Apesar dos avanços sobre a efetiva participação das células T reguladoras (Treg) na resposta imune antitumoral, ainda existem vários pontos que precisam ser esclarecidos. Visto que, os fatores que controlam a migração destas células para o microambiente tumoral ainda não estão totalmente definidos, o esclarecimento dos mecanismos de migração de células Treg no contexto do câncer poderia fornecer novos alvos para o desenvolvimento de terapias mais específicas. Diversos modelos de estudo demonstraram que o recrutamento preferencial de células Treg ao invés de outros tipos de células T pode ser explicado pela expressão diferencial de receptores de quimiocinas como o CCR5. Assim, é de extrema importância estabelecer qual é o papel de CCR5 na migração de células Treg em tumores induzidos quimicamente e seu envolvimento no desenvolvimento tumoral. Baseado no exposto, o presente estudo analisou o envolvimento de CCR5 na migração de células Treg e a sua correlação com o desenvolvimento de carcinoma espinocelular (CEC) induzido quimicamente. Os resultados obtidos demonstraram que camundongos geneticamente deficentes de CCR5 (CCR5KO) apresentaram baixo número de células Treg nas lesões e foram menos suscetíveis ao desenvolvimento de carcinoma espinocelular. Na fase de progressão tumoral verificou-se o desenvolvimento de CEC in situ por animais CCR5KO em combinação com a maior infiltração leucocitária, enquanto camundongos do grupo controle (WTCEC) apresentaram lesões de CEC bem diferenciado associado à elevada frequência de células Treg no microambiente tumoral e menor infiltração leucocitária. Interessantemente, a transferência adotiva de células Treg CCR5+ para animais CCR5KO (CCR5CEC Treg) resultou no acúmulo destas células no microambiente tumoral, elevado nível de CCL4, CCL17 e CCL22, e aumento da suscetibilidade desses animais à carcinogênese química. Verificou-se o desenvolvimento de CEC indiferenciado por animais CCR5CEC Treg e este foi associado à elevada frequência de macrófagos, células mielóides e dendríticas, linfócitos CD19+, T CD4+, T CD8+ e células Treg na fase de progressão tumoral. Outro aspecto relevante de nosso estudo foi à observação de que a transferência adotiva de células T CD4+CD25-CCR5+ para animais CCR5KO (CCR5CEC CD4+) induziu o desenvolvimento de CEC moderadamente diferenciado com características intermediárias as lesões observadas em animais WTCEC e CCR5CEC Treg. A transferência adotiva de células T CD8+CCR5+ para animais CCR5KO (CCR5CEC CD8+) promoveu o aparecimento precoce de papilomas e inibiu a progressão de papilomas para o CEC. A menor suscetibilidade à carcinogênese química de animais CCR5CEC CD8+ foi associada ao alto número de macrófagos, células mielóides, linfócitos B e T CD8+, células NK detectado nas lesões destes animais. Dessa forma, os resultados descritos estabelecem que a quimiotaxia de células Treg para o microambiente tumoral é dependente de CCR5 e estas células regulam aspectos críticos desta doença, sugerindo que o bloqueio da migração de células Treg CCR5+ seria uma importante estratégia imunoterapêutica no combate deste tipo de câncer. / Considering the advances on the effective participation of regulatory T cells (Treg) in the antitumor immune response, there are still several points that need to be clarified. The mechanisms that control the Treg cells migration to the tumor microenvironment are not completely defined, for these reason, establish these mechanisms could provide new targets for the development of more specific therapies. Several study models have demonstrated that preferential recruitment of Treg cells rather than other types of T cells can be explained by the differential expression of chemokine receptors such as CCR5. Thus, the present study examined the involvement of CCR5 in the migration of Treg cells and their correlation with the development of squamous cell carcinoma (SCC) chemically induced. The results showed that CCR5 knockout mice (CCR5KO) showed a low number of Treg cells in the lesions and these animals were less susceptible to the development of squamous cell carcinoma. SCC in situ was developed in CCR5KO mice and associated with high leukocytes infiltration, whereas the development SCC well differentiated in the control group (WTSCC) was associated with a high number of Treg cells and lower leukocyte infiltration in the tumor microenvironment. Interestingly, adoptive transfer of CCR5+Treg cells to CCR5KO mice (CCR5SCC Treg) resulted in the accumulation of these cells, high levels of CCL4, CCL17 and CCL22 in the tumor microenvironment and increased susceptibility to chemical carcinogenesis. CCR5SCCTreg mice developed SCC undifferentiated associated with a higher incidence of macrophages, myeloid and dendritic cells, CD19+, CD4+ T, CD8+ T lymphocytes, and Treg cells in the stage of tumor progression. Another relevant aspect of our study was the observation that adoptive transfer of CD4+CD25-CCR5+ T cells to CCR5KO animals (CCR5SCC CD4+) induced the development of SCC moderately differentiated with intermediate features observed in the WTSCC and CCR5SCC Treg mice. The adoptive transfer of CD8+CCR5+ T cells to CCR5KO mice (CCR5SCC CD8+) promoted the early incidence of papillomas and inhibited the progression to SCC. Reduced susceptibility to skin carcinogenesis in CCR5SCC CD8+ mice was associated with high frequency of macrophages, myeloid cells, B lymphocytes, CD8+ T lymphocyte and NK cells. In this study we showed that the migration of Treg cells to the tumor microenvironment is CCR5 dependent and that it regulates critical aspects of tumor development. The development of drugs that blocks CCR5+ Treg cells migration could be an important immunotherapeutic strategy to control this type of cancer.

INTRODUÇÃO: A endometriose é uma doença crônica de natureza benigna e de alta prevalência, definida pela presença de tecido endometrial fora da cavidade uterina. Dentre os principais sintomas, destacam-se a dor pélvica crônica, dismenorreia e infertilidade. Clinicamente, apresenta-se de três formas distintas: endometriose peritoneal ou superficial, endometriose ovariana - endometrioma - e endometriose profunda (EP). A EP apresenta um padrão de comportamento semelhante ao das doenças malignas, com capacidade de crescimento infiltrativo e destrutivo em diferentes sítios. Lesões endometrióticas já foram identificadas em linfonodos pélvicos, evidenciando a disseminação linfática das células endometrióticas. Em neoplasias malignas, as quimiocinas e seus receptores desempenham papel soberano no processo de metástase e na disseminação linfática das células tumorais. OBJETIVOS: 1) avaliar a expressão das quimiocinas que no câncer estão relacionadas ao processo de metástase - CXCL12-CXCR4, CCL19/CCL21-CCR7 - na EP do compartimento posterior da pelve e nos respectivos linfonodos-sentinela (LS); 2) avaliar a concentração dessas quimiocinas no líquido peritoneal (LP) de pacientes com e sem endometriose; 3) avaliar a expressão da proteína BAF250a, relacionada à transformação maligna, na endometriose, com ênfase na EP do compartimento posterior da pelve. MÉTODOS: 123 pacientes foram incluídas neste estudo. Nós realizamos a coloração imuno-histoquímica para avaliar a expressão das quimiocinas - ligantes e receptores - nas lesões de EP retovaginal/do compartimento posterior da pelve (n=27), nos respectivos LS (n=27) e no endométrio de pacientes-controle sem endometriose (n=20); a concentração das quimiocinas no LP foi avaliada por meio da tecnologia multiplex - Luminex® xMAP® Technology - em um subgrupo de pacientes com (n=36) e sem (n=27) endometriose; a possibilidade de transformação maligna também foi avaliada por meio da imuno-histoquímica para analisar a expressão da proteína BAF250a dentre as lesões de endometriose - EP retovaginal (n=30), lesões de endometriose nos LS (n=7), endometriose ovariana (n=20), sarcoma do estroma endometrial extragenital (SEEE) de intestino (n=2) e no endométrio de pacientes sem endometriose (n=20). RESULTADOS: o padrão de coloração IHQ das quimiocinas relacionadas à metástase no câncer foi caracterizado pela primeira vez na EP do compartimento posterior da pelve e nas lesões de endometriose acometendo os LS; a expressão de CXCR4 foi diretamente relacionada ao tamanho da lesão de EP; CCL19, CCL2 e CXCL8 apresentaram concentrações no LP estatisticamente maiores em mulheres com endometriose comparadas aos controles sem doença e a associação delas aumentou a probabilidade de identificar pacientes com endometriose; além disso, nós identificamos a perda clonal da expressão da BAF250a em 36% (9/25) dos casos de EP, 40% (2/5) das lesões de endometriose nos LS, 30% (6/20) dos endometriomas e em 25% (5/20) no endométrio tópico das pacientes-controle. CONCLUSÕES: quimiocinas parecem estar envolvidas no mecanismo de disseminação da endometriose e algumas mostraram potencial para serem utilizadas como marcadores da doença; a perda clonal da expressão da proteína BAF250a na EP possa talvez representar um marcador de risco para transformação maligna nessas lesões. O valor desses achados precisa ser ainda esclarecido em futuras análises / INTRODUCTION: Endometriosis is a chronic disease of benign nature and of high prevalence, defined by the presence of endometrial tissue outside the uterine cavity. Among the main symptoms are highlighted chronic pelvic pain, dysmenorrhea and infertility; clinically, it may appear in three distinct ways: peritoneal endometriosis, ovarian endometriosis - endometriomas - and deep infiltrating endometriosis (DIE). DIE presents a behavioral pattern in many ways similar to that of malignancies, as capacity of infiltrative and destructive growth in different sites. Endometriotic lesions have already been identified in pelvic lymph nodes, showing the possibility of lymphatic dissemination of endometriotic cells. In malignancies, chemokines play a sovereign role in the process of metastasis and lymphatic spread of tumor cells. OBJECTIVES: 1) to evaluate the expression of cancer-related chemokines - CXCL12-CXCR4, CCL19/CCL21-CCR7 - in rectovaginal DIE (or endometriosis of the posterior compartment of the pelvis) and the respective pelvic sentinel lymph node (PSLN); 2) to evaluate the concentration levels of those chemokines in the peritoneal fluid (PF) of patients with and without endometriosis; 3) to evaluate the expression of protein BAF250a, related to malignant transformation, in endometriosis, with emphasis in rectovaginal DIE. METHODS: 123 patients were enrolled in this study. We performed immunohistochemical staining to assess the expression of all chemokines - ligands and receptors - in rectovaginal DIE (n=27), PSLN (n=27) and eutopic endometrium (EE) from patients without endometriosis as controls (n=20); chemokine concentration in the PF was assessed with multiplexing technology - Luminex® x-MAP® Technology - in a subgroup of patients with (n=36) and without (n=27) endometriosis; the possibility of malignant transformation was also assessed by means of immunohistochemistry to evaluate the expression of BAF250a protein among endometriosis lesions - rectovaginal DIE (n=30), compromised PSLN (n=7), ovarian endometriosis (n=20), extragenital endometrial stromal sarcoma (EESS) affecting the bowel (n=2) and EE from controls without the disease (n=20). RESULTS: the staining pattern of cancer metastasis-related chemokines was characterized for the first time in rectovaginal DIE and lesions compromising the PSLN; CXCR4 expression was directly correlated with the size of the DIE lesions; CCL19, CCL2 and CXCL8 presented higher statistically significant PF concentrations in women with endometriosis compared with controls and their association improved the likelihood of identifying patients with endometriosis; furthermore, we identified the clonal loss of BAF250a expression in 36% (9/25) of DIE, 40% (2/5) of endometriotic lesions in the PSLN, 30% (6/20) of endometriomas and in 25% (5/20) of EE from controls. CONCLUSIONS: chemokines might be involved in the mechanism of dissemination of endometriosis and some have shown potential to be used as markers of the disease; clonal loss of protein BAF250a in DIE might represent a marker for malignant transformation in these lesions. The value of these findings needs to be clarified in further analysis

A hiperplasia prostática benigna (HPB) e o câncer de próstata (CaP) são duas condições crônicas muito comuns em homens com idade avançada e têm sido relacionadas a processos inflamatórios. As quimiocinas são reconhecidas como mediadores críticos da resposta inflamatória por regular a migração das células imunológicas através da ativação de receptores de quimiocinas na superfície destas células. As quimiocinas estão relacionadas à patogênese tumoral, embora não seja claro de que modo afetam a progressão tumoral humana. O objetivo desse estudo foi investigar a associação de dois polimorfismos de receptores de quimiocinas, CCR2-64I e CCR5-delta32, com HPB e CaP. Neste trabalho foram genotipadas 385 amostras de DNA genômico de homens do sul do Brasil, predominantemente euro-descendentes, incluindo 130 casos de HPB, 136 casos de CaP e 119 indivíduos controle saudáveis. Para o polimorfismo CCR2-64I a genotipagem foi realizada por PCR-RFLP e para o CCR5-delta32 foi por PCR convencional. As frequências alélicas do CCR2-64I foram 14,0%; 15,8% e 11,1% nos grupos controle, HPB e CaP, respectivamente; enquanto as do CCR5-delta32 foram 5,1%; 7,1% e 6,2%, respectivamente. A mediana referente aos níveis de PSA foi de 0,79; 1,45 e 6,91 ng/mL nos grupos controle, HPB e CaP, respectivamente; diferindo significativamente entre estes (todos p<0,001). A mediana do volume da próstata foi 20,00 cm3 no grupo controle, portanto, menor que dos grupos HPB (35,35 cm3) e CaP (35,80 cm3) (ambos p<0,001); no entanto, não foi observada diferença entre pacientes com HPB e CaP (p=0,172). Algo interessante observado foi CCR2-64I como um fator protetor para CaP quando comparado com HPB (OR=0,550; IC95%=0,311–0,975), mas não quando comparado com o grupo controle (p=0,448). Não foi observada associação do CCR2-64I com os estados clinicopatológicos do CaP (estadiamento tumoral e escore de Gleason) (todos p≥0,308). Não foi observada associação significativa da variante CCR5-delta32 com HPB ou CaP (todos p≥0,072), ou com os estados clinicopatológicos do CaP (todos p≥0,253). Assim, nossos dados sugerem a influência da variante CCR2-64I, observada como fator protetor para CaP quando comparada com HPB, no desenvolvimento do câncer de próstata. / Benign prostatic hyperplasia (BPH) and prostate cancer (PCa) are two chronic conditions very common in aged men and have been related to inflammatory process. Chemokines are recognized as critical mediators of inflammatory responses by regulating the migration of immune cells through the activation of chemokine receptors on the surface of these cells. Chemokines are implicated in tumor pathogenesis, although it is not clear how it affects human tumor progression. The aim of this study was to investigate the association of two chemokine receptor gene polymorphisms, CCR2-64I and CCR5-delta32, with BPH and PCa. In this study were genotyped 385 genomic DNA samples from southernmost Brazilian men, predominantly euro-descendants, including 130 BPH, 136 PCa and 119 healthy control subjects. To CCR2-64I polymorphism the genotyping was performed by PCR-RFLP and to CCR5-delta32 by conventional PCR. The allele frequencies of CCR2-64I were 14.0%, 15.8% and 11.1% in control, BPH and PCa, respectively; while of CCR5-delta32 were 5.1%, 7.1% and 6.2%, respectively. Median of serum PSA levels were 0.79, 1.45 and 6.91 ng/mL in control, BPH and PCa group, respectively (all p<0.001). The prostate volume median was 20.00 cm3 in the control group, thus, lower than BPH (35.35 cm3) and PCa (35.80 cm3) group (both p<0.001), nevertheless no difference was observed between BPH and PCa patients (p=0.172). Interestingly, CCR2-64I was detected as a protective factor to PCa when compared with BPH (OR=0.550; 95%CI=0.311–0.975), but not when compared with control group (p=0.448). No significant associations of the CCR2-64I were observed with PCa clinicopathologic states (tumor stage and Gleason score) (all p≥0.308). No significant associations of the CCR5-delta32 variant were observed with BPH or PCa (all p≥0.072), or with PCa clinicopathologic status (all p≥0.253). Thus, our data suggest a influence of the CCR2-64I variant, that was observed as a protective factor in PCa when compared with BPH, in prostate cancer development.

Submitted by Programa de Pós-graduação em Ciências da Saúde (pos.saude@ufba.br) on 2017-09-28T13:14:20Z No. of bitstreams: 1 TESE Aline Muniz.pdf: 4528280 bytes, checksum: 1946bc2b7d10cc438a4d5f012ee6f207 (MD5) / Approved for entry into archive by Uillis de Assis Santos (uillis.assis@ufba.br) on 2017-09-28T13:20:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TESE Aline Muniz.pdf: 4528280 bytes, checksum: 1946bc2b7d10cc438a4d5f012ee6f207 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-28T13:20:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE Aline Muniz.pdf: 4528280 bytes, checksum: 1946bc2b7d10cc438a4d5f012ee6f207 (MD5) / INTRODUÇÃO: Leishmaniose cutânea (LC) é a forma clínica mais comum causada por Leishmania braziliensis. Dez a 15% de indivíduos sadios residentes em uma área endêmica de Leishmania sem história prévia de LC apresentam um teste intradérmico para o antígeno solúvel de leishmania (SLA) positivo e são considerados como tendo a forma subclínica (SC) da doença. Os mecanismos envolvidos no controle da infecção SC por L. braziliensis são desconhecidos. OBJETIVO: Determinar fatores imunológicos associados com o desenvolvimento da infecção subclínica ou da leishmaniose cutânea (LC) em indivíduos expostos à infecção por Leishmania braziliensis. METODOLOGIA: Uma coorte de 308 contatos familiares (CF) de pacientes com LC, sem história de doença foi estabelecido em 2010 em uma área endêmica de leishmaniose tegumentar. Os indivíduos foram acompanhados por cinco anos e participaram de avaliações clínicas e estudos imunológicos. A avaliação da produção de IFN-γ e quimiocinas em culturas de sangue total estimuladas com antígeno solúvel de Leishmania (SLA) e o teste de intradermo reação de Montenegro (RM) foram realizados no início do estudo (ano zero), ano dois e no ano quatro. A identificação das células produtoras de IFN-γ foi realizada por citometria de fluxo e foi determinada a capacidade dos monócitos em controlar a infecção por Leishmania. Durante todo o período os indivíduos foram monitorados para identificar o aparecimento de LC. RESULTADOS: A infecção por L. braziliensis foi evidenciada em 118 (38,3%) indivíduos. LC foi documentada em 45 (14,6%) indivíduos, 101 (32,8%) apresentaram infecção SC e 162 (52,6%) não tinham indícios de exposição à L. braziliensis. A razão de infecção para a doença foi de 3,2:1 e apenas 3% dos indivíduos que apresentaram apenas produção de IFN-γ adoeceram. Houve uma correlação direta e uma concordância razoável entre a RM e a produção de IFN-γ [κ: 0,23 (95% IC: 0.12-0.35)]. Enquanto a produção de IFN-γ por células NK foi associada com proteção, uma RM positiva não impediu o desenvolvimento da doença. Monócitos de indivíduos SC controlaram mais a infecção do que monócitos de indivíduo com LC. Pode haver negativação tanto da RM quanto da produção de IFN-γ. CONCLUSÕES: Proteção contra a LC foi associada com a produção de IFN-γ por células NK, resultados do teste intradérmico negativos e maior capacidade dos monócitos dos indivíduos SC em impedir e controlar o crescimento do parasito na infecção por L.braziliensis.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao de Flavia Dias Coelho da Silva.pdf: 4558177 bytes, checksum: eadcc2f337a0bf938bf5970abe9f7578 (MD5) Previous issue date: 2009-04-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A Tuberculose (TB) ainda é uma ameaça global à humanidade, sem vacina eficaz disponível até momento. Estudos epidemiológicos têm demonstrado que o Mycobacterium tuberculosis (MTB) e os helmintos são coendêmicos em muitas regiões no mundo, e que as coinfecções com esses patógenos são freqüentes. A infecção por helmintos intestinais pode ser um dos fatores de risco para o desenvolvimento da TB pulmonar ativa. Através de marcações fenotípicas e dosagem de citocinas e quimiocinas, pretendemos mostrar que os vermes são capazes de desviar a resposta Th-1 protetora para a Tuberculose para a Th-2 característica nas helmintíases intestinais. Cultura de sangue total para dosagem de citocinas e quimiocinas pela técnica de microesferas marcadas para leitura em citômetro de fluxo, em conjunto com a imunofenotipagem de células dendríticas (DCs) e monócitos/macrófagos através de marcadores extra e intracelulares via citometria, foram utilizadas com o objetivo de se estudar alguns aspectos da imunidade inata em pacientes com TB, com TB e helmintíases intestinais (TB+HELM), com helmintos, e controles saudáveis. Para tal foram avaliados: a) o número e fenótipo de DCs e monócitos/macrófagos do sangue periférico; e b) a produção de citocinas (IL-10, IL-12, TNF-&#61537; , IL-6 e IL-1&#61538; ) e de algumas quimiocinas (CCL2, CCL5, CXCL-8, CXCL9 e CXCL-10) no sobrenadante de cultura de sangue total após estímulo com antígenos de MTB. A análise de células dendríticas e macrófagos circulantes, e a avaliação de citocinas e quimiocinas em pacientes com TB+HELM, nos permite concluir que: a) A maioria das DCs apresentava fenótipo de células imaturas. Entre as células com fenótipo de células maduras, existiam células mDC DC-SIGN+ e pDC CD123+CD40+, fenótipos compatíveis com DCs maduras indutoras de resposta Th-2; b) A maior parte dos macrófagos avaliados estava ativada e expressava DC-SIGN (fenótipo é compatível com macrófagos M2); c) A produção de citocinas mostrou-se significativamente maior para IL-10, TNF-e IL-6, enquanto IL-1teve uma tendência ao aumento. No entanto, os níveis de IL-12 permaneceram semelhantes ao grupo controle; d) Redução significante da produção de CCL-2, tendência à menor produção de CXCL-8 e aumento não significativo de CXCL-10 foram observados, ao passo que quimiocinas CXCL-9 e CCL-5 não foram detectadas. Embora o número de casos estudados não permita uma afirmação conclusiva, as observações admitem a possibilidade de que a infecção com helmintos intestinais em pacientes com tuberculose possa estar interferindo na resposta Th-1 aos antígenos de MTB / The Tuberculosis (TB) remains a global threat to humanity, which no effective vaccine available until now. Epidemiological studies have shown that Mycobacterium tuberculosis (MTB) and helminths are co-endemic in many regions in the world, and that co-infections with these pathogens are frequent. The intestinal helminths infection may be a risk factor to the development of active pulmonary TB. Through phenotypic markings and dosage of cytokines and chemokines, we aimed to show that the worms are capable to deviate the Th-1 response TB protective to the Th-2 response, characteristic in intestinal helminthiasis. Blood culture for cytokines and chemokines dosage was done by the technique of marked microspheres for reading on flow cytometry, in conjunction with immunophenotyping of dendritic cells (DCs) and monocytes / macrophages through extra and intracellular markers by cytometry were used to study some aspects of innate immunity in TB patients, TB and intestinal helminths patients (TB + HELM), patients with helminths, and healthy controls. Were analyzed: a) The number and phenotype of DCs and monocytes/macrophages in peripheral blood, and b) The production of cytokines (IL-10, IL-12, TNF-&#61537; , IL-6 and IL-1&#61538; ) and of some chemokines (CCL2, CCL5, CXCL8, CXCL9 and CXCL10) in the culture supernatant of whole blood after stimulation with MTB antigens. The analysis of circulating dendritic cells and macrophages, and evaluation of cytokines and chemokines in patients with TB + HELM, should us conclude that: a) The majority of DCs were immature cell phenotype. Among the cells with mature cell phenotype, there were cells mDC DC-SIGN + and CD40 + CD123 + pDC, phenotypes consistent with mature DCs to induce Th-2 response; b) Most of the activated macrophages was assessed and expressed DC-SIGN (phenotype compatible with M2 macrophages); c) The production of cytokines was significantly greater for IL-10, TNF-and IL-6, while IL-1had a tendency to increase. However, the levels of IL-12 remained similar to control group; d) significant reduction of the production of CCL-2, a trend to lower production of CXCL-8 and no significant increase of CXCL-10 were observed, whereas the chemokines CXCL CCL-5 and -9 were not detected. Although the number of cases does not permit a conclusive statement, the observations allow the possibility that infection with intestinal helminths in TB patients may be interfering with the Th-1 response to antigens of MTB

Resumo:A leishmaniose visceral é uma importante doença parasitária com distribuição mundial e que afeta homens e animais. Existem relatos de envolvimento encefálico durante a infecção, mas sua patogenia ainda não foi completamente elucidada. Com o presente estudo, objetivamos a avaliação de quimiocinas relacionadas com a resposta inflamatória no encéfalo e marcadores da integridade da barreira hematoencefálica em cães naturalmente infectados. Também foi estabelecido um modelo experimental murino que permite a avaliação da dinâmica da infecção, bem como localização do parasita e resposta inflamatória in vivo. Cães naturalmente infectados apresentaram um perfil específico de quimiocinas no encéfalo, altamente quimioatrativo para linfócitos T, além de evidente perda da integridade da barreira hematoencefálica, com elevado quociente de albumina e altas concentrações de anticorpos anti-Leishmania no líquido cefalorraquidiano. Utilizando inovadoras técnicas moleculares e de imagiologia in vivo, foi possível determinar a presença do parasita no encéfalo de camundongos Balb/c experimentalmente infectados, bem como sua localização intra-craniana. A inflamação no encéfalo, avaliada nos primeiros quatro meses pós-infecção, apresentou duas fases distintas, uma fase aguda nos primeiros quatorze dias, e uma fase de reinflamação após três meses de infecção. Conjuntamente, os dados desse estudo permitiram confirmar o envolvimento encefálico durante a leishmaniose visceral, e reforçam o fato de que o comprometimento encefálico tem sido negligenciado durante a leishmaniose visceral / Abstract:Visceral leishmaniasis is an important parasitic disease, with worldwide distributions that affects humans and animals. There are reports of brain involvement during the infection; however, its pathogenesis has not been completely elucidated. Therefore, with this study, we aimed the evaluation of the inflammatory response in the brain and the integrity of the blood-brain barrier in naturally infected dogs, and the establishment of an experimental mice model that could allow the evaluation of the infection dynamics, as well as the localization of the parasite and the inflammatory response in vivo. Naturally infected dogs presented a specific chemokine profile in the brain, highly attractive to T-lymphocytes, besides the evident blood-brain barrier disruption, with increased albumin quota and elevated concentrations of anti-Leishmania antibodies in the cerebrospinal fluid. Using molecular techniques and state-of-the-art in vivo imaging tools, we could determine the presence of parasites in the brain of experimentally infected Balb/c mice, as well as its intracranial localization. Brain inflammation, evaluated during four months post-infection, presented two distinct phases, one acute phase in the first fourteen days, and one phase of re-inflammation after three months of infection. Altogether, the data from this study allow us to confirm that the brain is affected during visceral leishmaniasis, and reinforce the fact that the brain involvement has been neglected during visceral leishmaniasis / Orientador:Gisele Fabrino Machado / Banca:Karen Regina Lemos / Banca:Valéria Marçal Felix de Lima / Banca:Cáris Maroni Nunes / Banca:Antonio Carlos Alessi / Doutor

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:18:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LeonamGC.pdf: 218692 bytes, checksum: 002840894937241c14e673ee875d7524 (MD5) Previous issue date: 2008-03-18 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Activation of the kynurenine (KYN) pathway (KP) by modulators of immune system has been observed during several neurological diseases. Here we assessed the association of chemo-/cytokine levels with the concentration of KP metabolites in cerebrospinal fluid (CSF) and plasma samples from patients with bacterial meningitis (BM). All samples were collected from 42 patients diagnosed with acute bacterial meningitis (ABM), aseptic meningitis, tuberculous meningitis and patients without infection neurological disorders. CSF and plasma concentration of metabolites from the KP was assessed by high pressure liquid chromatography (HPLC) and cytokines and chemokines by Bio-plex 200 suspension array system. Concentrations of the KP metabolites KYN and kynurenic acid (KYNA) were significantly higher in CSF of patients with ABM compared to other groups. Tryptophan (TRP), anthranilic acid (AA), 3-hydroxykynurenine (3HK) and 3-hydroxyanthranilic acid (3HAA) did not show statistical significance, although some of them presented a good accumulation during ABM. The expression of TNF-alpha, IL-6, IL-1beta, IFN-gamma, IL-10, IL-1 receptor antagonist (IL-1Ra), MIP-1alpha, MIP-1beta, MCP-1 and G-CSF was about 100-fold higher in CSF from ABM patients than other infected groups. In all CSF and plasma samples, the concentration of IL-2, IL-12(p70), IL-4, IL-8 and GM-CSF was not significant. ABM still showed significant concentrations of IL-6, IL-10, IL-1Ra and MCP-1 in plasma samples. Based on the comparison of KP metabolites concentrations between plasma and CSF samples we conclude that the activation of the tryptophan pathway upon BM occurs within the brain. This increase in KP metabolites is most due to activation of the KP by molecules as IFN-gamma and TNF-alpha in response to infection. / A ativa??o da rota da quinurenina por moduladores do sistema imune tem sido observada durante diversas doen?as neurol?gicas. Neste trabalho foi avaliado a associa??o entre os n?veis de citocinas e quimiocinas com a concentra??o dos metab?litos da rota da quinurenina ( Kynurenine pathway KP) em amostras de l?quor e plasma de pacientes com meningite bacteriana. Todas as amostras foram coletadas de 42 pacientes hospitalizados com o diagn?stico de meningites bacteriana aguda, tubercul?sica, ass?ptica e pacientes cujo diagn?stico excluiu infec??o no sistema nervoso central. As concentra??es dos metab?litos da quinurenina foram avaliadas pela cromatografia l?quida de alta press?o enquanto os n?veis de citocinas e quimiocinas foram medidos pelo Bio-plex 200 suspension array system. Concentra??es de quinurenina e ?cido quinur?nico foram significativamente mais elevadas no l?quor de pacientes com meningite bacteriana aguda do que nos outros grupos. Ainda no l?quor, os n?veis de triptofano, ?cido antran?lico, 3-hidroxiquinurenina e ?cido 3-hidroxiantran?lico n?o mostraram signific?ncia estat?stica, embora alguns deles apresentaram um bom ac?mulo durante meningite bacteriana aguda. No l?quor dos pacientes com meningite bacteriana foram observados n?veis mais elevados de TNF-alfa, IL-6, IL-1beta, IFN-gama, IL-10, IL-1Ra, MIP-1alpha, MIP-1beta, MCP-1 e G-CSF do que os outros grupos infectados. Em todas as amostras, as concentra??es de IL-2, IL-12(p70), IL-4, IL-8 e GM-CSF n?o variaram significativamente. No grupo com meningite bacteriana aguda foram tamb?m observadas elevadas concentra??es de IL-6, IL-10, IL-1Ra e MCP-1 no plasma. Baseado na compara??o das concentra??es dos metab?litos da via quinurenina no l?quor e no plasma, conclui-se que a ativa??o desta via metab?lica durante a meningite ocorre primordialmente dentro do c?rebro. O aumento na concentra??o dos metab?litos da quinurenina durante a infec??o deve-se ativa??o da enzima idoleamina 2,3 dioxigenase por prote?nas da resposta imune hospedeira principalmente pelo IFN-gama, IL1beta e TNF-alfa.

A hiperplasia prostática benigna (HPB) e o câncer de próstata (CaP) são duas condições crônicas muito comuns em homens com idade avançada e têm sido relacionadas a processos inflamatórios. As quimiocinas são reconhecidas como mediadores críticos da resposta inflamatória por regular a migração das células imunológicas através da ativação de receptores de quimiocinas na superfície destas células. As quimiocinas estão relacionadas à patogênese tumoral, embora não seja claro de que modo afetam a progressão tumoral humana. O objetivo desse estudo foi investigar a associação de dois polimorfismos de receptores de quimiocinas, CCR2-64I e CCR5-delta32, com HPB e CaP. Neste trabalho foram genotipadas 385 amostras de DNA genômico de homens do sul do Brasil, predominantemente euro-descendentes, incluindo 130 casos de HPB, 136 casos de CaP e 119 indivíduos controle saudáveis. Para o polimorfismo CCR2-64I a genotipagem foi realizada por PCR-RFLP e para o CCR5-delta32 foi por PCR convencional. As frequências alélicas do CCR2-64I foram 14,0%; 15,8% e 11,1% nos grupos controle, HPB e CaP, respectivamente; enquanto as do CCR5-delta32 foram 5,1%; 7,1% e 6,2%, respectivamente. A mediana referente aos níveis de PSA foi de 0,79; 1,45 e 6,91 ng/mL nos grupos controle, HPB e CaP, respectivamente; diferindo significativamente entre estes (todos p<0,001). A mediana do volume da próstata foi 20,00 cm3 no grupo controle, portanto, menor que dos grupos HPB (35,35 cm3) e CaP (35,80 cm3) (ambos p<0,001); no entanto, não foi observada diferença entre pacientes com HPB e CaP (p=0,172). Algo interessante observado foi CCR2-64I como um fator protetor para CaP quando comparado com HPB (OR=0,550; IC95%=0,311–0,975), mas não quando comparado com o grupo controle (p=0,448). Não foi observada associação do CCR2-64I com os estados clinicopatológicos do CaP (estadiamento tumoral e escore de Gleason) (todos p≥0,308). Não foi observada associação significativa da variante CCR5-delta32 com HPB ou CaP (todos p≥0,072), ou com os estados clinicopatológicos do CaP (todos p≥0,253). Assim, nossos dados sugerem a influência da variante CCR2-64I, observada como fator protetor para CaP quando comparada com HPB, no desenvolvimento do câncer de próstata. / Benign prostatic hyperplasia (BPH) and prostate cancer (PCa) are two chronic conditions very common in aged men and have been related to inflammatory process. Chemokines are recognized as critical mediators of inflammatory responses by regulating the migration of immune cells through the activation of chemokine receptors on the surface of these cells. Chemokines are implicated in tumor pathogenesis, although it is not clear how it affects human tumor progression. The aim of this study was to investigate the association of two chemokine receptor gene polymorphisms, CCR2-64I and CCR5-delta32, with BPH and PCa. In this study were genotyped 385 genomic DNA samples from southernmost Brazilian men, predominantly euro-descendants, including 130 BPH, 136 PCa and 119 healthy control subjects. To CCR2-64I polymorphism the genotyping was performed by PCR-RFLP and to CCR5-delta32 by conventional PCR. The allele frequencies of CCR2-64I were 14.0%, 15.8% and 11.1% in control, BPH and PCa, respectively; while of CCR5-delta32 were 5.1%, 7.1% and 6.2%, respectively. Median of serum PSA levels were 0.79, 1.45 and 6.91 ng/mL in control, BPH and PCa group, respectively (all p<0.001). The prostate volume median was 20.00 cm3 in the control group, thus, lower than BPH (35.35 cm3) and PCa (35.80 cm3) group (both p<0.001), nevertheless no difference was observed between BPH and PCa patients (p=0.172). Interestingly, CCR2-64I was detected as a protective factor to PCa when compared with BPH (OR=0.550; 95%CI=0.311–0.975), but not when compared with control group (p=0.448). No significant associations of the CCR2-64I were observed with PCa clinicopathologic states (tumor stage and Gleason score) (all p≥0.308). No significant associations of the CCR5-delta32 variant were observed with BPH or PCa (all p≥0.072), or with PCa clinicopathologic status (all p≥0.253). Thus, our data suggest a influence of the CCR2-64I variant, that was observed as a protective factor in PCa when compared with BPH, in prostate cancer development.

A hiperplasia prostática benigna (HPB) e o câncer de próstata (CaP) são duas condições crônicas muito comuns em homens com idade avançada e têm sido relacionadas a processos inflamatórios. As quimiocinas são reconhecidas como mediadores críticos da resposta inflamatória por regular a migração das células imunológicas através da ativação de receptores de quimiocinas na superfície destas células. As quimiocinas estão relacionadas à patogênese tumoral, embora não seja claro de que modo afetam a progressão tumoral humana. O objetivo desse estudo foi investigar a associação de dois polimorfismos de receptores de quimiocinas, CCR2-64I e CCR5-delta32, com HPB e CaP. Neste trabalho foram genotipadas 385 amostras de DNA genômico de homens do sul do Brasil, predominantemente euro-descendentes, incluindo 130 casos de HPB, 136 casos de CaP e 119 indivíduos controle saudáveis. Para o polimorfismo CCR2-64I a genotipagem foi realizada por PCR-RFLP e para o CCR5-delta32 foi por PCR convencional. As frequências alélicas do CCR2-64I foram 14,0%; 15,8% e 11,1% nos grupos controle, HPB e CaP, respectivamente; enquanto as do CCR5-delta32 foram 5,1%; 7,1% e 6,2%, respectivamente. A mediana referente aos níveis de PSA foi de 0,79; 1,45 e 6,91 ng/mL nos grupos controle, HPB e CaP, respectivamente; diferindo significativamente entre estes (todos p<0,001). A mediana do volume da próstata foi 20,00 cm3 no grupo controle, portanto, menor que dos grupos HPB (35,35 cm3) e CaP (35,80 cm3) (ambos p<0,001); no entanto, não foi observada diferença entre pacientes com HPB e CaP (p=0,172). Algo interessante observado foi CCR2-64I como um fator protetor para CaP quando comparado com HPB (OR=0,550; IC95%=0,311–0,975), mas não quando comparado com o grupo controle (p=0,448). Não foi observada associação do CCR2-64I com os estados clinicopatológicos do CaP (estadiamento tumoral e escore de Gleason) (todos p≥0,308). Não foi observada associação significativa da variante CCR5-delta32 com HPB ou CaP (todos p≥0,072), ou com os estados clinicopatológicos do CaP (todos p≥0,253). Assim, nossos dados sugerem a influência da variante CCR2-64I, observada como fator protetor para CaP quando comparada com HPB, no desenvolvimento do câncer de próstata. / Benign prostatic hyperplasia (BPH) and prostate cancer (PCa) are two chronic conditions very common in aged men and have been related to inflammatory process. Chemokines are recognized as critical mediators of inflammatory responses by regulating the migration of immune cells through the activation of chemokine receptors on the surface of these cells. Chemokines are implicated in tumor pathogenesis, although it is not clear how it affects human tumor progression. The aim of this study was to investigate the association of two chemokine receptor gene polymorphisms, CCR2-64I and CCR5-delta32, with BPH and PCa. In this study were genotyped 385 genomic DNA samples from southernmost Brazilian men, predominantly euro-descendants, including 130 BPH, 136 PCa and 119 healthy control subjects. To CCR2-64I polymorphism the genotyping was performed by PCR-RFLP and to CCR5-delta32 by conventional PCR. The allele frequencies of CCR2-64I were 14.0%, 15.8% and 11.1% in control, BPH and PCa, respectively; while of CCR5-delta32 were 5.1%, 7.1% and 6.2%, respectively. Median of serum PSA levels were 0.79, 1.45 and 6.91 ng/mL in control, BPH and PCa group, respectively (all p<0.001). The prostate volume median was 20.00 cm3 in the control group, thus, lower than BPH (35.35 cm3) and PCa (35.80 cm3) group (both p<0.001), nevertheless no difference was observed between BPH and PCa patients (p=0.172). Interestingly, CCR2-64I was detected as a protective factor to PCa when compared with BPH (OR=0.550; 95%CI=0.311–0.975), but not when compared with control group (p=0.448). No significant associations of the CCR2-64I were observed with PCa clinicopathologic states (tumor stage and Gleason score) (all p≥0.308). No significant associations of the CCR5-delta32 variant were observed with BPH or PCa (all p≥0.072), or with PCa clinicopathologic status (all p≥0.253). Thus, our data suggest a influence of the CCR2-64I variant, that was observed as a protective factor in PCa when compared with BPH, in prostate cancer development.

Considerando que processos cruciais de diferenciação e maturação das células dendríticas (DCs) são regulados pelo fator de transcrição nuclear kappa B (NF-&#954;B), nos propusemos a estudar esta via em DCs derivadas de monócitos de pacientes com câncer de mama, partindo da hipótese de que alterações desta via contribuam, nesses indivíduos, para a geração de DCs com fenótipo e função alterados, levando ao escape tumoral. A análise da presença de NF-&#954;B no núcleo de monócitos, DCs imaturas (iDCs) e maduras indicou que as pacientes falham em modular tal fator de transcrição, de modo que a quantidade de NF-&#954;B no núcleo de iDCs de pacientes supera os níveis encontrados em controles, fenômeno possivelmente decorrente de alterações nas proteínas inibidoras do NF-&#954;B em pacientes. Observou-se menor frequência de células CD86+, CD83+ e HLA-DR+ (p < 0,05) ao final das culturas das pacientes, e aumento na concentração de IL-8 no sobrenadante das culturas. Coletivamente, estes dados corroboram a hipótese formulada. / Considering that crucial processes of differentiation and maturation of dendritic cells (DCs) are regulated by nuclear factor kappa B (NF-&#954;B), we proposed to study this pathway in monocyte-derived DCs from breast cancer patients, based on the hypothesis that alterations in such pathway may contribute in these individuals to the generation of DCs having phenotypic and functional changes, leading to tumor escape. The analysis of the presence of NF-&#954;B in the nucleus of monocytes, immature and mature DCs indicated that patients fail to modulate this transcription factor, so that the amount of NF-&#954;B in the nucleus of iDCs from patients exceeds levels found in controls, a phenomenon possibly due to alterations in inhibitory proteins of NF-&#954;B in patients. It was also observed diminished frequency of CD86+, CD83+ and HLA-DR+ cells (p <0.05) at the end of the patients cultures, as well as increased IL-8 concentration in the culture supernatants. Collectively, these data support the hypothesis previously formulated.