Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2012-10-24T07:33:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 266270.pdf: 1306759 bytes, checksum: cf35a1868bde66705b1ab7bb35b513ec (MD5) / Os linfomas constituem um grupo heterogêneo de desordens malignas com diferentes comportamentos clínicos, distintos fatores patológicos e características epidemiológicas. O Linfoma Folicular (LF) e o Linfoma Difuso de Grande Célula B (LDGC) são os mais freqüentes tipos de neoplasia linfóide de células B maduras. Na atual classificação OMS para os linfomas, a histologia permanece como importante parâmetro para a classificação, embora o diagnóstico destas neoplasias também possa ser baseado na informação combinada do imunofenótipo, genótipo e manifestações clínicas, as quais por si só fornecem informações suficientes para a conduta clínica. A translocação (14;18)(q32;q21) é uma nas anormalidades citogenéticas mais bem caracterizadas em doenças linfoproliferativas B periféricas, sendo detectável em aproximadamente 90% dos LF e 20% dos LDGC dependendo do teste diagnóstico utilizado. Desta forma, o presente estudo teve como objetivo padronizar a detecção da translocação t(14;18)(q32;q21) através da reação de PCR multiplex, assim como estabelecer uma relação entre as características imunofenotípicas e moleculares, por citometria de fluxo e reação em cadeia da polimerase, respectivamente, nos LF e LDGC avaliados. A partir da avaliação das características citomorfológicas e imunofenotípicas, 83 amostras de origens variadas foram caracterizadas: Hiperplasia Reacional (10), Linfoma da Zona do Manto (20), Linfoma Folicular (38) e Linfoma de Grande Célula B (15). A pesquisa da t(14;18) relativa ao ponto de quebra em MBR foi realizada em 35 amostras de LF e em 10 de LDGC e a alteração foi revelada em 65,5% das amostras de LF em 30% das amostras de LDGC. Seis casos (15%) sem classificação do tipo de linfoma B pela citomorfologia e a imunofenotipagem confirmaram a translocação pela PCR, revelando a importância desta metodologia na classificação do tipo de linfoma.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-08-14T17:17:44Z No. of bitstreams: 1 dissertação Fernanda Alvarenga Cardoso 1.pdf: 1458584 bytes, checksum: a3070865cab7509b6900f5f36ab2b623 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-14T17:17:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertação Fernanda Alvarenga Cardoso 1.pdf: 1458584 bytes, checksum: a3070865cab7509b6900f5f36ab2b623 (MD5) Previous issue date: 2013 / Nas últimas décadas, a reação em cadeia da polimerase (PCR) vem sendo utilizada para o diagnóstico da leishmaniose visceral (LV) com diferentes objetivos: o diagnóstico da infecção, da doença e o controle de cura. Para utilização em larga escala, a etapa de eletroforese para detecção dos produtos amplificados na PCR, torna a técnica complexa e onerosa. A PCR-ELISA representa uma alternativa de detecção do produto amplificado por PCR através de um ensaio imunoenzimático (ELISA). Esta técnica é capaz de conferir maior sensibilidade e rapidez para a análise de grandes números de amostras clínicas com o uso de equipamentos utilizados para processamento de ELISA e, portanto, permite realizar PCR para fins de diagnóstico em laboratórios de média complexidade. Assim, este estudo objetivou desenvolver e validar o método de detecção colorimétrica dos produtos de amplificação gerados pela reação de PCR para o diagnóstico da LV em amostras de sangue periférico.O método de PCR-ELISA foi desenvolvido para detecção de fragmento de DNA do cinetoplasto (kDNA), complexo Donovani-específico. Utilizando-se cepas referências de Leishmania em cultivo e de painel de amostras de sangue periférico humano de 11 indivíduos não infectados, moradores de área endêmica e 14 casos de LV, caracterizadas clínica e parasitologicamente, determinou-se o limite de detecção da reação, medidas de precisão (repetibilidade e reprodutibilidade) e limite entre positivo e negativo (cut-off). A avaliação do desempenho do ensaio foi realizada com amostras de sangue periférico de 105 pacientes portadores de LV, 25 pacientes portadores da co-infecção Leishmania/HIV e de 73 indivíduos moradores de área endêmica para a LV. Foi desenvolvido ainda um ensaio de PCR-ELISA para detecção do DNA amplificado do gene humano ACTB, para uso como controle do processo de extração de DNA e amplificação por PCR das amostras clínicas. O ensaio PCR-ELISA kDNA desenvolvido apresentou limite de detecção de 1 parasito/mL de sangue e 0,07fg/µL de DNA de L. (L.) infantum, sensibilidade de 100% (IC 95%: 97,1 a 100%) e especificidade de 95% (IC 95%: 83,5 a 98,6%). Todos os indivíduos assintomáticos de área endêmica, com positividade por outras técnicas diagnósticas, foram também positivos pela PCR-ELISA. Todas as amostras foram testadas satisfatoriamente para o ensaio de PCR-ELISA ACTB. O ensaio de PCR-ELISA kDNA, desenvolvido e validado neste estudo, apresenta simplicidade metodológica e operacional, permite interpretação objetiva da amplificação por PCR do DNA de Leishmania do complexo Donovani e desempenho adequado no diagnóstico da LV em laboratórios de referência. / In recent decades, the polymerase chain reaction (PCR) has been used for the diagnosis of visceral leishmaniasis (VL) with different goals: diagnosis of infection, disease control and cure. For large-scale use, the step of electrophoresis to detect amplified products of PCR makes this technique more complex and costly. The PCR-ELISA is an alternative for the detection of the amplified PCR product through an immunoenzymatic assay (ELISA). This technique offers higher sensitivity and speed for the analysis of large numbers of clinical specimens, using equipment widely used for processing sets of ELISA and therefore allows performing PCR for diagnostic purposes in laboratory of medium complexity. Thus, this study aimed to develop and validate the colorimetric detection method (ELISA) for amplification products generated by PCR targeting the diagnosis of VL.The method of PCR-ELISA was developed to detect a fragment of DNA of kinetoplast (kDNA) specific from Leishmania donovani complex. Using reference strains of Leishmania in cultivation and a panel of human peripheral blood samples of 11 non-infected individuals, residents of endemic area and 14 cases of VL with clinical and parasitological characterization, we determined the detection limit of the reaction, precision measurements (repeatability and reproducibility) and limit between positive and negative (cut-off). The performance of the assay was evaluated with peripheral blood samples of 105 patients with VL, 25 patients showing the co-infection Leishmania/HIV and 73 individuals living in endemic areas for VL. A PCR-ELISA assay for detection of DNA from the human ACTB gene was also developed for use as control for the process of DNA extraction and amplification by PCR of clinical samples. The PCR-ELISA kDNA assay developed showed a detection limit of 1 parasite/ml blood and 0.07 fg/µL of DNA from L. (L.) infantum. The assay showed a sensitivity of 100% (IC 95%: 97.1 to 100%) and specificity of 95% (IC 95%: 83.5 to 98.6%). All asymptomatic individuals from an endemic area, who were diagnosed for LV by other techniques, were also positive by PCR-ELISA kDNA. All samples were tested satisfactorily by PCR-ELISA ACTB assay. The PCR-ELISA kDNA assay was developed and validated in this study. It presents methodological and operational simplicity; enables objective interpretation of PCR amplification of DNA from Leishmania donovani complex and have sufficient performance for diagnosis of VL in reference laboratories.

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-17T16:14:55Z No. of bitstreams: 1 TESE ROSIMERY merged (2).pdf: 13670043 bytes, checksum: 3d066fc62d2695e641494985db2b5801 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-17T16:14:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE ROSIMERY merged (2).pdf: 13670043 bytes, checksum: 3d066fc62d2695e641494985db2b5801 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A história natural da leishmaniose visceral americana apresenta poucos estudos relacionados ao conhecimento dos reservatórios associados à Leishmania. Para os estudos de infectividade, foram realizados experimentos com os seguintes roedores silvestres: Nectomys squamipes, Rattus rattus e Galea spixii para incriminação de hospedeiros reservatórios de Leishmania (Leishmania) infantum , foram realizados duas repetições, com 10 roedores de cada espécie perfazendo um total de 60 animais, todos colonizados em laboratório. Como grupo controle foi utilizado seis hamsters (Mesocricetus auratus) para cada grupo de dez animais. Nas duas repetições, os animais foram inoculados com 2,8x105 /ml de promastigotas de fase log de Leishmania (leishmania) infantum. Amostras de pele, baço e fígado dos animais foram processadas para a detecção de DNA por meio de PCR específica para o subgênero Leishmania. Como resultado obtivemos dos 60 animais inoculados, 36 roedores positivos em amostras de pele, baço e fígado bem como 3 hamsters de controle (50%). Foram capturados entre 2009/2010 95 roedores silvestres para detecção de infecção natural. Destes, 9 animais das espécies: Nectomys squamipes, Necromys lasiurus e Rattus rattus foram positivos por PCR em amostras de pele, baço e fígado para Leishmania. As capturas de flebotomíneos utilizando armadilhas do tipo CDC para detecção de infecção natural dos espécimes coletados 420 flebotomíneos (fêmeas) de mais de 3.000 capturados foram processadas, 110 fêmeas em amostras individuais e 31 pools de 10 fêmeas cada um, destes, 6 foram positivos para Leishmania pela técnica de PCR e pela técnica de Dot-Blot hibridização, foram positivos 2 (33,3%) flebotomíneos para Leishmania (L.) infantum e 4 (66,6%) flebotomíneos para Leishmania (V.) braziliensis. Com a utilização da armadilha de Disney modificada em região de mata, utilizando como isca o roedor silvestre Galea spixii, foram capturados 131 flebotomíneos fêmeas e todas identificadas como da espécie Lutzomyia complexa. / The natural history of American visceral leishmaniasis presents few studies related to knowledge of reservoirs associated with Leishmania. In order to characterize the experimental infectivity in wild rodents of the following species: Nectomys squamipes, Rattus rattus and Galea spixii for trials of reservoir hosts of Leishmania (Leishmania) infantum , two experiments were conducted with 10 rodents of each species for a total 60 animals, all colonized in the laboratory. For the control was used six hamsters (Mesocricetus auratus) for each group of ten animals. In both experiments, the animals were inoculated with 2.8 x105 / ml log phase promastigotes of Leishmania infantum. Samples of skin, liver and spleen of animals were processed for DNA detection by PCR specific for the subgenus Leishmania. As a result we obtained the 60 injected animals, 36 (%) positive for samples of rodent skin, spleen and liver and 3 (50%) control hamsters. During 2009/2010 were collected 95 wild rodents for the detection of natural infection. Of these, nine animals: Nectomys squamipes, Bolomys lasiurus and Rattus rattus were positive by PCR in samples of skin, liver and spleen for Leishmania. The catch of sandflies using CDC traps for detecting natural infection, 420 female sand flies out of 3.000 were processed in 110 individual samples and 31 pools of 10 females sandflies each of these, 6 were positive by PCR and Dot-Blot hybridization technique, 2 (33.3%) were positive for L. (L.) infantum and, four (66.6%) for Leishmania (V.) braziliensis. During two years several attempts were made to obtain a colony of the Lutzomyia migonei for xenodiagnosis, however after several attempt no sufficient number of sandflies was able to perform this procedure, because of early mortality of the adults. Modified Disney trap baited with Galea spixii were used during a period of four months to capture sandflies in a forest area São Vincente Férrer. 131 sand flies captured were identified as Lutzomyia complexa.

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-24T13:25:42Z No. of bitstreams: 1 Grazielle Cardoso da Graça.pdf: 2006498 bytes, checksum: 53326885a5878760b37f852744da05fd (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-24T13:25:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Grazielle Cardoso da Graça.pdf: 2006498 bytes, checksum: 53326885a5878760b37f852744da05fd (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A leishmaniose é um complexo de doenças caracterizada não só pelo considerável pleomorfismo clínico, mas também pela variação epidemiológica, devido à notável diversidade de espécies de Leishmania e de vetores envolvidos no ciclo de transmissão e, quando aplicável, os seus grupos de reservatórios. O diagnóstico da infecção por Leishmania associado à identificação da espécie causal é importante para o prognóstico, definição de esquemas terapêuticos adequados e para vigilância epidemiológica da doença. Neste contexto, os métodos baseados na PCR tem sido os mais investigados e por isso muitos métodos tem sido descritos. O principal objetivo deste estudo foi estabelecer uma metodologia que apresentasse uma boa sensibilidade para ser utilizada no diagnóstico da leishmaniose cutânea e que fosse capaz de identificar o agente etiológico causal da infecção ao nível específico. Para isto, neste trabalho utilizamos diferentes metodologias baseadas na PCR que já foram empregadas em vários estudos enfocando o diagnóstico molecular das leishmanioses: PCR kDNA, PCR ITS1 e PCR g6p. O limite de detecção, sensibilidade frente a amostras clínicas obtidas de pacientes com LC e a capacidade destas metodologias em discriminar entre as espécies relacionadas com a LC humana no Brasil foram avaliados. Além disso, considerando resultados anteriores do nosso grupo que indicaram que regiões do gene hsp70 poderiam ser utilizadas para o alcance deste objetivo, desenvolvemos metodologias de PCR direcionadas para a amplificação de fragmentos que correspondiam a distintas regiões do gene hsp70, com tamanho variando entre 230pb a 390pb. Considerando as quatro regiões que foram analisadas, escolhemos uma (aqui denominada de PCR hsp70C) por ter apresentado o melhor limite de detecção de DNA de Leishmania e que, através da PCR RFLP hsp70C, foi capaz de discriminar todas as espécies de Leishmania, patógenos humanos, que circulam no Brasil, quando cepas de referência foram analisadas. A sensibilidade da PCR hsp70C empregando DNA extraído de tecido coletado de pacientes diagnosticados com leishmaniose foi avaliada, comparando com as demais metodologias mencionadas anteriormente; além disso, a capacidade da PCR-RFLP em identificar espécies de Leishmania foi validada empregando um painel de 70 cepas de Leishmania, representando as diferentes espécies e a distribuição geográfica destas, e também foi aplicada ao material clínico analisado. Foi possível concluir que a PCR kDNA é um método bastante sensível e por isso indicado para o diagnóstico molecular das leishmanioses, mas não permite a identificação de espécies. A PCR ITS1 apresenta boa sensibilidade para o diagnóstico das leishmanioses, mas a capacidade de identificação de algumas espécies de Leishmania que circulam nas Américas, através da PCR-RFLP, depende de metodologias mais complexas, dificultando seu uso em áreas de circulação de espécies como L. braziliensis e L. guyanensis, por exemplo. Finalmente, A PCR-RFLP hsp70C, direcionada para a amplificação de uma região do gene hsp70 de Leishmania, combina boa sensibilidade para detectar Leishmania diretamente em material clínico e a habilidade em identificar todas as espécies que circulam no Brasil, sendo útil principalmente em áreas onde existe a ocorrência de espécies de Leishmania em simpatria. / Leishmaniasis is zoonosis caused by parasite protozoa belonging to the genus Leishmania, which comprises about 30 species, and of these about 20 are responsible for causing human diseases. Leishmaniasis is characterized by considerable clinical pleomorphism and epidemiological variability. Diagnosis of Leishmania infection associated with the identification of the causative species is important for prognosis, definition of appropriate treatment schemes and epidemiological surveillance of the disease. In this context, PCR-based methods have been the most investigated and therefore many methods have been described, although there are still limitations in terms of validation and ability to discriminate between different Leishmania species. In Brazil there are at least seven species associated with human cutaneous Leishmaniasis (CL) and one species associated with visceral Leishmaniasis. The main goal of this study was to establish a methodology presenting both good sensitivity and capacity to identify the causative etiologic agent of the infection at species level. To this end, this study employed different methodologies based on PCR already used in several studies focusing on the molecular diagnosis of Leishmaniasis: kDNA PCR, ITS1 PCR and g6p PCR. The limit of detection, sensitivity in the face of clinical samples obtained from patients diagnosed with CL and the ability of these methodologies to discriminate between species related to human CL in Brazil were evaluated. Furthermore, considering previous results from our group showing that regions of the hsp70 gene could be used to achieve this goal, we developed PCR-based methodologies targeting fragments that correspond to different hsp70 gene regions, with sizes ranging from the 230pb to 390pb. Considering the four regions that were analyzed, we chose one (here named as hsp70C PCR) for having presenting the best detection limit of Leishmania DNA and the capacity of discriminating human pathogens Leishmania species that circulate in Brazil, when reference strains were analyzed by PCR RFLP hsp70C. The sensitivity of hsp70C PCR using DNA extracted from tissue collected from patients diagnosed with CL compared with the other methods mentioned above. In addition, the ability of hsp70C PCR-RFLP to identify Leishmania species has been validated using a panel of 70 Leishmania strains, representing different species and geographic regions aditionaly clinical material was also analyzed. The results suggest that kDNA PCR is a very sensitive method and therefore suitable for the molecular diagnosis of Leishmaniasis, but does not allow the identification of the species envolved in the infection. The ITS1 PCR is quite sensitive for the diagnosis of Leishmaniasis, but the non ability to identify the sympatric species like L.guyanensis and L.braziliensis, by PCR-RFLP limits its use in some in the South America. Finally, PCR-RFLP hsp70C, combines good sensitivity to detect Leishmania DNA extracted from clinical material and the ability to identify all Leishmania species that circulate in Brazil, being particularly useful in areas where Leishmania species are simpatric.

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-24T15:16:03Z No. of bitstreams: 1 Irlane Faria de Pinho.pdf: 1040715 bytes, checksum: 87d7812b6d730954fda7c527c1132c57 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-24T15:16:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Irlane Faria de Pinho.pdf: 1040715 bytes, checksum: 87d7812b6d730954fda7c527c1132c57 (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A taxa de infecção por Trypanosoma cruzi em triatomíneos é um importante parâmetro para a avaliação do risco de transmissão vetorial da doença de Chagas em localidades onde há infestação doméstica e peridoméstica por estes insetos. A infecção por T. cruzi em insetos vetores costuma ser avaliada pelo exame, através de microscopia óptica, de suspensões do conteúdo intestinal fresco dos insetos, buscando-se nelas a presença de tripanossomatídeos flagelados. Esta metodologia apresenta como desvantagens a necessidade de se transportar os insetos vivos até o laboratório, além de não permitir a identificação da espécie de tripanossomatídeo presente nas fezes dos triatomíneos. Técnicas de biologia molecular baseadas na reação em cadeia da polimerase (PCR) têm, portanto, sido desenvolvidas para a identificação de T. cruzi em amostras biológicas, como o conteúdo intestinal dos triatomíneos. O objetivo desta dissertação foi avaliar a aplicabilidade e a sensibilidade de uma técnica de diagnóstico molecular da infecção natural por T. cruzi, baseada na utilização de papel de filtro, em triatomíneos capturados no estado do Ceará. Adicionalmente, procurou-se avaliar esta técnica diagnóstica em amostras do conteúdo intestinal de triatomíneos criopreservadas em papel de filtro durante 11 anos. Foram estudados os conteúdos intestinais de 68 espécimes de triatomíneos capturados no ano de 2000 (Rhodnius nasutus, n=40; Triatoma pseudomaculata, n=25 e T. brasiliensis, n=3), além de fezes de 51 espécimes coletados no ano de 2010 (T. pseudomaculata, n=15; T. brasiliensis, n=36). Os conteúdos intestinais obtidos por compressão abdominal dos 119 triatomíneos foram analisados pelo exame direto por microscopia óptica. As fezes foram diluídas sobre as lâminas de microscopia, em solução salina tamponada, cobertas com lamínulas e examinadas no microscópico óptico com aumento de 400 vezes, para observação direta da presença de tripanossomatídeos. Alíquotas das suspensões fecais foram separadas e aplicadas em tiras de papel de filtro (FTA Card, GE Healthcare, Buckinghamshire, UK), que foram armazenadas individualmente em tubos de 2 mL e acondicionadas em freezer a -20 ºC, para utilização na técnica de PCR, visando a detecção de kDNA de T. cruzi. Empregaram-se os iniciadores S35 5´- AAATAATGTACGGG(T/G)GAGATGCATGA-3`, e S36 5´- GGTTGCATTGGGTTGGTGTAATATA-3`, que amplificam o fragmento de 330 pares de bases contendo as regiões variáveis dos minicírculos do DNA do cinetoplasto (kDNA). O cálculo comparativo das sensibilidades das técnicas diagnósticas (microscopia óptica e PCR) foi realizado da seguinte forma: sensibilidade da técnica = número de exames positivos por esta técnica / número de exames positivos em quaisquer das duas técnicas. Com relação à análise dos 68 conteúdos intestinais criopreservados em papel FTA Card, 58 foram positivos pela microscopia óptica. Destes, 56 foram positivos pela PCR. Obteve-se, desta forma, uma sensibilidade comparativa de 96,5% para a PCR e 100% para a microscopia óptica. Analisando-se as 51 amostras fecais recém-obtidas de triatomíneos, obteve-se uma positividade, pela microscopia óptica, de quatro amostras e, pela PCR, de 14 amostras, obtendo-se uma sensibilidade de 100% para a PCR e de 28.6% para a microscopia óptica. A concordância entre as técnicas foi de 66/68 (97%) para as amostras criopreservadas e de 41/51 (80,4%) para as amostras recém-obtidas de insetos. Analisando-se as amostras em conjunto, obtivemos uma concordância de 107/119 (89,9%) entre as técnicas. O estudo conclui que a técnica de diagnóstico por PCR em amostras de conteúdo intestinal de triatomíneos aplicadas ao papel FTA Card é aplicável para a estimativa das taxas de infecção natural destes insetos pelo T. cruzi, sendo capaz de auxiliar a caracterização de perfis eco-epidemiológicos e a detecção da circulação do parasita em ambientes silvestres, peridomésticos e domésticos, contribuindo também para a avaliação do risco de transmissão da doença de Chagas em localidades onde há infestação pelos vetores. / The rate of infection by Trypanosoma cruzi in triatomines is an important parameter for assessing the risk of vectorial transmission of Chagas disease in localities where domestic and peridomestic infestation by these insects are found. Infection with T. cruzi in triatomines is usually evaluated by examining, by light microscopy, suspensions of intestinal contents of fresh insects, seeking in them the presence of flagellate trypanosomatids. This approach has disadvantages as the need to transport the live insects to the laboratory, and not allow the identification of the trypanosomatid species present in the triatomine feces. Molecular biology techniques based on polymerase chain reaction (PCR) have therefore been developed to identify T. cruzi in biological samples, such as the intestinal contents of triatomines. The aim of this study was to evaluate the applicability and sensitivity of the technique of molecular diagnosis of natural infection by T. cruzi, based on the use of filter paper in triatomines captured in the Ceará state. Additionally, we sought to evaluate this diagnostic technique in samples of intestinal content of triatomines cryopreserved on filter paper for 11 years. We studied the intestinal contents of 68 specimens of insects captured in the year 2000 (Rhodnius nasutus, n = 40; T. pseudomaculata, n = 25 and T. brasiliensis, n = 3), and feces from 51 specimens collected in 2010 (T. pseudomaculata, n = 25; T. brasiliensis, n = 36). The intestinal content obtained by abdominal compression of 119 insects were analyzed by direct examination through optical microscopy. The feces were diluted on microscope slides in buffered saline (pH = 7.0), covered with coverslips and examined under optical microscope with 400 times magnification for direct observation of the trypanosomes presence. Aliquots of fecal suspensions were separated and applied to strips of filter paper (FTA Card, GE Healthcare, Buckinghamshire, UK), which were stored individually in 2 mL tubes and stored at -20 ° C for use in PCR , aimed at detection of kDNA of T. cruzi. The primers used were 5'-AAATAATGTACGGG S35 (T / G) GAGATGCATGA-3 'and 5'-GGTTGCATTGGGTTGGTGTAATATA S36-3', which amplify a fragment of 330 base pairs containing the hypervariable regions of the k-DNA minicircles. The comparative calculation of the sensitivity of diagnostic techniques (optical microscopy and PCR) was performed as follows: sensitivity = number of technical tests positive by this technique / number of positive tests in any of the two techniques. Regarding the analysis of 68 cryopreserved paper intestinal contents FTA Card, 58 were positive by light microscopy. Of these, 56 were positive by PCR. Was obtained in this way, a comparative sensitivity of 96.5% for PCR and 100% for light microscopy. Analyzing the newly obtained 51 fecal samples of insects, we obtained a positivity by light microscopy, four samples and PCR of 14 samples, yielding a sensitivity of 100% for PCR and 28.6% for optical microscopy. The agreement between the techniques was 66/68 (97%) for the cryopreserved samples and 41/51 (80.4%) for the newly obtained samples of insects. Analyzing the samples together, we achieved an agreement of 107/119 (89.9%) between the techniques. The study concludes that the technique of PCR for diagnosis in samples of intestinal content of triatomines applied to FTA paper Card is applicable for estimating natural infection rates of these insects by T. cruzi, is able to assist the characterization of eco-epidemiological profiles and the detection of the parasite in the wild environment, peridomestic and domestic, also contributing to the assessment of risk of transmission of Chagas disease in localities where there is infestation by vectors.

Made available in DSpace on 2014-03-18T17:13:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 cintia_paula_ipec_mest_2013.pdf: 1050545 bytes, checksum: 214327e202e5f77522b5e0c404d3b245 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013-11-21 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma doença endêmica, causada por diferentes espécies de Leishmania e distribuída por todos os estados brasileiros. No entanto, não estão estabelecidos os critérios de cura clínica definitiva, nem a participação da resposta imunológica na manutenção do estado de cura, na reativação de lesões e no desenvolvimento da forma mucosa. A persistência parasitária após a cura clínica, já demonstrada anteriormente, poderia estar relacionada a estes fenômenos. Este estudo objetivou identificar DNA de Leishmania e a presença de parasitas através do cultivo, do exame direto e do exame histopatológico, em cicatrizes cutâneas e em pele sadia de pacientes com LTA tratados e clinicamente curados. Cinquenta pacientes com LTA e 30 com esporotricose (grupo controle) foram submetidos a avaliação dermatológica, avaliação otorrinolaringológica com fibra óptica, intradermorreação de Montenegro (IDRM), e sorologia para leishmaniose por ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) e por reação de imunofluorescência indireta (RIFI) Após consentimento livre e esclarecido, fragmentos de cicatriz e de pele sadia foram obtidos por biópsia, com o auxílio de "punch" 6mm. O tempo mediano decorrido entre a cicatrização da lesão e entrada no projeto foi de 25 (LTA) e 46 meses (controle) respectivamente. Os fragmentos teciduais, cujo peso mediano foi de 7,1mg, foram subdivididos em pequenas amostras submetidas à: a) extração de DNA e amplificação genérica e subgenérica por reação em cadeia da polimerase (PCR) com revelação em gel de agarose dos produtos amplificados; b) isolamento de formas promastigotas em meio de cultura bifásico (NNN enriquecido com meio Schneider e soro fetal bovino); c) investigação de formas amastigotas por exame direto corado pelo Giemsa; e d) exame histopatológico. Todos os pacientes encontravam-se clinicamente curados, com lesões cutâneas cicatrizadas e sem lesões mucosas em atividade. A IDRM foi positiva em 88% dos pacientes, a sorologia por ELISA em 44% e a RIFI em 26%. Foram encontradas duas amostras de cicatriz cutânea positivas para Leishmania, uma na PCR e outra no "imprint", ambas do grupo de LTA. As demais amostras de cicatriz e de pele sadia foram negativas Os presentes resultados confirmam achados anteriores que Leishmania pode persistir em lesões cicatrizadas. A negatividade para Leishmania nas amostras de pele sadia não apóia a hipótese do ser humano como fonte de infecção. A baixa frequência de positividade encontrada nas cicatrizes pode ser parcialmente explicada pela realização das biópsias no bordo da cicatriz, região por onde se inicia o processo de cicatrização durante o tratamento, pelo tamanho diminuto dos fragmentos cutâneos estudados e pela baixa carga parasitária / American Cutaneous Leishmaniasis (ACL) is an endemic disease caused by different species of Leishmania and distributed in all Brazilian states. However, there are neither established criteria for definitive clinical cure, nor on the immune response participation in the maintenance of the state of cu re, in the reactivation of the lesions, and in the development of the mucosal form. The parasite persistence after clinical cure, previously demonstrated, could be related to these phenomena. This study aimed to identify Leishmania DNA and the presence of parasites through cultivation, direct examination and histopathology studies on skin scars and healthy skin of patients with ACL treated and clinically cured. Fifty patients with ACL and 30 with s porotrichosis (control group) underwent dermatologic assessm ent, EENT fiber optics evaluation, Montenegro skin test (MST), and leishmaniasis serology by enzyme immunoassay (ELISA) and indirect immunofluorescence assay (IFA). After informed consent, fragments of scarred and healthy skin were obtained by punch 6 mm b iopsy. The median time between the healing of the lesion and study entry was 25 (ACL) and 46 months (control) respectively. The tissue samples, whose average weight was 7.1 mg, were further divided into small samples submitted to: a) DNA extraction and gen eric and subgeneric amplification by polymerase chain reaction (PCR) with in agarose gel revelation of amplified products, b) isolation of promastigotes in biphasic medium (NNN medium enriched with fetal calf serum in Schneider media), c) investigation of amastigotes forms by Giemsa - stained direct examination, and d) histopathological studies. All patients were clinically cured, with healed skin lesions and no mucosal lesions in activity. The MST was positive in 88% of patients, ELISA serology in 44% and IF AT in 26%. Two cutaneous scarring samples were found positive for Leishmania , one by PCR and one in the "imprint" , both ACL group . Additional samples of scarred and healthy skin were negative. The present results confirm earlier findings that Leishmania ma y persist in healed lesions. The samples negative for Leishmania in the healthy skin does not support the hypothesis of human beings as a source of infection. The low frequency of positivity found in the scarred tissues may be partially explained by the pe rformance of biopsies at the edge of the scarred region, where the healing process begins during treatment, and the extremely small size of the skin fragments studied and low parasite load

OLIVEIRA, F. A. F. Detecção de bactérias orais e avaliação da expressão de marcadores inflamatórios e trombogênicos em valvas cardíacas sadias e na estenose aórtica calcificada. 2017. 94 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-05-10T15:48:41Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_fafoliveira.pdf: 102595336 bytes, checksum: 3a1351e0856f5e81af6c65c01ce6e802 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-05-10T15:49:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_fafoliveira.pdf: 102595336 bytes, checksum: 3a1351e0856f5e81af6c65c01ce6e802 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-10T15:49:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_fafoliveira.pdf: 102595336 bytes, checksum: 3a1351e0856f5e81af6c65c01ce6e802 (MD5) Previous issue date: 2017-03 / The present study aimed to perform molecular, histomorphological and immunohistochemical analysis of oral pathogens in healthy cardiac valves and calcified aortic stenosis, as well as evaluate the expression of Osteopontin, Fibrinogen, CD61 and inflammatory markers in these samples. Dental plaque, saliva and heart valve samples from ten patients with calcified aortic stenosis were collected for molecular analysis of S. mutans, P. intermedia, P. gingivalis and T. Denticola, through real-time Polymerase Chain Reaction (PCR). In addition, heart valve tissue from five healthy young men submitted to necropsy was also collected and analyzed for the same bacteria using the same technique mentioned above. Fragments of all specimens were fixed in 10% buffered formalin for histomorphological (Hematoxylin/eosin), histochemical (Giemsa) and immunohistochemical (Streptavidin-biotin-peroxidase method) analysis for anti-Streptococcus mutans, anti-IL-1β, anti-TNF alpha, anti-COX -2, anti-NF-κB, anti-C-Reactive Protein, anti-Osteopontin, anti-Fibrinogen and anti-CD61. To evaluate caries and periodontal disease, the DMFT (decayed, missing and filled teeth) and PSR (periodontal screening and recording) indexes were used, respectively. Molecular analysis of supragingival and subgingival dental plaque and saliva of dentate and edentulous patients with calcified aortic stenosis revealed a high frequency of S. mutans and P. intermedia in the samples (varying between 90.0% and 100.0%), whereas the frequency of P. and T. denticola was lower (ranging from 10.0% to 67.0%). The evaluation of oral bacteria in valvar tissue by realtime PCR revealed a high frequency of S. mutans (80.0%) in healthy cardiac valves and in calcified aortic stenosis valves, while P. intermedia, P. gingivalis and T. Denticola were not identified. Immunohistochemical analysis identified S. mutans only in valves with calcified aortic stenosis (80%). Areas of calcification, fibrosis and myxoid degeneration were identified in 100% of the diseased cardiac valves, and they were all colonized with Streptococcus, which was revealed by histochemical analysis. The number of decayed, missing and filled teeth (DMFT) was 25.6 ± 6.7 in patients with valve disease. Positive immunohistochemical staining for IL-1β, TNF alpha, COX-2, fibrinogen, C-Reactive Protein and osteopontin was observed in 100% of the calcified aortic stenosis samples that were also immunopositive for S. mutans, whereas the immunoexpression of NF-kB and CD61 was evidenced in 87.5% and 62.5% of those samples, respectively. In healthy samples, the expression of these immunomarkers was negative. The detection of S. mutans in the calcified aortic stenosis through multiple techniques with different sensitivity may suggest the colonization of this bacterium in extraoral sites. In addition, the presence of S. mutans and the expression of 11 inflammatory and thrombogenic immunomarkers in microscopically altered areas was observed in the diseased valves, guiding a possible relation with the calcified aortic stenosis. / O presente trabalho teve por objetivo realizar análises molecular, histomorfológica e imunohistoquímica de patógenos orais em valvas sadias e na estenose aórtica calcificada, além de avaliar a expressão de Osteopontina, Fibrinogênio, CD61 e marcadores inflamatórios. Amostras de placa dental, saliva e valva cardíaca de dez pacientes com estenose aórtica calcificada foram coletadas para análise molecular de S. mutans, P. intermedia, P. gingivalis e T. Denticola, através de Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) em tempo real. Adicionalmente, tecido cardíaco valvar de cinco jovens saudáveis submetidos a necropsia também foi coletado e analisado para esse grupo de bactérias, pela mesma técnica supracitada. Em paralelo, fragmentos de todos os espécimes valvares foram fixados em formol 10% tamponado para análises histomorfológica (Hematoxilina/eosina), histoquímica (Giemsa) e imuno-histoquímica (método da estreptavidina-biotina-peroxidase) para anti-Streptococcus mutans, anti-IL-1β, anti-TNF alpha, anti-COX-2, anti-NF-kB, anti-Proteína C-Reativa, anti-Osteopontina, anti-Fibrinogênio e anti-CD61. Para avaliação da cárie e da doença periodontal foram utilizados os índices CPO-D (dentes cariados, perdidos e obturados) e PSR (periodontal screening and recording), respectivamente. Análise molecular das placas dentais supragengival, subgengival e saliva de pacientes dentados e desdentados com estenose aórtica calcificada revelou frequência maior de S. mutans e P. intermedia (variando entre 90% e 100%), enquanto P. gingivalis e T. denticola estiveram presentes em menor número de amostras bucais (variando entre 10% e 67%). S. mutans foi encontrado na mesma proporção em valvas cardíacas sadias e na estenose aórtica calcificada (80%), enquanto que P. Intermedia, T. denticola e P. gingivalis não foram identificadas. A análise imunohistoquímica evidenciou o S. mutans somente na estenose aórtica calcificada (80%). Áreas de calcificação, fibrose e degeneração mixoide estiveram presentes em 100% das valvas doentes, sendo todas sítios de colonização de Estreptococos, revelados através da reação histoquímica. O número de dentes cariados, perdidos e obturados (CPO-D) foi de 25,6±6,7 nos pacientes com doença valvar. Marcação imuno-histoquímica positiva para IL-1β, TNF alpha, COX-2, Fibrinogênio, Proteína C-Reativa e Osteopontina foi observada em 100% das amostras analisadas de estenose aórtica calcificada imunopositivas para S. mutans, enquanto que a imunoexpressão para NF-kB e CD61 foi evidenciada em 87,5% e 62,5% dessas valvas, respectivamente. Em amostras sadias a expressão desses marcadores foi negativa. A detecção de S. mutans na estenose aórtica calcificada através de múltiplas técnicas com diferentes sensibilidades pode sugerir a colonização dessa bactéria em sítios extrabucais. Aliado a este 9 achado, observou-se a presença de S. mutans e a expressão de marcadores inflamatórios e trombogênicos nas áreas microscopicamente alteradas nas valvas doentes, norteando possível relação com a estenose aórtica calcificada.

SAMPAIO, Sarah Carvalho de Alencar. Identificação de HPV de alto risco oncogênico em citologia em meio líquido com atipias escamosas e carcinoma escamoso. 2015. 57 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-12-21T12:12:32Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_scasampaio.pdf: 475142 bytes, checksum: 0889054dafdd6b2e0a27be354b1ffb64 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-12-21T12:33:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_scasampaio.pdf: 475142 bytes, checksum: 0889054dafdd6b2e0a27be354b1ffb64 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-21T12:33:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_scasampaio.pdf: 475142 bytes, checksum: 0889054dafdd6b2e0a27be354b1ffb64 (MD5) Previous issue date: 2015 / To identify high-risk HPV genotypes in liquid-based cytology smears(SurePath®) with diagnosis of squamous atypia and squamous carcinoma. METHODS: This was a cross-sectional study using 165 liquid-based cytology with squamous atypia and 149 without atypia. HPV genotyping by real-time PCR was performed on this material. The material was processed by COBAS® 4800 System (Roche), which has three detection channels: HPV 16, HPV 18, and HPV HR (other twelve high-risk genotypes). RESULTS:We analyzed 75 cases of ASC-US, 62 LSIL, 8 ASC-H, 12 HSIL and 8 squamous carcinomas. The average age was 32.2 years in the group without atypia, 31.1 years for ASC-US and LSIL, 41.2 years for ASC-H and HSIL and 43.1 years for SCC. There were 112 positive cases for HPV (68%) in the group with atypia: 72% positive for HPV AR, 18% of HPV16 and 10% of HPV 18. Only in ASC-US group, HPV positive and negative frequency was similar (1:1). In the others, the amount of HPV positive cases surpassed negative ones. In the group of Cytology without atypia were found 40 positive cases for HPV (26%): 68% positive for HPV AR probe, 17% of HPV18 and 15% of HPV16. Detections by a single probe predominated in both groups (88% and 84%). In the group with atypia the most prevalent combination was HPV16 and HPV HR (57%); and in cases without atypia was HPV18 and HPV HR (68%) and there was a single positive case for three channels in this group. CONCLUSIONS: The prevalence of other 12 high-risk HPV genotypes (not 16 and 18), was frequent in cytology with and without squamous atypia, associated or not with genotypes 16 and 18. The connection of squamous atypia with HPV 16 and HPV HR was significant. The data obtained are in agreement with the literature regarding the existence of heterogeneity in the distribution of different genotypes and their most frequent association as the level of atypia. / Identificar genótipos de HPV de alto risco em citologias em meio líquido com diagnóstico de atipias escamosas e carcinoma escamoso. MÉTODOS: Foi realizado estudo de corte transversal utilizando 165 citologias em meio líquido com atipias escamosas e 149 sem atipias. Nesse material foi realizado genotipagem do HPV por PCR em tempo real. O material foi processado pelo Sistema Cobas® 4800 (Roche), que apresenta três canais de detecção, para HPV 16, HPV 18, e HPV AR (outros doze genótipos de HPV de alto risco). RESULTADOS: Foram analisados 75 casos de ASC-US, 62 LSIL, 8 ASC-H, 12 HSIL e 8 carcinomas escamosos. A média etária foi de 32,2 anos no grupo sem atipias, 31,1 anos para ASC-US e LSIL, 41,2 anos para ASC-H e HSIL e 43,1 anos para CEC. Houve 112 casos positivos para HPV (68%) no grupo com atipias, sendo 72% de positividade para HPV AR, 18% de HPV 16 e 10% de HPV 18. Somente nos casos de ASC-US a frequência de HPV positivo e negativo foi semelhante (1:1). Nas demais, a quantidade de casos HPV positivo ultrapassou a de negativos. No grupo de citologias sem atipias, foram encontrados 40 casos positivos para HPV (26%), sendo 68% de positividade para a sonda HPV AR, 17% de HPV 18 e 15% de HPV16. Predominaram detecções por uma única sonda em ambos os grupos (88% e 84%). No grupo com atipias, a combinação mais presente foi HPV AR e 16 (57%); e nos casos sem atipias, foi HPV AR e 18 (68%) e houve um único caso positivo para os três canais neste grupo. CONCLUSÕES: A prevalência de outros 12 genótipos de alto risco de HPV (que não 16 e 18), foi frequente, em citologias com e sem atipias escamosas, associados ou não aos genótipos 16 e 18. A relação de atipias escamosas com HPV 16 e HPV AR foi significativa. Os dados obtidos estão em concordância com a literatura quanto à existência de uma heterogeneidade na distribuição dos diversos genótipos e sua associação mais frequente conforme o nível de atipia.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-07-07T19:08:23Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 867144 bytes, checksum: b1dfb9c08a4b085feda6d150ced1327c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-07T19:08:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 867144 bytes, checksum: b1dfb9c08a4b085feda6d150ced1327c (MD5) Previous issue date: 2017-03-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Mycobacterium bovis e Brucella abortus são os agentes etiológicos da tuberculose e da brucelose bovinas, doenças infectocontagiosas de ocorrência mundial que geram grandes prejuízos econômicos e podem ser transmitidas aos humanos principalmente através do contato direto com animais contaminados e da ingestão de leite cru e derivados. No Brasil existe o Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose, criado pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento, que estabelece a realização do diagnóstico e normatiza as medidas de controle dessas zoonoses. Os métodos oficiais para diagnóstico de brucelose e tuberculose no animal vivo possuem sensibilidade e especificidade variáveis, são laboriosos e demandam tempo. Para aumentar a eficácia do controle destas doenças são necessários métodos rápidos e acurados, que atuem como ferramenta auxiliar no diagnóstico in vivo dessas enfermidades sem a necessidade de procedimentos invasivos. Para garantir a credibilidade e confiabilidade de novos métodos de diagnóstico é necessário que os mesmos sejam validados. No presente estudo foram realizados ensaios para a validação de uma reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) para a detecção do DNA de M. bovis e B. abortus em amostras de leite cru artificialmente contaminados, usando como critério o desempenho analítico (sensibilidade e especificidade analítica), repetibilidade, reprodutibilidade interna e robustez. Inicialmente cinco metodologias de extração de DNA foram testadas e as que apresentaram melhores resultados foram os kits comerciais DNeasy mericon Food Kit – Qiagen e Maxwell® 16 Tissue DNA Purification Kit – Promega. Os limites de detecção obtidos na qPCR validada nesse estudo foram de 2,3 pg de DNA de M. bovis e 20,7 fg de DNA de B. abortus. As repetibilidades eviii reprodutibilidades aliadas à robustez apresentadas nesse trabalho indicam que os métodos avaliados podem ser utilizados de forma auxiliar ao diagnóstico in vivo oficial de tuberculose e brucelose bovinas, após ser testada em animais naturalmente infectados. / Mycobacterium bovis and Brucella abortus are the etiological agents of bovine tuberculosis and brucellosis, infectious diseases globally disseminated that cause substantial economic losses and can be transmitted to humans mainly through direct contact with contaminated animals and the intake of raw milk and milk products. In Brazil there is the National Program for the Control and Eradication of Brucellosis and Tuberculosis, created by the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply, which establishes the diagnosis and regulates the control measures of these zoonosis. The official methods for diagnosis of brucellosis and tuberculosis in the living animal have variable sensitivity and specificity, are laborious and time consuming. In order to increase the efficacy of brucellosis and tuberculosis control, rapid and accurate methods are necessary to act as an auxiliary tool in the in vivo diagnosis of these diseases without the need of invasive procedures. To ensure the credibility and reliability of new diagnostic methods, they must be validated. In the present study, the validation of a real-time polymerase chain reaction (qPCR) for the detection of M. bovis and B. abortus in artificially contaminated raw milk samples was performed using analytical performance (analytical sensitivity and specificity), repeatability, internal reproducibility and robustness. Initially five DNA extraction methodologies were tested and the ones that presented the best results were the commercial kits “DNeasy Mericon Food Kit – Qiagen” and “Maxwell® 16 Tissue DNA Purification Kit – Promega”. The limits of detection obtained in the qPCR validated in this study were 2.3 pg of M. bovis DNA and 20.7 fg of B. abortus DNA. The repeatability and reproducibility associated with the robustness presented in this study indicate that the evaluated methods can be used as an auxiliaryx tool to the in vivo official diagnosis of bovine tuberculosis and brucellosis, after being tested in naturally infected animals. / Nos dois impressos faltaram as últimas 12 páginas com referência bibliográfica.

FERNANDES, C. P. Detecção de streptococcus mutans e avaliação da expressão de marcadores teciduais em placas ateroscleróticas de pacientes com doença vascular e vasos sadios. 2017. 87 f. Tese (Doutorado em Odontologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by PPGO UFC (ufcppgo@gmail.com) on 2017-05-31T13:53:05Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_cpfernandes.pdf: 122721977 bytes, checksum: 90712aa0832a939ee513facf14adfa73 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-05-31T15:26:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_cpfernandes.pdf: 122721977 bytes, checksum: 90712aa0832a939ee513facf14adfa73 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-31T15:26:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_cpfernandes.pdf: 122721977 bytes, checksum: 90712aa0832a939ee513facf14adfa73 (MD5) Previous issue date: 2017-03-06 / Over the past few years, the association between oral bacteria and atherosclerosis has been investigated, and studies have suggested that cariogenic bacteria are directly and indirectly involved in the etiopathogenesis and progression of this disease. Streptococcus mutans (SM) has demonstrated the ability to invade and cause damage to endothelial cells, favor the adhesion of leukocytes in vascular endothelium and promote the transformation of macrophages into foam cells, events directly related to the development of atherosclerosis. This microorganism has been detected in atherosclerotic plaques with variable frequency, and laboratory studies have investigated its role in the activation of inflammatory and thrombogenic markers, which are indirectly associated with the pathogenesis of this disease. However, the pathogenic mechanism of atherosclerosis is not yet fully elucidated, and the role of oral bacteria needs to be extensively investigated. The present study aimed to evaluate the association between the presence of SM and tissue and inflammatory alterations in vessels with atherosclerosis. A total of 13 atherosclerotic plaques, collected from patients with carotid stenosis or aortic aneurysm, and 10 control samples of healthy blood vessels (aortic and carotid arteries) collected during necropsy procedure, were submitted to Real-time Polymerase Chain Reaction (qPCR), histopathological analysis, histochemical analysis by Giemsa staining (GS) and immunohistochemical analysis for SM, IL-1!, TNF-", CRP, osteopontin, fibrinogen and CD61 (Streptavidin-biotin-peroxidase method). All microscopically healthy control specimens were positive for SM only through qPCR, whereas atherosclerotic plaque specimens were positive for SM through qPCR and immunohistochemistry, and showed histopathological characteristics of severe atherosclerosis (100%). Presence of fibrous tissue (100.0%) and calcification (92.3%) were the most frequent features, followed by thrombus formation (84.6%), mononuclear inflammatory cells (76.9%) and presence of core lipid (61.5%). GC showed that streptococcus colonized areas of core lipid, fibrous tissue and calcification, and was not positive in vessels of the control group. All 13 atherosclerotic plaques, immunopositive for SM, were positive for the fibrinogen, IL-1!, osteopontin and CD61 antibodies, whereas immunoexpression for CRP and TNF-" was evidenced in 12 samples (92.3%). The reactivity to IL-1!, TNF-", osteopontin and CD61 was not found in the control samples, immunonegative to SM, but in some cases, immunoexpression of fibrinogen (60.0%) and PCR (50.0%) was observed. The detection of SM in atherosclerotic plaques, in addition to the visualization of Streptococcus in areas of tissue alteration, suggests that in these samples, microorganisms found a favorable 10 environment for their proliferation. In addition, positive immunoexpression of TNF-", IL-1!, fibrinogen, CRP, osteopontin and CD61 in atherosclerotic plaque samples immunopositive to SM may suggest a possible association with atherosclerosis. / Nos últimos anos, a relação entre bactérias orais e aterosclerose tem sido investigada, e estudos têm sugerido que bactérias cariogênicas participam direta e indiretamente da etiopatogênese e progressão dessa doença. Streptococcus mutans (SM) tem demonstrado a capacidade de invadir e causar dano às células endoteliais, favorecer a aderência de leucócitos no endotélio vascular e promover a transformação de macrófagos em células espumosas, eventos diretamente relacionados ao desenvolvimento da aterosclerose. Essa bactéria tem sido detectada em placas ateroscleróticas com variável frequência, e estudos laboratoriais têm pesquisado sua relação com a ativação de marcadores inflamatórios e trombogênicos, que são indiretamente associados à patogênese dessa doença. Porém, o mecanismo patogênico da aterosclerose ainda não está completamente elucidado, e o papel de bactérias orais precisa ser amplamente investigado. O presente estudo teve por objetivo avaliar a relação entre a presença de SM e alterações teciduais e inflamatórias em vasos com acometimento de aterosclerose. Um total de 13 placas ateroscleróticas, coletadas de pacientes com estenose de carótida ou aneurisma de aorta, e dez amostras-controle de vasos sadios (artérias carótida e aorta), coletadas durante procedimento de necropsia, foram submetidas a Reação em Cadeia da Polimerase em tempo real (qPCR), análise histopatológica, análise histoquímica por coloração de Giemsa (CG) e análise imuno-histoquímica para SM, IL-1!, TNF-", PCR, osteopontina, fibrinogênio e CD61 (método da estreptavidina-biotina-peroxidase). Todas as amostras-controle, microscopicamente sadias, foram positivas para SM apenas através de qPCR, enquanto que as amostras de placa aterosclerótica apresentaram positividade para SM através de qPCR e imuno-histoquímica, além de exibirem características histopatológicas de aterosclerose severa (100%). Presença de tecido fibroso (100,0%) e calcificação (92,3%) foram as características mais frequentes, seguidas de formação de trombo (84,6%), células inflamatórias mononucleares dispersas (76,9%) e presença de core lipídico (61,5%). A CG mostrou que os Estreptococcus colonizaram áreas de core lipídico, tecido fibroso e calcificação, não sendo positiva nos vasos do grupo controle. Todas as 13 amostras de placa aterosclerótica, imunopositivas para SM, foram positivas para os anticorpos fibrinogênio, IL- 1!, osteopontina e CD61, enquanto que imunoexpressão para PCR e TNF-" foi evidenciada em 12 amostras (92,3%). A reatividade para IL-1!, TNF-", osteopontina e CD61 não foi encontrada nas amostras-controle, imunonegativas para SM, porém, em algumas, observou-se imunomarcação para fibrinogênio (60,0%) e PCR (50,0%). A detecção de SM em placas ateroscleróticas, além da visualização de Estreptococcus em áreas de alteração tecidual, 8 sugere que nessas amostras, os micro-organismos encontraram ambiente favorável para sua proliferação. Além disso, imunoexpressão positiva de TNF-", IL-1!, fibrinogênio, PCR, osteopontina e CD61 em amostras de placa aterosclerótica imunopositivas para SM pode sugerir uma possível relação com a aterosclerose.