Autism is a complex disorder with possible genetic, epigenetic and environmental components. As the etiology remains uncertain and an increase in incidence is suspected, the involvement of possible environmental risk factors has gained increasing attention. With this thesis, I aim to provide tools for assessing such risk factors. Firstly, I aim to construct a questionnaire for the analysis of an environmental component in the etiology of autism. Secondly, I aim to assess the importance of prenatal exposure to metals in certain diseases and thirdly I aim to construct a methodology enabling the analysis of the mitochondrial epigenome, which is especially interesting in relation to autism as mitochondrial diseases occur more frequently in an autistic population than in the general population. For the creation of the questionnaire the scientific literature was reviewed. The resulting questionnaire contains general, prenatal, neonatal and paternal risk factors. The metal analysis was conducted on the cord blood of patients who later developed autism, antinuclear antibodies positive rheumatoid arthritis or diabetes, which were then compared to healthy control subjects. My findings propose a link between elevated levels of cord blood cadmium or aluminum and rheumatic arthritis. In addition, elevated aluminum levels might be associated with autism. In regards to the analysis of the mitochondrial epigenome, to my knowledge, no standard protocol exists with frozen human whole blood as a source. In this thesis, I succeeded in creating the basis for such a protocol, however still needing several small modifications for an increased overall yield.

INTRODUÇÃO: A utilização dos anti-TNF no tratamento da artrite reumatoide é uma realidade cada vez mais frequente. Estudos de eficácia e efetividade têm trazido resultados de grande valor clínico. No entanto, a maneira como os diferentes desenhos de estudos são conduzidos pode mostrar resultados conflitantes. OBJETIVO: Avaliar o uso dos anti-TNF no tratamento da artrite reumatoide, comparando estudos de eficácia e efetividade. MÉTODOS: Rever sistematicamente a literatura sobre o assunto com as seguintes etapas: 1) Busca na base de dados eletrônica Pubmed; 2) Armazenamento e avaliação por título e resumo dos estudos selecionados com auxílio do aplicativo ZOTERO, versão 3.0.8; 3) Avaliação da qualidade de 39 estudos de eficácia e 06 de efetividade, utilizando a ferramenta GRADE; 4) Extração dos dados referentes aos desfechos ACR50, ACR70 e DAS28; 5) Análise dos dados extraídos. RESULTADOS: Para todos os desfechos analisados, em ambos os tipos de estudo, a síntese metaanalítica demonstrou que a terapia associada dos biológicos com MTX ou outro DMARD beneficiou o tratamento da doença. Nos estudos de eficácia, as sínteses meta-analíticas foram: ACR50: 1,64 (IC95% 1,57 a 1,72); ACR70: 1,92 (IC95% 1,80 a 2,06); remissão pelo DAS28: 1,78 (IC95% 1,67 a 1,90). Nos estudos de efetividade: ACR50: 1,29 (IC95% 1,04 a 1,59); ACR70: 1,27 (IC95% 1,05 a 1,52); remissão pelo DAS28: 1,36 (IC95% 1,18 a 1,57). Na comparação indireta dos três biológicos entre si, os valores das sínteses meta-analíticas dos riscos relativos aos DMARDs apresentou sobreposição dos intervalos de confiança, sugerindo que a magnitude do benefício é semelhante entre os anti-TNF. A análise de sensibilidade mostrou, que os estudos com cegamento placebo, com melhor qualidade, com pacientes em fase mais adiantada da doença e com menor tempo de acompanhamento dos pacientes, apresentaram valores maiores de benefício dos biológicos. CONCLUSÃO: Este estudo permitiu observar que o benefício dos biológicos está presente tanto nos estudos de eficácia quanto nos de efetividade. Entretanto, as diferenças observadas sugerem que, no mundo real da assistência ao paciente, o benefício dos anti-TNF seja menor do que o sugerido nos ensaios randomizados / INTRODUCTION: The use of anti-TNF in the treatment of rheumatoid arthritis is an increasingly common reality. Efficacy and effectiveness studies has brought results of great clinical value, but how different study designs are conducted can show conflicting results. OBJECTIVE: Evaluate the use of anti-TNF in the treatment of rheumatoid arthritis, comparing studies of efficacy and effectiveness. METHODS: Systematically review the literature about the subject, with the following steps: 1) Searching electronic databases of Pubmed; 2) Storage and evaluation by title and summary of selected studieds with aid of the Zotero version 3.0.8 application software; 3) Evaluation of quality of 39 studies of efficacy and 06 studies of effectiveness, using the GRADE tool; 4) Data extraction of ACR50, ACR70 and DAS28 outcomes; 5) Analysis of the extracted data. RESULTS: For all analyzed outcomes in both types of studies, a meta-analytic synthesis demonstrated that the associated therapy of the biologicals agents with MTX or other DMARD benefited the treatment of disease. In efficacy studies, the metaanalytic syntheses were: ACR50: 1.64 (CI95% 1.57 to 1.72); ACR70: 1.92 (CI95% 1.80 to 2.06); DAS28 remission: 1.78 (CI95% 1.67 to 1.90). In effectiveness studies: ACR50: 1.29 (CI95%1.04 to 1.59); ACR70: 1.27 (CI95%1.05 to 1.52); DAS28 remission: 1.36 (CI95%1.18 to 1.57). In the sensitivity analysis of RCTs for indirect comparison of the three biological agents each other, the values of the meta-analytic synthesis of the relative risks to DMARDs had overlapping confidence intervals, suggesting that the magnitude of benefit is similar between anti-TNF. The sensitivity analysis showed that studies with blinded placebo, studies with better quality, studies in patients with more advanced stage of the disease and studies with shorter follow-up of patients showed higher values of biological benefit. CONCLUSION: This study lead to the observation that the benefit of biologics is present in both studies of efficacy and effectiveness. However, suggests that in the real world, patient care benefit of the anti-TNF is smaller than suggested by randomized trials

Introdução: A artrite reumatóide (AR) é uma artropatia autoimune, de caráter inflamatório, com prevalência em torno de 1% da população. O tabagismo é considerado o principal fator de risco para o desenvolvimento da AR. O receptor de hidrocarbonetos de arila (AhR), um fator de transcrição intracelular ativado por hidrocarbonetos aromáticos componentes da fumaça do cigarro, foi identificado como alvo de regulação da diferenciação de células Th17. Objetivos: Avaliar se os polimorfismos genéticos do AhR estariam associados ao desenvolvimento da AR , e se este receptor estaria mais expresso em pacientes com AR. Pacientes e Métodos: Nós analisamos sete polimorfismos genéticos por mudança de única base (SNP) por PCR em tempo real utilizando sondas TaqMan em 138 pacientes com AR e 129 indivíduos saudáveis. A quantificação da expressão do mRNA do AhR em células mononucleares isoladas de pacientes com AR e indivíduos saudáveis foi realizada por PCR em tempo real. Resultados: Identificamos que haplótipos formados por SNPs no AhR estariam associados com desenvolvimento da AR, podendo ser fator protetor ou de risco para a doença. Em adição, os pacientes com haplótipos de risco apresentavam doença com índice de atividade elevado, principalmente quando o tabagismo estava presente. De fato, pacientes com AR apresentaram aumento na expressão de AhR (mRNA) em relação a indivíduos saudáveis. Conclusões: Em conjunto estes resultados sugerem que o AhR possui um papel importante para o desenvolvimento da artrite reumatóide. Possivelmente mutações neste receptor podem estar relacionadas com alterações na sua atividade e conseqüentemente na diferenciação de células Th17 e a susceptibilidade a AR. / Introduction: Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic autoimmune arthropaty with inflammatory characteristics and prevalence around 1% in the population. Tabagism is the main risk factor to RA development. The aryl hydrocarbon receptor (AhR) is an intracellular transcription factor activated by aromatic hydrocarbons present in smoking, whichwas identified to be a target of regulation of Th17 differentiation. Purpose: Study the relationship of genetic polymorphisms in AhR with RA development, and if this receptor expression is upregulated in RA patients. Patients and Methods: We analyzed seven genetic single nucleotide polymorphisms by Real-Time PCR using TaqMan probes in 138 patients with Rheumatoid Arthritis and 129 healthy controls. The AhR mRNA quantization in mononuclear cells isolated from AR patients and healthy controls has been done by Realt-Time PCR. Results: We identified that AhR haplotypes were associated with RA development and that they could be protector or risk factors to disease. In addition, patients with risk haplotypes showed higher disease activity index, mainly when smoking was present. Indeed, patients with RA showed upregulation in the AhR expression (mRNA) when compared with healthy controls. Conclusions: These results suggest that AhR has an important role in AR development. Probably, mutations in this receptor could be related with alterations in its activity and consequently in the differentiation of Th17 cells and RA susceptibility.

INTRODUÇÃO: A diminuição da massa óssea e mudanças na composição corporal são comuns em pacientes com artrite reumatóide, particularmente nos usuários de glicocorticóide (GC). OBJETIVO: Analisar o comprometimento dos componentes da composição corporal e densidade mineral óssea (DMO) na artrite reumatóide (AR) e seus aspectos clínicos. MÉTODOS: 83 mulheres com AR realizaram densitometria óssea para análise de massa óssea total e regional e estudo da composição corporal (CC). Além disso, foram submetidas à realização laboratorial de provas inflamatórias, dosagem de fator reumatóide e aplicados questionários para avaliação da atividade da doença, classe funcional, atividade física, e inquérito alimentar. RESULTADOS: A prevalência de osteoporose nas pacientes menopausadas foi de 21,4%, 46,4% com osteopenia e 32,1% com valores normais e ocorreu de forma semelhante em coluna lombar e colo do fêmur. As mulheres na pré-menopausa apresentaram maiores valores nas médias de DMO. A idade teve efeito negativo nas medidas DMO e de CC enquanto que o índice de massa corpórea (IMC) mostrou efeito positivo nestas variáveis. A atividade física apresentou efeito positivo na DMO de fêmur total. A duração da AR teve efeito negativo na DMO de coluna lombar. O GC foi o determinante negativo na massa magra total e aumentou o percentual de gordura. CONCLUSÕES: O achado de valores reduzidos de DMO sugere que devam ser aplicadas medidas para a prevenção e tratamento de osteoporose. A doença (AR) também influenciou negativamente a DMO nestas pacientes e a utilização de GC modificou a CC, reduzindo a massa muscular e aumentando o percentual de gordura. A preservação da massa muscular é importante ao equilíbrio das pacientes, com conseqüente diminuição de quedas e futuras fraturas. / INTRODUCTION: The reduction of bone mass and changes in body compositions are usual in patients with rheumatoid arthritis specialty in users of glucocorticoid (GC). OBJECTIVE: To evaluate the bone mineral density (BMD) and body composition (BC) including its correlation to factors of rheumatoid arthritis (RA) and clinics concerns. METHODS: BMD and body composition (total and regional) were measured by densitometry in 83 patients with RA. Furthermore, it was performed laboratory exams (rheumatoid factor, inflammatory exams) and activity of disease, functional class, physical activity and alimentary data were colleted by specific questionnaires. RESULTS: The prevalence of osteoporosis in menopausal patients was 21,4%, 46,4% of osteopenia and 32,1% were normal and osteoporosis was similar in lumbar spine and femoral neck. Premenopausal women had the biggest values of BMD medias. Dose of GC was negative determinant of total lean mass and made positive effect in total fat percentual. Age made negative effect in BMD and body composition. BMI showed positive effect in all CC variables. The physical activity made positive effect in BMD in total femur. The RA duration had negative effect in BMD in lumbar spine. CONCLUSIONS: The finding of low BMD suggests a better approach to prevention and treatment. The disease (RA) also made a negative influence in BMD in these patients and the use of GC cause changes in body composition, with reduction in lean mass and improvement of total fat percentual. Recommendations to preservation of lean mass are important to reduction of falls and consequent diminution of fractures.

Introdução: recentemente, foi descrita a ação do abatacepte (ABA) na redução nos níveis de imunoglobulinas (Ig) plasmáticas em pacientes com artrite reumatoide (AR). No entanto, a possível associação destes resultados com infecções não foi avaliada até o presente momento. Objetivos: comparar os níveis totais de Igs, suas frações (IgG, IgM, IgA) e das cadeias leves (kappa e lambda) em pacientes com AR em uso de ABA vs. agentes anti-TNF semestralmente, durante 24 meses de uso, e correlacioná-los com a presença de infecções. Método: dezoito pacientes consecutivos com AR tratados abatacepte (ABA-AR) foram comparados com 18 pacientes com AR tratados com anti-TNF (aTNF-AR). Dados clínicos, laboratoriais e dosagens de imunoglobulinas total, suas frações (IgG, IgM, IgA) e das cadeias leves (kappa e lambda) foram obtidos a cada seis meses até o tempo total de 24 meses. Foi feito screening sistemático para presença de infecções. Os critérios de exclusão foram: uso prévio de abatacepte/rituximabe e hipogamablobulinemia basal (< 0,7 g/dL). Resultados: no baseline, as medianas da idade (55 vs. 53 anos, P = 0,92), porcentagem de gênero feminino (78 vs. 78%, P = 1,0), comorbidades (28 vs. 28%, P = 1,0), DAS-28 (5,73 vs. 5,67, P = 0,93), HAQ (1,5 vs. 1,13, P = 0,1), VHS (21,5 vs. 22 mm/1ahora, P = 0,49), PCR (15,5 vs. 12 mg/dL, P = 0,43) e contagem de linfócitos (2.200 vs. 1.800/mm3, P = 0,18) foram semelhantes entre os grupos ABA-AR e aTNF-AR, assim como as medianas da gamaglobulina total (1,4 vs. 1,35 g/dL, P = 0,74), IgG (1.168 vs. 1.079 mg/dL, P = 0,46), IgM (107 vs. 113mg/dL, P = 0,38), IgA (333 vs. 322 mg/dL, P = 0,71), kappa (342 vs. 249 mg/dL, P = 0,39) e lambda (170 vs. 150 mg/dL, P = 0,20). No grupo ABA-AR, após seis meses de uso, houve uma queda dos níveis séricos de gamaglobulina total (1,4 vs. 1,05 g/dL, P < 0,001), IgG (1.168 vs. 997 mg/dL, P < 0,001), IgA (333 vs. 278 mg/dL, P < 0,001), kappa (342 vs. 257 mg/dL, P < 0,001) e lambda (170 vs. 144 mg/dL, P < 0,001). Esses níveis permaneceram estáveis dos seis meses até os 24 meses de tratamento (P > 0,05). Em contraste, no grupo aTNF-AR, não houve alteração nos níveis séricos da gamaglobulina total, suas frações e cadeias leves (P > 0,05) em nenhum momento. A variação negativa da gamaglobulina total, IgG, IgM, IgA, kappa e lambda no grupo ABA-AR foi diferente do grupo aTNF-AR (P < 0,05) em todas as avaliações. No entanto, a frequência de infecções foi semelhante entre os grupos (77,8 vs. 88,9%, P = 0,66) e não se associou às variações da gamaglobulina total, de suas frações ou das cadeias leves em nenhum dos dois grupos. Não houve infecções graves durante o período do estudo. Conclusão: o presente estudo demonstra que o abatacepte, mas não os aTNFs, induz uma queda nos níveis de imunoglobulina total, suas frações e cadeias leves nos primeiros seis meses de uso, com estabilidade nos níveis até 24 meses. No entanto, essa queda não está relacionada ao aumento da frequência de infecções nesse grupo de pacientes / Objective: to evaluate the influence of abatacept on gamma-globulin levels in comparison to anti-TNF treatment and correlate these effects with infections frequency in rheumatoid arthritis (RA) patients. Methods: eighteen consecutive RA patients undergoing abatacept (ABA-RA) were compared to 18 patients treated with anti-TNF (aTNF-RA) agents with similar ages. Clinical and laboratory data, total, specific (IgG, IgM, IgA) gamma-globulin and free light chains (FLC) levels were assessed before and every six months during biologic treatment, up to 24 months. Systematic clinical screening protocol for infection was performed. Exclusion criteria were previous abatacept/rituximab treatments and low gamma-globulin level ( < 0.7 g/dL). Results: at baseline, median age (55 vs. 53 years, P = 0.92), female gender (78 vs. 78%, P = 1.0), co morbities (28 vs. 28%, P = 1), DAS-28 (5.73 vs. 5.67, P = 0.93), HAQ (1.5 vs. 1.13, P = 0.1), ESR (21.5 vs. 22mm/1sth, P = 0.49), CRP (15.5 vs. 12mg/dL, P = 0.43) and lymphocyte count (2,200 vs. 1,800/mm3, P = 0.18) were comparable in ABA-RA and aTNF-RA. Medians of gamma-globulin (1.4 vs. 1.35g/dL, P = 0.74), IgG (1,168 vs. 1,079mg/dL, P = 0.46), IgM (107 vs. 113mg/dL, P = 0.38), IgA (333 vs. 322mg/dL, P = 0.71), kappa (342 vs. 249mg/dL, P = 0.39), lambda (170 vs. 150mg/dL, P = 0.20) were also alike. In ABA-RA, total gamma-globulin (1.4 vs. 1.05 g/dL, P < 0.001), IgG (1,168 vs. 997 mg/dL, P < 0.001), IgA (333 vs. 278 mg/dL, P < 0.001), kappa (341.5 vs. 257 mg/dL, P < 0.001), lambda (169.5 vs. 144.3 mg/dL, P < 0.001) levels decreased after six months in comparison to baseline values and persisted stable up to 24 months (P > 0.05). In contrast, in aTNF-RA no decrease in total, specific gamma-globulin levels or FLC was seen (P > 0.05). The negative variation of gamma-globulin, IgG, IgM, IgA, kappa and lambda levels in ABA-RA was different from aTNF-RA (P < 0.05) at all evaluations. However, the infection rates (77.8 vs. 88.9%, P = 0.66) were similar and not associated to variations in total or specific gamma-globulin levels in any group. No severe infection was observed. Conclusion: these comparative data demonstrate that ABA, but not the aTNF, induces a non-progressive and mild, but significant reduction in gamma-globulin levels. We further demonstrated that this alteration is not clinically relevant since it is not associated with increased infection rate

A artrite idiopática juvenil frequentemente afeta a articulação temporomandibular, compromete o crescimento facial e pode ser fator de risco para cáries e doenças periodontais. Entretanto, são escassos os estudos que avaliam em conjunto todas essas alterações. O objetivo deste estudo foi avaliar a condição dentária, as características faciais e a articulação temporomandibular de 35 pacientes com artrite idiopática juvenil, evolução poliarticular, tratados em hospital escola, comparativamente a um grupo controle de 35 crianças saudáveis. O estudo constou de avaliação sistemática das estruturas dentárias, orais e faciais através de: questionário de anamnese, índice CPO-D, índice de placa, índice de sangramento gengival, relação dentária, perfil facial, índice de Helkimo e classificação das alterações condilares observadas nas radiografias panorâmicas da face. A idade média foi de 11,4±3,47 e 10,4±2,56 anos, respectivamente para os grupos estudo e controle. No grupo com artrite idiopática juvenil estiveram significativamente presentes, comparativamente ao grupo controle: o perfil facial convexo (p=0,002); os ruídos articulares (p=0,040); a disfunção da articulação temporomandibular (p=0,003); a limitação da abertura bucal (p=0,001), a mobilidade mandibular gravemente comprometida (p=0,001) e a dor à palpação articular e dos músculos da mastigação (p=0,001). O índice CPO-D dos pacientes com artrite idiopática juvenil com 3 a 8 articulações de membros superiores comprometidas pela doença foi estatisticamente diferente que o do grupo controle (p=0,036), no entanto os índices de placa e de sangramento gengival, em números absolutos foram maiores no grupo com artrite idiopática juvenil, embora sem diferenças estatisticamente significativas, havendo aumento progressivo desses índices à medida que aumentaram o número de articulações de membros superiores comprometidas pela artrite idiopática juvenil. Ao exame radiográfico a prevalência da alteração do côndilo mandibular foi estatisticamente diferente no grupo com artrite idiopática juvenil (p=0,041), sendo de grau 2 as alterações mais freqüentes (p=0,010). Este estudo mostrou que os pacientes com artrite idiopática juvenil avaliados têm alterações faciais e mandibulares graves, que podem ser atribuídas aos efeitos diretos da doença na articulação temporomandibular. Por outro lado, a maior freqüência de doenças dentárias e gengivais que apresentaram pode ser atribuída, em parte, como efeito secundário da artrite idiopática juvenil na saúde oral / The juvenile idiopathic arthritis frequently affects the temporomandibular joint, compromises the facial growth and can be factor of risk to tooth decay and gingival diseases. However, there are few studies that correlate all those alterations. The aim of this study was to evaluate the dental condition, facial characteristics and the temporomandibular joint of the 35 patients with juvenile idiopathic arthritis treated in a large teaching hospital, comparatively with a control group of 35 healthy children. The study consisted of systematic evaluation of their dental, oral, and facial structures, through: anamnesis questionnaire, DMFT index, plaque and gingival bleeding index, dental relationship, facial profile, Helkimo\'s index and classification of condilar alterations observed in ortopanthomography. The mean age was 11.4±3.47 and 10.4±2.56 years, respectively to the study group and control group. In the juvenile idiopathic arthritis group were significantly presents, comparatively with a control group: the convex facial profile (p=0.002); joint noise (p=0.040), temporomandibular joint dysfunction (p=0.003); limited of mouth opening (p=0.001); mandibular mobility severely impaired (p=0.001) and the articular and masticatory muscles palpation pain (p=0.001). The DMFT index of juvenile idiopathic arthritis patients with 3 to 8 affected joints in superior limbs, was statistically different that control group (p=0.036), however the plaque and gingival bleeding indexes, were higher in juvenile idiopathic arthritis group, although without statistically significant difference, with progressive increase in these index, in proportion to a higher number of superior limbs joints involved by juvenile idiopathic arthritis. In accordance with the radiographic evaluation, the incidence of condilar alteration was statistically different in juvenile idiopathic arthritis group (p=0.041), and the grade 2 was the most frequent alterations (p=0.010). This study showed that the patients with juvenile idiopathic arthritis evaluated have severe facial and mandibular alterations what can be a direct effect of the disease in the temporomandibular joint. And also, the higher frequency of dental and gingival diseases can be considered, as a secondary effect of juvenile idiopathic arthritis on oral health

Base teórica: A artrite reumatoide (AR) é uma doença autoimune sistêmica onde a inflamação crônica da sinóvia articular e a subsequente erosão óssea e da cartilagem resultam em destruição articular, dor e incapacidade funcional. Apesar dos recentes progressos no tratamento da AR, estes ainda apresentam limitações e significativos efeitos adversos, salientando a necessidade de novas estratégias terapêuticas. Plantas da família das Amarilidáceas apresentam em seus bulbos um conjunto de alcaloides muito característicos e exclusivos com atividades farmacológicas, tais como atividade antiviral, anti-inflamatória e atividade anticolinérgica. A montanina é um alcaloide isolado da Rhodophiala bífida, uma planta da família das amarilidáceas utilizada na medicina popular, mas nunca antes testada como terapia para doenças inflamatórias. Objetivo: Avaliar o efeito da montanina como uma terapia anti-inflamatória in vivo em dois modelos de artrite e in vitro sobre a proliferação de linfócitos e sobre a invasão de fibroblastos sinoviais (FLS). Métodos: Artrite induzida por antígeno (AIA) foi realizada em camundongos Balb/C com albumina bovina sérica metilada e a nocicepção e a migração de leucócitos para a articulação do joelho foram os parâmetros avaliados. Artrite induzida por colágeno (CIA) foi realizada em camundongos DBA/1J e o desenvolvimento e severidade da artrite foi avaliado através de escore clínico, nocicepção articular e escore histológico. Montanina foi administrada via intraperitoneal, duas vezes ao dia. A proliferação de linfócitos estimulados por concanavalina A (conA) foi realizada pelo método de MTT e invasão de FLS em 24 horas foi avaliada em um sistema de insertos de Matrigel. Resutados: A administração de montanina diminuiu a migração articular de leucócitos (p0,001) e a nocicepção (p0,01) em camundongos com AIA. Em camundongos com CIA, o tratamento com montanina reduziu a severidade da artrite e o dano articular avaliado pelos escores clínico (p0,01) e histológico (p0,05) e melhorou a nocicepção articular (p0,05), sem causar nenhum dano hepático. Além disso, montanina inibiu in vitro a proliferação de linfócitos estimulados com conA (p0,01) e diminuiu a invasão de FLS (p0,05) em 54%, com uma ação independente de citotoxicidade. Conclusão: Esses resultados indicam que a montanina pode ser explorada para se tornar um possível fármaco para o tratamento de doenças inflamatórias e autoimunes, como a AR. / Background: Rheumatoid arthritis (RA) is an autoimmune and systemic disease where the chronic inflammation of articular synovia and the subsequent bone and cartilage erosion results in joint destruction, pain and functional disability. Despite recent progress in RA treatments, its still have limitations and significant side effects, emphasizing the need of new therapeutic strategies. Amaryllidaceae plants presenting at its bulbs a set of very characteristics and exclusives alkaloids with pharmacological activities such as antiviral, anti-inflammatory and anticholinergic activity. Montanine is an alkaloid isolated from the Rhodophiala bifida, an Amaryllidaceae plant used in alternative medicine but never before tested as a therapy for inflammatory diseases. Objective: To evaluate the effect of montanine as an in vivo anti-inflammatory therapy in two arthritis models and in vitro on lymphocytes proliferation and fibroblast-like synoviocytes (FLS) invasion. Methods: Antigen-induced arthritis (AIA) was performed in Balb/C mice with methylated bovine serum albumin and nociception and leukocytes migration into the knee joint were evaluated. Collagen-induced arthritis (CIA) was performed in DBA/1J mice and arthritis development and severity were assessed by clinical scoring, articular nociception and histological scoring. Montanine was administered intraperitoneally twice a day. Lymphocyte proliferation stimulated by concanavalin A in 48 hours was performed with MTT assay and FLS invasion in 24 hours was assayed in a Matrigel-coated transwell system. Results: Administration of montanine decreased leukocyte articular migration (p0.001) and nociception (p0.01) in mice with AIA. In mice with CIA, treatment with montanine reduced severity of arthritis and joint damage assessed by clinical (p0.01) and histological score (p0.05) and ameliorates articular nociception (p0.05), without causing any hepatic damage. Moreover, montanine inhibited in vitro lymphocyte proliferation stimulated with ConA (p0.01) and decreased FLS invasion by 54% (p0.05), with an action independent of cytotoxicity. Conclusion: These findings suggest that montanine can be explored to become a possible medicament to treat inflammatory and autoimmune diseases such as arthritis.

A Artrite Reumatóide (AR) é uma artropatia autoimune multifatorial com etiologia desconhecida que afeta aproximadamente 1% da população adulta. A estratégia padrão para o tratamento da AR consiste na administração de baixas doses de Metotrexato (MTX), cujo efeito anti-inflamatório está relacionado com a manutenção dos níveis elevados de adenosina (ADO) extracelular. No entanto, uma parte considerável dos pacientes com AR é refratária ao tratamento com MTX e o mecanismo pelo qual este fenômeno ocorre ainda não está totalmente esclarecido. Neste contexto, o presente estudo descreveu que a eficácia terapêutica ao MTX está associada com a expressão em células Tregs da ectoenzima CD39, cuja função biológica é a geração de ADO extracelular via metabolização do ATP. Especificamente, através da realização de um estudo longitudinal, observamos que pacientes respondedores ao MTX (R-MTX) apresentam uma expansão de células Tregs circulantes expressando CD39 após o tratamento com MTX. Por outro lado, identificamos que pacientes não respondedores ao MTX (UR-MTX) possuem uma redução da expressão de CD39 em células Tregs, o que culmina em um comprometimento das suas funções supressoras. Ainda, demonstramos que a expressão de CD39 em células Tregs é um biomarcador apto em predizer a resposta terapêutica ao MTX, visto que pacientes UR-MTX apresentam uma expressão reduzida de CD39 em Tregs mesmo antes do início do tratamento com MTX. Posteriormente, nós investigamos as bases moleculares que acarretam na expressão reduzida de CD39 observada em células Tregs de pacientes URMTX. Demonstramos que a estimulação com TGF-? tanto em células Tregs isoladas quanto diferenciadas in vitro aumenta a expressão de CD39 através da ativação sequencial da seguinte plataforma molecular: receptores de TGF-? (TGFBRII e TGFBRI), transdutor de sinal SMAD2, fator de transcrição CREB, de modo dependente da atividade de p38. Uma vez identificada a via envolvida com a indução da expressão de CD39, demonstramos que células Tregs diferenciadas de indivíduos que apresentam uma expressão reduzida de CD39 são incapazes de induzir a expressão desta ectoenzima através da estimulação com TGF-?. Por fim, transpondo nossos achados para pacientes com AR, observamos que pacientes UR-MTX apresentam uma redução nos níveis de RNAm para TGFBRII e CREB bem como também uma redução das proteínas fosforiladas SMAD2 e CREB em células CD4+ e Tregs, sugerindo que o comprometimento na cascata de sinalização de TGF-?, envolvida com a indução da expressão de CD39 em células Tregs, está associado com a resistência ao MTX. / Rheumatoid arthritis (RA) is an autoimmune multifactorial arthropathy with unknown etiology that affects approximately 1% of the adult population. The standard strategy for RA treatment comprises the administration of low doses of methotrexate (MTX), whose antiinflammatory effects are associated with maintenance of high levels of extracellular adenosine (ADO). However, a considerable proportion of RA patients is resistant to MTX treatment and the mechanisms underlying this phenomenon occurs is poorly understood. Within this context, the present study showed that therapeutic efficacy of MTX is associated with expression on Treg cells of the ectoenzyme CD39, whose function is related to the generation of extracellular ADO by ATP metabolism. Specifically, we conducted a longitudinal study and observed that responsive patients to MTX (R-MTX) exhibit an increase in the frequency of circulating Treg cells expressing CD39 after MTX treatment. On the other hand, we found that non-responsive patients to MTX (UR-MTX) have a reduction of CD39 expression on Treg cells, which culminates in an impairment of Treg function. Furthermore, these findings indicate that CD39 expression on Treg cells is a biomarker for therapeutic response to MTX, since UR-MTX patients had a depressed CD39 expression on Treg cells even before MTX treatment. Subsequently, the present study investigated the molecular mechanisms that would cause the reduction of CD39 expression on Treg cells from UR-MTX patients. For this, we demonstrated that TGF-? stimulation increases CD39 expression in isolated and in vitro differentiated Treg cells through participation/activation of the following molecules: receptors of TGF-?, TGFBRII and TGFBRI, signal transducer SMAD2 and transcription factor CREB, through p38 activity dependent-manner. Once identified these molecules involved with CD39 induction, we demonstrated that differentiated Treg cells from healthy individuals with an intrinsic reduction of CD39 expression on circulating Treg cells are unable to increase CD39 expression by TGF-? stimulation. Transposing our findings to RA patients, we found that UR-MTX patients exhibit a reduction of mRNA for TGFBRII and CREB as well as reduction on levels of phospho-SMAD2 and phospho-CREB in CD4+ and Treg cells, suggesting that an impairment in TGF-? signaling pathway, related to induction of CD39 expression on Treg cells, is associated with MTX resistance.

Introdução A artrite reumatoide (AR) é uma doença crônica autoimune degenerativa, de alta prevalência e alta morbimortalidade, com difícil diagnóstico em todo o mundo. O seu pronto diagnóstico e o rápido início com medicamentos modificadores do curso da doença (MMCD) impactam de forma relevante o prognóstico do paciente. Para alguns pacientes os MMCDs sintéticos não serão eficazes e este paciente deverá receber então um MMCD biológico, medicamento este de alto custo para o paciente e o sistema de saúde. Objetivo - Explorar as trajetórias percorridas na busca por cuidado por pacientes com AR em uso de MMCD biológico no município de São Paulo. Métodos - Pesquisa qualitativa, de caráter exploratório, com orientação analítico-descritiva, mediante entrevistas semiestruturadas com questões abertas, iniciada após prévia aprovação do Comitê de Ética em Pesquisa e consentimento esclarecido dos entrevistados. Os sujeitos são pacientes em uso de MMCD biológico para tratamento de AR dispensados pelo SUS. Foi utilizada a ferramenta do itinerário terapêutico (IT) para entendimento do caminho escolhido por estes pacientes na busca por cuidado em saúde. Resultados e Discussão Entre os entrevistados, a busca de cuidado ocorreu tardiamente, normalmente sem a suspeita de que se tratasse de doença reumática degenerativa. Os primeiros profissionais acessados foram o médico clínico geral ou o ortopedista, que raras vezes investigaram com atenção os sintomas relatados para em seguida proceder o encaminhamento adequado e rápido do paciente para o reumatologista. Nos ITs descritos, os tratamentos na sua maioria são constituídos apenas pelos medicamentos, e sem a participação de outros profissionais no acompanhamento além do reumatologista. Os pacientes entrevistados chegaram até o MMCD biológico após tentativa de controle da doença com os MMCDs sintéticos, conforme descreve o protocolo de tratamento do Ministério da Saúde. Há nos ITs descritos diversos atores representantes da iniciativa privada, que apoiam e influenciam estes pacientes na escolha dos seus caminhos por cuidado de saúde, que devem ser melhor compreendidos em estudos futuros / Introduction Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic degenerative autoimmune disease of high prevalence and with high morbidity and mortality, worldwide difficult to diagnose. Its prompt diagnosis and rapid onset with disease modifying drugs (DMARD) have a relevant impact on the patient\'s prognosis. For some patients, the synthetic DMARDs will not be effective so these patients should receive a biological DMARD - a high cost medication both to the patient and the health system. Objective - To explore the trajectories performed by patients with RA using biological DMARD in the search for care in the city of São Paulo. Methods - Qualitative research, with an exploratory character, with analytical-descriptive orientation, through semi-structured interviews with open questions, initiated after prior approval of the Committee on Ethics in Research and informed consent of the interviewees. The subjects are patients using biological DMARD to treat RA that were dispensed by SUS. The therapeutic itinerary tool (TI) was used to understand the path chosen by these patients in the search for health care. Results and Discussion Among those interviewees, the search for care occurred late, usually without the suspicion that there was a degenerative rheumatic disease. The first accessed professionals were the general practitioner or the orthopedist, who rarely ever investigated the reported symptoms with attention to direct the patient to the rheumatologist quickly. In the described TIs, the treatments are mostly composed only by the medicines, and without the participation of other professionals in the follow-up besides the rheumatologist. The patients interviewed reached the biological DMARDs after an attempt to control the disease with synthetic DMARD, as described in the Ministry of Health recommendations. There are several actors representing the private sector described in the TI\'s, who support and influence the patients in the choice of their care pathways, which should be better understood in future studies

Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O gênero Pterodon pertence à família das Papilonaceas e inclui cinco espécies nativas do Brasil: P. pubescens Benth., P. emarginatus Vog., P. apparicioi Pedersoli e P. abruptus Benth., sendo a espécie objeto deste estudo a P. polygalaeflorus Benth.. Seus frutos são livremente comercializados em mercados da flora medicinal e utilizados pela medicina popular devido a propriedades anti-reumática, analgésica, antiinflamatória, dentre outros efeitos associados a esses frutos. O principal uso popular está relacionado ao efeito antiartrítico que parece se encontrar na fração oleosa do fruto. O objetivo deste trabalho foi avaliar o extrato etanólico de Pterodon polygalaeflorus (EEPpg) quanto ao seu potencial antiinflamatório crônico através do modelo de artrite induzida por colágeno (CIA) e seu efeito sobre os linfócitos in vitro, bem como sobre a expansão de células MAC-1+ induzida por adjuvante completo de Freund (AFC). A caracterização química do EEPpg foi realizada por cromatografia em camada delgada (TLC), cromatografia líquida de alta performance (HPLC) e cromatografia gasosa acoplada a espectrômetro de massa (GC-MS), através dos quais uma gama de compostos, incluindo terpenóides de polaridades variadas e flavonóides, foram observados. No modelo de CIA, o EEPpg reduziu significativamente parâmetros associados ao desenvolvimento e progressão da doença e à severidade da doença , inibindo em até 99% o seu desenvolvimento e levando a ausência de sinais clínicos evidentes após tratamento com as menores doses do extrato (0,01 mg/kg e 0,001 mg/kg). O tratamento com EEPpg também reduziu características histopatológicas típicas de articulações de animais com CIA, que também são observadas na artrite reumatóide. O EEPpg reduziu significativamente o peso dos linfonodos dos camundongos, bem como o número absoluto de segmentados, monócitos e linfócitos no sangue. In vitro, O EEPpg mostrou uma atividade anti-proliferativa dos esplenócitos estimulados com concanavalina A (Con A) ou lipopolissacarídeo (LPS) analisada através do ensaio de redução do sal de tetrazólio MTT, corroborada pelo seu efeito sobre o ciclo celular de linfócitos estimulados com Con A, onde o EEPpg nas concentrações de 5, 10 e 20 &#956;g/mL reduziu significativamente, de maneira concentração-dependente, o número de células nas fases S+G2/M e aumentou na fase G0/G1 do ciclo celular. O efeito anti-proliferativo do EEPpg parece também estar associado ao aumento da apoptose dos linfócitos após estimulação com Con A, com aumento estatisticamente significativo no percentual de células mortas por apoptose nas maiores concentrações . O EEPpg inibiu a expansão de células Mac-1+ induzida por AFC no baço, porém não no peritônio. Esse resultado sugere um efeito inibidor do EEPpg sobre a migração celular para as articulações artríticas. Esses resultados contribuem para a validação do uso popular de P. polygalaeflorus contra doenças relacionadas a processos inflamatórios e imunes, sobretudo na artrite reumatóide, antes nunca demonstrado. / The genus Pterodon belongs to the family Papilonaceas and includes five native species of Brazil: P. pubescens Benth., P. emarginatus Vog., P. apparicioi Pedersoli and P. abruptus Benth., being the object of this study the species P. polygalaeflorus Benth . Its fruits are freely traded in markets and medicinal plants used in folk medicine due to anti-rheumatic, analgesic, antiinflammatory, among other effects associated with these fruits. The main use is related to the popular anti-arthritic effect that seems to be found in oily fraction of the fruit. The aim of this study was to evaluate the ethanol extract of Pterodon polygalaeflorus (EEPpg) for their potential anti-inflammatory chronic through the model of collagen-induced arthritis (CIA) and its effect on lymphocytes in vitro, as well as the MAC-cell expansion 1 + induced by Freund's complete adjuvant (CFA). The chemical characterization of EEPpg was performed by thin layer chromatography (TLC), high-performance liquid chromatography (HPLC) and gas chromatography coupled with mass spectrometry (GC-MS), through which a range of compounds, including terpenoids polarity varied and flavonoids, were observed. In model of CIA, EEPpg significantly reduced parameters associated with the development and progression of disease and disease severity, inhibiting up to 99% its development and leading to the absence of obvious clinical signs after treatment with lower doses of the extract (0,01 mg/kg and 0.001 mg/kg). Treatment with EEPpg also reduced histopathological features typical of arthritic joints that are also observed in rheumatoid arthritis. The EEPpg significantly reduced the weight of the lymph nodes of mice as well as the absolute number of segmented, monocytes and lymphocytes in the blood. In vitro, EEPpg showed an anti-proliferative activity of splenocytes stimulated with concanavalin A (Con A) or lipopolysaccharide (LPS) analyzed by testing to reduce the tetrazolium salt MTT, supported by its effect on the cell cycle of lymphocytes stimulated with Con A, where the EEPpg at concentrations of 5, 10 and 20 mg/mL significantly reduced in concentration-dependent manner, the number of cells in phases S + G2 / M and increased G0/G1 phase of cell cycle. The anti-proliferative EEPpg seems also to be associated with increased apoptosis of lymphocytes after stimulation with Con A, with a statistically significant increase in the percentage of dead cells by apoptosis at higher concentrations. The EEPpg inhibited the expansion of Mac-1 + cells induced by AFC in the spleen but not in the peritoneum. This suggests an inhibitory effect on cell migration by EEPpg into arthritic joints. These results help to validate the popular use of P. polygalaeflorus against diseases related to inflammatory and immune disorders, especially rheumatoid arthritis, never shown before.