Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A obesidade, cuja origem é multifatorial e a prevalência é crescente em diferentes regiões no mundo, está geralmente associada à produção desregulada de adipocinas, ao aumento do estresse oxidativo e à ocorrência de distúrbios metabólicos como dislipidemia, intolerância à glicose e hipertensão. A Programação Metabólica ou Plasticidade Ontogenética tem sido proposta como um importante fator na etiologia da obesidade. Este fenômeno sugere que alterações nutricionais, hormonais e ambientais durante períodos críticos do desenvolvimento, tais como gestação e lactação, podem alterar a fisiologia e o metabolismo de um organismo provocando o desenvolvimento de distúrbios metabólicos na vida adulta. Neste trabalho foram estudados dois modelos de plasticidade ontogenética que programam ratos Wistar para obesidade na vida adulta: a supernutrição na lactação e o desmame precoce. A supernutrição na lactação provocada pela redução da ninhada causou obesidade, hiperfagia, aumento do estresse oxidativo, resistência hepática à ação da insulina e esteatose nas proles na idade adulta. A desnutrição, provocada pelo desmame precoce, também se associou na idade adulta com obesidade visceral, aumento do estresse oxidativo e esteatose, assim como dislipidemia, resistência à insulina, hipertensão arterial e resistência central à leptina. No modelo de programação pelo desmame precoce, os animais adultos foram tratados com resveratrol (30mg/kg/MC), um polifenol encontrado nas uvas e conhecido por seus efeitos antioxidante e hipoglicemiante, por 30 dias. Os animais programados pelo desmame precoce que receberam resveratrol tiveram massa corporal, gordura visceral e morfologia hepática semelhantes aos animais controles. Ainda, o resveratrol normalizou a pressão arterial, a dislipidemia, a glicemia e as concentrações de adiponectina e leptina. A normalização da leptinemia esteve associada à correção da resistência central à leptina nestes animais, uma vez que o resveratrol normalizou além da ingestão, o conteúdo hipotalâmico de JAK2, pSTAT3 e NPY. Portanto, os animais programados pela supernutrição na lactação ou pelo desmame precoce apresentaram aumento do estresse oxidativo associado à obesidade e alterações metabólicas como esteatose. O tratamento com resveratrol nos animais programados pelo desmame precoce preveniu o aumento de estresse oxidativo, obesidade visceral, resistência à insulina, dislipidemia e esteatose. Além disso, o resveratrol causou normalização da leptinemia nestes animais, assim como da ação deste hormônio no hipotálamo, controlando a hiperfagia característica deste modelo. / Obesity, a multifactorial disease with increased prevalence in different regions in the world, is generally associated with a deregulated adipocytokines production, increased oxidative stress and the occurrence of metabolic disorders such as dyslipidemia, glucose intolerance and hypertension. The Metabolic Programming or Developmental Plasticity has been proposed as important factor in the etiology of obesity. This phenomenon suggests that dietary changes, hormonal and environmental factors during critical periods of development, such as pregnancy and lactation can alter the physiology and metabolism of an organism causing the development of metabolic disorders at adulthood. In this work, we studied two models of developmental plasticity in Wistar rats, which programmed for obesity at adulthood: overnutrition during lactation and early weaning. Overnutrition during lactation through litter size reduction caused obesity, hyperphagia, increased oxidative stress, liver insulin resistance and steatosis in offspring at adulthood. Malnutrition caused by early weaning was also associated with visceral obesity, increased oxidative stress and steatosis as well as dyslipidemia, insulin resistance, hypertension and central leptin resistance in adulthood. In this programming model by early weaning, adult animals were treated with resveratrol (30mg/kg/BW for 30 days), a polyphenol found in grapes and known for its antioxidant and hypoglycemic actions. Offspring programmed by early weaning that were treated with resveratrol had body mass, visceral fat and liver morphology similar to those found in control offspring. Also, resveratrol normalized blood pressure, dyslipidemia, and serum glucose, adiponectin and leptin. The normalization of leptin levels was associated with the correction of central leptin resistance in these animals, since resveratrol normalized food intake and hypothalamic content of JAK2, pSTAT3 and NPY. Therefore, offspring programmed by overnutrition during lactation or early weaning displayed increased oxidative stress, obesity and metabolic disorders such as steatosis. Treatment with resveratrol in early weaned offspring prevented the increase of oxidative stress, visceral obesity, insulin resistance, dyslipidemia and steatosis. Indeed, resveratrol normalized serum leptin as well as its action in the hypothalamus, controlling the hyperphagia characteristic of these offspring.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Os representantes do gênero Arachis são conhecidos como amendoim, e suas sementes possuem grande quantidade de óleos e proteínas, podendo ser consumidas cruas. A espécie mais cultivada do gênero é Arachis hypogaea, que possui grande importância comercial. Outras espécies são também utilizadas para controle das ervas daninhas e cobertura do solo, assim como ornamentais e na alimentação. Arachis repens, popularmente conhecida como grama amendoim, é utilizada como planta ornamental, na formação de pastagens, como forragem e para cobertura do solo em substituição a várias espécies comuns de grama. Diversas substâncias bioativas têm sido identificadas em A. hypogaea. Contudo, estas substâncias ainda não foram descritas em outras espécies do gênero. O objetivo deste trabalho foi o estabelecimento de sistemas de cultivo in vitro para Arachis repens, visando à micropropagação e à análise comparativa da produção de resveratrol em extratos alcoólicos dos materiais produzidos in vitro, em comparação com as plantas in vivo. Segmentos nodais, internodais e foliares foram excisados de plantas in vitro e inoculados em meio MS suplementado com diferentes concentrações de BAP, TDZ, AIA e KIN, utilizados isoladamente ou em combinação. Os explantes apresentaram respostas distintas de acordo com o regulador de crescimento utilizado. Na presença de BAP foi observada a formação de calos compactos, com formação de brotos em diferentes taxas. Na presença de TDZ, segmentos nodais e internodais formaram calos compactos em todas as concentrações. Segmentos nodais cultivados na presença de diferentes concentrações de AIA em combinação com KIN apresentaram a formação de calogênese. Foi também realizada uma avaliação da atividade antioxidante e a presença de fenóis totais em extratos de diferentes materiais in vivo e produzidos in vitro. Nas análises por meio de CLAE, foi possível detectar a presença de resveratrol tanto nos materiais in vivo, quanto os produzidos in vitro. Dessa forma, o trabalho forneceu resultados preliminares sobre as possibilidades de utilização de A. repens para a produção de metabólitos especiais. / Arachis species are known as groundnut and their seeds display high oil and protein contents, being consumed in natura. The most common commercially cultivated species of the genus is Arachis hypogaea. Other Arachis species can also be used as food, ornamental, ground cover and provide weed control. Arachis repens, commonly known as grama amendoim, is used as an ornamental, forage legume and ground cover in substitution of common grass species. Different bioactive substances have been identified in A. hypogaea. However, these substances have not been described in other species of the genus. The goal of this work was the establishment of in vitro culture for Arachis repens, aiming at the micropropagation and the comparative analysis of the resveratrol production in ethanolic extracts of the in vitro produced material, in comparison to in vivo plants. Nodal, internodal and leaf segments were excised from in vitro plants and inoculated on MS medium supplemented with different concentrations of BAP, TDZ, IAA and KIN, used alone or in combination. Explants showed distinct responses in according to the growth regulator used. In the presence of BAP, compact calluses were formed, with the production of shoots in different frequencies. In the presence of TDZ, nodal and internodal segments formed compact calluses in response to all concentrations. Nodal segments cultivated in the presence of different IAA concentrations in combination with KIN showed callogenesis The evaluation of antioxidant activity and the presence of total phenolics in extracts of different in vivo and in vitro materials was also evaluated. The HPLC analysis detected the presence of resveratrol in the materials produced in vivo and in vitro. Therefore, this work provided preliminary results about the possible use of A. repens for the production of special metabolites.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / A torção testicular (TT) é uma afecção de relativa frequência, alvo de muitos estudos clínicos e experimentais ao longo dos anos. Pode acometer qualquer idade, no entanto é mais incidente em pacientes com menos de 21 anos de idade. Sua distribuição ocorre em dois picos: um no período neonatal e outro ao redor dos 13 anos de idade. A taxa dessa morbidade em jovens com menos de 25 anos é na ordem de 1/4000. A TT resulta em rotação do cordão espermático, que gera um comprometimento do suprimento sanguíneo testicular, considerada uma urgência urológica. Depois da TT, a artéria testicular e o plexo pampiniforme sofrem oclusão, interrompem o suprimento arterial e a drenagem venosa do testículo, diminuindo o aporte de nutrientes e oxigênio aos tecidos e células, levando à isquemia testicular. Esta condição afeta a produção de espermatozóides do testículo torcido podendo comprometer a fertilidade do indivíduo. Este presente estudo avaliou a função reprodutiva, alguns parâmetros espermáticos e morfologia dos testículos de ratos adultos submetidos à torção testicular antes, durante e após a puberdade, e também o efeito do tratamento com resveratrol. Os testículos direitos dos ratos foram torcidos a 720 por quatro horas em todos os grupos, exceto no grupo controle. A TT foi realizada durante os períodos pré-púbere (4 semanas de idade), púbere (6 semanas de idade) e adulto jovem (9 semanas de idade). Para cada grupo, houve um outro grupo que os animais foram submetidos ao mesmo procedimento e foram tratados com resveratrol, 30 mg/kg resveratrol foi injetado por via intraperitonel, 30 minutos antes da destorção, seguido por gavage por 7 dias. Cada rato na idade adulta acasalou com três fêmeas adultas com 12 semanas de idade para avaliar parâmetros de fertilidade. Todos os animais foram mortos com 14 semanas de idade e os testículos foram removidos para análise de concentração, motilidade e viabilidade dos espermatozóides de amostras colhidas da cauda dos epidídimos. Os parâmetros morfológicos foram avaliados por métodos estereológicos macro e microscópicos. A função reprodutiva dos animais nas diferentes idades não foi afetada pela TT, no entanto, após o tratamento os ratos operados com 4 e 6 semanas de idades tiveram maior potência e os ratos operados com 9 semanas de idade apresentaram maior taxa de fecundidade na idade adulta.. Os parâmetros morfológicos foram afetados em todos os testículos torcidos em todas as idades. Alguns desses parâmetros melhoram após o tratamento com resveratrol, e o efeito adjuvante foi maior nos ratos submetidos à TT com 4 semanas de idade. Entretanto, o resveratrol recuperou o epitélio seminífero no grupo que sofreu TT com 9 semanas de idade, os quais não apresentaram nenhum epitélio após a TT. Os parâmetros espermáticos dos testículos torcidos decresceram em todas as idades, e o resveratrol não foi efetivo, embora tenha recuperado a produção de espermatozóides no grupo que foi submetido à TT com 9 semanas de idade, em que todos os animais foram aspermatogênicos após a TTNão houve nenhum dano nos testículos contralaterais. O resveratrol promoveu efeito protetor para TT, principalmente quando os animais foram submetidos à TT em idade prépúbere. / Testicular torsion (TT) is a disease relatively frequent, which was assessed in many experimental and clinical studies over the years. TT can occur in any age, but is more common in patients under 21 years old, mostly in neonatal period and around 13 years old. The rate of this disease in youths under 25 years is about 1/400. The TT also twists the spermatic cord, which generates an impairment of the testicular blood supply and is considered a urological emergency. After TT, the testicular artery and pampiniform plexus become occluded, disrupting arterial supply and venous drainage of the testis, decreasing provision of nutrients and oxygen for tissues and cells, leading to testicular ischemia. This condition affects sperm production of the twisted testicle and may impair the fertility. This study assessed reproductive function, some morphological and spermatic parameters in adult rats which underwent experimental TT before, during and after puberty and also the effect of the treatment with resveratrol. Right testicles of rats were twisted 720 for 4 hours in all groups except the control group. TT was done during the prepubertal period (4 weeks old), puberty (6 weeks old) and young adult period (9 weeks old). For each group, there was another group which animals underwent the same procedure and were treated with resveratrol, 30 mg/kg resveratrol was injected by an intraperitoneal route, 30 minutes before detorsion, followed by gavage for 7 days. Each rat in adulthood was mated with three adult females at 12 weeks old, in order to assess parameters of fertility. All animals were killed at 14 weeks old and testes were removed for analyses Concentration, motility and viability of spermatozoids were evaluated on samples taken from the tail of the epididymis. Morphological parameters were evaluated by macroscopic and microscopic stereological methods. Reproductive function of animals at different ages was not affected by TT, however, after treatment with resveratrol, rats operated at 4 and 6 weeks old presented greater potency and animals operated at 9 weeks old showed higher fertility rate in adulthood. Morphological parameters were affected in all twisted testes at all ages. Some of these parameters improved after treatment with resveratrol and the adjuvant effect was greater in rats which underwent TT at 4 weeks old. However, resveratrol recovered the seminiferous epithelium in the group that suffered TT at 9 weeks of age, which did not show any epithelium after TT. The spermatic parameters decreased in all ages and the resveratrol did not affect it, despite it has recovered sperm production in group that underwent TT with 9 weeks old, once all animals were azoospermic after the TT. There was almost no damage in the contralateral testis. Resveratrol promoted protective effect for TT, mainly when animals underwent TT at prepubertal age.

A hipoperfusão cerebral crônica (HCC) é um importante fator de risco para o declínio cognitivo e outras disfunções cerebrais, tais como Doença de Alzheimer e Demência Vascular. O objetivo deste estudo foi investigar o efeito neuroprotetor do Resveratrol (RSV), avaliando parâmetros comportamentais, bioquímicos e morfológicos, em um modelo experimental de Demência Vascular. Ratos Wistar adultos foram submetidos ao modelo modificado da HCC através da oclusão permanente de 2 vasos (2VO) e tratamento diário, iniciado uma hora após oclusão permanente dos vasos, com injeções intraperitoneais (20 mg/kg) de RSV durante 7 dias. Os testes comportamentais foram realizados entre o 35° e 45° dias após a cirurgia - 2VO, através da tarefa do labirinto aquático de Morris, na qual os animais foram avaliados quanto ao desempenho da memória espacial. Ao final dos testes comportamentais, um grupo dos animais foi perfundido transcardiacamente para análise histológica, outro grupo foi submetido à eutanásia em 3 tempos (3, 14 e 45 dias após a lesão isquêmica) para avaliação da expressão de NGF (fator de crescimento do nervo). Os resultados demonstraram que o tratamento com RSV atenuou significativamente a morte das células piramidais na região CA1 do hipocampo e preveniu o déficit da memória espacial. O aumento da expressão de NGF foi evidenciado no 3° dia após indução da HCC em todos os animais isquêmicos e no 45° dia após indução da HCC nos animais tratados com RSV. Com base nesses dados, hipotetizamos que o aumento, em longo prazo, na expressão de NGF no hipocampo após a HCC pode caracterizar uma das vias envolvidas nos mecanismos neuroprotetores do RSV. / Chronic cerebral hypoperfusion (CCH) is an important risk factor for cognitive decline and other brain dysfunctions, such as Alzheimer’s Disease and Vascular Dementia. The aim of the present study was to investigate the neuroprotective effect of Resveratrol (RSV) on behavioral, biochemical and morphological parameters in an experimental model of Vascular Dementia. Adult Wistar rats were submitted to the CCH modified model by means of permanent 2-vessel occlusion (2VO) and daily treatment, initiated one hour after permanent vessel occlusion, with intraperitoneal injections (20 mg/kg) of RSV for 7 days. Behavioral testing was performed between the 35th and the 45th day after 2VO surgery in the Morris Water Maze task, allowing for the evaluation of spatial memory function. At the end of the behavioral assessment, half of the animals were transcardially perfused for histological analysis and the remaining were euthanized in 3 times (3. 14 and 45 days after ischemic injury) for NGF expression evaluation (neural growth factor). Results demonstrate that the treatment with RSV significantly attenuated pyramidal cell death in CA1 hippocampal field and prevented spatial memory impairment. The increase of NGF expression was evidenced on the 3rd day after CCH induction in all ischemic animals and on the 45th day after CCH induction in animals treated with RSV. On the basis of these data, we hypothesize that the long term increase in NGF expression in the hippocampus after CCH may characterize one pathway involved in the neuroprotective mechanisms of RSV.

O carcinoma mucoepidermóide de pulmão, um tipo histológico que deriva das glândulas mucosas traqueobrônquicas, manifesta-se com sintomas obstrutivos e tende a comprometer a traqueia. Com finalidade curativa ou paliativa da doença, atualmente há uma forte tendência na oncologia em desenvolver estratégias terapêuticas que visam à administração de compostos com elevado potencial de otimizar o efeito do tratamento com a radiação ionizante, de modo a aumentar a morte de células tumorais e preservar íntegras as células dos tecidos sadios adjacentes. A intensa busca por tais estratégias evidenciou resultados promissores apresentados pelo composto denominado Resveratrol (3,4,5-trihidroxiestilbeno), tornando-o amplamente divulgado e alvo de intensas pesquisas. O principal objetivo do presente estudo foi determinar o efeito do resveratrol em cultura celular de carcinoma mucoepidermóide de pulmão exposta a diferentes doses de radiação ionizante. Para tal, os estudos de citotoxicidade utilizando o método de incorporação do vermelho neutro, e da determinação da dose letal 50 % (DL50) da radiação ionizante, foram realizados em cultura de células da linhagem NCI-H292 [H292] (ATCC® CRL-1848TM), CCIAL069. Com base nos resultados do IC50% (401,5 μM) e da DL50 (693 Gy) foram realizados o teste in vitro do micronúcleo e os ensaios para avaliar o efeito do resveratrol no ciclo celular, reparo da lesão no DNA e processo de lesão radioinduzida, necrose e apoptose celular. Os resultados evidenciaram que o resveratrol na concentração de 30 μM apresenta uma importante capacidade em promover danos às células NCI-H292 após 24 h da irradiação. / Mucoepidermoid lung carcinoma is a histological type that derives from the tracheobronchial mucous glands. It is manifested by trachea symptoms. Curative or palliative purpose for the disease, nowadays presents a strong oncology tendency to develop therapeutic strategies aimed at the administration of high potential compounds to improve the ionizing radiation treatments, so as to increase the radiation effects on tumor cells while minimizing these effects to surrounding normal tissues. The intensive search for such strategies showed promising results by the compound called Resveratrol, making it widely available and subject of many studies. The main of this study was to determine in vitro resveratrol effect in mucoepidermoid lung carcinoma cells NCI-H292 [H292] (ATCC® CRL-1848TM), CCIAL069, exposed to ionizing radiation doses. For this purpose, there were performed in vitro cytotoxicity studies by neutral red uptake assay, as well as the lethal dose 50 % (LD50) of ionizing radiation. On the basis of the IC50% (401.5 μM) and LD50 (693 Gy) results, there were performed in vitro micronucleus test and other tests in order to evaluate the cell cycle, repair and injury processes, cellular apoptosis and necrosis inductions. The results showed that resveratrol in 30 μM concentrations showed an important capability to injury NCI-H292 cells after 24 h of irradiation.

A hipoperfusão cerebral crônica (HCC) é um importante fator de risco para o declínio cognitivo e outras disfunções cerebrais, tais como Doença de Alzheimer e Demência Vascular. O objetivo deste estudo foi investigar o efeito neuroprotetor do Resveratrol (RSV), avaliando parâmetros comportamentais, bioquímicos e morfológicos, em um modelo experimental de Demência Vascular. Ratos Wistar adultos foram submetidos ao modelo modificado da HCC através da oclusão permanente de 2 vasos (2VO) e tratamento diário, iniciado uma hora após oclusão permanente dos vasos, com injeções intraperitoneais (20 mg/kg) de RSV durante 7 dias. Os testes comportamentais foram realizados entre o 35° e 45° dias após a cirurgia - 2VO, através da tarefa do labirinto aquático de Morris, na qual os animais foram avaliados quanto ao desempenho da memória espacial. Ao final dos testes comportamentais, um grupo dos animais foi perfundido transcardiacamente para análise histológica, outro grupo foi submetido à eutanásia em 3 tempos (3, 14 e 45 dias após a lesão isquêmica) para avaliação da expressão de NGF (fator de crescimento do nervo). Os resultados demonstraram que o tratamento com RSV atenuou significativamente a morte das células piramidais na região CA1 do hipocampo e preveniu o déficit da memória espacial. O aumento da expressão de NGF foi evidenciado no 3° dia após indução da HCC em todos os animais isquêmicos e no 45° dia após indução da HCC nos animais tratados com RSV. Com base nesses dados, hipotetizamos que o aumento, em longo prazo, na expressão de NGF no hipocampo após a HCC pode caracterizar uma das vias envolvidas nos mecanismos neuroprotetores do RSV. / Chronic cerebral hypoperfusion (CCH) is an important risk factor for cognitive decline and other brain dysfunctions, such as Alzheimer’s Disease and Vascular Dementia. The aim of the present study was to investigate the neuroprotective effect of Resveratrol (RSV) on behavioral, biochemical and morphological parameters in an experimental model of Vascular Dementia. Adult Wistar rats were submitted to the CCH modified model by means of permanent 2-vessel occlusion (2VO) and daily treatment, initiated one hour after permanent vessel occlusion, with intraperitoneal injections (20 mg/kg) of RSV for 7 days. Behavioral testing was performed between the 35th and the 45th day after 2VO surgery in the Morris Water Maze task, allowing for the evaluation of spatial memory function. At the end of the behavioral assessment, half of the animals were transcardially perfused for histological analysis and the remaining were euthanized in 3 times (3. 14 and 45 days after ischemic injury) for NGF expression evaluation (neural growth factor). Results demonstrate that the treatment with RSV significantly attenuated pyramidal cell death in CA1 hippocampal field and prevented spatial memory impairment. The increase of NGF expression was evidenced on the 3rd day after CCH induction in all ischemic animals and on the 45th day after CCH induction in animals treated with RSV. On the basis of these data, we hypothesize that the long term increase in NGF expression in the hippocampus after CCH may characterize one pathway involved in the neuroprotective mechanisms of RSV.

Made available in DSpace on 2018-06-27T18:56:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Viviam Shinobu Kishimoto Nishihira.pdf: 1449623 bytes, checksum: 695b00eba00a141bcd8f0d653cbcb917 (MD5) Viviam Shinobu Kishimoto Nishihira.pdf.jpg: 3806 bytes, checksum: 4f2ac7a7687ef7a61a7e4f8e64b1c9ef (MD5) Previous issue date: 2013-08-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The use of nanoparticles (NPs) as drugs carriers has been widely studied, among these NPs are highlighted the cyclodextrins (CDs), they are cyclic oligosaccharides composed of glucose residues with hydrophobic cavity and a hydrophilic external surface, which enables the formation inclusion complexes with lipophilic substances such as resveratrol (RSV) thereby increasing their solubility in water. RSV is a polyphenol founded in products derived from plants, for example, in the grape skins has been extensively studied for its antioxidant properties, anti-inflammatory, as well as their estrogenic effects in the prevention and treatment of various metabolic disorders, including, Diabetes. The aims of this study were to characterize the complex of RSV in HP-β-CD, validate the method on UV/vis spectrophotometer and after the in vitro treatment, comparing the effect of oral administration of free RSV and complexed with HP-β-CD (Hidroxypropil-Beta-Cyclodextrin) for two months, dose giving of 1 mg RSV / kg rat / day, on the enzyme activity of energy metabolism, pyruvate kinase (PK), creatine kinase (CK), adenylate kinase (AK), in tissue such as kidney, liver, heart, cerebral cortex and hippocampus and lactate dehydrogenase (LDH) in cerebral cortex and hippocampus, some of these compromised in diabetes. And also examine the toxicity and hypoglycemic effect of the complex through biochemical serum parameters. With the characterization been demonstrated that complexation was successfully. On the other hand, with to validate method, the analytical parameters studied indicate a simple, fast and precise, accurate and can be applied safely and reliably to determine the level of RSV incorporated into the inclusion complex. The hypoglycemic effect of RSV glycemic was not observed in our study when treated with both free RSV and complexed RSV. All diabetic groups showed elevated levels of urea, which may have derived from protein catabolism of DM1, however, no increase in the levels of creatinine, a marker of renal injury. Moreover, almost all results of the activities PK, AK, and CKmit CKcit showed no significant difference, indicating again that the kidney tissue is not compromised. Lipidemics levels are associated with vascular injury in DM1. High concentrations of triacylglycerol (TG) and very low density lipoprotein (VLDL) for diabetic groups were reversed by the complex and did not occur with free RSV. This lipid imbalance seems to be due to liver dysfunction, because the levels of alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST) and albumin are not altered in diabetic control. All diabetic groups showed significant increases in the activity of alkaline phosphatase (ALP). Several parameters were not affected after two months of treatment as albumin, high-density lipoprotein (HDL), uric acid, direct bilirubin (DB), total bilirubin (TB), total protein (TP), calcium (Ca), iron (Fe) and phosphate. Insulin stimulates the functioning of the liver PK in the absence of this hormone, a feature in DM1, the liver PK activity is reduced in all diabetic groups characteristic inhibition by insulin deficiency, both free RSV and the complex did not revert this situation, which can be proven by hyperglycemia and elevated serum concentration of fructosamine. In the heart, the administration of the complex reduced the activity of PK in diabetic rats and CKcit, but increased the activity of CKmit. The complex also reduced the activity of PK and CKcit in the cerebral cortex of normoglycemic animals. In the hippocampus, the activity of PK is high for all hyperglycemic animals in all diabetic groups and these complexes reinforce this elevation. For the diabetic groups in this tissue, the free RSV strongly reduced activity in both fractions of CK complex and reduces the activity of CKcit. For the diabetic group, RSV also inhibits CKmit complex and inhibits the activity of CKcit though both reductions appear to be offset by an increase in the activity of PK. Catches the attention that HP-β-CD significantly reduces the activity of AK compared to the two controls: diabetic and non diabetic.It is concluded that despite the complex does not affect biochemical markers of toxicity such as creatinine, urea, AST and ALT, it reduces the activity of key enzymes of energy metabolism in various organs, wich can alter cellular energy homeostasis. These findings reinfore the need to evaluate the mechanisms of action of nanoparticles. / A utilização de nanopartículas (NPs) como carreadores de fármacos tem sido amplamente estudada, dentre essas NPs se destacam as ciclodextrinas (CDs), que são oligossacarídeos cíclicos compostos por resíduos de glicose com uma cavidade hidrofóbica e superfície externa hidrofílica. O que permite a formação de complexos de inclusão com substâncias lipofílicas como o resveratrol (RSV) aumentando assim sua solubilidade em água. O RSV é um polifenol encontrado em produtos derivados de plantas como, por exemplo, na casca da uva, o qual tem sido extensivamente estudado pelas suas propriedades antioxidantes, anti-inflamatórias, seus efeitos estrogênicos bem como na prevenção e tratamento de algumas doenças metabólicas, entre elas, o diabetes. Os objetivos deste estudo foram caracterizar o complexo do RSV com a hidroxipropil-beta-ciclodextrina (HP-β-CD), validar o método através do espectrofotômetro no UV/vis e avaliar o efeito da administração por via oral de 1 mg de RSV livre e complexado/kg rato/dia, durante dois meses, em ratos normo- e hiperglicêmicos, sobre as atividades de enzimas chaves do metabolismo energético, piruvatocinase (PK), creatinacinase (CK), adenilatocinase (AK), de tecidos como rim, fígado, coração, córtex cerebral e hipocampo, e lactato desidrogenase (LDH) no córtex cerebral e hipocampo, alguns destes comprometidos no diabetes. E, também analisar a toxicidade e efeito hipoglicemiante do complexo, através de parâmetros séricos bioquímicos. As caracterizações na espectroscopia do infravermelho (IV) e de ressonância magnética nuclear de hidrogênio (RMN 1H) comprovaram que a complexação foi realizada com sucesso. Por outro lado, foi realizada a validação do método, os parâmetros analíticos estudados indicam um método simples, rápido, preciso e exato que pode ser aplicado com segurança e confiabilidade na determinação do teor de RSV incorporado no complexo de inclusão. O efeito hipoglicemiante do RSV, não foi observado neste trabalho tanto para o grupo diabético tratado com o RSV livre quanto aquele tratado com o complexo. Todos os grupos diabéticos apresentaram níveis elevados de ureia, porém, não houve elevação nos níveis de creatinina, um marcador de lesão renal. Da mesma forma, as atividades da PK, AK, CKmit e CKcit deste tecido praticamente não apresentaram alterações entre os grupos. As concentrações elevadas de triacilglicerol (TAG) e lipoproteína de muito baixa densidade (VLDL) para os grupos diabéticos foram revertidas pelo complexo, mas não pelo RSV livre. Este desequilíbrio lipídico parece não ser decorrente de disfunção hepática, pois os níveis das transaminases ALT, AST e albumina não estão alterados no controle diabético. Todos os grupos diabéticos apresentaram aumentos expressivos na atividade da fosfatase alcalina (FAL). Vários parâmetros não foram afetados após os dois meses de tratamento como albumina, lipoproteína de alta densidade (HDL), bilirrubina direta (BD), bilirrubina total (BT), proteína total (PT), colesterol total (CT), cálcio (Ca), ferro (Fe) e fosfato. A atividade da PK hepática encontra-se reduzida em todos os grupos diabéticos, inibição característica pela deficiência de insulina, e tanto RSV quanto o complexo não reverteram este quadro, o que pode ser comprovado pela hiperglicemia e concentração elevada de frutosamina sérica. No coração, o complexo reduziu a atividade da PK de ratos diabéticos e da CKcit, porém elevou a atividade da CKmit. O complexo também reduziu a atividade da CKcit no córtex cerebral dos animais normoglicêmicos, mas elevou a atividade da fração mitocondrial. Já no hipocampo, a atividade da PK encontra-se elevada para todos os grupos hiperglicêmicos e o complexo reforça este aumento. Nos animais normoglicêmicos, o complexo inibiu a atividade das duas frações da CK e também da fração mitocondrial dos diabéticos. Conclui-se que apesar do complexo não afetar marcadores de toxicidade como creatinina, ureia, AST e ALT, ele altera a atividade de importantes enzimas do metabolismo energético em vários órgãos, o que pode alterar a homeostasia energética celular. Estes achados reforçam a necessidade de avaliar mecanismos de ação de nanopartículas.

Made available in DSpace on 2018-06-27T18:56:14Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Claudia Grigolo Pinto.pdf: 1176064 bytes, checksum: 59a91895834e923c2658353b7e595164 (MD5) Claudia Grigolo Pinto.pdf.txt: 107937 bytes, checksum: 1b0f8213d3d5c275ed204303dd4db6c4 (MD5) Claudia Grigolo Pinto.pdf.jpg: 3006 bytes, checksum: 39d1ff3d9bf0d2f9de94bcb4adf42377 (MD5) Previous issue date: 2014-03-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The use of nanoparticles as carriers of drugs has been widely studied. These include cyclodextrins (CDs), cyclic oligosaccharides that allow the formation of inclusion complexes with lipohilic substances such as resveratrol (RSV). RSV is a polyphenol with antioxidant characteristics; when consumed, a great part is excreted, while the remainder is quickly metabolized in the body. The anti-inflammatory, antioxidant and preventive of metabolic diseased properties such as diabetes, stimulate the complexation of RSV to the hydroxypropyl-beta-cyclodextrin (HP-β-CD), thus enabling the increase of the bioavailability of an orally RSV. Hyperglycemia, a marker by which diabetes is diagnosed, promotes increased production of species reactive to oxygen by various routes that lead to cell damage and potentially to cell death. The oxidative stress parameters can be determined through certain techniques. The reduction in the amount or in the activity of endogenous antioxidant defenses is and indicative of oxidant injury and may, therefore, is considered as an excellent marker of oxidative stress. In this context, nanotechnology can contribute to the development of new therapeutic approaches for various diseases, including diabetes. The objective of this study is to investigate the in vivo effects of free and complex resveratrol to HP-β-CD on parameters of oxidative stress, based on the measurements of GSH, TBARS, total content of carbonyls, activity of SOD, CAT and GPx enzymes and determination of total protein in the cerebral cortex, liver, kidney and heart of normal and hyperglycemic rats. For this study, 70 male Wistar rats were used, form the vivarium of the Federal University of Santa Maria, randomly divided into five diabetic groups induced by streptozotocin (STZ), and five non-diabetic groups with seven animals per group. The hyperglycemic and normoglycemic groups daily received, through intragastric gavage, the following substances: water (control groups), free RSV in concentration of 1mg/kg (RSV groups), concentration of HP- β-CD equivalent to that present in complex (HP- β-CD groups), RSV complexed to the cyclodextrin at a concentration of 1 mg/kg body weight (complex groups) and a solution of 15% ethanol (ethanol group). After two months of treatment and 12 hours fasting, the animals were killed by decapitation. According to the data obtained, it was found that treatment with HP- β-CD caused a decrease of endogenous antioxidant molecules. When complexed to RSV, this decrease was lower; indicating a protective effect by RSV to the damage caused by the medium, in this case HP- β-CD. In the measurements of TBARS it was observed that there was a decrease in the RSV group and HP- β-CD, indicating a protective behavior to lipid peroxidation. / O emprego de nanopartículas como carreadores de fármacos vem sendo vastamente estudado. Entre elas, estão as ciclodextrinas (CDs), que são oligossacarídeos cíclicos que permitem a formação de complexos de inclusão com substâncias lipofílicas, como o resveratrol (RSV). O RSV é um polifenol com características antioxidantes; quando consumido, há uma grande parte excretada, enquanto o restante é rapidamente metabolizado no organismo. As propriedades antioxidantes, anti-inflamatórias e preventivas de doenças metabólicas, como o diabetes, estimulam a complexação do RSV à hidróxi-propil-beta-ciclodextrina (HP--CD), possibilitando, dessa forma, o aumento da biodisponibilidade do RSV por via oral. A hiperglicemia, marcador por meio do qual se diagnostica o diabetes, promove aumento na produção de espécies reativas de oxigênio por diversas rotas, que levam a lesões celulares e potencialmente à morte celular. Os parâmetros de estresse oxidativo podem ser determinados através de diversas técnicas. A redução da quantidade ou da atividade das defesas antioxidantes endógenas é indicativa de lesão oxidante, podendo, portanto, ser considerada como excelente marcador de estresse oxidativo. Nesse contexto, a nanotecnologia pode contribuir para o desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas para diversas doenças, entre elas o diabetes. O objetivo deste trabalho é investigar o efeito in vivo do resveratrol livre e complexado à HP-β-CD sobre parâmetros do estresse oxidativo, com base nas medidas de Glutationa reduzida (GSH), espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), conteúdo total de carbonilas, atividade das enzimas superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx) e dosagem de proteínas totais, no córtex cerebral, no fígado, nos rins e no coração de ratos normais e hiperglicêmicos. Para este trabalho, foram utilizados 70 ratos Wistar machos, provenientes do biotério da Universidade Federal de Santa Maria, separados aleatoriamente em cinco grupos diabéticos, induzidos por estreptozotocina (STZ) e cinco grupos não diabéticos, com sete animais por grupo. Os grupos normoglicêmicos e hiperglicêmicos receberam diariamente, por gavagem intragástrica, as seguintes substâncias: grupos controles receberam água, os grupos RSV receberam 1mg/kg de massa corporal, os grupos HP-β-CD receberam concentração de HP-β-CD equivalente àquela presente no complexo, os grupos complexo (RCD) receberam 1mg/kg e os grupos etanol (E) receberam solução de etanol a 15%. Os animais foram mortos, após dois meses de tratamento e com 12 horas em jejum, por decapitação, sem anestesia. De acordo com os dados obtidos, concluiu-se que o tratamento com HP-β-CD provocou uma queda das moléculas antioxidantes endógenas. Quando complexada ao RSV, tal queda foi menor, indicando uma proteção exercida pelo RSV ao dano causado pelo veículo, neste caso a HP-β-CD. Nas medidas de TBARS, observou-se que ocorreu uma queda nos grupos RSV e HP-β-CD o que indica um comportamento de proteção à lipoperoxidação.

Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-16T18:42:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ClaudiaGrigoloPinto.pdf: 1229176 bytes, checksum: fb57d89db2a6f400f78549c1b5a04a7c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-16T18:42:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ClaudiaGrigoloPinto.pdf: 1229176 bytes, checksum: fb57d89db2a6f400f78549c1b5a04a7c (MD5) Previous issue date: 2014-03-31 / The use of nanoparticles as carriers of drugs has been widely studied. These include cyclodextrins (CDs), cyclic oligosaccharides that allow the formation of inclusion complexes with lipohilic substances such as resveratrol (RSV). RSV is a polyphenol with antioxidant characteristics; when consumed, a great part is excreted, while the remainder is quickly metabolized in the body. The anti-inflammatory, antioxidant and preventive of metabolic diseased properties such as diabetes, stimulate the complexation of RSV to the hydroxypropyl-beta-cyclodextrin (HP--CD), thus enabling the increase of the bioavailability of an orally RSV. Hyperglycemia, a marker by which diabetes is diagnosed, promotes increased production of species reactive to oxygen by various routes that lead to cell damage and potentially to cell death. The oxidative stress parameters can be determined through certain techniques. The reduction in the amount or in the activity of endogenous antioxidant defenses is and indicative of oxidant injury and may, therefore, is considered as an excellent marker of oxidative stress. In this context, nanotechnology can contribute to the development of new therapeutic approaches for various diseases, including diabetes. The objective of this study is to investigate the in vivo effects of free and complex resveratrol to HP--CD on parameters of oxidative stress, based on the measurements of GSH, TBARS, total content of carbonyls, activity of SOD, CAT and GPx enzymes and determination of total protein in the cerebral cortex, liver, kidney and heart of normal and hyperglycemic rats. For this study, 70 male Wistar rats were used, form the vivarium of the Federal University of Santa Maria, randomly divided into five diabetic groups induced by streptozotocin (STZ), and five non-diabetic groups with seven animals per group. The hyperglycemic and normoglycemic groups daily received, through intragastric gavage, the following substances: water (control groups), free RSV in concentration of 1mg/kg (RSV groups), concentration of HP--CD equivalent to that present in complex (HP--CD groups), RSV complexed to the cyclodextrin at a concentration of 1 mg/kg body weight (complex groups) and a solution of 15% ethanol (ethanol group). After two months of treatment and 12 hours fasting, the animals were killed by decapitation. According to the data obtained, it was found that treatment with HP--CD caused a decrease of endogenous antioxidant molecules. When complexed to RSV, this decrease was lower; indicating a protective effect by RSV to the damage caused by the medium, in this case HP--CD. In the measurements of TBARS it was observed that there was a decrease in the RSV group and HP--CD, indicating a protective behavior to lipid peroxidation. / O emprego de nanopartículas como carreadores de fármacos vem sendo vastamente estudado. Entre elas, estão as ciclodextrinas (CDs), que são oligossacarídeos cíclicos que permitem a formação de complexos de inclusão com substâncias lipofílicas, como o resveratrol (RSV). O RSV é um polifenol com características antioxidantes; quando consumido, há uma grande parte excretada, enquanto o restante é rapidamente metabolizado no organismo. As propriedades antioxidantes, anti-inflamatórias e preventivas de doenças metabólicas, como o diabetes, estimulam a complexação do RSV à hidróxi-propil-beta-ciclodextrina (HP--CD), possibilitando, dessa forma, o aumento da biodisponibilidade do RSV por via oral. A hiperglicemia, marcador por meio do qual se diagnostica o diabetes, promove aumento na produção de espécies reativas de oxigênio por diversas rotas, que levam a lesões celulares e potencialmente à morte celular. Os parâmetros de estresse oxidativo podem ser determinados através de diversas técnicas. A redução da quantidade ou da atividade das defesas antioxidantes endógenas é indicativa de lesão oxidante, podendo, portanto, ser considerada como excelente marcador de estresse oxidativo. Nesse contexto, a nanotecnologia pode contribuir para o desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas para diversas doenças, entre elas o diabetes. O objetivo deste trabalho é investigar o efeito in vivo do resveratrol livre e complexado à HP-β-CD sobre parâmetros do estresse oxidativo, com base nas medidas de Glutationa reduzida (GSH), espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), conteúdo total de carbonilas, atividade das enzimas superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx) e dosagem de proteínas totais, no córtex cerebral, no fígado, nos rins e no coração de ratos normais e hiperglicêmicos. Para este trabalho, foram utilizados 70 ratos Wistar machos, provenientes do biotério da Universidade Federal de Santa Maria, separados aleatoriamente em cinco grupos diabéticos, induzidos por estreptozotocina (STZ) e cinco grupos não diabéticos, com sete animais por grupo. Os grupos normoglicêmicos e hiperglicêmicos receberam diariamente, por gavagem intragástrica, as seguintes substâncias: grupos controles receberam água, os grupos RSV receberam 1mg/kg de massa corporal, os grupos HP-β-CD receberam concentração de HP-β-CD equivalente àquela presente no complexo, os grupos complexo (RCD) receberam 1mg/kg e os grupos etanol (E) receberam solução de etanol a 15%. Os animais foram mortos, após dois meses de tratamento e com 12 horas em jejum, por decapitação, sem anestesia. De acordo com os dados obtidos, concluiu-se que o tratamento com HP-β-CD provocou uma queda das moléculas antioxidantes endógenas. Quando complexada ao RSV, tal queda foi menor, indicando uma proteção exercida pelo RSV ao dano causado pelo veículo, neste caso a HP-β-CD. Nas medidas de TBARS, observou-se que ocorreu uma queda nos grupos RSV e HP-β-CD o que indica um comportamento de proteção à lipoperoxidação.

O resveratrol, um polifenol de origem natural, é descrito como uma substância antiinflamatória, antioxidante, cardioprotetora e anticancerígena. Diversos estudos comprovam a atividade imunomodulatória do resveratrol in vitro e in vivo, estimulando ou diminuindo a secreção de citocinas envolvidas na resposta Th1/Th2. Além do uso em vacinas como adjuvantes, a descoberta de novas substâncias imunomodulatórias pode ser aplicada na profilaxia e tratamento de doenças imunodegenerativas com perda da tolerância sistêmica ou periférica. O objetivo desse estudo é relacionar o efeito modulador do resveratrol em ensaios de endocitose em macrófagos e de secreção de citocinas IL-6(produção de IgA) e IL-10(resposta Th2 e tolerância em mucosas) com a produção de anticorpos anti-ova IgG e IgA após imunização via-oral. Os resultados obtidos demonstraram que in vitro, houve aumento da endocitose em macrófagos e diminuição na secreção de IL-6 pelas células isoladas de placas de peyer em concentrações abaixo de 50 µM de resveratrol. Após a administração oral de resveratrol de 5 mg e 10 mg/kg observou-se o aumento significativo da secreção de IL-10 em esplenócitos isolados de camundongos Balb/C. Nos grupos imunizados com 1 mg de ovalbumina/animal e resveratrol (5 mg e 10 mg/kg) via oral 2 vezes, com 14 dias de intervalos, houve aumento significativo da produção de IgG sérico em relação ao grupo imunizado somente com ovalbumina. Porém a produção de IgA sérico e em lavado intestinal diminuiu, indicando um possível aumento da tolerância oral. Esses resultados demonstram o efeito imunomodulador do resveratrol in vitro/in vivo e a necessidade de maiores estudos sobre o uso desta substãncia como adjuvante de vacinas ou uma droga imunossupressora de mucosa. / Resveratrol, a polyphenol of natural origin, is described as a substance-inflammatory, antioxidant, cardioprotective and anticancer. Several studies have demonstrated the immunomodulatory activity of resveratrol in vitro and in vivo, stimulating or decreasing the secretion of cytokines involved in Th1/Th2 response. Besides the use as adjuvants in vaccines, the discovery of new immunomodulatory substances can be applied for prophylaxis and treatment of diseases imunodegenerativas with loss of peripheral tolerance or systemic. The aim of this study is to relate the modulating effect of resveratrol on tests of endocytosis in macrophages and secretion of IL-6 (IgA production) and IL-10 (Th2 response and mucosal tolerance) with the production of anti-ova IgG and IgA after oral immunization route. The results of in vitro tests showed an increase of endocytosis in macrophages and decrease in IL-6 secretion by cells isolated from Peyer\'s patches at concentrations below 50 mM of resveratrol. After oral administration of resveratrol 10 mg / kg was observed to significantly increase the secretion of IL-10 in splenocytes isolated from Balb / C. In groups immunized with 1 mg ovalbumin / animal and resveratrol (5 mg and 10 mg / kg) orally two times with 14 days intervals, significant increase of IgG level in relation to the group immunized with ovalbumin only. But the production of IgA in serum and intestinal lavage decreased, indicating a possible increase in oral tolerance. These results demonstrate the immunomodulatory effect of resveratrol in vitro / in vivo and the need for more studies on substance use as a vaccine adjuvant or immunosuppressive drugs mucosa.