Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 396843.pdf: 208677 bytes, checksum: 50ebe2518a717c97f6596659cfc38e2f (MD5) Previous issue date: 2006-07-31 / Embasamento te?rico e objetivos: a s?ndrome das apn?ias-hipon?ias obstrutivas do sono (SAHOS) ? uma comorbidade associada ? obesidade m?rbida principalmente em fun??o da grande circunfer?ncia do pesco?o. Dependendo da sua gravidade, a SAHOS pode interferir na homeostasia de in?meros sistemas, como por exemplo o sistema nervoso central (SNC). A enolase neur?nio-especifica (NSE) e a prote?na S100B, proveniente do astr?cito, s?o considerados marcadores sens?veis para les?o cerebral. Nesse estudo avaliamos os n?veis s?ricos de S100B e NSE com o intuito de marcar poss?veis inj?rias causadas pela SAHOS ao SNC. Pacientes e m?todos: n?s estudamos dados provenientes de 25 pacientes obesos m?rbidos portadores de SAHOS e realizamos a coleta de sangue antes e ap?s o exame polissonogr?fico (PSG) para a dosagem das prote?nas S100B e NSE. Tamb?m foram analisados dados relativos a depress?o e sonol?ncia diurna excessiva. Resultados: Os valores de S100B foram maiores ap?s [0,029 (0,010-0,199)] em compara??o com antes [0,010 (0,010-0,025)] ?g/l da PSG (P=0,002). Os valores s?o expressos em mediana e IQ25-IQ75. Os valores de NSE n?o mostraram diferen?as significativas entre antes e depois do sono. Conclus?es: o estudo mostra varia??es significativas em n?veis de S100B quando comparados antes e depois exame polissonogr?fico.

Submitted by PPG Ci?ncia da Computa??o (ppgcc@pucrs.br) on 2018-09-03T14:00:58Z No. of bitstreams: 1 RAFAEL CAUDURO OLIVEIRA MACEDO_DIS.pdf: 6178948 bytes, checksum: 6ed3599e31f122e78b11b322a8c0ac06 (MD5) / Approved for entry into archive by Sheila Dias (sheila.dias@pucrs.br) on 2018-09-04T12:17:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 RAFAEL CAUDURO OLIVEIRA MACEDO_DIS.pdf: 6178948 bytes, checksum: 6ed3599e31f122e78b11b322a8c0ac06 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-04T12:47:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RAFAEL CAUDURO OLIVEIRA MACEDO_DIS.pdf: 6178948 bytes, checksum: 6ed3599e31f122e78b11b322a8c0ac06 (MD5) Previous issue date: 2017-08-30 / Prote?nas executam um papel vital em todos os seres vivos, mediando uma s?rie de processos necess?rios para a vida. Apesar de existirem maneiras de determinar a composi??o dessas mol?culas, ainda falta-nos conhecimentos suficiente para determinar de uma maneira r?pida e barata a sua estrutura 3D, que desempenha um papel importante na suas fun??es. Um dos principais m?todos computacionais aplicados ao estudo das prote?nas e o seu processo de enovelamento, o qual determina a sua estrutura, ? Din?mica Molecular. Um aprimoramento deste m?todo, conhecido como Replica Exchange Molecular Dynamics (ou REMD), ? capaz de produzir resultados muito melhores, com o rev?s de significativamente aumentar o seu custo computacional e gerar um volume muito maior de dados. Esta disserta??o apresenta um novo m?todo de otimiza??o deste m?todo, intitulado Filtragem de Dados Anal?ticos, que tem como objetivo otimizar a an?lise p?s-simula??o filtrando as estruturas preditas insatisfat?rias atrav?s do uso de m?tricas de qualidade absolutas. A metodologia proposta tem o potencial de operar em conjunto com outras abordagens de otimiza??o e tamb?m cobrir uma ?rea ainda n?o abordada por elas. Adiante, a ferramenta SnapFi ? apresentada, a qual foi designada especialmente para o prop?sito de filtrar estruturas preditas insatisfat?rias e ainda operar em conjunto com as diferentes abordagens de otimiza??o do m?todo REMD. Um estudo foi ent?o conduzido sobre um conjunto teste de simula??es REMD de predi??o de estruturas de prote?nas afim de elucidar uma s?ries de hip?teses formuladas sobre o impacto das diferentes temperaturas na qualidade final do conjunto de estruturas preditas do processo REMD, a efici?ncia das diferentes m?tricas de qualidade absolutas e uma poss?vel configura??o de filtragem que utiliza essas m?tricas. Foi observado que as temperaturas mais altas do m?todo REMD para predi??o de estruturas de prote?nas podem ser descartadas de forma segura da an?lise posterior ao seu t?rmino e tamb?m que as m?tricas de qualidade absolutas possuem uma alta vari?ncia (em termos de qualidade) entre diferentes simula??es de predi??es de estruturas de prote?nas. Al?m disso, foi observado que diferentes configura??es de filtragem que utilize tais m?tricas carrega consigo esta vari?ncia. / Proteins perform a vital role in all living beings, mediating a series of processes necessary to life. Although we have ways to determine the composition of such molecules, we lack sufficient knowledge regarding the determination of their 3D structure in a cheap and fast manner, which plays an important role in their functions. One of the main computational methods applied to the study of proteins and their folding process, which determine its structure, is Molecular Dynamics. An enhancement of this method, known as Replica-Exchange Molecular Dynamics (or REMD) is capable of producing much better results, at the expense of a significant increase in computational costs and volume of raw data generated. This dissertation presents a novel optimization for this method, titled Analytical Data Filtering, which aims to optimize post-simulation analysis by filtering unsatisfactory predicted structures via the use of different absolute quality metrics. The proposed methodology has the potential of working together with other optimization approaches as well as covering an area still untouched at large by them to the best of the author knowledge. Further on, the SnapFi tool is presented, a tool designed specially for the purpose of filtering unsatisfactory structure predictions and also being able to work with the different optimization approaches of the Replica-Exchange Molecular Dynamics method. A study was then conducted on a test dataset of REMD protein structure prediction simulations aiming to elucidate a series of formulated hypothesis regarding the impact of the different temperatures of the REMD process in the final quality of the predicted structures, the efficiency of the different absolute quality metrics and a possible filtering configuration that take advantage of such metrics. It was observed that high temperatures may be safely discarded from post-simulation analysis of REMD protein structure prediction simulations, that absolute quality metrics posses a high variance of efficiency (regarding quality terms) between different protein structure prediction simulations and that different filtering configurations composed of such quality metrics carry on this inconvenient variance.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:01:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DinaelzaCP.pdf: 982597 bytes, checksum: 8505a456042640660a4eeec39570774f (MD5) Previous issue date: 2009-03-23 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / The seaweed Gracilaria domingensis is a common species in the coast of Rio Grande do Norte. This species lives in the intertidal zone, where colour strains (red, green and brown) co-occur during the whole year. Seaweeds that live in this region are exposed to daily changes and to the rhythm of the tide. During the low tide they are exposed to dissection, hiper-or hipo-osmotic shock, high temperatures and high irradiance. The aim of this study was to analyze whether the pigment and protein content of the colour strains of G. domingensis is affected by some environmental parameters in a temporal scale. The seaweeds were collected during 10 months in the seashore of Rio do Fogo (RN). The total soluble proteins and the phycobiliprotein were extracted in phosphate buffer and the carotenoids were analyzed by a standardized method through HPLC-UV. The pigments analysis showed that phycoerithrin is the most abundant pigment in the three strains. This pigment was strongly correlated with nitrogen and the photosynthetically active radiation. Chlorophyll presented higher concentrations than carotenoids during the whole, but the ratio carotenoid/chlorophyll-a was modified by incident radiation. The most abundant carotenoid was ?-carotene and zeaxanthin, which had higher concentrations in the higher radiation months. The concentration increase of zeaxanthin in this period indicated a photoprotective response of the seaweed. The three strains presented a pigment profile that indicates different radiation tolerance profile. Our results pointed that the green strain is better adapted to high irradiance levels than the red and brown strains / A macroalga Gracilaria domingensis ? comumente encontrada no litoral do Rio Grande do Norte. Esta esp?cie habita a zona intertidal, onde linhagens crom?ticas (vermelha, verde e marrom) co-ocorrem durante todo o ano. Algas que vivem nesta regi?o est?o submetidas a mudan?as diurnas e ao ritmo da mar?. Durante a mar? baixa elas ficam expostas a disseca??o, choque hiper ou hipo-osm?tico, altas temperaturas e elevada irradi?ncia. Este trabalho teve como objetivo geral o estudo do perfil prot?ico e pigmentar das variantes crom?ticas de G. domingensis e a altera??o deste perfil em fun??o dos par?metros ambientais em uma escala temporal. As algas foram coletadas mensalmente, durante 10 meses, nas parias de Rio do Fogo-RN. As prote?nas totais sol?veis e as ficobiliprote?nas foram extra?das em tamp?o fosfato e os caroten?ides foram analisados em um m?todo padronizado por HPLC-UV. A an?lise dos pigmentos mostrou que a ficoeritrina ? o pigmento mais abundante nas tr?s linhagens. Este pigmento esteve fortemente correlacionado com o nitrog?nio e a PAR. Os pigmentos caroten?ides apresentaram concentra??es inferiores as da clorofila-a durante todos os meses, mas a raz?o caroten?ides/clorofila-a foi modificada com o aumento da radia??o. O caroten?ide mais abundante foi o ?-caroteno, seguido da zeaxantina, que esteve em maiores concentra??es nos meses de maior radia??o. O aumento na concentra??o da zeaxantina nesse per?odo indicou uma resposta fotoprotetora da alga. As tr?s linhagens apresentaram um perfil pigmentar que remete a diferentes padr?es de toler?ncia a radia??o. A linhagem verde mostrou ser melhor adaptada a elevados n?veis de irradi?ncias do que a vermelha e a marrom

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 KatyaAJ.pdf: 641948 bytes, checksum: 8145771d141a135b5fa6f7f5586cd02d (MD5) Previous issue date: 2007-06-28 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Linseed is an important oilseed consumed raw as nutritional supplement, that although represents a rich source of nutrients, its nutritional value could be impaired due to the presence of antinutritional factors. In this study, protein fractions from raw linseed flour were extracted and isolated being obtained 12% of albumins, 82% of globulins, 5% of glutelins and 1% of prolamins. These proteins were visualized by SDS-PAGE and albumins showed low molecular mass protein bands around 21 kDa and minor bands, similar to that of trypsin inhibitor; Globulins presented protein bands with high molecular masses, which possibly are constituents of multimeric proteins, such as legumins. After determination of the centesimal composition of raw linseed, it was used as exclusive protein source for young rats to evaluate its effect on animal growth. The results showed negative effects on rat growth (weight gain 73% less than the control group) and reduction of intestinal villus (35%), that could be related with in vitro and in vivo globulin digestibility and proteinaceous antinutritional factors (mammalian digestive enzymes inhibitors and lectins) in albumin fraction. Native globulins showed, by SDS-PAGE, low susceptibility in vitro to trypsin and chymotrypsin, however presented high degradation by pancreatin. Thermal treatment of globulins for 5 and 15 minutes at 100?C improved considerably its digestibility by trypsin and pancreatin. Globulins presented 93.2% in vivo digestibility, similar to the control protein. Albumin fraction had high trypsin inhibition activity (100%) and chymotrypsin inhibition of 28.3%; haemagglutinating activity was not detected. The results of this study indicate the negative action of trypsin inhibitors on animal growth, but can not be discarded its combined action with other antinutritional factors, which could compromise the raw linseed utilization as an alternative food / A linha?a (Linum usitatissimun) ? uma importante oleaginosa consumida crua como suplemento nutricional, que apesar de representar rica fonte de nutrientes, pode ter valor nutricional reduzido devido ? presen?a de fatores antinutricionais. Neste estudo as principais fra??es prot?icas da farinha de linha?a crua foram extra?das e isoladas, sendo obtidos 12% de albuminas, 82% de globulinas, 5% de glutelinas e 1% de prolaminas; o padr?o eletrofor?tico das prote?nas mostrou que as albuminas apresentaram bandas majorit?rias de baixa massa molecular em torno de 21 kDa e menores, indicativas da presen?a de inibidores de tripsina, e nas globulinas foram observadas algumas bandas intensas que provavelmente comp?em uma prote?na multim?rica de alta massa molecular do tipo legumina. Ap?s a obten??o da composi??o centesimal da farinha crua, esta foi usada como fonte exclusiva de prote?nas para ratos rec?m-desmamados, a fim de avaliar seu efeito no crescimento dos mesmos. Os resultados de depress?o do crescimento (ganho de peso 73% inferior ao grupo padr?o) e redu??o no crescimento dos vilos intestinais (35%) levaram ? verifica??o da digestibilidade in vitro e in vivo da fra??o globulina e detec??o de fatores antinutricionais prot?icos (inibidores de enzimas digest?rias de mam?feros e lectinas) na fra??o albumina, como poss?veis fatores delet?rios ao crescimento dos ratos em estudo. As globulinas nativas apresentaram baixa susceptibilidade a digest?o in vitro por tripsina e quimotripsina, no entanto sofreram maior degrada??o pela pancreatina. O aquecimento das globulinas por 5 e 15 minutos a 100?C aumentou consideravelmente a digestibilidade pela tripsina e pancreatina. No experimento de digestibilidade in vivo, a globulina apresentou alta susceptibilidade ? degrada??o pelas enzimas digestivas (93,2%), semelhante ? prote?na padr?o. Na avalia??o da fra??o albumina, esta apresentou alta atividade inibit?ria de tripsina (100%) e, em menor grau, inibi??o de quimotripsina (28,3%), n?o sendo detectada atividade hemaglutinante. Os resultados obtidos s?o indicativos da a??o negativa dos inibidores de tripsina no crescimento dos animais, no entanto n?o se pode descartar a possibilidade de uma a??o sinerg?stica com outros fatores antinutricionais, que comprometem a utiliza??o da linha?a crua como um alimento alternativo

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CarlosEMG.pdf: 434119 bytes, checksum: cffd1dddf77ec049b23dadc1bfa89773 (MD5) Previous issue date: 2004-12-20 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / A proteinaceous trypsin inhibitor was purified from Crotalaria pallida seeds by ammonium sulphate fractionation, affinity chromatography on immobilized Trypsin-Sepharose and TCA precipitation. The trypsin inhibitor, named ITC, had Mr of 32.5 kDa by SDS-PAGE and was composed by two subunits with 27.7 and 5.6 kDa linked by disulphide bridges, a typical characteristic of Kunitz-Inhibitor family. ITC was stable until 50?C, and at 100?C its residual activity was of about 60%. Also, ITC was stable at pHs 2 to 12. The inhibition of trypsin by ITC was non-competitive, with a Ki of 8,8 x 10-7M. ITC inhibits weakly other serine proteinases such as chymotrypsin and elastase. The inhibition of papain (44% of inhibition), a cysteine proteinase was an indicative of the bi-functionality of ITC. In vitro assays against digestive proteinases from several Lepdoptera, Diptera and Coleoptera pests were made. ITC inhibited in 100% digestive enzymes of Ceratitis capitata (fruit fly), Spodoptera frugiperda and Alabama argillacea, the last one being a cotton pest. It also inhibited in 74.4% Callosobruchus maculatus (bean weevil) digestive enzymes, a Coleoptera pest. ITC, when added in artificial diet models, affected weakly the development of C. capitata larvae and it had a WD50 of 2.65% to C. maculatus larvae / Um inibidor de proteinase foi isolado de sementes de Crotalaria pallida por fracionamento com sulfato de am?nio, cromatografia de afinidade em Sepharose com tripsina acoplada e precipita??o com ?cido tricloroac?tico (TCA). O inibidor de tripsina, denominado ITC, possui massa molecular de 32,5 kDa determinada por SDS-PAGE e ? composto por duas subunidades, uma de 25,7 e outra de 5,6 kDa, ligadas por pontes dissulfeto; uma caracter?stica t?pica da fam?lia de inibidores de Kunitz. ITC foi est?vel at? 50?C e a 100?C sua atividade residual foi cerca de 60%. ITC tamb?m foi est?vel em valores de pHs variando de 2 a 12. A inibi??o da tripsina por ITC ? do tipo n?o-competitivo, com um Ki de 8,8 x 10-7M. ITC inibe fracamente outras proteinases ser?nicas como quimotripsina e elastase. A inibi??o da papa?na (44%), uma proteinase ciste?nica, foi indicativa da bifuncionalidade de ITC. Ensaios in vitro contra proteinases digestivas de v?rios insetos praga das ordens Lepidoptera, Diptera e Coleoptera foram realizados. ITC inibiu em cerca de 100% enzimas digestivas de Ceratitis capitata (mosca-das-frutas), Spodoptera frugiperda (lagarta do cartucho do algod?o), e Alabama argillacea (curuquer? do algod?o). ITC tamb?m inibiu em 74,4% enzimas digestivas de Callosobruchus maculatus (broca do feij?o) uma praga da ordem Coleoptera. ITC, quando adicionado a dietas artificiais, afetou fracamente o desenvolvimento de larvas de C. capitata e teve um WD50 de 2,65% contra larvas de C. maculatus

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CleysyvanSM_DISSERT.pdf: 1173359 bytes, checksum: 82a094c436e4d9b81948c390ed5d9ed1 (MD5) Previous issue date: 2010-02-26 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Chitin-binding vicilins from legume seeds (Erythrina velutina. Canavalia ensiformes and Phaseolus vulgares) were isolated by ammonium sulfate followed by affinity chromatography on a chitin column. Effect of these vicilins on female adults of Ceratitis capitata was examined by bioassay and in a semi-field assay model. Mechanism of action of the vicilins was determined by in vivo digestibility and chitin affinity. Among the tested vicilins, E. velutina when added to diet caused strong effect on mortality at 10% dose. This insecticidal property was tested in a semi-field assay which showed the same effect observed in laboratory conditions, where doses of 10% and 15% were lethal to female adults of C. capitata. These deleterious effects were not only associated to the binding to chitin structures present in peritrophic membrane, but principally to its low digestibility in the C. capitata digestive tract. This fact was confirmed because chiting binding proteins as WGA and the other tested vicilins were not toxic to female adults of C. capitata due susceptibility of these proteins to digestive enzymes of the insects. By other side EvV was more resistant to digestive enzymes, causing deleterious effects on female adults of C. capitata. These results showed that EvV may be part of the pest management programs or an alternative in plant improvement program in the population control of this fruticulture pest / Vicilinas ligantes a quitina de sementes de Erythrina velutina, Canavalia ensiformis e Phaseoulus vulgaris foram isoladas atrav?s de procedimento que consistiu de precipita??o com sulfato de am?nio seguida de cromatografia de afinidade em coluna de quitina. O efeito dessas vicilinas sobre f?meas adultas de Ceratitis capitata foi examinada por bioensaios em condi??es de laborat?rio e por bioensaios em condi??es de semi-campo. O mecanismo de a??o dessas vicilinas foi determinado por um ensaio de digestibilidade in vivo e pela propriedade de liga??o a uma matriz de quitina. Entre as vicilinas testadas, a vicilina de E. velutina foi a ?nica letal, causando mortalidade de 100% quando adicionada ? dieta das moscas das frutas adultas na concentra??o de 10% (p/p). Este efeito inseticida da vicilina de E. velutina foi tamb?m testado em condi??es de semi-campo, onde concentra??es de 10 % e 15% (p/p) de vicilina adicionada ? dieta foram letais para f?meas adultas de C. capitata. Esse efeito delet?rio das prote?nas ligantes ? quitina n?o foi associado somente ? propriedade de liga??o ? quitina, visto que as outras vicilinas, al?m da lectina de g?rmen de trigo (WGA) foram t?xicas quando adicionadas ? dieta das moscas das frutas. Entretanto, a resist?ncia/susceptibilidade dessas prote?nas aos processos digest?rios desses insetos poderia explicar os diferentes efeitos observados. Das prote?nas ligantes ? quitina, apenas aquelas refrat?rias ? a??o das enzimas digestivas nos processos digest?rios teve a??o inseticida. Esses resultados mostraram que vicilina de E. velutina ? um bioinseticida com potencial de uso nos programas de controle de pragas diminuindo a popula??o de moscas das frutas no campo

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 NathaliaMCM_DISSERT.pdf: 2544480 bytes, checksum: eab320fea2fc6e6b04c8d45099041a93 (MD5) Previous issue date: 2014-03-21 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / The genome of all organisms constantly suffers the influence of mutagenic factors from endogenous and/or exogenous origin, which may result in damage for the genome. In order to keep the genome integrity there are different DNA repair pathway to detect and correct these lesions. In relation to the plants as being sessile organisms, they are exposed to this damage frequently. The Base Excision DNA Repair (BER) is responsible to detect and repair oxidative lesions. Previous work in sugarcane identified two sequences that were homologous to Arabidopsis thaliana: ScARP1 ScARP3. These two sequences were homologous to AP endonuclease from BER pathway. Then, the aim of this work was to characterize these two sequence using different approaches: phylogenetic analysis, in silico protein organelle localization and by Nicotiana tabacum transgenic plants with overexpression cassette. The in silico data obtained showed a duplication of this sequence in sugarcane and Poaceae probably by a WGD event. Furthermore, in silico analysis showed a new localization in nuclei for ScARP1 protein. The data obtained with transgenic plants showed a change in development and morphology. Transgenic plants had slow development when compared to plants not transformed. Then, these results allowed us to understand better the potential role of this sequence in sugarcane and in plants in general. More work is important to be done in order to confirm the protein localization and protein characterization for ScARP1 and ScARP3 / O genoma de todos os organismos sofre constantemente a influ?ncia de fatores mutag?nicos que podem ser de origem end?gena e/ou ex?gena, estes podem resultar em danos ao material gen?tico. Se esses danos n?o forem corrigidos pode levar ao aparecimento de muta??es. As plantas por serem organismos sesseis est?o continuamente expostas a estes fatores. Considerando isto, os organismos (animais e vegetais) possuem diferentes vias de reparo de DNA para manter a integridade do material gen?tico. Dentro destas vias, h? a via de Reparo por Excis?o de Bases (BER) que ? composta por diferentes enzimas, e dentro dessa via h? a enzima AP endonuclease que ? alvo deste estudo. Trabalhos anteriores em cana-de-a??car identificaram duas sequ?ncias de cDNA hom?logas a esta prote?na que foram denominadas ScARP1 e ScARP3. Com isso, o objetivo deste trabalho foi caracterizar estas duas sequ?ncias por meio de an?lises filogen?ticas utilizando sequ?ncias presentes dentro do reino Plantae, e de an?lises estruturais dos genes de AP endonuclease por an?lise in silico e por plantas transg?nicas contendo cassetes de super-express?o. Al?m disso, foi realizado transforma??es e a obten??o plantas transg?nicas de Nicotiana tabacum contendo cassetes de super-express?o em orienta??o anti-senso. Foi tamb?m analisado a rela??o filogen?tica de genes DNA ligase I presentes no organismo vegetal de estudo. Os resultados obtidos permitiram verificar que as sequ?ncias ScARP1 e ScARP3 correspondem a uma duplica??o, provavelmente devido a um processo de duplica??o do genoma como um todo (WGD) que deve ter ocorrido no grupo das gram?neas (Poaceae). Refor?ando estes dados, foi verificado um poss?vel direcionamento da prote?na para organelas diferentes, sendo que a ScARP1 pode ser encontrada no n?cleo e a ScARP3 em mitocondrias e/ou cloroplasto. Com rela??o as plantas transg?nicas contendo o cassete em orienta??o anti-senso foi observado que estas apresentaram crescimento lento quando comparado com a planta selvagem (n?o transformada). Al?m disso, seu fen?tipo abrange altera??es morfol?gicas no crescimento foliar, baixa estatura e diminui??o na produ??o de sementes. Entretanto, ainda se faz necess?rio a obten??o da linhagem homozigota para aprofundar essas observa??es. Desta forma, estes resultados permitem compreender um pouco melhor do poss?vel papel da enzima AP endonuclease em cana-de-a??car e em plantas

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:13:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 BernardoMR.pdf: 260986 bytes, checksum: 17a4b2567679fec24073be98451b0953 (MD5) Previous issue date: 2008-03-25 / Blood constituents labelled with technetium-99m (99mTc) has been used with radiobiocomplexes in several procedures in nuclear medicine. Some natural and sintetic drugs are capable to interfere on the labeling of blood constituents with 99mTc, on the morphology of red blood cells (RBC) and on the biodistribution of radiobiocomplexes. The aim of this study was evaluate the effect of an extract of Passiflora edulis f. flavicarpa on the labeling of blood constituints with 99mTc, on the morphology of RBC and on the biodistribution of the radiopharmaceutical sodium perthecnetate in Wistar rats. On the in vitro studies the Passiflora edulis f. flavicarpa decreased significantly (p<0.05) the %ATI on plasma proteins and on the in vitro morhology of RBC, the passion fruit peel flour altered the shape and the perimeter/?rea ratio. On the in vivo estudies the extract did not altered the %ATI in blood constituents, and did not altered the shape of RBC. Although, on the biodistribution of the radiobiocomplex sodium perthecnetate (Na99mTcO4) this extract decreased significantly (p<0.05) the uptake in duodenum, spleen, p?ncreas and blood, and increased the uptake in stomach. It can be suggested that the effects presented by this extract could be a result of some substances contained in this extract that could alter the binding of 99mTc to plasma proteins, the morphology of RBC and the biodistribution of the radiobiocomplex sodium perthecnetate. This study was multidisciplinary experimental research. It was developed with the contribution of different Departments and Services of the Hospital Universit?rio Pedro Ernesto of the Universidade Estadual do Rio de Janeiro / Constituintes sang??neos marcados com tecn?cio-99m (99mTc) t?m sido utilizadas com radiobiocomplexos em procedimentos da Medicina Nuclear. Determinadas drogas naturais ou sint?ticas s?o capazes de interferir na marca??o de estruturas sang??neas com 99mTc, na morfometria de hem?cias e na biodisponibilidade de radiobiocomplexos. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de um extrato de farinha da casca do maracuj? (Passiflora edulis f. flavicarpa) na marca??o de constituintes sangu?neos com 99mTc, na morfologia de hem?cias marcadas com 99mTc e na biodisponibilidade do radiobiocomplexo pertecnetato de s?dio. Nos estudos in vitro, o extrato foi capaz de diminuir significativamente (p<0,05) a fixa??o do 99mTc nas prote?nas plasm?ticas e tamb?m alterar a forma e a rela??o per?metro/?rea de hem?cias. Nos estudos in vivo, o extrato de farinha da casca de maracuj? n?o alterou a marca??o dos constituintes sangu?neos com 99mTc, assim como a forma de hem?cias marcadas com 99mTc. No estudo da biodisponibilidade do radiobiocomplexo pertecnetato de s?dio (Na99mTcO4), o extrato estudado aumentou significativamente (p<0,05) a capta??o no duodeno e ba?o, e diminuiu a capta??o do Na99mTcO4 no p?ncreas, est?mago e sangue. Os efeitos apresentados por este extrato podem ser derivados de subst?ncias presentes no extrato, que poderiam alterar a liga??o do 99mTc ?s prote?nas plasm?ticas, induzir altera??es morfol?gicas nas hem?cias e/ou a biodisponibilidade do radiobiocomplexo pertecnetato de s?dio.. Este trabalho foi desenvolvido em diferentes Departamentos e Servi?os da ?rea biom?dica do Hospital Universit?rio Pedro Ernesto, UERJ, atestando o car?ter multidisciplinar da pesquisa

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:13:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Raquel Terra Agostinho_DISSERT.pdf: 212655 bytes, checksum: afa93fe07c8ba1db5dc83395a1dc586d (MD5) Previous issue date: 2009-09-29 / Clinical evaluations have been made possible with radiobiocomplexes marked with tecnecium-99m (99mTc). Natural or synthetic drugs are able to interfere in the marking of blood structures with 99m Tc. Also, the toxicity of several natural products has been described. The aim of this study was evaluating the effect of an extract of Ganoderma lucidum (Reishi) in the marking of blood constituents with 98m Tc and in the survival of Escherichia coli. Blood samples from Wistar rats were treated with reishi extract. Radiomarking procedure was performed. Samples of plasma (P), blood cells (CS), and insoluble (FI) and soluble (FS) fractions of P and CS were separated and the radioactivity was counted to determine radioactivity percentages (%ATI). Escherichia coli AB1157 cultures were treated with stannous chloride in the presence and absence of the reishi extract. Blood samples and bacterial cultures treated with NaCl 0.9% were used as controls. Data indicated that the reishi extract has significantly altered (p<0,05) the %ATI of P, CS, FI-P, FS-P, FI-CS e FS-CS, as well as it has increased survival of bacterial cultures treated with stannous chloride. Our results suggest that the Reishi extract would be able to present a redox/ chelant action by altering blood constituent marking with 99mTc and by protecting bacterial cultures against stannous chloride-induced oxydating lesions. The study had a multidisciplinary character, with the participation of the following areas of knowledge: Biophysics, Radiobiology, Botanics, Phytotherapy, and Hematology / Avalia??es cl?nicas t?m sido poss?veis com radiobiocomplexos marcados com tecn?cio-99m (99mTc). Drogas naturais ou sint?ticas s?o capazes de interferir na marca??o de estruturas sangu?neas com 99mTc, e tamb?m tem sido descrita a toxicidade de v?rios produtos naturais. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de um extrato de Ganoderma lucidum (Reishi) na marca??o de constituintes sangu?neos sang??neas com 99mTc e na sobreviv?ncia de Escherichia coli. Amostras de sangue de ratos Wistar foram tratadas com extrato de reishi. O procedimento de radiomarca??o foi realizado. Amostras de plasma (P), c?lulas sang??neas (CS) e fra??es insol?vel (FI) e sol?vel (FS) de P e CS foram separadas e a radioatividade foi contada para determina??o das porcentagens de radioatividade (%ATI).Culturas de Escherichia coli AB1157 foram tratadas com cloreto estanoso na presen?a e aus?ncia do extrato de reishi. Amostras de sangue e culturas bacterianas tratadas com NaCl 0.9% foram usadas como controles. Dados indicaram que o extrato de reishi alterou significativamente (p<0,05) a %ATI de P, CS, FI-P, FS-P, FI-CS e FS-CS, bem como, aumentou a sobreviv?ncia de culturas bacterianas tratadas com cloreto estanoso. Nossos resultados sugerem que o extrato de Reishi poderia apresentar a??o redox/quelante alterando a marca??o de constituintes sang??neos com 99mTc e protegendo culturas bacterianas contra les?es oxidativas induzidas pelo cloreto estanoso. O estudo teve car?ter multidisciplinar com a participa??o das seguintes ?reas do conhecimento: Biof?sica, Radiobiologia, Bot?nica, Fitoterapia e Hematologia

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-03-22T19:38:42Z No. of bitstreams: 1 FranciscoCanindeDeSousaJunior_TESE.pdf: 1665223 bytes, checksum: a3c9c1fa573d5e42243d0808e537d798 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-03-28T19:44:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 FranciscoCanindeDeSousaJunior_TESE.pdf: 1665223 bytes, checksum: a3c9c1fa573d5e42243d0808e537d798 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-28T19:44:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FranciscoCanindeDeSousaJunior_TESE.pdf: 1665223 bytes, checksum: a3c9c1fa573d5e42243d0808e537d798 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / O crescente interesse e aplica??es dos produtos biotecnol?gicos v?m aumentando o desenvolvimento de novos processos de recupera??o e purifica??o de prote?nas. A adsor??o em leito expandido (ALE) tem se destacado como uma t?cnica promissora para essa finalidade, pois combina em uma ?nica opera??o as etapas de clarifica??o, concentra??o e purifica??o da prote?na alvo, reduzindo assim tempo e custos de opera??o. Neste contexto, o objetivo desta tese foi avaliar a recupera??o e purifica??o do ant?geno 503 de Leishmania i. chagasi expresso em E. coli M15 e a remo??o de endotoxina por ALE. Na primeira etapa do trabalho foram realizados ensaios em taques agitados sob a forma de dois planejamentos experimentais, para definir as condi??es ?timas de adsor??o e elui??o do ant?geno na resina Streamline chelating. Nos ensaios de adsor??o usando o leito na forma expandida empregou-se uma coluna de 2,6 cm de di?metro por 30,0 cm de altura, acoplada a uma bomba perist?ltica. Na segunda etapa do trabalho, avaliou-se a remo??o de endotoxina durante o processo de recupera??o do ant?geno, empregando o tensoativo n?oi?nico triton X-114 na etapa de lavagem da ALE. Na terceira etapa, buscou-se elaborar um modelo matem?tico capaz de prever as curvas de ruptura do ant?geno 503 em coluna na forma expandida. Os resultados do planejamento experimental para adsor??o do ant?geno 503 mostraram o pH 8,0 e a concentra??o de NaCl de 2,4 M como melhores condi??es de adsor??o. No segundo planejamento, o ?nico fator significativo para elui??o foi a concentra??o de imidazol, definida em 600 mM. A isoterma de adsor??o do ant?geno 503 mostrou bom ajuste ao modelo de Langmuir (R=0,98) e os valores de qmax (capacidade m?xima de adsor??o) e Kd (constante de equil?brio) estimados foram de 1,95 mg/g e 0,34 mg/mL, respectivamente. Atrav?s dos testes de purifica??o diretamente do homogeneizado n?o clarificado obteve-se uma recupera??o de 59,2% da prote?na de interesse e um fator de purifica??o de 6,0. A adi??o do tensoativo n?o-i?nico Triton X-114 ? etapa de lavagem da ALE proporcionou altos valores (>99%) de remo??o do LPS inicialmente presente nas amostras para todas as condi??es estudadas. O modelo matem?tico obtido para descrever a curva de ruptura do ant?geno 503 na resina Streamline Chelanting em leito expandido apresentou bom ajuste aos dados experimentais, tanto para etapa de estimativa de par?metros quanto para de valida??o. O modelo validado foi utilizado na otimiza??o das efici?ncias, obtendo-se os valores m?ximos de efici?ncia do processo e efici?ncia da coluna de 89,2% e 75,9%, respectivamente. Portanto, ALE mostrou ser uma alternativa eficiente na recupera??o da prote?na-alvo e remo??o de endotoxina a partir de um extrato de E. coli n?o clarificado em apenas uma etapa. / The growing interest and applications of biotechnology products have increased the development of new processes for recovery and purification of proteins. The expanded bed adsorption (EBA) has emerged as a promising technique for this purpose. It combines into one operation the steps of clarification, concentration and purification of the target molecule. Hence, the method reduces the time and the cost of operation. In this context, this thesis aim was to evaluate the recovery and purification of 503 antigen of Leishmania i. chagasi expressed in E. coli M15 and endotoxin removal by EBA. In the first step of this study, batch experiments were carried out using two experimental designs to define the optimal adsorption and elution conditions of 503 antigen onto Streamline chelating resin. For adsorption assays, using expanded bed, it was used a column of 2.6 cm in diameter by 30.0 cm in height coupled to a peristaltic pump. In the second step of study, the removal of endotoxin during antigen recovery process was evaluated employing the non-ionic surfactant Triton X-114 in the washing step ALE. In the third step, we sought developing a mathematical model able to predict the 503 antigen breakthrough curves in expanded mode. The experimental design results to adsorption showed the pH 8.0 and the NaCl concentration of 2.4 M as the optimum adsorption condition. In the second design, the only significant factor for elution was the concentration of imidazole, which was taken at 600 mM. The adsorption isotherm of the 503 antigen showed a good fit to the Langmuir model (R = 0.98) and values for qmax (maximum adsorption capacity) and Kd (equilibrium constant) estimated were 1.95 mg/g and 0.34 mg/mL, respectively. Purification tests directly from unclarified feedstock showed a recovery of 59.2% of the target protein and a purification factor of 6.0. The addition of the non-ionic surfactant Triton X-114 to the washing step of EBA led to high levels (> 99%) of LPS removal initially present in the samples for all conditions tested. The mathematical model obtained to describe the 503 antigen breakthrough curves in Streamline Chelanting resin in expanded mode showed a good fit for both parameter estimation and validation steps. The validated model was used to optimize the efficiencies, achieving maximum values of the process and of the column efficiencies of 89.2% and 75.9%, respectively. Therefore, EBA is an efficient alternative for the recovery of the target protein and removal of endotoxin from an E. coli unclarified feedstock in just one step.