Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmacology & Toxicology Student: Iveta Rajtmajerová Supervisor: PharmDr. Jana Pourová, Ph.D. Title of diploma thesis: The in vitro effects of selected fenolic substances on isolated rat vessels Silymarin flavonolignans are endowed with various aspects. Recently their hepatoprotective effect has been discussed widely as well as their positive influence on the cardiovascular system. This diploma thesis is concerned with the vasodilatory effects of silybin-A, silybin-B, silybin-A + B and isosilybin-A on rat aorta. The aim of this study was to test the vasodilatory effect of selected substances. The dependence of aortic relaxation on the increasing concentration of tested substances was measured. Isolated Wistar breed rat aorta was used. DRC curves were created and EC50 values were assessed from the obtained values of vessel tension. The results were evaluated subsequently. The vasodilator potential of silybin-A and isosilybin-A is comparable; hence the position of the substituents may be irrelevant in having any impact on relaxation of the vessels. Different vasodilatory effects of silybin-A and silybin-B have been observed thus, the relaxation could be stereoselective. The testing of the equimolar mixture of silybin-A and...

A doença de Chagas ou tripanossomíase americana é uma doença zoonótica, transmitida pelas fezes do inseto triatomíneo, pertencente à família Reduviidae, subfamília Triatominae. Estima-se que 8 milhões de pessoas estejam infectas por T. cruzi em todo o mundo e 25 milhões de pessoas estejam sob o risco de infecção. Durante a prenhez, a demanda de zinco no organismo é aumentada, razão pela qual as mulheres grávidas são mais suscetíveis a apresentarem déficit deste micronutriente. O zinco é um oligoelemento com função essencial no crescimento, desenvolvimento, diferenciação celular e sistema imunológico. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a influência do zinco na ativação de diferentes compartimentos do sistema imune em ratas Wistar prenhas infectadas pela cepa Y de T. cruzi. Foram utilizados 4 grupos experimentais: prenhas infectadas sem tratamento (PI), prenhas infectadas tratadas com sulfato de zinco (PIZ), prenhas controles sem tratamento (PC), prenhas controles tratadas com sulfato de zinco (PCZ). Fêmeas do grupo infectado foram acasaladas trinta dias após a infecção e o tratamento com zinco (20 mg/kg/dia) foi efetuado durante 18 dias. Os animais foram eutanasiados no 18° dia da prenhez (48°dia da infecção). Foram avaliados os seguintes parâmetros: população de macrófagos, produção de nitrito e expressão de RT1B (MHC II) no lavado peritoneal; proliferação de linfócitos (CFSE), perfil apoptótico (anexina V e iodeto de propídeo), expressão fenotípica de linfócitos CD161+, CD3+CD161+, TCD3+CD4+, TCD3+CD8+, expressão de CD11a+, CD28+, células apresentadoras de antígenos CD11b/c+, moléculas coestimulatórias, CD80+,CD86+, linfócito B (CD45RA), células T reguladoras TCD3+CD4+CD25+Foxp3high, perfil de memória CD62L/CD44high. Também foram avaliadas citocinas intracelulares produzidas por linfócitos esplênicos (IL-4, IL- 10, IFN-?, TNF-? e quimiocina MCP-1), citocinas do soro (IL- 2, IL- 4, IL- 6, IL- 10, IL- 12, IL- 17, TGF- ?, INF-? e TNF-?), corticosterona plasmática, zinco sérico, e análise molecular de amostras fixadas (coração, placenta e fetos) para detecção de DNA ii genômico de T. cruzi. Nossos resultados mostraram que o tratamento com zinco aumentou as concentrações de nitrito e expressão de RT1B em macrófagos. Por outro lado, observou-se uma diminuição no perfil de proliferação de esplenócitos e no percentual de células em apoptose. Em relação às populações de linfócitos, o tratamento com zinco diminuiu o percentual de células NKT+, TCD4+, TCD8+ e Treg. Foi possível observar ainda, uma diminuição na produção de TNF-? e IFN-?, e aumento de IL-17 e TGF-?. Desta forma, os resultados mostraram que o zinco exerce papel modulador nos diferentes parâmetros imunológicos em ratas prenhas infectadas com T. cruzi / Chagas disease or American trypanosomiasis is a zoonotic disease, transmitted by the feces of the triatomine insect, belonging to the Reduviidae family, Triatominae subfamily. It is estimated that 8 million people worldwide are infected with T. cruzi and 25 million people are under risk of infection. During pregnancy, an increased demand for zinc is observed, reason why pregnant women are more likely to have a deficit in this micronutrient. Zinc is a trace element which plays an essential function during growth, development, cellular differentiation and immune response. Thus, the goal of this study was to evaluate the influence of zinc on the activation of different compartments of the immune system in pregnant Wistar rats infected with T. cruzi Y strain. Four experimental groups were used: infected pregnant without treatment (PI) and infected pregnant treated with zinc sulfate (PIZ), pregnant controls without treatment (PC), pregnant controls treated with zinc sulfate (PCZ). Females from infected group were mated 30 days post infection and treatment with zinc (20mg/kg/day) was performed for 18 days. Animals were euthanized on the 18th day of pregnancy (48th day of infection). The following parameters were evaluated: macrophages subsets, nitrite production and RT1B (MHC II) expression in the peritoneal exudate; Lymphocyte proliferation (CFSE), apoptotic profile (annexin V and propidium iodide), phenotype expression of CD161+ lymphocytes, CD3+ CD161+, TCD3+ CD4+, TCD3+ CD8+, CD11a+, CD28+, CD11b/c+, CD45RA, TCD3+ CD4+ CD25+ Foxp3high regulatory T cells, CD62L/CD44high memory profile. Intracellular cytokines produced by splenic lymphocytes (IL-4, IL-10, IFN-?, TNF-? and MCP- 1 chemokine), serum cytokines (IL-2, IL-4, IL- 10, IL-12, IL-17, TGF-?, INF-? and TNF-?), plasma corticosterone, serum zinc, and molecular analysis of fixed samples (heart, placenta and fetuses) for detection of T. cruzi genomic DNA. Our results demonstrated that zinc treatment increased nitrite concentrations and RT1B expression in macrophages. On the other hand, there was a decrease in splenocytes proliferation and in the percentage of apoptosis. Furthermore, zinc therapy decreased the percentage of NKT+, TCD4+, TCD8+ and Treg cells. Besides, zinc treatment decreases TNF-? and IFN-? and increase IL-17 and TGF-? production. Indeed, our results demonstrated that actually zinc exerts a modulatory role on the different immune responses as well as cellular subsets from T. cruzi infected and pregnant rats.

A não-união óssea devido a condições pós-traumáticas ou patologias apresentam grandes desafios para a prática ortopédica, onde a necessidade de analisar novos biomateriais que auxiliem no processo da regeneração, tem levado vários pesquisadores a estudarem a membrana do látex natural (LN) e colágeno (COL) como formas de tratamento através da regeneração óssea guiada. O uso do LN têm mostrado promissores resultados em aplicações biomédicas, apresentando características como biocompatibilidade, crescimento ósseo e estímulo natural à angiogênese. Estudos que utilizam as membranas de colágeno para a mesma finalidade também observaram bons resultados em relação à biocompatibilidade, função hemostática, poder de auxiliar na cicatrização de feridas, capacidade de estimular a adesão celular e quimiotaxia. Porém, possuem alto poder de se degradar antes de completar o período final de tratamento. Desta forma, a utilização de membranas contendo estes dois componentes pode auxiliar no processo de neoformação óssea através da regeneração óssea guiada (ROG), e o LN pode funcionar como matriz para a liberação controlada do colágeno no defeito. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da membrana mista, composta por LN/COL, no processo de reparação óssea em defeitos de tíbia de ratos. Para tanto, foram utilizados quarenta (40) ratos machos da raça Rattus norvegicus albinus, da variedade Wistar, com cinco semanas de idade e peso médio de 300 g. Foi realizado um defeito ósseo bilateralmente nas tíbias de todos os animais, que foram divididos em 4 grupos (n=10), sendo: grupo controle (C); e tratados: grupo látex natural (LN); grupo látex natural/colágeno (LN/COL) e grupo colágeno (COL). O tempo de tratamento foi de 42 dias e a eutanásia dos animais foi realizada por overdose de anestésico (ketamina/xilazina). Após a eutanásia, as tíbias de cada animal foram dissecadas e limpas das partes moles, e armazenadas de acordo com protocolo de cada análise. Foram realizadas análise de microtomografia computadorizada (micro CT), densitometria, ensaio mecânico, histologia, e reação de polimerização em cadeia quantitativo (RT-qPCR). A análise estatística dos dados foi realizada utilizando o programa SPSS® (Versão 20.0, IBM®, Armonk, EUA) e foi adotado nível de significância de 5% (p<= 0,05). Foi utilizado o teste de Shapiro-Wilk para testar se os dados apresentavam ou nãodistribuição normal. A comparação entre os grupos (dados paramétricos) foi realizada através do teste ANOVA com pós-teste de Tukey. Os dados não-paramétricos foram analisados através do teste de Kruskal-Wallis. Foram demonstradas diferenças estatísticas no BV entre os grupos LN e CON (p<0,008); BV/TV do grupo LN/COL comparado ao CON (p<0,016) e ao LN (p<0,016); na neoformação óssea entre CON e COL (p< 0,002); e na força máxima quando comparado o grupo COL com CON (p<0,050) e (p<0,001). Os resultados demonstraram que não houve diferença significativa entre os grupos na análise da DMO (p=0,669), colágeno (p=0,224), rigidez relativa (p=0,461), RANK L (p=0,121), OC (p=0,066) e OPG (0,287), porém, todas as membranas utilizadas demonstraram valores superiores ao grupo CON. Sendo assim podemos concluir que as membranas utilizadas como tratamento apresentaram eficácia na reparação óssea de tíbia de ratos, no entanto, as membranas de COL e LN/COL demonstraram resultados mais significativos no período analisado. / The non-union of bone due to post-traumatic conditions or pathologies presents major challenges for orthopedic practice, where the need to analyze new biomaterials that aid in the regeneration process, has led several researchers to study the natural latex (LN) membrane and collagen (COL) as forms of treatment through guided bone regeneration. The use of LN has shown promising results in biomedical applications, presenting characteristics such as biocompatibility, bone growth and natural stimulation to angiogenesis. Studies that use collagen membranes for the same purpose have also observed good results in relation to biocompatibility, hemostatic function, the power to aid wound healing, the ability to stimulate cell adhesion and chemotaxis. However, they have a high capacity to degrade before completing the final treatment period. Thus, the use of membranes containing these two components can aid in the bone neoformation process through guided bone regeneration (ROG), and the LN can function as a matrix for the controlled release of the collagen in the defect. Therefore, the objective of this study was to evaluate the effect of the mixed membrane, composed of LN / COL, in the process of bone repair in rat tibia defects. For this purpose, forty (40) male Rattus norvegicus albinus rats of the Wistar variety, with five weeks of age and average weight of 300 g were used. A bone defect was performed bilaterally in the tibiae of all the animals, which were divided into 4 groups (n = 10), being: control group (C); and treated: natural latex group (LN); natural latex / collagen group (LN / COL) and collagen group (COL). The treatment time was 42 days and euthanasia of the animals was performed by anesthetic overdose (ketamine / xylazine). After euthanasia, the tibia from each animal were dissected and cleaned from the soft tissues, and stored according to each analysis protocol. Computed microtomography (micro CT), densitometry, mechanical assay, histology, and quantitative polymerization (RT-qPCR) were performed. Statistical analysis of the data was performed using the SPSS® program (Version 20.0, IBM®, Armonk, USA) and a significance level of 5% was adopted (p<=0.05). The Shapiro-Wilk test was used to test whether or not the data presented normal distribution. The comparison between the groups (parametric data) was performed through the ANOVA test with Tukey post-test. Nonparametric data were analyzed using the Kruskal-Wallis test. Statistical differences in BVwere found between the LN and CON groups (p <0.008); BV / TV of the LN / COL group compared to the CON (p <0.016) and the LN (p <0.016); in the bone neoformation between CON and COL (p <0.002); and maximal strength when compared to the COL group with CON (p <0.050) and (p <0.001). The results showed that there was no significant difference between groups in the analysis of BMD (p = 0.669), collagen (p = 0.224), relative rigidity (p = 0.461), RANK L (p = and OPG (0.287), however, all the membranes used showed higher values than the CON group. Thus, it can be concluded that the membranes used as treatment showed efficacy in rat tibia repair, however, the COL and LN / COL membranes showed more significant results in the analyzed period.

ABSTRACT Vascular permeability and angiogenesis are crucial events in the rodent and human uterus in early pregnancy and are regulated by vascular endothelial growth factor (VEGF) and prostaglandins liberated from arachidonic acid by cyclooxygenase 2 (COX2). These events coincide with the typical morphological features of the receptive uterus and are regulated by synchronized release of ovarian hormones (oestrogen and progesterone). However, administration of follicle stimulating hormone (FSH) and human chorionic gonadotropin (hCG), commonly used in assisted reproduction, affect the synchrony of the hormonal milieu, particularly by increasing oestrogen levels. This causes detrimental changes to the uterine morphology and affects vascular permeability at the site of implantation. In the present study, the expression of COX2 and VEGF was compared between control and hyperstimulated rat uteri during the peri-implantation period using immunohistochemistry and Western blot analysis. While in control pregnant rats COX2 and VEGF immunolocalization occurred in the luminal epithelial cells and stroma on consecutive days, strong immunolocalization of COX2 and VEGF occurred in the luminal epithelial cells but was inhibited in the stroma of the hyperstimulated rats. This appears to have resulted in the suppression of stromal decidualization and vascular permeability. Western blot analysis did not show any results. This may be due to low concentrations of the protein in the sample. Since vascular permeability and angiogenesis are critical to the process of implantation and are influenced by VEGF and COX2, disturbance of the pattern of these two proteins by hyperstimulation may contribute to the low implantation rate in IVF programes. immunohistochemistry and Western blot analysis. While in control pregnant rats COX2 and VEGF immunolocalization occurred in the luminal epithelial cells and stroma on consecutive days, strong immunolocalization of COX2 and VEGF occurred in the luminal epithelial cells but was inhibited in the stroma of the hyperstimulated rats. This appears to have resulted in the suppression of stromal decidualization and vascular permeability. Western blot analysis did not show any results. This may be due to low concentrations of the protein in the sample. Since vascular permeability and angiogenesis are critical to the process of implantation and are influenced by VEGF and COX2, disturbance of the pattern of these two proteins by hyperstimulation may contribute to the low implantation rate in IVF programes.

Este estudo teve como objetivo investigar uma provável função mecânica da fíbula no complexo tíbio-fibular de ratos. Para tanto, os complexos tíbio-fibulares de 20 ratos da raça Norvegicus Albinus, variedade Wistar, foram submetidos a esforços de compressão axial e flexão em três pontos. Os animais eram adultos jovens, todos machos com peso corporal médio de 350 g. Foram utilizados 20 pares de tíbias para cada ensaio, sendo que, de um dos lados de cada par, a fíbula foi mantida e, do outro lado, removida. Foi utilizado uma máquina universal de ensaio para a realização de ambos os ensaios mecânicos. Os valores foram obtidos na forma de carga versus deformação (ensaio de compressão), e carga versus deflexão (ensaio de flexão). Os seguintes parâmetros foram analisados: carga máxima, deformação máxima e rigidez. Da análise dos resultados foi concluído que a fíbula, no rato, não aumenta a resistência do complexo tíbio-fibular. Assim, a presença da fíbula parece estar mais relacionada com função de inserções musculares do que fortalecimento tíbio-fibular. / This study was conducted to investigate the contribution of the fibula to the mechanical resistance of the tibiofibular complex in the rat (both banes are fused distally). Twenty adult wistar rats were used as donor animals of twenty paired tibias. For each pair of bones in one side the fibula was excited and in the other side it was maintained. In a test machine the mechanical tests were done in three flexion and axial compression. The results were plotted either in load x deformation or load x deflection graphs the following parameters were analysed: ultimate load, ultimate deformation and rigidity. It was concluded that the fibula does not increase the mechanical strength of the tibiofibular complex, but it may play a role as an anchorage for the muscles that act on the foot.

A tribo Oryzomyini abriga 34 dos 86 gêneros sigmodontíneos e apresenta ampla distribuição geográfica, ocorrendo em diversos habitats desde a Terra do Fogo ao sudeste dos Estados Unidos; com representantes cursoriais, arborícolas ou ainda semi-aquáticos, e com diferentes hábitos alimentares, variando de onívoros a insetívoros. Estudos sistemáticos nessa tribo têm sido desenvolvidos com base em dados de morfologia, morfometria, informações citogenéticas e moleculares, o que vêm contribuindo para o reconhecimento de novos táxons. No entanto, a última revisão taxonômica publicada para o gênero Nectomys data da década de 1940, na qual foi reconhecida apenas uma espécie com diversas subespécies, o que aumentou substancialmente a quantidade de nomes associados ao gênero. Diante disso, o cerne desse estudo foi testar a hipótese levantada por Hershkovitz de que Nectomys é representado por apenas uma espécie com ampla distribuição geográfica pela América do Sul. Para testar essa hipótese, reuni informações acerca dos táxons nominais e empreguei análises de variação geográfica com base na metodologia de transectos, tendo como unidades geográficas as bacias hidrográficas da América do Sul. Para isso, apliquei análises univariadas e multivariadas para dados quantitativos, e frequência de caracteres para dados qualitativos. Os resultados apontaram que o gênero Nectomys é composto por oito entidades, assim nomeadas e distribuídas: N. apicalis, encosta oriental da Cordilheira dos Andes do sul do Peru até o norte da Colômbia, no extremo oeste do Estado do Amazonas, no Brasil; N. magdalenae, ao longo do vale do rio Magdalena e ao norte do vale do rio Cauca, no oeste da Colômbia; N. palmipes, Trinidad e Tobago e nordeste da Venezuela; N. rattus, porção norte e central do Brasil, ao norte da bacia do rio Paraná e a oeste do rio São Francisco, Guiana, Suriname, Guiana Francesa, Venezuela (exceto Península de Paria), e rios Ucayali e Huallaga no Peru; N. saturatus, Ibarra, Equador; N. squamipes, Floresta Atlântica, desde Pernambuco até o Rio Grande do Sul, nos Estados de Minas Gerais e na porção leste do Mato Grosso do Sul, Paraguai e na Província de Misiones, na Argentina; Nectomys sp. A, noroeste da Bolívia, encosta oriental da Cordilheira do Andes; e Nectomys sp. B., Amazônia ocidental, nos rios Purus, Juruá e Javari. As análises que conduzi me permitiram estabelecer que a variação morfológica e citogenética não é aleatória: encontrei descontinuidades nítidas entre amostras ao longo da geografia, e com base no conceito de espécie por mim adotado, estabeleço que estas entidades representam oito espécies distintas. / The tribe Oryzomyini holds 34 of 86 sigmodontine genera and presents a wide geographic distribution, occurring in several habitats from Tierra del Fuego to southeast United States ; it includes cursorial, arboreal and semi-acquatic species with distinct food habits, ranging from omnivorous to insectivorous. Systematic studies in Oryzomyini have been based on morphological and morphometric data, as well cytogenetic and molecular information, which is contributing to recognition of new taxa. However, the latest published taxonomic review of the genus Nectomys date from 1940, where was recognized only one species with several subespecies, what increased substantially the amount of names related to the genus. In this way, the main goal of this study was to test the Hershkovitz\'s hypothesis that Nectomys is represented by only one species widely distributed through South America. To test this hypothesis, I gathered information about the nominal taxa and I employed geographical variation analysis based on the transect method, for what I used the South America river basins as a geographic units. To do so, I applied univariated and multivariated analysis for the quantitative data, and character frequency for the qualitative data. The results suggest the genus Nectomys is composed by eight species, which are so named and distributed: N. apicalis, Andean eastern slope, from southern Peru to northern Colombia, and westernmost Amazonas state, in Brazil; N. magdalenae, through Magdalena and Cauca valleys, in Colombia; N. palmipes, Trinidad and Tobago, and northeast Venezuela; N. rattus, central and north region in Brazil, Guyana, Suriname, and French Guyana, Venezuela (except Paria peninsula), and Ucayali and Huallaga rivers in Peru; N. saturatus, Ibarra, Ecuador; N. squamipes, Atlantic Forest, from Pernambuco to Rio Grande do Sul, Minas Gerais and eastern Mato Grosso do Sul in Brazil, Paraguay, and Misiones province, Argentina; Nectomys sp. A, northwestern Bolivia, in the eastern Andean slope; and Nectomys sp. B., western Amazônia, in Purus, Juruá, and Javari rivers. The analysis conducted allowed me to establish that the cytogenetic and morphologic variation is not random: I found marked discontinuities among samples through the geography, and based on the species concept I adopted, I establish that these entities represent eight distinct species.

Neste estudo investigamos os mecanismos reguladores associados à indução da inflamação pulmonar decorrente da /IR intestinal. A hipótese é que mediadores inflamatórios gerados no intestino, drenados pelo sistema linfático medeiam as repercussões pulmonares observadas na SDRA. Grupos de ratos foram submetidos à isquemia intestinal por meio da oclusão da artéria mesentérica superior (45 min) seguida da reperfusão intestinal por 2h. Grupos de ratos foram submetidos à obstrução do fluxo linfático (canulação do dueto torácico linfático, ou sua secção) previamente à indução da I/R intestinal. Os dados indicaram que a secção do dueto linfático torácico reduziu a atividade pulmonar de MPO (índice indireto de presença de neutrófilos), bem como a permeabilidade vascular (extravasamento do corante Azul de Evans) pulmonar e intestinal e aumento da atividade de LDH intestinal (índice de lesão tecidual). Sistemicamente, a ligação do dueto linfático antes da indução de l/R intestinal reduziu os níveis séricos de TNF-<font face=\"symbol\">a, IL- 1<font face=\"symbol\">b e elevou aqueles de IL-10, LTB4e TXB2. Ainda, observamos que a linfa coletada nesses animais é rica em TNF-<font face=\"symbol\">a, IL-1<font face=\"symbol\">b, IL-10, LTB4 e TXB2. O tratamento dos animais previamente à l/R intestinal com o inibidor de síntese de TNF-<font face=\"symbol\">a, pentoxifilina (PTX), reduziu a atividade de MPO pulmonar nos animais submetidos a l/R intestinal com o dueto linfático intaeto e a potencializou naqueles onde o dueto torácico linfático foi seccionado. A PTX reduziu o aumento de permeabilidade vascular pulmonar e intestinal em condições onde dueto linfático torácico foi mantido intacto. Por outro lado em animais l/R intestinal com o dueto linfático seccionado, a PTX não causou redução adicional da permeabilidade vascular, mas reduziu os níveis séricos de IL-1<font face=\"symbol\">b e aumentou os de LTB4, enquanto na linfa, o tratamento com PTX aumentou a concentração de IL-10 e LTB4 e reduziu a de IL-1<font face=\"symbol\">b e TXB2. A inibição não seletiva das NOS com o composto L-NAME causou aumento dos níveis séricos de TNF-<font face=\"symbol\">a, os quais foram reduzidos pela secção do dueto linfático. O bloqueio da geração do NO nos animais com dueto seccionado não alterou o perfil no soro de IL-10, mas elevou a concentração de IL-1<font face=\"symbol\">b. Ainda, na linfa dos animais tratados com L-NAME, houve aumento de IL-1<font face=\"symbol\">b, IL-10, LTB4 e TXB2 e redução de TNF-<font face=\"symbol\">a. Nossos dados ainda revelaram que o pulmão dos animais I/R intestinal gerou IL1<font face=\"symbol\">b e IL-10 quando o dueto linfático estava intacto, e que sua secção reduziu os níveis gerados dessas citocinas. A PTX reduziu a geração de IL-1<font face=\"symbol\">b e aumentou a IL-10 no pulmão.O L-NAME aumentou a IL-1<font face=\"symbol\">b e IL-10 nos animais com o dueto intacto e interrupção do fluxo linfático aumentou os níveis de IL-1<font face=\"symbol\">b. A I/R intestinal, em animais com o dueto intacto, aumentou, enquanto na vigência da obstrução do fluxo linfático, houve redução da expressão de ICAM-1, Mac-1 e E-selectina no pulmão. Finalmente, os dados apresentados neste estudo sugerem que eventos isquêmicos intestinais seguidos de sua reperfusão, induzem a geração de mediadores inflamatórios locais (intestino) os quais uma vez drenados pelo sistema linfático mesentérico são transportados pela linfa e atingem o pulmão. Nessas condições observa-se inflamação pulmonar e geração adicional de mediadores inflamatÓrios os quais são lançadas à circulação e concorrem para o desenvolvimento da inflamação sistêmica e eventualmente para a falência múltipla dos órgãos. / In this study we investigated the role of lymphatic system on the mechanisms associated to the induction of lung inflammation afier intestinal I/R in rats. The hypothesis ofthe study was that upon intestinal I/R, inflammatory mediators are generated in the intestine and once drained by mesenteric lyrnphatic system interfere with the lung homeostasis contributing to lung dysfunction observed in ARDS. To these purposes groups of rats were submitted to occlusion of superior mesenteric artery (45 min) followed by intestinal reperfusion during 2h when the rats were killed. Groups of rats were subjected to thoracic lymphatic duct ligation previously to induction of the intestinal I/R. The data showed that the thoracic duct ligation significantly reduced the increased pulmonary MPO activity and the augrnented vascular perrneability (extravasation of the Evans blue dye) in lung and intestine. In addition, thoracic duct ligation increased the intestinal activity of LDH. Systemically, the obstruction of lymph flow, leaded to reduction of TNF in serum of rats upon intestinal I/R and increased the levels of IL-1O, LTB4 and TXB2. Elevated levels of TNF-<font face=\"symbol\">a, IL-l<font face=\"symbol\">b), IL-1O, LTB4 and TXB2 were also found in lymph ofrats upon intestinal I/R. The treatment of the animals previously to the intestinal I/R induction with inhibitor of TNF-<font face=\"symbol\">a synthesis, pentoxyfilline (PTX), reduced the lung MPO activity upon lymphatic duct intact that was exacerbated by thoracic duct ligation. PTX treatment reduced the increased vascular permeability of the lung and intestine conditions in rats with lymphatic duct intact. On the other hand, when the thoracic duct was ligated, the PTX did not cause additional reduction of vascular permeability in both tissues , but reduced the serum levels of IL-1<font face=\"symbol\">b) and increased those of LTB4. Lymph of rats treated with PTX revealed an increased leveI of IL-10 and LTB4 and a reduced leveI of IL-<font face=\"symbol\">b) and TXB2. L-NAME treatment increased the serum levels of TNF-<font face=\"symbol\">a, which were reduced by the thoracic lymphatic duct ligation. The blockade of NO synthesis in rats with lymphatic duct ligation did not modify the IL-10 serum levels, but increased those of IL-1<font face=\"symbol\">b). Lymph of rats upon L-NAME treatment, an increased level of IL-1<font face=\"symbol\">b), IL-1O, LTB4 and TXB2 and a reduction of TNF-<font face=\"symbol\">a levels were detected. Pulmonary tissue of Iymphatic duct intact rats after intestinal I/R were increased the release of IL-1<font face=\"symbol\">b) and IL-10 whereas the thoracic duct ligation reduced the release of these cytokines. PTX treatment reduced the levels of IL-1<font face=\"symbol\">b) and increased the IL-10 in the lung. L-NAME treatment increased the IL-1<font face=\"symbol\">b) and IL-10 in lung of intact duct rats but the obstruction of lymph flow caused an increase release of IL-1<font face=\"symbol\">b levels. Intestinal I/R in intact duct rats, increased whereas the thoracic duct ligation reduced the pulmonary expression of ICAM-1, Mac-1 and E-selectin. In conclusion, our data suggest that intestinal I/R, induces the generation of local inflammatory mediators (intestine) which drained by the mesenteric lymphatic system are carried by the lymph and reach the lung. ln these conditions we observed pulmonary inflammation and additional generation of inflammatory mediators and eventually the development of the systemic inflammation. Our data support the view that lymphatic system play a role a path underlying the spread oflung and gut injury after intestinal I/R.

Dentre as diversas possibilidades de reconstrução de tecidos ósseos atróficos, a regeneração óssea guiada é uma das mais promissoras. Neste contexto, muitas membranas reabsorvíveis tem sido desenvolvidas e precisam ser testadas como parte de sua caracterização. O objetivo do presente estudo foi avaliar radiográfica e histologicamente em um estudo in vivo, se uma nova membrana polimérica eletrofiada de PCL/poli(rotaxona) demonstra comportamento semelhante a uma membrana de colágeno, comercialmente consagrada, quanto à promoção de regeneração óssea guiada. Foi realizado defeito crítico de 8mm de diâmetro na calvária de 60 ratos Wistar machos. Em dois grupos iguais (n=20) os defeitos foram recobertos aleatoriamente por uma membrana de colágeno suíno ou por uma membrana polimérica mista de policaprolactona (PCL) e poli(rotaxona). Em um terceiro grupo (n=20) os defeitos não foram recobertos e permaneceram apenas com o coágulo. Os animais sofreram eutanásia em 7, 14, 21 e 42 dias pós operatórios. Espécimes da região foram radiografadas e preparadas para análise histológica. Radiograficamente, os defeitos recobertos pela membrana de colágeno suíno apresentaram diminuição mais significativa da área radiográfica dos defeitos de acordo com a progressão dos períodos pós-operatórios do que nos outros grupos. A histomorfologia do reparo mostrou agrupamentos mais expressivos de células gigantes no grupo PCL/poli(rotaxona) sugerindo resposta à corpo estranho. Na histomorfometria, a neoformação óssea foi significativamente mais intensa e com osso neoformado mais maduro no grupo Colágeno. Concluímos que para um modelo de regeneração óssea guiada, a membrana de PCL/poli(rotaxona) não superou a membrana de colágeno. / The need to rebuild lost bone tissue, shows up as one of the great challenges of modern dentistry. Among several possibilities, guided bone regeneration is one of the most established techniques. In this context, many resorbable membranes have been developed and need to be tested as part of their characterization. The aim of this study was to evaluate by an in vivo model, if a new electrospinning PCL/polyrotaxane polymer membrane promotes similar guided bone regeneration when compared to a collagen membrane. An 8mm diameter critical defect was made in 60 male Wistar rats calvaria. In two equal groups (n = 20) the defects were randomly covered with a porcine collagen or a PCL/polyrotaxane membranes. In a third group (n = 20) the defects remained uncovered and just the blood clot occupied the defect. The animals were euthanized at 7, 14, 21 and 42 days post-operative. Specimens were x-rayed and prepared for histological analysis. Radiographically, the defects covered by porcine collagen membrane, showed more significant reduction in defect area, according to postoperative period evolution. Histomorphology showed intense giant cells presence in the PCL/polyrotaxane group, suggesting a foreign body response. The histomorphometric analysis showed new and mature bone formation more intense in collagen group. Under the limits of this study, the collagen membrane performance in guided tissue regeneration was far superior to the PCL/polyrotaxane membrane.

A idade afeta vários fatores do sistema locomotor, incluindo as propriedades mecânicas. Os ossos são materiais viscoelásticos e uma característica destes materiais é a ocorrência de histerese quando são submetidos a ciclos de carregamento e descarregamento. Nesta pesquisa nós estudamos a tensão máxima e a energia de histerese de fêmures de ratas de diferentes idades, submetidos a ensaios de flexão em três pontos. Foram utilizados os fêmures de 90 ratas fêmeas, da raça Wistar, os animais foram divididos em três grupos de 30 animais de acordo com a idade: 25 dias (A), 65 dias (B) e 365 dias (C). Cada grupo foi subdividido em 3 lotes de 10 animais. Todos os fêmures foram submetidos a ensaio de flexão em três pontos. De cada par de ossos, o fêmur esquerdo foi submetido a carregamento até a ruptura (ensaio destrutivo) e, o fêmur direito foi submetido a carregamento até 40% (lote I), 60% (lote II) e 80% (lote III) do limite elástico obtido do fêmur contralateral e, então, descarregado. Comparando os grupos B e C, as energias de carregamento e de descarregamento aumentaram com a idade e com o nível de carregamento, mas, a energia de histerese aumentou somente com o nível de carregamento. Na comparação entre os três grupos, a tensão máxima aplicada aumentou significativamente com a idade (p 0,001) e, a perda de energia relativa foiestatisticamente igual entre todos os lotes de uma mesma idade, 25 dias (p=0,136), 65 dias (p=0,583) e 365 dias (p=0,177), mas diminuiu significativamente com a idade (p<0,001). Podemos concluir que a idade exerceu influências na tensão máxima e no comportamento viscoelástico dos fêmures de ratas, mas são necessários estudos mais profundos para compreendermos melhor este material. / Ageing affects many features of the locomotor system, including its mechanical properties. Bone is a viscoelastic material what means that it displays the phenomenon of hysteresis when submitted to loading-unloading cycles. In the present research we studied the behavior of the ultimate stress and the energy of hysteresis of femurs of rats in different ages, when tested in bending. Ninety femurs collected from female Wistar rats were used. There were three groups classified according to the animal age: 25 days (A), 65 days (B) and 365 days (C). The groups were divided into 3 subgroups (10 animals each). All the femurs were submitted to a three-point bending test. For each paired bones, the left femur was loaded until failure and the right femur was load to 40% (subgroup I), 60% (subgroup II) and 80% (subgroup II) of the yield load in relation to the opposite side femur and, then, unloaded. Comparing the groups B and C, the energies of loading and unloading increased with age and loading level, but, the energy of hysteresis increased only with loading level. The comparison among the three groups showed that the ultimate stress increased with age (p 0.001) and, the relative energy loss was equal for the subgroups belonging to the same group, A (p=0.136), B (p=0.583) and C (p=0.177), but different when the different groups were compared (p<0.001). It was concluded that ageing affects both the ultimate stress and the viscoelastic behavior of rat femurs, but further studies are necessary to deepen the knowledge in such matter.

Para avaliar as fibras elásticas na junção vésico-uretral de ratos, em diferentes faixas etárias, realizou-se estudos histológicos, microscopia elêtronica e histomorfometria. O estudo histológico do sistema de fibras elásticas mostrou a presença dos três tipos de fibras elásticas, em todas as faixas etárias, a microscopia eletrônica de transmissão, mostrou as diferenças ultra-estruturais entre as fibras elásticas. A avaliação histomerfométrica revelou diminuição na densidade linear das fibras elásticas e oxitalânicas e aumento na das elaunínicas. Na junção vésico-uretral de animais velhos, há uma queda nas propriedades de elasticidade, recuo elástico e ancoragem, que são compensadas pelas fibras elaunínicas. O processo de envelhecimento das fibras elásticas na junção vésico-uretral não contribui sozinha e diretamente no estado de incontinência urinária, mas compensa e dá suporte a muscular, devido ao aumento das fibras elaunínicas, o que torna o sistema elástico na junção vésico-uretral indiretamente responsável pela manutenção da continência urinária. / To evaluate the elastic fibers in the junctio vesico-urethral of the rat, in different age groups, was accomplished studies histologics, electron microcopy and histomorphometrics. Study histologic showed the presence of the three types elastic fibers in all the studied age groups, electron microcopy showed the ultra-structural differences amoung elastic fibers. Histomorphometric studies revealed a decrease the linear density of the mature elastic fibers and oxytalans and an increase elaunin. In the junction vesico-urethral of the old animals there is a fall the properties elastic, elastic recoil and achorage, but they are compensated by elaunins. Processs aging of the elastic system in this place doesn?t contribute alone or directly in urinary incontinence, but it is indirectly responsible for the maintenance urinary continence.