Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Programa Multiinstitucional de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, Convênio Rede Centro-Oeste (UnB/UFG/UFMS), 2006. / Submitted by samara castro (sammy_roberta7@hotmail.com) on 2010-11-20T23:55:01Z No. of bitstreams: 1 2006-Sandra Maria Silveira Denadai.pdf: 2780495 bytes, checksum: 6e6795ead415472078a2b46dc593c6e0 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-12-03T22:18:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006-Sandra Maria Silveira Denadai.pdf: 2780495 bytes, checksum: 6e6795ead415472078a2b46dc593c6e0 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-12-03T22:18:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006-Sandra Maria Silveira Denadai.pdf: 2780495 bytes, checksum: 6e6795ead415472078a2b46dc593c6e0 (MD5) / As proteínas devem estar presentes na alimentação em quantidade adequada. Além do aspecto quantitativo deve-se levar em conta o aspecto qualitativo, isto é, seu valor nutricional, que depende de sua composição, digestibilidade, biodisponibilidade de aminoácidos essenciais, ausência de toxicidade e de fatores antinutricionais. Neste estudo amêndoas de sapucaia (Lecythis pisonis Camb.) foram analisadas para se determinar a sua composição centesimal, fatores antinutricionais, e o teor e o escore químico (EQ) de aminoácidos, digestibilidade in vitro e in vivo e os índices de aproveitamento biológico (Balanço Nitrogenado-BN, Coeficiente de Eficiência Alimentar-CEA, Razão de Eficiência Protéica-PER e Valor Biológico-VB) de suas proteínas, para se avaliar seu potencial como fonte alternativa de proteínas. As amêndoas apresentaram teores de aminoácidos, principalmente sulfurados (metionina + cisteína – 105 mg/g), acima dos recomendados, nenhum aminoácido limitante foi encontrado. O teor de ácidos graxos insaturados (ácido linoléico - 42,5%), foi maior que os recomendados e baixos teores de minerais e fibras foram observados. No presente estudo, a presença de lectinas ou inibidores de proteinases, quando detectados, apresentaram baixos níveis. A digestibilidade in vitro de globulinas, nativas ou aquecidas, por proteinases digestivas de mamíferos foi realizada utilizando-se tripsina + quimotripsina + peptidase, obtendo-se valores aproximados de 71,5% e 73,5%, respectivamente. Os indicadores de aproveitamento biológico, a digestibilidade verdadeira e a digestibilidade protéica corrigida escore de aminoácidos- PDCAAS de suas proteínas, foram estudados utilizando-se ratos e se apresentaram semelhantes aos índices da caseína. Estes resultados sugerem que as amêndoas de sapucaia podem ser utilizadas como fonte alternativa de proteína de bom valor nutricional e de lipídeos, por humanos e animais. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Proteins must be present in diet, in appropriate amounts. Besides the quantitative aspect, the qualitative aspect should be taken into account, i.e. its nutritional value, which will depend on its composition, digestibility, bioavailability of essential amino acids, absence of toxicity, and of antinutritional factors. In this study sapucaia nuts (Lecythis pisonis Camb.) were analyzed to determine its proximate composition, antinutritional factors and the amino acid profile and score, in vitro and in vivo digestibility and biological utilization indices (Nitrogen Balance-NB, Alimentary Efficiency Coefficient-AEC, Protein Efficiency Ratio-PER and Biological Value-BV) of its proteins, in order to evaluate their potential as an alternative source of proteins. Nuts presented amino acids profile, principally sulfurized (methionine + cystein - 105 mg/g) higher than the recommended, no limiting amino acids were found. Content unsaturated fatty acids (linoleic acid – 42.5%) were higher than the recommended and low amounts of minerals and fiber were observed. In the present study, lectins or proteinases inhibitors, when detected, showed low levels. In vitro digestibility of native and heated globulins by mammalian digestive proteinases were carried out utilizing trypsin + chymotrypisin + peptidase, with resulting values of approximately 71.5% and 73.5%, respectively. Biological utilization indices, the true digestibility and protein digestibility-corrected amino acid score of the proteins were analyzed utilizing rats and presented similar indices of the casein. Taken together, the results suggest that sapucaia nuts may provide alternative source of good nutritional value protein and fat, for use as a potential nutritional agent by humans and animals.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-10-15T11:14:04Z No. of bitstreams: 1 2013_MarinaFirminodaSilva.pdf: 1446801 bytes, checksum: c661becf28c2d1ce39c45b876e5cdb3e (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-10-15T12:13:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_MarinaFirminodaSilva.pdf: 1446801 bytes, checksum: c661becf28c2d1ce39c45b876e5cdb3e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-15T12:13:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_MarinaFirminodaSilva.pdf: 1446801 bytes, checksum: c661becf28c2d1ce39c45b876e5cdb3e (MD5) / A febre é definida como o aumento da temperatura corporal que ocorre como parte da resposta de fase aguda desencadeada após a invasão de um organismo por agentes estranhos. O LPS (lipopolissacarídeo) é um potente indutor de febre, frequentemente utilizado em estudos sobre respostas inflamatórias e febris. Alguns trabalhos têm sugerido o envolvimento de vias de sinalização dependentes de proteína quinase A (PKA) e proteína quinase C (PKC) no desenvolvimento da febre. Neste estudo, investigamos o efeito de inibidores de PKA (H-89) e PKC (celeritrina) sobre a resposta febril induzida por LPS. Analisamos ainda alterações da expressão e atividade destas quinases em resposta aos diferentes tratamentos, 3 e 6 h após a injeção do estímulo pirogênico. Os resultados demonstraram que celeritrina (3 μg/rato) e H-89 (10 μg/rato) reduziram a resposta febril induzida pela injeção iv de LPS (5 μg/Kg) em 36 % e 33,1 %, respectivamente. A administração conjunta de celeritrina e H-89 também reduziu a resposta febril induzida por LPS; entretanto, o efeito inibitório verificado (31,2 %) não foi maior do que o observado após a administração isolada de cada droga. Após os experimentos farmacológicos, os animais foram eutanasiados e tiveram seus hipotálamos dissecados para as análises de expressão e atividade. A análise por western blotting não foi capaz de detectar alterações da expressão de PKCε 3 h após a injeção do LPS, tampouco de PKA nos dois tempos analisados. A expressão de PKCε 6 h após a injeção do estímulo pirogênico apresentou-se aumentada nos animais tratados com H-89, sugerindo que, na ausência da ativação de PKA, vias dependentes de PKCε sejam ativadas como mecanismo compensatório. A análise da atividade foi realizada por meio de kits comerciais de ELISA para medir a fosforilação de um substrato realizada por quinases. Não foram encontradas mudanças significativas nos padrões de atividade para nenhuma das proteínas testadas, o que pode ser devido à baixa especificidade do método, visto que o substrato utilizado no ensaio pode ser fosforilado por todas as isoformas de PKA e PKC. Os dados desse trabalho sugerem que vias de sinalização dependentes de PKA e PKC estejam envolvidas na resposta febril induzida por LPS, porém, métodos mais específicos para análise destas enzimas são necessários para elucidar os mecanismos moleculares envolvidos. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Fever is defined as the increase in body temperature that occurs as a component of the acute phase response triggered after invasion of pathogens in the body. Lipopolysaccharide (LPS) is a potent inducer of fever, often used in studies assessing the inflammatory and febrile responses. Some studies have suggested the involvement of protein kinase A (PKA) and protein kinase C (PKC)-dependent signaling pathways in the development of fever. We investigated the effect of PKA and PKC inhibitors, H-89 and celeritrin respectively, on the febrile response induced by LPS. We also analyzed changes in the expression and activity of these kinases in response to different treatments, 3 and 6 h after the pyrogenic stimulus injection. The results showed that celeritrin (3 mg/rat) and H-89 (10 mg/rat) reduced the febrile response induced by LPS (5 mg/kg, iv) in 36% and 33.1%, respectively. Co-administration of celeritrin and H-89 also reduced the LPS-induced febrile response; however, the inhibitory effect observed (31.2%) was not more effective than that observed after administration of each drug separately. After pharmacological experiments, animals were euthanized, and their hypothalami were dissected for kinases expression and activity analyses. Western blot analyses did not exhibit changes in neither PKCε expression 3 h after LPS injection nor PKA levels in both periods investigated. The expression of PKCε 6 h after injection of pyrogenic stimulus was increased in H-89 treated animals, suggesting that PKCε-dependent pathways are activated as a compensatory mechanism in the absence of PKA activation. The enzymatic activity analysis was performed using commercial ELISA kits specific for measuring substrate phosphorylation mediated by kinases. There were no significant changes in the patterns of activity for any tested enzymes, which may be due to low specificity of the method since the substrates employed in the assays can be phosphorylated by all PKC or PKA isoforms. Data from the present study suggest that PKA and PKC-dependent signaling pathways may be involved in the febrile response induced by LPS, although more specific methods are needed to analyze such enzimes in order to elucidate their involvement in fever molecular mechanisms.

Orientador : Paulo Arruda / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T12:02:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_TiagoCampos_M.pdf: 5014451 bytes, checksum: d2047dfc11426a4b6bf79cbe548a81ec (MD5) Previous issue date: 2002 / Mestrado

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Pós-graduação em Ciências Médicas, 2015. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-05-14T16:04:32Z No. of bitstreams: 1 2015_EduardoAugustoRosa.pdf: 17236503 bytes, checksum: bbfab38745a25fee1717ad180d847582 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-05-14T20:42:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_EduardoAugustoRosa.pdf: 17236503 bytes, checksum: bbfab38745a25fee1717ad180d847582 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-14T20:42:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_EduardoAugustoRosa.pdf: 17236503 bytes, checksum: bbfab38745a25fee1717ad180d847582 (MD5) / Introdução: O câncer de boca está entre os dez tipos de câncer mais comuns em todo o mundo. Lesões precursoras como leucoplasia e líquen plano em geral precedem o surgimento do tumor invasivo. Nesse contexto, a busca por marcadores biológicos para o diagnóstico e prognóstico dessas lesões é extremamente relevante. Objetivo: Avaliar a expressão das proteínas P16, BUB3, SOX4 e Ki67 no líquen plano oral (LPO) e comparar os resultados com a expressão dos mesmos anticorpos no líquen plano cutâneo (LPC), na displasia oral (DO) e na hiperplasia fibrosa oral (HFO). Materiais e Métodos: Conduziu-se um estudo retrospectivo, que incluiu 120 blocos de tecido parafinados, distribuídos igualmente em LPO, DO, HFO e LPC. A partir desses blocos foi realizada reação imunoistoquímica com os anticorpos citados em cada um dos grupos. A expressão dos anticorpos foi avaliada por um índice de positividade (IP) determinado após a contagem de 500 células de cada amostra. Resultados: Verificou-se que o IP (mediana) de P16 em LPC foi o mais elevado (86,59), seguido pelo LPO (20,65), HFO (11,8) e DO (7,85) (p <0,001). A comparação de pares post-hoc mostrou diferença estatisticamente significativa entre LPO / LPC, LPO / DO. O IP para BUB3 também foi maior no LPC (83,2), seguido por LPO (80), HFO (77) e DO (71,4) (p = 0,04). O maior IP para SOX4 foi encontrado em LPC (86,8) seguido por HFO (82,3), DO (72,4) e LPO (66,1) (p <0,001). Foi verificada diferença estatísticamente significativa entre LPO / LPC. O Ki67 apresentou expressão maior em DO (14,4) seguido de LPO (11,6), LPC (8,24) e HFO (5,5) (P <0,001). O teste post hoc mostrou diferença significativa entre LPO / HFO, LPC / DO e DO / HFO. Conclusão: Os resultados aqui apresentados sugerem que o LPO tem um potencial intermediário de transformação maligna. O P16 não se comportou como um marcador confiável de transformação maligna das lesões orais. A expressão de BUB3 e SOX4 devem ser melhor esclarecidas, mas talvez possam atuar como fatores de proteção. Mais estudos devem ser realizados envolvendo esses marcadores. / Background: Oral cancer is one of the ten most common types of cancer worldwide. In this context, the search for diagnosis and prognosis biological markers is extremely relevant. Objective: To evaluate the expression of the antibodies P16, BUB3, SOX4 and Ki67 in oral lichen planus (OLP) and compare its results with their expression among cutaneous lichen planus (CLP), oral dysplasia (OD) and oral fibrous hyperplasia (OFH). Materials and methods: This is a retrospective study design, which included 120 formalin fixed paraffin embedded tissue blocks of OLP, OD, OFH and CLP, equally distributed. Results: It was verified that positive index (median) of P16 in CLP was the highest one (86.59), followed by OLP (20.65), OFH (11.8) and OD (7.85) (p <0.001). Post-hoc pairwise comparisons showed significant statistical differences between OLP/CLP, OLP/OD, CLP/OD and CLP/OFH. Positive index for BUB3 was also higher in CLP (83.2) followed by OLP (80), OFH (77) and OD (71.4) (p = 0.04). The highest SOX4 index was found in CLP (86.8) followed by OFH (82.3), OD (72.4) and OLP (66.1) (p < 0.001). Significant statistical difference was verified between LPO/LPC and LPC/OD. Ki67 was higher in OD (14.4) followed by OLP (11.6), CLP (8.24) and OFH (5.5) (P < 0.001). Post hoc test showed significant difference between OLP/OFH, CLP/OD and OD/OFH. Conclusion: The results presented here suggest that OLP has an intermediate malignant potential. P16 can not be considered a reliable marker for malignant transformation in oral lesions. The expression of BUB3 and SOX4 should be further clarified, but they may act as protect factors. More studies should be performed envolving these markers.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, 2009. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2010-03-10T18:47:46Z No. of bitstreams: 1 2009_DanielLimaLogrado.pdf: 4716490 bytes, checksum: 5cc801a6d076dff66b230bb9caddb891 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-05-11T18:33:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_DanielLimaLogrado.pdf: 4716490 bytes, checksum: 5cc801a6d076dff66b230bb9caddb891 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-11T18:33:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_DanielLimaLogrado.pdf: 4716490 bytes, checksum: 5cc801a6d076dff66b230bb9caddb891 (MD5) Previous issue date: 2009-06 / Visando o desenvolvimento de uma metodologia analítica rápida e econômica orientada para estudos de sistemas moleculares formados por proteínas, o presente trabalho teve como objetivo primordial a associação entre duas poderosas técnicas para análise de proteínas, a microscopia de força atômica (AFM) e a espectrometria de massa (MS). Tendo como perspectiva principal para a associação AFM-MS o estudo do interatoma. A microscopia de força atômica é uma importante técnica para análise de sistemas supramoleculares, dentre outras informações, permite à obtenção da topografia desses sistemas possibilitando que as dimensões das estruturas que o compõe sejam mensuradas, sendo assim, essa ferramenta de análise fornece informações importantes no que diz respeito a estruturas quaternárias formadas por proteínas, sugerindo como as subunidades interagem para formação de complexos moleculares. A determinação precisa da massa molecular por espectrometria de massa possibilita a solução de diversos problemas relacionados às questões bioquímicas, como a determinação direta das estruturas primária e quaternária de proteínas, determinação de modificações pós traducionais, identificação de proteínas e etc. Graças a sua versatilidade e sensibilidade, a espectrometria de massa vem se destacando como ferramenta indispensável para a análise de proteínas. O presente trabalho propõe a associação da microscopia de força atômica com a espectrometria de massa objetivando análises rápidas nas quais uma mesma amostra é submetida às duas ferramentas analíticas, identificando, também, em quais aspectos essas duas técnicas se complementam na investigação de sistemas protéicos. Nos experimentos, proteínas adsorvidas em superfície de mica, suporte frequentemente utilizado nas análises por AFM, tiveram sua morfologia estudada por AFM e, em seguida, foram analisadas por MALDI-MS na mesma superfície, adaptada a placa do MALDI por meio de uma fita dupla face. Em outras circunstâncias, a amostra adsorvida em mica foi submetida a reações para caracterização e identificação das proteínas por MALDI-MS. __________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Aiming the development of analytical methodology oriented for rapid analysis of protein supramolecular systems, we present in this work the association between two powerful techniques for protein analysis: atomic force microscopy (AFM) and mass spectrometry (MS). The AFM-MS prospects are mainly directed to the interactome study. Atomic force microscopy is a powerful analytical technique for supramolecular systems. Among other information, it provides the system topography and enables the measurement of subunits dimensions. So, it deals about an analytical tool which provides important information regarding the quaternary protein structure, giving a track about how subunits interact to each other in molecular complexes formation. The precise molecular weight determination by mass spectrometry allows the solution of various problems related to biochemical issues, such as determining proteins primary and quaternary structure, characterization of their post-translational modifications, proteins identification and so on. Thanks to its versatility and sensitivity, mass spectrometry has been highlighting as an indispensable analytical tool for protein analysis. This work suggests the association of atomic force microscope and mass spectrometry for rapid analysis of a single sample. We identified the aspects in which these techniques are complementary for investigation of protein systems. For the first time, proteins adsorbed onto mica surface (support often used in AFM analysis) were identified by MALDI-MS, after having their topography examined by AFM. Samples adsorbed on mica were also subjected to reactions for protein characterization and identification by MALDI-MS.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2009. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-03-31T16:06:23Z No. of bitstreams: 1 2009_LiudyGarciaHernandez.pdf: 2782788 bytes, checksum: a3b8e9e786e30fd2a56505419bfa34d2 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-05-12T14:29:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_LiudyGarciaHernandez.pdf: 2782788 bytes, checksum: a3b8e9e786e30fd2a56505419bfa34d2 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-12T14:29:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_LiudyGarciaHernandez.pdf: 2782788 bytes, checksum: a3b8e9e786e30fd2a56505419bfa34d2 (MD5) Previous issue date: 2009-02 / A abelha da espécie Apis mellifera é um inseto social que apresenta comportamentos complexos e integrados. As mudanças no comportamento ocorrem a partir da diferenciação ontogenética e comportamental de nutridora para campeira. Neste trabalho, proteomas do cérebro das abelhas nutridora e campeira foram comparados através de eletroforese bidimensional em gel dentro da faixa de pH de 4-7 e análise por MudPIT, a fim de encontrar proteínas relacionadas ao desenvolvimento ontogenético e comportamental. Vinte proteínas diferencialmente expressas foram detectadas por análise computacional das imagens dos géis e identificadas por PMF utilizando espectrometria de massas MALDI-TOF. O cérebro de nutridora apresentou alta expressão das proteínas principais da geléia real (MRJP1, MRJP2 e MRJP7), que estão relacionadas com a determinação de castas e funções sociais durante a diferenciação das larvas. Análise por imunocitoquímica e microscopia eletrônica revelaram MRJP1 no citoplasma de células cerebrais, aparentemente ao longo de filamentos do citoesqueleto, nos lobo antenal, lobo óptico e corpos cogumelares. MRJP1 também foi encontrada em espaços intercelulares entre células dos corpos cogumelares, indicando que é uma proteína secretada. Outras proteínas implicadas na síntese protéica e funções putativas no sistema olfativo também foram mais expressas em cérebro de nutridora. Em campeiras experientes foram mais expressas proteínas envolvidas no metabolismo energético, transportes de ferro e metabolismo de neurotransmissores. Expandindo-se a análise proteômica pela estratégia de MudPIT, o primeiro mapeamento em grande escala do proteoma cerebral da abelha operária da espécie A. mellifera foi alcançado. Identificou-se um total de 2.742 proteínas a partir de amostra de cérebros de abelha operárias, nutridora e campeira, sendo que 17% das proteínas totais foram encontradas como diferencialmente expressas por amostragem estatística de contagem espectral e teste-G. A nutridora apresentou expressão aumentada no cérebro de proteínas envolvidas na tradução, estrutura ribossomal e biogênese (14,5%), consideravelmente maior que a operaria campeira (1,8%). Em campeiras as proteínas envolvidas na produção e conversão de energia foram muito abundantes, mostrando ampla diferença neste conjunto de proteínas (17%) em relação à operaria nutridora (0,6%). Ambas as metodologias foram coincidentes nos resultados de categorização e expressão diferencial de nove proteínas. Em experimentos relacionados à aprendizagem operante, foram comparados mapas proteômicos e fosfoproteômicos por 2-DE de extratos cerebrais da abelha mandaçaia (Melípona quadrifasciata), identificando-se uma isoforma da proteína arginina quinase como mais expressa no cérebro das abelhas treinadas por condicionamento operante. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The honey bee (Apis mellifera) is a social insect that shows complex and integrated behaviors. For instance, A. mellifera behavior changes upon the ontogenetic differentiation from nurse to forager worker subcastes. In this work, brain proteomes of nurses and foragers were compared by two-dimensional gel electrophoresis (2DE) within pH range of 47 and MudPIT analysis in order to find proteins related to such a ontogenetic and behavioral development. Twenty differentially expressed proteins were detected by gel image computational analysis, and identified by peptide mass fingerprinting using MALDI-TOF mass spectrometry. Nurse brain showed increased expression of major royal jelly proteins (MRJP1, MRJP2 and MRJP7), which are related to determination of castes during the honey bee larvae differentiation. Immunocytochemistry and electron microscopy showed that MRJP1 was localized in the cytoplasm of brain cells, seemingly along filaments of the cytoskeleton, in the antennal lobe, optical lobe and mushroom body. MRJP1 was also found in intercellular spaces between cells in mushrooms bodies, indicating that it is a secreted protein. Other proteins implicated in protein synthesis and putative functions in the olfactory system were also up-regulated in the nurse brain. Experienced foragers overexpressed proteins possibly involved in energy production, iron binding, metabolic signalling and neurotransmitter metabolism. As an expansion of the proteomics analysis, large-scale mapping of worker honey bee brain proteome was achieved by MudPIT analysis. An excess of 2742 proteins were identified from forager and nurse honey bee brain samples, with 17% of total proteins found to be differentially expressed by spectral count sampling statistics and G-test. Nurse brain showed increased expression of proteins implicated in translation, ribosomal structure and biogenesis (14.5 %), in comparison with forager (1.8%). Experienced foragers overexpressed proteins involved in energy production and conversion, showing extensive difference in this set of proteins (17 %) in relation to nurse subcaste (0.6%). Both methodologies (MudPIT and 2DE) provided coincident results of categorization and differential expression of nine proteins. Regarding operant learning experiments, proteomic and phosphoproteomic 2- DE maps of brain extracts from mandaçaia bee (Melipona quadrifasciata) were compared. A single isoform of arginine kinase was identified as over expressed in the brain of bees trained by operant conditioning.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2011. / Submitted by Max Lee da Silva (bruce1415@hotmail.com) on 2011-06-28T13:30:52Z No. of bitstreams: 1 2011_LizMariaBatistaTeles.pdf: 2779966 bytes, checksum: 24f2d49d4772a40872853395bd4de504 (MD5) / Approved for entry into archive by Guilherme Lourenço Machado(gui.admin@gmail.com) on 2011-06-30T15:37:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_LizMariaBatistaTeles.pdf: 2779966 bytes, checksum: 24f2d49d4772a40872853395bd4de504 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-06-30T15:37:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_LizMariaBatistaTeles.pdf: 2779966 bytes, checksum: 24f2d49d4772a40872853395bd4de504 (MD5) / Os neutrófilos são os leucócitos mais abundantes no sangue periférico humano, representando a principal linha de defesa contra bactérias, vírus e protozoários. Durante o processo de ativação, essas células podem liberar ânion superóxido (O2 •-) e proteases oriundas de seus grânulos para o meio extracelular, promovendo dano tecidual. Em politraumatismo, o processo inflamatório pode tornar-se disseminado e resultar na síndrome da resposta inflamatória sistêmica (SIRS). O progresso dessa situação induz o desenvolvimento de síndrome da angústia respiratória aguda (ARDS) e falência de múltiplos órgãos (MOF). Devido à complexidade do sistema analisado, que envolve muitas e diferentes vias metabólicas de estimulação / ativação com diversos pontos de interação, a abordagem proteômica é considerada uma ferramenta apropriada para estudar as funções neutrofílicas. Este trabalho apresenta os resultados obtidos a partir da análise comparativa entre os mapas proteômicos de polimorfonucleares (PMN) humanos quiescentes e ativados por trauma grave. São pesquisados marcadores moleculares que possam estar envolvidos nos estados mórbidos observados após politraumatismo. Extratos proteicos de neutrófilos de 3 doadores hígidos e de 3 pacientes politraumatizados foram analisados, como triplicatas biológicas e experimentais, em dois intervalos de eletroforese bidimensional: pH 6-11 e 4-7. O processo comparativo da abordagem alcalina revelou 3 spots diferencialmente expressos, sendo que os três aumentaram sua expressão após ativação devido a trauma grave. Quanto ao perfil ácido, 114 spots foram diferencialmente expressos, onde 27 aumentaram e 87 diminuíram sua expressão devido à ativação por politraumatismo. Foram alcançadas identificações de algumas proteínas potencialmente relacionadas com quadros inflamatórios após trauma grave, como Zfyve19, MAOB e proteína semelhante à albumina, descritas pela primeira vez em polimorfonucleares. A partir do entendimento das funções bioquímicas dessas proteínas, espera-se que exames laboratoriais e terapias clínicas específicos possam ser desenvolvidos. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Polymorphonuclear leukocytes (PMN) or neutrophils are thought to play divergent roles in critically injured patients. In one fashion, they are the first line of defense against bacterial, viral and protozoan infections through phagocytosis and release of reactive oxygen species (ROS). However, it has become apparent that inappropriate activation of these cells and release of ROS and tissue degrading enzymes from their granules contributes to systemic inflammatory response syndrome (SIRS), acute respiratory distress syndrome (ARDS) and multiple organ failure (MOF). Neutrophil protein extracts from three volunteer normal donors and from three major torso trauma patients were submitted, as technical and biological triplicates, to two ranges of bidimensional electrophoresis: pH 6-11 and 4-7. Alkaline and acidic proteomic maps of quiescent human neutrophils were analyzed and compared to those of activated neutrophils from severe trauma patients. The alkaline proteomic comparison revealed 3 spots whose measured volumes differed between activated and quiescent neutrophils, with all of them upregulated in trauma setting. On the other hand, the acidic proteomic analysis revealed 114 spots whose measured volumes differed between activated and quiescent polymorphonuclear leukocytes, with 27 upregulated and 87 downregulated in trauma condition. This work achieved the identification of several proteins potentially involved in signaling after trauma, as exemplified by the proteins Zfyve19, MAOB and albumin-like protein, described for the first time in polymorphonuclear leukocytes. Understanding the role of some neutrophil proteins, which are involved in the leukocyte metabolical actions in inflammatory response, can contribute to the development of new therapeutic strategies to control the deleterious inflammatory process and its pathological sequelae.

Dissertação (mestrado)—Univerdidade de Brasília, Instituto de Química, 2010. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-07-02T01:57:12Z No. of bitstreams: 1 2010_BrunoMarquesLacava.pdf: 3048974 bytes, checksum: de0d9d3b53a1f642ddec1461887902d7 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-07-02T01:59:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_BrunoMarquesLacava.pdf: 3048974 bytes, checksum: de0d9d3b53a1f642ddec1461887902d7 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-07-02T01:59:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_BrunoMarquesLacava.pdf: 3048974 bytes, checksum: de0d9d3b53a1f642ddec1461887902d7 (MD5) / Este trabalho descreve a preparação de um fluido magnético iônico, em meio ácido, com base em nanopartículas de maghemita, sintetizadas pelo método de coprecipitação, usando uma rota química aprimorada para prover um material monomodal, em uma única etapa, ou seja, sem necessitar de etapas especificas para seleção de diâmetros. O fluido magnético produzido foi caracterizado usando técnicas de difração de raios X (DRX) e microscopia eletrônica de transmissão (MET), que comprovaram a presença da fase maghemita e revelaram nanopartículas com diâmetro médio de 8,15 ± 0,09 nm e dispersão de 0,30 ± 0,01 via descrição por uma função de distribuição log-normal. A técnica de birrefringência magnética estática foi utilizada na caracterização magneto-óptica do material preparado e indicou a presença de aglomerados de nanopartículas (mais provavelmente cadeias lineares), mostrando que o sinal de birrefringência depende do valor do campo aplicado, da fração volumétrica de partículas e da morfologia dos aglomerados. O fluido magnético preparado foi utilizado como precursor na produção de um nanocompósito magnético para aplicações biomédicas. Neste caso, as nanopartículas de maghemita foram encapsuladas em nanocápsulas de albumina bovina (diâmetro médio de 73?3 nm), preparadas pelo método de desnaturação térmica. Este nanocompósito magnético tem sido utilizado em diversos estudos; em investigações de propriedades físicas básicas e em investigações de características biológicas. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / This work describes the preparation of an ionic magnetic fluid in acidic medium based on maghemite nanoparticles, the latter synthesized by coprecipitation via a chemical route developed to provide, in a single step, monomodal samples with no extra procedure for size selection. The prepared magnetic fluid was characterized by X-ray diffraction (XRD) and transmission electron microscopy (TEM), indicating the maghemite phase consisting of nanosized particles with average diameter of 8.15 ± 0,09 nm and diameter dispersion of 0.30 ± 0.01 under a log-normal distribution function. Static magnetic birefringence technique was used to characterize the magneto-optical properties of the as-produced sample, revealing the influence of particle agglomerates (more likely linear chains of particles) and indicating that the birefringence signal scales with the applied magnetic field, with the particle volume fraction, and with the morphology of the agglomerates. The produced magnetic fluid was used as a precursor in the preparation of a magnetic nanocomposite for biomedical applications. In this case, the maghemite nanoparticles were encapsulated within nanosized bovine serum albumin (BSA) nanospheres (average diameter of 73±3 nm), prepared by the thermal denaturation route. This magnetic nanocomposite has been used in several studies; investigating the basic physical properties and the biological characteristics.

Orientador : Humberto de Araujo Rangel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-16T07:12:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Salata_Ednir_M.pdf: 2557397 bytes, checksum: 35f37adc0d10c994869db3ef6c53d4b6 (MD5) Previous issue date: 1977 / Resumo: Não informado / Resumo: Não informado / Abstract: Not informed. / Abstract: Not informed. / Mestrado / Imunologia / Mestre em Ciências Biológicas

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, Programa de Pós-Graduação em Química, 2018. / Submitted by Fabiana Santos (fabianacamargo@bce.unb.br) on 2018-10-02T22:29:32Z No. of bitstreams: 1 2018_LuísGuilhermeGomesdeSá.pdf: 3389847 bytes, checksum: 36697c6195c5f03e137127fcce4f0363 (MD5) / Approved for entry into archive by Fabiana Santos (fabianacamargo@bce.unb.br) on 2018-10-09T19:01:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_LuísGuilhermeGomesdeSá.pdf: 3389847 bytes, checksum: 36697c6195c5f03e137127fcce4f0363 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-09T19:01:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_LuísGuilhermeGomesdeSá.pdf: 3389847 bytes, checksum: 36697c6195c5f03e137127fcce4f0363 (MD5) Previous issue date: 2018-10-09 / Peptídeos antimicrobianos (AMPs) têm despontado como uma alternativa promissora aos antibióticos convencionais. Sua forma de ação, baseada em características inerentes à AMPs, permite que sejam ativos contra os mais diferentes patógenos com poucos relatos sobre resistência. Dentre as diversas formas de identificar novas moléculas com atividade antimicrobiana, a pesquisa de sequências encriptadas dentro de proteínas complexas mostra-se uma boa fonte de moléculas bioativas. Considerando as propriedades físico-químicas de AMPs de origem natural como ponto de partida para a síntese de novos peptídeos com atividade antimicrobiana, bem como a possibilidade de encontrar sequencias de AMPs encriptadas dentro de proteínas, esta dissertação busca explorar esses fatos como forma de identificar AMPs intragênicos. Coleções de proteínas de duas espécies, Bos taurus e Gallus gallus, foram pesquisadas como fonte de novos AMPs. A pesquisa é feita com base nas características físico-químicas de AMPs por meio do software Kamal. Após avaliação da possiblidade de agir como agente antimicrobiano, três peptídeos foram selecionados e sintetizados por meio da técnica de síntese de peptídeos em fase sólida. Os peptídeos Bt01, Bt02 e Gg01 foram testados quanto sua interação com membranas modelo usando as técnicas de Dicroísmo Circular e Calorimetria Diferencial de Varredura, além de ter seu potencial antimicrobiano frente a culturas de Escherichia coli e Staphylococcus aureus. Todos os três peptídeos sintetizados apresentaram atividade antimicrobiana em concentrações na faixa de 4 – 8 μM. Posteriormente, um peptídeo foi selecionado para co-precipitação em sistemas poliméricos, sendo analisadas sua presença e dispersão no meio por meio de MALDI e espectroscopia de absorção UV-Vis. Por fim, a atividade antimicrobiana do filme sintetizado foi preliminarmente investigada frente a meios de cultura líquido de E. coli, mostrando inibição de crescimento microbiano para todas as concentrações testadas. / Antimicrobial peptides have emerged as a good alternative to conventional antibiotics. Their form of action, based on characteristics inherent to AMPs, allows them to be active against the varied pathogens with few reports of resistance. Among the several ways to identify new molecules with antimicrobial activity, the search for encrypted sequences within complex proteins is a good source of bioactive molecules. Based on the assumption that physical-chemical characteristics of naturally occurring AMPs can be used as a starting point for the synthesis of new peptides with antimicrobial activity, as well as the possibility to find AMP sequences encrypted within proteins, this dissertation seeks to explore these facts as ways to identify intragenic AMPs. The genome of two species, Bos taurus and Gallus gallus, was investigated as sources for new AMPs. The research is based on the physical-chemical characteristics of AMPs using the software Kamal. After evaluating the possibility of acting as an antimicrobial agent, three peptides were selected and synthesized by solid phase peptide synthesis. Their interaction with models membranes was evaluated using Circular Dichroism and Differential Scanning Calorimetry and their antimicrobial potential was determined against Escherichia coli and Staphylococcus aureus. Peptides Bt01, Bt02 and Gg01 presented antimicrobial activity in concentrations in the range of 4 – 8 μM. Additionally, one of the synthesized peptides was selected for co-precipitation in polymeric systems, and its presence and distribution in the product was evaluated by MALDI MS and UV-Vis spectroscopy. The antimicrobial potential of the synthetic film was evaluated against E. coli, showing antimicrobial activity at all the investigated concentrations.