Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, 2006. / Submitted by mariana castro (nanacastro0107@hotmail.com) on 2009-12-01T13:59:23Z No. of bitstreams: 1 dissertacao_Waldemar Pacheco de Oliveira Filho.pdf: 2573172 bytes, checksum: 9a381323d2cc30bb38170bd6982875f1 (MD5) / Rejected by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com), reason: Falta abstract on 2009-12-04T02:47:45Z (GMT) / Submitted by mariana castro (nanacastro0107@hotmail.com) on 2009-12-16T12:23:26Z No. of bitstreams: 1 dissertacao_Waldemar Pacheco de Oliveira Filho.pdf: 2573172 bytes, checksum: 9a381323d2cc30bb38170bd6982875f1 (MD5) / Approved for entry into archive by Joanita Pereira(joanita) on 2009-12-16T19:56:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dissertacao_Waldemar Pacheco de Oliveira Filho.pdf: 2573172 bytes, checksum: 9a381323d2cc30bb38170bd6982875f1 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-12-16T19:56:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_Waldemar Pacheco de Oliveira Filho.pdf: 2573172 bytes, checksum: 9a381323d2cc30bb38170bd6982875f1 (MD5) Previous issue date: 2006 / O prion é uma proteína de superfície de membrana, presente no tecido nervoso da maioria dos mamíferos. É uma proteína de tamanho médio (250 resíduos de aminoácidos em sua estrutura primária) e que ainda possui sua função biológica indefinida, apesar de diversos estudos já realizados. O prion é responsável por um conjunto de doenças chamadas Encefalopatias Espongiformes, onde se incluem a Síndrome de Creutzfeld-Jacob e a Encefalopatia Espongiforme Bovina (Mal da vaca Louca). Estas patologias podem estar relacionadas a eventos de mudança conformacional que ocorrem na proteína durante o transporte de íons cobre para o neurônio. Estudos realizados na última década comprovaram a existência de uma interação entre o prion e íons cobre(II), que ocorre em regiões definidas do prion: entre os resíduos de aminoácidos 60 e 91, e possivelmente entre os resíduos de aminoácidos 92 e 96 e 180 e 193. Diversas técnicas analíticas têm sido utilizadas para o estudo da interação cobre - prion (EPR, RMN, espectrometria de massa, espctroscopia CD-UV, Raman), no entanto ainda existe uma carência de dados e uma divergência de resultados no que se refere aos parâmetros quantitativos. Neste trabalho, utilizou-se a voltametria de redissolução anódica para estudar a interação do prion com os íons cobre (II). Inicialmente, fragmentos peptídicos, correspondentes aos sítios de ligação do cobre no prion (PHGGGWGQ: resíduos 60 a 91; GGGTH: resíduos 92 a 96; VNITKQHTVTTTT: resíduos 180 a 193), foram sintetizados pelo método Fmoc de fase sólida. Em seguida, realizou-se a clivagem dos peptídeos da resina e a remoção de seus grupos protetores com reagentes orgânicos. Os peptídeos foram posteriormente purificados utilizando a cromatografia líquida de alta eficiência de fase reversa e padronizados por espectroscopia UV-Vis utilizando a Lei de Beer e os métodos de Edelhoch e Murphy & Kies. A espectrometria de massa foi utilizada para a identificação e verificação da pureza (determinação da massa molecular e seqüência) dos peptídeos. Para todos os peptídeos estudados, observou-se a formação de um complexo com os íons cobre(II). A estequiometria da reação de complexação do Cu2+ com os peptídeos foi de 1 mol de peptídeo para 1 mol de íon cobre(II), em todos os sistemas estudados, estando em concordância com a literatura. Duas metodologias foram utilizadas para o cálculo da constante de dissociação (Kd) dos complexos: Lei da Ação das Massas (Kd = 4,371 x 10-8 mol L-1 - complexo Cu2+-Ac-VNITKQHTVTTTT-NH2; Kd= 4,334 x 10-8 mol L-1 - complexo Cu2+-Ac-GGGTH-NH2 e Kd = 5,240 x 10-9 mol L-1 - complexo Cu2+-Ac-PHGGGWGQ-NH2) e Titulação Amperométrica (Kd = 2,683 x 10-9 mol L-1 - complexo Cu2+-Ac-VNITKQHTVTTTT-NH2; Kd= 1,830 x 10-9 mol L-1 - complexo Cu2+-Ac-GGGTH-NH2 e Kd = 3,500 x 10-10 mol L-1 - complexo Cu2+-Ac-PHGGGWGQ-NH2), Com base nestes resultados, foi proposto um mecanismo para explicar a participação dos íons cobre(II) nos eventos de mudança conformacional característicos das síndromes. Os íons cobre(II) que se ligam ao prion na região entre os resíduos 60 e 91 (complexo mais estável) teriam participação direta na mudança conformacional, enquanto que os íons cobre(II) que se ligam às outras regiões do prion (resíduos 92 a 96 e 180 a 193) atuariam no papel biológico da proteína, que consiste em transportar íons cobre até enzimas que previnem danos oxidativos nos neurônios. __________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Prion is a protein of membrane surface, which is present in the majority of the mammalians. It is a protein of average size (250 amino acid residues in its primary structure) that still has its biological function unclear, although many studies have been already done. Prion is responsible for a group of diseases called Spongiforms Encefalopaties, such as Creutzfeld-Jacob Disease and Bovine Spongiform Encefalopaty (Mad Cow Disease). The occurrence of these diseases can be related to conformational changes that occur in the structure of the protein during the transport of copper ions to neurons. Many studies, which have been carried out in the last decade, demonstrated that there is an interaction between prion and copper(II) ions, that occurs at certain peptide fragments of prion: between 60 and 91 amino acids residues and possibly between 92 and 96 and 180 and 193 amino acids residues Many analytical techniques have been used to study the interaction between copper and prion (EPR, RMN, mass spectrometry, CD-UV spectroscopy, Raman). However, the quantitative data obtained in the studies differ significatively and there is still many information about the interaction that remains unclear. In this work, the anodic stripping voltammetry was used to study the interaction between copper (II) ions and prion. Initially, peptide fragments, which correspond to cooper binding sites at prion (PHGGGWGQ: 60 to 91 amino acid residues; GGGTH: 92 to 96 amino acid residues; VNITKQHTVTTTT: 180 to 193 amino acid residues), were synthesized by Fmoc-solid phase method. Then, the peptides were cleaved from the resin and its protecting groups removed with organic reagents. The peptides were then purified by reverse phase high performance liquid chromatography and their concentrations were determined by UV-Vis spectroscopy using the beer law, and Edelhoch and Murphy & Kies methods. Mass spectrometry was used to identify and characterize the peptides (molecular mass and amino acid sequence determination). The formation of a complex with cooper(II) ions was observed for all the three studied peptides. The stoichiometry rate was found to be 1 mol of peptide to 1 mol of Cu2+ ion for all the three studied systems. These obtained values are in agreement with literature. Two methodologies were used to determine the dissociation constant (Kd) of the complexes: Action Law Mass (Kd = 4.371 x 10-8 mol L-1 – Cu2+-Ac- VNITKQHTVTTTT-NH2 complex; Kd = 4.334 x 10-8 mol L-1 – Cu2+-Ac-GGGTHNH2 complex and Kd = 5.240 x 10-9 mol L-1 – Cu2+-Ac-PHGGGWGQ-NH2 complex) and Amperometric Titration (Kd = 2.683 x 10-9 mol L-1 - Cu2+-Ac- VNITKQHTVTTTT-NH2 complex; Kd = 1.830 x 10-9 mol L-1 - Cu2+-Ac-GGGTHNH2 complex and Kd = 3.500 x 10-10 mol L-1 - Cu2+-Ac-PHGGGWGQ-NH2 complex). Based on these results, a mechanism was proposed to explain the involvement of copper(II) ions in the conformational change events that are observed in the occurence of the Spongiforms Encefalopaties. The copper(II) ions, which bind to the fragment between 60 and 91 amino acid residues (more stable complex), would have direct participation in the conformational changes, while the copper(II) ions, which bind to the others fragments in the prion (92 to 96 and 180 to 193 amino acid residues) would act in the biological function of the protein, that is to transport the copper(II) ions to anti-oxidative enzymes in the neurons.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2007. / Submitted by mariana castro (nanacastro0107@hotmail.com) on 2009-12-14T18:09:13Z No. of bitstreams: 1 2007_KarinaCunhadosSantos.pdf: 3450951 bytes, checksum: aa8b711edd0b318c7ea8250d3da45bfb (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-01-07T23:54:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_KarinaCunhadosSantos.pdf: 3450951 bytes, checksum: aa8b711edd0b318c7ea8250d3da45bfb (MD5) / Made available in DSpace on 2010-01-07T23:54:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_KarinaCunhadosSantos.pdf: 3450951 bytes, checksum: aa8b711edd0b318c7ea8250d3da45bfb (MD5) Previous issue date: 2007-07-13 / Os neutrófilos constituem o principal tipo de leucócito do sangue periférico e protegem contra infecções fúngicas e bacterianas. Devido à sua capacidade de quimiotaxia, conseguem chegar rapidamente a um sítio de infecção e destruir os patógenos invasores. Essas células podem existir em três estágios de ativação denominados, quiescente, estimulado e ativado. Neutrófilos ativados produzem espécies reativas de oxigênio (ROS), aumentam sua capacidade fagocitária; têm a apoptose retardada além de outras funções. Os polimorfonucleares podem ser ativados in vitro por várias substâncias, dentre elas o PMA, que atravessa as membranas e ativa, diretamente, várias isoformas de PKC. Neste trabalho, os neutrófilos foram purificados a partir do sangue venoso periférico, e obtidos após centrifugação do sangue total em um gradiente de percoll (pureza maior que 96% e viabilidade maior que 97%). Em seguida, 107 células foram ativadas com PMA 100 ng/mL, por 30 minutos, mantendo também um grupo controle não ativado. Análises citométricas foram executadas para se acompanhar a ativação celular através da explosão respiratória e a viabilidade e pureza da separação dos neutrófilos. Também foi realizada uma análise comparativa dos géis bidimensionais na condição Normal e ativada com PMA, verificando que 12 spots tiveram sua expressão aumentada com a ativação e 62 apresentaram expressão diminuída nesta condição. Além disso, 141 spots foram considerados como pertencentes apenas ao gel Normal e 109 spots foram exclusivos da condição PMA. Trinta e cinco spots foram sujeitos à identificação por peptide mass fingerprinting, dos quais seis foram identificados. Entre as proteínas identificadas, quatro são relacionadas ao processo inflamatório e duas foram classificadas como estruturais. RBCK1 e CRAa, foram encontradas pela primeira vez em neutrófilos. Nossa hipótese é que MEK1 e MEKK1, reduzam a atividade transcricional de RBCK1, enquanto PKA aumenta sua atividade. A lisozima, proteína microbicida de grânulos específicos e a ?-actina, classificada como a principal isoforma do citoesqueleto de neutrófilos, também foram identificadas. MRP-14, presente no citoplasma de neutrófilos, apresenta efeitos bacteriostáticos e semelhantes às citocinas. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Neutrophils are the major type of leukocytes in peripheral blood and protect against fungal and bacterial infections. Directed migration in a gradient of chemotactic stimuli enables these cells to rapidly find the site of infection and destroy the invading pathogens. PMNs can exist in three different activation states, namely, resting, primed, and activated states. Activated neutrophils produce reactive oxygen species (ROS), in what is known as respiratory burst, increase phagocytosis, delay apoptosis, among other functions. These cells can also be activated in vitro by particles and substances such as phorbol-myrystate-acetate (PMA). The PMA is a diacylglicerol (DAG) analog that bypasses membrane receptors and directly activates intracellular protein kinase C isoforms (PKC). In this study, human neutrophils were prepared from peripheral venous blood of healthy volunteers (greater than 96% purity, greater than 97% viability) and were obtained by density centrifugation on percoll gradient. 107 cells were activated with 100ng PMA for 30 minutes in 1 mL of PBS. Cytometric analysis was executed for measurement of respiratory burst, viability and purity from neutrophils. A comparative analysis of 2D-eletrophoresis gels, of normal and PMA activated neutrophils was executed, and 83 spots revealed differential expression, from which 13 spots were up regulated after PMA activation and 70 were down regulated in this condition (p≤0,05). Moreover, 141 spots were regarded as belonging only to normal gel, and 109 spots were exclusive of the PMA activated neutrophil map Thirty five conserved spots were subjected to peptide mass fingerprinting, yielding six identifications. Among the identified proteins, four are related to the inflammatory process and two are classified as structural. RBCK1 and CRAa, were found for first time in neutrophils. Our hypothesis is that MEK1 and MEK kinase 1 (MEKK1) represses the RBCK1 activity, and PKA enhances its activity. Lysozyme, a microbicidal protein of specific granules, and β-actin, the main isoform of neutrophil cytoskeleton were identified too. MRP-14, present in the neutrophil cytoplasm, provides bacteriostatic and cytokine-like effects.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2007. / Submitted by mariana castro (nanacastro0107@hotmail.com) on 2009-12-16T18:25:37Z No. of bitstreams: 1 2007_LeandroPinheiroFlauzina.PDF: 112385 bytes, checksum: d0f8c373b8102c0f3fd442abf33d833f (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-01-18T23:26:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_LeandroPinheiroFlauzina.PDF: 112385 bytes, checksum: d0f8c373b8102c0f3fd442abf33d833f (MD5) / Made available in DSpace on 2010-01-18T23:26:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_LeandroPinheiroFlauzina.PDF: 112385 bytes, checksum: d0f8c373b8102c0f3fd442abf33d833f (MD5) Previous issue date: 2007-02-28 / Com o objetivo de determinar o nível ideal de proteína bruta (PB) na ração para codornas japonesas criadas no Distrito Federal, Brasil, foi desenvolvido um experimento, em uma granja comercial. Foram utilizadas 260 codornas japonesas fêmeas de um dia de idade. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado com cinco repetições e 13 codornas por unidade experimental. As aves foram alimentadas com dietas experimentais contendo quatro níveis de PB (18; 20; 22 e 24%), mantendo-se constantes os níveis de energia metabolizável, metionina + cistina, lisina, cálcio e fósforo. Os índices de produção médios de um a 42 dias de idade encontrados foram peso médio de 154,66g, conversão alimentar de 4,39, consumo de ração de 643,59g e ganho de peso de 146,71g. No que tange à biometria das vísceras não foi verificada diferença significativa para o parâmetro moela. Já o parâmetro fígado apresentou diferença significativa (p<0,05) aos 35 dias; o parâmetro peso do intestino mostrou-se significativamente (p<0,05) diferente entre os tratamentos utilizados aos 28 dias; o parâmetro comprimento do intestino fio significativamente (p<0,05) influenciado aos 42 dias. No que concerne a desempenho, verificou-se diferença significativa (p<0,05) para o parâmetro consumo de ração aos 14 dias. Contudo, para os demais parâmetros de desempenho analisados não foi verificada diferença significativa (p>0,05). Dieta .contendo 18% de PB, suplementada com metionina e lisina pode ser indicada para codornas japonesas fêmeas de 1 a 42 dias de idade. __________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The experiment have the objective of determine the ideal crude protein level for Japanese quail raised in the Distrito Federal, Brasil, in a commercial farm.The experiment was developed using 260 one day-old female japanese quail. The experimental delineation was entirely random with five repetitions and 13 quails for each experimental unit. The birds had been fed with experimental diets contend four levels of CP (18; 20; 22 and 24%) and a constant level of metabolizavel energy (2,950 Kcal EM/kg). The results (one to 42 days old) were final Weight 154,66g, feed conversion 4,39, feed intake 643,59g and weight gain 146,71g. There was no significant difference for the parameter moela. However, the parameter liver presented significant difference (p<0,05) in the 35th day; the parameter weight of the intestine revealed a significantly (p<0,05) different between the treatments in the 28 th day; the parameter length of the intestine was significantly (p<0,05) influenced in the 42 th day. In the performance analysis, a significant difference (p<0,05) was verified in the parameter ration consumption in the 14 th day. However, for the others performances was not verified a significant difference between the treatments (p>0,05). Diet with 18% of CP, supplemented with metionina and lisina is indicated to female japanese quail of 1 to 42 years old.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2007. / Submitted by mariana castro (nanacastro0107@hotmail.com) on 2010-03-18T18:02:38Z No. of bitstreams: 1 Tese_Ranieri Oliveira 07_02.pdf: 659949 bytes, checksum: c10c20fe8f18ef4bffb2b430517554d7 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-05-20T19:55:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_Ranieri Oliveira 07_02.pdf: 659949 bytes, checksum: c10c20fe8f18ef4bffb2b430517554d7 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-20T19:55:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Ranieri Oliveira 07_02.pdf: 659949 bytes, checksum: c10c20fe8f18ef4bffb2b430517554d7 (MD5) Previous issue date: 2007 / Introdução: A importância das proteínas citoplasmática na captação, estoque e translocação nuclear dos hormônios tireoideanos ainda é pouco conhecida. Além do mais, a relação da proteína citosólica ligante de T3 de 38kDa (p38CTBP ou simplesmente CTBP) com transporte nuclear de T3 e transcrição gênica T3 mediada é ainda controversa. O objetivo deste estudo foi investigar a função da CTBP na ativação do receptor de hormônio tireoideano (TR) mediada por T3. Métodos: Curvas dose resposta de T3 foram realizadas em células CHO co-transfectadas com os plasmídeos expressando TRβ1, CTBP ou o gene da enzima luciferase controlado pelo promotor do TRH e elementos responsivos ao hormônio tireoideano (DR4, F2, PAL). Ensaios de transporte celular total e nuclear foram realizados em células CHO transfectadas ou não com CTBP. Uma vez que a CTBP pode estar localizada no núcleo, nós também medimos as interações da CTBP com TR e proteínas co-reguladoras tais como SMRT, SRC1. Resultados: A hiper-expressão de CTBP aumentou a captação de [125I]T3, 61,6±9,4 cpm/μg de proteína em células controle para 151,6±23,7 cpm/μg de proteína (p<0,05). Em ensaios de gene repórter, a co-tranfecção de CTBP aumentou a ativação máxima do TR no TRE- PAL em 42%. Além disso, a alta expressão de CTBP em células CHO aumentou o EC50 do T3 no TRE-DR4 em 5,5 vezes. Por outro lado, no TRE-F2 e promotor do TRH, um gene regulado negativamente pelo T3, a co-transfecção da CTBP não alterou a ativação ou repressão mediada por T3, respectivamente. De modo interessante, os ensaios de GST pull-down mostraram que a CTBP interagiu diretamente in vitro com GST-TRβ1 e GST-SMRT, mas não com GST-SRC1 Conclusão: Foi demonstrado neste trabalho que a CTBP aumentou as concentrações intracelulares de T3 e modulou a transcrição gênica mediada por T3 de um modo TRE-específico. Interessantemente, a CTBP interagiu diretamente com TRβ1 e com o co-repressor SMRT, mas não com SCR1. Numa análise geral, estes resultados sugerem que a CTBP pode afetar a ação do T3 não somente alterando níveis intracelulares de T3, mas também interagindo com proteínas nucleares envolvidas na resposta ao T3. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Background: The importance of the cytoplasmatic proteins in the uptake, storage and nuclear translocation of thyroid hormone is poorly understood. Moreover, the relation of cytosolic thyroid binding protein 38kDa (p38CTBP or simply CTBP) with nuclear transport of T3 and T3-mediated gene transcription is still controversial. The aim of this work was to investigate the role of CTBP in the T3-mediated thyroid receptor (TR) activation. Methods: T3 dose response curves were performed in CHO cells cotransfected with plasmids expressing TRβ1, CTBP, and thyroid responsive elements driving the luciferase gene (TREs – DR4, F2, PAL and TRH promoter). Whole cell and nuclear [125I]T3 transport assays were performed in CHO cells transfected or not with CTBP. Since CTBP could be localizated in the nucleus, we also measured the interactions of CTBP with TR and coregulator proteins such as SMRT, SRC1 through GST-pull down assays. Results: Overexpression of CTBP increased [125I]T3 uptake from 61.6±9.4 cpm/μg protein in control cells to 151.6±23.7 cpm/μg protein (p<0.05). In reporter gene assays, CTBP cotransfection increased TR maximum activation on TRE-PAL by 42%. Additionally CTBP overexpression in CHO cells increased T3 EC50 on TRE-DR4 by 5.5 fold. On the other hand, on the TRE-F2 and TRH promoter, a T3 negatively regulated gene, the co-transfection of CTPB did not change T3 activation and repression, respectively. Interesting, GST pull-down assays showed that CTBP directly interacted in vitro with GST-TRβ1 and GST-SMRT, but not GST-SRC1. Conclusion: We demonstrated that CTBP increases intracellular T3 concentration and modulates T3-mediated gene transcription and this effect is TRE specific. Furthermore, CTBP directly interacted with TRβ1 and the corepressor SMRT, but not with coactivator GRIP1. Taken together, these results suggest that CTBP may affect T3 action not only by changing T3 intracellular levels, but also interacting with proteins involved in T3 response.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Programa Multiinstitucional de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, Convênio Rede Centro-Oeste (UnB/UFG/UFMS), 2006. / Submitted by samara castro (sammy_roberta7@hotmail.com) on 2010-11-20T23:55:01Z No. of bitstreams: 1 2006-Sandra Maria Silveira Denadai.pdf: 2780495 bytes, checksum: 6e6795ead415472078a2b46dc593c6e0 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-12-03T22:18:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006-Sandra Maria Silveira Denadai.pdf: 2780495 bytes, checksum: 6e6795ead415472078a2b46dc593c6e0 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-12-03T22:18:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006-Sandra Maria Silveira Denadai.pdf: 2780495 bytes, checksum: 6e6795ead415472078a2b46dc593c6e0 (MD5) / As proteínas devem estar presentes na alimentação em quantidade adequada. Além do aspecto quantitativo deve-se levar em conta o aspecto qualitativo, isto é, seu valor nutricional, que depende de sua composição, digestibilidade, biodisponibilidade de aminoácidos essenciais, ausência de toxicidade e de fatores antinutricionais. Neste estudo amêndoas de sapucaia (Lecythis pisonis Camb.) foram analisadas para se determinar a sua composição centesimal, fatores antinutricionais, e o teor e o escore químico (EQ) de aminoácidos, digestibilidade in vitro e in vivo e os índices de aproveitamento biológico (Balanço Nitrogenado-BN, Coeficiente de Eficiência Alimentar-CEA, Razão de Eficiência Protéica-PER e Valor Biológico-VB) de suas proteínas, para se avaliar seu potencial como fonte alternativa de proteínas. As amêndoas apresentaram teores de aminoácidos, principalmente sulfurados (metionina + cisteína – 105 mg/g), acima dos recomendados, nenhum aminoácido limitante foi encontrado. O teor de ácidos graxos insaturados (ácido linoléico - 42,5%), foi maior que os recomendados e baixos teores de minerais e fibras foram observados. No presente estudo, a presença de lectinas ou inibidores de proteinases, quando detectados, apresentaram baixos níveis. A digestibilidade in vitro de globulinas, nativas ou aquecidas, por proteinases digestivas de mamíferos foi realizada utilizando-se tripsina + quimotripsina + peptidase, obtendo-se valores aproximados de 71,5% e 73,5%, respectivamente. Os indicadores de aproveitamento biológico, a digestibilidade verdadeira e a digestibilidade protéica corrigida escore de aminoácidos- PDCAAS de suas proteínas, foram estudados utilizando-se ratos e se apresentaram semelhantes aos índices da caseína. Estes resultados sugerem que as amêndoas de sapucaia podem ser utilizadas como fonte alternativa de proteína de bom valor nutricional e de lipídeos, por humanos e animais. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Proteins must be present in diet, in appropriate amounts. Besides the quantitative aspect, the qualitative aspect should be taken into account, i.e. its nutritional value, which will depend on its composition, digestibility, bioavailability of essential amino acids, absence of toxicity, and of antinutritional factors. In this study sapucaia nuts (Lecythis pisonis Camb.) were analyzed to determine its proximate composition, antinutritional factors and the amino acid profile and score, in vitro and in vivo digestibility and biological utilization indices (Nitrogen Balance-NB, Alimentary Efficiency Coefficient-AEC, Protein Efficiency Ratio-PER and Biological Value-BV) of its proteins, in order to evaluate their potential as an alternative source of proteins. Nuts presented amino acids profile, principally sulfurized (methionine + cystein - 105 mg/g) higher than the recommended, no limiting amino acids were found. Content unsaturated fatty acids (linoleic acid – 42.5%) were higher than the recommended and low amounts of minerals and fiber were observed. In the present study, lectins or proteinases inhibitors, when detected, showed low levels. In vitro digestibility of native and heated globulins by mammalian digestive proteinases were carried out utilizing trypsin + chymotrypisin + peptidase, with resulting values of approximately 71.5% and 73.5%, respectively. Biological utilization indices, the true digestibility and protein digestibility-corrected amino acid score of the proteins were analyzed utilizing rats and presented similar indices of the casein. Taken together, the results suggest that sapucaia nuts may provide alternative source of good nutritional value protein and fat, for use as a potential nutritional agent by humans and animals.

Tese (Doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2010. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2011-01-18T15:53:22Z No. of bitstreams: 1 2010_AisyBotegaBaldoni.pdf: 10671243 bytes, checksum: fe25bfcdd42b951cc586871607af283e (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2011-01-19T00:42:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_AisyBotegaBaldoni.pdf: 10671243 bytes, checksum: fe25bfcdd42b951cc586871607af283e (MD5) / Made available in DSpace on 2011-01-19T00:42:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_AisyBotegaBaldoni.pdf: 10671243 bytes, checksum: fe25bfcdd42b951cc586871607af283e (MD5) / A mamona (Ricinus communis L.) é uma oleaginosa de grande importância social e econômica. O óleo extraído de suas sementes é utilizado na produção de biodiesel e como insumo para as indústrias químicas, de cosméticos e de lubrificantes. Além do óleo extraído das sementes, sua cadeia produtiva gera subprodutos, especialmente a torta de mamona, que pode ser utilizada como adubo orgânico de boa qualidade (alta concentração de nitrogênio) ou como alimento animal (alta concentração de proteína). O principal entrave de seu uso como alimento animal é a ricina, uma proteína altamente tóxica, encontrada na semente. A ricina é uma lectina, composta por duas subunidades conhecidas como cadeias A e B. Quando ingerida a cadeia B liga-se à galactose na superfície celular, fazendo com que a proteína penetre na célula. Dentro da célula, a cadeia A, que possui atividade enzimática, inativa a subunidade 60S do ribossomo impedindo a produção de proteínas, levando a célula à morte. Os objetivos desse trabalho foram: avaliar a existência de variabilidade genética para concentração de ricina em sementes de mamona de 20 acessos do banco de germoplasma da Embrapa; estudar a distribuição e acúmulo de ricina durante o desenvolvimento da semente de mamona na cultivar BRS Energia; e realizar a transformação genética visando o silenciamento dos genes que codificam para a ricina em sementes de mamona geneticamente modificadas. Para tanto, foram utilizadas técnicas de ELISA (Enzymelinked immunosorbent assay) para a quantificação da ricina nos extratos protéicos totais das sementes, análises imunocitoquímicas, utilizando microscopia de luz e eletrônica para a localização da ricina nas células do endosperma da semente e transformação genética por biobalística visando o silenciamento dessa proteína na semente de mamona, utilizando a metodologia de RNA interferente. Os resultados obtidos mostraram a existência de variabilidade para a concentração de ricina nos acessos do banco de germoplasma da Embrapa Algodão, sendo possível a seleção de genótipos com alto e baixo teor de ricina. As cultivares comerciais IAC Guarani, BRS Nordestina e BRS Paraguaçu apresentaram as menores concentrações de ricina, sendo, as mais indicadas para trabalhos de melhoramento visando à utilização da torta como ração animal. Dentre as cultivares comerciais, a BRS Energia apresentou o valor mais elevado na concentração dessa proteína. Durante o desenvolvimento das células do endosperma da semente de mamona da cultivar BRS Energia ocorreu um aumento no número de vesículas de reserva (vacúolos de armazenamento de proteínas e corpos lipídicos) e diminuição do volume citoplasmático celular. O acúmulo de ricina na cultivar BRS Energia aumentou com o desenvolvimento da semente, sendo que na semente madura (60DAP) essa concentração foi máxima. A ricina pode ser encontrada também nos cristalóides dos vacúolos de armazenamento de proteínas (PSV) e não só na matriz, contrariando observações bioquímicas anteriores em que os componentes protéicos foram encontrados apenas compartimentalizados dentro dos corpos protéicos. Na etapa relacionada à transformação genética da mamona, em cultura de tecidos, o regulador TDZ foi mais eficiente na indução de brotações que o BAP. A adição ao meio de cultura de IBA e AgNO3 foi importante para o alongamento das brotações e enraizamento dos explantes. O uso de biorreatores visando o alongamento dos explantes foi eficiente por curtos períodos. É possível obter plantas geneticamente modificadas de mamona usando imazapir como agente seletivo. O sistema de transformação genética por biobalística apresentou eficiência similar a outros sistemas de transformação de mamona. Assim, no presente trabalho, além de estudar a variabilidade para a concentração de ricina em diferentes genótipos, foi possível identificar seu acúmulo durante o desenvolvimento da semente de mamona. Foram obtidas também plantas transgênicas, que deverão ser analisadas para confirmar a redução total ou parcial da ricina, bem como avaliar em seus descendentes a herança do silenciamento. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Castor bean (Ricinus communis L.) is an oilseed of great economic and social importance. The oil extracted from its seeds is used in biodiesel production and as raw material for chemicals, cosmetics and lubricants. Besides the oil extracted from the seeds, their production chain generates side-products, which can be used as organic fertilizer of good quality (high nitrogen concentration) or as animal food (with high protein content). The main obstacle to its use for animal feeding is ricin, a highly toxic protein, found in the seed. Ricin is a lectin composed of two subunits known as chains A and B. When ingested, the B chain binds to galactose on the cell surface, penetrating into the cell. Inside the cell, the A chain, which has enzymatic activity, inactivates the 60S subunit of the ribosomes preventing the production of proteins, leading to cell death. The objectives of this study was (1) to assess the existence of genetic variability for the concentration of ricin in castor bean seeds from 20 accessions of germplasm bank of Embrapa, (2) study the distribution and accumulation of ricin during seed development, and (3) perform genetic transformation aimed at silencing the genes coding for ricin in genetically modified castor bean seeds. ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) was used to quantify ricin in total protein extracts of seeds, immunocytochemical analysis using light and electron microscopy for the localization of ricin in cells of the endosperm of the seed and genetic transformation by biolistic targeting the silencing of this protein in castor seeds, using the strategy of interfering RNA (RNAi). The results showed the existence of variability for the concentration of ricin in accessions of the germplasm bank of Embrapa Algodão, it is possible to select genotypes with high and low levels of ricin. The cultivars IAC Guarani, BRS Nordestina and BRS Paraguaçu had the lowest concentrations of ricin, and are quite suitable for breeding aiming to use the seed cake to feed animals. Among the commercial cultivars, BRS Energia presented the highest concentration of this protein. During the development of cells in the endosperm of castor seeds of BRS Energia exhibited an increasing number of reserve vesicles (protein storage vacuoles and lipid bodies) and decreased cytoplasmic volume. The accumulation of ricin in the BRS Energia increased with seed development, and in the mature seed (60DAP) the concentration was the maximum. Ricin can also be found in crystalloids of protein storage vacuoles (PSV) and not only in the matrix, contrary to previous biochemical observations that the protein components were found only compartmentalized within the protein bodies. Genetic transformation of castor bean was developed, with the regulator TDZ being more effective in inducing shoots then BAP. In addition, IBA and AgNO3 were important for the elongation of shoots and rooting of explants. The use of bioreactors in order to elongate the explants was effective for short periods. It is possible to obtain genetically modified castor bean using as selective agent the imazapyr. The transformation system based on the biolistic process presented efficiency similar to other protocols.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, 2011. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2012-03-20T13:52:59Z No. of bitstreams: 1 2011_LuciliaZeymerAlvesCorrea.pdf: 10461549 bytes, checksum: 5e882c748c15f3ef071faa0b579dec08 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2012-03-21T12:55:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_LuciliaZeymerAlvesCorrea.pdf: 10461549 bytes, checksum: 5e882c748c15f3ef071faa0b579dec08 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-21T12:55:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_LuciliaZeymerAlvesCorrea.pdf: 10461549 bytes, checksum: 5e882c748c15f3ef071faa0b579dec08 (MD5) / O vírus da imunodeficiência humana infecta linfócitos T, que possuem o receptor CD 4 na membrana plasmática. Inicialmente, o CD 4 é responsável pela entrada do vírus na célula hospedeira. Em um segundo momento, ocorre a modulação negativa do CD 4 pela proteína auxiliar Nef do vírus HIV-1, o que possibilita a saída do vírus para infectar outra célula. O antibiótico Ikarugamicina impede a modulação negativa do CD4 pela proteína auxiliar Nef e reestabelece o nível de CD 4 na membrana plasmática, mas é citotóxico em testes in vitro. Inibidores da proteína auxiliar Nef vêm sendo amplamente estudados como possíveis fármacos para o tratamento antirretroviral. O objetivo deste trabalho é a síntese de possíveis inibidores da proteína auxiliar Nef do vírus HIV -1. A partir de estudos de interação molecular, propusemos a síntese de seis moléculas, que contêm os grupos 3-amino-1,2,4-triazol, uracila ou 1,2,3-triazol, como possíveis inibidores da proteína auxiliar Nef do vírus HIV-1. Após análise retrossintética, diversas rotas foram propostas para a síntese das moléculas. Após várias tentativas de síntese, não se obteve sucesso na síntese da molécula com o grupo 3-amino-1,2,4-triazol, e da molécula com o grupo uracila. Um total de quatro moléculas contendo o anel 1,2,3-triazólico foram sintetizadas por rota sintética direta, obtendo-se excelentes rendimentos. A síntese envolveu a preparação do grupo azida, seguida por reação de Huisgen – reação click – e acoplamento com DCC/DMAP. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The human immunodeficiency virus infects T lymphocytes that have the CD4 receptor on the plasma membrane. Initially, CD4 is responsible for virus entry into the host cell. In a second stage, the CD 4 downregulation by the auxiliary protein of HIV-1 Nef occurs, allowing the exit of the virus to infect another cell. The antibiotic Ikarugamycin prevents downregulation of CD 4 by the Nef auxiliary protein and restores the level of CD4 at the plasma membrane, but in vitro tests it is cytotoxic. Nef inhibitors have been investigated as potential drugs for antiretroviral treatment. The aim of this work is the synthesis of potential inhibitors of auxiliary protein HIV-1 Nef. Based on studies of molecular interaction we proposed the synthesis of six molecules, which contain the groups 3-amino-1,2,4-triazole, 1,2,3-triazole or uracil as potential inhibitors of the auxiliary protein HIV -1 Nef. After retrosynthetic analysis, several routes have been proposed for the synthesis of these molecules. Several attempts to synthesize molecules with the 3-amino-1,2,4-triazole and uracil groups, were performed without success. The molecules containing 1,2,3-triazole ring were synthesized by a direct synthetic route with excellent yields. The synthesis involved the preparation of the azide group, followed by the Huisgen reaction – click reaction – and DCC/DMAP coupling.

El estado crítico de la alimentación en los países subdesarrollados requiere de estudios que planteen nuevas posibilidades para la mejor utilización de los recursos alimenticios disponibles. Una de éstas consiste en utilizar material foliar como materia prima para producir concentrados proteicos de características adecuadas para el consumo humano. Esto involucra un cambio, tanto en las costumbres del consumidor, quien se vería ante la posibilidad de consumir alimentos vegetales enteramente nuevos (de textura y forma diferentes a los productos clásicos), como en el sistema agrario, ya que el material foliar en cuestión es utilizado primordialmente para la alimentación del animal destinado al consumo humano, y en este caso el cultivo sería dedicado a la elaboración de los concentrados proteicos vegetales para consumo directo del hombre.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-10-15T11:14:04Z No. of bitstreams: 1 2013_MarinaFirminodaSilva.pdf: 1446801 bytes, checksum: c661becf28c2d1ce39c45b876e5cdb3e (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-10-15T12:13:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_MarinaFirminodaSilva.pdf: 1446801 bytes, checksum: c661becf28c2d1ce39c45b876e5cdb3e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-15T12:13:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_MarinaFirminodaSilva.pdf: 1446801 bytes, checksum: c661becf28c2d1ce39c45b876e5cdb3e (MD5) / A febre é definida como o aumento da temperatura corporal que ocorre como parte da resposta de fase aguda desencadeada após a invasão de um organismo por agentes estranhos. O LPS (lipopolissacarídeo) é um potente indutor de febre, frequentemente utilizado em estudos sobre respostas inflamatórias e febris. Alguns trabalhos têm sugerido o envolvimento de vias de sinalização dependentes de proteína quinase A (PKA) e proteína quinase C (PKC) no desenvolvimento da febre. Neste estudo, investigamos o efeito de inibidores de PKA (H-89) e PKC (celeritrina) sobre a resposta febril induzida por LPS. Analisamos ainda alterações da expressão e atividade destas quinases em resposta aos diferentes tratamentos, 3 e 6 h após a injeção do estímulo pirogênico. Os resultados demonstraram que celeritrina (3 μg/rato) e H-89 (10 μg/rato) reduziram a resposta febril induzida pela injeção iv de LPS (5 μg/Kg) em 36 % e 33,1 %, respectivamente. A administração conjunta de celeritrina e H-89 também reduziu a resposta febril induzida por LPS; entretanto, o efeito inibitório verificado (31,2 %) não foi maior do que o observado após a administração isolada de cada droga. Após os experimentos farmacológicos, os animais foram eutanasiados e tiveram seus hipotálamos dissecados para as análises de expressão e atividade. A análise por western blotting não foi capaz de detectar alterações da expressão de PKCε 3 h após a injeção do LPS, tampouco de PKA nos dois tempos analisados. A expressão de PKCε 6 h após a injeção do estímulo pirogênico apresentou-se aumentada nos animais tratados com H-89, sugerindo que, na ausência da ativação de PKA, vias dependentes de PKCε sejam ativadas como mecanismo compensatório. A análise da atividade foi realizada por meio de kits comerciais de ELISA para medir a fosforilação de um substrato realizada por quinases. Não foram encontradas mudanças significativas nos padrões de atividade para nenhuma das proteínas testadas, o que pode ser devido à baixa especificidade do método, visto que o substrato utilizado no ensaio pode ser fosforilado por todas as isoformas de PKA e PKC. Os dados desse trabalho sugerem que vias de sinalização dependentes de PKA e PKC estejam envolvidas na resposta febril induzida por LPS, porém, métodos mais específicos para análise destas enzimas são necessários para elucidar os mecanismos moleculares envolvidos. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Fever is defined as the increase in body temperature that occurs as a component of the acute phase response triggered after invasion of pathogens in the body. Lipopolysaccharide (LPS) is a potent inducer of fever, often used in studies assessing the inflammatory and febrile responses. Some studies have suggested the involvement of protein kinase A (PKA) and protein kinase C (PKC)-dependent signaling pathways in the development of fever. We investigated the effect of PKA and PKC inhibitors, H-89 and celeritrin respectively, on the febrile response induced by LPS. We also analyzed changes in the expression and activity of these kinases in response to different treatments, 3 and 6 h after the pyrogenic stimulus injection. The results showed that celeritrin (3 mg/rat) and H-89 (10 mg/rat) reduced the febrile response induced by LPS (5 mg/kg, iv) in 36% and 33.1%, respectively. Co-administration of celeritrin and H-89 also reduced the LPS-induced febrile response; however, the inhibitory effect observed (31.2%) was not more effective than that observed after administration of each drug separately. After pharmacological experiments, animals were euthanized, and their hypothalami were dissected for kinases expression and activity analyses. Western blot analyses did not exhibit changes in neither PKCε expression 3 h after LPS injection nor PKA levels in both periods investigated. The expression of PKCε 6 h after injection of pyrogenic stimulus was increased in H-89 treated animals, suggesting that PKCε-dependent pathways are activated as a compensatory mechanism in the absence of PKA activation. The enzymatic activity analysis was performed using commercial ELISA kits specific for measuring substrate phosphorylation mediated by kinases. There were no significant changes in the patterns of activity for any tested enzymes, which may be due to low specificity of the method since the substrates employed in the assays can be phosphorylated by all PKC or PKA isoforms. Data from the present study suggest that PKA and PKC-dependent signaling pathways may be involved in the febrile response induced by LPS, although more specific methods are needed to analyze such enzimes in order to elucidate their involvement in fever molecular mechanisms.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2014-01-22T12:09:28Z No. of bitstreams: 1 2013_EmanuelAdelinoMedeirosDamasceno.pdf: 769625 bytes, checksum: 6708aea1d8268fb87fc5926cd7192370 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-02-17T12:56:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_EmanuelAdelinoMedeirosDamasceno.pdf: 769625 bytes, checksum: 6708aea1d8268fb87fc5926cd7192370 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-17T12:56:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_EmanuelAdelinoMedeirosDamasceno.pdf: 769625 bytes, checksum: 6708aea1d8268fb87fc5926cd7192370 (MD5) / INTRODUÇÃO: O adenocarcinoma gástrico é uma neoplasia de grande morbidade e mortalidade em nossa realidade que, apesar dos avanços na medicina, ainda é diagnosticada em estágios avançados. A descoberta da amplificação/super- expressão do HER2 nesta doença foi um passo importante tanto na melhor compreensão da carcinogênese desse tumor, quanto na utilização deste receptor como um alvo terapêutico eficaz. Acredita-se que a positividade do HER2 esteja relacionada a um pior prognóstico, mas os dados atuais na literatura ainda são controversos, sem padronização e podem não refletir as variações regionais deste receptor. O objetivo do presente estudo é avaliar o perfil de expressão do HER2 em espécimes cirúrgicos e sua possível associação com outros fatores prognósticos. MÉTODOS: Espécimes de gastrectomia parcial ou total de 106 pacientes foram submetidos ao exame imuno-histoquímico para avaliação da expressão do HER2 e a nova avaliação morfológica para análise dos fatores prognósticos. RESULTADOS: Dos espécimes, 12 (11,32%) foram positivos para a super-expressão do HER2 e 94 (88,67%) foram negativos. Não foi observada associação entre a expressão do HER2 e o tipo histológico, diferenciação tumoral, margens cirúrgicas, invasões vascular e perineural, metástase nodal e profundidade de invasão. CONCLUSÃO: A expressão do HER2 não foi frequente no câncer gástrico nem associada às características clinicopatológicas. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / INTRODUCTION: Gastric adenocarcinoma is a neoplasm of major morbidity and mortality in our reality that, despite advances in medicine, is still diagnosed in advanced stages. The discovery of HER2 overexpression in this disease is an important step in understanding both carcinogenesis of this tumor, and the use of this receptor as a tHERapeutic target. Several studies have associated HER2 positivity as a prognostic factor, but the current data in the literature are still controversial, non-standardized and may not reflect the regional variations of this receptor. The aim of this study is to evaluate the expression HER2 in surgical specimens and its association with prognostic factors. METHODS: Partial or total gastrectomy specimens from 106 patients were evaluated by immunohistochemical method and new morphological evaluation for analysis of prognostic factors. RESULTS: Of all specimens 12 (11.32%) were positive for HER overexpression, and 94 (88.67%) were negative. No association was observed between HER2 expression and histopathological type, differentiation, surgical margins, vascular or perineural invasion, nodal metastasis and depth of invasion. CONCLUSIONS: HER2 expression was not frequent in gastric cancer and neitHER associated with clinicopathological features.