Orientador: Dora Maria Grassi Kassisse / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-20T06:22:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ishizu_LarissaYuri_M.pdf: 1236160 bytes, checksum: d3b83c5f6882f0bbaa5b2be15aa753a0 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Dados do Laboratório de Estudo do Estresse revelaram que a produção de lactato por adipócitos isolados de tecido adiposo visceral de humanos eutróficos e obesos mórbidos está sob estímulo de adrenoceptores ?1. Observou-se também hiperlactatemia no jejum de obesos mórbidos, aumento na liberação de lactato e na lipólise basal e estimulada em adipócitos viscerais isolados destes indivíduos, comparados com eutróficos. Porém dados de nosso laboratório e da literatura sugerem uma relação antagônica entre lipólise e lactatogênese, da qual participa o receptor GPR81, o qual está envolvido com lactato, inibindo a lipólise. Dados da literatura também sugerem a supressão da lipogênese e maior lipólise basal e estimulada dos adipócitos de obesos, com aumento da expressão da aquaporina 7, pelo qual o glicerol gerado na lipólise, é liberado. Por outro lado, estudos da literatura relatam a ocorrência da reesterificação dos produtos liberados após a lipólise de triacilgliceróis (TAGs) no tecido adiposo, na obesidade. Possivelmente, este seria o processo que promoveria a manutenção de grandes estoques de TAGs no tecido adiposo, apesar da maior lipólise e menor lipogênese. Frente aos nossos dados funcionais e os presentes na literatura sobre tecido adiposo visceral na obesidade, o objetivo deste estudo foi detectar alterações no metabolismo glicídico e lipídico neste tecido isolado de humanos obesos, em comparação com eutróficos, sob o enfoque da expressão gênica. Para tanto, quantificamos a expressão de genes envolvidos com a lactatogênese (lactato desidrogenase A, LDHA), lipogênese (acetil-CoA carboxilase, ACACA; glicerol quinase, GK; lipoproteína lipase, LPL) e lipólise (lipase hormônio sensível, LIPE; fosfodiesterase 3b, PDE3b; aquaporina 7, AQP7), e o gene relacionado com a inibição da lipólise via lactato (receptor-órfão acoplado à proteína G 81, GPR81) através do Real- Time PCR. Os resultados obtidos mostraram que o tecido adiposo de mulheres obesas expressa significativamente 49% a mais o gene LIPE e 66% a mais o gene LPL o de que mulheres eutróficas (p<0,05), enquanto que no tecido adiposo de homens não foi encontrada diferença significativa, apenas uma tendência a aumento do gene LPL nos obesos, comparados com eutróficos. Os adipócitos isolados do tecido adiposo visceral de homens obesos são morfometricamente maiores que os provenientes de eutróficos tendo como provável fator o aumento da expressão de LPL sem ser acompanhado de alterações na expressão de LIPE. Por outro lado, os adipócitos isolados do tecido adiposo visceral de mulheres obesas não apresentaram alterações morfométricas quando comparados aos adipócitos isolados de eutróficas, estes resultados são explicados pela análise da expressão dos genes LPL e LIPE do tecido adiposo desta região que se apresentou significativamente elevada em obesas. Desta forma, para este tecido estudado, existem alterações, dependente de gênero, que devem ser consideradas para estudos futuros sobre a obesidade. Neste trabalho, com as condições e a população estudada, referente a obesos e eutróficos de ambos os gêneros, podemos indicar as seguintes conclusões: a expressão de enzimas relacionadas à lipólise e a lipogênese em adipócitos isolados da região visceral de obesos é dependente do gênero enquanto que não há alterações significativas na expressão gênica relacionada à lactatogênese / Abstract: Previous data from the Laboratory of Stress Study showed that lactate production by adipocytes isolated from visceral adipose tissue of human normal and morbidly obese is under ?1-adrenoceptor stimulation. It was also observed hyperlactatemia in fasting from morbidly obese, an increase basal and stimulated lactate and glycerol production in visceral adipocytes isolated from these individuals, compared with normal weight. But data from our laboratory and the literature suggest an antagonistic relationship between lipolysis and lactatogênese, which participates in the GPR81 receptor, which is involved with lipolysis inhibition by lactate. Literature data also suggest the suppression of lipogenesis and increased basal and stimulated lipolysis in adipocytes of obese, with increased expression of aquaporin 7, whereby the glycerol generated in lipolysis, is released. Furthermore, published studies have reported the occurrence of re-esterification of the products released after lipolysis triacylglycerols (TAGs) in adipose tissue, in obesity. Possibly, this would be the process that would promote the maintenance of large stocks of TAGs in adipose tissue, despite the increased lipolysis and reduced lipogenesis. Front of our functional data and the literature on visceral adipose tissue in obesity, the aim of this study was to detect changes in glucose and lipid metabolism in this tissue isolated from obese humans, compared with normal weight, with a focus on gene expression. To this end, we quantified the expression of genes involved in lactatogênese (lactate dehydrogenase A LDHA), lipogenesis (acetyl- CoA carboxylase, ACACA, glycerol kinase, GK, lipoprotein lipase, LPL) and lipolysis (hormone sensitive lipase, LIPE; phosphodiesterase 3b , PDE3b; aquaporin 7 AQP7), and the gene related to the inhibition of lipolysis via lactate (orphan receptor-G protein coupled 81, GPR81) using Real-Time PCR. The results showed that adipose tissue isolated from obese women expressed significantly 49% more gene LIPE and 66% more LPL gene that women with normal weight (p <0.05), whereas in men no significant difference was found, only a tendency towards increased LPL gene in obese compared with normal weight. The isolated adipocytes visceral adipose tissue of obese men morphometrically are larger than those from normal weight bearing as the most probable cause increased expression of LPL without being accompanied by alterations in the expression of LIPE. Moreover, the isolated adipocytes visceral adipose tissue of obese women showed no morphological changes compared to normal weight of isolated adipocytes. These results are explained by analysis of gene expression of LPL and LIPE adipose tissue in this region which was significantly higher in obese women. Thus, there are changes, in this tissue studied, dependent on gender, which should be considered for future studies on obesity. In this work, the conditions and the population studied, referring to obese and normal for both genders, we can state the following conclusions: the expression of enzymes related to lipolysis and lipogenesis in adipocytes isolated from visceral fat of obese people is dependent on the gender while not there are significant changes in enzyme expression related to lactatogenesis / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores: Marcelo Menossi Teixeira, Agustina Gentile / Texto em português e inglês / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-20T09:56:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_ThaisHelenaSilva_M.pdf: 2413589 bytes, checksum: 0f0b16ac6fde8a1d1ee40e823f25320a (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A cana-de-açúcar é uma das mais importantes espécies vegetais cultiváveis do mundo, sendo o Brasil o maior produtor. A seca é um dos principais estresses que reduzem a produtividade da cana-de-açúcar e a produção de variedades tolerantes não só representa ganhos econômicos como contribui para a sustentabilidade do setor de bioenergia. A base genética da tolerância à seca ainda é pouco conhecida. Uma nova forma de regulação mediada por micro RNAs (miRNA) foi recentemente descrita como um componente importante e decisivo no desenvolvimento vegetal e na modulação da resistência aos mais diversos estresses. Nesse contexto, o objetivo desse trabalho foi identificar miRNAs expressos durante o estresse hídrico e correlacioná-los com a tolerância à seca em cana-de-açúcar. Para tal foram avaliados os perfis de expressão de miRNAs em dois cultivares de cana contrastantes quanto à tolerância à seca, mantidos em condições de irrigação normal, sob déficit hídrico (dois e quatro dias de estresse) e após recuperação por irrigação. Os dados foram obtidos através do sequenciamento de bibliotecas de miRNAs e a confirmação foi realizada por qRT-PCR. A comparação dos microtranscritomas dos cultivares RB867515 (mais tolerante à seca) e RB855536 (mais sensível à seca) permitiu a identificação de 7 miRNAs diferencialmente expressos em resposta à seca. Cinco miRNAs tiveram sua expressão confirmada através de ensaios de RT-qPCR. Também foram preditos, através de análises in silico, precursores e alvos para esses miRNAs. Aparentemente, muitos desses alvos desempenham papéis diversos na tolerância à seca. Esses resultados contribuíram para a descoberta de novos miRNAs em cana-de-açúcar e forneceram maior entendimento sobre a complexa rede de regulação gênica envolvida na resposta ao estresse hídrico / Abstract: Drought stress is a major abiotic stress factor that reduces significantly sugarcane yields. Sugarcane (Saccharum spp.) is one of the most important crop plants in the world and the molecular processes that mediate plant response to water stress are barely known. Although several microRNA mediating post-transcriptional regulation during water stress were described in other species, the role of the sugarcane microtranscriptome during drought stress is not known so far. The objective of this work was to identify miRNAs differentially expressed under drought stress and to correlate this expression with the tolerance of two cultivars contrasting for drought tolerance. The sugarcane cultivars RB867515 (higher drought tolerance) and RB855536 (lower drought tolerance) were cultivated in greenhouse for three months and then submitted to drought for 2 and 4 days. By using small RNA deep-sequencing we were able to identify 18 conserved miRNAs families, of which 12 families represent new sugarcane miRNA families. From the total miRNAs identified, 7 were differentially expressed under drought. Six of those were differentially expressed in two days and 5 miRNAs in four days of stress. Five miRNAs had their expression validated by RT-qPCR. The precursors and targets of the differentially expressed miRNAs were predicted using an in silico approach. Many of those targets probably play important roles in drought tolerance. These findings contribute significantly to increase the number of identified miRNAs in sugarcane and also to uncover the complex regulation network that is activated by drought stress / Mestrado / Genetica Vegetal e Melhoramento / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Several risk factors have been shown to be able to adjust the establishment and progression of periodontal disease. There is evidence demonstrating that some illegal drugs like cocaine and heroin can influence the pathogenesis of periodontitis. However, there is little evidence investigating the influence of crack in epidemiology and periodontal profile in periodontitis. The aim of this cross-sectional study with a control group was to compare the count of some periodontal pathogens in individuals exposed to crack the control subjects matched for age, sex and exposure to tobacco. Demographic variables were collected, clinics and subgingival biofilm of 155 subjects (74 exposed to crack / 81 controls). The microbiological outcome was count Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa), Prevotella intermedia (Pi), Porphyromonas gingivalis (Pg) and Fusobacterium nucleatum (Fn) measured by real time PCR. The results demonstrated that exposure presented in greatest severity insertion loss (P = 0.000), analyzed by McNemar with the exception of marginal gingival bleeding (P = 0.489) and supragingival calculus (P = 0.504), Wilcoxon. No significant differences were observed in the prevalence of counting 106 cells / ml and the total count of bacteria evaluated between groups through Poisson regression with Variance Robusta. In the analysis of subjects who had only the highest bacterial counts (≥ 75%), both in gross nor adjusted analysis, there was a significantly higher prevalence of individuals in the group exposed to crack. It is concluded that the microbiological profile of Aa, Pg, Pi and Fn did not differ between exposed and unexposed to crack. / Inúmeros indicadores de risco têm se mostrado poder modular o estabelecimento e progressão da doença periodontal. Há evidências demonstrando que algumas drogas ilícitas como a cocaína e heroína podem influenciar na etiopatogenia da periodontite. Entretanto, há poucas evidências investigando a influência do crack na epidemiologia e perfil de periodontopatógenos na periodontite. O objetivo deste estudo transversal com grupo controle foi comparar a contagem de alguns periodontopatógenos em indivíduos expostos ao crack a sujeitos controles pareados por idade, sexo e exposição ao tabaco. Foram coletadas variáveis demográficas, clínicas e biofilme subgengival de 155 sujeitos (74 expostos ao crack /81 controles). O desfecho microbiológico foi a contagem de Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa), Prevotella intermedia (Pi), Porphyromonas gingivalis (Pg) e Fusobacterium nucleatum (Fn) mensuradas pela técnica de PCR em tempo real. Os resultados demonstraram que os expostos apresentaram maior severidade na perda de inserção (P=0.000), analisado por McNemar, com excessão de sangramento gengival marginal (P=0,489) e cálculo supragengival (P=0,504), teste Wilcoxon. Não foram observadas diferenças significativas na prevalência da contagem 106 células/ml e na contagem total das bactérias avaliadas entre os grupos, através de Regressão de Poisson com Variancia Robusta. Na análise dos sujeitos que tiveram apenas as maiores contagens bacterianas (≥ 75%), tanto na análise bruta quanto na ajustada houve uma prevalência significativamente maior de indivíduos no grupo exposto ao crack. Conclui-se que o perfil microbiológico de Aa, Pg, Pi e Fn não diferiu entre expostos e não expostos ao crack.

Orientadores: Paulo Eduardo Neves Ferreira Velho, Maria Letícia Cintra / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-22T07:25:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lania_BrunoGrosselli_M.pdf: 3238329 bytes, checksum: 957e602fc97c4a033665229ade46faca (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Introdução: o processo de cicatrização é longo e complexo, dura meses nos humanos, e depende de diversos fatores locais e gerais. Ele pode ser divido em três fases: inflamatória, proliferativa e de remodelação. Para que ocorra, é necessária uma cascata de eventos e a participação de diversos tipos de células, bem como de substâncias por elas secretadas. Entre estas destacam-se as substâncias pró-cicatriciais, como a leptina, IL-2, IL-4, IL-6 e o IGF-1, as anti-cicatriciais, como a adiponectina, IL-12, o IFN-?, o IFN-? e, finalmente, o TNF-?, que possui ação variável, de acordo com a concentração circulante desta substância. Muito há para se pesquisar nesse campo, e o desenvolvimento de produtos, com princípios ativos que estimulam a cicatrização, mas de baixo custo, que aproveite matérias-primas encontradas na região, poderia beneficiar um número grande de indivíduos. Foi demonstrado que o uso do óleo do farelo de arroz induz a proliferação de linfócitos, a síntese de citocinas, o aumento da hematopoese e a atividade fagocítica de macrófagos. Objetivos: testar a efetividade do óleo de arroz na cicatrização de feridas cutâneas, e avaliar, tanto no tecido lesado, como no sangue, a sua ação em fatores que atuam na cicatrização. Material e métodos: sobre feridas cirúrgicas circulares produzidas pela exérese da pele, com bisturi, no dorso de ratos, (45 animais, divididos em três grupos) foi aplicado um produto à base de óleo de arroz (patente BR 10 2012 008718 9). O processo de cicatrização foi avaliado por meio do estudo histológico e da quantificação tissular (por meio da PCR real time) e sérica (por meio da técnica Elisa), de fatores que atuam na cicatrização: leptina, IL-2, IL-4, IL-6, IGF-1, adiponectina, IL-12, IFN-?, IFN- ? e TNF- ?. Resultados e conclusões: comparativamente com o controle, foi encontrada diferença significante na celularidade das feridas e detectada ação sistêmica do produto, face ao aumento dos níveis séricos de adiponectina, leptina, IL-2, IL-6, TNF-? e IFN-?. Os resultados deste trabalho poderão ser úteis para a indústria farmacêutica e cosmecêutica brasileira ou internacional / Abstract: The wound healing process is long and complex, lasts months and depends on many local and general factors. It can be divided into three phases: inflammatory, proliferative and remodeling. For that to occur, it is necessary a cascade of events involving several cell types, as well as substances secreted by them. Among these we highlight the pro-healing substances such as leptin, IL-2, IL-4, IL-6 and IGF-1, anti-scarring such as IL-12, IFN-?, IFN- ? and, finally, TNF-?, which possesses variable action, according to the circulating concentration of this substance. More research is needed in this field, and the development of products with active ingredients that stimulate healing, but of low cost, which uses raw materials found in the region, could benefit a large number of individuals. It has been shown that the use of rice bran oil induces lymphocyte proliferation, cytokine synthesis, increased hematopoiesis and phagocytic activity of macrophages. The objectives of this study were to test the effectiveness of rice oil topical use and assess both the injured tissue and blood to evaluate its action on factors that act in healing. Methods: Circular surgical wounds were produced by excision of skin with a scalpel in the back of rats (45, divided into three groups), then applied saline solution or essentials fatty acids or rice bran oil (patent BR 10 2012 0087 18 9). The healing process was evaluated by histological examination and quantification of tissue (by real time PCR) and serum (by ELISA technique), factors that act in healing, namely leptin, IL-2, IL -4, IL-6, IGF-1, adiponectin, IL-12, IFN-?, IFN-? and TNF-?. Compared with control, there was significant difference in the cellularity of the wound healing area and systemic action of the product detected by the increases in serum levels of adiponectin, leptin, IL-2, IL-6, TNF-? and IFN -?. The results of this study may be useful to the Brazilian or international pharmaceutical and cosmeceutical industry / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Orientadores: Sandra Cecília Botelho Costa, Eros Antonio de Almeida / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T09:16:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Batista_AngelicaMartins_D.pdf: 10617483 bytes, checksum: 6e76f5ea9c45674436a2aa740178f813 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Atualmente, o diagnóstico laboratorial da doença de Chagas crônica baseia-se em métodos sorológicos convencionais. Entretanto, resultados falso-negativos e falso-positivos podem ocorrer. A hemocultura também pode ser utilizada como método diagnóstico, mas sua sensibilidade é limitada na fase crônica. Métodos diagnósticos baseados em princípios de biologia molecular vêm sendo estudados e a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) tem sido a técnica mais utilizada ultimamente. Este estudo teve como objetivo principal avaliar o desempenho da PCR qualitativa e quantitativa no diagnóstico da doença de Chagas em pacientes portadores de megaesôfago. Foram estudadas amostras de DNA de sangue de 26 pacientes com sorologia não reagente ou inconclusiva e de 33 pacientes soropositivos para doença de Chagas. O alvo genético mais adequado para PCR qualitativa, que apresentou maior positividade, foi o Sat-DNA de T. cruzi. Quando comparada com os resultados de PCR quantitativa, houve concordância de 72,72% em ambos os grupos. Além disso, observou-se que todos os pacientes com hemocultura positiva apresentaram PCR qualitativa positiva. A metodologia quantitativa, embora considerada altamente sensível, não detectou DNA de T. cruzi em uma amostra de paciente com hemocultura positiva. Nossos resultados indicam um possível subdiagnóstico da doença de Chagas em pacientes com megaesôfago devido aos exames sorológicos negativos ou inconclusivos. A PCR qualitativa mostra-se uma ferramenta útil para esclarecimento da etiologia do megaesôfago e, por apresentar positividade semelhante à qPCR, não se justifica o uso de metodologia quantitativa para fins exclusivamente diagnósticos / Abstract: Current laboratory diagnosis of chronic Chagas disease relies on conventional serological tests but false-positive and false-negative results may occur. Hemoculture can also be used as a diagnostic method but its sensitivity in chronic phase is limited due to the low/intermittent parasitemia. Molecular diagnosis methods have been studied and the main technique that has been extensively tested is the Polymerase Chain Reaction (PCR). This study aimed to evaluate the qualitative and quantitative PCR performance for diagnostic purposes in patients with megaesophagus. We studied DNA blood samples from 26 patients with negative or inconclusive conventional serology for Chagas disease and from 33 patients with positive serology. The most suitable target for qualitative PCR presenting high positivity was the Sat-DNA of T. cruzi. When compared to the quantitative results, the concordance between the two molecular methods in both groups was 72.72%. In addition, we observed that all patients with positive results of hemoculture had positive qualitative PCR. The qPCR methodology although highly sensitive could not detect minimal amounts of T. cruzi DNA in one patient with positive hemoculture. Our results indicate a possible misdiagnosis of patients with megaesophagus given by the negative or inconclusive serology for Chagas disease. Due to its good performance, the qualitative PCR is a useful tool to determine the megaesophagus etiology / Doutorado / Clinica Medica / Doutora em Clínica Médica

Orientador: Mary Marcondes / Banca:Wagner Luis Ferreira / Banca: Suely Regina Mogami Bomfim / Banca: Juliana Peloi Vides / Banca: Acácio Duarte Pacheco / Resumo: O presente estudo teve como objetivos investigar a presença de anticorpos anti-Leishmania spp. e anti-saliva de Lutzomyia spp., e a presença do DNA de Leishmania spp. no sangue periférico de 284 indivíduos atendidos em um hospital público de área endêmica para leishmaniose visceral (LV). Baseando-se nos resultados de sorologia e da reação em cadeia da polimerase (PCR), 21,1% dos indivíduos foram considerados expostos. A presença de anticorpos anti-Leishmania spp. e anti-saliva de Lutzomyia spp. foi observada em 20,8% e 37,7% dos indivíduos, respectivamente, observando-se uma associação significativa entre a presença dos dois anticorpos. Em 20,4% dos indivíduos verificou-se sororeatividade em ambos os testes, 17,3% apresentavam anticorpos anti-saliva de Lutzomyia spp. sem a presença de anticorpos anti-Leishmania spp. e um indivíduo apresentava somente anticorpos anti-Leishmania spp. sem a presença de anticorpos anti-saliva de flebotomíneo. Em apenas um indivíduo foi possível amplificar fragmento do DNA de Leishmania spp. no sangue periférico. Concluiu-se que a infecção por Leishmania spp. pode estar sendo subdiagnosticada em áreas endêmicas para LV e, portanto, sugere-se que indivíduos atendidos em hospitais sejam melhor avaliados quanto à possibilidade de infecção e posterior desenvolvimento da doença. Ainda, a presença de anticorpos anti-saliva de flebotomíneo pode ser um possível indicador de exposição ao vetor. / Abstract: The present study aimed to investigate the presence of anti-Leishmania spp. and anti-saliva of Lutzomyia spp. antibodies, and the presence of Leishmania spp. DNA in the peripheral blood of 284 people attended at a public hospital in an endemic area for visceral leishmaniasis (VL). Based on the results of serology and PCR, 21.1% of the people were considered exposed. The presence of antibodies anti-Leishmania spp. and anti-saliva of Lutzomyia spp. was observed in 20.8% and 37.7% of the individuals, respectively, with a significant association between the presence of both antibodies. In 20.4% of the people there was serum reactivity in both tests, 17.3% had antibodies anti-saliva of Lutzomyia spp. without the presence of anti-Leishmania spp. antibodies, while one individual had only anti-Leishmania spp. antibodies without the presence of antibodies against saliva of sand flies. In only one individual it was possible to amplify the DNA fragment of Leishmania spp. in peripheral blood. It was concluded that the infection by Leishmania spp. may be underdiagnosed in endemic areas for VL and, therefore, it is suggested that people referred to hospitals should be better evaluated for the possibility of infection and subsequent development of the disease. Furthermore, the presence of antibodies anti-sandfly saliva may be an indicator of exposure to vector. / Doutor

Orientador: Gisele Fabrino Machado / Resumo: O principal objetivo do presente estudo foi avaliar a expressão gênica do PD-1 e seu ligante PD-L1, e do FoxP3 em felinos com gengivoestomatite crônica (GCF). Adicionalmente, foi feita uma caracterização do perfil dos indivíduos acometidos com a enfermidade a fim de se verificar a associação entre os resultados encontrados com os aspectos clínicos das lesões e com as análises histopatológicas das lesões. Para tal, após avaliação clínica, foram colhidas amostras da mucosa oral de sete gatos acometidos por gengivoestomatite crônica e de sete gatos aparentemente saudáveis para controle. Também foi feita a coleta de sangue para extração do soro e swab orofaríngeo para triagem das principais viroses felinas como Calicivirus (FCV), Herpesvirus (FHV-1), Vírus da Imunodeficiência Felina (FIV), Vírus da Leucemia Felina (FeLV) e Coronavirus (FCoV), assim como avaliação da função renal desses animais. O fragmento colhido foi dividido em duas partes, uma para processamento histopatológico e outra para PCR em tempo real. Foi realizada imuno-histoquímica para detecção do FCoV em específico nas lesões dos gatos com GCF. Como resultado, verificou-se que cinco dos sete gatos com a doença incluídos no estudo, eram machos, adultos, sem raça definida, castrados, viviam em ambiente com superlotação de animais, tinham acesso livre para a rua, se alimentavam de uma dieta mista composta por ração e comida caseira, e recebiam reforços anuais de vacinação. Cinco gatos com GCF eram negativos para FCV, ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The main objective of the present study was to evaluate the gene expression of PD-1 and its ligand PD-L1, and FoxP3, as immune response modulators, in cats diagnosed with feline chronic gingivostomatitis (FCGS). Additionally, it was performed a characterization of the feline profile with FCGS the association between the results found with clinical evalution of oral cavity as well as histopathological analysis. For this, oral mucosa samples were collected from seven cats with FCGS and seven from healthy cats. Previously, clinical evalution was done and oral lesion severety was scored by a system. Blood samples and oropharyngeal swabs were collected for major feline viruses screening, such as Calicivirus (FCV), Herpesvirus (FHV-1), Feline Immunodeficiency Virus (FIV), Feline Leukemia Virus (FeLV) and Coronavirus. (FCoV), and also, renal function evaluation. The oral mucosa fragment was divided into two parts, one for histopathological processing and another for RTPCR. Immunohistochemistry was performed to detect FCoV in lesions of cats with FCGS. As result, it was found that five of seven cats with FCGS included in the study were males, adults and mixed breed. All cats were neutered, lived in a multi-cat household, had an outdoor lyifestyle, received a mixed diet, and received routine booster immunizations. Five cats were negative for FCV, FHV- 1, FIV and FeLV infection, no one was positive for FCoV at immunohistochemistry. At histopathological evaluation, it was observed minim... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Introdução: O câncer de próstata (CP) é a neoplasia mais comum do homem e o seu rastreamento e métodos de detecção têm sido motivo de grande discussão. Devido a sua alta prevalência, busca-se a identificação de tumores clinicamente significantes, evitando-se o supertratamento e seus consequentes efeitos colaterais. Atualmente a ressonância magnética multiparamétrica e outros marcadores moleculares têm sido utilizados, mas falham em acurácia. A busca de novos marcadores diagnósticos e de caracterização da agressividade do CP é urgente. Objetivos: Identificação do perfil de expressão dos genes ERG, SPOP, PTEN, AMACR, GOLM1, EN2 e NKX3.1 e dos miRNAs 21, 221, 100 e 141 no tecido proveniente de biópsias de próstata por agulha e avaliação de sua acurácia no diagnóstico e determinação do prognóstico do CP. Análise de proteínas glicosiladas na urina através da proteômica e espectometria de massa para o diagnóstico do CP. Materiais e Métodos: Estudo prospectivo, exploratório para identificação de biomarcadores diagnósticos e prognósticos de CP. Cento e trinta e dois pacientes com indicação de biópsia de próstata (PSA > 4,0 ng/ml e/ou alterações no toque retal) foram submetidos a biópsia prostática em sextantes no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP e no Instituto do Câncer do Estado de São Paulo (ICESP). Uma amostra aleatória de biópsia foi submetida a qRT-PCR para análise da expressão dos genes e miRNAs. A urina foi coletada após a biópsia e mantida a -20oC. Doze amostras de urina sendo seis de pacientes com diagnóstico de CP e seis com hiperplasia próstatica benigna foram submetidas a análise proteômica com espectrometria de massa. Os perfis de expressão de miRNAs, genes e proteínas foram comparados entre pacientes com e sem diagnóstico de CP. Avaliamos também o perfil de expressão de genes e miRNAs e sua relação com a graduação histológica de Gleason. Resultados: Os níveis aumentados de expressão tissular de NKX3, SPOP, AMACR, EN2, GOLM1 e ERG foram significativamente maiores no grupo CP quando comparados ao grupo controle p=0.03, p=0.004, p < 0.001, p < 0.001, p < 0.001, p=0,002 respectivamente. A avaliação da curva ROC revelou AUC de 0,744; 0,726; 0,692; 0,659; 0,646; 0,609 e 0,469 respectivamente para AMACR, GOLM1, EN2, ERG, SPOP, NKX3 e PTEN no diagnóstico do CP. Com base na análise de regressão linear foi proposto um modelo de análise conjunta dessas variáveis e criado um nomograma com GOLM1 e AMACR integrados com idade e níveis de PSA. A acurácia do nomograma proposto foi de 78,2% no diagnóstico do CP. Na avaliação prognóstica comparando dois grupos de Gleason 6 vs 7 a 10, os genes EN2, GOLM1 e AMACR foram significativamente mais expressos nos tumores mais agressivos (p=0,027, p=0,002, p=0,013 respectivamente). A curva ROC revelou AUC de 0,675, 0,727 e 0,684 respectivamente para EN2, GOLM1 e AMACR. Seguindo o mesmo tratamento estatístico do modelo diagnóstico proposto nesse estudo, foi elaborado um nomograma prognóstico com integração do PSA, idade e expressão de GOLM1 que mostrou uma acurácia de 79%. Na avaliação prognóstica entre os grupos Gleason 6 e 7 vs 8, 9 e 10 apenas os marcadores NKX3 e SPOP foram diferencialmente expressos, p=0,036 e p=0,044 respetivamente. A avaliação da curva ROC revelou AUC 0,704 e 0,696 para NKX3 e SPOP respectivamente. O nomograma proposto, a partir dessas informações e tratamento estatístico das variáveis, integrando PSA, idade e expressão de SPOP mostra uma acurácia de 89% na identificação de tumores de alto grau. Os miRNAs não apresentaram expressão significativamente diferente entre os grupos tanto para o diagnóstico quanto para o prognóstico. A análise proteômica revelou um painel de 56 N-glicopeptídeos capaz de discriminar completamente os grupos de pacientes com e sem CP. A avaliação da curva ROC para o painel formado mostrou uma AUC=1. Conclusões: A análise da expressão de genes em fragmento de biópsia de próstata por agulha, aleatoriamente retirado foi capaz de identificar a presença ou não do CP e caracterizar a sua agressividade. O nomograma desenhado a partir da expressão de GOLM1 e AMACR associados a idade e aos níveis de PSA mostrou acurácia de 78,2% no diagnóstico da doença. Os níveis de expressão tecidual de GOLM1 associados ao PSA demonstraram uma acurácia de 79,1% para a identificação de carcinomas com graduação >=7 e os níveis de expressão tecidual de SPOP associados ao PSA demonstraram uma acurácia de 89,0% para a identificação de carcinomas com graduação >=8. Os níveis de expressão de 56 N-glicopeptídeos intactos na urina mostraram uma ROC: AUC de 1 para o diagnóstico do câncer de próstata / Introduction: Prostate cancer (PC) is the most common cancer among men and screening and detection methods have been a matter of great discussion. Due to its high prevalence, there is an urgent need to search for new biomarkers able to distinguish the clinically significant PC, trying to avoid or postpone the side effects related to the curative treatment. Recently, multiparametric magnetic resonance and some molecular markers have been used but fail in accuracy. The search for new markers to diagnose and classify the aggressiveness of PC is urgent. Objective: Evaluate the expression of ERG, SPOP, PTEN, AMACR, GOLM1, EN2 and NKX 3.1 and miRNAs 21, 221, 100 and 141 in prostate tissue obtained by needle biopsy relating the results with the accuracy in the diagnosis and characterization of the aggressiveness of PC. Analysis of glycosylated proteins in the urine by proteomics and mass spectrometry to be applied in the diagnosis of PC. Materials and methods: Exploratory prospective study to identify diagnostic and prognostic biomarkers for PC. One hundred and thirty-two patients underwent prostate biopsy (PSA > 4.0 ng/ml and/or abnormalities in the digital rectal examination) at the Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP and the Cancer Institute of the State of São Paulo (ICESP). A random core was submitted to qRT-PCR for evaluation of gene and miRNA expression. The urine was collected after the biopsy and maintained at -20oC. Twelve samples of urine (six patients with PC and six with benign prostatic hyperplasia) were subjected to proteomic analysis with mass spectrometry. The expression profiles of miRNAs, genes and proteins were compared between patients with and without PC. In addition, the same analysis was performed considering the Gleason and ISUP grading. Results: NKX3, SPOP, AMACR, EN2, GOLM1 and ERG had significantly higher expression in the PC group (p=0.03, p=0.004, p < 0.001, p < 0.001, p=0.002, respectively). Evaluation of ROC curve revealed an AUC of 0.744, 0.726, 0.692, 0.659, 0.646, 0.609 and 0.469 respectively for AMACR, GOLM1, EN2, ERG, SPOP, NKX3 and PTEN. Based on the linear regression analysis, a model of joint analysis of these variables was proposed and a nomogram was created with GOLM1 and AMACR associated with age and PSA levels. The accuracy of this nomogram in diagnosing PC was 78.2%. Considering the prognosis, comparing Gleason 6 vs 7 to 10, EN2, GOLM1 and AMACR were significantly more expressed in more aggressive tumors (p=0.027, p=0.002, p=0.013 respectively). ROC curve evaluation revealed an AUC of 0.675, 0.727 and 0.684 respectively for EN2, GOLM1 and AMACR. Following the same statistical treatment used for diagnosis, a nomogram was created with PSA, age and GOLM1 expression showing an accuracy of 79%. Another prognostic evaluation compared Gleason 6 and 7 vs 8,9 and 10. Only the NKX3 and SPOP were differentially expressed (p=0.036 and p=0.044, respectively) and the ROC curve revealed an AUC 0.704 and 0.696 for NKX3 and SPOP, respectively. A nomogram was designed including age, PSA and SPOP expression. The accuracy for this model in identifying high grade tumors was 89%. MiRNAs expression was not different between the groups considering diagnosis and prognosis. Proteomics analysis revealed a panel of 56 N-glycopeptides able to completely discriminate the groups with and without PC with an (ROC: AUC=1). Conclusion: Evaluating the expression of genes in a random core of prostate biopsy we were able to identify the presence of PC and to characterize its aggressiveness. A nomogram using GOLM1 and AMACR associated with PSA serum levels and age showed and accuracy of 78.2% in diagnose PC. The levels of GOLM1and PSA showed an accuracy of 79.1% in the identification of PC Gleason >=7. SPOP and PSA showed and accuracy of 89% in the identification of PC Gleason >=8. The expression levels of 56 N-glycoproteins perfectly discriminated PC and BPH (ROC: AUC=1)

O presente estudo teve por objetivo avaliar in vivo a eficácia do preparo de canais radiculares na redução bacteriana em dentes portadores de periodontite apical primária, com auxílio do sistema EndoVac de irrigação e aspiração. Foram coletadas amostras dos canais radiculares de 20 pacientes, antes (S1) e após (S2) o preparo com instrumentos rotatórios Protaper, variando somente a técnica utilizada para irrigação e aspiração: Grupo A (irrigação convencional n=10) e Grupo B (irrigação com auxílio do sistema EndoVac n=10). Após a extração do DNA presente nas amostras, este foi quantificado através da reação de PCR em tempo real, pelo método SYBR Green, identificando o número de cópias do gene 16SrRNA. Em todas as amostras, com exceção de uma pós-preparo com EndoVac, foram identificadas cópias do gene alvo. A média para todos os casos foi de 1,6 X 108 e 8,8 X 105 cópias do 16SrRNA, antes e após o preparo, respectivamente. Para os grupos isoladamente, os mesmos valores foram: 2,0 X 108 e 5,5 X 105 (convencional), e 1,1 X 108 e 1,2 X 106 (EndoVac). O percentual médio de redução foi de 97,52% (97,02% para convencional e 98,04% para o EndoVac). O teste de Mann-Whitney permitiu concluir que ambas as técnicas reduziram significativamente os microrganismos presentes antes do preparo (p<0,0001), sem haver diferença entre as mesmas (p=0,9705). Nenhuma das técnicas foi efetiva na eliminação completa de bactérias sob a metodologia utilizada. A eficácia antibacteriana do sistema EndoVac, sob esta metodologia, foi semelhante a obtida com a irrigação e aspiração convencional. / The present study aimed to analyze in vivo the effectiveness of root canal preparation on bacterial reduction in patientss teeth with primary apical periodontitis. Samples were collected from 20 patients before (S1) and after (S2) preparation with ProTaper rotary files, varying only the technique used for irrigation and aspiration: Group A (conventional irrigation - n = 10) and Group B (with the aid of EndoVac system - n = 10). After extraction, the DNA present in the samples was quantified by real-time PCR with the SYBR Green method, identifying the number of 16SrRNA gene copies. In all samples, except for a post-preparation case with EndoVac, copies of the target gene were identified. Average for all cases was 1,6 X 108 and 8,8 X 105 copies of the 16SrRNA, before and after preparation, respectively. For the groups separately, the same values were 2,0 X 108 and 5,5 X 105 (conventional) and 1,1 X 108 and 1,2 X 106 (EndoVac). The mean percentage of reduction was 97.52% (97.02% for the conventional and 98.04% for the EndoVac). The Mann-Whitney test concluded that both techniques significantly reduced the microrganisms after preparation (p<0,0001), with no differences between them (p=0,9705). None of the techniques were effective in the complete elimination of bacteria under this methodology. The antibacterial efficacy of the EndoVac system under this methodology was similar to that obtained with conventional irrigation and aspiration.

INTRODUÇÃO: Imunodeficiências primárias são um grupo heterogêneo de distúrbios de origem genética que afetam a imunidade e se caracterizam por infecções de repetição. Aproximadamente metade dos casos estão ligados a deficiências humorais e dentre estas podemos destacar a Imunodeficiência Comum Variável (ICV). Uma vez que os pacientes com ICV possuem redução dos níveis de anticorpos, esses pacientes apresentam infecções recidivantes do trato respiratório e aproximadamente 90% tiveram no mínimo um episódio de rinossinusite (RNS). A RNS se instala devido ao desequilíbrio entre o meio ambiente e fatores do hospedeiro e a infecção viral é pelo menos 20 vezes mais frequente do que a infecção bacteriana em indivíduos normais. OBJETIVOS: (1) Identificar os agentes virais da RNS nos pacientes com ICV e em indivíduos controles em um contexto prospectivo; (2) Definir quais citocinas e quimiocinas estão presentes e avaliar a expressão de genes relacionados à imunidade inata e adaptativa antiviral no lavado nasal de pacientes com ICV e nos indivíduos controles. CASUÍSTICA, MATERIAIS E MÉTODOS: Pacientes com ICV e indivíduos controles foram avaliados quando apresentavam sinais e sintomas de uma RNS viral e foi realizado a coleta de lavado nasal para a identificação de vírus respiratórios, além da quantificação da secreção de citocinas e quimiocinas e da avaliação da expressão gênica de genes relacionados à imunidade inata e adaptativa antiviral. A avaliação foi repetida quando todos os indivíduos previamente estudados se encontravam assintomáticos. RESULTADOS: De abril de 2012 a novembro de 2014, foram colhidas 65 amostras de lavado nasal, 43 amostras de 34 indivíduos controles e 22 amostras de 14 pacientes com ICV. Quatro amostras foram positivas para vírus pela técnica da imunofluorescência direta e dezoito amostras foram positivas pelo PCR. Pacientes com ICV tiveram mais infecções, duração maior dos sintomas e maior necessidade de uso de antibióticos que o grupo controle. A avaliação da produção de citocinas e quimiocinas no lavado nasal mostrou aumento da secreção de CXCL10, CCL2, CCL5, CXCL8 IL-6, IL-10, IL-1beta e TNF em ambos os grupos quando esses apresentavam quadro agudo de RNS viral. Foi realizada a expressão de genes pela técnica do PCR Real Time. Os pacientes com ICV apresentaram um aumento de expressão de genes relacionados à imunidade inata e adaptativa anitiviral substancialmente maior frente a um quadro de RNS viral do que os indivíduos controles em situações semelhantes. Quando comparamos os pacientes ICV e os controles ambos sem infecção aguda, observamos que os genes apresentam em sua maioria uma redução de expressão nos pacientes com ICV. DISCUSSÃO: Os vírus detectados respeitaram a sazonalidade em que normalmente são detectados e pacientes com ICV proporcionalmente tiveram mais infecções e uma evolução pior que o grupo controle. Aparentemente não houve diferenças significativas entre os grupos estudados quanto à liberação de citocinas e quimiocinas. Com relação ao estudo da expressão gênica, a maior amplitude de variação observada nos pacientes com ICV pode significar um desajuste de resposta imune levando a um quadro de maior inflamação local com consequente maior dano tecidual e justificando assim a incidência aumentada de complicações, duração aumentada dos sintomas e replicação viral aumentada nesse grupo de pacientes / INTRODUCTION: Primary immunodeficiencies (PIDs) are a heterogeneous group of genetic disorders that affect immunity and are characterized by relapsing, usually severe infections. Approximately half of the cases are linked to humoral deficiencies, being common variable immunodeficiency (CVID) the most frequent. CVID patients have reduced levels of antibodies; therefore, these patients have recurrent infections in the respiratory tract and approximately 90% had at least one episode of rhinosinusitis (RS). RS installs itself due to the imbalance between the environment and host factors and viral infection is at least 20 times as common as the bacterial infection in normal individuals. OBJECTIVES: (1) Identify the viral agents of rhinosinusitis in patients with CVID and in control individuals on a prospective context; (2) define which cytokines and chemokines are present in the nasal wash and evaluate the expression of genes related to innate and adaptive antiviral immunity in nasal wash of CVID patients and in control individuals. CASES, MATERIALS, AND METHODS: patients with CVID and control individuals were examined at Outpatient Facility of Dermatological Manifestations of Primary Immunodeficiencies and when they presented signs and symptoms of a viral RS. Nasal wash was collected in order to identify respiratory viruses; secretion of cytokines and chemokines were quantified and gene expression of genes related to innate and adaptive antiviral immunity were evaluated. This evaluation was repeated when all individuals previously studied were asymptomatic. RESULTS: From April 2012 to November 2014, 65 samples of nasal wash, 43 samples of 34 control individuals and 22 samples of 14 patients with CVID were collected. Four samples were positive for virus by direct immunofluorescence technique and eighteen samples by PCR. The detected viruses behaved according to the season in which they are normally detected and patients with CVID proportionally had more and longer infections and required more antibiotics than the control group. The evaluation of the production of cytokines and chemokines showed an increased secretion of CXCL10, CXCL8 CCL2, CCL5, IL-6, IL-10, IL-1beta and TNF in both groups when they presented acute viral RS. Gene expression was performed by using Real Time PCR. CVID patients showed increased expression of genes related to innate and adaptive antiviral immunity when compared to control individuals presenting acute viral RS. Conversely, when we compared CVID patients and control individuals both without acute infection, we observed a reduction in gene expression in CVID patients. DISCUSSION: The viral rhinosinusitis respected seasonality and CVID patients had proportionally more infections and a worse evolution than the control group. Apparently, there were no significant differences between the groups regarding the release of cytokines and chemokines. The greater magnitude of gene expression variation observed in CVID patients suggests an imbalance of immune response leading to a state of greater local inflammation with consequent greater tissue damage, therefore justifying an increased incidence of complications, increased duration of symptoms and increased viral replication in this group of patients