Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, Programa de Pós-Graduação em Química, 2014. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2015-12-10T18:33:36Z No. of bitstreams: 1 2014_VerônicaAlvesGonçalvesdaSilva.pdf: 79755843 bytes, checksum: 06fb5d3d6c456388dbeeadcee6b036b5 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-12-15T18:07:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_VerônicaAlvesGonçalvesdaSilva.pdf: 79755843 bytes, checksum: 06fb5d3d6c456388dbeeadcee6b036b5 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-15T18:07:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_VerônicaAlvesGonçalvesdaSilva.pdf: 79755843 bytes, checksum: 06fb5d3d6c456388dbeeadcee6b036b5 (MD5) / A investigação pericial de documentos sob suspeita de fraudes é uma importante área na ciência forense. Na maioria dos casos uma simples inspeção visual desses documentos não consegue revelar todas as informações necessárias para a elucidação de um caso. Por isso é necessário a proposição de métodos alternativos, rápidos, eficientes e não destrutivos de análise de amostras para solucionar os inquéritos e preservar os documentos até o final dos processos. A utilização de métodos espectroscópicos aliados a técnicas quimiométricas vem se destacando como alternativa viável nestes casos. Esse trabalho objetivou investigar as potencialidades e limitações do uso da parte espectroscópica do VSC® 6000, para o desenvolvimento de um método não destrutivo de análise de tintas de canetas, avaliando diferentes tipos, marcas, modelos e cores usando espectroscopia no visível aliado a métodos quimiométricos, como o Método dos Mínimos Quadrados Parciais para Análise Discriminante (PLS-DA) e a Resolução de Curvas Multivariadas por Mínimos Quadrados Alternantes (MCR-ALS). Noventa e cinco canetas, 25 marcas de canetas de cor azul, 55 marcas de canetas de cor preta e 10 marcas de cor vermelha, foram adquiridas no comércio local do Distrito Federal. Para a análise das tintas, amostras padrão foram produzidas em folha de papel branco, do tipo A4, gramatura de 75g/m2, onde foram realizados traços que simulam a escrita cursiva com as diferentes canetas, a partir destes foram adquiridos espectros ao longo de cada traço em diferentes posições não repetidas. Para cada caneta foram adquiridos 60 espectros. Usando ambos os métodos quimiométricos citados acima, três tipos de modelos químiométricos foram construídos, um para a discriminação das tintas por tipos, outro por marcas e o terceiro por modelos. Em todos os casos, foram obtidos modelos com baixos erros de previsão e, na maioria dos casos, não foram observados erros de classificação entre as classes. Testes para verificar a robustez dos modelos quimiométricos também foram realizados: o primeiro para verificar a influência de diferentes tipos de papéis como suporte para a elaboração dos padrões, um segundo para verificar a variabilidade entre diferentes lotes de uma mesma caneta, e um terceiro para verificar a influência do tempo de envelhecimento da tinta sobre papel. De um modo geral, utilizando os métodos desenvolvidos foi possível diferenciar trechos de tintas por tipos, marcas e modelos. Os modelos quimiométricos se mostraram robustos às influências testadas, demonstrando a eficiência destes. Duas aplicações foram realizadas: teste cego e caso real. Na primeira aplicação os modelos demonstraram que são livres de tendências do analista. Já no caso real, dois casos analisados utilizando os métodos propostos apresentaram resultados concordantes com aqueles encontrados pelos peritos responsáveis, utilizando métodos convencionais, demonstrando que os métodos propostos podem ser utilizados em situações reais. ______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The forensic investigation of documents under suspicion of fraud is an important area in forensic science. In most cases a simple visual inspection of such documents could not reveal all the necessary information to elucidate a case. So, the proposition of alternative, fast, efficient and non-destructive analysis methods of samples to resolve investigations and preserve the documents until the end of the process are necessary. The use of spectroscopic methods coupled with chemometric techniques has emerged as a viable alternative in these cases. This study aimed to investigate the potential and limitations of using the spectroscopic part of VSC® 6000, to develop a non-destructive method for analyzing ink pens, systematically evaluating different types, brands, models and colors using visible spectroscopy combined with chemometric methods such as Partial Least Squares Method to discriminant analysis (PLS-DA) and Multivariate Curve Resolution Alternating Least Squares (MCR-ALS). Ninety-five pens, 25 brands of blue pens, 55 brands of black pens and 10 red brands, were bought locally acquired on the District Federal commerce. For the inks analysis, standard samples were produced in sheets of white paper A4 type, weight 75 g/m2, where traces simulating cursive hand writing with the different pens were made. From these, spectra were acquired throughout each trace in different positions. For each pen 60 spectra were acquired. Using the chemometric methods mentioned above, three types of chemometric models were built, one for discrimination by types of paints, other by brands and the third by models. In all cases, the models were obtained with low prediction errors and, in most cases, no misclassifications between classes were observed. Tests to check the robustness of the chemometric models were also conducted: the first to investigate the influence of different types of paper as support in the elaboration of the standards, a second to check the variability between different batches of the same pen, and a third to verify the influence of aging time of ink on paper. Generally, using the proposed methods was possible to distinguish inks by types, brands and models. The chemometric models are robust to the influences tested, demonstrating their efficiency. Also Two applications tests were performed: a blind study and a real case study. In the first application models results showed that models are free from tendencies from the analyst. In the real case study, two cases were analyzed using the proposed methods and showed concordant results with those found by the experts in charge, using conventional methods. These studies demonstrate that the proposed methods can be used in real situations.

Orientador: Cristiane Nespoli Morelato França / Banca: Thais Jordão / Banca: Marcos Tadeu Oliveira Pimenta / Resumo: No presente trabalho estudamos a teoria de Cálculo Variacional com o intuito de nos familiarizarmos com a teoria de Controle Ótimo. Estudamos também resultados da Teoria de Equações Diferenciais, com foco em Teoria da Medida, com o objetivo de demonstrarmos o Princípio Mínimo de Pontryagin, condição esta necessária para otimalidade de um controle. Por sua vez, condições de regularidade e existência para Controles Ótimos Lineares também foram estudadas, uma vez que são essenciais para determinação de controles ótimos. Por m, utilizamos a teoria de Controle Ótimo acima indicada para a análise de um modelo de crescimento de câncer com quimioterapia com o objetivo de minimizar a quantidade de quimioterápico aplicada no tratamento / Abstract: In the worked here presented we study the theory of Optimal Control. We also studied results in Theory of Di erential Equations focusing on Measure Theory, with the goal of proving the Pontryagin Mininum Principle, a necessary condition for optimality of a control. In turn, regularity and existence conditions for Optimal Linear Controls were also studied, since they are essential for determination of optimal controls. Finally, we used the theory of Optimal Control above mentioned for an analysis of a model of tumor with chemotherapy with the goal of minimizing the quantity of chemotherapy applied in the treatment / Mestre

Orientador: Sérgio Vicente Serrano / Banca: Maria Inês de Moura Campos Pardini / Banca: Carlos Eduardo Paiva / Resumo: A presença de alterações das funções cognitivas é uma das queixas frequentemente relatadas por mulheres com câncer de mama que recebem quimioterapia adjuvante. Neste estudo foram comparadas prospectivamente as características e as diferenças de fluxo sanguíneo cerebral regional (FSCr) em pacientes portadoras de câncer de mama, antes e após serem submetidas à quimioterapia adjuvante (QTadj), através da análise de imagens geradas por exame de Single Photon Emission Computed Tomography (SPECT) cerebral empregando técnica de quantificação automatizada Statistical Parametric Mapping (SPM). Foram incluídas 41 pacientes tratadas no Hospital de Câncer de Barretos da Fundação Pio XII no período de abril de 2008 a dezembro de 2010 com idades entre 25 e 70 anos, portadoras de câncer de mama com estadiamento clínico I a III, com ausência de hiperexpressão de c-erb-B2. As imagens foram obtidas no período de aproximadamente 4 semanas após a cirurgia e repetidas com três meses após o término da quimioterapia adjuvante. Os esquemas quimioterápicos empregados foram: FAC (fluorouracil, doxorrubicina e ciclofosfamida) em 75,6% das pacientes, AC-T (doxorrubicina, ciclofosfamida e paclitaxel) em 14,6%, AC (doxorrubicina e ciclofosfamida) em 9,6% e CMF (ciclofosfamida, metotrexato e fluorouracil) também em 9,6% das pacientes. A comparação das imagens pré-QTadj e pos-QTadj mostrou redução significativa do fluxo sanguíneo cerebral regional na região do cingulado anterior do lobo límbico no hemisfério cerebral direito (p<0,0001) e na área do giro temporal médio no hemisfério esquerdo (p<0,0001). Por outro lado, observou-se forte aumento significativo de perfusão sanguínea (p<0001) em quatro regiões distintas: (1) cérebro esquerdo, giro parahipocampal, lobo límbico; (2) cérebro... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cognitive dysfunctions are among the most frequent complains remarked by women treated with adjuvant chemotherapy for breast cancer. The present study prospectively compared the characteristics and regional cerebral blood flow changes among women diagnosed with breast cancer before and after they were submitted to adjuvant chemotherapy (AdjCHEMO), using Single Photon Emission Computed Tomography (SPECT) technique combined with the automated quantification method, Statistical Parametric Mapping (SPM). 41 recently diagnosed breast cancer patients treated by Hospital do Câncer de Barretos - Fundação Pio XII, aged 25 to 70 years old previously operated, and presenting with breast cancer clinical stage I to III and without c-erb-B2 expression were included between April 2008 to December 2010. Images were obtained both 4 weeks after surgery and 3 months after completion of adjuvant chemotherapy. The FAC chemotherapeutic regimen (Fluorouracil, doxorubicin and cyclophosphamide) was used in 75,6 % of patients, followed by AC-T (doxorubicin, cyclophosphamide and paclitaxel) in 14,6 %.AC and CMF combinations (cyclophosphamide, methotrexate and fluorouracil) were used equally in 9,6 % of cases. Comparison of pre-AdjCHEMO and pos-AdjCHEMO images showed significant reduction of cerebral blood flow at the cingulated anterior region of the limbic lobe on the right cerebral hemisphere (p<0,0001) and at the medium temporal gyros located on the left hemisphere (p<0,0001). On the other hand, an increased blood flow (p<0,0001) was observed in 4 areas: (1) left hemisphere, parahippocampal, limbic lobe; (2) right hemisphere, sub lobar area, insular posterior; (3) right hemisphere, cingulated gyros, limbic lobe; (4) left hemisphere, frontal lobe, pre central gyros. Overall a trend for reduction in cerebral... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-27Bitstream added on 2014-06-13T19:49:50Z : No. of bitstreams: 1 correia_nc_me_botfm.pdf: 216439 bytes, checksum: b25b9cedb4a596833c717c3f23f7ead7 (MD5) / Fundação Pio Xii - Barretos / A presença de alterações das funções cognitivas é uma das queixas frequentemente relatadas por mulheres com câncer de mama que recebem quimioterapia adjuvante. Neste estudo foram comparadas prospectivamente as características e as diferenças de fluxo sanguíneo cerebral regional (FSCr) em pacientes portadoras de câncer de mama, antes e após serem submetidas à quimioterapia adjuvante (QTadj), através da análise de imagens geradas por exame de Single Photon Emission Computed Tomography (SPECT) cerebral empregando técnica de quantificação automatizada Statistical Parametric Mapping (SPM). Foram incluídas 41 pacientes tratadas no Hospital de Câncer de Barretos da Fundação Pio XII no período de abril de 2008 a dezembro de 2010 com idades entre 25 e 70 anos, portadoras de câncer de mama com estadiamento clínico I a III, com ausência de hiperexpressão de c-erb-B2. As imagens foram obtidas no período de aproximadamente 4 semanas após a cirurgia e repetidas com três meses após o término da quimioterapia adjuvante. Os esquemas quimioterápicos empregados foram: FAC (fluorouracil, doxorrubicina e ciclofosfamida) em 75,6% das pacientes, AC-T (doxorrubicina, ciclofosfamida e paclitaxel) em 14,6%, AC (doxorrubicina e ciclofosfamida) em 9,6% e CMF (ciclofosfamida, metotrexato e fluorouracil) também em 9,6% das pacientes. A comparação das imagens pré-QTadj e pos-QTadj mostrou redução significativa do fluxo sanguíneo cerebral regional na região do cingulado anterior do lobo límbico no hemisfério cerebral direito (p<0,0001) e na área do giro temporal médio no hemisfério esquerdo (p<0,0001). Por outro lado, observou-se forte aumento significativo de perfusão sanguínea (p<0001) em quatro regiões distintas: (1) cérebro esquerdo, giro parahipocampal, lobo límbico; (2) cérebro... / Cognitive dysfunctions are among the most frequent complains remarked by women treated with adjuvant chemotherapy for breast cancer. The present study prospectively compared the characteristics and regional cerebral blood flow changes among women diagnosed with breast cancer before and after they were submitted to adjuvant chemotherapy (AdjCHEMO), using Single Photon Emission Computed Tomography (SPECT) technique combined with the automated quantification method, Statistical Parametric Mapping (SPM). 41 recently diagnosed breast cancer patients treated by Hospital do Câncer de Barretos – Fundação Pio XII, aged 25 to 70 years old previously operated, and presenting with breast cancer clinical stage I to III and without c-erb-B2 expression were included between April 2008 to December 2010. Images were obtained both 4 weeks after surgery and 3 months after completion of adjuvant chemotherapy. The FAC chemotherapeutic regimen (Fluorouracil, doxorubicin and cyclophosphamide) was used in 75,6 % of patients, followed by AC-T (doxorubicin, cyclophosphamide and paclitaxel) in 14,6 %.AC and CMF combinations (cyclophosphamide, methotrexate and fluorouracil) were used equally in 9,6 % of cases. Comparison of pre-AdjCHEMO and pos-AdjCHEMO images showed significant reduction of cerebral blood flow at the cingulated anterior region of the limbic lobe on the right cerebral hemisphere (p<0,0001) and at the medium temporal gyros located on the left hemisphere (p<0,0001). On the other hand, an increased blood flow (p<0,0001) was observed in 4 areas: (1) left hemisphere, parahippocampal, limbic lobe; (2) right hemisphere, sub lobar area, insular posterior; (3) right hemisphere, cingulated gyros, limbic lobe; (4) left hemisphere, frontal lobe, pre central gyros. Overall a trend for reduction in cerebral... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-09-10. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:51:06Z : No. of bitstreams: 1 000857407_20170910.pdf: 828849 bytes, checksum: 3d1d6ca67089dd4d215ef86e6e490933 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-09-11T13:55:54Z: 000857407_20170910.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-09-11T13:56:49Z : No. of bitstreams: 1 000857407.pdf: 2331591 bytes, checksum: 1fa5b1caae874d52e97bccd59a46ce2f (MD5) / Neste trabalho é apresentado o desenvolvimento de dois sensores eletroquímicos modificados para determinação sensível e seletiva de cisplatina, um dos fármacos mais frequentemente utilizados no tratamento oncológico de diversos tipos de patologias tumorais cancerosas. O primeiro sensor foi desenvolvido a base de pasta de carbono modificado com a enzima glutationa-s-transferase (GST). O biossensor é baseado na resposta inibitória da atividade enzimática da enzima GST devido à adição do fármaco cisplatina. Glutationa reduzida (GSH) e 1-cloro-2,4-dinitrobenzeno foram utilizados como substratos para a enzima GST, os quais foram adicionados na concentração de 1,0 x 10-3 mol L-1 na cela de medida. As técnicas utilizadas para a caracterização do sistema foram espectroscopia de infravermelho, voltametria cíclica e impedância eletroquímica. Os resultados quantitativos daquelas interações foram obtidos usando VOQ, observando-se uma resposta linear entre 50 e 140 μmol L-1 de cisplatina e limite de detecção de 8,8 μmol L-1 de cisplatina. O biossensor apresentou uma boa repetibilidade intra-dia com um desvio padrão relativo de 4,2% avaliando quatro curvas analíticas. O uso da pasta de carbono ofereceu a possibilidade de uma simples, rápida e eficiente renovação da camada de superfície do eletrodo, o que permitiu a utilização da mesma pasta em várias medidas durante um longo período de tempo. Adicionalmente, foi desenvolvido um sensor não enzimático no monitoramento da cisplatina usando eletrodos impressos de carbono (SPCE, screen-printed carbon electrodes) modificados com nanotubos de carbono de multiplas paredes funcionalizados com grupos carboxila (MWCNT-COOH.SPCE) da DROPSENS® (SDS 110CNT). Com o propósito de avaliar a influência dos nanotubos de carbono na resposta do sensor de cisplatina foi utilisada a técnica de voltametria cíclica. O uso do surfactante dodecilsulfato... / This thesis presents the development of two electrochemical sensors for the sensitive and selective detection of cisplatin, one of the drugs most frequently used in the oncologic treatment of several cancer tumor pathologies. The first was a biosensor based on carbon paste modified with the enzyme glutathione-s-transferase (GST). The biosensing was based on the inhibitory response of the enzymatic activity of GST due to the addition of the drug cisplatin. Reduced glutathione (GSH) and 1-chloro-2,4-dinitrobenzene were used as substrates for the GST enzyme, and were added at the concentration of 1.0 x 10-3 mol L-1 in the measuring cell. The techniques used for the characterization of the system were infrared spectroscopy, cyclic voltammetry and electrochemical impedance. The quantitative results of those interactions, obtained by square wave voltammetry (SWV) and differential pulse with adsorptive stripping voltammetry were very similar, and very promising for the analysis of cisplatin. The biosensor showed, using SWV, a linear response between 50 and 140 μmol L-1 of cisplatin. The detection limit was 8.8 μmol L-1 of cisplatin. In the intra-day repeatability studies, the relative standard deviation was 4.2%, from the analysis of four analytical curves, showing the repetitiveness of the electrochemical response of the proposed sensor. The use of the carbon paste offered the possibility of the simple, quick and efficient renewal of the surface layer of the electrode, which allowed the use of the same paste for several measurements during a long period of time. Additionally, a non-enzymatic sensor was developed for the monitoring of cisplatin using screen-printed carbon electrodes (SPCE, screen-printed carbon electrodes), functionalized with multi-walled carbon nanotubes and factory modified with carboxyl groups (MWCNT-COOH) acquired from DROPSENS® (SDS 110CNT). The electrochemical characterization...

Orientador: Cristiane Yumi Koga-Ito / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Marcia de Souza Carvalho / Resumo: O presente trabalho teve como objetivo avaliar a presença de leveduras do gênero Candida na cavidade bucal de pacientes hansenianos, comparando os resultados com indivíduos controle. Foram utilizados enxágües bucais de trinta e oito indivíduos com idade entre 10 a 89 anos, diagnosticados como portadores de hanseníase clinicamente e por exame baciloscópico, que estejam sob poliquimioterapia por no mínimo 45 dias. Para o grupo controle o mesmo número de indivíduos saudáveis e com perfil semelhante (quanto à idade, gênero e condições bucais) aos pacientes do grupo em estudo. As amostras foram processadas e semeadas em ágar Sabouraud dextrose acrescido de cloranfenicol. Após o crescimento, as colônias foram examinadas quanto às características morfológicas, contadas as unidades formadoras de colônias (ufc). As colônias representativas de cada morfologia diferente foram isoladas. A identificação foi realizada por provas de formação de tubo germinativo, produção de hifas/pseudohifas e clamidoconídeos, fermentação, assimilação de carboidratos. Para identificação presuntiva de Candida dubliniensis foi realizado o teste à temperatura diferencial de 45ºC. Também foram realizadas provas de susceptibilidade aos antifúngicos anfotericina B, fluconazol, cetoconazol e 5- fluorocitosina. As contagens de leveduras nos grupos hansenianos e controle foram comparadas estatisticamente por ANOVA teste de Mann-Whitney (5%). O porcentual de pacientes hansenianos positivos para leveduras foi superior aos de indivíduos controle; porém não foi observada diferença significativa entre as contagens de leveduras nos grupos estudados. Houve maior prevalência de C. albicans e C. tropicalis em ambos os grupos estudados. Apenas uma amostra de C. tropicalis foi resistente à anfotericina B e todas as demais cepas foram sensíveis aos antifúngicos testados. / Abstract: The present study aimed to evaluated the presence of Candida genus yeasts in the oral cavity of patients with hanseniasis, comparing the results with control individuals. Mouth rinses of thirty eight individuals aged between 10 to 89 years, diagnosed clinically and by baciloscopic examinations as hanseniasis positive, and who were under multi-drug therapy for at least 45 days were included. Control group was constituted by the same number of healthy individuals and same profile (in relation to age, gender and oral conditions) in relation to the study-group. Samples were processed and plated on Sabouraud dextrose agar supplemented with chloramphenicol. After the growth, colonies were examined in relation to their morphologic characteristics and the number of colony-forming units were counted. The colonies representative of each morphology were isolated. The identification was performed by germ tube formation test, production of hyphae/pseudohyphae and chlamidoconidea, fermentation and assimilation of carbohydrates. Candida dubliniensis presuntive identification was performed by growth at 45°C test. Antifungal susceptibility was tested with amphotericin B, fluconazole, ketoconazole and flucytosine. Counts of yeasts in the hanseniasis and control groups were compared by ANOVA Mann-Whitney's test (5%). The porcentage of hanseniasis patients positive to yeasts was higher in relation to the control group, however no significant differences were observed between the counts of yeasts in the studied groups. Higher prevalence of C. albicans and C. tropicalis was observed in both groups. Only one isolate of C. tropicalis was resistant to amphotericin B and all the other isolates were susceptible to the antifungal drugs tested. / Mestre

Made available in DSpace on 2013-12-21T01:01:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000452946-Texto+Completo-0.pdf: 4295769 bytes, checksum: 7a8634a037c064cad84539c03a441c4a (MD5) Previous issue date: 2013 / Human thymidine phosphorylase (hTP) also known as platelet-derived endothelial cell growth factor (PD-ECGF) or gliostatin, has an important role in nucleotide metabolism. hTP is a molecular target for anticancer drug development since it is overexpressed in certain solid tumours, and its catalityc activity has been shown to be essencial to promote angiogenesis. This work describes amplification, cloning, and recombinant expression in E. coli, purification to homogeinity of both precursor and mature protein hTP. Mass spectrometry analysis confirmed the identity of homogeneous hTP and size exclusion chromatography showed that hTP proteins are a dimer in solution. Kinetic studies allowed the determination of apparent and true kinetic constants for forward reaction, and showed that enzymes displayed substrate inhibition for thymidine. Initial velocity and isothermal titration calorimetry (ITC) studies suggested that hTP catalysis follows a rapid-equilibrium random bi-bi kinetic mechanism. Thermodynamics constants and discrimination profile allowed natural enzyme’s substrates/products binding patterns identification. Additionally, these studies showed differences in the kinetic constants and the thermodynamic parameters between the precursor and the mature protein and these differences were revealed by structural analysis using molecular modeling. The pH-rate profiles suggested that maximal enzyme activity was achieved at low pH values, and functional groups with a pK values of 5. 1 – 5. 2 and 9. 0 – 9. 2 are involved in thymidine binding, and groups with pK value of 6. 1 – 6. 2 and 7. 8 – 8. 6 are involved in phosphate binding. The enzyme characterization provides additional data that may be useful for the rational design of novel inhibitors hTP. Chemical compounds designed and synthesized as potential inhibitors against hTP activity were active in both forms of the enzyme, whereas the compound 5g showed the best inhibitory potential. The compound 5g was characterized as noncompetitive inhibitor towards hTP substrates thymidine and phosphate. The noncompetitive inhibiton mechanism points to the existence of an allosteric binding site at hTP, different from the substrate binding sites. This allosteric site could be considered an important molecular target for the development of potent and selective hTP inhibitors. / A Timidina fosforilase humana (hTP), também conhecida como PD-ECGF e gliostatina, é uma enzima importante no metabolismo de nucleotídeos. A hTP é um alvo molecular para o desenho de inibidores enzimáticos com possível uso na terapia do câncer, visto que essa enzima encontra-se superexpressa em alguns tipos de tumores sólidos e sua atividade catalítica é essencial para promoção da angiogênse. Esta tese descreve a amplificação, clonagem, expressão heteróloga em E. coli, purificação e caracterização bioquímica do precursor e da proteína madura hTP. Análises de espectrometria de massa confirmaram a identidade das proteínas recombinantes e ensaios de cromatografia de exclusão por tamanho revelaram que ambas as enzimas encontram-se como dímeros em solução. Estudos cinéticos permitiram a determinação das constantes cinéticas aparentes e verdadeiras para a reação direta e mostraram que as enzimas apresentam inibição pelo substrato tidimina. Estudos espectofotométricos de velocidade inicial e estudos de ligação por microcalorimetria de titutalação isotérmica (ITC) sugerem que a catálise enzimática segue um mecanismo cinético bi-bi aleatório de rápido equilíbrio. As constantes termodinâmicas e o perfil de discriminação termodinâmica permitiram a identificação dos modos de interação dos substratos/produtos naturais das enzimas com seus sítios de ligação. Além disto, esses estudos revelaram diferenças nas constantes cinéticas e nos parâmetros termodinâmicos entre o precursor e a proteína madura e tais diferenças foram evidenciadas por meio da análise estrutural de ambas as enzimas.O perfil de pH mostrou que a atividade enzimática máxima foi obtida em valores de pH baixos, e que grupamentos funcionais com valores de pK de 5,1 – 5,2 e 9,0 – 9,2 estão envolvidos na ligação à timidina e grupamentos com valores de pK de 6,1 – 6,2 e 7,8 – 8,6 estão envolvidos na ligação ao fosfato. Os resultados da caracterização da enzima fornecem dados adicionais que podem ser úteis para o desenho racional de novos inibidores da hTP. Os compostos químicos planejados e sintetizados como possíveis inibidores da atividade da hTP foram ativos em ambas as formas da enzima, sendo que o composto 5g apresentou o melhor potencial inibitório. O composto 5g foi caracterizado como um inibidor não competitivo em relação aos substratos naturais timidina e fosfato. O mecanismo de inibição não competitiva sugere a existência de um sitío de ligação alostérico na hTP, diferente dos sítios de ligação aos substratos, podendo ser considerado um alvo molecular importante para a busca de inibidores potentes e seletivos para hTP.

Glioblastoma é um tumor cerebral que apresenta uma alta taxa de invasão, sendo que os pacientes portadores do mesmo possuem uma baixa sobrevida. Um dos maiores desafios encontrados é a resistência do tumor ao principal agente quimioterápico utilizado, a temozolomida, além de apresentar um fenótipo de resistência cruzada a outros quimioterápicos tradicionais como a doxorrubicina. Diversos estudos tem mostrado uma ativação contínua do fator de transcrição Transdutor de sinais e ativador de transcrição 3 (STAT3) em glioblastomas resistentes a quimioterapia. Neste trabalho nós examinamos se células de glioma de rato da linhagem C6 que se tornaram resistentes aos quimioterápicos doxorrubicina e/ou temozolamida, apresentam um conteúdo elevado de STAT3 fosforilada (p-STAT3) e se a inibição deste fenômeno pelo inibidor específico de JAK2/STAT3 AG490, poderia sensibilizar novamente estas células a quimioterápicos. Nós observamos que nossas linhagens resistentes apresentaram um IC50 para temozolamida 11 vezes maior do que a linhagem paterna e 33 vezes maior para doxorrubicina em comparação com a linhagem paterna. Além disto, ambas as linhagens resistentes apresentaram um imunoconteúdo elevado de STAT3. A inibição de STAT3 pelo inibidor de JAK2, AG490, apresentou um decréscimo no imunoconteúdo de p-STAT3, uma parada no ciclo celular na fase G2/M e uma consequente ressensibilização das linhagens resistentes aos seus quimioterápicos. Em suma, os dados aqui apresentados nos levam a acreditar que a inibição de STAT3 poderia ser uma interessante terapia adjuvante a ser estudada para a ressensibilização de pacientes com glioblastoma à quimioterapia. / Glioblastoma is a brain tumor whit high invasiveness and low survival. One of the main characteristics of the tumor is the resistance to the standard chemotherapy to the alkylating agent temozolomide, and the multidrug resistance to other traditional chemotherapeutics like doxorubicin. Signal Transducer and Activator of Transcription 3 (STAT3) has been shown to be constitutive active in glioblastomas resistant to chemotherapy. In this work we examined if C6 cells that became resistant to temozolomide and/or doxorubicin have increased STAT3 phosphorylation (p-STAT3) and if the inhibition of this phosphorylation could re-sensitize these cells. We observed that our two resistant lineages showed higher IC50 for TMZ and DOX in order of 11 and 33 fold higher respectively, and elevated p-STAT3 immunocontent when compared to their parental C6 lineage. The inhibition of p-STAT3 by AG490 50 μM decreased the p-STAT3 immunocontent, induced a G2/M arrest in cell cycle and re-sensitizes the resistant C6-TR and C6-DR to their chemotherapeutics showing a synergetic effect with both chemotherapeutics used in this work. In summary, data present here suggest that the inhibition of STAT3 could be an interesting adjuvant therapy for glioblastoma cells that became resistant to the traditional chemotherapy.

O câncer de cólon e reto configura-se como a terceira causa mais comum de câncer no mundo, em ambos os sexos, e a segunda causa em países desenvolvidos. Estudar a qualidade de vida (QV) é fundamental para a presença de intervenções que promovam bem-estar e/ou o estar bem destes pacientes, cujo prognóstico nem sempre é o melhor. Esta dissertação tem como norte a seguinte questão: como é a qualidade de vida do paciente com câncer colorretal em quimioterapia ambulatorial? Trata-se de um estudo transversal com abordagem quantitativa descritiva, no qual buscou-se avaliar a qualidade de vida do paciente com câncer colorretal em quimioterapia ambulatorial. A pesquisa foi desenvolvida em uma Unidade de Quimioterapia Ambulatorial em um hospital do sul do Brasil, cujos pacientes eram portadores do diagnóstico de câncer colorretal e foram submetidos ao tratamento com o Protocolo 5FU. A amostra contou com 48 participantes que estavam em tratamento quimioterápico por um período de 6 meses. Utilizou-se como instrumento de levantamento de dados um questionário já validado e traduzido para o português, o WHOQOL-Bref. Nos resultados encontrados, prevaleceu a idade de 50 anos ou mais, todos os participantes estavam com estadiamento Dukes B e possuíam no mínimo um mês e no máximo 11 meses de tratamento. Os domínios do WHOQOL-Bref afetados mais significativamente foram os domínios II e III (psicológico e relações sociais), respectivamente, havendo diferença nas respostas quanto à QV geral naqueles que estavam no 1º ciclo de tratamento daqueles que já se encontravam no último ciclo (6º). A qualidade de vida é resultado da combinação de fatores subjetivos e de fatores objetivos, precisando suprir às necessidades humanas integrais, em seus aspectos físicos, psicológicos, sociais e espirituais. / Cancer of the colon and rectum appears as the third most common cancer worldwide in both sexes, and the second leading cause in developed countries. Studying the quality of life (QOL) is fundamental for the existence of interventions that promote wellness and/or well-being of these patients, whose prognosis is not always the best. This thesis is guided by the following question: how is the quality of life of patients with colorectal cancer in outpatient chemotherapy? It was a cross-sectional study with a descriptive quantitative approach, which aimed at assessing the quality of life of patients with colorectal cancer in outpatient chemotherapy. The research was conducted in an Outpatient Chemotherapy Unit at a hospital in Southern Brazil, whose patients were diagnosed with colorectal cancer and were treated with 5-FU protocol. The sample had 48 participants who were undergoing chemotherapy for a period of six months. It was used as an instrument of data collection a questionnaire, which has already been validated and translated into Portuguese, the WHOQOL-Bref. In the results found, prevailed the age of 50 years or more, all participants were in Dukes stage B, with at least a month and a maximum of 11 months of treatment. / El cáncer de colon y recto se configura como la tercera causa más frecuente de cáncer en el mundo, en ambos los sexos, y la segunda en los países desarrollados. Estudiar la calidad de vida (CV) es fundamental para la presencia de intervenciones que promueven bienestar y/o el estar bien de los pacientes cuyo pronóstico no siempre sea el mejor. Esta tesina se propone a la siguiente cuestión central: ¿cómo se presenta la calidad de vida de los pacientes con cáncer colorrectal sometidos a quimioterapia ambulatoria? Se trata de un estudio transversal con un abordaje cuantitativo descriptivo en el que se ha buscado evaluar la calidad de vida de pacientes con cáncer colorrectal sometidos a quimioterapia ambulatoria. Se ha desarrollado esta investigación en una Unidad de Quimioterapia Ambulatoria de un hospital ubicado al sur de Brasil, cuyos pacientes eran portadores de diagnóstico de cáncer colorrectal y fueran sometidos al tratamiento con el Protocolo 5-FU. La muestra dispuso de 48 pacientes en tratamiento quimioterápico por un periodo de 6 meses. Se ha utilizado como instrumento de recolección de datos un cuestionario validado y traducido al portugués, el WHOQOL-Bref. En los resultados obtenidos ha prevalecido la franja de edad de 50 años o más, todos los participantes se encontraban en el estadio Dukes B y poseían como mínimo un mes y como máximo 11 meses de tratamiento. The domains of the WHOQOLBref affected more significantly were the domains II and III (psychological and social relations), respectively, with significant differences in responses regarding overall QOL in those who were in the first cycle of treatment from those already in the last cycle (6th). Quality of life is the result of a combination of subjective and objective factors, needing help meeting human needs in full, in terms of physical, psychological, social and spiritual.

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