Submitted by Daniele Amaral (daniee_ni@hotmail.com) on 2016-10-05T20:44:37Z No. of bitstreams: 1 DissWCF.pdf: 1667974 bytes, checksum: eb02b0255d4c2035728b60b62b8627e0 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-20T16:21:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissWCF.pdf: 1667974 bytes, checksum: eb02b0255d4c2035728b60b62b8627e0 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-20T16:21:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissWCF.pdf: 1667974 bytes, checksum: eb02b0255d4c2035728b60b62b8627e0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-20T16:21:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissWCF.pdf: 1667974 bytes, checksum: eb02b0255d4c2035728b60b62b8627e0 (MD5) Previous issue date: 2016-03-31 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Emotional stress has been recognized as a risk factor for cardiovascular diseases. Nevertheless, the mechanisms involved in the etiology of cardiovascular dysfunctions evoked by stress are still poorly understood. Thus, in the present study we investigated the involvement of angiotensin II acting in the type 1 receptor (AT1) in cardiovascular dysfunctions evoked by chronic stress in rats. For this, we compared the effect of chronic treatment with the AT1 receptor antagonist losartana (30mg/kg/day, p.o.) in the cardiovascular and autonomic changes following 10 days exposure to chronic variable stress (CVS, heterotypic stressor) and repeated restraint stress (RRS, homotypic stressor). Neither RRS nor CVS affected basal values of arterial pressure and heart rate. However, RRS increased sympathetic tone to the heart and decreased cardiac parasympathetic activity, whereas CVS decreased cardiac parasympathetic activity. Both chronic stressors also impaired the baroreflex function. All alterations in autonomic activity and the baroreflex impairment were inhibited by treatment with losartan. Complementary measurements of parameters commonly analyzed in studies investigating stress effects also indicated that CVS reduced body weight gain and increased circulating corticosterone, but these effects were not affected by losartan. In fact, CVS-evoked body weight change was even higher in losartan-treated animals. In conclusion, these findings indicate an involvement of angiotensin II/AT1 receptors in autonomic changes evoked by both homotypic and heterotypic chronic stressors. Additionally, present results suggest that increased circulating corticosterone evoked by CVS is independent of AT1 receptors, while reduction in body weight gain evoked by this heterotypic stressor is facilitated by treatment with losartan. / Estresse emocional tem sido reconhecido como um fator de risco para o desenvolvimento de doenças cardiovasculares. No entanto, os mecanismos envolvidos na etiologia das disfunções cardiovasculares evocadas pelo estresse ainda são pouco compreendidos. Assim, no presente estudo nós investigamos o envolvimento da angiotensina II, agindo através do receptor tipo 1 (AT1), nas disfunções cardiovasculares evocadas por estresse crônico em ratos. Para isso, comparamos o efeito do tratamento crônico com um antagonista AT1, losartana (30 mg/kg/dia, p.o.), nas alterações cardiovasculares e autônomas após exposição por 10 dias a dois modelos de estresse crônico: o estresse crônico de variável (ECV, estressor heterotípico) e o estresse de restrição repetido (ERR, estressor homotípico). Nenhum dos protocolos de estresse crônico afetaram os valores basais de pressão arterial e frequência cardíaca. No entanto, o ERR aumentou o tônus simpático para o coração e diminuiu a atividade parassimpática cardíaca, enquanto o ECV diminuiu a atividade parassimpática cardíaca. Ambos os estressores crônicos também prejudicaram a função do barorreflexo. Todas as alterações na atividade autônoma e a disfunção do barorreflexo foram inibidas pelo tratamento com losartana. Medidas complementares de parâmetros comumente analisados em estudos investigando os efeitos do estresse também demonstraram que o nosso protocolo de ECV reduziu o ganho de peso e aumentou os níveis plasmáticos de corticosterona, porém nenhum destes efeitos foram afetados pelo tratamento com losartana. De fato, a redução no ganho de peso corporal induzida pelo ECV foi acentuada nos animais tratados com losartana. Em conclusão, estes resultados indicam um envolvimento dos receptores AT1 nas alterações autônomas evocadas pelos estressores homotípico e heterotípico. Além disso, os resultados do presente estudo sugerem que o aumento na corticosterona circulante causada pelo ECV é independente dos receptores AT1, enquanto a redução de ganho do peso corporal evocado por este estressor heterotípico é facilitado pelo tratamento com losartana.

Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2017-02-13T11:50:19Z No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 2376282 bytes, checksum: f00091bc34d6ac827f808df88ecc9540 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-13T11:50:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 2376282 bytes, checksum: f00091bc34d6ac827f808df88ecc9540 (MD5) Previous issue date: 2015-02-06 / Hypertension and diabetes are diseases with a strong impact on public health and have risk factors, incorrect eating habits and oxidative stress. In this sense, the science search for alternatives to the treatment of these diseases, being natural compounds an important research line. Family Myrtaceae species are recognized as a major source of antioxidant compounds and stands out Syzygium cumini L. to present biological activities, especially hypoglycemic. Currently, one observes during the processing of this and other plants a wide production waste (eg .: fruit epicarp and seeds) without proper biological utilization and / or therapeutic. This study aims to identify the content of phenolic compounds, antioxidant activity of the hydroalcoholic extract lyophilized epicarp of S. cumini L. (Sc-EPHE), and investigate the effects of chronic intake of this extract in normotensive rats metabolism (WKY) and hypertensive (SHR). To characterize the Sc-Ephesus was carried out by high-performance liquid chromatography, the identification of gallic acid as a marker of standardization, determination of total phenolic and antioxidant activity. During six weeks the animals received via different oral doses (150 or 300 mg/kg) of Sc-EpHE or saline (VEHICLE) in this period the weight was measured weekly and water intake and ration monitored daily. After treatment the animals underwent direct measurement of blood pressure, blood collection and later euthanized for collection agencies. The modified extraction technique generated a product with high content of phenolic compounds (5440.86 mg GAE/100g sample), presence of gallic acid and high antioxidant activity (EC50 = 59 μg/ mL) determined by DPPH. As for biological assessments, there was no significant difference between groups for weight gain. The average blood pressure levels (MAP) in SHR VEHICLE (153.8±5.0 mmHg) were significantly higher than WKY VEHICLE (123.0±4.86 mmHg). Treatment with 150 mg/kg Sc-EpHE did not significantly alter the MAP. However hypertensive rat 300 mg/ kg of Sc- EpHE reduced 29.77 ± 8.12 mmHg of MAP compared to vehicle. The contractile response induced to phenylephrine was significantly higher in SHR VEHICLE (Emax = 153.4± 14.2%) compared to WKY VEHICLE (Emax = 100.2±10.5%). SHR treated with 300 mg/kg Sc- EpHE (Emax = 116.7 ± 6.7%) showed reduced contractile response to phenylephrine in SHR compared to vehicle. The induced vasorelaxation NPS in SHR 150 mg/kg was not changed, however the SHR 300 mg/kg (Emax = 82.2 ± 3.7%) the effect was reduced as compared with WKY VEHICLE (Emax = 100.0 ± 4.7%). The SHR 300 mg/kg showed a significant reduction in fasting blood glucose during the fourth (25.5 ± 7.06 mg/dL) and fifth (30.83±7.06 mg/dL) week of treatment. Fluorescence microscopy preliminary results suggest that the SHR have excessive production of reactive oxygen species (ROS) and treatment with 300 mg/kg Sc-EpHE attenuate this production. Therefore, our results demonstrate that the Sc- EpHE has a high content of phenolics and antioxidant activity, and suggest that oral administration Sc-EpHE has antihypertensive activity for attenuating the contractile response, and possibly, the production of ROS and reduce glucose levels in SHR. / Hipertensão e diabetes são patologias com forte impacto na saúde pública e possuem como fatores de risco, hábitos alimentares incorretos e estresse oxidativo. Neste sentido, a ciência busca por alternativas para tratamento destas enfermidades, sendo os compostos naturais uma importante linha de pesquisa. Espécies da família Myrtaceae são reconhecidas como uma relevante fonte de compostos antioxidantes e destaca-se a Syzygium cumini L. por apresentar atividades biológicas, principalmente ação hipoglicemiante. Atualmente, observa-se durante o processamento desta e de outras plantas uma larga produção de resíduos (ex.: epicarpo do fruto e sementes) sem o devido aproveitamento biológico e/ou terapêutico. Este estudo objetiva identificar o teor de compostos fenólicos, atividade antioxidante do extrato hidroalcoólico do epicarpo liofilizado da S. cumini L. (Sc-EpHE), e investigar os efeitos da ingestão crônica deste extrato no metabolismo de ratos normotensos (WKY) e hipertensos (SHR). Para caracterização do Sc-EpHE foi realizada, por cromatografia líquida de alta eficiência, a identificação de ácido gálico como marcador de padronização, determinação de fenólicos totais e da atividade antioxidante. Durante 6 semanas os animais receberam via oral diferentes doses (150 ou 300 mg/kg) do Sc-EpHE ou salina (VEÍCULO), neste período o peso foi aferido semanalmente e a ingestão de água e ração monitoradas diariamente. Ao fim do tratamento os animais foram submetidos à medida direta da pressão arterial, coleta sanguínea e posteriormente eutanasiados para coleta de órgãos. A técnica modificada de extração gerou um produto com elevado teor de fenólicos totais (5.440,86 mg EAG/100g de amostra), presença de ácido gálico e alta atividade antioxidante (CE50 = 59 μg/mL) determinada por DPPH. Quanto às avaliações biológicas, não observou-se diferença significativa entre os grupos para ganho ponderal. Os níveis de pressão arterial média (PAM) no SHR VEÍCULO (153,8±5,0 mmHg) foram significativamente superiores ao WKY VEÍCULO (123,0±4,86 mmHg). O tratamento com 150 mg/kg do Sc-EpHE não alterou significativamente a PAM. Entretanto em ratos hipertensos 300 mg/kg do Sc-EpHE reduziu 29,77±8,12 mmHg de PAM quando comparados com o veículo. A resposta contrátil induzida à fenilefrina foi significativamente superior no SHR VEÍCULO (Emáx = 153,4±14,2%) em relação ao WKY VEÍCULO (Emáx = 100,2±10,5%). Os SHR tratados com 300 mg/kg do Sc-EpHE (Emáx = 116,7±6,7%) apresentaram resposta contrátil à fenilefrina reduzida em comparação com SHR VEÍCULO. O vasorelaxamento induzido pelo NPS no SHR 150 mg/kg não foi alterado, entretanto no SHR 300 mg/kg (Emáx = 82,2±3,7%) o efeito foi reduzido quando comparado com WKY VEÍCULO (Emáx = 100,0±4,7%). Os animais SHR 300 mg/kg apresentaram redução significativa da glicemia de jejum durante a quarta (25,5±7,06 mg/dL) e quinta (30,83±7,06 mg/dL) semana de tratamento. Resultados preliminares de microscopia de fluorescência sugerem que os animais SHR apresentam produção excessiva de espécies reativas de oxigênio (ROS) e que o tratamento com 300 mg/kg do Sc-EpHE atenua essa produção. Portanto, nossos resultados demonstram que o Sc-EpHE apresenta elevado conteúdo de fenólicos e atividade antioxidante e sugerem que a administração oral do Sc- EpHE possui atividade anti-hipertensiva por atenuar a resposta contrátil e, possivelmente, a produção de ROS, além de reduzir os níveis glicêmicos em SHR.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-09-11T10:46:39Z No. of bitstreams: 2 Tese - Thiago Sardinha de Oliveira - 2018.pdf: 4687551 bytes, checksum: 1e4f2d0e9cb8438779749f49756c0b0b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-09-11T11:12:23Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Thiago Sardinha de Oliveira - 2018.pdf: 4687551 bytes, checksum: 1e4f2d0e9cb8438779749f49756c0b0b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-11T11:12:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Thiago Sardinha de Oliveira - 2018.pdf: 4687551 bytes, checksum: 1e4f2d0e9cb8438779749f49756c0b0b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-08-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Estrone (E1), the major component of Premarin® and predominant estrogen in postmenopausal women, does not have its vascular effects involving its vasodilatory mechanism of action completely elucidated. Therefore, the aim of this study was to evaluate the effects of E1 treatment on the vascular reactivity of isolated aortic rings and blood pressure in ovariectomized Wistar rats (OVX). For this purpose, 12 week-old Wistar rats were divided into four experimental groups, Sham (physiological estrous rats treated with vehicle), OVX (OVX rats treated with vehicle), OVX + E1 (OVX rats treated with 825μg / kg of E1) and OVX + 17β-estradiol (E2) (OVX rats treated with 15μg / kg of E2). The treatments started after the 8 weeks of surgery trough subcutaneous pathway for 30 days. At the end of treatment, blood pressure measurement by tail plethysmograph was performed. In addition, aortic rings were isolated to evaluate contractile response to phenylephrine (Phe), relaxation to acetylcholine (ACh) or sodium nitroprusside (NPS) by means of concentration curves. The response to ACh in rings previously incubated with superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) or apocynin (NADPH oxidase inhibitor) was also evaluated. The protein expression of SOD, CAT, NOX 1, NOX 2 and NOX 4 were quantified by Western blotting. Follow-up of the weight gain after the OVX or Sham procedure was also performed. After euthanasia, the weight of retroperitoneal fat, uterus and heart were evaluated. E1 treatment decreased body weight and retroperitoneal fat, increased uterine weight, and corrected both the increased blood pressure, and the decreased hyperreactivity to Phe vasoconstrictor agent and also increased endothelium-dependent vasodilatory response to ACh. The effects presented by this hormone are related to compensatory mechanisms in the activity of antioxidant enzymes such as SOD and catalase besides the reduction in the expression of the NADPH oxidase NOX 4 isoform. In addition, E1 reverses the increase in total and LDL cholesterol in the OVX group. Our study confirms the role of oxidative stress in endothelial dysfunction of OVX rats and further demonstrates that E1 reverses elevation of blood pressure and restores endothelial function in OVX rats. / A estrona (E1), componente majoritário do Premarin® e estrogênio predominante na circulação feminina na pós-menopausa, não possui seus efeitos vasculares e mecanismos de ação completamente elucidados. Diante disso, o objetivo do presente trabalho foi avaliar os efeitos do tratamento com E1 em ratas Wistar ovariectomizadas (OVX) sobre a reatividade de anéis de aorta e pressão arterial. Para este estudo, ratas com 12 semanas de idade foram divididas em quatro grupos experimentais, Sham (ratas em estro fisiológico tratadas com veículo), OVX (ratas OVX tratadas com veículo), OVX + E1 (ratas OVX tratadas com 825μg/Kg de E1) e OVX + 17β-estradiol (E2) (ratas OVX tratadas com 15μg/Kg de E2). Os tratamentos foram iniciados após 8 semanas da cirurgia pela via subcutânea pelo período de 30 dias. Ao final do tratamento, foi realizada a medida de pressão arterial por pletismografia de cauda.Além disso, anéis de aorta foram isolados para avaliar resposta contrátil à fenilefrina (Phe), relaxamento à acetilcolina (ACh) ou ao nitroprussiato de sódio (NPS) por meio de curvas de concentração efeito cumulativas. Foi ainda avaliada a resposta à ACh em anéis incubados previamente com superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) ou apocinina (inibidor da NADPH-oxidase (NOX)). A expressão protéica da SOD, CAT, NOX 1, NOX 2 e NOX 4 foi quantificada por Western-blot. Foi realizado o acompanhamento do ganho de peso após o procedimento de ovariectomia nos grupos OVX ou Sham e, após a eutanásia, foi avaliado o peso da gordura retroperitoneal, útero e coração. O tratamento com E1 diminuiu o peso corporal e a gordura retroperitoneal, aumentou o peso uterino, normalizou os níveis de pressão arterial, o aumento da resposta contrátil à Phe e a resposta vasodilatadora dependente de endotélio à ACh. Os efeitos apresentados por este hormônio estão relacionados com mecanismos compensatórios na expressão e atividade de enzimas antioxidantes como SOD e CAT, além da redução na expressão da isoforma NOX 4. Além disso, a E1 reverteu o aumento do colesterol total e LDL observados nas ratas OVX. Os dados apresentados demonstram o papel benéfico da E1 frente ao estresse oxidativo na disfunção vascular, restabelecendo a função endotelial e os níveis fisiológicos da pressão arterial.

Para avaliar o efeito de uma refeição-teste rica em lipídeos, assim mimetizando o estado pós-prandial durante o dia, nos parâmetros metabólicos e na reatividade vascular, foram estudados quatro grupos de pacientes do sexo masculino, assim divididos: com diabetes mellitus Tipo 2 e sem doença arterial coronariana (DM, n = 10), com doença arterial coronariana e com diabetes mellitus Tipo 2 (DM + DAC, n = 11), com doença arterial coronariana e sem diabetes mellitus (DAC, n = 11) e Controle (n = 7). Todos os pacientes, após receberem uma dieta rica em gordura (60g) e pobre em hidratos de carbono (14g), foram avaliados em termos de perfil lipídico antes (0h) e 2h, 4h, 6h e 8h após a ingestão e realizada a avaliação da reatividade vascular nos tempos 0h, 4h e 8h. A reatividade vascular foi estudada por ultra-som de alta resolução, medindo-se a resposta vasodilatadora da artéria braquial durante hiperemia reativa (vasodilatação endotélio-dependente) e após administração de nitroglicerina (endotélio-independente). HbA1c não foi diferente entre os grupos do estudo, exceto, como seria de se esperar, nos Controles, que foi normal (média ± DP) (DAC: 6,3 ± 0,6% vs DM + DAC: 7,6 ± 1,6% vs DM: 6,8 ± 1,7% vs Controle: 5,43 ± 0,45%). Por outro lado, a glicemia e insulina de jejum foram significativamente menores dos DAC e grupo Controle, sendo similar nos dois grupos. Dos outros parâmetros metabólicos, apenas o ácido úrico foi significativamente maior no grupo DAC (p = 0,025) em comparação aos outros. Vasodilatação da artéria braquial pós-isquemia antes do teste de sobrecarga foi semelhante entre os grupos (DAC: 7,44 ± 4,30% vs 7,01 ± 4,53% no DM vs 10,34 ± 5,10% no DM+DAC vs 9,91 ± 2,97% no grupo Controle. A vasodilatação após administração de nitrato (realizada no dia anterior ao teste de sobrecarga lipídica) também se manteve dentro da normalidade nos quatro grupos, sem diferença entre eles (DAC: 19,85 ± 8,66% vs 15,68 ± 11,43% no DM vs 21,24 ± 11,82% no DM+DAC e 20,05 ± 3,73% no grupo Controle). HOMAIR (Homeostasis Model for Assessment of insulin resistance) aumentou progressivamente nos grupos DAC, DM e DM+DAC, respectivamente, sendo significativamente menor no grupo Controle. Após sobrecarga, os níveis de triglicerídeos aumentaram significativamente nos quatro grupos, com pico nos tempos 4h e 6h (p < 0,001 nos quatro grupos para 2h, 4h, 6h e 8h vs 0h). O colesterol total apresentou aumento, com p < 0,001 para 4h e 6h e p = 0,0019 para 8h, em comparação com 0h, nos quatro grupos. O LDL-colesterol (p = 0,001) e o HDL-colesterol (p < 0,001) apresentaram decréscimo em todos os tempos após o teste em relação ao basal. Não houve diferença significativa entre os quatro grupos no perfil lipídico após sobrecarga de gordura. A glicemia foi significativamente mais baixa nos grupos DAC e Controle do que nos grupos DM e DM+DAC. Nos grupos DAC e Controle, a glicemia manteve-se inalterada durante o teste. Os grupos DM e DM+DAC apresentaram um decréscimo significativo nos níveis glicêmicos nos tempos 4h, 6h e 8h. (p<0,001 para todos os grupos em relação ao tempo 0h). O comportamento da insulinemia foi semelhante entre os grupos e todos mostraram elevação nos tempos 2h (p<0,001) vs 0h, havendo progressiva queda no decorrer dos tempos, chegando aos níveis basais na oitava hora. A reatividade vascular foi semelhante entre os quatro grupos e não houve diferença nas medidas após sobrecarga. No grupo DM ocorreu uma redução limítrofe na reatividade vascular após a ingestão da sobrecarga lipídica (p = 0,0556). A vasodilatação pós-nitroglicerina também foi semelhante entre os grupos, assim como os resultados obtidos antes e após sobrecarga quando comparados entre si. Este estudo permitiu concluir que a hiperlipemia pós-sobrecarga lipídica nos grupos DAC, DM, DM+DAC e Controle resultou em hiperinsulinemia sem elevação glicêmica, mas sem efeito significativo da reatividade vascular, tanto quando avaliada pela hiperemia reativa (endotélio-dependente), quanto quando estimulada com vasodilatador (endotélio-independente) / To assess the effect of a high-fat meal to simulate to post-prandial state during the day, on the metabolic parameters and endothelial function, four groups of male patients with Coronary Heart Disease and without Diabetes Mellitus (DAC, n= 11); with known Type 2 Diabetes Mellitus and no Coronary Heart Disease (DM, n= 10); and with both Type 2 Diabetes and Coronary Heart Disease (DM+DAC, n = 11) as well as seven healthy controls (Control n = 7) were evaluated before and after receiving a high fat (60g) low carbohydrate (14g) meal test. Lipid profile (basal and 2, 4, 6 and 8 hours after the meal-test) and Vascular reactivity (2, 4 and 8h) were measured. Vascular reactivity was evaluated using high-resolution ultrasound and assessing brachial artery\'s vasodilatory responses during reactive hyperemia (endothelium-dependent vasodilatation), and after nitroglycerin administration, an endotheliumindependent vasodilator. Mean ± SD HbA1c was not significantly by different between groups (DAC: 6.3 ± 0.6% vs DM + DAC: 7.6 ± 1.6% vs DM: 6.8 ± 1,7%) except, as expected in the Control (5.43 ± 0.45%). Furthermore, fasting plasma glucose and insulin were significantly lower in the DAC and Control being however similar in both groups. DAC group had significant by higher uric acid levels than the other three groups (p = 0.025). Post-ischemia brachial artery vasodilation was similar among groups before lipid overload (DAC: 7.44 ± 4.30% vs 7.01 ± 4.53% no DM vs 10.34 ± 5.10% no DM+DAC vs 9.91 ± 2.97% in the Control). Basal change in the brachial artery diameter after sublingual nitrate, performed the day before the fat test, was also within the accepted normal range in all four groups, with no difference in between them (DAC: 19.85 ± 8.66% vs 15.68 ± 11.43 in DM vs 21.24 ± 11.82% in DM+DAC and 20.05 ± 3.73% in the Control). Homeostasis Model for Assessment of insulin sensitivity (HOMAIR) increased significantly and progressively from DAC to DM and to DM+DAC groups, however being significantly lower in the Control. After the fat overload test all four groups had a major increase in triglyceride levels peaking at 4h and 6h after the ingestion (p<0.001) for four groups for 2h, 4h, 6h and 8h vs 0h). Total cholesterol had a increase at all times of sampling (p < 0.001), while LDL-cholesterol (p < 0.001) and HDL-cholesterol (p = 0.001) decreased after the test-meal. Overall, there were no statistical differences among the four groups regarding post load-lipid profile. Glycemia was statistically lower in DAC and Control versus DM and DM+DAC groups. In DAC and Control glicemia was unchanged during testing, DM and DM+DAC groups had a considerable glycemic decrease at times 4h, 6h and 8h after fat-load (p<0.001, for both groups vs 0h). Insulin behaviors was similar among all four groups all of which showed higher levels at 2h (p<0.001 vs 0h, there being a progressive decrease during the test becoming within the basal range at the 8th hour. Vascular reactivity was similar within the four groups and there was no difference through the different measures after fat-loading. In the diabetic group without coronary hearth disease there was a borderline reduction in vascular reactivity after the fat load (p = 0.0556). Vasodilation after nitroglycerin was comparable among the groups again with no differences in the response before and after fat-loading. In conclusion this study showed than the post-load hyperlipemia in DAC,DM, DM+DAC and Control groups resulted in hyperinsulinemia without hyperglycemia and had no significant effects on vascular reactivity both endothelial dependent (hyperemia reactivity) and independent

Evidências epidemiológicas tem sugerido que a desnutrição intra-uterina pode ter papel importante no desenvolvimento de hipertensão arterial na fase adulta. No presente trabalho, foi estudada a influência da desnutrição intra-uterina na reatividade vascular e na pressão arterial de animais Wistar e SHR (ambos os sexos). Para tanto, ratas prenhes foram submetidas à restrição alimentar equivalente a 50% da dieta normal, durante toda a gestação. Curvas concentração-efeito à noradrenalina (NA), acetilcolina (ACh) e ao nitroprussiato de sódio (NPS) foram realizadas em anéis de aorta de ratos Wistar e SHR nutridos e desnutridos (ambos os sexos). A desnutrição intra-uterina elevou a pressão arterial em animais Wistar, machos e fêmeas, até níveis considerados de hipertensão. Além disso, acarretou alterações da reatividade à NA e à ACh, mas não ao NPS. Em animais SHR, de ambos os sexos, os efeitos deletérios da desnutrição intra-uterina foram capazes de exacerbar a hipertensão e a disfunção endotelial já existentes nesses animais. / Epidemiological studies suggest that intrauterine undernutrition can play an important role in the development of arterial hypertension in adulthood (FERRARI et al., 2000). Furthermore, maternal malnutrition during organ developmental stage impairs fetal growth and is believed to alter permanently the metabolism and physiology of the developing tissues. The aim of the present study was to examine the effects of intrauterine undernutrition in the arterial blood and vascular reactivity pressure of male and female normotensive (Wistar) and spontaneously hypertensive (SHR) rats offspring. Female pregnant rats (Wistar and SHR) were fed either normal or 50% of the normal intake diets, during the whole gestational period. Arterial blood pressure and the norepinephrine (NE), acetylcholine (ACh) and sodium nitroprusside (SNP) dose-response curves in isolated aortic rings of their offspring (male and female – when they reached adulthood) were determined. In Wistar rats, the intrauterine undernutrition induced an increase in the arterial blood pressure, leading to hypertension. Dietary restriction during pregnancy of Wistar rats altered the vascular reactivity to NE and ACh, whereas the response to SNP remained unaltered in the offspring. In the SHR offspring (male and female) the intrauterine undernutrition exacerbates the already existing hypertension and endothelial dysfunction. In summary, this study has shown that intrauterine undernutrition increased the arterial blood pressure and altered the vascular reactivity of male and female normotensive and SHR offspring.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Diabetes mellitus (DM) is presented as a metabolic disorder characterized by chronic hyperglycemia that is associated with endothelial dysfunction (ED). Among the various therapies employed in the improvement of ED, primary prevention, which includes changes in diet and physical training (PT), has been the right one. This study evaluated the effects of resistance training (RT) on vascular reactivity of diabetic rats induced by alloxan. Wistar rats (250-300g) were divided into 3 groups: sedentary control (SC), sedentary diabetic (SD) and diabetic trained with resistance exercise (TD). The TR was performed in a squat aparatus of TAMAKI in 3 sets of 10 repetitions, 3 times a week for 8 weeks. The intensity was set at 40% of the maximum established by the test of one repetition maximum. At the end of the training protocol the animals were sacrificed by exsanguination, and the superior mesenteric artery was removed and sectioned into rings (1-2 mm), which were put into chambers containing 10 mL of Tyrode solution at 37°C and gasified with carbogen. Changes in vascular reactivity to phenylephrine contracturantes agents (PHE) and potassium chloride (KCl) and relaxing, acetylcholine (ACh), sodium nitroprusside (NPS) and pinacidil (PIN) was assessed by obtaining concentration-response curves. It was not observed differences between the potency (pD2) and maximum response (Rmax) of the contractions induced by contract agents in all groups. On the other hand, It was observed a significant (p < 0.05) decrease of Rmax of the relaxation induced by ACh in the SD (79.7 ± 1.4%; n = 6) when compared with SC (98.8 ± 2.0%; n = 6), and an increase in the DT (93.1 ± 2.6%; n = 6), both without changing the pD2. In the presence of L-NAME, the relaxation induced by ACh was significantly (p < 0.05) reduced in SC (from 7.0 ± 0.06 to 5.5 ± 0.1; n = 6) and TD (from 7.0 ± 0.08 to 4.9 ± 0.2; n = 6), but not in SD. Furthermore, it was observed a significant (p < 0.001) increase in the pD2 of SNP in SD (from 7.9 ± 0.08 to 8.3 ± 0.03 compared with SC) and PIN (from 6.2 ± 0.09 to 6.9 ± 0.08 compared with SC). The RT was able to prevent this increase only for PIN (from 6.9 ± 0.08 to 6.3 ± 0.1). These results demonstrate the RT was able to improve the relaxation induced by ACh and to prevent the changes in the sensitivity of the ATP-sensitive potassium channels (KATP) caused by DM. Thus, the RT presents an therapeutic potential in the treatment of vascular complications produced by the DM. / O diabetes mellitus (DM) se apresenta como uma desordem metabólica caracterizada por hiperglicemia crônica que está associada à disfunção endotelial (DE). Dentre as diversas terapêuticas empregadas na melhora da DE, a prevenção primária, que inclui mudanças na dieta alimentar e treinamento físico (TF), tem sido a mais indicada. Este estudo avaliou os efeitos do treinamento resistido (TR) sobre a reatividade vascular de ratos diabéticos induzidos por aloxano. Ratos Wistar (250-300g) foram divididos em 3 grupos: controle sedentário (CS); diabético sedentário (DS) e diabético treinado com exercício resistido (DT). O TR foi realizado no aparelho de agachamento de TAMAKI em 3 séries de 10 repetições, 3 vezes por semana, durante 8 semanas. A intensidade foi definida em 40% da carga máxima estabelecida pelo Teste de uma repetição máxima. Ao final do protocolo de treinamento os animais foram sacrificados por dessangramento, e a artéria mesentérica superior foi removida e seccionada em anéis (1-2 mm), os quais foram montados em cubas contendo 10 mL de solução de Tyrode, a 37°C e gaseificada com carbogênio. As alterações na reatividade vascular para os agentes contracturantes fenilefrina (FEN) e cloreto de potássio (KCl) e relaxantes, acetilcolina (ACh), nitroprussiato de sódio (NPS) e pinacidil (PIN) foram avaliadas através da obtenção de curvas concentração-resposta. Não foram observadas diferenças entre a potência (pD2) e resposta máxima (Rmax) nas contrações induzidas pelos agentes contracturantes em todos os grupos. Por outro lado, foi observado uma redução (p <0,05) significativa da Rmax do relaxamento induzido pela ACh no DS (79,7 ± 1,4%, n = 6) quando comparado com o CS (98,8 ± 2,0%, n = 6 ), e um aumento do DT (93,1 ± 2,6%, n = 6), ambos sem alterar o pD2. Na presença do L-NAME, o relaxamento induzido pela ACh foi significativamente (p <0,05) reduzido em CS (de 7,0 ± 0,06 para 5,5 ± 0,1, n = 6) e DT (de 7,0 ± 0,08 para 4,9 ± 0,2 n; = 6), mas não no DS. Além disso, foi observado um aumento (p <0,001) significativo na pD2 do SNP em DS (7,9 ± 0,08 para 8,3 ± 0,03 comparado com CS) e PIN (de 6,2 ± 0,09 para 6,9 ± 0,08 comparado com CS). O TR foi capaz de evitar esse aumento apenas para PIN (de 6,9 ± 0,08 para 6,3 ± 0,1). Estes resultados demonstram que o TR foi capaz de melhorar o relaxamento induzido pela ACh e impedir as mudanças na sensibilidade dos canais de potássio sensíveis ao ATP (KATP), causada pelo DM. Assim, o TR apresenta um potencial terapêutico no tratamento de complicações vasculares produzidas pelo DM.

PEREIRA, A.C. Mecanismos celulares que influenciam a sinalização por 1-adrenoceptores na carótida contra-lateral à lesão por cateter balão. 2009. 127 f. Tese (Doutorado) - Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2009. Em artérias carótidas de ratos, a lesão provocada pela angioplastia por cateter balão resulta em resposta neurocompensatória na carótida contra-lateral à lesão, com aumento da inervação contendo substância P e CGRP (peptídeo relacionado ao gene da calcitonina), além de alteração de reatividade a agonistas vasoconstritores. O objetivo deste trabalho foi estudar os mecanismos relacionados à alteração de reatividade à fenilefrina (Phe) na carótida contra-lateral à lesão, 1, 2, 4 e 15 dias após a lesão. A análise histológica mostrou que a carótida contra-lateral à lesão é semelhante ao controle. Na artéria ipsi-lateral a camada endotelial estava ausente e, aos 15 dias após a lesão observou-se a presença da neoíntima. Curvas concentração-resposta para Phe (contração) foram realizadas em anéis isolados de carótidas contra-laterais e controles, 1, 2, 4 e 15 dias após a lesão. No quarto dia após a lesão, observou-se aumento no efeito máximo (Emax) da Phe na artéria contralateral em relação ao controle. Para avaliar se o aumento no Emax da Phe estava relacionado à mobilização de cálcio induzida por esse agonista, foi usada solução de Krebs sem cálcio, contendo ou não EGTA e curvas concentração resposta para CaCl2. Observamos que a mobilização de cálcio intracelular induzido pela Phe na contra-lateral não estava alterada em relação ao controle, mas o influxo de cálcio estava reduzido. Este resultado foi confirmado em usando anéis de carótida marcados com Fluo-3AM em microscópio confocal. Na presença de inibidores específicos, observou-se que a isoforma endotelial da enzima óxido nítrico sintase, canais para potássio dependentes de cálcio, prostanóides derivados da COX-2, ânion superóxido e junções do tipo Gap estão envolvidos na redução do influxo de cálcio na contra-lateral. No entanto, não há participação de óxido nítrico, guanilato ciclase ou da Ca-ATPase do retículo. Ânion superóxido, COX-2 e junções do tipo Gap também participam do aumento de Emax da Phe na carótida contra-lateral à lesão. Os resultados sugerem ainda que ânions superóxido promovem aumento da atividade de Rho-kinase na artéria contra-lateral em relação ao controle, conforme observado em curvas de relaxamento com Y-27632 (inibidor de Rho-quinase), após pré-contração com Phe. A potência para Phe e para CaCl2 na contra-lateral foi semelhante ao controle, assim como o relaxamento induzido pela acetilcolina e a contração desencadeada pelo KCl. Os resultados obtidos neste trabalho indicam que a resposta neurocompensatória ao cateter balão resulta em alterações na sinalização celular que interferem na reatividade à Phe na carótida contra-lateral à lesão. Estas alterações são dependentes do endotélio, desencadeadas, provavelmente, por um estresse oxidativo causado por ânions superóxido e sugerem a existência de mecanismos compensatórios para manter o tônus vascular. / In rat carotid arteries, balloon catheter injury results in neurocompensatory response in contralateral carotid, leading to increased levels of substance P and CGRP (calcitonin gene-related peptide), beside alterations in reactiveness to vasoconstrictor agonists. The aim of this work was to study the mechanisms involved in alterations in phenylephrine (Phe) responsiveness in contralateral carotid, 1, 2, 4 and 15 days after injury. Histological analysis showed that contralateral carotid was similar to control. Endothelium was absent in ipsilateral arteries, but 15 days after lesion it was observed the neointima. Concentration-response curves to Phe (contraction) were performed in isolated carotid rings, control and contralateral, 1, 2, 4 and 15 days after lesion. In the fourth day after lesion, it was observed increase in maximum effect (Emax) to Phe in contralateral compared to control arteries. In order to verify if the increase in Emax to Phe was related to calcium mobilization by this agonist, it was used free-calcium Krebs solution containing or not EGTA, and concentration-response curves to CaCl2. It was observed that intracellular calcium mobilization by Phe was similar to control, but calcium influx was reduced in contralateral. Confocal microscopy, using carotid rings loaded with Fluo-3AM, was also utilized to corroborate this result. In presence of specific inhibitors, it was observed that endothelial isoform of nitric oxide synthase, calcium-activated potassium channels, prostanoids from COX-2, superoxide anions and Gap-junctions are involved on reduction of Phe-induced calcium influx. However, neither nitric oxide, guanylate cyclase nor sarcoendoplasmic reticulum Ca-ATPase participate in this response. Superoxide anions, COX-2 and Gap-junctions also play a role on increased Emax to Phe in contralateral carotid. Futhermore, superoxide anions promote increase in Rho-kinase activity in contralateral carotid compared to control, as it was observed in relaxation curves with Y-27632 (Rho-kinase inhibitor), after Phe pre-contraction. Phe and CaCl2 potency in contralateral were similar to control, like acetylcholine relaxation and KCl-induced contraction. Results obtained in this work indicate that the neurocompensatory response to balloon catheter injury leads to alterations in the signaling pathway downstream alpha1-adrenoceptor activation in contralateral carotid. These alterations are endothelium dependent and, probably, triggered by oxidative stress due to superoxide anions. Taken together, data suggest the existence of compensatory mechanisms to maintain the vascular tonus.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Diabetes mellitus (DM) can be defined as a heterogeneous group of metabolic disorders characterized by hyperglycemia, resulting in dysfunction, ultimately, failure of various organs, especially the eyes, kidneys, nerves and vascular system. This study aimed to evaluate the effects of L-arginine (L-Arg), resistance exercise (RE) and the association between them on changes of endothelium-derived relaxing factor (EDRF) in isolated rings of superior mesenteric artery of diabetic rats induced by alloxan. Wistar rats (250-300g) were divided into 7 groups: Control (CON, n = 4), Electrically Stimulated (ES, n = 4), Trained Control (TC, n = 4), Sedentary Diabetic (SD, n = 5), L-arginine Diabetic (L-Arg + D, n = 5), Trained Diabetic (TD, n = 5) and L-arginine + Trained Diabetic (L-Arg + TD, n = 5). The animals diabetic groups received alloxan 2 weeks before the start of treatment protocols. The RE protocol consisted of 3 sets of 10 squats (Tamaki apparatus) with an intensity of 50% of one repetition maximum (1RM). Animals treated with L-Arg received 1.25 mg/ml daily in drinking water. At the end of 8 weeks, vessel relaxation endothelium-dependent was obtained in rings pre-contracted with L-phenylephrine (Phe, 10 mM) by addition of increasing concentrations and cumulative acetylcholine (ACh, 10-9 10-4 M). After this, concentration-response curves were constructed in control conditions or in the presence of inhibitors of nitric oxide sintetase (L-NAME), cyclo-oxygenase (INDO) and potassium channels blockers (TEA). The vessel relaxation induced by 10 ACh showed a significant reduction (p < 0.05) in the maximum response (Rmax) of SD compared with CON. Furthermore, we observed a significant reduction (p < 0.001) in sensitivity (pD2) (6.8 ± 0.12 to 6.2 ± 0.11) of L-Arg + D compared with the SD. In the presence of L-NAME the L-Arg + D showed a reduction (p < 0.001) of vessel relaxation compared to the SD. After addition of L-NAME + INDO, the LArg + TD showed a significant reduction (p < 0.001) in vessel relaxation compared with the SD. The presence of L-NAME + INDO + TEA, the TD and L-Arg + TD showed a significant reduction (p <0.001) of vessel relaxation compared with the SD. The results show that although there was no improvement in vessel relaxation induced by ACh, we observed a change in the participation of EDRF in all groups. / O diabetes mellitus (DM) pode ser definido como um grupo heterogêneo de distúrbios metabólicos caracterizados pela hiperglicemia, resultando em disfunção, e última instância, insuficiência de vários órgãos, especialmente dos olhos, rins, nervos e sistema vascular. O presente estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da Larginina (L-Arg), do exercício resistido (ER) e da associação entre L-Arg e o ER sobre as alterações dos fatores relaxantes derivados do endotélio (EDRFs) em anéis isolados da artéria mesentérica superior de ratos diabéticos induzidos por aloxano. Ratos Wistar (250-300g) foram divididos em 7 grupos: Controle (CON, n = 4), Estimulado Eletricamente (EE, n = 4), Controle Treinado (CT, n = 4), Diabético Sedentário (DS, n = 5), Diabético L-arginina (DL-Arg, n = 5), Diabético Treinado (DT, n = 5) e grupo Diabético Treinado + L-arginina (DT + L-Arg, n = 5). Os animais dos grupos diabéticos receberam aloxano 2 semanas antes do início dos protocolos de tratamento. O protocolo de ER consistiu em 3 séries de 10 agachamentos (no aparelho de Tamaki) com uma intensidade de 50% de uma repetição máxima (1RM). Os animais tratados com L-Arg receberam 1,25 mg/ml diariamente na água de beber. No final de 8 semanas, o vasorrelaxamento dependente de endotélio foi obtido em anéis pré-contraídos com L-fenilefrina (FEN, 10 μM) pela adição à cuba de concentrações crescentes e cumulativas de acetilcolina (ACh, 10-9 10-4 M). Após isto, curvas concentração-respostas foram construídas na condição controle ou na presença dos inibidores da síntese do óxido nítrico (LNAME), da ciclo-oxigenase (INDO) e dos canais para potássio (TEA). Os vasorrelaxamentos induzidos por ACh apresentaram uma redução significativa (p < 0,05) na resposta máxima (Rmax) do DS comparado com o CON. Além disso, foi observado uma redução significativa (p < 0,001) da sensibilidade (pD2) (de 6,8 ± 0,12 para 6,2 ± 0,11) do DL-Arg quando comparado com o DS. Na presença do LNAME o DL-Arg apresentou uma redução (p < 0,001) dos vasorrelaxamentos 8 quando comparado com o DS. Após adição de L-NAME + INDO, o DT + L-Arg apresentou uma redução significativa (p < 0,001) nos vasorrelaxamentos quando comparado com o DS. Já na presença de L-NAME + INDO + TEA, o DT e DT + LArg apresentaram uma redução significativa (p < 0,001) dos vasorrelaxamentos quando comparados com o DS. Os resultados demonstram que apesar de não haver melhora nos vasorrelaxamentos induzidos por ACh, foi observado uma modificação na participação dos EDRFs em todos os grupos.

Evidências epidemiológicas tem sugerido que a desnutrição intra-uterina pode ter papel importante no desenvolvimento de hipertensão arterial na fase adulta. No presente trabalho, foi estudada a influência da desnutrição intra-uterina na reatividade vascular e na pressão arterial de animais Wistar e SHR (ambos os sexos). Para tanto, ratas prenhes foram submetidas à restrição alimentar equivalente a 50% da dieta normal, durante toda a gestação. Curvas concentração-efeito à noradrenalina (NA), acetilcolina (ACh) e ao nitroprussiato de sódio (NPS) foram realizadas em anéis de aorta de ratos Wistar e SHR nutridos e desnutridos (ambos os sexos). A desnutrição intra-uterina elevou a pressão arterial em animais Wistar, machos e fêmeas, até níveis considerados de hipertensão. Além disso, acarretou alterações da reatividade à NA e à ACh, mas não ao NPS. Em animais SHR, de ambos os sexos, os efeitos deletérios da desnutrição intra-uterina foram capazes de exacerbar a hipertensão e a disfunção endotelial já existentes nesses animais. / Epidemiological studies suggest that intrauterine undernutrition can play an important role in the development of arterial hypertension in adulthood (FERRARI et al., 2000). Furthermore, maternal malnutrition during organ developmental stage impairs fetal growth and is believed to alter permanently the metabolism and physiology of the developing tissues. The aim of the present study was to examine the effects of intrauterine undernutrition in the arterial blood and vascular reactivity pressure of male and female normotensive (Wistar) and spontaneously hypertensive (SHR) rats offspring. Female pregnant rats (Wistar and SHR) were fed either normal or 50% of the normal intake diets, during the whole gestational period. Arterial blood pressure and the norepinephrine (NE), acetylcholine (ACh) and sodium nitroprusside (SNP) dose-response curves in isolated aortic rings of their offspring (male and female – when they reached adulthood) were determined. In Wistar rats, the intrauterine undernutrition induced an increase in the arterial blood pressure, leading to hypertension. Dietary restriction during pregnancy of Wistar rats altered the vascular reactivity to NE and ACh, whereas the response to SNP remained unaltered in the offspring. In the SHR offspring (male and female) the intrauterine undernutrition exacerbates the already existing hypertension and endothelial dysfunction. In summary, this study has shown that intrauterine undernutrition increased the arterial blood pressure and altered the vascular reactivity of male and female normotensive and SHR offspring.

Trinta dias após a indução do diabetes, em aortas com endotélio (E+) de ratas diabéticas (DB), a Rmáx ao cloreto de potássio (KCl) foi reduzida e a resposta à noradrenalina (NA) foi semelhante as controles (CT). A retirada do endotélio (E-) potencializou a resposta ao KCl e NA, porém essa potencialização foi de menor magnitude em DB. A Rmáx à NA em aortas E+: não foi alterada após o seqüestro de ânion superóxido ou inibição da síntese de óxido nítrico (NO) em DB, nas CT esta resposta foi reduzida e aumentada, respectivamente, e foi reduzida apenas nas DB após o bloqueio dos receptores para endotelina (ET). A mobilização de cálcio (Ca2+) em resposta à NA foi reduzida em aorta E+ e E- de DB. Em aortas de ratas diabéticas, as alterações no aparato contrátil, como por exemplo. A redução da mobilização de Ca2+, podem ser responsáveis pela redução da resposta contrátil e a redução da modulação do NO sobre a resposta à NA ou o aumento da liberação de ET pelo endotélio podem ser os responsáveis pela manutenção da resposta à NA. / Thirty days after induction of diabetes, in aortas with endothelium (E+) of diabetic female rats (DB), the maximum response (Rmax) to potassium chloride (KCl) was reduced and the Rmax to noradrenaline (NE) was similar to controls (CT). The endothelium (E-) removal increased the response to KCl and NE, but this increase was of a lower magnitude in DB than in CT. In aortas E+, the Rmax to NA: was not altered by superoxide anion scavenger or nitric oxide (NO) synthesis inhibition in DB, whereas in CT this response is reduced or increased, respectively, and was reduced only in DB after endothelin (ET) receptor blockade. The mobilization of the calcium (Ca2+) in response to NE was reduced in aortas E+ and E- of the DB. In aortas of DB, the alterations in the contractile apparatus, for example, reduction of the Ca2+ mobilization may be responsible for the reduction of the vasoconstriction. The reduction of NO modulation upon the response to NE or the increase of the ET release can be the responsible for the maintenance of the contractile response to NE.