Orientador: Flavia Maria Netto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-22T15:29:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Henn_RuthLiane_M.pdf: 5191604 bytes, checksum: c6426c51553d184bf65dc2b208ae534f (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: Este trabalho objetivou caracterizar diferentes isolados protéicos de soja comerciais (IPSs), bem como analisar seu comportamento quando submetidos à hidrólise enzimática para a obtenção de peptídeos de baixo peso molecular. Para cada isolado determinou-se o teor de proteína, lipídio, cinzas, umidade, fitato, inibidor de tripsina (IT), índice de dispersibilidade da proteína (IDP) e composição em aminoácidos totais. Além disso, realizou-se extração das proteínas dos IPSs com água destilada e a fração solúvel foi submetida à eletroforese em gel de poliacrilamida, na presença de dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) e análise densitométrica dos géis. Os IPSs foram hidrolisados com pancreatina nas seguintes condições: em água deionizada, 5,5% de substrato (p/p), relação enzima/substrato = 1:15 (p/p), temperatura = 40°C e pH = 8,0 mantido pela adição de NaOH 4,93N. A reação foi interrompida quando atingiu 21,5% de grau de hidrólise (GH). Os hidrolisados obtidos foram analisados para o índice de solubilidade em ácido tricloroacético (TCA) 10%, conteúdo de aminoácidos livres (AAL) , cromatografia de exclusão molecular e eletroforese em gel de poliacrilamida, na presença de dodecil sulfato de. sódio (SDS-PAGE). Os resultados obtidos na caracterização dos 13 IPSs demonstraram diferenças quanto ao conteúdo de: proteína (87,8-94,1%), lipídio (3,0-4,7%), cinzas (3,5-5,0%), umidade (4,1-9,5%), fitato (7,41-15,62 mg/g proteína), IT (5,17-94,72 UTl/mg de proteína) e IDP (11,7-88,7%). Quanto à composição em aminoácidos, a variabilidade entre os IPSs, para 13 dos 18 aminoácidos analisados, ficou dentro do erro experimental (+-8%). Entretanto, os isolados apresentaram variabilidade > 8% para os aminoácidos Trp (11%), His (12%), Cys (14%), Met (16%) e Tyr (10%). A composição relativa das subunidades-7S e polipeptídeos-11S presentes na fração solúvel dos 13 IPSs foi: ? a' (0-100%); a (0¬26%); ß (0-44%); polipeptídeo ácido (50-100%); polipeptídeo básico (0-50%). O tempo de hidrólise necessário para atingir 21,5% de GH diferiu para os 13 IPSs (48 a 252 min) e foi maior para os isolados que continham todas as subunidades-7S e polipeptídeos-11 S, valores mais altos de iDP, e com maior conteúdo de IT. A solubilidade em TCA 10% dos hidrolisados variou de 61,5 a 100,0%. O total de AAL ficou entre 7,5 e 31,0%, sendo que os aminoácidos Arg, Lys, Trp, Tyr, Phe, Met, Vai, Leu e lIe encontravam-se em maior quantidade. Deste grupo, os básicos foram os aminoácidos liberados em menor proporção. A cromatografia de exclusão molecular sugeriu diferenças no perfil de peso molecular dos hidrolisados. Estas diferenças foram confirmadas pela eletroforese uma vez que alguns hidrolisados apresentaram bandas bem definidas na faixa de PM entre 14400 e 31000, enquanto outras amostras apresentaram somente bandas difusas na região de PM < 6500. Os resultados obtidos com o presente trabalho sugerem que os 13 IPSs analisados são fisicamente diferentes e comportam-se como substratos distintos quando submetidos às mesmas condições de hidrolise / Abstract: The purpose of this study was to characterize different commercial soy protein isolates (SPI's) and to analyse their behaviour when they were submitted to an enzymatic hydrolysis to obtain low-molecular weight hydrolysates. Protein, lipid, ash, moisture, phytate, trypsin inhibitor (TI) content, protein dispersibility index (PDI), and total-amino acid composition were determined for each SPI. SDS-PAGE electrophoresis and densitometric analysis of the gels were performed in the soluble SPI protein extracted with destilled water. The SPI's were hydrolysed with pancreatin under the following conditions: deionized water, 5.5% substrate concentration (w/w), enzyme-substrate ratio = 1: 15 (w/w), temperature = 40°C and pH = 8.0 which was maintained constant by addition of 4.93N NaOH. The reaction was stopped when the degree of hydrolysis (DH) reached 21.5%. The hydrolysates obtained were evaluated according to their solubility in 10% trichloroacetic acid (TCA), free-amino acid content (FAA), molecular exclusion chromatography and SDS-PAGE electrophoresis. The characteristics of the 13 SPI's showed differences in the contents of protein (87.8-94.1 %), lipid (3.0-4.7%), ash (3.5-5.0%), moisture (4.1-9.5%), phytate (7.41-15.62 mg/g protein), TI (5.17-94.72 TIU/mg protein) and PDI (11.7-88.7%). In terms of the amino-acid composition, the variability among the SPI's was within the experimental error (:t8%) for the most amino-acids analysed. However the SPI's showed variability > 8% for the amino-acids Trp (11%), His (12%), Cys (14%), Met (16%), and Tyr (10%). The relative composition of the 78¬subunits and 11S-polipeptides presented in the soluble fraction was: a' (0-100%), a (0-26%), ß (0-61%), acid polipeptide (50-100%) and basic polipeptide (0-50%). The time the SPI's consumed to reach the same DH (21.5%) was different (48-252 min.), being longer for isolates containing all the 7S-subunits and 11S-polipeptides, higher PDI values, and higher TI contents. The hydrolysates' solubility in 10% TCA was in the range of 61.5 to 100.0%. The free-amino acids varied from 7.5 to 31.0%, consisting mainly of Arg, Lys, Trp, Tyr, Phe, Mel, Val, Leu and Ile. It was noticed, however, that basic amino acids were released in smaller proportion. Molecular exclusion chromatography pointed out differences in the molecular-weight profiles of the hydrolysates. These differences were confirmed by electrophoresis, which showed for some of the hydrolysates well defined zones in the region between 14400 and 31000, while the other samples showed only scattered zones in the MW < 6500 region. These results suggest that the 13 SPI's analysed are physically different and behave as distinct substrates when submitted to the same hydrolysis conditions / Mestrado / Mestre em Ciência da Nutrição

Orientador: Maria Luiza Silveira Mello / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-22T19:22:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Garcia_SimoneLopes_M.pdf: 3905156 bytes, checksum: a41eb69b400c0c1984d156c63e481ef6 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: Ninfas de 30., 40. e 50. estádios e adultos de ambos os sexos de Panstrongylus megistus de hábito domiciliar e silvestre, bem e pouco alimentados, foram submetidos a choques de temperatura de O°C e 40° C por 1h e 12 h. Após o choque, os insetos retomavam a temperatura e umidade controle (28°C e 80% UR), e foram acompanhados diariamente durante um período de 30 a 35 dias para se determinar os níveis de sobrevivência. Para a análise de fenótipos nucleares foram utilizadas ninfas de 50. estádio de hábito domiciliar e pouco alimentadas as quais foram submetidas a choques de 40°C por 1h e 12h e a O°C por 1h. A dissecação dos insetos para a retirada dos túbulos de Malpighi foi efetuada imediatamente após o choque, 10 e 30 dias após. O objetivo foi determinar alterações decorrentes do choque de temperatura, visando promover manutenção mais adequada em insetário e interpretar alterações em insetos provenientes do meio ambiente em esquemas experimentais. Os resultados indicaram variabilidade de resposta aos choques térmicos com relação aos parâmetros estudados. A variabilidade foi dependente da temperatura a que os insetos foram mantidos, duração do tratamento, fase do desenvolvimento e sexo. Choques hipertérmicos de curta duração pouco afetaram a sobrevivência dos insetos, principalmente das ninfas, enquanto os de longa duração foram letais na maioria dos casos. Quanto à ocorrência de mudas, pouca alteração se verificou após choques hipertérmicos, ao contrário do verificado após choques hipotérmicos, os quais se mostraram mais eficazes em promover uma diminuição nessa frequência Choques hipotérmicos, especialmente os de longa duração, promoveram uma queda drástica na taxa de sobrevivência dos espécimes. Os fenótipos nucleares mais frequentes tanto nos insetos do grupo controle quanto nos submetidos a choques, foram os núcleos considerados normais, ou seja, com um pequeno e conspícuo corpo heterocromático (cromossomo Y). Os fenótipos alterados, presentes inclusive nos grupos controle, foram núcleos em degeneração, apoptóticos, com suspeita de apoptose, com heterocromatina aparentemente descompactada, gigantes, gigantes em degeneração, com suspeita de apoptose e gigantes com a heterocromatina aparentemente descompactada. Dentre os fenótipos alterados em maior frequência foram encontrados núcleos suspeitos de apoptose seguidos por núcleos em degeneração e núcleos com a heterocromatina aparentemente descompactada. Um aumento estatisticamente significante nos núcleos em degeneração foi constatado com o decorrer dos dias para dissecação dos espécimes. Núcleos apoptóticos foram observados principalmente após choques hipertérmicos, independente da duração do choque e do tempo pós-choque, enquanto núcleos suspeitos de apoptose foram mais frequentes em insetos dissecados 30 dias após o choque. A maior frequência de núcleos com aparente descompactação da heterocromatina ocorreu em insetos submetidos a choques hipertérmicos, independente da duração do tratamento. Houve uma elevação na frequência de núcleos gigantes após choques hipertérmicos, embora esta não tenha se intensificado com o aumento da duração do tratamento. Os poucos insetos sobreviventes aos choques de 40°C por 12 h, apresentaram uma diminuição significante, quando dissecados 30 dias após o choque, constatando-se também uma interação entre os fatores dias pós-choque e temperatura de choque. Núcleos gigantes em degeneração foram observados com maior frequência após choques hipertérmicos, enquanto um aumento na frequência de núcleos gigantes com suspeita de apoptose foi observado após aumento na duração do tratamento. Com a elevação da temperatura, verificou-se um aumento na frequência de núcleos apoptóticos, gigantes com suspeita de apoptose e núcleos com aparente descompactação da heterocromatina. Os dados levantados para Panstrongylus megistus mostraram-se diferentes dos previamente relatados para Triatoma infestans, salientando a importância de estudos para diferentes espécies, dado o seu comportamento particular / Abstract: Domestic and silvatic third, fourth and fifth instar nymphs and male and female adults of Panstrongylus megistus Burmeister with different feeding conditions were submitted to thermal shocks at ooe and 40oe for 1 and 12 hours. After the shock the insects were retumed to normal temperature and humidity conditions and followed for 30 to 35 days in order to determine survival rates, molting and nuclear phenotypes ofMalpighian tubules. Since feeding and living conditions were not significant factors in the survival rates of specimens submitted to the thermal shock, fasting domestic fifth instars mal e nymphs were used in order to investigate nuclear phenotypes. The insects were submitted to thermal shocks at ooe (1 hour) and 40oe (1 hour and 12 hours) being retumed to control conditions (28°e). The insects were dissected right after shock, 10 and 3 O days after shock for cytological analysis of their Malpighian tubule. The objective was to investigate the changes promoted by the shocks with views to provi de adequate laboratory conditions and to understand changes caused by experimental schemes. The results indicate that the response varies according to temperature, duration of treatment, development stage and sexo Short hyper thermic shocks had little effect, mainly for the nymphs, while long shocks were lethal in the majority of studied cases. About molting, few alterations were observed after hyper thermic shocks in contrast to hypothermic shocks which promoted a falI in the observed frequency. Hypothermic shocks, specially long ones, promoted a drastic fall in the survival rate of the specimens. The most frequent phenotype observed was the one considered normal, not only for the control group but also for the insect submitted to the shocks. Altered phenotypes, found also in nuclear group, included degenerated, apoptotic, suspected of apoptosis, heterocromatin partially or completely unraveled, giant nuclei, this last phenotype being classified also as usual, degenerated, suspected of apoptosis and with heterocromatin partially unraveled. Among the altered phenotypes the predominant one was the suspected of apoptosis nuclei, followed by degenerated and heterocromatin partially unraveled nuclei. There were a rising statistically significant in the frequency of degenerated nuclei when analyzed 30 days after shock. Apoptotic nuclei were observed specially after hyper thermic shocks independently of duration of shock and time after shock. However, suspect of apoptosis nuclei were more frequently observed 30 days after shock. The most frequency of apparently unraveled heterocromatin nuclei occurred after hyper thermic shocks no matter the duration of the shock. A rising in the frequency of giant nuclei was observed after hyper thermic shocks although it did not increase for insects submitted to long duration shocks. The few remain from long hyper thermic shocks presented a significant fall when analyzed 30 days after shock. An interaction between the factors days and temperature was verified for this experimental condition. Degenerated giant nuclei were observed mostly after hyper thermic shocks, while it was observed a rising in the fTequency of suspected of apoptosis giant nuclei after long shocks. The rising in the temperature of the shock caused a rising in the frequency of apoptotic, suspects of apoptosis giant and apparently unraveled heterocromatin nuclei. The data collected for Panstrongylus megistus behaved differently from the data collected previously for Triatoma infestans. Therefore, it shows the importance of studies conceming different species taking into account their peculiar behavior / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientadores: Joyce M. Annichino-Bizzacchi, Christine Hackel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-23T08:15:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mendes_ChristianePatriciadeOliveira_M.pdf: 3747507 bytes, checksum: 314473a43a2b60b23c30e4583bb31f97 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: A cascata da coagulação sanguínea humana, em condições normais, é regulada por vários mecanismos naturais de anticoagulação. Entre esses mecanismos está a chamada Via da Proteína c (PC) Anticoagulante. A PC é uma proteína hepática dependente da vitamina K, que, quando ativada, exerce uma potente atividade anticoagulante e pró-fibrinolítica. Os pacientes com deficiência de PC apresentam quadro clínico caracterizado por fenômenos tromboembólicos Apenas 2-5% dos pacientes com trombose venosa apresentam deficiência de Pc. Contudo, devido à importância desse anticoagulante natural, a diminuição de sua concentração, mesmo que ainda dentro dos limites da normalidade, talvez possa ser um fator de risco a mais, que contribua para a trombose nesses pacientes. Recentemente foram descritos três polimorfismos na região promotora do gene da PC; um polimorfismo C/T, na posição -1654 e um polimorfismo A/G, : um polimorfismo na posição 1641 A/T, na posição -1476 (REITSMA, 1993). A análise desses três polimorfismos, em 24 famílias normais da Holanda, demonstrou que os três haplótipos mais freqüentes eram CAA, CGT e T AA, e representavam 88% dos casos. Segundo os autores os polimorfismos CGT e T AA tinham relação com a concentração da atividade plasmática de PC, na qual o genótipo CGT está associado a um risco elevado de trombose venosa, uma vez que foi mais freqüente nos indivíduos com trombose (risco relativo associado a doença de 1.9 ou OR de 1.9) frente ao genótipo T AA (OR de 1.6). Neste trabalho determinamos a freqüência destes 3 polimorfismos em três grupos étnicos da população brasileira (caucasóide, negróide e indígena), e em pacientes com trombose venosa mas sem deficiência congênita de Pc. Analisamos se em nossa população havia uma correlação entre o genótipo e a concentração da atividade de PC, ou se algum dos genótipos estava associado ao risco de trombose. A população indígena foi constituída por 87 indivíduos. Observou-se uma maior freqüência de homozigotos nos três genótipos estudados (CC - 52,9%; GG - 54% e AA 70,1 %), que também se manteve na análise considerando os três genótipos, simultaneamente (CC/GG/ AA -21,8%). Tal resultado leva-nos crer que os índios brasileiros estudados no presente trabalho ainda não sofreram folie influência da miscigenação, bastante comum em nosso país. Esse grupo indígena tem sua tribo em localização razoavelmente isolada do convívio do homem civilizado, o que resulta na pouca variação genômica (baixo fluxo gênico). A população de doadores caucasóide e negróide foi constituída por 216 homens e 50 mulheres. A população caucasóide foi constituída por 188 indivíduos (147 homens e 41 mulheres) e a negróide por 78 indivíduos (69 homens e 9 mulheres). Quando esses grupos foram analisados em conjunto, observou-se uma maior freqüência de heterozigotos nos 3 polimorfismos (CT 59,4% e AG - 59,4%; AT-70,7%). A análise conjunta dos 3 polimorfismos revelou uma predominância do genótipo heterozigoto (CT/AG/AT - 27,4%). Isto sugere um elevado fluxo gênico, o que é esperado, visto a alta taxa de miscigenação em nossa população. A freqüência dos polimorfismos na raça caucasóide foi CT-57%, AG-59%; e AT-64%; e na raça negróide CT -65%, AG-60% e A T -77%. A conjugação dos 3 polimorfismos mostrou que na raça caucasóide houve predominância do genótipo CT/AG/AT (28,3%) assim como na raça negróide (30,1 %). Sendo que as populações caucasóide e negróide não apresentaram diferença significativa. A dosagem da atividade de PC na população de doadores variou de 70 a 150%, com uma média de 102%. Contudo, não se evidenciou nenhuma relação entre os níveis de PC e os genótipos, exceto para o polimorfismo A/T, conforme descrito na população holandesa. Também, o genótipo CC/GG/TT, associado a níveis diminuídos de PC naquela população foi praticamente nulo (menor que 1%) em nossa população de brasileira, não permitindo qualquer análise. A média da atividade de PC dos 2 genótipos mais freqüentes (CT/AG/AT e CC/AG/AT) na população de doadores caucasóide e holandesa foi semelhante (p=0,039). Verificou-se nos doadores uma diferença significativa nos níveis de PC no polimorfismo 3, entre AA e A T com uma concentração da atividade de 108% e 99% (p=O, 015), respectivamente, associada a homozigose CC, que também mostrou uma diferença significativa entre CC/ AA e CC/AT com uma concentração da atividade de 112.76% e 99.96% (p=0,004), respectivamente). Isto poderia sugerir que o polimorfismo AT em homozigose para o C influencia na diferença dos níveis de PC, em relação ao polimorfismo 3. Como os resultados na população holandesa são opostos aos nossos, pois aqueles indivíduos com o genótipo CC/ A T exibem níveis de PC mais elevados, não permitem que se faça qualquer afirmativa com segurança. Na população com trombose, houve predominância do sexo feminino, sendo 35 homens e 88 mulheres. Quanto à raça, também houve uma predominância de indivíduos caucasóides (n=108) sobre os negróides (n=15). Verificou-se uma maior freqüência de heterozigosidade dos 3 Polimorfismos (CT-65,5%; AG-54% e AT-55,5%), assim como do genótipo heterozigoto (CT/AG/AT-21,1%). Mesmo quando os pacientes foram separados por raça, também verificou-se um maior índice de heterozigozidade, sendo CT -64%;e AG-52,3% e A T -54% no caucasóides e, CT -75%; AG-66,7% e A T - 77,7% nos negróides. Sendo que as populações caucasóide e negróide não apresentaram diferença significativa. o polimorfismo 2 em homozigose para o A foi significativamente mais freqüente na população com trombose (46%), quando comparada à população de doadores (24.4%) (p=0.005). Tais dados sugerem que o genótipo AA é um fator de risco para trombose (aR 1.93, 95% CI, 1.11 a 3.24). Contudo, em nossa população esse genótipo não está associado a níveis Por outro lado, o haplótipo CGT, considerado um fator de risco para trombose nos pacientes holandeses, foi encontrado em apenas 1 % dos nossos pacientes. Apesar de serem 2 populações diferentes, caso esse genótipo fosse um fator de risco, esperaríamos uma maior freqüência em nossos pacientes, assim como verificamos um aumento da prevalência de outras alterações genéticas associadas à trombose, como o fator V de Leiden, a mutação da protrombina e a mutação no gene da metilenotetrahidrofolatoredutase. A freqüência dos genótipos com maior e menor concentração da atividade de PC não é diferente entre doadores e pacientes com trombose, sugerindo que esses polimorfismos parecem não estar diretamente ligados ao risco de trombose. Portanto, nossos resultados demostraram que em nossa população, tanto de doadores como de pacientes com trombose, esses 3 polimorfismos praticamente não estão associados com os níveis de atividade plasmática de PC. Esses resultados mais uma vez ilustram a grande diversidade genética, nas populações humanas, mesmo entre grupos étnicos semelhantes, apontando para a importância de se analisar individualmente cada população, para que as conclusões possam ser bem fundamentadas / Abstract: Protein C (PC) is one of the major inhibitors of blood coagulation. After activation by thrombin-thrombomodulin complex in the endothelium, PC inhibites activated factors V and VIII. It also exerts a profibrinolytic activity, trough neutralization of plasminogen activator inhibitor-l (PAI-I). PC deficiency is associated with clinical thromboembolic disease. The incidence of PC deficiency in patients with thrombosis is 2-5%. However, since the physiological significance of the PC anticoagulant activity, a decreased plasmatic concentration, even in the normal range, could be a factor contributing for thrombosis in patients without a congenital PC deficiency. Recently, Spek et aI (1993) described 3 polymorphisms in the promoter region of PC gene: AlT in the position 1476; C/T in the position 1654 and AlG in the position 1641. The genotypic variation of these polymorphisms were associated with plasma PC levels and thrombotic risk (Spek et aI 1995). We determined the frequency of these polymorphisms in 3 ethinic groups of the Brazilian population (caucasian, black and indian) and in patients with thrombosis disease, without PC deficieI1cy. We also verified ifthere is an association between genotype and PC concentration, and with thrombotic risk. The indian group comprised 87 individuais. Homozigosity was prevalent in all polymorphisms (CC-52.9%, GG-54% and AA-70.1%) and in the genotype (CC/GG/AA-21.8%). These results suggest that this group was not miscegeneous, a finding very common in Brazilian population, probably because the tribe of these indians is isolated from the civilization. Caucasian and black population comprised 216 men and 50 women; there was 188 Caucasians (147 men and 41 women) and 78 Blacks (69 men and 9 women). Heterozigous polymorphism was more frequent in caucasian and black, as well as complete heterozygote CT/AG/AT (26.1% and 30.1%, respectively). Although before blood collection the individuaIs were selected only if untill the third ancestry were from the same origin, our results favour a high genetic flow. Mean PC activity levels in caucasian and blacks was 102%. However there was no correlation between the genotypic variation and PC concentration. IndividuaIs with the 2 more frequent genotype (CT/AG/AT and CC/AG/AT) had mean PC levels similar to that described in the Dutch study. There was a difference in mean PC levels in A/T polymorphism, between AA and A T (p=0.015), that also was significative between CC/AA and CC/AT (p=0.004). This could suggest that the first polymorphism homozigous for C influence the difference in PC concentration related to A/T polymorphism. However, in the Dutch population the results are in opposite, since the individuaIs with CC/ A T genotype showed increased PC levels. Thrombotic population comprised 35 men and 88 women, 108 caucasian and 15 black. The complete heterozigous CT/AG/AT was the more frequent genotype (21-1%), and not differ from the black and caucasian population. Even when they were separated according to the race, there was no difference between the frequency in the groups. When the polymorphisms were analysed individually, the second polymorphism homozigous for A was significantly more frequent in caucasian patients with thrombosis related to the caucasian normal population (p=0.005). To ascertain whether this polymorphism genotype was associated with a higher risk for thrombosis, we compare the number of patients and control caucasian subjects with the AA and ATor TT genotypes. The results indicated that having the AA genotype yields an OR of 1.93 (95% CI, 1.11 to 3.24) compared to the other genotypes. However, AA genotype is not associated with decrease in PC levels. Indeed, this finding was not verified in Dutch population. On the other hand, in Dutch study a clear correlation between PC promoter genotype and PC plasma levels was found; individuaIs with CGT haplotype exibited a PC activity 22% lower than individuaIs with T AA haplotype. They also considered CGT haplotype a risk factor for thrombosis. Although Brazilian and Dutch populations, we should expected that CGT genotype being a risk factor for thrombosis was more prevalent in our population, like factor V Leiden, variant prothrombin gene and methylene tetrahydrofolate reductase mutation, wich were increased in our and in Europe thrombotic patients, In conclusion, our results demonstrated that in our population these polymorphisms were not related to PC concentration. It is also important to point out the great genetic variety in human populations, even in the same ethynic groups, rising the 'importance to analyse individually each population / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Ciências / FAPESP

Orientador: Elias Basile Tambourgi / Tese (doutorado) Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-23T20:10:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Porto_AnaLuciaFigueiredo_D.pdf: 3149386 bytes, checksum: 7b7522a5b74e3408c9c0e7c0109e9d41 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Sistemas de duas fases aquosas constituídos por Polietileno Glicol e Sais de fosfatos, com diferentes massas moleculares do polímero, em diferentes comprimentos de "tie lines" a pH 7,0, foram empregados para caracterização hidrodinâmica destes sistemas em coluna de discos perfurados rotativos (PRDC), utilizando a albumina de soro bovino como proteína modelo. O desempenho deste tipo de equipamento foi caracterizado a partir de análise dos estudos da Fração Retida da Fase Dispersa ("hold up"), do Coeficiente de Transferência de Massa (Kda) e da Eficiência de Separação (Eficiência de Murphree). Os estudos de transferência de massa e eficiência de separação foram baseados na partição da albumina sérica bovina por meio de extração em coluna PRDC operada de modo contracorrente e contínuo, durante 70 minutos de operação, onde a fase dispersa foi constituída pela fase rica em PEG (leve) e a fase contínua a fase rica em sal (pesada). Foram realizadas variações da velocidade de rotação, velocidade da fase dispersa e composição dos sistemas e avaliado o comportamento do fração retida da fase dispersa, coeficiente de transferência de massa e da eficiência de separação. Os resultados obtidos demonstraram que o melhor valor de coeficiente de transferência de massa foi obtido com a velocidade de rotação de 140 rpm , e que a eficiência de separação é praticamente independente da velocidade de rotação. Os maiores valores da fração retida da fase dispersa, coeficiente de transferência de massa e eficiência de separação foram obtidos com a velocidade da fase dispersa de 3,0 ml/min, e que os mesmos diminuem a medida que aumenta a composição dos sistemas. Foram também realizados estudos de extração contínua a partir dos extratos impuros da proteína citocromo b5, e das enzimas protease e ascorbato oxidase, utilizando as condições ótimas obtidas a partir de suas extrações em descontínuo. Os resultados demonstraram uma extração em proteína total de 38,5%, 44% e 48% para a protease, citocromo b5 e ascorbato oxidase, respectivamente. A aplicação deste tipo de equipamento permitiu fator de purificação para citocromob5 de 2, proteasede 4 e 22 para ascorbato oxidase. A recuperação em atividade para protease, ascorbato oxidase e citocromo b5 foi 100%, 112% e 78%, respectivamente. Os valores obtidos a partir da utilização de sistemas de duas fases aquosas em coluna de discos perfurados rotativos, comprovam a possível utilização deste tipo de equipamento em escala industrial / Abstract: Aqueous two-phase systems constituted by polyethylene glycol and phosphate salts with different polymers molecular mass and tieline lenghts (pH 7.0) were used for hydrodynamic characterization of these systems in a continuous perforated rotating disc contactor (PRDC) usind bovine serum albumin as the standard protein. The performance of this kind of equipment was investigated from the analyses of the fractional dispersed phase hold up studies, partition coefficient, mass transfer (Kda) and separation efficiency (Murphree efficiency). The studies of mass transfer and separation efficiency were based in the bovine serum albumin partition throughout the extraction in a contactor (PRDC) operated in countercurrent and in a continuous mode during 70 minutes of operation, where the dispersed phase was constituted by the PEG rich phase (light phase) and the continuous phase by the salts ( heavy phase). Variations in the rotation velocity, dispersed phase velocity and systems compositions were investigated and the hod up of the dispersed phase behaviouL mass transfer coefficient and separation efficiency were evaluated. The results obtained showed that the best mass transfer coefficient value was achieved with a rotation velocity of 140 rpm and the separation efficiency was practically independent on the rotation velocity. The highest values of the fractional dispersed phase hold up, mass transfer and coefficient separation coefficient were obtained with the velocity of 3.0 mllmin, and they decreased when the composition systems increased. Continuous extraction studies were also performed from the impure extracts of the protein cytocrhome bs and the enzymes protease and ascorbic oxidoreductase, utilizing the optimal conditions obtained from the discontinuous extraction of these. The results demonstrated a total. protein extraction of 38.5%, 44% and 48% for protease, cytocrhome bsand ascorbic oxidoreductase, respectively. The application of this kind of equipment permitted a purification factor of 2 for cytocrhome bs. , 4 for protease and 22 for ascorbic oxidoreductase. The activity recovery for protease, ascorbic oxidoreductase and cytocrhome bswas 100%, 112% and 78%, respectively. The values obtained from the utilization of aqueous two-phase systems in a continuous perforated rotating disc eontactor confirm a possjble utilization of this kind of equipment in industrial scale / Doutorado / Sistema de Processos Quimicos e Informatica / Doutor em Engenharia Química

Orientador: Marcos Silveira Buckeridge / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-27T06:04:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_AnaMariada_M.pdf: 2785329 bytes, checksum: 805a8f875c7d56fac6d3f82d1485fdb5 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Xiloglucanos (xgs) são polissacarídeos que ocorrem em parede celulares principalmente de dicotiledôneas. Possuem uma cadeia principal idêntica a da celulose P(1_4) glucano e ramificações com xilose, galactose e/ou arabinose. Sua principal função nas paredes celulares é orientar as microfibrilas de celulose e consequentemente os xgs têm papel fundamental na forma e desenvolvimento celulares. Xiloglucanos também acumulam-se em grandes quantidades e sementes, onde servem como reserva para o crescimento inicial da plântula. Sua hidrólise in vivo tem se mostrado altamente complexa e apesar de razoavelmente conhecido, o sistema de hidrólise dos xgs em plantas ainda não está completamente elucidado. O presente trabalho mostra que proteínas extraídas de cotilédones de Tropaeolum majus L. interagem in vitro com celulose (cel) e com o complexo celulose-xg (cel-xg). A concentração ótima de proteínas para essa interação está por volta de 80/-lg.mL-1 (nas condições experimentais determinadas no nosso laboratório). A análise por SDS-PAGE das proteínas eluídas a partir da cel e do complexo cel-xg revelou uma diferença no perfil de bandas detectadas. A interação dos polipeptídeos com o complexo cel-xg mostrou uma proporção maior de uma proteína de 43kDa, sugerindo que a presença do xiloglucano poderia estar aumentando o número de sítios para esses polipeptídeos. Uma diferença entre os perfis de polipeptídeos eluídos a partir de celulose e do complexo cel-xg foi o desaparecimento de uma banda de 63kDa que apareceu somente no primeiro (cel). Isto sugere que o xiloglucano, ao interagir com a celulose, poderia "esconder" sítios específicos de ligação da proteína 63kDa à celulose. Nenhuma atividade enzimática das hidrolases do xiloglucano foi detectada nas amostras de proteínas eluídas da cel e do complexo cel-xg e também as massas moleculares das proteínas detectadas nas interações com cel e com complexo cel-xg não coincidem com as das enzimas já reportadas para o sistema de mobilização do xiloglucano. Nossos resultados sugerem que os polipeptídeos que interagem com a cel e com o complexo cel-xg poderiam estar atuando principalmente na ligação entre celulose e xiloglucano, interferindo no acesso das enzimas responsáveis pela mobilização do xiloglucano / Abstract: Xyloglucans (xgs) are polysaccharides that occur mainly in the plant cell walls of dicots. They are composed of a main chain identical to cellulose W-1,4 linked glucoses) branched with xylose galactose and/or arabinose. Its main function in the walls is the orientation of cellulose microfibrils, being therefore important for cell shape determination. Xyloglucans also accumulate in great amounts in seeds, where they serve as a reserve for plantlet initial growth. Although seed Xgs are reserve polymers, their hydrolysis in vivo have been demonstrated to be extremely complex and although many enzymes have been isolated, the system is not completely elucidated. The present work showed that proteins present in the cotyledons of Tropaeolum majus L. are able to interact in vitro with microcrystalline cellulose (cel) ar microcrystalline cellulose covered with xyloglucan (cel+xg). The optimal concentration of proteins for interaction with cel or cel+xg are around 80).!g.mL-1. Analysis by SDSPAGE of the proteins eluted frem cel or cel+xg with sodium chloride revealed a different polypeptide profile. The interaction of cotyledon extracts with cel+xg showed a higher proportion of a 43kDa protein, suggesting that xyloglucan could be increasing the number of sites of interaction for this polypeptide. Alternatively, when cel alone was used, a 63kDa protein appeared together with the 43kDa protein observed in interaction with cel+xg. This suggests that when xyloglucan interacts with cel it possibly "hides" binding sites which are specific for the 63kDa protein binding. No enzymatic activity of any of the xyloglucan hydrolases was observed in the solution of polypeptides eluted from cel or cel+xg. Also, none of the bands found in SDS-PAGE coincide with any of the molecular weights already known for xyloglucan hydrolases of T. majus L. Our results suggest that the cel and cel+xg interactive polypeptides found in the cotyledons of T. majus L. might be related to storage mobilisation, possibly interfering with the access of the hydrolases to xyloglucan / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Jose Francisco Hofling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-27T17:42:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_CristinaCrespo_M.pdf: 1894181 bytes, checksum: a8c2297f706d149ed6be72ca9fbb524f (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Amostras de Cândida álbicans isoladas da cavidade oral e de diferentes sítios anatômicos de humanos, foram estudadas. O propósito da presente pesquisa foi analisar os graus de similaridade entre esses isolados, através da técnica de eletroforese de proteínas totais em gel de poliacrilamida, em sistema descontínuo (SDS-PAGE). As amostras foram inoculadas em 50 mL de meio de cultura YPD. Decorrido o tempo de inoculação, as amostras foram centrifugadas a 3000 x g, por 5 minutos e os sedimentos obtidos foram ressuspensos em água destilada gelada, lavados e fracionados em alíquotas de 0,5 mL, os quais foram submetidos ao processo de extração de proteínas por nitrogênio líquido. Os extratos celulares foram submetidos à técnica de SDS-PAGE e após a corrida eletroforética os géis foram revelados e as bandas proteicas foram submetidas a análise computacional no pacote estatístico NTSYS-pc 1.70 empregando-se o programa QUALITATTVE e o coeficiente de similaridade &M(Simple Matching Coefficient). Essas matrizes de similaridade foram tratadas pelo algoritmo UPGMA, a qual gerou os dendrogramas que possibilitaram as análises dos graus de similaridade existentes entre os isolados de C. albicans. A análise dos perfis eletroforéticos de extratos proteicos de isolados de C. albicans da cavidade bucal e outros sítios anatômicos de humanos, originou diversos dendrogramas, o qual permitiu o agrupamento dos isolados em grupos representativos da espécie. As amostras de C. albicans, de um mesmo sítio anatômico, quando comparadas, apresentaram valores de similaridade acima de 80% (Ssm = 0,800), os quais suportam o agrupamento dentro de uma mesma espécie. As amostras de C. albicans em conjunto, envolvendo a linhagem-tipo CBS-562, juntamente com as 14 amostras analisadas (uma de cada sítio anatômico) escolhidas aleatoriamente, apresentaram um alto grau de coeficiente de similaridade, quando comparadas. A composição dos "clusters" presentes nos dendrogramas resultantes da análise dos perfis proteicos das diversas amostras analisadas, independeram dos fatores estudados, como sítios anatômicos e indivíduos / Abstract: Samples of Candida albicans isolated from the human oral cavities and other anatomic sites, were studied. The purpose of the present research was to study the degree of similarity among these isolates through the whole-cell polyacrylamide gel electrophoresis technique (SDS-PAGE). The samples were inoculated in YPD culture medium, and after the incubation, they were centrifuged at 3,000 x g for 5 minutes, with the sediments were washed in cold distilled water and whole-cell proteins were extracted in liquid nitrogen. The cell extracts were submitted to SDS-PAGE technique and after the electrophoresis, the gels were revealed and the protein bands were submitted to computacional analysis on the NTSYS-pc 1.70 version statistical package applying the coefficient similarity SM (Simple Matching Coefficient). Those similarity matrices were treated by the UPGMA algorithm, allowing the analyses of similarity levels among C. albicans isolates by dendrograms. The eiectrophoretic analysis of the C. albicans proteins extracts isolated from oral cavities and others human anatomies sites, allowed the construction of dendrograms including clustering of isolates in representatives groups of species. Samples of C. albicans species of the same anatomic site showed similarity values up 80% (SSm = 0,800) supporting the species grouping. Whole sample of these organisms (all anatomic sites) selected randomly including the type-strain CBS-562 showed high similarity. The clusters composition expressed by the dendrograms of all the sample were not dependent of factor as: anatomic sites and studied persons / Mestrado / Mestre em Biologia e Patologia Buco-Dental

Orientador : Aloisio Jose Antunes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-28T00:50:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ribeiro_HelenytaSantos_D.pdf: 40899420 bytes, checksum: b7c24dda57136600a195fafa67a7b1e7 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: O propósito deste estudo foi avaliar o comportamento das proteínas miofibrilares e de quatro concentrados protéicos de soro de leite (CPS) em sistema modelo, utilizando-os devido às suas propriedades funcionais compatíveis com aplicações na indústria da carne e investigar as características de textura dos produtos elaborados a partir dessas proteínas. Os CPSs foram avaliados em relação à solubilidade, gelatinização e emulsificação. As proteínas miofibrilares do músculo bovino Quadriceps femuris foram extraídas e testadas as propriedades funcionais, como foi feito nas amostras de CPS. Géis mistos (CPS e proteínas miofibrilares) foram avaliados pela sua propriedade funcional de gelatinização, para proporcionar informações sobre o propósito de substituição em sistemas cárneos. Os bolos de carne, hambúrgueres e salsichas foram elaborados de acordo com formulações clássicas, utilizadas pela indústria da carne. Nestes produtos, as proteínas miofibrilares foram substituídas em diferentes proporções pelos CPSs (1,0 a 5,0%). Todas as amostras de CPS utilizadas neste estudo apresentaram uma solubilidade alta (83,2 a 97,1%), bem como uma eficiente capacidade de emulsificação e gelatinização. As proteínas miofibrilares apresentaram uma capacidade de emulsificação e gelatinização inferior às proteínas do soro. A avaliação das salsichas, bolos de carne e hambúrgueres ("cooking yield" e análise do perfil de textura, ou TPA) demonstrou viabilidade de substituição / Abstract: The purpose of this study was to evaluate the behavior of the myofibrillar proteins and four whey protein concentrates in model system, and utilize the four whey protein concentrates due to their functional properties compatible with applications in the meat industry, and to investigate the textura1characteristics of the manufactured products with these proteins. WPCs was evaluated in relation to solubility, gelation and emulsification. Myofibrillar proteins from bovine muscle QuadriceDs femuris were extracted and tested for functional properties as it was done for the WPC samples. Mixed gels (WPC and myofibrillar proteins) were eVpluated for their functional property of gelation, to provide information about the intended substitution in meat systems. Meat loaves, meat patties and sausages were manufactured according to the classical formulations, utilized by the meat industry. In these products, myofibrillar proteins were replaced in different proportions by WPCs (1,Oto 5,0%). Ali WPCs samples utilized in this study showed a high solubility periormance (83,2 to 97,1%), as well as an efficient emulsification and gelatinization capacities. The myofibrillar proteins showed gelatinization and emulsifying capacity lower than whey proteins. The evaluation of sausages, meat loaves and meat patties (cooking yield, TPA) have shown the feasibility of the substitution / Doutorado / Doutor em Ciência da Nutrição

Orientador : Michael Georges Albert Vincentz / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T02:14:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kobarg_ClaudiaBandeira_M.pdf: 5569874 bytes, checksum: d8bc63a3af210b4a8a1791986eacb57e (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: O gene Opaco2 (02) é um fator de regulação da transcrição do tipo bZIP envolvido no controle da síntese de proteínas de reserva no endosperma do milho. Um cDNA de Arabidopsis thaZiana que codifica uma proteína do tipo bZIP homóloga ao fator de transcrição 02 de milho denominado BZ02Hl masic Leucine Zipper Opaque2 Homologous) foi isolado e caracterizado. A seqüência do gene BZ02Hl foi identificada nos bancos de dados do projeto genoma de Arabidopsis thaZiana. O gene BZ02Hl é composto por sete exons e seis íntrons e está presente em cópia única no genoma de Arabidopsis thaZiana. A estrutura do gene BZ02Hl, assim como a alta similaridade entre as seqüências do domínio bZIP de BZ02Hl e 02 confirmaram que BZ02Hl pertence à Fanulia Multigênica de 02. Transcritos de RNA mensageiro de BZ02Hl foram detectados em todos os tecidos investigados e a incidência ou ausência de luz sobre as plantas jovens pareceu não afetar a expressão do gene. O domínio bZIP da proteína BZ02Hl foi produzido em E. coZi para determinar sua especificidade de ligação ao DNA. O domínio bZIP de BZ02Hl reconhece seqüências relacionadas ao sítio GCN4 como GLM (5'- TGACTA-3') e a seqüência palíndrome (5'-GACATGTC-3'), além dos motivos G-box e, menos intensamente, C-box. A especificidade de ligação do domínio bZIP de BZ02Hl foi comparada com a da proteína 02 de Coix e as diferenças encontradas foram discutidas. / Abstract: The gene Opaque2 (02) encodes a bZIP transcription factor involved in storage protein synthesis control in maize endosperm. An Arabidopsis thaliana cDNA that encodes a bZIP protein homologous to the 02 transcription factor, named BZ02Hl (Basic Leucine Zipper Opaque2 Homologous) has been isolated and characterized. The BZ02Hl gene sequence was identified in the databases of the Arabidopsis thaZiana genome project. The BZ02Hl gene is composed of seven exons and six introns and is present as a single copy in the genome of Arabidopsis thaliana. The gene structure and the high sequence similarity of the bZIP domain shared by BZ02Hl and 02 deftned BZ02Hl as a member ofthe 02 multigene family. BZ02Hl mRNA was detected in alI tis sues analyzed, but no differences of the expression levels were observed when comparing young plants exposed to light or darkness. The bZIP domain ofBZ02Hl protein was expressed in E. coZi to begin the characterization of its DNA binding specificity. The bZIP domain of BZ02Hl binds to the GCN4-related DNA binding site sequences GLM (5'- TGACTA-3') and "palindrome" (5'-GACATGTC 3 '), as well as to the G-box and to a lesser extend to the C-box. The binding specificity of the BZ02Hl bZIP domain was compared to 02 Coix bZIP domain and the differences observed were discussed. / Mestrado / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores: Florencia Cecilia Menegalli, Paulo Jose do Amaral Sobral / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-28T09:12:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souza_SilviaMariaAlmeidade_D.pdf: 36508055 bytes, checksum: 1f3067443e9a985d4caa016bf46324f9 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Pesquisas sobre filmes comestíveis e biodegradáveis a base de biopolímeros surgiram nos últimos tempos devido à considerações ecológicas, aliadas à necessidade de minimização de resíduos sólidos. Estudos com proteínas miofibrilares de peixe demonstraram a capacidade em formar filmes de propriedades funcionais interessantes. O objetivo desse trabalho foi desenvolver uma formulação a base de proteínas miofibrilares de origem bovina (músculo Semitendinosus). As proteínas miofibrilares foram extraídas pelo método de centrifugação diferencial, em soluções tampão salinas e posteriormente foram liofilizadas e caracterizadas segundo as análises de teor protéico e de lipídeo, granulometria (0,125 mm), umidade e cinzas, identificação das frações protéicas (SDSPAGE), identificação das frações protéicas (aminograma), determinação de isotermas de sorção (25°C) e visualização através de microscopia de varredura. As composições das formulações dos filmes testadas foram calculadas segundo um planejamento experimental fatorial completo de dois níveis (23] com quatro repetições no ponto central, sendo compostas de água destilada, glicerol como plasticizante (50 a 75 g/lOO g proteína), ácido acético como ajustador de pH (2,5 a 3,5), além da proteína (1%). As propriedades funcionais utilizadas para verificar os efeitos dos fatores foram as propriedades mecânicas (força e deformação na ruptura), solubilidade em água, opacidade e permeabilidade ao vapor de água. Com a formulação que apresentou as melhores propriedades funcionais foram estudados, inicialmente, os efeitos da espessura e umidade relativa sobre as propriedades mecânicas força-deformação na ruptura e permeabilidade ao vapor de água ...Observação: O resumo, na íntegra poderá ser visualizado no texto completo da tese digital. / Abstract: Researches on biodegrable and edible films based on biopolymers appeared on the Iast years due to environrnental considerations allied to the necessity of solids waste minimizations. Studies on fish myofibrillar proteins verify this capability on film forming with interesting functional properties. The objective of this work was to develop a formulation based on myofibrillar bovine proteins (Semitendinosus muscle). Myofibrillar proteins were extracted with buffers solutions by differential centrifugation method, and afterwards that material was freeze-dried. Samples were characterized according to protein and lipid content analysis, size (0,125 mm), humidity and ash, identification of proteins ftactions (SDS-PAGE), identification of proteins fractions (aminograms), sorption isotherm determination (25°C) and visualization by scanning electronic microscope. Film formulation solutions were tested according to a complete (23)factory experimental design, with four replications on the central point. The composition of the casting solution 1% protein, distilled water, glycerol as plasticizer (50 to 75 g/lOOg protein), and acetic acid for pH control (2,5 to 3,5). Several functional properties were measured to verify the reference of composition: mechanical properties (force and punction force), solubility in water, opacity and water vapor permeability ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations. / Doutorado / Doutor em Engenharia de Alimentos

Orientador: Sara Teresinha Olalla Saad / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-28T15:25:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leite_RobertaCampaniledeAlmeida_M.pdf: 2956595 bytes, checksum: 95ba2c0e0e8e28a5d1c7b0dc0252ede6 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: O presente estudo teve por objetivo a análise molecular de 28 pacientes não relacionados, atendidos no Hemocentro-UNICAMP, portadores de Esferocitose Hereditária (EsH) diagnosticada a partir de dados clínicos, esfregaço de sangue periférico e curva de fragilidade osmótica. Na maioria destes casos, a quantificação das proteínas de membrana das hemácias através da densitometria de gel de políacrilamida-SDS corado pelo azul de Coomassie, detectou deficiência de espectrina e/ou anquirina. O rastreamento de mutações foi feito através de SSCP e confirmadas por sequenciamento. Duas novas mutações foram encontradas em nossa população, ambas tratando-se de substituição de um nucleotídeo com alteração do aminoácido. A primeira no exon 9 (His -> Arg, CAC->CGC) e a segunda no exon 28 (lle->Thr ATC->ACC), totalizando uma frequência de 7.2% de mutações no gene da anquirina na população com Esferocitose Hereditária estudada. Foram também encontrados dois novos polimorfismos: no exon 6 (codon 197, CCG ->CCA) e no exon 29 (codon 1162, AGT -> AGC), além de outros polimorfismos já descritos, no exon 4 (codon 105, AAT->AAC), no exon 16 (codon 594, TCC -> TC A), e no exon 18 (codon 691, GGT -> GGC). Foi ainda realizada a análise da expressão de RNAm do gene da anquirina através de SSCP. Um paciente apresentou defeito na transcrição de um dos alelos, conforme evidenciado pela análise da repetição de nucleotídeos AC na região 3' não transcrita. Assim nossos dados indicam que, diferente da literatura, mutações no gene da anquirina podem não ser frequente em todas as populações / Abstract: In this study, we carried out the molecular analysis of 28 unrelated patients seen at the Hemocentro-UNICAMP with Hereditary Spherocytosis diagnosed by clinical data, peripheral blood smear and osmotic fragility test. Spectrin and/or ankyrin deficiency was detected in these patients, by densitometry of SDS-PAGE stained by Coomassie blue. By SSCP and DNA sequencing, two novel mutations were identified: In exon 9 (His ->Arg, CAC->CGC) and in exon 28 (lle-*Thr ATC->ACC) totalizing a frequency of 7,2% of ankyrin mutations in the Hereditary Spherocytosis population studied. Two novel polymorphisms were also observed: in exon 6 (codon 197,CCG ->CCA) and in exon 29 (codon 1162, AGT -" AGC), besides other polymorphisms already described in exon 4 (codon 105, AAT -> AAC), exon 16 (codon 594, TCC -> TCA), and exon 18 (codon 691, GGT -> GGC). Expression of ankyrin mRNA by SSCP-PCR of the AC repeat at the 3'ut region showed, in one patient, a defect in the transcription of one allele. Then, our data indicated that ankyrin defects might be not frequent in all populations / Mestrado / Mestre em Ciências Médicas