O objetivo deste estudo foi de tentar isolar e cultivar células da polpa de dentes decíduos humanos hígidos com diferentes graus de rizólise e avaliá-las após a expansão in vitro para parâmetros apresentados por células-tronco. Para tanto, o tecido pulpar foi obtido a partir de 30 dentes de crianças de 6 a 12 anos. A exodontia dos dentes foi indicada pelo cirurgião-dentista responsável pelo tratamento da criança. Os responsáveis pelos pacientes assinaram um termo de doação de material biológico aprovado pelo comitê de ética da UFRGS. Do total de dentes, 21 estavam em processo avançado de rizólise (grupo I), sendo que 17 possuíam raiz totalmente reabsorvida e 4 apresentavam cerca de de raiz residual. Os 9 dentes restantes não apresentavam reabsorção visível (grupo II). Todos os dentes extraídos foram imersos em meio de cultura para o transporte ao laboratório. Na capela de fluxo laminar, o tecido pulpar foi removido e incubado com colagenase tipo I e submetido a dissociação mecânica. A suspensão obtida foi semeada em placa de 12 poços e o meio de cultura trocado após 24 horas e após a cada 4 dias até a confluência de 90% ser atingida, quando eram realizadas as passagens. Na quinta e décima passagens, as células foram avaliadas pela citometria de fluxo quanto a seu fenótipo para CD29, CD34, CD44, CD45, CD90, CD117, CD133, CD146, CD184, STRO-1 e HLA-DR e para determinar a presença/ausência da expressão gênica de OCT4, por meio de RT-PCR. Nas mesmas passagens, as células foram submetidas a avaliação do seu crescimento in vitro e foram induzidas à diferenciação adipogênica, osteogênica e condrogênica. O isolamento das células foi considerado com sucesso em 25 amostras nas quais células aderidas foram verificadas após 24h. Apenas 17 destas atingiram confluência de 90%. Não foi possível estabelecer cultura do grupo II (n=9). O estabelecimento das culturas e a capacidade de proliferação foram independentes da quantidade de tecido pulpar remanescente coletado. As células nas quinta e décima passagens foram positivas para CD29, CD44 e CD90 (>95%) e para a expressão gênica de OCT-4. Positividade moderada foi vista para CD117 e CD133 e expressão inferior a 3% para CD34, CD45, HLA-DR, CD184 e STRO-1 em todas as análises. Foi pequena também, a marcação de CD146. O CD146 está relacionado com as células-tronco localizadas nos pericitos, sendo descrito como possível nicho das células-tronco pulpares. Todas as culturas foram capazes de diferenciação nas 3 linhagens celulares citadas. Portanto, as células isoladas eram células-tronco, pois foram aderentes ao plástico, positivas para marcadores característicos de células-tronco mesenquimais e pluripotentes. Considerando os baixos níveis de expressão de CD146, nós podemos sugerir que o nicho perivascular não é o único provedor das células-tronco pulpares. A facilidade de obtenção das células parece estar ligada ao processo de rizólise, visto que as células do tecido pulpar do grupo I apresentaram-se capazes de proliferação in vitro, enquanto que no grupo II esta não foi suficiente para permitir o estabelecimento das culturas. / The aim of this study was to isolate and grow cells from the pulp of human sound deciduous teeth with different levels of resorption, and evaluate stem cell parameters after growing them in vitro. Pulp tissue was removed from 30 different patients, aged from 6 to 12. A free informed term of consent was signed by the patient’s next of kin, approved by UFRGS’s Ethical Committee. From all the teeth, 21 were in advanced levels of resorption (group I): 17 had completely reabsorbed roots and 4 had ⅓ of residual roots. The 9 teeth left did not show any visible re-absorption (group II). The teeth were immersed in culture medium to be transported to the lab. In aseptic conditions, pulp tissue was removed, incubated with type I collagenase and mechanically dissociated. The suspension was seeded onto 12 well plates and the medium was changed every 4 days until the culture reached 90% confluence, when a passage was performed. The phenotype of the cells was analyzed on fifth and tenth passages, by flow cytometry for the following markers: CD29, CD34, CD44, CD45, CD90, CD117, CD133, CD146, CD184, STRO-1 and HLA-DR; and RT-PCR for OCT-4. On the same passages, cells were differentiated into adipocytes, osteoblasts and chondrocytes. Cell isolation was successful in 25 samples, where adherent cells were observed after 24h. Only 17 of these samples reached 90% confluence. It was not possible to establish cell culture from group II teeth (n=9). Cell growth and ability to proliferate in vitro were not dependent on the amount of pulp tissue that was collected. Cells on both fifth and tenth passages were positive for CD29, CD44 and CD90 (>95%) and also for the expression of OCT-4. Moderate labelling was observed for CD117 and CD133, while an expression lower than 3% for CD34, CD45, HLA-DR, CD 184 and STRO-1 was detected. Low amounts of CD146 were found in all analysis. CD146 is related to pericytes stem cells and therefore can be pulp stem cells niche. All cultures were able differentiate into all 3 cell types. According to these findings, the isolated pulp cells can be considered stem cells: they were adherent to plastic, positive for stem cell related markers and pluripotent. Considering the cells expressed low levels of CD146, we can infer that the perivascular niche isn’t the only source of pulpar stem cells. The easiness to obtain cells seems to be related to the root resorption process, because the cells from group I were able to proliferate in vitro, while group II cells were not.

Orientadores: Pedro Luiz Rosalen, Gilson Cesar Nobre Franco / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-17T12:39:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_LucianaSallesBrancode_D.pdf: 18183834 bytes, checksum: 7e68ca8a08aa330701eecf3a55349a69 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A fluoxetina é um droga inibidora seletiva da recaptação de serotonina que apresenta propriedades imunomoduladoras e antiinflamatórias. O objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos da fluoxetina sobre a resposta imuno-inflamatória relacionada à doença periodontal (DP). In vitro, avaliou-se a influência da fluoxetina sobre a capacidade das células dendríticas (DCs) em apresentar antígeno aos linfócitos T. As DCs foram obtidas da medula óssea de camundongos C57BL/6 e diferenciadas utilizando-se GM-CSF (20 ng/mL). As DCs foram tratadas com a fluoxetina (concentrações: 0,01, 0,1 ou 1 ?M) para análise da produção de citocinas e quimiocinas, bem como da expressão de MHC-II e moléculas co-estimuladoras (CD80, CD86, PD-L1, ICOS-L) aos linfócitos T, utilizando-se ensaios de ELISA e citometria de fluxo respectivamente. Culturas de DCs e linfócitos T reativos ao Aggregatibacter actinomycetemcomitans (×Aa-T) foram utilizadas para avaliação de proliferação/ativação de linfócitos T. A desipramina, um inibidor seletivo da recaptação de norepinefrina, também foi incluída nos ensaios in vitro para comparação. In vivo, avaliou-se os efeitos da fluoxetina sobre a resposta inflamatória e a destruição tecidual utilizando-se modelo de DP induzida por ligadura. Ratos Wistar machos (SPF) foram submetidos à colocação de ligadura em torno dos primeiros molares inferiores e divididos em 3 grupos experimentais (n=10 animais/grupo): 1) ratos sem ligadura e sem tratamento (grupo controle); 2) ratos com ligadura e tratados com solução salina (grupo ligadura); 3) ratos com ligadura e tratados com a fluoxetina (20 mg/kg/dia, grupo ligadura + fluoxetina). Análises de reabsorção óssea na região de furca (lâminas coradas com H&E) e de colágeno no tecido conjuntivo da mesial dos primeiros molares (coloração de picrosirius) foram realizadas nos ratos submetidos a 15 dias de indução da DP. Tecidos gengivais de ratos submetidos a 3 dias de indução da DP foram submetidos às seguintes análises: expressão de IL-1?, COX-2, MMP-9 e iNOS utilizando-se RT-PCR e atividade da MMP-9 utilizando-se zimografia. Como resultados, a fluoxetina diminuiu a produção de IL-12, IL-1?, TNF-?, RANTES e MIP-1??pelas DCs estimuladas com LPS (P < 0,05, ANOVA, teste t de Student), bem como diminuiu significativamente a expressão de ICOSL. Além disso, reduziu a proliferação de ×Aa-T estimulados com Aa pelas DCs. A serotonina (5- HT) aumentou a proliferação de ×Aa-T, indicando que os efeitos da fluoxetina são independentes da 5-HT. A desipramina apresentou perfil semelhante à fluoxetina nos ensaios in vitro. No estudo in vivo, a fluoxetina reduziu a perda óssea em região de furca quando comparada ao grupo ligadura (P < 0,05 ANOVA, teste t de Student) e manteve a porcentagem de fibras colágenas com níveis similares ao grupo controle (P > 0,05). Ainda, a fluoxetina reduziu a expressão de IL-1??e COX-2 e a atividade da MMP-9 quando comparada ao grupo ligadura (P < 0,05). Em conjunto, os dados demonstram que a fluoxetina diminuiu a capacidade de apresentação de antígeno das DCs, bem como a resposta inflamatória, a reabsorção óssea e a perda de colágeno na DP, indicando que ela pode constituir uma abordagem terapêutica promissora como moduladora da resposta do hospedeiro na DP / Abstract: Fluoxetine is a selective serotonin reuptake inhibitor presenting immunomodulatory and anti-inflammatory properties. The aim of this study was to evaluate the fluoxetine effects on immunoinflammatory response associated with periodontal disease (PD). The in vitro study evaluated the effects of fluoxetine on antigen-presentation capacity of dendritic cells (DCs). Bone marrow DCs obtained from C57BL/6 wild type mice were differentiated using GM-CSF (20 ng/mL). DCs were treated with fluoxetine (concentrations of 0.01, 0.1 or 1 ?M) for subsequent cytokine/chemokine assays (ELISA) and analysis of expression of MHC-class II and co-stimulatory molecules (CD80, CD86, PD-L1, ICOS-L) to T cell activation using flow cytometry. Fluoxetine was also applied to cultures with both DCs and Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)-reactive T cells (×Aa-T), which were used for analysis of T cells proliferation/activation using thymidine and ELISA assays. Desipramine, a selective norepinephrine reuptake inhibitor, was also tested in vitro for comparison to fluoxetine. In vivo, male Wistar rats received ligature placement around mandibular first molars and were randomly assigned into three experimental groups (n=10/group): 1) Control rats (without ligature); 2) rats with ligature + placebo (saline; oral gavage); 3) rats with ligature + fluoxetine (20 mg/kg/day in saline; oral gavage). Histometric and histological analyses were performed for measurement of loss of bone in furcation region (H&E stain) and collagen fibers (picrosirius red stain) in the connective tissue of rats submitted to 15 days of PD induction. Gingival tissues were collected from animals submitted to 3 days of PD induction for analyses of mRNA expression of IL-1?, COX-2, MMP-9 and iNOS using RT-PCR, measurement of total protein concentration and MMP-9 activity using zymogram. Fluoxetine suppressed IL 12, IL-1?, TNF-?, RANTES and MIP-1??production by LPS-stimulated DCs (P < 0.05, ANOVA, Student's t test), as well as significantly reduced the expression of ICOS-L. Fluoxetine suppressed the proliferation of ×Aa-T stimulated with Aa-antigen presentation by DCs from co-cultures. When applied to ×Aa-T/DCs co-cultures, serotonin (5-HT) increased T cell proliferation, indicating that fluoxetine effects are independent of 5-HT. Desipramine effects were similar to those of fluoxetine. In the in vivo study, fluoxetine reduced alveolar bone loss as compared to ligature group (P < 0.05, ANOVA, Student's t test) and maintained collagen fibers levels similarly to control group (P > 0.05). Fluoxetine reduced IL-1??and COX-2 expression, as well as MMP-9 activity, from gingival tissues when compared to ligature group (P < 0.05). Altogether, data showed that fluoxetine can modulate the antigenpresentation capacity of DCs and reduce inflammatory response and loss of bone and collagen associated with PD. In conclusion, fluoxetine can modulate both immune and inflammatory responses on PD, suggesting that it may constitute a new therapeutic approach for modulation of host response in periodontal therapy / Doutorado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Doutor em Odontologia

Orientador: Reginaldo Bruno Gonçalves / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-05T08:24:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Napimoga_MarceloHenrique_D.pdf: 980827 bytes, checksum: d6e89bf1b359918d8c502f0a7367d2c1 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Porphyromonas gingivalis (Pg) sintetiza diversas classes de fosfolipídeos. Entretanto, pouco se sabe sobre os efeitos biológicos que estes lipídeos exercem sobre a reabsorção óssea. Células precursoras de osteoclastos de camundongos, incluindo RAW264.7 e células da medula óssea, foram estimuladas com um lipídeo recém caracterizado isolado de Pg (F24), LPS de Pg, RANKL e um isômero estrutural isolado de mamíferos (DMPE), seguida de coloração das células por fosfatase ácida (TRAP) para detecção de osteoclastos. A formação de lacunas de reabsorção em discos de dentina foi realizados para identificar a presença de osteoclastos maduros. Proteínas de células precursoras RAW264.7 com afinidade a F24 foram identificadas como sendo nucleolin através de espectometria de massa, e confirmada sua presença através de ensaio em microscopia confocal. Utilizando Western-blot e RNAi, a sinalização intracelular desencadeada pela F24 durante a osteoclastogênese foi analisada. A F24 mas não o LPS ou DMPE induziu números significantemente maiores de células multinucleadas TRAP+ quando comparado ao RANKL, assim como a formação de lacunas de desmineralização em discos de dentina, o qual não foi inibida pelo repressor do RANKL, a OPG. LPS de Pg, mas não a F24, induziu a produção de TNF-a, IL-1ß e IL-6 pelas células RAW264.7. Microscopia confocal mostrou que a F24 está co-localizada com este receptor na superfície de células RAW264.7. A F24 induziu a fosforilação de maior intensidade do p38 e JNK comparado ao RANKL. Este novo fosfolipídeo isolado de P. gingivalis, distinto do LPS, mostrou-se capaz de induzir osteoclastogênese utilizando nucleolin como a molécula receptora através de uma via independente do RANK / Abstract: Porphyromonas gingivalis (Pg) synthesizes several classes of complex phospholipids in addition to LPS. However, little is known about the biological effects of these phospholipids on bone resorption. Mouse osteoclast precursors cells including, RAW264.7 and bone marrow cells, were stimulated with phospholipids isolated from Pg (F24), Pg LPS, RANKL and a mammalian structural isomer (DMPE). Tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) staining and a dentine-pit formation assay were used for the identification of activated mature osteoclasts. F24¿s counter-ligand expressed on RAW264.7 cells were identified by affinity purification and mass-spectrometry based proteomics, and counter-examined by a confocal microscopy. Using Western-blot, signaling pathways triggered by F24 during osteoclastogenesis were examined with RNAi technology. F24, but not LPS or DMPE, induced significantly higher number of TRAP+ multinuclear cells from osteoclast precursors than RANKL, along with dentine-pit formation, which was not inhibited by RANKL decoy receptor OPG. Pg LPS, but not F24, induced TNF-a, IL-1ß and IL-6 by RAW264.7 cells. Proteomics analyses identified nucleolin as a ligand for F24. Confocal microscopy revealed the co-localization of F24 and its ligand on the surface of RAW264.7 cells. F24 induced stronger phosphorylation of p38 MAP kinase than RANKL. A novel P. gingivalis phospholipid that is distinct from LPS represents a new class of RANK-independent osteoclast differentiation factor / Doutorado / Microbiologia e Imunologia / Doutor em Biologia Buco-Dental

O receptor NLRP12 é um receptor intracelular que está envolvido no reconhecimento de PAMPs e DAMPs durante uma infecção. Foi visto que durante a osteoclastogênese, há uma diminuição da transcrição de NLRP12, e que este receptor inibe a reabsorção óssea através da supressão da via alternativa de NF-&kappa;B, exercendo um papel protetor sobre o tecido ósseo. Além disso, foi observado que a deficiência de NLRP12 em monócitos sob o estímulo de RANKL levou a maior estabilização de NIK e maior translocação de RelB para o núcleo, aumentando a formação dos osteoclastos in vitro. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar o papel de NLRP12 no desenvolvimento e progressão da lesão periapical induzida em camundongos. Para isso, foi induzida a lesão periapical dos primeiros molares inferiores dos camundongos fêmeas C57/Bl6 (WT) e camundongos deficientes para o receptor NLRP12 (Nlrp12-/-). Após 14 e 21 dias, as amostras de mandíbula foram submetidas às análises: determinação da área de lesão periapical em cortes histológicos; expressão gênica de marcadores osteoclastogênicos por qPCR; contagem de osteoclastos submetidos ao ensaio de histoenzimologia (TRAP); avaliação enzimática das MMPs por Zimografia. Os linfonodos cervicais foram submetidos à análise da expressão dos fatores de transcrição T-bet, ROR&gamma;t, GATA-3 e Foxp-3 por qPCR. Aos 14 dias, na análise histomorfométrica os animais Nlrp12-/- apresentaram uma maior lesão periapical quando comparados aos animais WT, associado com o aumento da expressão de Trap, Catepsina K e MMP-9 em amostras de hemi-mandíbulas com lesão. Além disso, o número de células TRAP positivas foi significantemente maior em Nlrp12-/- com lesão quando comparado com seu controle, enquanto no grupo WT com e sem lesão foram semelhantes. Assim como foi observado o maior aumento dos osteoclastos presentes no local da lesão dos animais Nlrp12-/-, estes também se mostraram com maior atividade gelatinolítica de MMP-9 e MMP-2 em relação ao seu controle, diferente dos animais WT que não apresentaram diferença entre os grupos controle e com lesão. Ainda nesse período, foi observado nas amostras de linfonodos cervicais que, no grupo Nlrp12-/- houve uma tendência à maior expressão de ROR&gamma;t, seguidos de menor expressão de T-bet quando comparados com o grupo WT. Aos 21 dias, os animais WT e Nlrp12-/- apresentaram lesões periapicais de tamanhos semelhantes. Além disso, somente o grupo Nlrp12-/- com lesão apresentou um aumento significativo da expressão de Trap em relação ao seu controle e a expressão de Catepsina K foi semelhante em ambos os grupos. Neste período houve um aumento na quantidade de células TRAP positivas em ambos os grupos com lesão quando comparados com seus respectivos controles, entretanto também não houve diferença entre os animais WT e Nlrp12-/-. A atividade de MMP-9 e MMP-2 foram semelhantes entre os animais WT e Nlrp12-/- e entre seus respectivos controles aos 21 dias. Nossos dados sugerem que a deficiência de NLRP12 levou a uma maior perda óssea aos 14 dias de lesão periapical e que isso ocorre via modulação da formação e atividade dos osteoclastos. Portanto, o NLRP12 inibe a osteoclastogênese e a atividade dos osteoclastos durante a fase inicial da lesão periapical, retardando o desenvolvimento da doença. / NLRP12 is an intracellular sensor that recongnizes PAMPS and DAMPs during infeccion. It was seen that NLRP12 transcription is down-regulated during osteoclastogenesis, and NLRP12 protect bone via suppression of alternative NF-&kappa;B-induced osteoclastogenesis. It has been shown that NLRP12 deficiency in monocytes under RANKL stimuli exhibited more stabilization of NIK and nuclear translocation of RelB, increasing osteoclasts formation in vitro. Therefore, the aim of this study was to evaluate the role of NLRP12 in the development and progression of experimentally induced periapical lesions in mice. Periapical lesions were induced in first molars of WT and NLRP12 knockout (KO) mice. Samples were collected at 14 and 21 days of the lesion for the analyses. Jaw samples with lesion and control area were subjected to periapical lesions area determination by histological sections; osteoclastogenic markers expression by q-PCR; count of osteoclasts submitted to the enzyme assay for TRAP; evaluation of MMPs activity by Zymography. The expression of T cells markers´ transcription factors was evaluated in lymph nodes by q-PCR. Fourteen days after periapical lesion induction, histological analysis revealed that NLRP12KO mice exhibited higher area of periapical lesion compared to WT group, which was associated with up-regulated mRNA expression of Trap, Cathepsin K and MMP-9 in the jaw samples. Moreover, the number of multinuclear TRAP-stained cells was significantly higher in the NLRP12KO with lesion group when compared to it control, whereas in the WT the number between the lesion and control groups were similar. Still, NLRP12KO showed higher MMP-9 and -2 gelatinolytic activity than it control, unlike WT mice that showed no difference between control and lesion group. In this period, NLRP12KO mice lymph nodes showed more ROR&gamma;t expression than WT mice and less T-bet expression. At 21 days, WT and NLRP12KO presented periapical lesions of similar sizes. In addition, NLRP12KO group with lesion showed a significant increase in Trap expression when compared with their control, but the increase in Trap e Cathepsin K was similar in both groups. Additionally, there was an increase of multinuclear TRAP-stained cells in both lesion groups when compared with their respective controls; however, there was also no difference between WT and NLRP12KO mice. MMP-9 and -2 activity was similar between WT and NLRP12KO and with their respective controls at 21 days. Our results suggest that NLRP12 deficiency led to increased bone loss at 14 days of periapical lesion and it occurs due to increased osteoclasts formation and activity. Therefore, NLRP12 inhibits osteoclastogenesis and osteoclasts activity during the early stages of periapical lesion, slowing the development of the disease.

Objetivo: Avaliar por meio da análise histométrica os efeitos da irradiação com laser de diodo de alta potência em superfícies radiculares de dentes de ratos, reimplantados tardiamente. Método: Foram utilizados sessenta ratos Wistar, os quais, após a extração, permaneceram em meio ambiente a seco durante sessenta minutos. Por via retrógrada, foi realizada a remoção da papila dental, pulpectomia, preparo e preenchimento dos canais radiculares com pasta de hidróxido de cálcio. Em seguida, de acordo com o tratamento da superfície radicular realizado antes do reimplante, os espécimes foram divididos em quatro grupos (n=15): G1 (controle negativo)- sem tratamento da superfície radicular; G2 (controle positivo)- solução de fluoreto de sódio a 2%; G3 - irradiação com laser diodo de alta potência (810nm, modo contínuo, fibra óptica de 600&#956;m, 1.5W input, 30s) e G4- irradiação com laser diodo nos mesmos parâmetros do grupo G3, mas no modo pulsado.Transcorridos os períodos de 15, trinta e sessenta dias do reimplante, os animais foram mortos, as peças obtidas e processadas em laboratório e, por meio da análise histométrica, foram calculadas para cada grupo a média em porcentagem das áreas de reabsorção radicular. Resultados: Em todos os períodos experimentais, as médias em porcentagem das áreas de reabsorção foram em ordem decrescente:G1>G2>G4>G3. Os grupos irradiados com laser de diodo (G3 eG4) obtiveram as menores médias e não diferiram estatisticamente entre si. As reabsorções substitutivas e anquilose só foram observadas nos períodos experimentais de trinta e sessenta dias. Tais eventos não foram notados no grupo G3. Conclusões: O condicionamento das superfícies radiculares com laser de diodo de alta potência, previamente ao reimplante tardio, nos parâmetros utilizados neste estudo, reduziu a prevalência de reabsorção radicular externa. No modo contínuo, inibiu o aparecimento de reabsorção substitutiva e anquilose. / Aim: The aim of this study was to evaluate by histometric analysis, the effects of high potency diode laser irradiation in root surfaces of delayed replanted rat teeth. Methods: Sixty Wistar rats were extracted and left on the bench for sixty minutes. Thereafter, the dental papilla was sectioned for pulp removal by a retrograde way, the root canal was prepared and filled with calcium hydroxide paste (Calen). According to the root surface treatment before the replantation, the teeth were assigned to four groups(n=15): G1 (negative control) no root surface treatment; G2 (positive control)- treated with 2% sodium fluoride solution; G3- irradiated with high potency diode laser(810nm), continuous mode, optic fiber 600&#956;m, 1.5W input, 30s) and G4- - irradiated with high potency diode laser in the same parameters of G3, but in pulsed mode. The rats were killed by anesthetic overdose 15, thirty and sixty days after replantation and the specimens were processed in laboratory for histometric analysis. It was calculated the mean (%) of the root resorption areas for each group. Results: In all experimental periods, the root resorption percentage mean was in decreasing order: G1>G2>G4>G3.The diode laser irradiated groups (G3 and G4) presented the least means and there was no statistical difference between them. Replacement resorption and ankylosis were observed only at periods of thirty and sixty days, but in G3 such events were not observed. Conclusions: The root surface treatment with high potency diode laser irradiation before delayed replantation, in the parameters used in this study, reduced external root resorption prevalence. In continuous mode, it inhibited replacement resorption and ankylosis emergence.

O objetivo do presente estudo foi comparar a eficácia da implantação de biomateriais porosos na neoformação óssea e reparo de defeitos cervicais mandibulares em cães, com ou sem a técnica de regeneração óssea guiada (ROG). Bio-Oss Block® (BB), Bio-Oss Collagen® (BC), Bio-Oss® em grânulos (BG), osso autógeno (Ab) e coágulo (Cg) foram utilizados nas mesmas situações experimentais. Para o grupo com membrana foi utilizado o BioGide®. Doze cães foram submetidos a extrações dos pré-molares e primeiros molares mandibulares bilateralmente. Quatro meses após cinco defeitos ósseos (6 mm de diâmetro/4 mm de profundidade) foram confeccionados em um lado. Implantes de 3,3 x 10 mm foram instalados na mesial de cada defeito, proporcionando um \"gap\" distal de 2,7 mm. Os defeitos foram aleatoriamente preenchidos com Ab, Cg, BB, BC e BG. Os mesmos procedimentos foram executados no lado oposto após oito semanas. A membrana foi utilizada para recobrir os defeitos em metade dos lados. Os animais foram sacrificados após oito semanas. A estabilidade dos implantes foi aferida pelo Osstell Mentor®, na instalação do implante e no sacrifício. Os espécimes (n=60, sendo 3 de cada grupo) foram escaneados em micro-tomógrafo Skyscan® 1172. Após aquisição das imagens, o volume de interesse de 3,0 x 6,0 x 4,0 mm foi estabelecido e os parâmetros relativos à formação óssea foram avaliados. Todos os biomateriais foram escaneados in vitro para avaliação da porosidade. Utilizando a técnica de cortes por desgaste, lâminas histológicas foram confeccionadas para a avaliação histológica e histométrica de cada espécimen. As análises histométricas revelaram que o BC apresentou formação óssea semelhante ao Ab em 8 semanas sem BGd. O Cg mostrou a maior formação óssea entre os tratamentos testados em 16 semanas com BGd, e foi superior ao BB e BG em 8 semanas sem BGd (p<0,05). O BB exibiu pior formação óssea entre os tratamentos (8 e 16 semanas, com ou sem membrana). O BC obteve o melhor desempenho dentre os biomateriais. Todos os biomateriais foram parcialmente reabsorvidos de 8 a 16 semanas, no entanto, o BB foi encontrado em maior quantidade em comparação com os demais biomateriais (p<0,05). Em relação à análise da crista alveolar, o BB apresentou a menor reabsorção entre os tratamentos, com e sem BGd a 8 e 16 semanas (p<0,05). A aplicação da BGd proporcionou maior ISQ em 16 semanas, independentemente do material testado (p<0,05). A análise micro-tomográfica mostrou que quando a BGd não foi utilizada, o BG proporcionou a maior quantidade de osso no interior do defeito, seguido pelo BC (p<0,05). Quando o defeito foi coberto com BGd, o Ab rendeu superior formação óssea (p>0,05). A análise de superfície óssea mostrou valores aumentados em sítios tratados com BG, seguido por BC em 8 semanas sem BGd, e Ab em 8 semanas com BGd (p<0,05). O BC apresentou superfície/volume ósseo superior a 8 (com e sem BGd) e 16 semanas com BGd (p<0,05). O BB apresentou os menores valores em 16 semanas (sem BGd). O Cg em 16 semanas (com BGd) foi o pior entre os tratamentos aplicados (p<0,05). Em relação à espessura trabecular, Ab e BB apresentaram respectivamente valores maior e menor (p<0,05), independente do tempo experimental avaliado ou uso de membrana. A análise da porosidade dos biomateriais revelou que o BG apresentou maiores números, volume e superfície de poros fechados. O BB apresentou maiores valores de volume de poros abertos, porosidade aberta e porosidade total em comparação com os outros materiais. Conclui-se que a implantação de bloco de alta porosidade (BB) falhou em proporcionar maior reparo ósseo no interior do defeito e foi o tratamento que mais reduziu a reabsorção da crista óssea alveolar distal. Biomateriais com menor porosidade (BC e BG) apresentaram superior ou semelhante formação óssea e estabilidade dos implantes em comparação ao osso autógeno. A utilização da técnica de ROG melhorou o padrão de formação óssea em todos os tratamentos e períodos testados e reduziu a presença de tecido mole no interior do defeito. Uma relação inversa entre a porosidade dos biomateriais e a formação óssea in vivo foi observada no modelo experimental adotado. / The aim of this study was to compare the effectiveness of porous biomaterials in bone formation and repair of cervical mandibular defects in dogs, with or without Guided Bone Regeneration (GBR) technique. Bio-Oss Block® (BB), Bio-Oss Collagen® (BC), Bio-Oss® in granules (BG), autogenous bone (Ab) and coagulum (Cg) were used under the same experimental conditions. For the membrane group, BioGide® was used. Twelve dogs underwent bilateral extractions of mandibular premolars and first molars. After four months five bone defects (6 mm long / 4 mm deep) were prepared at one side. Implants of 3.3 x 10 mm were installed on each of mesial defect, providing a distal gap of 2.7 mm. The defects were randomly filled with Ab, Cg, BB, BC and BG. The same procedures were performed in the opposite side after eight weeks. A membrane was used to cover the defects in half of the sides. Animals were sacrificed after eight weeks. Implant stability was measured by Osstell Mentor®, at implant installation and sacrifice. The specimens (n=60, 3 in each group) were scanned in Skyscan® 1172 micro-CT scanner. A volume of interest of 3.0 x 6.0 x 4.0 mm was established and the parameters related to bone formation were evaluated. All used biomaterials were also scanned for in vitro porosity evaluation. Using Exakt® system, ground section of each specimen were prepared for histological and histometric assessment. Histometric analysis revealed that BC presented similar bone formation to Ab in 8 weeks without BGd. Cg showed greater bone formation between treatments at 16 weeks with BGd, and was superior to BG and BB at 8 weeks without BGd (p<0.05). BB exhibited worse bone formation within treatments (8 and 16 weeks, with or without membrane). BC had the best performance among biomaterials. All biomaterials were partially resorbed from 8 to 16 weeks. However, BB was found in greater amounts in comparison with other biomaterials (p<0.05). Regarding the alveolar crest analysis, BB had the lowest resorption between treatments with and without BGd at 8 and 16 weeks (p<0,05). The BGd use promoted higher final ISQ values at 16 weeks, regardless the tested treatment (p<0.05). Micro-CT analysis showed that when BGd was not used, BG yielded the highest amount of bone within the defect, followed by BC (p<0.05). When the defect was covered with BGd, Ab yielded higher bone formation (p>0.05). Bone surface area analysis showed that increased values in sites treated with BG, followed by BC without BGd at 8 weeks, and Ab at 8 weeks with BGd (p<0.05). The BC presented greater Bone Surface Area/Bone volume at 8 (with and without BGd) and 16 weeks with BGd (p<0.05). BB had the lowest values at 16 weeks (without BGd). Cg presented the worst performance among treatments at 16 weeks (with BGd) (p<0.05). Regarding the Trabecular Thickness, Ab and BB showed the highest and lowest values, respectively (p<0.05), regardless of the time point or membrane use. In biomaterials porosity analysis, BG showed higher numbers, volume, and surface area of closed pores. BB had the highest volume of open pores, open porosity and total porosity compared with the other treatments. It can be concluded the use of a high porosity block (BB) failed to provide greater bone formation within the defect area and it was the treatment that better reduced distal alveolar crest resorption. Biomaterials with lower porosity (BC and BG) showed higher or similar bone formation and implant stability if compared to autogenous bone. The appliance of BGd improved bone formation in all treatments and tested periods and reduced soft tissue presence within the defect. An inverse relationship between biomaterials\' in vitro porosity and in vivo bone formation was observed in the experimental model used.

Na gravidez, a deficiência de cálcio tem sido associada a complicações como pré-eclâmpsia, hiperparatireoidismo, osteoporose e desnutrição, o que aumenta a frequência de crianças pré-termo, de baixo peso e pequenas para a idade gestacional (PIG). Este estudo teve como objetivo avaliar o estado nutricional de cálcio em gestantes no terceiro trimestre gestacional, utilizando como parâmetros a ingestão dietética, o cálcio urinário e o telepeptídio carboxiterminal do colágeno (CTx) no plasma. Cinquenta e duas gestantes foram selecionadas no Serviço de Obstetrícia do HU-USP. As participantes responderam um registro alimentar (3 dias) e um recordatório de 24h. Para a análise dos alimentos consumidos foi utilizado o software Nutriquanti (GALANTE & COLLI, 2007). Verificou-se a distribuição normal da ingestão de cálcio e ajustaram-se os dados pela energia de acordo com o método do nutriente residual, posteriormente corrigidos pela variabilidade intrapessoal e interpessoal. Só uma gestante teve ingestão maior do que a AI (1.000 mg/d), sendo, portanto, a única que teve ingestão de Ca adequada, segundo a referência AI. Por outro lado, considerando o CTx (não aumentado em relação ao Intervalo de Referência), e considerando que 60% das gestantes apresentam hipercalciuria, supõe-se que o equilíbrio de Ca se deu pela absorção intestinal e a reabsorção renal e não pela reabsorção óssea, indicando ingestão de Ca adequada (612 ±187 mgCa/d). / During pregnancy, calcium deficiency has been associated with complications such as pre-eclampsia, hyperparathyroidism, osteoporosis and malnutrition, which increase the frequency of preterm babies, low-weighed and small for their gestational age (SGA). This study aimed to evaluate calcium nutritional status of pregnant women in the last third of pregnancy, using diet intake, urinary calcium and plasma colagen carboxy-terminus telepeptide (CTx) as parameters. Fifty-two pregnant women were selected in the Obstetrics Service of the University Hospital (HU-USP). The subjects completed a food-consumption record (3 days) e a 24-h record. For the consumed-food analysis, Nutriquanti software (GALANTE & COLLI, 2007) was used. A normal distribution of calcium intake was observed when the data were adjusted for energy according to the residual-nutrient method and corrected to consider intrapersonal and interpersonal variability afterwards. Only one pregnant woman showed a higher intake than the AI (1.000 mg/day), and therefore only this one is considered to present an adequate Ca intake when the reference is the AI. On the other hand, considering that CTx was not increased in relation to the Reference Interval and that 60% of the pregnant women presented hypercalciuria, we can say that Ca balance was due to intestinal absorption and renal resorption rather than bone resorption, thus indicating an adequate Ca intake (612 ±187 mgCa/day).

O trauma em dentes decíduos é uma ocorrência comum na infância, sendo a reabsorção radicular patológica (RRP) uma das sequelas observadas no próprio dente traumatizado. A proposta deste estudo de coorte histórico foi avaliar a associação entre a ocorrência de reabsorção radicular externa e a perda precoce de incisivos centrais superiores decíduos traumatizados. Um examinador treinado e calibrado avaliou as fichas clínicas, fotografias e radiografias de prontuários de pacientes atendidos no Centro de Pesquisa e Atendimento de Traumatismos em Dentes Decíduos da FOUSP de 1998 a 2016. Após critérios de inclusão e exclusão, 521 prontuários foram analisados. Observou-se que 56,6% dos pacientes eram do sexo masculino, 54,7% tinham menos de 3 anos de idade e 30,7% tinham mordida aberta anterior e/ou sobressaliência no momento do trauma. A amostra deste estudo foi composta de 803 incisivos centrais superiores decíduos traumatizados, dos quais 69,2% sofreram trauma de tecido periodontal. Observou-se em 56 dentes (7%) reabsorção fisiológica, 138 (17,2%) reabsorção relacionada à reparação óssea (RRR), 163 (20,3%) reabsorção relacionada à infecção (RRI) e 446 (55,5%) reabsorção relacionada à expansão do folículo do sucessor permanente (RREXP). A ocorrência de reabsorção radicular patológica foi de 93% dos dentes incluídos neste estudo. A RREXP apresentou as maiores médias de tempo entre a ocorrência do trauma e o diagnóstico da reabsorção e entre o diagnóstico da reabsorção e a perda do dente, 32,3 meses e 24,1 meses, respectivamente. Já em contrapartida a RRI foi a que apresentou as menores médias 12,8 meses e 5 meses, respectivamente. A associação entre as variáveis independentes e os desfechos foram avaliadas usando análises de regressão de Poisson que permitiram o cálculo dos valores de risco relativo (RR) e respectivos intervalos de confiança de 95%. Em relação ao desfecho perda precoce, a análise de regressão de Poisson multivariada no modelo hierárquico pré-definido indicou como fatores de risco a presença de mordida aberta e/ou sobressaliência (RR = 1,95; 1,20 - 3,18), traumas de tecido periodontal do tipo luxação (RR = 1,84; 1,03 - 3,31) ou luxação com deslocamento (RR = 2,37; 1,36 - 4,12), reabsorção relacionada à reparação óssea (RR = 3,35; 1,17 - 9,55), reabsorção relacionada à infecção (RR = 7,55; 2,74 - 20,81) e a presença de necrose pulpar (RR = 2,35; 1,18 - 4,67). O tratamento endodôntico foi considerado fator de proteção (RR = 0,53; 0,36 - 0,77). Para o desfecho reabsorção desfavorável (RRR e RRI), a análise de regressão de Poisson multivariada indicou como fatores de risco trauma de tecido periodontal do tipo luxação (RR = 1,93; 1,20 - 3,09) e luxação com deslocamento (RR = 2,81; 1,80 - 4,38), traumas de tecido duro (RR = 1,94; 1,21 - 3,12) e ter coloração dental cinza ou marrom (RR = 1,46; 1,09 - 1,95). A calcificação pulpar foi considerada fator de proteção (RR = 0,51; 0,38 - 0,69). Conclui-se que a ocorrência de reabsorção radicular externa patológica em incisivos centrais superiores decíduos traumatizados é alta, e que as reabsorções relacionadas à reparação óssea e à infecção são desfavoráveis ao ciclo fisiológico destes dentes, porém o prognóstico melhora com o tratamento endodôntico. / Trauma in primary teeth is a common occurrence in childhood, and the pathological root resorption (PRR) is one of the sequelae, which may be observed in the traumatized tooth itself. The purpose of this historical cohort study was to evaluate the association between the occurrence of external root resorption and the premature loss of traumatized primary upper central incisors. One trained and calibrated examiner evaluated the dental records, photographs and radiographs of patients attended at the Research and Clinical Centre of Dental Trauma in Primary Teeth of FOUSP from 1998 to 2016. After inclusion and exclusion criteria, 521 dental records were evaluated. It was observed that 56.6% of the patients were males, 54.7% were less than 3 years of age and 30.7% had anterior open bite and/or overjet at the time of trauma. The study sample was composed of 803 traumatized primary upper central incisors, of which 69.2% suffered periodontal trauma. It was observed in 56 teeth (7%) physiological resorption, 138 teeth (17.2%) repair-related resorption (RRR), 163 teeth (20.3%) infection-related resorption (IRR) and 446 teeth (55.5%) expansion of dental sac-related resorption (EDSRR). The occurrence of pathological root resorption was 93% in the teeth included in this study. EDSRR presented the highest mean time between the occurrence of trauma and the diagnosis of resorption, and between the diagnosis of resorption and tooth loss, 32.3 months and 24.1 months, respectively. On the other hand, IRR presented the lowest averages 12.8 months and 5 months, respectively. The association between independent variables and outcomes was assessed after performance of Poisson regression analyses (regular or hierarchical model), which allowed the calculation of relative risk (RR) values and respective 95% confidence intervals. In relation to the premature tooth loss outcome, the multivariate Poisson regression analysis using the predefined hierarchical model indicated as risk factors: presence of anterior open bite and/or overjet (RR = 1.95; 1.20 - 3.18), periodontal trauma such as luxation (RR = 1.84; 1.03 - 3.31) or luxation with tooth displacement (RR = 2.37; 1.36 - 4.12), repairrelated resorption (RR = 3.35; 1.17 - 9.55), infection-related resorption (RR = 7.55; 2.74 - 20.81) and presence of pulp necrosis (RR = 2.35; 1.18 - 4.67). Endodontic treatment was considered a protection factor (RR = 0.53; 0.36 - 0.77). Regarding the desfavorable resorption outcome (RRR and IRR), the multivariate Poisson regression analysis indicated as risk factors periodontal trauma such as luxation (RR = 1.93; 1.20 - 3.09) and luxation with tooth displacement (RR = 2. 81; 1.80 - 4.38), hard tissue trauma (RR = 1.94; 1.21 - 3.12) and had grey or brown tooth colour (RR = 1.46; 1.09 -1.95). Pulp calcification was considered a protection factor (RR = 0.51; 0.38 -0.69). It is concluded that the occurrence of pathological external root resorption in traumatized primary upper central incisors is high, and repair-related and infection-related resorptions are unfavourable to the physiological cycle of these teeth, however the prognosis improves when endodontic treatment is performed.

O LED infravermelho tem sido considerado uma alternativa efetiva para o laser na bioestimulação. Entretanto, o efeito na remodelação óssea durante o movimento ortodôntico ainda deve ser esclarecido. Oitenta ratos machos com 10 semanas de idade, foram divididos em dois grupos de 40 animais cada: grupo LED (GLED) e grupo controle (GCON), e tiveram seu 1ºmolar superior esquerdo submetido a força de 10 g com uma mola helicoidal fixada entre o 1ºmolar superior esquerdo e incisivo superior esquerdo. Durante os primeiros cinco dias de movimentação dentária foi aplicada a luz infravermelha LED (850nm, 30mW) durante 5 minutos no GLED. O GCON não foi irradiado. Em 0, 7, 14 e 21 dias, 5 animais de cada grupo foram submetidos a microtomografia computadorizada. Para a avaliação histológica, todos os ratos foram subdivididos em subgrupos de 20 animais cada de acordo com a o dia da eutanásia 4, 7, 14 e 21 dias e as maxilas foram dissecadas e processadas para a microscopia de luz (HE e TRAP). A quantidade de movimento, segundo as microtomografias computadorizadas, foi maior no grupo LED em T1 (intervalo entre os dias 0 e 7) e em T3 (intervalo entre os dias 14 e 21). No dia 4 foi observada hialinização na área de pressão em ambos os grupos; nos períodos posteriores, 7, 14, a área hialina foi vista apenas no grupo controle. A reabsorção radicular ocorreu em ambos os grupos após o dia 7. A fototerapia LED melhora a movimentação dentária e minimiza a hialinização durante o movimento ortodôntico. Entretanto, não reduz o risco de reabsorção da superfície radicular. / Infrared LED has been considered an effective alternative to infrared LASER for biostimulation purposes. However, its effect on bone remodeling during orthodontic tooth movement (OTM) is unknown. Eighty 10 week-old male Wistar rats were divided into two groups of forty animals each: LED group (GLED) and control group (GCON) and had a coiled spring bonded to the first upper molar and upper incisor exerting 10g force to mesially move the molar. During the first five days of OTM the maxillae were daily irradiated with infrared LED (850nm, 30mW) during 5 minutes (LED group). The controls were not irradiated (GCON). At 0, 7, 14 and 21 days, 5 LED group and 5 CON group rats were submitted to ?CT. For the histological study, all rats were subvided into subgroups of 20 animal each according to the euthanasia day 4, 7, 14 e 21 days. The rats were euthanized after 4, 7, 14 and 21 days and the maxillae were processed to light microscopy and TRAP histochemistry. The amount of tooth movement was greater in the GLED on days 7 and 14. At 4 day, hyalinization was seen at the pressure areas in both groups; on the subsequent days it was seen only in the GCON. Root resorption occurred in both groups after 7 days. LED phototherapy enhances early tooth movement and minimizes periodontal hyalinization during OTM. However, it does not reduce the risk of tooth resorption.

Orientador: Márcio Zaffalon Casati / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-24T15:40:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vale_HugoFelipedo_D.pdf: 1222140 bytes, checksum: faabfb358aea20e9dcec56786e895bc9 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar os parâmetros clínicos, imunoenzimáticos e microbiológicos de implantes dentais de estágio único instalados em pacientes com histórico de periodontite agressiva, periodontite crônica e saúde, considerando a hipótese de nulidade de que não existe diferença entre os grupos. Foram selecionados pacientes que apresentaram histórico de periodontite agressiva generalizada (PAG) e periodontite crônica generalizada (PCG) com indicação de reabilitação protética implanto suportada. Os pacientes com necessidade de reabilitação unitária foram divididos em 3 grupos: Grupo PAG (n=13): pacientes apresentando histórico de periodontite agressiva generalizada; Grupo PCG (n=18): pacientes com histórico de PCG ; e Grupo Controle (n=14): pacientes sem histórico de periodontite. Todos os implantes foram instalados em estágio único e, após 3 meses, receberam reabilitação com próteses metalocerâmicas unitárias aparafusadas. Profundidade de sondagem, nível clínico de inserção relativo e posição da margem gengival relativo foram avaliados nos implantes no momento da instalação da prótese e 1, 3 e 6 meses após o carregamento. Avaliação radiográfica foi feita no momento 7 dias após a cirurgia, na instalação da prótese e 6 meses após o carregamento protético. Avaliação microbiológica foi realizada imediatamente após a instalação da prótese, 1, 3 e 6 meses após, por meio de PCR real time, determinando a quantidade dos microrganismos A. actinomycetemcomitans, P. gingivalis e, T. forsythia Avaliação imunológica foi realizada utilizando o sistema LUMINEX/MAGPIX® com amostras de fluido periimplantar coletado aos 15 dias após a cirurgia, imediatamente após a instalação da prótese e 6 meses após o carregamento protético, avaliando as concentrações de IL1?, IL4, IL6, IL8, IL10, TNF?, INF? e GM-CSF, além de marcadores de osteogênese e osteoclasia (OPG e RANKL). Não foram observadas diferenças entre os perfis de pacientes quanto aos parâmetros clínicos e radiográficos ao redor dos implantes em nenhum dos períodos de avaliação. No primeiro mês após a instalação das próteses verificou-se maior concentração de Aa (p<0,05) no grupo PAG. Seis meses após a instalação das próteses o grupo Controle apresentou menores concentrações de Pg (p<0,05). A avaliação dos marcadores de osteogênese/osteoclasia indicou alta concentração de OPG no grupo controle no momento da instalação da prótese. Ainda neste grupo, alta concentração de IL4 foi observada 6 meses após o carregamento dos implantes. Dentro das limitações deste estudo, pode ser concluído que 6 meses após a instalação das próteses, não há diferenças clínicas nem adicional reabsorção óssea em implantes dentários instalados em pacientes com histórico de doença periodontal / Abstract: The aim of this study was to evaluate clinical, microbiological, and immunological patterns of dental implants placed in healthy, partially edentulous, patients (HH), and those with a history of aggressive (HGAgP) or chronic periodontitis (HGCP), considering the null hypothesis that there are no difference between groups. This prospective, parallel, controlled trial enrolled 45 patients (HGAgP, n = 13; HGCP, n = 18; HH, n = 14) followed up from implant insertion until six months after implant loading. Plaque index (PI), bleeding on probing (BOP), probing depth (PD), relative clinical attachment level (rCAL), gingival margin position (rGMP), implant stability (IS), and radiographic marginal bone resorption (RMBR) around implants were evaluated. Porphyromonas gingivalis (Pg), Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa), and Tannerella forsythia (Tf) levels were evaluated by real-time PCR. Also, IL-1?, TNF?, IL-6, IL-8, IFN?, GM-CSF, IL-4, IL-10, RANKL, and OPG levels were evaluated with the LUMINEX/MAGPIX® platform. No inter-group differences were observed around dental implants when the clinical parameters (PI, BOP, PD, rCAL, rGMP, IS, and RMBR) (p > 0.05) were considered at any evaluation period. At the first month after implant loading, those in the HGAgP group presented a higher level of Aa (p < 0.05). Six months after implant loading, those in the HH group presented a lower level of Pg (p < 0.05). The immunologic evaluation showed higher values of OPG in those in the HH group at implant loading, and a higher IL-4 level in those in the HH group six months after implant loading. It can be concluded that, after six months of implant loading, despite some micro- and immunological differences, there are no clinical differences or additional RMBR around implants placed in patients with a history of periodontal disease / Doutorado / Periodontia / Doutor em Clínica Odontológica