em pacientes metilmalonicacidêmicos. À medida em que foi demonstrado que o MMA causa convulsões, e que a inflamação pode contribuir para a ocorrência de convulsões em vários modelos animais, é possível que mediadores inflamatórios, como as prostaglandinas, facilitem as convulsões induzidas por MMA. A ciclooxigenase (COX) é a enzima marca-passo na rota metabólica pela qual o ácido araquidônico é convertido em prostaglandinas, e a COX-2 uma isoforma da cicloooxigenase, é induzida em sítios de lesão/inflamação, e também se expressa constituivamente em alguns tecidos, como o sistema nervoso central (SNC). Tem sido sugerido que a prostaglandina E2 (PGE2), principal produto da via COX-2 no SNC, tenha um papel importante em várias doenças neurodegenerativas, incluindo epilepsia. Contudo, até a presente data nenhum estudo avaliou se mediadores inflamatórios, como a PGE2, facilitam as convulsões induzidas por MMA. Assim, neste estudo investigamos o papel da COX-2 e da PGE2 nas convulsões induzidas por MMA (2,5 µmol/2,5 µL, i.c.v.). Verificamos que a PGE2 (100 ng/2 μL, i.c.v.) facilita as convulsões induzidas por este ácido orgânico. Além disso, verificamos que o celecoxibe, um inibidor seletivo da COX-2, na dose de 2 mg/kg (v.o.), atenuou as convulsões comportamentais e eletrográficas induzidas por MMA no hipocampo e córtex cerebral de ratos. O efeito protetor do celecoxibe contra as convulsões induzidas por MMA foi revertido pela administração i.c.v. de prostaglandina E2. O conjunto de dados deste estudo suporta um papel facilitatório para a via COX-2/PGE2 nas convulsões induzidas por MMA.

The World Health Organization classifies glioblastoma (GBM) as a type IV astrocytoma, making it one of the most fatal tumors that exists. Despite the advances in chemotherapy, surgery, and radiation treatments that improve a patients length of survival, the overall trajectory of the disease remains unchanged. It has been shown that GBM cells produce significant levels of prostaglandins, including prostaglandin D2 (PGD2). PGD2 possesses pro- and anti-tumorigenic properties. Hence, a more complete understanding of PGD2 activity in GBM could yield more effective treatments against GBM. Through techniques like RT-PCR, immunohistochemistry, and HPLC tandem mass spectrometry, we were able to confirm the presence of the PGD2 synthesis in GBM cell lines. We treated GBM cell lines with various concentrations of exogenous PGD2 over 72 hours and observed its effects on cell count, apoptosis, mitosis and viability. Our results suggest that PGD2 possesses contradictory functions in GBM depending on concentration (mM PGD2 vs. nM PGD2) and receptor activation. / A Organização Mundial de Saúde classifica glioblastoma (GBM) como um astrocitoma tipo IV, fazendo uns dos tumores mais fatais que existe. A pesar dos avanços em quimioterapia, cirurgia e radioterapia que melhoram a longevidade de sobrevivência, a trajetória geral da doença permanece imutável. Tem sido demonstrado que células de GBM produzem níveis significativos de prostaglandinas, incluindo prostaglandina D2 (PGD2). PGD2 possui propriedades pro- e anti-tumorigenicos. Então, um entendimento mais completo da atividade de PGD2 em GBM pode gerar tratamentos mais efetivos. Através de técnicas como RT-PCR, imunohistoquimicas e HPLC espectrometria de massa em tandem, conseguimos confirmar a presença da síntese de PGD2 em linhagens de GBM. Tratamos linhagens de GBM com concentrações variáveis de PGD2 exógeno durante 72 horas e observamos seus efeitos na contagem de células, apoptose, mitose e viabilidade. Nossos resultados sugerem que PGD2 possui funções opostas em GBM dependendo em concentração (mM PGD2 vs. nM PGD2) e ativação de receptores.

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:55:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LeandroBecaleteRizzoni-Dissertacao.pdf: 3096648 bytes, checksum: d5c52567fe33e15db0244070559133db (MD5) Previous issue date: 2012-04-18 / This study assessed the of effects the application of cloprostenol in postpartum dairy goats. Twenty-nine Anglonubian goats were used, evenly divided into two groups. The control group received 0.5 ml of saline (0.9%) and group PGF2&#61537; 0.133 mg cloprostenol in two intramuscular applications on day 1 (D1) and four (D4) PP. The reproductive tract of the animals was assessed by transrectal ultrasound with a linear, 5.0 MHz on days 1, 4, 10, 16, 22, 28, 34, 40 and 46 postpartum. The uterine diameter, cervical diameter, volume of the intrauterine contents and uterine position were measured. In four animals from each treatment the endometrial thickness and diameter of the two larger follicles present in the ovary were evaluated, and vaginoscopy revealed the presence and aspect of the cervical mucus. The data were tested using the ANOVA analysis of variance and the averages (uterine diameter and endometrial thickness), by the Tukey test. The position of the uterus was assessed by the X2 test (chi-square). The body condition score and volume of intrauterine contents were evaluated with the nonparametric Wilcoxon test. All parameters were considered significant at 5% probability level. The uterine diameter behaved differently between the groups. In the PGF2&#61537; group there was a marked reduction in uterine diameter until day 22 PP (3.5 ± 0.6 cm) and the control group until day 28 PP (3.6 ± 0.8 cm). The expulsion of uterine contents was earlier in PGF2&#61537; group (D40), and on D46 in the control group. Likewise, the presence of cervical mucus was earlier in PGF2&#61537; group (D34) compared to control group (D40). The follicular growth did not differ between the groups, the maximum average diameters were 5.1 ± 0.3 mm at 28 dpp for the PGF2&#61537; group and 5.2 ± 0.4 mm at 22 dpp for the control group. The results suggest that cloprostenol acts beneficially in the process of uterine involution and expulsion of uterine contents. Key-words: Goats, Uterine involution, Prostaglandin. / Objetivou-se verificar os efeitos da aplicação do cloprostenol sódico no puerpério de cabras leiteiras. Utilizaram-se vinte e nove cabras Anglonubianas, divididas uniformemente em dois grupos. O grupo controle recebeu 0,5 mL de solução salina (0,9%) e o grupo PGF2&#61537;&#61484; 0,133 mg de cloprostenol sódico em duas aplicações, nos dias 1 (D1) e 4 (D4) PP, pela via intramuscular. O aparelho reprodutivo dos animais foi avaliado através de ultrassonografia transretal, com transdutor linear de 5.0 MHz nos dias 1, 4, 10, 16, 22, 28, 34, 40 e 46 pós-parto. Aferiu-se o diâmetro uterino, diâmetro cervical, posição uterina e volume do conteúdo intrauterino. Em quatro animais de cada tratamento avaliou-se a espessura do endométrio e diâmetro dos dois maiores folículos presentes nos ovários e, através da vaginoscopia, observou-se a presença e aspecto do muco cervical. Os dados foram submetidos ao teste de analise de variância ANOVA e as médias (diâmetro uterino e espessura do endométrio) ao teste de Tukey. Para a posição uterina, utilizou-se o teste X2 (Qui-quadrado). Para o escore de condição corporal e volume de conteúdo intrauterino procedeu-se ao teste não paramétrico de Wilcoxon. Todas as variáveis foram consideradas significativas a 5% de probabilidade. O diâmetro uterino se comportou de maneira diferente entre os grupos. No grupo PGF2&#61537;&#61472;houve uma acentuada redução do diâmetro uterino até o dia 22 PP (3,5 ± 0,6 cm) e no grupo controle, até o dia 28 PP (3,6 ± 0,8 cm). A expulsão do conteúdo uterino foi anterior no grupo PGF2&#61537; (D40), enquanto para o grupo controle a expulsão completou-se no D46. Da mesma forma, a presença de muco cervical foi anterior no grupo PGF2&#61537;&#61472;(D34) quando comparado ao grupo controle (D40). O crescimento folicular não diferiu entre os grupos. Os diâmetros médios máximos observados foram de 5,1 ± 0,3 mm aos 28 dpp, para o grupo PGF2&#61537;&#61484; e 5,2 ± 0,4 mm aos 22 dpp, para o grupo controle. Os resultados sugerem que o cloprostenol sódico atua beneficamente no processo de involução uterina e expulsão do conteúdo uterino.

Resultados obtidos pelo nosso grupo demonstraram, in vitro, que a PGE2 é capaz de modular a sobrevivência de linfócitos TCD4+ protegendo essas células da morte. Dentro do modelo de EAE, nossa hipótese é que a PGE2 liberada pelas APCs, durante a fase de indução, module a sobrevivência de linfócitos autorreativos específicos induzindo a doença. Realizamos o tratamento de camundongos submetidos à EAE com indometacina durante 5 dias e notamos que houve redução da EAE associada à redução de linfócitos produtores de IFN-&gamma;, IL-17 e GM-CSF, e macrófagos infiltrantes e microglias ativadas, no SNC. O tratamento alterou a freqüência de células em proliferação e a frequência de células produtoras de IFN-&gamma; e IL-17 na periferia e a concentração dessas citocinas. Esses resultados sugerem que a indometacina reduz o desenvolvimento da EAE e sua resposta antígeno-específica demonstrando a sua importância na modulação das respostas de linfócitos T na autoimunidade. / Results obtained by our group demonstrated in vitro that PGE2 is able to modulate CD4+ T cells survival protecting these cells from death. Within the EAE model, we hypothesized that PGE2 released by APCs during the induction phase, modulate survival of autoreactive specific lymphocytes by induction the disease. We carried out the treatment of EAE in mice subjected to indomethacin for 5 days and noticed that there is reduction of EAE associated with decreased IFN-&gamma;, IL-17 and GM-CSF producing T cells, and infiltrating macrophages and activated microglia in the CNS. The results suggest that indomethacin reduces EAE and its antigen-specif response demonstrating their importance in the modulation of T lymphocyte responses in autoimmunity.