Uma estratégia muito simples para estudar as propriedades eletroquímicas para qualquer proteína foi desenvolvida por meio de ligações estáveis de dopamina, um neurotransmissor de mamíferos superiores, com albumina sérica bovina. Os resultados foram avaliados por voltametria cíclica, espectrofluorimetria e espectrofotometria de primeira derivada na região do visível. Eletrodos de pasta de carbono não modificados foram usados para identificar o complexo BSA-5-Cys-DA   em solução, após isolamento por filtração molecular. Um aumento significativo do sinal de fluorescência de emissão em 350 nm em conjunto com o aparecimento de um sinal de absorção em 370 nm também foram identificados para o complexo. Neste sentido, a ligação covalente entre uma proteína teste com a dopamina revelou-se como um modelo favorável para estudos eletroquímicos de proteínas desprovidas de centros redox metálicos, juntamente com a sua capacidade dual para investigação eletroquímica e espectroscópica direta de proteínas, quer imobilizadas ou em solução. / A very simple strategy for studying electrochemical properties for any protein was developed by cross-linking dopamine with BSA. The results were evaluated by cyclic voltammetry, spectrofluorimetry and first-derivative spectrophotometry in the visible range. Unmodified carbon paste electrodes were used for identify the BSA-5-Cys-DA complexes in solution. This approach allowed overlapping the sluggish kinetics of electron transfer exhibited by proteins with non-metalic redox centers near the surface electrode. Furthermore, a marked increased in fluorescence signal at 350 nm emission together with the appearance of a BSA absorption signal at 370 nm arouse from the protein adducts. In this sense the covalent linkage between a test protein with dopamine show it as a dual candidate able to display both electrochemical and spectroscopic signals, and allow the use of this approach for identify and analyze proteins either in solution or immobilized.

Orientador: Mariângela Esther Alencar Marques / Coorientador: Márcia Guimarães da Silva / Banca: Gisele Alborghetti Nai / Banca: Rozany Mucha Dufloth / Resumo: A incidência do adenocarcinoma do colo do útero (AC) está aumentando em muitos países. A associação entre a infecção pelo Papillomavirus Humano (HPV) e o AC ainda permanece incerta. A imunoistoquímica pode auxiliar no diagnóstico nos casos duvidosos, pois algumas condições benignas reativas podem mimetizar processos neoplásicos. Marcadores como bcl-2, Ki-67 e proteína p16INK4A (p16) já foram descritos para ajudar nas dúvidas relacionadas ao epitélio glandular cervical. Trabalhos recentes demonstraram a importância da adição da marcação da proteína Ciclina D1 ao painel imunoistoquímico. A Ciclina D1 é uma proteína sensor chave e integrador dos sinais extracelulares nas células em início até meados da fase G1 do ciclo celular, sendo importante na regulação da proliferação e diferenciação celular. Foram estudados 74 casos de biópsias com diagnóstico de adenocarcinoma de colo do útero, sendo 24 de adenocarcinoma cervical in situ e 50 de adenocarcinoma cervical invasor. No grupo controle, foram incluídas 79 biópsias de colo do útero que continham endocérvice normal ou em condições benignas reativas. A pesquisa de HPV nas biópsias foi realizada pela técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) utilizando os primers específicos (MY09/11 e GP5+/GP6+) e a genotipagem foi realizada empregando-se a técnica de PCR Multiplex utilizando primers específicos para os genótipos 6, 16, 18 e 33. A imunoistoquímica foi realizada nos 74 casos com diagnóstico de adenocarcinoma cervical (tipo in situ e invasor) para os marcadores Ciclina D1, proteína p16, Ki-67 e bcl-2 e em 79 casos controle para a Ciclina D1. O DNAHPV foi observado em 100% dos casos de adenocarcinoma cervical. O genótipo mais frequente foi o HPV18. A Ciclina D1 se apresentou negativa nos casos da doença e positiva nos casos benignos e reativos. O painel imunoistoquímico associando Ciclina D1, p16 e Ki-67 pode ser ferramenta útil na ... / Abstract: The incidence of cervical adenocarcinoma (AC) is increasing in many countries. The association between Human Papillomavirus (HPV) infection and the AC remains uncertain. Immunohistochemistry may help in the diagnosis in doubtful cases, because some benign reactive conditions can mimic neoplastic processes. Markers such as bcl-2, Ki-67 and protein p16INK4A (p16) have been described to assist with questions related to cervical glandular epithelium. Recent studies have shown the importance of adding protein labeling Cyclin D1 into immunohistochemical panel. The Cyclin D1 protein is a key sensor and integrator of extracellular signals into cells in early to mid G1 phase of the cell cycle, which is important in the regulation of cell proliferation and differentiation. We studied 74 patients with biopsy diagnosis of adenocarcinoma of the cervix, 24 of cervical adenocarcinoma in situ and 50 invasive cervical adenocarcinoma, The control group included 79 cervical biopsies containing endocervix normal or benign reactive conditions. The research of HPV in biopsies was performed by the polymerase chain reaction (PCR) using specific primers (MY9/11 and GP5 + / GP6 +) and genotyping was carried out using the Multiplex PCR using primers specific for genotypes 6, 16, 18 and 33. Immunohistochemistry was performed in 74 cases diagnosed with cervical adenocarcinoma (type in situ and invasive) for markers Cyclin D1, p16, Ki-67 and bcl-2, and 79 cases control for Cyclin D1. The HPV DNA was observed in 100% of cases of cervical adenocarcinoma. The most common genotype was HPV18. The Cyclin D1 was found negative in cases of illness and positive in benign and reactive samples. The immunohistochemical panel associating Cyclin D1, p16 and Ki-67 may be useful tool in the characterization and diagnosis of cervical adenocarcinoma / Mestre

A nefropatia diabética (ND) acomete cerca de 10 a 40% dos pacientes com diabete melito tipo 2 (DM2), e estes pacientes constituem a maioria dos casos de insuficiência renal crônica terminal por diabete melito. O aumento da excreção urinária de albumina (EUA) - microalbuminúria - é um importante marcador de risco cardiovascular e da lesão renal. O tratamento da microalbuminúria baseia-se na obtenção do melhor controle metabólico e pressórico possível e no uso de agentes inibidores da enzima conversora de angiotensina. O tratamento da dislipidemia ainda é contraditório. Entre as alternativas terapêuticas, a dieta hipoprotéica tem mostrado, embora com alguma controvérsia, resultados benéficos sobre a progressão da ND, porém a adesão é limitada e a sua segurança a longo prazo ainda não está definida. Em recente estudo em nosso meio foi demonstrado o efeito benéfico de uma dieta à base de carne de galinha sobre o perfil lipídico e EUA em pacientes DM2 microalbuminúricos. O presente estudo teve por objetivo analisar o papel dos componentes das dietas com diferentes fontes protéicas na redução do colesterol sérico em pacientes com DM2 com e sem ND. Foram estudados 30 pacientes (7 mulheres; idade de 57,9 ± 9,8 anos), sendo 14 normoalbuminúricos, com EUA < 20μ/min e 16 com ND, isto é, 10 microalbuminúricos (EUA 20 a 200μg/min) e 6 macroalbuminúricos (EUA > 200μg/min). O delineamento do estudo foi do tipo randomizado, cruzado, controlado, durante o qual os pacientes foram submetidos a três dietas, por um período de 4 semanas cada uma, com um igual período de "washout" entre as dietas. As dietas foram: dieta usual (OU) onde a carne vermelha era predominante; dieta de galinha (DG), onde só esta carne era permitida e dieta hipoprotéica (DH) onde as fontes de proteína eram leite e derivados e vegetais. As dietas prescritas foram isoenergéticas, com cerca de 30% de lipídeos sobre o valor energético total (VET). A DU e DG continham cerca de 1,20 a 1,50 g de proteína/kg de peso/dia e a OH continha de 0,50 a 0,80 g de proteína/kg de peso/dia. A adesão às dietas foi medida a cada 2 semanas, através de história alimentar que incluiu pesagens dos alimentos e entrevistas, e que foi validada pela medida da perda nitrogenada de 24 h. Para cálculo dos nutrientes que compõem as dietas foi utilizado o Programa Nutribase'98 Clinical Nutritional Manager (Cybersoft, Inc. Phoenix, AZ USA), cujo banco de dados é baseado na tabela americana de alimentos, com adaptação para alimentos do nosso meio. Ao final de cada dieta, foram avaliados: colesterol total ( col-total) e triglicerídeos (método enzimático); LOL (fórmula de Friedewald); HOL total e frações 2 e 3 (dupla precipitação com cloreto de manganês, heparina e sulfato de dextran); colesterol não-HDL (col não-HOL) (col-total- colesteroi-HDL) e apolipoproteína 8 (Apo 8) (imunoturbidimetria). Nos pacientes com ND, os níveis de col-total e col não-HDL foram mais baixos após OG (181 ± 41; 136 ± 42 mg/dl) e após OH (181 ± 31; 140 ± 34 mg/dl) em relação à OU (210 ± 37; 159 ± 34 mg/dl, P=O,OOS; P=O, 02). A ingestão de lipídeos totais, ácidos graxos saturados (AGS) e monoinsaturados foi significativamente menor na OG (0,86 ± 0,30; 0,23 ± O, 1 O; 0,27 ±O, 10 g/kg) e OH (0,82 ± 0,29; 0,21 ±O, 10; 0,26 ±O, 10 g/kg) em relação à OU (0,97 ± 0,93; 0,28 ±O, 10; 0,32 ±O, 11; P=O,OOS; P=0,003; P=0,0046), porém a quantidade de colesterol ingerida só foi significativamente menor na DH (0,64 ± 0,44 g/kg; P<0,0001) em relação à OU (3,21 ± 1,12 g/kg) e DG (3,04 ± 1,02 g/kg). A razão P/S foi significativamente maior nas DG (1 ,49 ± 0,56) e OH (1,68 ± 0,82) em relação à OU (1,14 ± 0,48; P=0,002). Foi observada uma correlação significativa entre a ingestão protéica (g/kg) proveniente da carne vermelha na DU e os níveis séricos de col-total (rs=0,583; P<0,05), colesterol-LDL (r5=0,65; P<0,05), col não-HDL (rs=0,517; P<0,05) e Apo 8 (r5=0,58 P<0,05) somente nos pacientes com ND, porém a mesma não ocorreu nos pacientes normoalbuminúricos. Conclui-se que tanto uma dieta normoprotéica à base de carne de galinha quanto uma DH lactovegetariana têm o mesmo impacto na redução dos níveis séricos de col-total e col não-HDL dos pacientes com DM2 com micro e macroalbuminúria e esse efeito provavelmente é devido à redução da ingestão de AGS da dieta com conseqüente aumento da relação ácidos graxos poliinsaturados/saturados. A dieta de galinha, portanto, pode ser uma alternativa terapêutica com efeitos benéficos sobre os lipídeos séricos, na progressão da nefropatia diabética e da aterosclerose nestes pacientes. / Approximately 10-40% of type 2 diabetes mellitus (DM2) patients develop diabetic nephropathy (DN), and these patients constitute the majority of the cases of end-stage renal disease. The raise in urinary albumin excretion rate (UAER) - microalbuminuria - is an important marker of cardiovascular and renal disease. Treatment is based on reaching the best metabolic and blood pressure contrai and using of angiotensin-converting enzyme inhibitors. Treatment of dislipidemia remains controversial. Other alternativas for treating DN are the low-protein diets but unfortunately, compliance to these diets is poor and its long-term safety has not been established. Recently it was reported that a diet based on chicken as the only source of meat improved the serum lipid profile and reduced UAER in DM2 patients with microalbuminuria. The aim of this study was to analyse the role of dietary nutrients from diets with different protein sources related to the reduction on cholesterol leveis in patients with DM2 with and without DN. A cross-over clinicai trial was carried out with 30 DM2 subjects (7 femate; age=57.9 ± 9.8 years), including 14 normoalbuminuric (UAER < 20μg/min) and 16 with DN, where 10 were microalbuminuric (UAER 20 - 200μg/min) and 6 were macroalbuminuric (UAER > 200μg/min) subjects. Patients followed, in a random arder, their usual diet (UD), a chicken-based diet (CO) - in which red meat was replaced by chicken - and a low-protein diet (LPD), where milk and vegetable were the only protein source. Ali diets were isoenergetic and had a similar fat content (30% of the total energy). There was a 4-week washout period between diets. The average protein content in UD and CO was 1.3-1.5 g protein/kg/day, whereas the proteín content in LPD was 0.5-0.8 g protein/kg/day. A 24-h urinary nitrogen measurement and 2 days of weigh diet records in biweekly interviews confirmed compliance with the diet. To analyse the nutrient content of each diet the Software Clinicai Nutribase'98 Clinical Nutritional Manager (Cybersoft, Inc. Phoenix, AZ USA) was used. This program is based on the U.S. Department of Agricultura food table and supplemented with information from manufactorers with particular food from our region. At the end of each diet, patients underwent a clinicai and metabolic control evaluation, as well as measurements of total cholesterol, triglycerides (enzymatic method); LDL-cholesterol (Friedwald equation); HDL-cholesterol and HDL2 and HDL3 (double precipitation with manganese chloride, heparin, and dextran suphate), non-HDL cholesterol (total cholesterol - HDL-cholesterol) and apolipoprotein B (Apo B) (immunoturbidimetry). In patients with micro- and macroalbuminuria, total and non-HDL cholesterollevels were lower after CO (181 ± 41; 136 ± 42 mg/dl) and after LPD (181 ± 31; 140 ± 34 mg/dl) than after UD (210 ± 37; 159 ± 34 mg/dl, P=O,OOS; P=0,02). Total fat, saturated (SFA) and monounsaturated fatty acids intake was lower on the CD (0,86 ± 0,30; 0,23 ±O,1O; 0,27 ± 0,10 g/kg) and on the LPD (0,82 ± 0,29; 0,21 ± O,1O; 0,26 ± O,1O g/kg) than on the UD (0,97 ± 0,93; 0,28 ± 0,10; 0,32 ± 0,11; P=O,OOS; P=0,003; P=0,0046 ANOVA). However, cholesterol intake was significantly lower only on the LPD (0,64 ± 0,44 g/kg; P<0,0001 ANOVA) comparing to UD (3,21 ± 1,12 g/kg) and LPD (3,04 ± 1,02 g/kg). PIS ratio was higher on the CD (1,49 ± 0,56) and LPD (1,68 ± 0,82) than on the UD (1,14 ± 0,48; P=0,002). In patients with DN significant correlations were observed between meat-protein intake on the UD and serum leveis of total cholesterol (rs=0,583; P<0,05), LDL-cholesterol (rs=0,65; P<0,05), non-HDL cholesterol (rs=0,517; P<0,05) and Apo B (rs=0,58 P<0,05). These significant correlations were not observed in normoalbuminuric patients. In conclusion, either a normoproteic diet with chicken as the only source of meat or a LPD based on milk and vegetables as protein source have the same effect on the reduction of both total cholesterol and non-HDL cholesterollevels in DM2 patients with micro- and macroalbuminuria. This effect is probably due to the reduction on SFA intake and consequently increase on PIS ratio. The CO could be an alternative treatment for DN with beneficiai effects on the lipid pro•file, since it may reduce the progression of DN and atherosclerosis in these patients.

Orientador: Leandro Cristante Oliveira / Coorientador: Fernando Alves de Melo / Banca: Ana Carolina Migliorini Figueira / Banca: Jorge Chahine / Resumo: A proteína Carboxyl-terminal Src Kinase, Csk, é uma proteína tirosina quinase com função de reguladora essencial para as proteínas da família das Src quinases (SFKs). Seu mal funcionamento regulatório tem sido reportado como responsável por diversas moléstias como: deformações na fase de desenvolvimento embrionário, manifestação de cânceres de mama, próstata, pâncreas, leucemia, linfoma e cólon. A CSK apresenta uma alta homologia sequencial com as SFKs, mas com disposições distintas de seus domínios. Outro diferencial é a ausência de uma porção terminal contendo uma tirosina que possa ser fosforilada, elemento fundamental para os demais membros das SFKs que podem se autofosforilar. Curiosamente, sua estrutura cristalográfica apresenta conformações distintas classificadas como formas ativa e inativa sendo o objetivo principal desse trabalho, modelar as transições e avaliar os seus possíveis mecanismos fazendo um link de como mudanças conformacionais entre essas duas conformações estão relacionadas com a ação da proteína quinase Csk baseando-se em experimentos in vitro. Complementarmente, a proteína adaptadora Grb2 relacionada com regulações de proteínas pertencente ao universo das quinases como a FGFR2, também é alvo do estudo. O conjunto quinase mais proteína adaptadora desempenham um importante papel na transmissão de sinal em cascatas de sinalizações envolvidas em processos celulares fundamentais como proliferação celular, diferenciação e apoptose. Dessa maneira, Grb2 é um... / Abstract: The Carboxyl-terminal Src Kinase (Csk) is a protein that plays an essential role for the down-regulation of Src kinase family proteins (SFKs). When Csk presents malfunction on its regulation action, several diseases can occurs, like deformations during the fetal develop, mama, prostate, pancreas, colon cancers, as well leukemia and lymphomas. Csk presents a high sequence homology with other SFK members, but without a similar arrangement of domains. Yet, the Csk lacks a tyrosine tail, so it cannot auto-phosphorylate, but it can phosphorylate their family members. Surprisingly, the crystallography structure of Csk presents two distinct conformations classified as active and inactive. The main objective of this work is to construct a model to evaluate transitions and possible mechanisms involving Csk, making a link between conformational changes and its action. On the other hand, the adaptor protein Growth factor Receptor-Bound protein 2 (Grb2) is related to the universe of protein regulators linked to the proteins kinase as the Fibroblast Growth Factor Receptor 2 (FGFR2), being an important target for study. The set kinase and adaptor proteins is important for signaling processes involving cell proliferation, differentiation and apoptosis. Thus, Grb2 is an potential aim for the evaluation of interactions with small anticarcinogen molecules as 1,2-benzopyrone Coumarin and 2',3,4',5,7-pentahydroxyflavon Morin. In vitro essays verified the interaction between the Grb2-coumarin and ... / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-12-18Bitstream added on 2014-06-13T19:19:56Z : No. of bitstreams: 1 marques_dp_dr_arafcf.pdf: 1011746 bytes, checksum: 390ce3f3fe90df8ee33232cb2c868a7d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (FUNDUNESP) / Os hidrolisados de proteínas do soro de queijo vêm sendo amplamente utilizados para diversos fins. Dependendo das enzimas utilizadas e meio de reação, podemos obter hidrolisados com diferentes características. O intuito do presente trabalho foi hidrolisar as proteínas do soro de queijo bovino de diferentes maneiras, variando-se a temperatura de reação e modo de adição das enzimas, a fim de se obter hidrolisados com diferentes graus de hidrólise para posterior aplicação em ensaios animais. Os hidrolisados escolhidos para aplicação nos ensaios biológicos foram obtidos pela ação das enzimas pepsina, tripsina, quimotripsina e carboxipeptidase a 50ºC. Dois hidrolisados diferentes foram preparados: um com maior quantidade de pequenos peptídeos (oligo, di e tripeptídeos) e outro com maior quantidade de aminoácidos livres. O soro sem hidrólise também foi utilizado como suplementação para um outro grupo de animais. A intenção foi testar os dois diferentes hidrolisados e o soro sem hidrólise como suplemento para ratos idosos, visando a minimização da sarcopenia. Diversos estudos apontam que fórmulas contendo oligopeptídeos, especialmente di- e tripeptídeos, possuem maior valor nutricional do que uma mistura equivalente de aminoácidos livres ou proteínas intactas. Tomando-se como base essa informação, delineou-se a pesquisa esperando-se que, o grupo suplementado com as proteínas parcialmente hidrolisadas obtivesse um melhor desempenho na minimização da sarcopenia. Todos os 3 grupos suplementados obtiveram aumento na massa muscular e óssea diferindo significativamente em relação ao controle (não suplementado) porem, o que apresentou efeitos mais positivos na minimização da sarcopenia foi realmente o grupo suplementado por proteínas parcialmente hidrolisadas. Paralelamente a esse estudo... / The cheese whey hydrolysates have been widely used for various purposes. Depending on the enzymes used and the reaction medium, we can obtain hydrolysates with different characteristics. The purpose of this study was to hydrolyze bovine cheese whey proteins in different ways, varying the temperature of reaction and enzyme addition, in order to obtain hydrolysates with different degrees of hydrolysis for application in animal tests. The hydrolysates chosen for application in biological assays were obtained by the action of enzymes pepsin, trypsin, chymotrypsin and carboxypeptidase at 50°C. Two different hydrolysates were prepared: one with a larger amount of small peptides (oligo-, di-and tripeptides) and another with larger amount of free amino acids. Serum without hydrolysis was also used as a supplement to another group of animals. The intention was to test the two different hydrolysates and whey without hydrolysis as a supplement to old age rats in order to minimize the sarcopenia. Several studies indicate that formulas containing oligopeptides, especially di-and tripeptides, have higher nutritional value than an equivalent mixture of free amino acids or intact proteins. Taking this information as a basis, the research was then outlined expecting that the group supplemented with partially hydrolyzed protein could obtain a better performance in reducing the sarcopenia. The all 3 supplemented groups showed increase in muscle mass and bone and differ significantly from control (not supplemented). However, the group who presented the most positive effects in reducing the sarcopenia was actually the group supplemented with partially hydrolyzed protein. In parallel with this study, in sandwich PhD, the attainment of immobilized pepsin and trypsin (derivatives) in solid support, stable was studied, for further application to obtain... (Complete abstract click electronic access below)

Mestre -- Sao Paulo (Estado). Secretaria da Saude. Coordenacao dos Institutos de Pesquisa. Programa de Pos-Graduacao em Ciencias, Sao Paulo, 2004.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-29Bitstream added on 2014-08-13T18:01:11Z : No. of bitstreams: 1 000736017_20140829.pdf: 268216 bytes, checksum: d24c916cb4f2f5d62140603bab304a45 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-03T16:24:43Z: 000736017_20140829.pdf,Bitstream added on 2014-10-03T16:27:41Z : No. of bitstreams: 2 000736017_20140829.pdf.txt: 31163 bytes, checksum: e21dedff28a6a8d49196eb12ad922ee5 (MD5) 000736017.pdf: 1092117 bytes, checksum: 23730ac0c228da8c6df28821beccf960 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-03T16:33:17Z: 000736017.pdf,Bitstream added on 2014-10-03T16:43:31Z : No. of bitstreams: 2 000736017_20140829.pdf.txt: 31163 bytes, checksum: e21dedff28a6a8d49196eb12ad922ee5 (MD5) 000736017.pdf: 1092117 bytes, checksum: 23730ac0c228da8c6df28821beccf960 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-03T16:48:57Z: 000736017.pdf,Bitstream added on 2014-10-03T16:49:48Z : No. of bitstreams: 1 000736017.pdf: 1092117 bytes, checksum: 23730ac0c228da8c6df28821beccf960 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-10-27T11:47:13Z: 000736017.pdf,Bitstream added on 2014-10-27T11:48:06Z : No. of bitstreams: 1 000736017.pdf: 1092117 bytes, checksum: 23730ac0c228da8c6df28821beccf960 (MD5) / As β-defensinas são as proteínas mais amplamente estudadas dentre as três subfamílias das defensinas, uma vez que possuem extensa atividade antimicrobiana e são produzidas por vários tipos de células epiteliais, fornecendo assim proteção às membranas das células do hospedeiro. Em mamíferos, além de sua atividade antimicrobiana, essas proteínas atuam na maturação do espermatozoide, na capacitação espermática, na proteção do espermatozoide contra a resposta imune da fêmea e na expressão diferenciada e específica nos tecidos reprodutivos, sugerindo assim, uma importante função na reprodução e na fertilidade. O painel de linhagens celulares híbridas irradiadas (painel RH) construído para o genoma do búfalo (BBURH5000) vem sendo utilizado com sucesso nos estudos de mapeamento dos cromossomos bubalinos. A estratégia do mapeamento RH, ou seja, a utilização do painel RH associado a análises estatísticas, determina a ordem linear de marcadores nos cromossomos, sendo uma importante ferramenta para a construção de mapas físicos de alta resolução do genoma, e também na construção de mapas comparativos entre espécies. O presente trabalho teve por objetivo utilizar o painel BBURH5000 para mapear um conjunto de genes das β-defensinas no cromossomo 14 bubalino (BBU14) e a construção de um mapa comparativo in silico entre o BBU14 e seu homólogo em bovino. Para tal, foram testados com DNA bubalino, sequências de iniciadores para PCR provenientes de oito genes das β-defensinas, localizados no cromossomo 13 bovino (BTA13), o qual é homólogo ao BBU14. Do total de marcadores testados, seis amplificaram produtos de PCR adequados ao mapeamento utilizando o painel BBURH5000. No entanto, dois marcadores foram excluídos na etapa de genotipagem. A frequência de retenção dos marcadores no painel apresentou uma variação de 16,66% com o marcador BBD125 a 20,00% com ... / The β-defensins are proteins most widely studied of the three subfamilies of defensins, because have extensive antimicrobial activity and are produced by several types of epithelial cells, thereby providing protection to the membranes of host cells. In mammals, in addition to their antimicrobial activity, these proteins act in the maturation of spermatozoa, in sperm capacitation, in protecting the sperm against the female immune response and specific and differential expression in reproductive tissues, thus suggesting an important role in reproduction and fertility. The radiation hybrid panel (RH panel) constructed for buffalo genome (BBURH5000) has been successfully used in mapping studies of buffalo chromosomes. The RH mapping strategy, in other words, use of RH panel associated statistical analysis, determines the linear order of markers on chromosomes and is an important tool for the construction of physical maps of high resolution genome and also in the construction of comparative maps between species. The present study has the purpose to use the BBURH5000 panel to map a set of β-defensins genes on buffalo chromosome 14 and the construction of a comparative map in silico between BBU14 and homologous bovine. To this end, we tested buffalo DNA sequences of primers for PCR from eight genes of β-defensins, located on bovine chromosome 13 (BTA13), which is homologous to BBU14. Of the markers tested, six amplified suitable PCR product to the mapping using BBURH5000 panel. However, two markers were excluded in step genotyping. The retention frequency of markers on the panel presented a variation of 16.66% with a marker BBD125 to 20.00% with markers BBD119 and BBD122. The comparative analysis in silico between the BBU14 RH map and the sequence map of BTA13 allowed to indicate the location of these markers on buffalo chromosome 14

Orientador: Kleber Tomás de Resende / Co-orientadora: Marcia Helena Machado da Rocha Fernandes / Co-orientador: Normand St-Pierre / Banca: Iraides Ferreira Furusho Garcia / Banca: Marcelo Teixeira Rodrigues / Banca: Jane Maria Bertocco Ezequiel / Banca: Izabelle Auxiliadora Molina de Almeida Teixeira / Resumo: Utilizamos a técnica de abate comparativo para verificar a diferenças entre categorias sexuais nas exigências de proteína e energia de caprinos Saanen em fase final de crescimento. Os animais foram alocados aleatoriamente em dois ensaios delineados para investigar as exigências em proteína e energia para mantença e ganho. No ensaio de mantença, utilizamos 85 animais (26 machos não castrados, 30 machos castrados e 29 fêmeas), com MC inicial de 30,3 ± 0,87 kg. Destes, 30 animais (8 machos não castrados, 9 machos castrados e 13 fêmeas) foram abatidos ao início do experimento para compor os animais de composição corporal referência inicial. Os demais animais foram aleatoriamente distribuídos em delineamento com parcelas subdivididas, sendo os principais fatores 3 condições sexuais e 3 níveis de alimentação. A parcela foi composta por 3 animais do mesmo sexo, aleatoriamente designados a um nível de alimentação: alimentado à vontade, 75% e 50% do consumo à vontade, de forma que foram abatidos com mesmo número de dias que o animal com alimentação à vontade levou para atingir 45 kg de MC. A exigência líquida de proteína para mantença (PLm) estimada foi 2,09 g/kg PCV0,75 e não diferiu entre condições sexuais. A exigência líquida de proteína para ganho (PLg) foi obtida com dados de 65 caprinos (20 machos não castrados, 22 machos castrados e 23 fêmeas) alimentados à vontade em delineamento inteiramente casualizado, a PLg variou de 154 a 146 g/kg de ganho em PCV entre 30 a 45 kg de MC. Recomendamos que a exigência metabolizável total de proteína (g/dia) para crescimento de caprinos Saanen seja estimada pelo modelo: PMt= [(4,31 * MC0,75) /kpm] + [(127,5* MC))/ kpg] * GPDdesejado)... / Abstract: We used the comparative slaughter technique to verify differences among gender in protein and energy requirements of Saanen goats in the final phase of growth. Animals were randomly allocated to 2 trials, designed to investigate protein and energy requirements for maintenance and growth. To determine the maintenance requirements we used 85 goats (26 intact males, 30 castrate males, and 29 females) with initial BW of 30.32 ± 0.87 kg. 30 goats (8 intact males, 9 castrated males and 13 females) were slaughtered to use as baseline group. The other goats were assigned in a split block design in a 3 × 3 factorial arrangement (3 genders - intact males, castrate males, and females with 3 DMI levels - ad libitum, and 75% and 50% of ad libitum intake). A slaughter group included one kid from each treatment and was slaughtered when the ad libitum kid reached 45 kg of BW. Net protein requirements for maitenance was the same for all genders tested and equal to 2.09 g/kg EBW0.75. Net protein requirements for growth were obtained using 65 goats (20 intact males, 22 castrate males, and 23 females) fed ad libitum in a completely randomized design and ranged from 154 to 146 g/kg of EBW gain as BW varied from 30 to 45 kg. WE recommended the following equation to estimate total metabolizable protein requirements (g/day): PMt= [(4,31 * BW0.75) /kpm] + [(127.5* BW))/ kpg] * ADGexpected)... / Doutor

Orientador: Maria Regina Barbieri de Carvalho / Coorientador: Valdir Augusto Neves / Banca: José Paschoal Batistuti / Banca: João Bosco Faria / Banca: Paulo cezar Bastianello Campagnol / Banca: Hirasilva Borba / Resumo: A Moringa oleifera Lam. (família Moringaceae) é uma leguminosa perene e arbórea originária do continente asiático, a qual vem sendo cultivada no Brasil por apresentar baixo custo de produção. Embora algumas populações têm empregado esta planta na alimentação, existem poucas informações sobre suas características químicas e nutricionais. O objetivo do trabalho foi caracterizar parcialmente a proteína da folha e verificar a potencialidade antioxidante em produto cárneo. Foram elaborados hambúrgueres adicionados de farinha de folha de moringa (0,0; 0,10; 0,15; 0,20 e 0,25%) e com antioxidante sintético propil galato (0,01%). A determinação de pH, medidas de cor e TBARS foram realizadas com 1, 30, 60, 90, 120 dias de armazenamento a -18 °C. O fracionamento das proteínas das folhas de moringa pelo critério de solubilidade em diferentes sistemas revelou teores de 3,13% de albuminas, 0,33% de globulinas, 2,16% de prolaminas, 3,45% de glutelinas e 70,1% de proteínas insolúveis. A hidrólise proteica da farinha da folha empregando-se dodecil sulfato de sódio (SDS) e 2-mercaptoetanol (Me) indicou valores de 39,45 % e 29,45%, respectivamente. A proteína total apresentou baixa digestibilidade in vitro (31,83%). As substâncias antinutricionais avaliadas foram fenóis totais (20,69 mg.g-1), inibidores de tripsina (1,45 UTI.mg-1), nitrato (17 mg.g-1) e ácido oxálico (10,5 mg.g-1) e não foi detectado glicosídeos cianogênicos. As medidas de pH dos hambúrgueres ficaram compreendidas entre 5,48 e 5,90 e a intensidade de amarelo foi maior com a adição de moringa. A adição de farinha de folhas de moringa não preveniu a oxidação com valor máximo de 0,571 mg.MDA.Kg-1, porém agregou quantidades de fibras nas formulações, o que pode ser considerado como fonte deste nutriente. As análises sensoriais demonstraram... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Moringa oleifera Lam (Moringaceae family) is a perennial leguminous tree from Asia, which has been cultivated in Brazil because of its low production cost. Although some people have used this plant as food, there is little information about its chemical and nutritional characteristics. The objective of this study was to partially characterize the leaf protein and verify the antioxidant potential in meat product. Hamburgers were prepared adding Moringa leaf meal (0.0, 0.10, 0.15, 0.20 and 0.25%) and propyl gallate synthetic antioxidant (0.01%). Determination of pH, color measurements and TBARS were performed with 1, 30, 60, 90, 120 days storage at -18C. The fractionation of proteins from the leaves of Moringa by the criterion of solubility in different systems showed levels of albumin 3.13%, globulin 0.33%, 2.16% prolamin, 3.45% glutelin, and 70.1% insoluble protein. Protein hydrolysis of the leaf flour with dodecyl sodium sulfate (SDS) and 2-mercaptoethanol (Me) indicated values of 39.45% and 29.45% respectively. Total protein showed low in vitro digestibility (31.83%). Antinutritional substances evaluated were total phenol (20.69 mg.g-1), trypsin inhibitors (1.45 UTI.mg-1), nitrate (17 mg.g-1) and oxalic acid (10.5 mg.g-1). Cyanogenic glycosides were not detected. PH measurements of hamburgers were between 5.48 and 5.90 and the yellow intensity was higher with the addition of Moringa. The addition of Moringa leaves flour did not prevent oxidation maximum value of 0.571 mg.MDA.Kg-1, but the quantity of fiber added in the formulations, which can be considered as a source of this nutrient. Sensory analyzes showed that there was good acceptance of hamburgers made with Moringa, with grades between 6.83 (0.25% formulation) to 7.51 (0.1% formulation). There was no antioxidant effect in leaves during the product storage, and their inclusion did not hinder the product acceptance / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-08-21Bitstream added on 2014-06-13T19:00:37Z : No. of bitstreams: 1 teixeira_emb_dr_arafcf.pdf: 342566 bytes, checksum: 1fd29a117bb7c065e571907d8d11b722 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A Moringa oleifera Lam. (família Moringaceae) é uma leguminosa perene e arbórea originária do continente asiático, a qual vem sendo cultivada no Brasil por apresentar baixo custo de produção. Embora algumas populações têm empregado esta planta na alimentação, existem poucas informações sobre suas características químicas e nutricionais. O objetivo do trabalho foi caracterizar parcialmente a proteína da folha e verificar a potencialidade antioxidante em produto cárneo. Foram elaborados hambúrgueres adicionados de farinha de folha de moringa (0,0; 0,10; 0,15; 0,20 e 0,25%) e com antioxidante sintético propil galato (0,01%). A determinação de pH, medidas de cor e TBARS foram realizadas com 1, 30, 60, 90, 120 dias de armazenamento a -18 °C. O fracionamento das proteínas das folhas de moringa pelo critério de solubilidade em diferentes sistemas revelou teores de 3,13% de albuminas, 0,33% de globulinas, 2,16% de prolaminas, 3,45% de glutelinas e 70,1% de proteínas insolúveis. A hidrólise proteica da farinha da folha empregando-se dodecil sulfato de sódio (SDS) e 2-mercaptoetanol (Me) indicou valores de 39,45 % e 29,45%, respectivamente. A proteína total apresentou baixa digestibilidade in vitro (31,83%). As substâncias antinutricionais avaliadas foram fenóis totais (20,69 mg.g-1), inibidores de tripsina (1,45 UTI.mg-1), nitrato (17 mg.g-1) e ácido oxálico (10,5 mg.g-1) e não foi detectado glicosídeos cianogênicos. As medidas de pH dos hambúrgueres ficaram compreendidas entre 5,48 e 5,90 e a intensidade de amarelo foi maior com a adição de moringa. A adição de farinha de folhas de moringa não preveniu a oxidação com valor máximo de 0,571 mg.MDA.Kg-1, porém agregou quantidades de fibras nas formulações, o que pode ser considerado como fonte deste nutriente. As análises sensoriais demonstraram... / Moringa oleifera Lam (Moringaceae family) is a perennial leguminous tree from Asia, which has been cultivated in Brazil because of its low production cost. Although some people have used this plant as food, there is little information about its chemical and nutritional characteristics. The objective of this study was to partially characterize the leaf protein and verify the antioxidant potential in meat product. Hamburgers were prepared adding Moringa leaf meal (0.0, 0.10, 0.15, 0.20 and 0.25%) and propyl gallate synthetic antioxidant (0.01%). Determination of pH, color measurements and TBARS were performed with 1, 30, 60, 90, 120 days storage at -18C. The fractionation of proteins from the leaves of Moringa by the criterion of solubility in different systems showed levels of albumin 3.13%, globulin 0.33%, 2.16% prolamin, 3.45% glutelin, and 70.1% insoluble protein. Protein hydrolysis of the leaf flour with dodecyl sodium sulfate (SDS) and 2-mercaptoethanol (Me) indicated values of 39.45% and 29.45% respectively. Total protein showed low in vitro digestibility (31.83%). Antinutritional substances evaluated were total phenol (20.69 mg.g-1), trypsin inhibitors (1.45 UTI.mg-1), nitrate (17 mg.g-1) and oxalic acid (10.5 mg.g-1). Cyanogenic glycosides were not detected. PH measurements of hamburgers were between 5.48 and 5.90 and the yellow intensity was higher with the addition of Moringa. The addition of Moringa leaves flour did not prevent oxidation maximum value of 0.571 mg.MDA.Kg-1, but the quantity of fiber added in the formulations, which can be considered as a source of this nutrient. Sensory analyzes showed that there was good acceptance of hamburgers made with Moringa, with grades between 6.83 (0.25% formulation) to 7.51 (0.1% formulation). There was no antioxidant effect in leaves during the product storage, and their inclusion did not hinder the product acceptance