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Purificação e caracterização de uma proteina (SIII-3rp) do veneno de Bothrops alternatus que se liga ao fator de von Willebrand (vwF)

Novello, Jose Camillo, 1955- 04 August 1995 (has links)
Orientador: Benedito de Oliveira Filho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-20T12:44:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Novello_JoseCamillo_D.pdf: 3818188 bytes, checksum: 81e4ccf7c0fc89552e040ffafc7c0369 (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: Botrocetina é uma coaglutinina de plaqueta descrita no veneno de Bothrops jararaca. Foi sugerida como um substituto para a ristocetina como medidor da interação entre o complexo GPIb-IX e o fator de von Willebrand (vWF). (Read et aI., 1978). Botrocetina de uma e duas cadeias foram descritas no veneno de B. jararaca (Fujimura et al., 1991a). A Botrocetina de duas cadeias apresenta alta homologia na sua sequência de aminoácidos com a albogreguina-B (isolada do veneno de Trimeresus albolabris), que aglutina plaquetas diretamente por se ligar à GPIb- IX de membranas de plaqueta em um sítio próximo ou identico ao do vWF (Peng et aI., 1991). Neste trabalho descrevemos a purificação e isolamento de uma proteína (SIII-3rp) do veneno de Botltrops alternatus, através de filtração em gel, cromatografia de troca ionica e HPLC em cromatografia de fase reversa em coluna C18. A proteína purificada que inibia a ligação de ristocetina ao vWF, apresentava uma única banda (28 kDa) em condições não desnaturantes quando submetida a PAGE-SDS 12,5%; após redução com DTT 0,1M foi observada uma banda com 15kDa. Microsequenciamento automático da proteína SIII-3rp foi realizado em um sequenciador automático Applied Biosystems Modelo 477 com fase de pulso liquído. A sequência N-terminal obtida foi DCPSDWSPYEG, e apresentava uma homologia de 82% com os primeiros onze resíduos das cadeias a e b da botrocetina heterodimérica / Abstract: Botrocetin is a platelet coagglutin described in Bothrops jararaca venon suggested as a substitute for ristocetin as a mediator of the interaction between GPIb-IX complex and the von Willebrand factor (vWF) that lead to platelet agglutination (Read et al., 1978). A single chain and a two chain botrocetin were described in B. jararaca venon (Fujimura et al., 1991a). Two chain botrocetin is highly homologous in its aminoacid sequence to alboaggregin-B (isolated from the venom of Trimeresus albolabris) a protein which directly agglutinates platelets by binding to a site on platelet membrane GPIb- IX dose to or identical with the site for vWF binding (Peng et al., 1991) .lu this work we report the purification and isolation of a protein (SIII3rp) from Bothrops alternatus venon, through procedures of gel filtration, ion exchange chromatography and HPLC reverse phase chromatography with a C 18 column. The purified protein which inhibits the ristocetin binding to vWF, presented a sillgle band (28 kDa) in non denaturing conditions in 12,5% PAGESDS; after reduction with 0,1M DTT, a 15kDa band was observed. Automatic microsequencing of this proteill was performed on a Applied Biosystem 477 automatic model sequencer with liquid phase pulse. The N-termillal sequence obtained DCPSDWSPYEG presented 82% homology to the first elevell residues of the a and b chains of the heterodimeric botrocetin / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Ciências
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Caracterização e determinação de grupos titulaveis de proteinas e aminoacidos em solução concentrada de ureia atraves potenciometrica

Vasconcelos, Nadja Maria Sales de 15 July 2018 (has links)
Orientador : Oswaldo E.S. Godinho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-15T08:27:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vasconcelos_NadjaMariaSalesde_D.pdf: 11957133 bytes, checksum: 85507124497470f55e7f264788231fcc (MD5) Previous issue date: 1984 / Doutorado
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Preparação de um extrato proteico com sabor e aroma de camarão

Rivero Chacon, Cipriano Lazaro 15 July 2018 (has links)
Orientador: Ihiel Schuartz Schneider / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-15T14:42:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RiveroChacon_CiprianoLazaro_M.pdf: 2374730 bytes, checksum: e04774e5ef62d767ae1b1af7219cc232 (MD5) Previous issue date: 1976 / Resumo: Com a finalidade de aproveitamento de resíduos de camarão (cabeças de camarão, camarões mecanicamente danificados e camarões demasiadamente pequenos) para a obtenção de um produto para sopas instantâneas, desenvolveram-se um processo para a recuperação das proteínas e substâncias aromáticas deste material, utilizando enzimas proteolíticas e também enzimas autóctone presentes na própria matéria prima. O processo compreendeu a preparação dos citados resíduos, sua concentração e posterior secagem da porção solúvel. Paralelamente, realizaram-se análises químicas, físicas e microbiológicas da matéria-prima, tanto nas etapas intermediárias como no produto final. A seguir, foram elaboradas fórmulas de sopa e sua aceitabilidade avaliada através de testes sensoriais. Os resultados demonstraram que os tratamentos com enzimas comerciais conseguem solubilizar cerca de 60% da proteína disponível, ao passo que, por autólise, a solubilização ê cerca de 50% apenas. Quando o tratamento autolítico é realizado com auxílio de um agente soluhilizante do tipo do polifosfato de sódio, a recuperação das proteínas alcança nível semelhante àquele das enzimas comerciais. Os solúveis de resíduos de camarão, quando seco, em forma de flocos com amido e lipídeos, constituem base protéica com sabor e aroma de camarão e que pode ser usada no preparo de sopas e produtos do tipo de antepastos / Abstract: In order to make use of shrimp residues (heads, mechanically damaged shrimp and very small shrimp) to obtain a product for instantaneous soups, a process was developed for recovering the proteins and flavoring material by the use of photolytic enzymes in combination with the enzymes naturally present in the raw material. The processing included the preparation and digestion of the residues and the concentration and drying of the resulting soluble products. During the process, chemical, physical and microbiological analyses were made of the raw material, of the materials in the intermediate steps, and of the end product. Finally, different soup formulas were prepared and the acceptability was evaluated by sensory tests. The results showed that treatment with commercial enzymes solubilized nearly 60% of the available protein, while by autolysis; the recovery was only about 50%. When the autolytic treatment was done with the aid of an agent of the type of sodium polyphosphate, the recovery of proteins reached levels similar to that obtained with commercial enzymes. The dry shrimp solubles plus starch and lipids in the form of flakes constitute a flavorized protein base that can be used for preparation of soups and snacks with shrimp flavor / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos
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Estudos dos mecanismos envolvidos na precipitação das proteinas do soro de queijo com amido em reator de batelada

Pellegrino, Angela Maria Queiroz 04 May 1987 (has links)
Orientador: Maria Angela de Almeida Petenate / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-15T13:56:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pellegrino_AngelaMariaQueiroz_M.pdf: 4545249 bytes, checksum: eafe47c24edfcb2e657e29390328886c (MD5) Previous issue date: 1987 / Resumo: A cinética da floculação das proteínas e sólidos do soro de queijo foi estudada em reator de batelada. Amido de milho orto-fosfatado (grau de substituição~0,1) foi usado como agente précipitante para estudos da influência do pH e concentração de dispersões de amido na recuperação de proteína do soro de queijo, especialmente a-lactoglobulina e ß-lactoalbumina. Amidos de fontes naturais, tais como amido de mandioca, amido de milho puro (Maizena) e, também, amidos de milho fosfatados, como ortofosfatado monosó-dico (grau de substituição ~ 0,1) e tripolifosfatado (grau de substituição ~ 0,01) foram empregados para estudo de suas eficiências na recuperação de proteínas e remoção de sólidos da solução. As experiências foram conduzidas em um reator especialmente construído para manter condições de mistura uniforme. Experimentos de filtração foram feitos para que se tives¬se melhor idéia do tamanho da partícula amido-proteína formada durante o processo de floculação e, também, dos mecanismos que promo¬vem a agregação dos dois polímeros. Dos resultados obtidos concluiu-se que as condições ótimas de precipitação das proteínas do soro de'queijo se dão a um pH em torno de 2,0 e a uma concentração da dispersão de amido de milho ortofosfatado monosódico de 5,0 g/l. A agregação das partículas mostrou um caráter fortemente iônico com contribuição, na etapa de crescimento, dos mecanismos de adsorção e formação de pontes. A solubilidade do agente précipitante, seu poder de gelatinização e grau de fosfatação influíram de maneira significativa na floculaçâo das proteínas e sólidos do soro de queijo / Abstract: The kinetics of flocculation of proteins and solids from whey was studied in a stirred batch reactor. Orthophosphated corn starch (degree of substitution ~0,1) was taken as a precipitant agent-to investigate the influences of pH and concentration of starch in the reactor for the whey proteins recovery, specially ß-lactoglobulin and a-lactalbumin. Starches from other -natural sources such as tapioca starch, corn starch and also other phosphated corn starches like orthophosphated ( degree of substitution ~ 0,1) and tripolyphosphated (degree of substitution 0,01) were used in the analysis of their efficiency in the recovery of proteins and solids removal from the solution. The experiments were carried out in a reactor built to keep uniform mixing conditions. Filtration experiments were performed in order to get an insight of the size of the protein-starch particle formed during the flocculation process, and of the particle aggregation mechanism. From the data obtained we could conclude that the optimum conditions for protein precipitation occur at a pH around 2,0 and at a concentration of starch dispersion equal to 5,0 g/1. The particle aggregation was shown to have a strong ionic characteristic with a contribution of the adsorption and bridging mechanisms. The solubility of the precipitant agent, its degree of gelatinization and phosphorus contents influence in a significant way the flocculation of whey proteins and solids / Mestrado / Mestre em Engenharia de Alimentos
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Produção de enzimas lignoceluloliticas e proteinas unicelulares por chrysonilia sitophila TFB 27441

Rodriguez Gutierrez, Jaime Patricio 15 July 2018 (has links)
Orientador : Nelson Duran / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-15T15:06:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RodriguezGutierrez_JaimePatricio_M.pdf: 2042701 bytes, checksum: 7eb3cc45a72a9c78d0c55cd9ef489165 (MD5) Previous issue date: 1987 / Mestrado
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Otimização das condições para titulações potenciometricas de proteinas em soluções concentradas de ureia : titulações potenciometricas da proteina de Bence Jones (JJO)

Silva, Maria da Conceição 17 July 2018 (has links)
Orientador : Oswaldo E. S. Godinho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-17T01:40:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_MariadaConceicao_D.pdf: 5313253 bytes, checksum: 1397fd69cb29e61a2be066032e953d96 (MD5) Previous issue date: 1986 / Doutorado
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Titulação potenciometrica de grupo amino em aminoacidos e de residuos de lisina em proteinas

Rodrigues, Tereza Cristina 18 July 2018 (has links)
Orientador : Oswaldo E. S. Godinho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-18T06:10:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_TerezaCristina_M.pdf: 1964202 bytes, checksum: 158243207e8eab3718a6c50d0a3e7312 (MD5) Previous issue date: 1993 / Mestrado
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Identificação e caracterização parcial de albuminas e globulinas de tres cultivares brasileiros de Phascolus vulgaris

Chagas, Eliana Pereira 18 July 2018 (has links)
Orientador: Luiz Gonzaga Santoro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-18T08:47:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Chagas_ElianaPereira_M.pdf: 10551524 bytes, checksum: ad805eaf5ab8d6369340586c89502e6a (MD5) Previous issue date: 1993 / Resumo: Sementes de Phaseolus vulgaris de 3 cultivares (Aeté-3, Goiano precoce e Carioca) foram analisadas sob diferentes aspectos: concentração das diferentes frações proteicas de albuminas e de globulinas, padrões eletroforéticos, composição de aminoácidos, avaliação do pI das principais vicilinas e seus valores nutritivos. A principal proteína de reserva, a faseolina, ainda, foi analisada em seu grau de glicosilação, conteúdo de carboidratos e padrão de degradação enzimático in vitro. Vários métodos foram utilizados para extraçâo, separação, análise e dosagem das diferentes frações proteicas, tais como, precipitação com tampões, sais e pH diferenciais, diálise, cromatografias (exclusão, afinidade e líquida). eletroforese denaturante, densitometria, reações enzimáticas, colorimétricas e imunológicas. Aeté e Carioca demonstraram ser cultivares muito semelhantes, pois mostraram o mesmo padrão eletroforético de albuminas e globulinas e a mesma concentração destas proteínas, de lectinas e de leguminas. A faseolina desses cultivares apresentou uma subunidade maior e outras 3 menores na proporção de 5:2:1:2. Apresentaram sementes pequenas, sendo classificados como tipo "Sanilac". Eles são filogeneticamente mais próximos, com características bastante distintas de Goiano. Contudo, o conteúdo de Lys e carboidratos ligados à faseolina foi bem superior em Carioca em relação aos demais cultivares. Goiano, por sua vez, mostrou um padrão eletroforético bem diferente dos outros cultivares, onde a faseolina era constituída de 2 subunidades maiores e 2 menores, na proporção de 2:2:1:0,1, apresentando sementes grandes, por isso sendo classificado como tipo "Contender". Além disso, diferiu na concentraçâo de lectinas e leguminas. Apresentou um maior conteúdo de carboidratos que Aeté e maior quantidade de Met e Cys que os demais cultivares. Todas as subunidades da faseolina e as leguminas dos 3 cultivares mostraram ser glicosiladas, embora o grau de glicosilaçâo tenha se distribuído indistintamente. Quanto à degradação, semelhante também nos 3 cultivares, verificou-se que a faseolina foi prontamente hidrolisada pela tripsina, que agiu na porção central das subunidades, formando polipeptídeos com M.M. ao redor de 20 kg/mol. A subunidade Q' pareceu ser a primeira a ser quebrada e, em Goiano, ela provavelmente também foi degradada no C-terminal. A faseolina de Goiano foi mais resistente ao ataque pela tripsina do que aquelas de Aeté e Carioca. Um aspecto comum entre os 3 cultivares, principalmente no que diz respeito à faseolina, foi a verificação da presença de determinantes antigênicos comuns, pois o anticorpo produzido contra a fração de proteínas totais de Goiano reconheceu aquelas de Aeté e Carioca. Há características que indicam que Goiano seria o cultivar potencialmente mais nutritivo, como o alto conteúdo de aminoácidos sulfurados e de Lys e a menor concentração de compostos hemoaglutinantes / Abstract: Seeds of Phaseolus vulgaris cv. Aeté-3, Coiano precoce and Carioca were analysed in different aspects: contents of the different protein fractions of albumins and globulins, electrophoretic banding patterns, amino acid composition, evaluation of the range of precipitaiton of major vicilins, and their nutritional values. The degree of glycosilation, carboydrate content and in vitro enzymatic hydrolysis patterns were also analysed for faseolin. Several methods were used for the extraction, separation and analysis of the different protein fractions, e.g. precipitation using buffers; salts and differencial pH; dialysis; exclusion, affinity and liquid chromatography; SDS-PACE; densitometry; enzymatic, colorimetric and immunological reactions. The cultivars Aeté and Carioca were found to be similar in electrophoretic patterns and contents of albumins, globulins, lectins and legumins. The patterns of faseolin of these cultivars were identical, having one major and three minor bands in a proportion of 5:2: 1:2. They presented small seeds and were classified as "Sanilac". They are phylogeneticaly very similar but unlike Coiano. However, Lys and carboydrates of faseolin were higher in Carioca than the others. Coiano showed a very different electrophoretic pattern of faseolin, having two major bands in a proportion of 2:2:1:0,1, with bigger seeds than the others. Coiano had a pattern similar to "Contender". It was also different in lectin and legumin contents. It presented a higher carboydrate content than Aeté and higher Met and Cys levels than the others. All subunits of faseolin and the protein like-Iegumin of Aeté, Coiano and Carioca were glycosylated but the degree of glycosilation was indistinct. Faseolin of the three cultivars was hydrolysated by trypsin that acts in the central portion of the molecule, producing polypeptides with M / Mestrado / Mestre em Biologia Vegetal
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Exercicio fisico associado a diferentes teores de proteina na dieta : estudo das alterações bioquimicas e corporais em ratos adultos

Parreira, Marcelina Rodrigues 18 July 2018 (has links)
Orientador : Antonio Celso Ramalho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-18T09:57:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Parreira_MarcelinaRodrigues_M.pdf: 5232036 bytes, checksum: 796580b3afeba179d5649cf2f032c76a (MD5) Previous issue date: 1993 / Resumo:O presente trabalho foi realizado com o objetivo de estudar a influência do conteúdo protéico da dieta associado ao exercício físico intenso, sobre o metabolismo protéico de ratos adultos. Ratos Wistar machos (90 dias de idade), treinados em esteira rolante e controles (sedentários), foram alimentados com dietas semipurificadas contendo 6% (hipoprotéica), 25% (normoprotéica) e 35% (hiperprotéica)de caseína. Em nossas condições experimentais, verificou-se que os animais do grupo hipoprotéico apresentaram reduções significativas do ganho de peso corporal, do balanço nitrogenado, da eficiência alimentar e da proteína hepática em relação aos animais normoprotéicos. Estas reduções foram mais acentuadas nos animais treinados. Ratos do grupo hiperprotéico mostraram níveis mais elevados de eficiência alimentar, balanço nitrogenado e ganho de peso corporal em relação aos animais normoprotéicos. Os animais submetidos a dieta normoprotéica apresentaram parâmetros bioquímicos e corporais constantes, ocorrendo no entanto diminuição significativa do ganho de peso corporal e eficiência alimentar nos ratos treinados. O exercício físico associado a diferentes dietas promoveu, em todos os grupos experimentais, discreta elevação dos teores de água corporal e massa corpórea magra e diminuiria da gordura corporal, bem como, redução significativa do ganho de peso corporal, eficiência alimentar e proteína hepática em relação aos animais sedentários. Baseados nesses resultados, concluímos que dietas com diferentes níveis de proteína promoveram alterações significativas no metabolismo protéico de ratos adultos. Essas alterações foram mais acentuadas nos animais submetidos a dieta hipoprotéica / Abstract: The objetive of this research was to study the influence of dietary protein content associated with intense physical exercise, on the protein metabolism of adult rats. Hale Wistar rats (90 days old), trained on a treadmill and controls (sedentary) were fed on semipurified diets containing 6% (hyp O proteic), 25% (normoproteic) and 35% (hyperproteic) casein. Under the experimental conditions used, it was shown that the animals ln the hypoproteic group presented significant reductions in body weight gain, N2 balance, alimentary efficiency and Iiver protein in relation of the normoproteic animals. These reductions were more accentuated in the trained animals. The hyperproteic group of rats showed higher Ievels of alimentary efficiency, N2 balance and body weight gain in relation to the nOt-moprot eic animaIs. The animaIs on a normoproteic diet presented constant biochemical parameters although there was a significant reduction in body weight gain and alimentary efficiency in the trained animals. Physical exercise associated with different diets promoted in all experimental groups slight increases in body water content and lean body mass and reduction in body fat content, as well as a significant reduction in body weight gain/alimentary efficiency and liver protein in relation of the sedentary animals. Basead on these results it was concluded that diets with different levels of protein resulted in significant alterations in the protein metabolism of adult rats. These alterations were more pronounced in animals on a hypoproteic diet / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Ciências Biológicas
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Ultrafiltração de soro doce de queijo Minas Frescal : efeito de pre-tratamento do soro no desempenho da membrana e na composição de solubilidade do concentrado proteico de soro

Viotto, Walkíria Hanada, 1956- 12 November 1993 (has links)
Orientador: Salvador Massaguer Roig / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-18T16:34:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Viotto_WalkiriaHanada_D.pdf: 7469524 bytes, checksum: 5319e915f09ddeca6cb8be4dcc71c40a (MD5) Previous issue date: 1993 / Resumo: Soro de queijo Minas Frescal foi submetido a várias condições de pré-tratamentos e concentrado por ultrafíltração em membrana de fibras paralelas. Foi estudado o efeito combinado dos pré-tratamentos clarificação, tratamento térmico e ajuste do pH do soro, sobre o desempenho do processo de ultrafiltração, particularmente a influência sobre fluxo de permeado, retenção de componentes pela membrana e rendimento protéico. Amostras de soro original, soro tratado, retentado e permeado obtidos a fatores de concentração volumétrico de 2, 5, 10 e 15 foram analisadas quanto a composição e quanto a solubilidade protéica a pH 3, pH 4,6 e pH 7. O acompanhamento das mudanças de composição, em todas as etapas do processo permitiu verificar o efeito do pré-tratamento do soro sobre a composição final do concentrado protéico de soro e a perda de proteína no permeado, que variaram em função das condições de pré-tratamento. As análises de solubilidade protéica a pH 4,6 mostraram que a pasteurização do concentrado protéico de soro foi a etapa que causou maior desnaturação protéica, resultando na diminuição da solubilidade das proteínas. Houve declínio do fluxo de permeado, diminuição do rendi- mento de proteína e aumento da retenção dos componentes com o aumento do fator de concentração volumétrico e do tempo de UF. A clarificação não exerceu nenhum efeito sobre a taxa de permeação durante a ultrafiltração, mas o aumento do pH de 5,6 para 6,5 e o aumento da intensidade do tratamento térmico provocaram o aumento do fluxo de permeado. A retenção dos componentes variou em função das condições de tratamento do soro, indicando que a retenção foi dependente do pré- tratamento e não somente uma característica da membrana. Das condições estudadas, a utilização de tratamento térmico a 68 °C/1 minuto e o ajuste do pH do soro a 5,6 favoreceram a obtenção de rendimentos de proteína mais elevados / Abstract: Minas Frescal cheese whey was submitted to a combination of various pre-treatments and concentration by ultrafiltration in hollow fiber membrane. The combined effect of the pre-treatments as clarification, heat treatment and adjustment of whey pH, on performance of UF was investigated, particularly the influence on permeate flux, components retention by membrane and protein yield. Samples of whey, treated whey, retentate and permeate obtained with different volumetric concentration factor (2, 5, 10 and 15) were characterized by their composition and protein solubi- lity at pH 3, pH 4.6 and pH 7. Following the observed changes of composition in all stages of processing permitted to verify the effect of whey pre-treatment on final composition of whey protein concentrate and on the protein lost in the permeate, which depend on pre-treatment conditions. Analysis of protein solubility at pH 4.6 showed that pasteurization of whey protein concentrate was the step responsible for major protein denaturation, resulting in reduction of protein solubility. As the volumetric concentration factor and time of ultra- filtration increased, there were a decline of permeate flux, increase of components retention and reduction of protein yield. The clarification did not affect permeation rate during ultrafiltration, but the increase of pH 5.6 to 6.5 and the increase of heat treatment intensity improved the permeate flux. The retention of components varied with whey pre-treatments conditions, indicating that retention was dependent of pre-treatment and not only a membrane characteristic. Within the conditions studied, the utilization of heat treatment at 6S°C/1 minute and the adjustment of whey pH to 5.6 favoured higher protein yields / Doutorado / Doutor em Tecnologia de Alimentos

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