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Polimorfismo I/D do gene ECA em pacientes com s?ndrome da Ang?stia respirat?ria aguda (SARA)Dias, Fernando Suparregui 18 January 2008 (has links)
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Previous issue date: 2008-01-18 / O presente estudo tem como objetivo estudar a associa??o entre o polimorfismo I/D do gene ECA com a susceptibilidade e mortalidade relacionada ? SARA, em uma popula??o de pacientes cr?ticos no sul do Brasil. Todos os pacientes cr?ticos admitidos na UTI Geral do Hospital S?o Lucas da PUCRS entre janeiro de 2004 e junho de 2006 foram candidatos ? pesquisa, dos quais foram arrolados 400 indiv?duos. O paciente foi considerado como tendo s?ndrome da ang?stia respirat?ria aguda (SARA) ao preencher os crit?rios do Consenso Americano- Europeu em qualquer momento da interna??o na UTI. De cada paciente foram retirados 5mL de sangue para obten??o de DNA e genotipagem do polimorfismo I/D do gene ECA. A incid?ncia de SARA foi de 11,8%. Os pacientes com SARA foram mais jovens do que os sem SARA (p=0,0001). O escore APACHE II da admiss?o foi semelhante nos grupos de pacientes com (19,3?6,85) e sem SARA (19,4?8,14), e o grau de disfun??o org?nica determinado pelo escore SOFA foi maior entre os pacientes sem SARA no primeiro dia (p=0,007) e depois, durante a primeira semana, entre os pacientes com SARA (dia 2 at? dia 7, p=0,009; p=0,003; p=0,003; p=0,001; p=0,004; p=0,04, respectivamente). Este estudo n?o encontrou nenhuma associa??o entre o polimorfismo I/D do gene ECA e a susceptibilidade ? SARA ou ? mortalidade. A mortalidade na UTI e na interna??o hospitalar foi de 42,5% e de 48,9%, respectivamente.
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Superprodu??o do interferon β1 humano recombinante em escherichia coliVillela, Anne Drumond 26 March 2008 (has links)
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Previous issue date: 2008-03-26 / Interferons s?o prote?nas expressas por diferentes c?lulas humanas e sintetizadas como resposta a muitos agentes qu?micos e biol?gicos. Eles est?o envolvidos em repostas antiviral, antiproliferativa e imunomodulat?ria, atuando na manuten??o da homeostase e na prote??o do organismo contra pat?genos. Devido a essa atividade biol?gica, os interferons s?o atualmente aprovados no mundo inteiro para o tratamento de v?rias desordens virais, malignas e imunol?gicas. Interferon β1, por exemplo, ? uma das poucas subst?ncias que provou ser efetiva na supress?o das manifesta??es da esclerose m?ltipla que ? uma doen?a cr?nica do sistema nervoso central. Ele ? produzido comercialmente em microorganismos como Escherichia coli, utilizando a tecnologia do DNA recombinante e ? chamado de biof?rmaco. As patentes de muitos biof?rmacos originais est?o expirando e uma nova gera??o de mol?culas, chamadas biossimilares, est? em desenvolvimento. O interferon β1 foi aprovado para uso no tratamento da esclerose m?ltipla surtoremiss?o pelo Departamento de Controle de Drogas e Alimentos dos EUA em 1993 e perdeu sua prote??o de patente em 2007, tornando-se um alvo para a produ??o do biossimilar pelas ind?strias farmac?uticas. O desenvolvimento do biossimilar interferon β1 ? uma alternativa para o alto custo do biof?rmaco original. Desenvolvemos um protocolo para produzir grandes quantidades do interferon β1, no qual aproximadamente 3 mg da prote?na recombinante homog?nea podem ser obtidos a partir de 1 g de c?lulas de E. coli Rosetta(DE3). As an?lises por seq?enciamento N-terminal de amino?cidos e espectrometria de massas proveram evid?ncias para a identidade e pureza da prote?na recombinante. A an?lise por cromatografia l?quida de fase reversa demonstrou que o conte?do de deamidados e sulf?xidos foi similar ao padr?o comercial, e nenhuma forma heterog?nea da prote?na rhIFN-β1ser17 foi detectada. A an?lise por cromatografia l?quida de exclus?o molecular demonstrou a aus?ncia de agregados de alta massa molecular e de d?meros. O protocolo desenvolvido poder? ser utilizado para a produ??o do biossimilar pelas ind?strias farmac?uticas e deste modo, diminuir os custos do Minist?rio da Sa?de e dos consumidores com este biof?rmaco.
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Estudos bioqu?micos e nocaute g?nico da enzima uracil fosforribosil transferase de Mycobacterium tuberculosis como alvo para o desenvolvimento de cepas atenuadasVillela, Anne Drumond 09 December 2011 (has links)
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Previous issue date: 2011-12-09 / Tuberculosis (TB) is an infectious disease mainly caused by Mycobacterium tuberculosis, which currently infects one-third of the world s population. Despite the availability of the Bacille Calmette-Gu?rin vaccine and effective short-course chemotherapy, the increasing global burden of TB has been linked to the co-infection with HIV, the emergence of multi, extensively and now totally drug-resistant strains. Furthermore, the capacity of M. tuberculosis to remain viable within infected hosts in a long-term asymptomatic infection is an additional problem for the control of TB. Nucleotides biosynthesis pathways provide promising molecular targets for the development of new vaccines and therapeutic strategies to control the global incidence of TB. Uracil phosphoribosyltransferase (UPRT) catalyzes the conversion of uracil and 5'-phosphoribosyl-a- 1'-pyrophosphate (PRPP) to uridine 5'-monophosphate (UMP) and pyrophosphate (PPi). UPRT plays an important role in the pyrimidine salvage pathway since its product (UMP) is a common precursor of all pyrimidine nucleotides. This work presents cloning, recombinant expression in Escherichia coli, and purification of the upp-encoded M. tuberculosis UPRT (MtUPRT). Mass spectrometry analysis and N-terminal amino acid sequencing confirmed the identity of homogeneous MtUPRT. The molecular mass of the native MtUPRT was shown to follow a monomer-tetramer association model by analytical ultracentrifugation. This enzyme did not show a pronounced regulation by GTP as this nucleotide did not affect enzyme kinetic parameters, and its binding was not detected by isothermal titration calorimetry (ITC). Initial velocity and ITC studies suggested that catalysis proceeds through a sequential ordered mechanism, in which PRPP binds first, followed by uracil binding, and PPi is the first product to be released, followed by UMP. ITC also showed that PRPP and UMP binding are thermodynamically favorable processes. The pH-rate profiles indicated that groups with pK values of 5.7 and 8.1 are important for catalytic activity and a group with a pK value of 9.45 is involved in PRPP binding. Pre-steady-state kinetic data suggested that product release is not the rate-limiting step of the reaction catalyzed by MtUPRT. Kinetic fluorescence studies demonstrated two forms of enzyme in solution of which only one can bind to PRPP. Knockout of the upp gene showed that this gene is not essential for M. tuberculosis H37Rv in the employed experimental conditions and the absence of upp gene did not affect the mycobacterium growth. UPRT is expressed in both high and low oxygen conditions of M. tuberculosis H37Ra growth. MtUPRT is inhibited by an active metabolite of isoxyl, which does not seem to inhibit RNA polymerase, adenine phosphoribosyltransferase and hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase. Minimum inhibitory concentration of isoxyl for M. tuberculosis mutant for upp gene, complemented and wild type strains was 12.8 μg/mL, meaning that the absence of the upp gene did not affect M. tuberculosis sensitivity to isoxyl. Altogether, these data may be useful for a better understanding about the nucleotide biosynthesis pathway in M. tuberculosis and as a framework on which to base efforts towards the development of efficient prophylactic and therapeutic strategies to decrease the global incidence of this pathogen. / A tuberculose (TB) ? uma doen?a infecciosa causada principalmente pelo Mycobacterium tuberculosis, o qual atualmente infecta um ter?o da popula??o mundial. Apesar da disponibilidade da vacina Bacille Calmette-Gu?rin e da eficaz quimioterapia de curta dura??o, o aumento na incid?ncia global da TB est? relacionado ? co-infec??o com o HIV e ao surgimento de cepas multi, extensivamente e agora totalmente resistente a drogas. Al?m disto, a capacidade do M. tuberculosis de permanecer vi?vel dentro do hospedeiro infectado por longo per?odo em uma infec??o assintom?tica ? um problema adicional para o controle da TB. As rotas de bioss?ntese de nucleot?deos fornecem alvos moleculares promissores para o desenvolvimento de novas vacinas e estrat?gias terap?uticas para controlar a incid?ncia global de TB no mundo. A uracil fosforribosil transferase (UPRT) catalisa a convers?o de uracil e 5 - fosforribosil-a-1 -pirofosfato (PRPP) a uridina 5 -monofosfato (UMP) e pirofosfato (PPi). A UPRT tem um papel importante na rota de salvamento das pirimidinas j? que seu produto (UMP) ? o precursor comum de todos os nucleot?deos pirim?dicos. Este trabalho apresenta a clonagem, express?o recombinante em E. coli, e a purifica??o da UPRT de M. tuberculosis codificada pelo gene upp (MtUPRT). Adicionalmente, foram realizadas an?lises de espectrometria de massas e sequenciamento N-terminal que confirmaram a identidade da MtUPRT homog?nea. A massa molecular da MtUPRT nativa seguiu um modelo de associa??o mon?mero-tetr?mero por ultracentrifuga??o anal?tica. Esta enzima n?o mostrou uma regula??o pronunciada por GTP j? que este nucleot?deo n?o afetou os par?metros cin?ticos da enzima, e a sua liga??o n?o foi detectada por calorimetria de titula??o isot?rmica (ITC). A velocidade inicial e os estudos de ITC sugeriram que a cat?lise procede atrav?s de um mecanismo ordenado sequencial, no qual o PRPP liga primeiramente, seguido pela liga??o de uracil, e PPi ? o primeiro produto a ser liberado, seguido pelo UMP. ITC tamb?m mostrou que a liga??o de PRPP e UMP s?o processos termodinamicamente favor?veis. O perfil de pH indicou que grupamentos com os valores de pK pr?ximos de 5,7 e 8,1 s?o importantes para a atividade catal?tica e um grupamento com valor de pK pr?ximo a 9,45 est? envolvido na liga??o do PRPP. Dados de cin?tica no estado pr?-estacion?rio sugeriram que a libera??o de produto n?o ? a etapa limitante da rea??o catalisada pela MtUPRT. Estudos de fluoresc?ncia demonstraram a exist?ncia de duas formas da enzima em solu??o, das quais apenas uma pode ligar ao PRPP. O nocaute do gene upp demonstrou que este gene n?o ? essencial para o M. tuberculosis H37Rv nas condi??es empregadas no experimento e a aus?ncia do gene upp n?o afetou o crescimento micobacteriano. A UPRT mostrou ser expressa tanto em altas como em baixas concentra??es de oxig?nio. A MtUPRT foi inibida por um metab?lito ativo do isoxyl, que n?o parece inibir as enzimas RNA polimerase, adenina fosforribosil transferase e hipoxantinaguanina fosforribosil transferase. A concentra??o inibit?ria m?nima de isoxyl para as cepas de M. tuberculosis mutante para o gene upp, complementada e tipo selvagem foi de 12,8 μg/mL, o que significa que a aus?ncia do gene upp n?o afetou a sensibilidade do M. tuberculosis ao isoxyl. Assim, estes dados podem ser ?teis para um melhor entendimento sobre a via de bioss?ntese de nucleot?deos em M. tuberculosis e podem servir como base para o desenvolvimento de estrat?gias terap?uticas e preventivas eficientes para diminuir a incid?ncia global deste pat?geno.
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Detec??o e caracteriza??o de virul?ncia e de resist?ncia a drogas antimicrobianas de isolados nosocomiais de Stenotrophomonas maltophiliaGallo, Stephanie Wagner 30 March 2012 (has links)
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Previous issue date: 2012-03-30 / Stenotrophomonas maltophilia is an important opportunistic and emerging pathogen commonly related to nosocomial infections and found in different environmental sources, including hospital settings. This microorganism is recognized for presenting intrinsic resistance to a range of important antimicrobials as well as to acquire resistance by horizontal gene transfer, which reduces the effective options for the treatment of infections caused by this organism. Therefore, the aim of this study was to determine the presence of S. maltophilia in the nosocomial environment and characterize the resistance of the environmental isolates, as well as clinical isolates obtained in the same hospital. Then, environmental samples were collected in the general ICU and the Unified Health System hospitalization unit of the S?o Lucas Hospital, Porto Alegre, Brazil. In addition, 100 clinical isolates were sent by the Clinical Pathology Laboratory of the same hospital. All samples were analyzed using a specific protocol for S. maltophilia detection by PCR developed in this study targeting 23S rRNA gene. Subsequently, the antimicrobial resistance was evaluated against ceftazidime, chloramphenicol, levofloxacin, minociclin and trimethoprim/sulfamethoxazole (TMP/SMX). The presence of integrons was verified in all isolates and those that presented reduced susceptibility to TMP/SMX was evaluated the presence of sul1 and sul2 gene, as well as was determined the plasmid profile. All isolates were submitted to detection of smf-1 gene. Among the 936 samples collected in the nosocomial environment, S. maltophilia was identified in 28. High rates of susceptibility to minocycline, levofloxacin and chloramphenicol were observed, and all of the 19 isolates that presented reduced susceptibility to TMP/SMX carried the sul1 gene, 14 of them presented class 1 integron and nine isolates showed simultaneously sul1 and sul2. All isolates that carried the sul2 gene also presented the 7.3 kb plasmid. The smf-1 gene was detected in 31 S. maltophilia isolates. The presence of S. maltophilia in hospital environment and medical devices indicates the permanence of this microorganism in the nosocomial environment, what can constitute a risk to infection for other hospitalized patients. In addition, the data obtained in this study in relation to TMP/SMX susceptibility can suggest that the resistance to these drugs have the tendency to increase, especially due to resistance determinants to these drugs can be associated to mobile genetic elements, which may facilitate horizontal transfer and the spread of these resistance genes. / Stenotrophomonas maltophilia ? um importante pat?geno oportunista e emergente, comumente relacionado a infec??es nosocomiais e encontrado em diferentes locais, incluindo o ambiente hospitalar. Este microrganismo ? reconhecido por apresentar resist?ncia intr?nseca a uma gama importante de antimicrobianos, bem como por adquirir resist?ncia atrav?s de transfer?ncia g?nica horizontal, o que reduz as op??es efetivas para o tratamento de infec??es ocasionadas por este microrganismo. Desta forma, o objetivo deste estudo foi determinar a presen?a de S. maltophilia no ambiente hospitalar e caracterizar a resist?ncia a drogas antimicrobianas dos isolados ambientais, bem como dos isolados cl?nicos obtidos no mesmo hospital. Para tanto, amostras ambientais foram coletadas na UTI Geral e no andar referente ? interna??o pelo Sistema ?nico de Sa?de (SUS) do Hospital S?o Lucas, Porto Alegre, Brasil. Al?m disso, 100 isolados cl?nicos foram cedidos pelo Laborat?rio de Patologia Cl?nica do mesmo hospital. Todas as amostras foram analisadas utilizando um protocolo de detec??o espec?fica de S. maltophilia atrav?s de PCR desenvolvido neste estudo, tendo o gene RNAr 23S como alvo. Posteriormente, foi avaliada a resist?ncia dos isolados frente ? ceftazidima, cloranfenicol, levofloxacina, minociclina e trimetoprim/sulfametoxazol (TMP/SMX). A presen?a de integrons foi verificada em todos os isolados e naqueles com suscetibilidade reduzida a TMP/SMX foi avaliada a presen?a dos genes sul1 e sul2, bem como foi determinado o perfil plasmidial. Todos os isolados foram submetidos ? detec??o do gene smf-1. De um total de 936 amostras coletadas no ambiente hospitalar, S. maltophilia foi identificada em 28. Foram observadas elevadas taxas de suscetibilidade ? minociclina, levofloxacina e cloranfenicol e todos os 19 isolados que apresentaram suscetibilidade reduzida ? combina??o TMP/SMX carrearam o gene sul1, 14 destes apresentaram o integron de classe 1 e nove isolados apresentaram concomitantemente os genes sul1 e sul2. Todos os isolados que carrearam o gene sul2 apresentaram o plasm?deo de 7,3 kb. O gene smf-1 foi detectado em 31 isolados de S. maltophilia. A presen?a de S. maltophilia nos materiais e equipamentos hospitalares indica a perman?ncia destas bact?rias no ambiente hospitalar, podendo constituir risco para infec??o de outros pacientes internados. Al?m disso, os dados obtidos neste estudo em rela??o ? suscetibilidade ? TMP/SMX podem sugerir que a resist?ncia a esta combina??o de drogas possa estar em ascens?o, especialmente porque os determinantes de resist?ncia a estas drogas podem estar associados a elementos gen?ticos m?veis, o que facilitaria a transfer?ncia horizontal e a dissemina??o destes genes de resist?ncia.
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Network meta-an?lise do uso de probi?ticos na preven??o de infec??es respirat?rias em crian?as e adolescentesAmaral , Marina Azambuja 06 March 2015 (has links)
Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-05-05T11:56:20Z
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Previous issue date: 2015-03-06 / CONTEXT : Probiotics have emerged as a promising intervention for the prevention of respiratory infections in children, according to several randomized controlled trials.OBJECTIVE : Critically assess the effect of probiotics on prevention of respiratory tract infections in children and adolescents.METHODS: Data Sources: Searches were conducted on February 24, 2014 in the following databases: MEDLINE, EMBASE, LILACS, SCIELO, CINAHL, SCOPUS, and Web of Science. The following combinations of terms were used: ?respiratory tract infections? AND probiotics. Study selection: Randomized clinical trials assessing the effect of probiotics on respiratory tract infections (RTIs) in children and adolescents were included. Studies involving children with chronic diseases or other pre-existing comorbidities and those that did not specifying the type of probiotic were excluded. Data extraction and Synthesis: Two reviewers, working independently, screened all titles and abstracts to identify studies that met the eligibility criteria. Pairwise and network analyses were performed to identify the effects of probiotics on respiratory infections. Main outcomes and Measures: Main and secondary outcomes were respiratory tract infections and adverse effects, respectively.RESULTS : Twenty-one trials with 6.603 participants were included. Direct comparison analysis suggested that Lactobacillus casei rhamnosus (LCA) was the only effective probiotic to the rate of respiratory infections compared to placebo (RR0.38; Crl 0.19-0.45). Network analysis showed that the Lactobacillus casei rhamnosus probiotic exhibited a 54.7% probability of being classified in first, while the probability of Lactobacillus fermentum CECT5716 (LFC) being last in the ranking was 15.3%. Lactobacillus casei rhamnosus showed no better effect compared to other probiotic strains by indirect analysis. CONCLUSION : This systematic review found a lack of evidence to support the effect of probiotic supplementation on the incidence rate of respiratory tract infections in children and adolescents. / INTRODU??O: Os probi?ticos ganhando espa?o como uma interven??o promissora para a preven??o de infec??es respirat?rias em crian?as e adolescentes, de acordo com v?rios ensaios cl?nicos randomizados controlados.OBJETIVOS : Avaliar criticamente o efeito de diferentes probi?ticos na preven??o de infec??es do trato respirat?rio em crian?as e adolescentes.M?TODOS : Busca dos dados: Foram realizadas buscas em 24 de fevereiro de 2014 nas seguintes bases de dados: MEDLINE, EMBASE, LILACS, SCIELO, CINAHL, Scopus e Web of Science. Foram utilizadas as seguintes combina??es de termos: ?infec??es do trato respirat?rio? e probi?ticos. Sele??o dos estudos: foram inclu?dos ensaios cl?nicos randomizados que avaliaram o efeito dos probi?ticos em infec??es do trato respirat?rio (ITR) em crian?as e adolescentes. Estudos envolvendo crian?as com doen?as cr?nicas ou outras comorbidades pr?-existentes e aqueles que n?o especificaram o tipo do probi?ticos administrado foram exclu?dos. Extra??o e s?ntese dos dados: dois revisores, trabalhando de forma independente, revisaram todos os t?tulos e resumos dos estudos para identificar estudos que preenchiam os crit?rios de elegibilidade. Foram realizadas an?lises de pares e de rede para identificar os efeitos dos probi?ticos sobre as infec??es respirat?rias. Principais desfechos: os desfechos prim?rios e secund?rios foram infec??es do trato respirat?rio e efeitos adversos, respectivamente.RESULTADOS : vinte e um ensaios com 6.603 participantes foram inclu?dos. A an?lise de compara??o direta sugeriu que o Lactobacillus casei rhamnosus (LCA) foi o ?nico probi?ticos eficaz na redu??o da incid?ncia de infec??es respirat?rias em compara??o com o placebo (RR 0,38; Crl 0,19-0,45). A an?lise de rede mostrou que o Lactobacillus casei rhamnosus apresentou probabilidade de 54,7% de estar classificado em primeiro lugar, enquanto a probabilidade do Lactobacillus fermentum CECT5716 (LFC) estar em ?ltimo lugar no ranking de efetividade foi de 15,3%. O Lactobacillus casei rhamnosus n?o apresentou melhor efeito em compara??o com outras cepas probioticas pelas an?lises indiretas. CONCLUS?O : Esta revis?o sistem?tica e meta-an?lise encontrou falta de evid?ncia para suportar o efeito da suplementa??o de probi?ticos na redu??o da incid?ncia de infec??es respirat?rias em crian?as e adolescentes.
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Avalia??o de protocolos de cintilografia renal com 99mTc-DMSA em crian?as com suspeita cl?nica de pielonefrite agudaVilas, Eduardo Rosito de 26 April 2014 (has links)
Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-05-18T12:11:50Z
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Previous issue date: 2014-04-26 / OBJECTIVE: This paper compares the test results of DMSA renal scintigraphy performed 1, 3 and 6 hours after administration of the radiopharmaceutical in children with clinical suspicion of acute pyelonephritis.
MATERIALS E METHODS: DMSA Images were performed 1, 3 and 6 h after tracer injection and evaluated by three nuclear medicine physicians, who rated the kidneys from normal and abnormal, in the three different moments. We used the Criteria for acute pyelonephritis published by The European Association of Nuclear Medicine and the Consensus of normality and its variants, proposed by 30 experts in nuclear nephrology and published in 1999. Moreover, was performed the relative renal function on each patient, for each protocol image, by counting the activity of 99m Tc-DMSA uptake in both kidneys.
RESULTS: One hundred sixty nine kidneys from 88 patients were evaluated. There was agreement intra-observer and inter-observer for all comparisons. The prevalence of acute pyelonephritis was 22,7%. There were no statistically significant changes in function calculation on the three proposed protocols.
CONCLUSION: There was no statistically significant difference in the images taken at 1, 3 and 6h in the scintigraphic evaluation of acute pyelonephritis in children up to ten years. Also do not change the functional indices in the three moments. / OBJETIVO: Esse trabalho compara os resultados dos exames de cintilografia renal com DMSA realizados 1, 3 e 6h ap?s a administra??o do radiof?rmaco em crian?as com suspeita cl?nica de pielonefrite aguda.
MATERIAIS E M?TODOS: As imagens de DMSA foram realizadas 1, 3 e 6h ap?s a inje??o do radiof?rmaco e avaliadas por tr?s m?dicos nucleares, que classificaram os rins em normal ou anormal, nos tr?s momentos diferentes, isoladamente. Foram usados os crit?rios para pielonefrite aguda publicados pela Associa??o Europeia de Medicina Nuclear e o Consenso de normalidade e suas poss?veis variantes, proposto por 30 especialistas em nefrologia nuclear e publicado em 1999. Al?m disso, foi realizado o c?lculo da capta??o renal relativa de cada paciente, para cada protocolo de imagem, atrav?s da contagem da atividade de capta??o do 99mTc-DMSA em cada rim.
RESULTADOS: foram avaliados 169 rins de 88 pacientes. Houve concord?ncias intra-observadores e inter-observadores para todas as compara??es realizadas. A preval?ncia de pielonefrite aguda foi de 22,7%. N?o houve altera??es estatisticamente significativas nos c?lculos das fun??es relativas nos tr?s protocolos propostos.
CONCLUS?O: N?o h? diferen?a estatisticamente significativa nas imagens realizadas em 1, 3 e 6h na avalia??o cintilogr?fica de pielonefrite aguda em crian?as de zero a dez anos com quadro cl?nico de ITU. Tamb?m n?o variam os ?ndices funcionais nos tr?s momentos.
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Avalia??o de mecanismos relacionados com a diferencia??o de C?lulas T CD8 de mem?ria durante a infec??o pelo v?rus sincicial respirat?rioFreitas, Deise do Nascimento de 29 July 2015 (has links)
Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-10-28T21:42:44Z
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Previous issue date: 2015-07-29 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Introduction : Respiratory Syncytial Virus (RSV) is a major cause of viral lower respiratory tract infection in children under two years of age. Memory CD8 T cell response to VSR does not provide an efficient and long-lasting immune response, so there are recurrent infections throughout life. The role of mTOR (mammalian target of rapamycin) and the purinergic receptor P2X7 in the memory CD8 T cell response during RSV infection has not been investigated. Objectives : To analize the effect of rapamycin on dendritic cells (DCs) during RSV infection, as well as to evaluate the role of P2X7 purinergic receptor in CD8 memory T cells response during RSV infection. Methodology : Bone marrow derived dendritic cells (BMDCs) differentiated from C57BL/6 P2X7-/- and C57BL/6 mice were infected with VSR virus and used to activate T cells purified from C57BL/6 P2X7-/- and C57BL/6 mice in vitro for 96 hours. In addition, BMDCs differentiated from C57BL/6 mice received 20ng/ml rapamycin during 1h prior infection. The following parameters were evaluated: BMDC cell death by apoptosis, memory cells markers by flow cytometry and RNA viral quantitation was performed by real time PCR. Results : Rapamycin treatment in RSV infected BMDCs decreases the frequency of CD8+CD44high cells and increases the level of viral RNA in DCs, but the rapamycin does not affect the viability of the infected dendritic cells. Furthermore, when BMDCs were treated with rapamycin, an increase of BMDC survival occurred, depending on the contact with the T cells. The absence of purinergic receptor P2X7 in T cells leads to a decrease in the frequency of CD8+CD122+KLRG1-, however the absence of purinergic receptor in infected BMDCs increases the frequency of CD8+CD122+ KLRG1- T cells. Conclusion : Our study suggests that P2X7 receptor is involved in memory CD8 T cell response. In addition our data indicated that mTOR inhibition increases the survival of BMDCs in a mechanism dependent on T-cell contact and also suggests that rapamycin treatment on dendritic cells during VSR infection affect CD8 T cell differentiation. / Introdu??o : O V?rus Sincicial Respirat?rio (VSR) ? um dos principais causadores de infec??o viral do trato respirat?rio inferior em crian?as menores de dois anos de idade. A resposta de c?lulas T CD8 de mem?ria para VSR n?o apresenta uma resposta imune eficiente e duradoura, por isso s?o recorrentes as infec??es durante a vida. At? o momento n?o se tem o conhecimento sobre o envolvimento do mTOR (mammalian target of rapamycin) e do receptor purin?rgico P2X7 na resposta de c?lulas T CD8 de mem?ria durante a infec??o de VSR. Objetivos : Investigar o efeito da rapamicina nas c?lulas dendr?ticas (DCs) durante a infec??o viral, bem como, avaliar o efeito do receptor purin?rgico P2X7 nas c?lulas dendr?ticas (DCs) infectadas com o v?rus VSR na resposta de c?lulas T CD8 de mem?ria. Metodologia : C?lulas dendr?ticas diferenciadas de medula ?ssea (BMDCs) de camundongos C57BL/6 P2X7-/- e C57BL/6 infectadas com VSR foram utilizadas para ativar c?lulas T purificadas de camundongos C57BL/6 P2X7-/- e C57BL/6 durante 96 horas. Al?m disso, um grupo de BMDCs de camundongos C57BL/6 recebeu 20ng/mL de rapamicina durante 1h antes da infec??o. As DCs foram marcadas para investiga??o de morte celular por apoptose, as c?lulas T marcadas para an?lise c?lulas de mem?ria e a quantifica??o do RNA viral foi realizada atrav?s de PCR em tempo real. Resultados : O tratamento com o inibidor de mTOR nas BMDCs infectadas pelo VSR diminuiu a gera??o de c?lulas T CD8+ CD44high e aumentou os n?veis de RNA viral nas DCs, por?m a rapamicina n?o influenciou a viabilidade das c?lulas dendr?ticas infectadas. Quando as BMDCs foram tratadas com rapamicina, houve um aumento de sobreviv?ncia das c?lulas, dependente do contato com as c?lulas T. Na aus?ncia do receptor purin?rgico P2X7 nas c?lulas T, ocorreu uma diminui??o na frequ?ncia das c?lulas T CD8+CD122+KLRG1-, entretanto a aus?ncia do receptor purin?rgico nas BMDCs infectadas aumentou a frequ?ncia destas c?lulas T CD8+CD122+KLRG1-. Conclus?o : Nosso estudo sugere que o receptor P2X7 est? envolvido na resposta de c?lulas T CD8 de mem?ria durante a infec??o pelo VSR. Al?m disso, sugere-se que as c?lulas dendr?ticas tratadas com rapamicina durante a infec??o com VSR prejudica a diferencia??o de c?lulas T CD8.
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Influ?ncia do design de restaura??es endocrown em CAD/CAM na carga m?xima de carregamento em molares tratados endodonticamenteModena, Cl?udia Freitas de Moura 20 January 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-01-20 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Objectives: To evaluate in vitro the influence of different cavity design preparations for endocrown restorations on the fracture resistance of endodontically treated molars. Materials and methods: Fifty extracted healthy third molars were divided randomly into 5 groups (n= 10 per group): H= healthy, F1= 1 ferrule, F2= 2 ferrules (buccal and palatal), FT= total ferrule and NF= flat plateau. The teeth were submitted to root canal treatment after which the cavity preparations were made. The crowns of endocrown, in Lava Ultimate, were manufactured with the CAD-CAM CEREC/INLAB system and cemented with Single Bond Universal and Rely X Ultimate. The resistance to fracture testing was made in a universal testing machine with a speed of 1mm/min. The pattern of failure was then evaluated, taking into consideration only the presence or absence of fracture in the pulp floor. Results: (Means followed by the same letter do not differ statistically for ANOVA and Tukey): H:3970N ab; F1:3170N ab; F2: 3786N ab; TF: 2894N b; NF:4416N a. The most prevalent pattern of failure was the type recoverable in all groups. Conclusions: The type of cavity preparation for endocrown restoration may influence the fracture resistance of endodontically treated molars. The type of ferrule may determine the greater resistance to loading. The pattern of failure was predominantly recoverable. / Objetivos: avaliar in vitro a influ?ncia de diferentes designs de preparos cavit?rios para restaura??es endocrown, na resist?ncia m?xima ao carregamento de molares endodonticamente tratados. Materiais e m?todos: Cinquenta terceiros molares h?gidos e extra?dos foram divididos aleatoriamente em 5 grupos (n= 10 por grupo), H= h?gido, F1= 1 f?rula, F2 = 2 f?rulas VL(vestibular e lingual), FT= f?rula total e SF= plat? reto. Os dentes foram submetidos ? endodontia e, ap?s, realizados os preparos cavit?rios. As coroas de endocrown, em Lava Ultimate, foram confeccionadas atrav?s do sistema CAD-CAM CEREC/INLAB e cimentadas com Single Bond Universal e Rely X Ultimate. O ensaio de resist?ncia ? fratura foi realizado em uma m?quina de ensaios universal com velocidade de 1mm/min at? o rompimento do corpo de prova. Ap?s, foi avaliado o padr?o de falha o qual levou em considera??o apenas a presen?a ou n?o de fratura do assoalho pulpar. Resultados: (m?dias seguidas de mesma letra n?o apresentam diferen?a estat?stica para ANOVA e Tukey): H:3970N AB; F1:3170N AB; F2: 3786N AB; FT 2894N B; SF:4416N A. O padr?o de falha predominante foi do tipo fratura da restaura??o em todos os grupos. Conclus?es: o tipo de preparo cavit?rio para restaura??es endocrown pode influenciar na resist?ncia ? fratura de molares tratados endodonticamente. O tipo de f?rula utilizada pode determinar maior resist?ncia ao carregamento. O padr?o de falha foi predominantemente recuper?vel.
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A conta??o de hist?rias na extens?o universit?ria e sua contribui??o para a forma??o acad?micaSilva, Carla Elisabete Cassel 26 February 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-02-26 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The present study investigates the contribution of storytelling in the experience of extension students in the University Extension Project Conta Mais, focusing in storytelling in a public school, in the Toy Library, in the museum and in the kindergarten from the Federal University of Rio Grande do Sul (UFRGS). The historicity of the University Extension in Brazil and in UFRGS is presented in order to understand its goal and function in the context of higher education. The university extension projects that use storytelling in their activities are shown. This is a qualitative research built in the light of contributions from Bogdan and Biklen (1994), L?dke and Andr? (1986), and Minayo (2011). In order to complete this investigation, we chose an ethnographic-like case study, as taught by L?dke and Andr? (1986), and Andr? (2008), as they understand that the ethnographic-like investigation makes it possible to investigate the contribution of storytelling in University Extension for the academic training of undergraduates in several areas of knowledge. Data collection was performed through semi-structured interviews with extension students, through participant observation in different locations where storytelling from Conta Mais Project happens, and through report analysis from the Conta Mais collection, based on the principles of document analysis. Data collected from the interviews was analyzed through Discursive Textual Analysis (DTA), which can be conceived as a self-organized process for the production of new understandings according to Moraes and Galiazzi (2011), relating the phenomena examined, linking them to theorical references and research purposes. In the analysis we interlaced narratives from academic extensions to the theoretical frameworks based on Benjamin (1987), Freire (1977) and Gadamer (1997). This investigation contributed to the field of Education, specifically to academic education, producing knowledge about a reality that is experienced in University Extension, which highlights the role of storytelling beyond schools, families and culture centers. Based on this study, it is possible to think that the experience of storytelling in the Conta Mais Project, from UFRGS University Extension, made the development of new ways of thinking and new ways of action possible to the undergraduates. This way, the Project contributed to the education per se, to the recognition and to the attribution of meanings and senses. This consideration can also add to the constant and innovating improvement of pedagogical practices in Extension, ratifying the importance of the inseparability of Extension, Education and Research, emphasizing, at the light of the opinion of extension students, the meaningful learning manifestations made during the performance and participation in a University Extension Project. / Este estudo investiga a contribui??o da conta??o de hist?rias na viv?ncia dos acad?micos extensionistas no Projeto de Extens?o Universit?ria Conta Mais, tendo como foco a conta??o de hist?rias nas escolas p?blicas, na Brinquedoteca, Creche e Museu da Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS). Apresenta a historicidade da Extens?o Universit?ria no Brasil e na UFRGS, com a finalidade de compreender seu objetivo e fun??o no panorama da educa??o superior. Mostra os projetos de extens?o universit?ria da UFRGS, que utilizam a conta??o de hist?rias em suas atividades. Trata-se de uma Pesquisa Qualitativa constru?da ? luz dos aportes de Bogdan e Biklen (1994), L?dke e Andr? (1986) e Minayo (2011). Para a realiza??o desta investiga??o, optou-se por um estudo de caso do tipo etnogr?fico, conforme ensinam L?dke e Andr? (1986) e Andr? (2008), por entender que a investiga??o tipo etnogr?fica possibilita investigar a contribui??o das atividades de conta??o de hist?rias na Extens?o Universit?ria para a forma??o acad?mica de licenciandos e bacharelandos de diversas ?reas. A coleta de dados foi realizada atrav?s das entrevistas semiestruturadas com acad?micos extensionistas, da observa??o participante nos diferentes espa?os, onde acontece a conta??o de hist?rias do Projeto Conta Mais e da an?lise de relat?rios do acervo do Conta Mais, com base nos princ?pios da an?lise documental. Os dados coletados nas entrevistas foram analisados atrav?s da An?lise Textual Discursiva (ATD), que pode ser concebida como um processo auto-organizado de produ??o de novas compreens?es consoante Moraes e Galiazzi (2011), relacionando os fen?menos examinados, articulando-os com o referencial te?rico e os prop?sitos da pesquisa. Nas an?lises foram entrela?adas as narrativas dos acad?micos extensionistas aos aportes te?ricos constru?dos a partir de Benjamin (1987), Freire (1977) e Gadamer (1997). Esta investiga??o trouxe contribui??es para a ?rea da Educa??o, de forma espec?fica para forma??o acad?mica, produzindo conhecimento acerca de uma realidade vivida na Extens?o Universit?ria, que destaca a import?ncia da conta??o de hist?rias para al?m da escola, fam?lias, centros de cultura. A partir deste estudo, ? poss?vel pensar que a viv?ncia da conta??o de hist?rias no Projeto Conta Mais, da Extens?o Universit?ria da UFRGS possibilitou a emerg?ncia de novas formas de pensamento e de a??o para os referidos acad?micos, contribuindo, dessa maneira, para a forma??o de si, o reconhecimento e atribui??o de sentidos e significados que ela representou. Esta reflex?o pode, ainda, contribuir para o aperfei?oamento constante e inovador da pr?tica pedag?gica na extens?o, ratificando a import?ncia da indissociabilidade Extens?o, Ensino e Pesquisa, destacando, ? luz da escuta feita aos acad?micos extensionistas, as manifesta??es de aprendizagens significativas durante a realiza??o e participa??o em um projeto de extens?o universit?ria.
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Contribui????o previdenci??ria patronal e as verbas de natureza indenizat??riaSilva, Thiago Perez Rodrigues da 05 December 2016 (has links)
Submitted by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2017-09-05T14:39:29Z
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Previous issue date: 2016-12-05 / This work has the scope to analyze the employers' social security contributions and
their impact on the amounts credited to the employees which they discuss their
nature, especially whether these incomes have damages or remunerative nature.
Therefore, the work discusses the national tax system, discussing the concept of
tribute and their species, with special emphasis on the contributions. Further it,
discusses the tax on the payroll, analyzing the taxes levied on such basis and
mapping an analysis of such a tax. Then proceeds to analyze the labor amounts paid
to workers recurrently discussed before the Judiciary, which are the untaken holiday
and its additional 1/3, 15 days before the sickness, notice indemnified, maternity pay,
salary paternity, night, risk premium, overtime indicating legislation, doctrine and
cases law in order to demonstrate the understanding of the nature of such incomes
and their effects on taxable basis of the social contribution to proper social security
levied on the employers, along the lines of article 150, I, of the Federal Constitution
and article 22, of Federal Law n?? 8.212 /1990. / O presente trabalho tem por escopo analisar a contribui????o previdenci??ria patronal e
sua incid??ncia sobre as verbas creditadas aos empregados as quais se discutem
suas naturezas, especialmente se constituem verbas de natureza indenizat??rias ou
remunerat??ria. Para tanto, o trabalho discorre sobre o sistema tribut??rio nacional,
discorrendo sobre o conceito de tributo e suas esp??cies, concedendo especial
destaque sobre as contribui????es. Ap??s, discorre sobre a tributa????o sobre a folha de
sal??rios, analisando os tributos que incidem sobre tal base de c??lculo e tra??ando
uma an??lise sobre tal forma de tributar. Ent??o, passa a analisar as verbas
trabalhistas pagas aos trabalhadores recorrentemente discutidas perante o Poder
Judici??rio, sendo estas as f??rias usufru??das e seu adicional de 1/3, os 15 dias que
antecedem o aux??lio-doen??a, aviso pr??vio indenizado, sal??rio-maternidade, sal??rio
paternidade, adicional noturno, adicional de periculosidade e horas extras, indicando
legisla????o, doutrina e jurisprud??ncia no intuito de demonstrar o entendimento sobre
a natureza de tais verbas e seus reflexos na composi????o da base de c??lculo da
contribui????o social para a seguridade social devida pelos empregadores, nos moldes
do artigo 150, I, da Constitui????o Federal e do artigo 22 da Lei n?? 8.212/1990.
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