Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2014-02-27T18:21:59Z No. of bitstreams: 1 Claire SS CD8+ granzyme b...pdf: 4914876 bytes, checksum: e54c8737a502be3105cd578fa7d10ef4 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-27T18:21:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Claire SS CD8+ granzyme b...pdf: 4914876 bytes, checksum: e54c8737a502be3105cd578fa7d10ef4 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina. Salvador, BA, Brasil / Células T CD8+ são essenCIaIS na defesa contra vírus, mas pouco se sabe sobre a sua participação na defesa do hospedeiro contra parasitas, como a Leishmania. Nesse trabalho, investigou-se a participação das células T CD8+ no processo inflamatório e na indução da morte do parasita, bem como os perfis proteômicos das lesões dos pacientes com leishmaniose cutânea localizada (LCL) infectados por L. braziliensis. Observa-se uma alta porcentagem de células T CD8+ nas lesões dos pacientes com LCL, como sugerido pela maior frequência de células T CD8+CD45RO+ e células T CD8+CLA + em comparação com CMSP do próprio indivíduo. Após re-estimulação com L. braziliensis, a maioria das células T CD8+ presentes na lesão expressam marcadores citolíticos, CD 107a e Granzima B. Além disso, a co-cultura de macrófagos infectados com linfócitos T CD8+ resultou na libertação de granzima B. A utilização do inibidor da granzima B, assim como Z-V AO, Fas:Fc ou anti­ IFN-y não teve nenhum efeito sobre a morte do parasita. Por outro lado, a co-cultura de macrófagos infectados com células T CD4+ diminuiu a taxa de infecção, efeito que foi completamente revertido ao se utilizar o anti-IFN-y, enfatizando o papel determinante de células T CD4+IFN-/ na morte da Leishmania. Além disso, observou-se um total de 150 proteínas diferencialmente expressas entre as lesões de pacientes com LCL e as amostras de pele normal. Destas, cinquenta e nove proteínas foram identificadas. Entre elas, 13 apresentaram uma maior ou menor expressão nas amostras dos pacientes em relação a pele normal. Vinte e sete proteínas foram encontradas somente nas lesões dos pacientes e 18 somente nas amostras de pele normal. Essas proteínas foram associadas com processos de regulação biológica; incluindo apoptose, ciclo celular e resposta imune. Para explorar as interações entre as proteínas identificadas e as proteínas e os genes que poderiam ser afetados por elas, redes e sub-redes de interações foram geradas. Após análises de imuno-histoquímica, a presença de caspas e 9, caspase-3 e granzima B foi validada no sítio da lesão. A expressão da granzima B nas lesões dos pacientes correlacionou-se positivamente com a expressão da caspase 9 e a porcentagem de células positivas para TUNEL. Observou-se também uma maior porcentagem de células postivas para TUNEL expressando granzima B nas biópsias dos pacientes que apresentam um processo mais intenso de necrose. Além disso, a presença de granzime B, caspase 9 e caspase-3 foram correlacionados positivamente com o tamanho da, lesão. Neste estudo, podemos concluir que as células T CD8+Granzima B+ estão envolvidas na patogênese da L. braziliensis, através da ativação da apoptose no sítio inflamatório, favorecendo a progressão do dano tecidual observado nos pacientes com LCL. / CD8+ T cells are essential in the defense against virus, but little is known of their participation in the host defense against parasites, such as Leishmania. In the present study, we investigated the participation of CD8+ T cells in the inflammatory process and parasite killing, as well as proteome profiles in the biopsies from localized cutaneous leishmaniasis patients (LCL) infected by L. brazliensis. We found a higher percentage of CD8+ T cells in lesions of LCL patients, as suggested by the higher frequency of CD8+CD45RO+T cells and CD8+CLA +T cells compared to PBMC. Upon L. braziliensis-restimulation, most of CD8+T cells from the lesion expressed cytolytic markers, CDI07a and Granzyme B. Furthermore, co-culture of infected macrophages and CD8+T lymphocytes resuIted in release of granzyme B and the use of granzyme B inhibitor, as well as z-V AD, Fas:Fc or anti-IFN-y had no effect upon parasite killing. On the other hand, co-culture of infected macrophages with CD4+T cells strongly increased parasite killing, which was completely reversed by anti-IFN-y, pointing out the decisive role of CD4+IFN-y +T cells in parasite killing. Besides that, a total of 150 differentially expressed proteins were observed in the lesions of LCL patients and normal skin. Fifty-nine proteins were identified. Among them, 13 were up or down regulated in LCL lesions compared to normal skin, 27 proteins were unique in the lesions of LCL patients and 18 were unique in the normal skin samples. These proteins were associated with biological regulation, including apoptosis, cell cycle and immune response. To explore interactions between the identified proteins and proteins and genes that may be affected by them, networks and subnetworks were generated. After immunohistochemistry analyses, the presence of casp~~e 9, caspase 3 and granzyme B were validated in the lesions site. Granzyme B expression in the lesions of LCL patients positively correlated with caspase 9 expression and the percentage of TUNEL-positive cells. We also observed a significant higher percentage of TUNEL-positive cells and granzyme B expression in the biopsies of patients showing a more intense necrotic processo Besides that, the presence of granzime B, caspase 9 and caspas e 3 were positively correlated with the lesion size. In this study we can conclude that CD8+ Granzyme B+T cells are involved in the pathogenesis of L. braziliensis due to their cytotoxic potential to induce apoptotic mechanism in the inflammatory site that favors the progression oftissue damage observed in LCL patients.

CAMPOS, R. S. Atividade antifúngica da palmatina frente a isolados de Candida spp. resistentes a azólicos e sua atividade contra biofilme formado e em formação. 2017. 104 f. Tese (Doutorado em Microbiologia Médica) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-03-22T11:52:05Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_rscampos.pdf: 1770762 bytes, checksum: 31d04bdbcd7bd2125c62f5719cd949ab (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-03-22T11:52:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_rscampos.pdf: 1770762 bytes, checksum: 31d04bdbcd7bd2125c62f5719cd949ab (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-22T11:52:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_rscampos.pdf: 1770762 bytes, checksum: 31d04bdbcd7bd2125c62f5719cd949ab (MD5) Previous issue date: 2017-02-23 / Currently, the incidence of fungal infections has been increasing and in a prominent position, those caused by species of the genus Candida, which is the most isolated microorganism in hospital sepsis. The most frequently isolated species was Candida albicans, but this scenario has been changing with the increase of non-albicans species, which are more resistant to fluconazole. Due to the resistance problem and the fact that there are few antifungal drugs available on the market, it is necessary to search for new drugs. In this context, there was an interest in studying palmatine, which is an isoquinolinic alkaloid, which has been used in traditional Chinese medicine for several years, presenting several pharmacological properties, including antifungal. The objective of this work was to evaluate the antifungal activity of palmatina against Candida spp. Resistant to azoles. The methodology used to verify the antifungal action was the broth microdilution technique. Flow cytometry tests were performed to elucidate the possible mechanisms of death involved. The anticancer action of palmatine was verified in biofilms formed and in formation in the three main Candida species (C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis). Proteomic analysis was also used as a tool to understand the biochemical processes involved in the action of palmatine and the cytotoxicity test was also performed on murine fibroblasts. Palmatina demonstrated antifungal activity with MICs ranging from 32 to 128 μg / mL. It was found that palmatine reduced cell density, caused DNA damage, promoted mitochondrial depolarization, increased phosphatidylserine outgrowth, suggesting cell death by apoptosis. In biofilms formed, palmatine reduced the cellular viability of the biofilm in a concentration of 20x MIC (C. albicans) and 10x MIC (C. tropicalis and C. parapsilosis) by 50%. In biofilms in formation, the same percentage of inhibition was achieved in the MIC concentration (C. albicans) and 2x MIC (C. tropicalis and C. parapsilosis). Proteomic analysis of a strain of C. albicans exposed to palmatine demonstrated the overexpression of proteins related to energy production and synthesis of macromolecules. Palmatine did not demonstrate cytotoxicity when evaluated at the concentration of 100 μg / mL in murine fibroblast L929 cells. The antifungal action of palmatine in Candida spp. Resistant to planktonic and biofilm forming and forming biofilms, as well as being non-cytotoxic to animal cells, point to a promising new molecule or anti-plaque prototype. / Atualmente, a incidência das infecções fúngicas vem aumentando e em posição de destaque, as causadas por espécies do gênero Candida, a qual é o microrganismo mais isolado em sepse hospitalar. A espécie mais frequentemente isolada era Candida albicans, mas esse panorama vem mudando com o aumento de espécies não albicans, as quais apresentam uma maior resistência ao fluconazol. Devido ao problema de resistência e o fato de haver poucos fármacos antifúngicos disponíveis no mercado, faz-se necessário a busca por novos fármacos. Neste contexto, houve interesse em estudar a palmatina que é um alcalóide isoquinolínico, há anos já vem sendo usado na medicina tradicional chinesa apresentando várias propriedades farmacológicas, inclusive antifúngica. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antifúngica da palmatina frente à cepas de Candida spp. resistentes a azólicos. A metodologia utilizada para verificar a ação antifúngica foi a técnica de microdiluição em caldo. Foi realizados testes de citometria de fluxo para elucidar os possíveis mecanismos de morte envolvidos. A ação anticandida da palmatina foi verificada em biofilmes formados e em formação nas três principais espécies de Candida (C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis). A análise proteômica também foi utilizada como ferramenta no entendimento dos processos bioquímicos envolvidos na ação da palmatina e também foi realizado o teste de citotoxicidade em fibroblastos murino. Palmatina demonstrou atividade antifúngica com os CIM variando 32 a 128 μg/ mL. Verificou-se que a palmatina reduziu a densidade celular, causou danos ao DNA, promoveu despolarização mitocondrial, aumenta a externalização de fosfatidilserina, sugerindo morte celular por apoptose. Em biofilmes formados, palmatina reduziu em 50% a viabilidade celular do biofilme na concentração de 20x CIM (C. albicans) e 10x CIM (C. tropicalis e C. parapsilosis). Já em biofilmes em formação, a mesma porcentagem de inibição foi alcançada na concentração do CIM (C. albicans) e 2x CIM (C. tropicalis e C. parapsilosis). Análise proteômica de uma cepa de C. albicans exposta a palmatina demonstrou a super expressão de proteínas relacionadas à produção de energia e síntese de macromoléculas. Palmatina não demonstrou citotoxicidade quando avaliada na concentração de 100 μg/ mL em células L929 de fibroblasto murino. A ação antifúngica da palmatina em Candida spp. resistentes a azólicos na forma planctônica e em biofilme formados e em formação, assim como, ao fato de não ser citotóxica para células animais, apontam para uma promissora nova molécula ou protótipo anticandida.

OLIVEIRA, Georgia Mesquita de. Efeito do pré-tratamento foliar com H2O2 sobre o proteoma e enzimas antioxidantes em plantas de feijão-de-corda submetidas ao estresse salino. 2016. 126 f. Tese (Doutorado em Bioquímica)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-03-29T15:35:42Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_gmoliveira.pdf: 2314756 bytes, checksum: c3c225c3b273655ee9ceb0f169022c77 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-03-29T17:09:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_gmoliveira.pdf: 2314756 bytes, checksum: c3c225c3b273655ee9ceb0f169022c77 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-29T17:09:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_gmoliveira.pdf: 2314756 bytes, checksum: c3c225c3b273655ee9ceb0f169022c77 (MD5) Previous issue date: 2016 / The cowpea [Vigna unguiculata (L.) Walp.] has a great nutritional an socioeconomic importance in Brazil. However, in the Northeastern there is a decline in its agricultural production, which might be associated with an increased salinity in the soil. It is know that salinity causes metabolic changes, accelerating the production of reactive oxygen species (ROS). They lead to several damage in cells, but also play a crucial role as signaling molecules for acclimation to various abiotic stresses. For this reason, the aim of this work was to evaluate the effects of hydrogen peroxide (H2O2) leaf pretreatment in cowpea plants on acclimation to salt stress, studying the physiological, biochemical and molecular mechanisms. Therefore, two experiments were conducted in a greenhouse under hydroponic conditions, using the cowpea, cultivar TVu 2331. In the first experiment, were evaluated physiological change induced by H2O2 leaf spraying pretreatment in different concentrations (1, 5, 10, 25, 50 e 100 mM), in cowpea plants subjected to salt treatment (NaCl 80 mM). The results showed that the spraying with 25 mM H2O2 solution was able to alleviate the deleterious effects of salinity on growth. From this point, in the second experiment, were evaluated the effects of this concentration of H2O2 leaf pretreatment on the biochemical and proteomic changes in plants during saline treatment. It was found the involvement of enzymes SOD and CAT in the initial times after spraying of H2O2, indicating an antioxidant response. However, in the presence of NaCl, the lipid peroxidation was not reduced by H2O2 spraying. In the proteomic study it was verified that pretreated with water and salt treatment altered the expression of 38 proteins, as H2O2 pretreatment and saline treatment were able to alter expression of 28 proteins and pretreatment with H2O2 was only able to change expression 11 proteins. Among these proteins, 44 of them had their identity determined by mass spectrometry (ESI-Q-TOF). Most of the identified proteins in the treatments performed were related to the photosynthetic process, to protection / defense and to carbohydrate metabolism. However, in the saline treatment revealed a decrease in the expression the proteins related to photosynthesis, it was observed that the pretreatment with H2O2 was able to enhance the expressed proteins, such as Rubisco and protein related to oxygen evolution (OEE2). In addition, that treatment displayed the largest number of proteins associated with protection/defense, such as glutathione reductase, chloroplast chaperonin, cytosolic APX and POB1 BTB/POZ. These data should contribute to a better understanding of the biochemical and molecular mechanisms of cowpea, TVu cultivar, involved in acclimation to salt stress previously treated with H2O2. The acquired knowledge generates perspectives for the development of biotechnological strategies in order to obtain cultivars that are more tolerant to salinity. / O feijão-de-corda [Vigna unguiculata (L.) Walp. ] tem grande importância nutricional e socioeconômica no Brasil. Entretanto, no Nordeste há um declínio da sua produção agrícola, que pode estar associado com o aumento da salinidade do solo. É conhecido que a salinidade causa mudanças metabólicas, acelerando a produção das espécies reativas de oxigênio (EROS). Elas levam a diversos danos na célula, mas também desempenham um papel crucial como moléculas sinalizadoras na aclimatação a vários estresses abióticos. Por essa razão, o objetivo desse trabalho foi avaliar os efeitos do pré-tratamento foliar com peróxido de hidrogênio (H2O2) em plantas de feijão-de-corda sobre a aclimatação ao estresse salino, estudando os mecanismos fisiológicos, bioquímicos e moleculares. Para tanto, dois experimentos foram conduzidos em casa de vegetação, sob condições hidropônicas, utilizando a cultivar TVu 2331. No primeiro experimento foram avaliadas as mudanças fisiológicas, induzidas pelo pré-tratamento foliar de H2O2 em diferentes concentrações (1, 5, 10, 25, 50 e 100 mM), em plantas submetidas ao tratamento salino (NaCl 80 mM). Os resultados demonstraram que a pulverização da solução de H2O2 na concentração de 25 mM foi capaz de amenizar os efeitos deletérios da salinidade sobre o crescimento. A partir disso, em um segundo experimento foram avaliados os efeitos dessa concentração de H2O2 no pré-tratamento foliar sobre as mudanças bioquímicas e proteômicas em plantas sob tratamento salino. Constatou-se o envolvimento das enzimas SOD e CAT nos tempos iniciais após a aplicação de H2O2, indicando uma resposta antioxidante. Entretanto, na presença de NaCl, a peroxidação lipídica não foi reduzida devido a pulverização foliar com H2O2. No estudo proteômico verificou-se que o pré-tratamento com água e tratamento salino foi capaz de modificar a expressão de 38 proteínas, o pré-tratamento com H2O2 e tratamento salino alterou a expressão de 28 proteínas e o pré-tratamento com H2O2 modificou a expressão de 11 proteínas. Entre essas proteínas, 44 tiveram suas identidades determinadas por espectrometria de massa (ESI-Q-TOF). A maioria das proteínas identificadas nos tratamentos realizados estavam relacionadas com o processo de fotossíntese, proteção/defesa e ao metabolismo dos carboidratos. Enquanto que o tratamento salino revelou uma diminuição da expressão das proteínas fotossintéticas, o pré-tratamento com H2O2 possibilitou primordialmente o seu aumento, como observado para a Rubisco e da proteína relacionada a evolução do oxigênio (OEE2). Esse tratamento foi também capaz de ativar proteínas envolvidas na proteção/defesa como: redutase da glutationa, chaperonina cloroplástica, APX citosólica e POB1 BTB/POZ. Os dados obtidos revelam respostas bioquímicas e moleculares da cultivar TVu envolvidas na aclimatação ao estresse salino, previamente tratados com H2O2. O conhecimento adquirido gera perspectivas para o desenvolvimento de estratégias biotecnológicas a fim de se obter cultivares mais tolerantes à salinidade.

ARRUDA, Paulo Cesar Lopes de. Efeitos de diferentes fontes de lipídeos sobre as características de carcaça, perfil lipídico e proteoma do Longissimus Dorsi De cordeiros deslanados. 2014. 104 f. Tese (Doutorado em Zootecnia)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2016-10-20T20:01:34Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_pclarruda.pdf: 1305239 bytes, checksum: de5f214cd9765d1e2cf7cb5fe597cb2c (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2016-10-20T23:41:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_pclarruda.pdf: 1305239 bytes, checksum: de5f214cd9765d1e2cf7cb5fe597cb2c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-20T23:41:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_pclarruda.pdf: 1305239 bytes, checksum: de5f214cd9765d1e2cf7cb5fe597cb2c (MD5) Previous issue date: 2014 / The study was conducted to evaluate the influence of supplementation of different lipid sources on performance and quantitative characteristics of housing and not housing, fatty acid profile and muscle proteome Longissimus dorsi of Santa Ines lambs fed different additional sources of lipids. 35 lambs bulls were used, with initial body weight (13 ± 1.80 kg) and approximately two months in a randomized block design with five treatments and seven repetitions. The treatments consisted of five diets, one free additional lipids (control) and the other, added cottonseed (CA), bran cashew (FCC), cottonseed with cashew nut meal (CALFCC) and calcium salts of long chain fatty acids (LCFA-Ca). The duration of the experiment was determined by the time required for the average body weight of all animals in each treatment were 28 kg, and this selected group for slaughter. No significant effect was observed with the use of supplementary sources of lipids on the loss of fasting, body weight at slaughter, empty body weight, hot carcass weight, cold carcass weight loss by cooling and biological yield. The non-carcass components, intestines and organs showed no differences across lipid additional sources. Regarding the fatty acid profile were observed 13 fatty acids, four of which are saturated, monounsaturated five-four polyunsaturated (PUFA). In proteome analysis, the proteins were expressed in greater quantity were located primarily at pH less than 5.5. Comparing the expression intensity spots between treatments can observe significant difference in the intensity of the spots 23 for the diet revealed fifteen proteins and of this total, seven were differentiated with respect to time. The proteins identified in this experiment can be mainly classified as structural cellular organization and protection to stress, as well as specific metabolic functions and other functions. The addition of various sources of lipid influenced the productive performance and features: hot carcass dressing and cold, yield and weight of the rack the weight and performance of the gastrointestinal tract filled, small intestine and liver income in Santa Ines sheep growing. Supplementation with different lipid sources influence the profile of fatty acids of Longissimus dorsi, so that diets containing FCC and Lcfa-Ca increased the amount of CLA in the muscle. The proteome analysis may be a method to identify marker proteins meat quality prediction. In this study, the identified proteins are highly relevant to the meat tenderness process, wherein the meat maturation process is complex and involves protein in different biological processes. The type of power had greater influence on the proportions of bodies responsible for digestion and absorption of nutrients. / O estudo foi realizado com objetivo de avaliar a influência da suplementação de diferentes fontes de lipídeos sobre o desempenho produtivo e as características quantitativas de carcaça e não carcaça, perfil de ácidos graxos e proteoma do músculo Longissimus dorsi de cordeiros Santa Inês alimentados com diferentes fontes suplementares de lipídeos. Foram utilizados 35 cordeiros não-castrados, com peso corporal médio inicial (13 ± 1,80 kg) e aproximadamente, dois meses de idade em delineamento de blocos ao acaso com cinco tratamentos e sete repetições. Os tratamentos experimentais consistiram de cinco rações, sendo uma isenta de lipídeos suplementares (controle) e as demais, adicionadas de caroço de algodão (CA), farelo da castanha de caju (FCC), caroço de algodão com farelo de castanha de caju (CALFCC) e sais de cálcio de ácidos graxos de cadeia longa (Ca-Agcl). A duração do experimento foi determinada pelo tempo necessário para que a média do peso corporal de todos os animais de cada tratamento atingisse 28 kg, sendo este grupo selecionado para o abate. Não foi observado efeito significativo com a utilização de fontes suplementares de lipídeos sobre a perda do jejum, peso corporal ao abate, peso de corpo vazio, peso de carcaça quente, peso de carcaça fria, perda por resfriamento e rendimento biológico. Os componentes não-carcaça, vísceras e órgãos, não apresentaram diferenças em função das fontes suplementares lipídicas. No tocante ao perfil de ácidos graxos foram observados 13 ácidos graxos, dos quais quatro são saturados, cinco monoinsaturados e quatro poliinsaturados(AGPI). Na análise do proteôma as proteínas que foram expressas em maior quantidade se localizaram principalmente em pH inferior a 5,5. Comparando a expressão da intensidade de spots entre os tratamentos pode-se observar diferença significativa na intensidade de 23 spots em função da dieta revelando quinze proteínas sendo que desse total, sete foram diferenciadas em função do tempo. As proteínas identificadas neste experimento podem ser classificadas principalmente como estruturais de organização celular e proteção ao stresse, bem como com específicas funções metabólicas e outras funções. A adição de diferentes fontes de lipídeo suplementar influenciou o desempenho produtivo e as características: rendimento da carcaça quente e fria, rendimento e peso da costela o peso e rendimento do trato gastrointestinal cheio, intestino delgado e rendimento do fígado em ovinos Santa Inês em crescimento. A suplementação com diferentes fontes lipídicas influenciou o perfil de ácidos graxos do Longissimus dorsi, de modo que as dietas contendo FCC e Ca-Agcl aumentou a quantidade de CLA neste músculo. A análise do proteoma pode ser um método para identificar as proteínas marcadoras de predição da qualidade da carne. Nesse estudo, as proteínas identificadas são altamente relevantes para o processo de maciez da carne, sendo que o processo de maturação da carne é complexo e envolve proteínas em diferentes processos biológicos. O tipo de alimentação teve maior influência sobre as proporções dos órgãos responsáveis pela digestão e absorção de nutrientes.

RODRIGUES, Fernanda Nascimento. Estabelecimento de cultivo in vitro e estudo proteômico de calos caulinares e foliares de Artocarpus incisa L. 2016. 70 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-01-03T20:49:55Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_fnrodrigues.pdf: 1058982 bytes, checksum: 85e27505af970a6b39e312b8bc7ac445 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-01-09T22:36:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_fnrodrigues.pdf: 1058982 bytes, checksum: 85e27505af970a6b39e312b8bc7ac445 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-09T22:36:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_fnrodrigues.pdf: 1058982 bytes, checksum: 85e27505af970a6b39e312b8bc7ac445 (MD5) Previous issue date: 2016 / The species Artocarpus incisa, belonging to the Moraceae family, is a tree-sized plant with multiple applications in folk medicine. As a woody species, several difficulties are reported to its spread, such as the delay in its development and low germination rate. In vitro culture of plant tissue, in particular callus culture, can serve as a tool to overcome these difficulties and to facilitate obtaining the compounds of interest. This work was meant to provide the best conditions of callus formation as well as perform histological analysis and proteomic study of A. incisa calluses. For induction of callus, explants were used arising from leaf and shoot, which have been added to the nutritional formulation Woody Plant Medium (WPM), and applied in treatments containing PVP, activated charcoal, and different growth regulators (2,4-D, BAP, NAA and KIN). The results showed that the cultivation of shoot and leaf explants in medium with 0.1% activated charcoal, supplemented with 4.5 uM of 2,4-D and 4.4 uM BAP treatment was the best callus induction with an 88% percentage production. Quantification of proteins by Protein UV from NanoVue detected 15.97 ug protein / uL shoot extract; 20.07 ug protein / uL leaf extract; 0.75 ug protein / uL of shoot callus extract; and 16.85 ug protein / uL of leaf callus extract. The original tissues showed higher protein concentration than those in produced calluses, which can be explained by the differentiation of tissue. Histological analysis indicated that the cells of calluses were homogeneous and viable, with thin cell wall, and large amount of polysaccharide granules. The proteomic study by mass spectrometry led to the identification of peptides that have relation to previously reported plant proteins. We were able to detect proteins related to the defense (KM+, chitinase, catalase), metabolism (fructose-bisphosphate aldolase, glutamate carboxypeptidase) and cell signaling (calmodulin) in calluses, regardless of the origin of these. The work pioneered the proteomic study of A. incisa calluses, and is an initial step in understanding the biochemistry and physiology of the species under study. / A espécie Artocarpus incisa, pertencente à família Moraceae, é uma planta de porte arbóreo com várias aplicações na medicina popular. Por ser uma espécie lenhosa, várias dificuldades são relatadas para sua propagação, como a demora no seu desenvolvimento e a baixa taxa de germinação. A cultura in vitro de tecidos vegetais, em particular a cultura de calos, pode servir como uma ferramenta para contornar essas dificuldades e facilitar a obtenção dos compostos de interesse. O presente trabalho teve como intuito estabelecer as melhores condições de calogênese, bem como realizar a análise histológica e o estudo proteômico de calos de A. incisa. Para a indução dos calos, utilizou-se explantes advindos de folha e de caule, os quais foram adicionados à formulação nutritiva Woody Plant Medium (WPM), e aplicados em tratamentos contendo PVP, carvão ativado, e diferentes reguladores de crescimento (2,4-D, BAP, ANA e CIN). Os resultados mostraram que o cultivo de explantes foliares e caulinares em meio com carvão ativado 0,1%, suplementado com 4,5 µM de 2,4-D e 4,4 µM de BAP foi o melhor tratamento de indução de calos, com um percentual de produção de 88%. A quantificação de proteínas através do Protein UV do NanoVue detectou 15,97 µg de proteína/µL de extrato de caule; 20,07 µg de proteína/µL de extrato de folha; 0,75 µg de proteína/µL de extrato de calos caulinares; e 16,85 µg de proteína/µL de extrato de calos foliares. Os tecidos originais apresentaram maior concentração de proteínas do que os calos produzidos, o que pode ser explicado pela diferenciação do tecido. A análise histológica indicou que as células de calos se mostraram homogêneas e viáveis, com parede celular fina, e com grande quantidade de polissacarídeos em grânulos. O estudo proteômico, através de espectrometria de massas, levou à identificação de peptídeos que apresentam relação com proteínas vegetais já relatadas. Detectou-se proteínas relacionadas com a defesa (KM+, quitinase, catalase), metabolismo (frutose-bifosfato aldolase, glutamato-carboxipeptidase) e sinalização celular (calmodulina) nos calos, independente da origem destes. O trabalho foi pioneiro no estudo proteômico de calos de A. incisa, e é um passo inicial na compreensão da bioquímica e fisiologia da espécie em estudo.

Made available in DSpace on 2016-05-11T13:01:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 carolina_nicolau_ioc_dout_2016.pdf: 5977694 bytes, checksum: af8dc8894964ad483ed199c8a766fe4e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Além de potencialmente letais, envenenamentos ofídicos frequentemente acarretam elevados índices de morbidade e são reconhecidos pela Organização Mundial da Saúde como uma condição negligenciada de saúde pública. Atualmente, um dos maiores problemas associados ao envenenamento por serpentes é a baixa eficácia dos soros antiofídicos em neutralizar os efeitos tóxicos locais (ex.: hemorragia e necrose). A seleção dos venenos que compõem o pool de imunização dos cavalos é uma etapa crucial na produção do soro antiofídico e um dos critérios utilizados é a classificação filogenética das serpentes. Neste contexto, com vistas à possível otimização do soro antiofídico produzido no Brasil, utilizamos a abordagem proteômica shotgun para caracterizar os venenos utilizados como antígenos na produção do soro antibotrópico produzido pelo Instituto Butantan. Outros dois venenos que não fazem parte do pool também foram analisados. Os resultados proteômicos deste trabalho indicaram que a classificação filogenética (baseada fundamentalmente em características morfológicas das serpentes e análises de DNA mitocondrial) não mostra boa correlação com a composição proteica dos venenos. Como os efeitos do envenenamento estão diretamente relacionados com os componentes proteicos, análises venômicas podem auxiliar na escolha do pool de imunização, aprimorando a eficácia do soro antiofídico. O emprego de inibidores toxinoespecíficos para administração local é uma possível alternativa na busca de terapias antiofídicas mais efetivas. Metalopeptidases (SVMP) são as principais responsáveis pela hemorragia local, sendo sintetizadas na forma de pró-enzimas. Acredita-se que o pró-domínio destas toxinas seja responsável pela modulação de sua atividade catalítica, através de um mecanismo conhecido por cysteine-switch Utilizamos as abordagens de avaliação de formação de complexo em condições nativas e cross-linking aliado à espectrometria de massas de alta resolução, para mapearmos a região de interação entre o pró-dominio recombinante (PD-Jar) de jararagina (principal metalopeptidase do veneno de Bothrops jararaca) e diferentes metalopeptidases isoladas de venenos botrópicos. Os resultados mostraram que, em concentrações equimolares, PD-Jar foi capaz de interagir com as SVMP da classe PI (BaP1, atroxlisina-I e leucurolisina-a), porém, foi degradado por todas as SVMP estudadas. Desta forma, o uso de PD-Jar na terapia antiveneno pode não ser efetivo; entretanto, pode auxiliar na elucidação do mecanismo de ativação das SVMP. Por outro lado, ainda que os componentes dos venenos possam causar efeitos deletérios significativos, eles também podem apresentar valor terapêutico. Recentemente, observamos que o peptidoma do veneno de B. jararaca é significativamente mais complexo do que previamente descrito na literatura. Desta forma, utilizando genômica funcional aliada à abordagem connectivity map, triamos o peptidoma por possíveis novas atividades biológicas relevantes. Diversas atividades potenciais, tais como antimalárica, anti-inflamatória e imunossupressora foram detectadas e serão submetidas à etapa de validação complementar. Em resumo, o presente trabalho mostrou a necessidade de estudos venômicos apara aperfeiçoar a escolha do pool de imunização para a produção do soro antibotrópico, confirmou a interação entre PD-Jar e algumas SVMP-PI e foi mostrado, pela primeira vez, um peptidoma de serpentes significativamente diverso com potencial terapêutico. Esses resultados poderão contribuir para o aprimoramento da terapia antiofídica atual e para a prospecção por novos fármacos para o tratamento de diferentes patologias / Snakebite envenoming induces high levels of morbidity, besides its lethality potential and have been classified as a neglected health condition by the World Health Organization. Currently, the major issue associated to snakebite envenoming is the low efficacy of the antiophidic serum to neutralize the toxic local effects such as hemorrhage and necrosis. One of the most essential steps in antivenom production is the appropriate choice of venoms to compose the horses\2019 immunization pool, which takes into account the phylogenetic classification of snakes. Thus, aiming at improvements in the efficacy of antibothropic sera produced in Brazil, we used shotgun proteomics to characterize the venoms used as antigens for the antibothropic serum production by the Butantan Institute. We also analyzed two other venoms not used in the immunization pool. The proteomic results indicated that phylogenetic classification (based on morphological features and mitochondrial DNA analysis) does not display good correlation to snake venom composition. Considering that the envenoming effects are directly related to venom proteins, venomic analysis may contribute for a more rational design for immunization pool, improving the efficacy of the antiophidic serum. The local administration of toxin-specific inhibitors may represent a good alternative for development of more effective antiophidic therapies. Metallopeptidases (SVMPs), mainly responsible for the local hemorrhage, are synthesized as a pro-enzyme. It is believed that the prodomain of SVMPs is responsible for the modulation of their catalytic activity, through a mechanism known as cysteine-switch Thus, we used complex formation assays in native conditions and with cross-linking allied to high resolution mass spectrometry, to map the interaction region between a recombinant prodomain (PD-Jar) from jararhagin (major class PIII SVMP from Bothrops jararaca venom), and different SVMPs isolated from bothropic venoms. The results indicated that PD-Jar is able to interact, in equimolar concentrations, with class P-I SVMPs (BaP1, atroxlysin-I and leucurolysin-a) but it was degraded by all SVMPs studied. Thus, PD-Jar may not be effective in antivenom therapy; however, it may contribute for the elucidation of the mechanism of activation of SVMPs. On the other hand, besides the dreadful effects of snake venom components, they display a therapeutic potential. Recently, we observed that the B. jararaca venom peptidome is far more complex than previously reported in the literature. Thus, using functional genomics associated to connectivity map approach, we screened for novel relevant activities in this peptidome. We identified different potential activities such as antimalarial, anti-inflammatory and immunosuppressive, which will be further validated through biological assays. In summary, in the present work we showed the importance to use venomic studies to improve the rational design for immunization pool for antibothropic serum production, we confirmed the interaction between PD-Jar and some SVMP-PI and we showed, for the first time, a significant diverse snake venom peptidome with therapeutic potential. Thus, these results may further contribute for improvements in the antiophidic therapy and for prospecting novel drugs to be applied to the treatment of different pathologies

CIPRIANO, A. K. A. L. A interação do cajueiro (Anacardium occidentale L.) com o fungo Lasiodiplodia theobromae reprograma a expressão de proteínas no caule, sítio de infecção do patógeno. 2014. 136 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2015-01-22T18:58:40Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_akalcipriano.pdf: 2753055 bytes, checksum: 892bde62cddf05cebf6ae0b3a737c969 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2016-01-06T19:27:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_akalcipriano.pdf: 2753055 bytes, checksum: 892bde62cddf05cebf6ae0b3a737c969 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-06T19:27:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_akalcipriano.pdf: 2753055 bytes, checksum: 892bde62cddf05cebf6ae0b3a737c969 (MD5) Previous issue date: 2014 / No Brasil, a indústria do caju é uma das principais fontes de renda e trabalho no campo e representa a maior parcela da economia na região nordeste, que concentra 94% da produção, destacando-se os estados do Ceará, Piauí e Rio Grande do Norte, respectivamente. Neste contexto, para otimizar o setor produtivo, estratégias de melhoramento genético de cultivares têm focado na seleção e desenvolvimento de clones anãos. Entretanto, essa prática tem contribuído para diminuição da variabilidade genética e, consequentemente, para maior vulnerabilidade ao ataque de patógenos. A resinose, causada pelo fungo Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griff & Maubl. é considerada a principal doença do cajueiro nas condições semiáridas. Métodos eficientes de controle da doença ainda não foram estabelecidos. Baseado na ausência de dados publicados com relação às respostas bioquímicas e fisiológicas do cajueiro infectado com L. theobromae, associado ao fato de que as plantas, para se defenderem do ataque de patógenos, acionam/alteram vias metabólicas controladas por diversas proteínas, o estudo da identidade dessas proteínas fornecem informações sobre os mecanismos relacionados à interação de compatibilidade/incompatibilidade entre o cajueiro e L. theobromae. Dessa forma, nesse estudo, foi realizada análise proteômica diferencial de caules de cajueiro (Anacardium occidentale), clone BRS 226 (resistente), mantido em condições controladas, em tempos iniciais pós-infecção com o L. theobromae, assim como, de plantas de cajueiro resultantes da polinização aberta do BRS 226, classificadas como resistentes e suscetíveis à resinose, em condições de campo, onde há alta pressão do patógeno. Proteínas diferencialmente expressas foram identificadas por eletroforese bidimensional (2D-PAGE) combinada com espectrometria de massas ESI-Q-TOF MS/MS. Plantas de cajueiro infectadas com L. theobromae acionam respostas fisiológicas associadas à reprogramação da expressão de um total de 73 proteínas, nos cenários investigados. Destas, 36 foram identificadas no clone BRS 226, artificialmente inoculado, e 37 nas plantas de cajueiro, cultivadas em condições de campo. Portanto, um número equivalente de proteínas é responsivo dentro dos cenários analisados e compartilham funções celulares em rotas metabólicas e de produção de energia, estresse/defesa, sinalização celular e enovelamento/metabolismo de proteínas. Proteínas responsivas a hormônios e envolvidas com estrutura celular foram diferencialmente expressas somente em plantas crescidas em condição de campo, enquanto proteínas de transporte foram reprogramadas no clone BRS 226. Plantas de cajueiro, cultivadas em campo, e inoculadas do clone BRS 226 compartilharam a expressão reprogramada de 6 proteínas idênticas, dentre as quais, proteínas 14-3-3 e anexinas, envolvidas com a sinalização celular, foram influenciadas ao mesmo tempo, aparentemente, pelos estresses abiótico e biótico. A reprogramação de funções celulares comuns somado a alteração na expressão de 6 proteínas idênticas, nas condições estudadas, mostrou sobreposição de respostas, que parece ser indicativo da infecção pelo L. theobromae no tecido caulinar. Essas observações revelam proteínas que são alvos dos mecanismos celulares acionados em plantas de cajueiro desafiadas com L. theobromae e constituem uma base inicial de resultados que podem ser, futuramente, integrados a programas de melhoramento genético do cajueiro, visando resistência, particularmente, à resinose.

Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-12-09T15:49:52Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_OtimizaçãoPeriodicidadesFracas.pdf: 2409585 bytes, checksum: f6c5582e68fe17edc6d95f5b2a5c8edc (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-12-09T20:19:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_OtimizaçãoPeriodicidadesFracas.pdf: 2409585 bytes, checksum: f6c5582e68fe17edc6d95f5b2a5c8edc (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-09T20:19:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_OtimizaçãoPeriodicidadesFracas.pdf: 2409585 bytes, checksum: f6c5582e68fe17edc6d95f5b2a5c8edc (MD5) Previous issue date: 2013 / Transformadas de Fourier discretas e os seus espectros de potˆencia associados são utilizados em biologia molecular e na bioinformática para a detecção de periodicidades e regiões codificastes no DNA. Tipicamente, o genoma primeiramente é mapeado para uma série numérica, então é feita sua transformada de Fourier, que será monitorada em busca de periodicidades biologicamente relevantes. A detecção de uma determinada periodicidade é criticamente dependente da forma como o genoma foi convertido numa sequência numérica. Uma vez que existem inúmeras maneiras de se mapear uma sequência de DNA, periodicidades biologicamente importantes podem passar despercebidas. Aqui apresentamos um método que utiliza um algoritmo genético para otimizar o mapeamento numérico que maximizará um pico em dada frequência do espectro de potências de Fourier. Nós mostramos que o método tem a capacidade de detectar periodicidades fracas que são normalmente perdidas com esquemas de mapeamento tradicionais, e dessa forma, aumenta em muito a sensibilidade de técnicas baseadas na transformada de Fourier discreta. Para exemplificar o uso deste novo método, nós o aplicamos para encontrar as periodicidades de 3 e 10 nucleotídeos em trechos dos genomas do Plasmodium falciparum e Drosophila melanogaster, além de aplicá-lo também em sequências promotoras de Homo sapiens, que foram recentemente analisadas para a detecção do período de 10 nucleotídeos. Trabalhos anteriores publicaram afirmações conflitantes sobre a presença desta periodicidade em torno dos sítios de iniciação de transcrição (TSS) de promotores humanos. Nós mostramos que esta periodicidade está realmente presente nessas sequências e também que o nosso método é robusto e eficiente para descobrir periodicidades fracas em genomas. ______________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Discrete Fourier transforms and their associated power spectra are used in molecular biology and bioinformatics for detecting periodicities and protein-coding genes. Typically, the genome is mapped into a numerical series which is Fourier-transformed and monitored for biologically relevant periodicities. The detection of a given periodicity is critically dependent on how the genome was converted into a numerical sequence. Since there are numerous ways of mapping the sequence, biologically important periodicities may go undetected. Here we present a method which employs a genetic algorithm to detect periodicities by optimising a given frequency peak of the Fourier power spectrum. We show that the method has the capability of detecting weak periodicities which are ordinarily missed with traditional mapping schemes, therefore greatly enhancing the sensitivity of discrete-Fourier-transform based techniques. To exemplify the use of this new method we apply it to find periodicities of 3 and 10 nucleotides on the Plasmodium falciparum and Drosophila melanogaster genomes and Homo sapiens promoter sequences, which were recently analysed for the detection of period 10. Previous works made confliting assertions about the presence of this periodicity around human TSS. We show that this periodicity is indeed present in these sequences and show that our method is robust and efficient to uncover weak periodicities in genomes.

Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa de Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by giuliana silveira (giulianagphoto@gmail.com) on 2016-02-19T18:08:21Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_PropecçãoPeptídeosBioativos.pdf: 3147932 bytes, checksum: cb1d8983cbab4d5d804dd91c66b36c7a (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2016-02-25T16:55:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_PropecçãoPeptídeosBioativos.pdf: 3147932 bytes, checksum: cb1d8983cbab4d5d804dd91c66b36c7a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-25T16:55:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_PropecçãoPeptídeosBioativos.pdf: 3147932 bytes, checksum: cb1d8983cbab4d5d804dd91c66b36c7a (MD5) Previous issue date: 2015 / A busca de peptideos bioativos com potencial capacidade de interacao e modulacao da atividade proteolitica do proteassoma 20S constitui tema de grande interesse em biologia celular. O uso de inibidores de proteassoma ja vem sendo aplicado no tratamento de doencas como o cancer, e varias moleculas encontram-se atualmente em fase de testes clinicos. O presente trabalho teve como objetivos a purificacao do proteassoma 20S e a avaliacao do potencial inibitorio de peptideos sobre a atividade quimotripsina-simile do complexo 20S. Neste intuito duas abordagens distintas foram utilizadas: 1) analise do potencial inibitorio de moleculas analogas ao inibidor de proteassoma PR-11, e 2) obtencao de novos alvos com capacidade de interacao e modulacao da atividade proteassomal por meio de tripsinolise de proteinas sericas. Para purificacao do proteassoma 20S utilizou-se de filtracao molecular e troca ionica, as quais proporcionaram a obtencao de dois perfis distintos do complexo 20S, apos analise por eletroforese unidimensional. A confirmacao das identidades das subunidades do proteassoma e a identificacao de proteinas co-eluidas foram realizadas por espectrometria de massas. Quanto ao potencial inibitorio dos analogos do PR-11, foram selecionados os peptideos F12, G9F12 e I9F12. Esses demonstraram eficacia nas taxas de inibicao da atividade proteolitica do proteassoma 20S com destaque para o F12 o qual foi capaz de inibir em cerca de 70 e 53% a atividade quimotripsina simile, quando utilizado na concentracao de 0,25 e 0,125 ƒÊM respectivamente. Para a identificacao de novos alvos moduladores de atividade do proteassoma, proteinas sericas foram digeridas com tripsina seguido de avaliacao do potencial inibitorio dos peptideos resultantes. Os ensaios de atividade demonstraram cerca de 40 e 10% de inibicao quando os peptideos tripticos totais foram empregados nas concentracoes de 50 ƒÊM e 6,25 ƒÊM, respectivamente. A identificacao dos peptideos tripticos ligantes de proteassoma por espectrometria de massas necessitara de novas abordagens tecnicas para ligacao e recuperacao da fracao peptidica ligada. Os resultados obtidos neste trabalho permitiram concluir que analogos estruturais do PR-11 representam moleculas inibidoras de alta potencia e ainda que a tecnica de tripsinolise serica utilizada, e capaz de fornecer peptideos alternativos para modulacao da atividade proteassomal. ________________________________________________________________________________ / ABSTRACT : The search for bioactive peptides endowed with modulatory capability over the activity of 20S proteasomes is a subject of major interest in cell biology. Proteasome inhibitors have been applied in the treatment of diseases such as cancer, and several new molecules are currently under investigation. This study aimed the purification of the 20S murine proteasome and the evaluation of potential inhibitory peptides over its chymotrypsin-like activity. To accomplish these goals two different approaches were used: 1) analysis of the inhibitory activity of three PR-11 derivatives, and 2) generation of new proteasome target molecules through trypsinolysis of serum proteins. 20S proteasome purification was achieved by gel filtration and ion exchange. These chromatographic steps resulted in two distinct and highly homogeneous 20S complexes as judged by one-dimensional gel electrophoresis. Confirmation of the identities for alpha and beta proteasome subunits and co-eluted proteins was made by mass spectrometry. The inhibitory potential of three PR-11 analogs F12, G9F12 and I9F12 was then evaluated. These PR-11 derivatives proved to be efficient 20S proteasome inhibitors highlighting that F12 was able to inhibit approximately 70 and 53% of the chymotrypsin-like activity when used at a concentration of 0.25 and 0.125 μM respectively. For the identification of new target modulators of proteasome activity, serum proteins were digested with trypsin, followed by evaluation of the inhibitory potency of the resulting peptides. Activity assays showed approximately 40 and 10% inhibition when total tryptic peptides were used at concentrations of 50 and 6.25 μM, respectively. The identification of such novel proteasome ligands by mass spectrometry will require the utilization of new approaches for binding and recovering of the bound peptide fraction. The results of this study indicate that structural analogues of PR-11 represent inhibitory molecules endowed with high potency and serum trypsinolysis may offer alternative molecules for modulating proteasome activity.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5212_1.pdf: 4521049 bytes, checksum: cfc53f94923278e9c0ce99384cb0ab07 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / O Toxoplasma gondii (T.gondii) é um dos principais agentes causadores de Uveíte posterior Presumidamente por T. gondii (UPAPT) em diferentes partes do mundo. A infecção predomina em jovens da segunda e terceira década de vida e é considerada a maior causa de perda da acuidade visual e cegueira. O diagnóstico da fase ativa da toxoplasmose ocular é difícil de ser realizado. Os exames sorológicos fornecem uma informação valiosa para realizar o diagnóstico etiológico desta doença, mas freqüentemente, não são conclusivos. O parasito causa a infecção latente. Algumas proteínas identificadas atualmente pela biologia molecular convencional e, utilizadas como marcadores no diagnóstico laboratorial, não conseguem discriminar entre toxoplasmose ativa e crônica, dificultando a intervenção terapêutica no momento adequado. Estudos prévios melhoraram o diagnóstico da toxoplasmose congênita usando immunoblotting bidimensional (2DIB). Nós desenvolvemos um método de 2DIB com o antígeno de taquizoítos da cepa RH do T. gondii para investigar as diferentes respostas dos anticorpos IgA e IgG ao parasito usando o soro de pacientes com e sem UPAPT. 68% das proteínas antigênicas foram reconhecidas especificamente pelos anticorpos IgA presentes no soro de pacientes com UPAPT. Nossos dados sugerem que estas proteínas antigênicas podem ser usadas como possíveis marcadores no diagnóstico da toxoplasmose ocular ativa