No período de março a maio de 2004, foram estudados 351 primo doadores de sangue do Centro Regional de Hemoterapia de Ribeirão Preto (CRHRP), objetivando investigar os seguintes itens: adequação do tempo utilizado na triagem clínica; entendimento acerca do processo de auto-exclusão e de suas implicações; compreensão sobre as orientações contidas em material informativo, de modo particular em relação ao conceito de janela imunológica; entendimento do termo de consentimento e suas implicações; e entendimento com relação aos comportamentos de risco para a AIDS e para as hepatites B e C. Os participantes foram entrevistados após o término da doação, com as informações sendo obtidas através da aplicação de um questionário e da busca junto à Central de Processamentos de Dados do CRHRP. As entrevistas foram realizadas em todos os dias da semana e durante o horário de funcionamento do Serviço, das 7:00 as 13:00. Nos dias em que o número de primo doadores ultrapassou a capacidade de aplicação do questionário, a escolha dos participantes foi realizada através de sorteio. As variáveis grau de instrução, número de doadores por dia, tempo médio utilizado na triagem clínica e triador foram determinantes para quantificar e qualificar o entendimento dos doadores com relação ao processo de seleção. Verificou-se que 11,4% dos doadores não recebeu o material informativo, e, dos que o receberam, 21,2% não realizou a leitura. O tempo médio gasto na triagem clínica foi igual ou inferior a 3 minutos em cerca de 42,7% dos casos, com variabilidade de 1,2 a 18,2 minutos. Boa compreensão do termo de consentimento e do conceito de janela imunológica ocorreu em 54,4% e 35,3% dos doadores, respectivamente. Evidenciou-se um nítido contraste de boa compreensão sobre comportamento de risco para AIDS e para hepatites B e C, com valores respectivamente iguais a 81,5% e 8,6%. Os resultados apontam para a necessidade de aprimoramento do processo de triagem clínica, bem com de novas pesquisas que contribuam para melhorar o entendimento acerca dos determinantes das deficiências verificadas. / Three hundred fifty-one first time blood donors at the Centro Regional de Hemoterapia in Ribeirão Preto (CRHRP) were studied from March to May 2004, in an attempt to investigate the following items: adequacy of the time spent in the clinical selection; agreement concerning the self-exclusion process and its implications; understanding information contained in informative material, particularly in relation to the immunologic window; understanding consent form and its implications; and understanding risk behaviors for AIDS and hepatitis B and C. The participants were interviewed just after donation; the information was pooled through a questionnaire and a data search at the Data Processing Center at CRHRP. The interviews were performed every weekday during working time, from 7:00 a.m. to 1:00 p.m. During the days when the number of first time blood donors exceeded allocated time for questionnaire completion, the participants were chosen through a raffle. The variables, educational level, number of donors a day, average time used for clinical selection and selector were determinants to quantify and qualify donors' understanding of the selection process. 11,4% of the donors were found not to have received informative material and among the ones who had, 21,2% had not read it. The average time spent in clinical selection was less or equal to 3 minutes in about 42,7% of the cases, with variability of 1,2 to 18,2 minutes. A clear understanding of the consent form and the immunologic window was found in 54,4% and 35,3% of the donors respectively A clear understanding contrast about risky behavior for AIDS and for types B and C hepatitis, 81,5% and 8,6% respectively, stood out. The results show a clear need for improvement of the clinical selection process as well as new studies that would contribute improving understanding concerning the determinants of the flaws detected.

Foram estudados 151 doadores de sangue encaminhados pelo Hemocentro de Ribeirão Preto ao Ambulatório de Hepatites do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto em função de terem apresentado resultados foram positivos para hepatite C nos testes de triagem pré-doação, entre 2001 e 2010. Todos tiveram confirmação diagnóstica mediante uso de técnicas de biologia molecular. No momento de chegada ao Hospital foram entrevistados por uma assistente social ligada ao Núcleo Hospitalar de Epidemiologia, com o objetivo de caracterizá-los segundo variáveis sociodemográficas, estudar fatores de risco presentes e genótipos encontrados. Houve predominância de indivíduos do sexo masculino, com baixos níveis de escolaridade e de estratos sociais menos favorecidos, com idade mediana de 36 anos. Observou-se uma tendência decrescente de infectados ao longo dos anos estudados. O genótipo mais prevalente foi o 1 com percentual de 68,8%, seguido do genótipo 3 (27,0%). Os potenciais fatores de risco mais prevalentes foram história pregressa de hospitalização sem e com cirurgia, multiplicidade de parceiros sexuais no passado, convivência com usuários de drogas, contato com sangue em atendimentos a terceiros, múltiplos parceiros sexuais no presente e contato domiciliar com casos de hepatite. Também com elevadas frequências foram observados os seguintes fatores: antecedente de transfusão sanguínea, uso coletivo de escova de dentes, história de contato sexual com usuários de drogas, frequência a creches na infância e tatuagem. Uso passado de drogas injetáveis e compartilhamento de seringas e agulhas foram relatados por 15,2% e 9,9%, respectivamente. Conclui-se que deve ter ocorrido omissão de inúmeros fatores de risco por ocasião da triagem clínica, possivelmente indicativo do desejo de se utilizar o Banco de Sangue como controle da situação sorológica por parte de parte dos doadores. / 151 blood donators were analyzed sent from the Hemocenter of Ribeirão Preto to the Hepatitis Clinic of the University Hospital of the Ribeirão Preto Medical School, University of São Paulo, because these individuals had presented positive results for Hepatitis C in the screening tests for pre-donation, taken between 2001 and 2010. All of them had diagnosis confirmation through the use of molecular biology techniques. At the moment of arrival in the hospital, they were interviewed by a Social Assistant from the Hospital Nucleus of Epidemiology, in order to characterize them according to socio-demographic variables, to study risk factors that might be present, and genotypes found. The predominance was of male individuals, with low school levels, and coming from a less favored social stratum, with a median age of 36 years. There was a decreasing tendency of infected individuals along the years of study. The most prevailing genotype was type 1 with a percentage of 68.8%, followed by the genotype 3 (27.0%). The most prevailing potential risk factors were previous history of hospitalization with and without surgery, multiplicity of sexual partners in the past, acquaintance with drug user, contact with blood on dealing with to third parties, multiple current sexual partners and home contact with hepatitis cases. The following factors were also observed with high frequency: antecedent of blood transfusion, collective use of tooth brush, history of sexual contact with drug users, attendance to day care clinics in childhood and tattoos. Past use of injectable drugs and syringe and needle sharing were reported by 15.2% and 9.9%, respectively. The conclusion was that there must have been the omission of a number of risk factors at the time of the clinical screening, possibly indicating the desire of using the Blood Bank to make control of the serological status by some of the donators

Os sistemas de grupos sanguíneos eritrocitários e plaquetários têm grande importância na medicina transfusional. Os serviços de hemoterapia têm investido cada vez mais em protocolos profiláticos à aloimunização contra antígenos eritrocitários, sendo o surgimento das plataformas de genotipagem em larga escala um avanço muito importante nesse âmbito. Este estudo tem por objetivo a padronização e a validação da plataforma OpenArray, por meio da técnica de microarranjos líquidos para genotipagem de antígenos eritrocitários e plaquetários em larga escala para futura implementação na rotina de doadores de sangue. Tal genotipagem permitirá a análise da frequência genotípica encontrada nos doadores de sangue da Fundação Pró-sangue/Hemocentro de São Paulo. Métodos: Foram analisadas 400 amostras de sangue total coletadas de doadores de sangue entre outubro e novembro de 2011. A genotipagem dos polimorfismos de troca de um nucleotídeo (Single nucleotide polymorphism - SNPs) que codifica os principais antígenos eritrocitários e plaquetários de relevância transfusional foi realizada utilizando a tecnologia OpenArray para as 400 amostras. Dessas, 242 também foram analisadas pela plataforma de genotipagem BLOODchip, em larga escala. Procedeu-se à comparação entre as técnicas em termos de acurácia, reprodutibilidade, número de resultados incorretos, número de resultados não amplificados ou indeterminados, possibilidade de customização dos ensaios, tempo total de duração da reação e número de amostras processadas por bateria. Foi também calculada a frequência genotípica dos SNPs e feita a comparação com dados prévios de literatura. Resultados e discussão: as amostras que foram testadas em ambas as plataformas apresentaram acurácia de 99,9% pela técnica OpenArray e 100% pela técnica BLOODchip, sendo os resultados discrepantes analisados por sequenciamento direto (técnica Sanger), confirmando os resultados obtidos pela genotipagem realizada no BLOODchip. Além disso, a técnica OpenArray apresentou maior número de resultados não amplificados ou indeterminados (no call), o que representa uma grande desvantagem do método, em decorrência da perda de insumos. Entretanto, a técnica OpenArray apresentou outras vantagens em relação ao BLOODchip, como a possibilidade de customização do ensaio, menor tempo para processamento das amostras, considerando a possibilidade de automatização total do processo e número de amostras testadas por bateria superior ao método comparativo. Os resultados da frequência alélica e genotípica dos polimorfismos analisados pelo método OpenArray foram comparados com as frequências encontradas na literatura, observando-se prevalência de doadores com perfil genotípico mais próximo da população caucasoide, porém, com a presença de alelos encontrados na população negra. Entretanto, esse perfil genotípico dos doadores predispõe à aloimunização de doentes falciformes, com perfil fenotípico negroide, reiterando a necessidade de transfusões com fenótipo compatível como profilaxia à aloimunização. / The erythrocyte and platelets blood groups are extremely important for transfusional medicine. Hemotherapy services have increasingly invested in prophylactic protocols for alloimmunization against erythrocyte antigens and the emergence of high-throuput genotyping platforms are a very prominent advance in this area. The aim of this study was to validate and to standardize the OpenArray platform, which is based on the microarray technolgy for the erythrocyte antigens genotyping on large scale, to further implementation in blood bank routine. This tecnique also allowed to asses the genotype frequencies in blood donors from Fundação Pró-sangue/Hemocentro de São Paulo. Method: We examined 400 blood donor samples collected from October to November 2011. The SNPs were detected using OpenArray technology. From the 400 blood samples, 272 were also tested using BLOODchip platform, to compare the results between both tecniques and evaluate the accuracy, reproducibility, number of incorrect results, failed samples, possibility of assays customization, duration of procedures, and number of samples that can be processed per batch. The genotype frequency of SNPs was also assesed and the findings were compared to previous studies. Results and Discussion: the OpenArray method showed accuracy of 99.9% and the BLOODchip of 100%. The inconsistent results were confirmed by Sanger Sequencing which showed that BLOODchip analysis was accurate. Besides, the OpenArray method showed a higher number of non-amplification or failed results (no call), which may be a major disavantage, due to reagent loss. However, the OpenArray platform showed other advantages when compared to BLOODchip such as the possibility of assay customization and full automation of the process, it was less time-consuming and allowed a higher number of samples per batch. The genotypic and allelic frequencies of each SNP tested in the blood donor population were calculated by the OpenArray method and the results were compared to reports from previous studies. We observed a prevalence of genotypic profiles closest to the Caucasian population, however, there was the presence of alleles found in the black population as well. This genotypic profile donors predispose to alloimmunization of sickle cell patients, with negroid phenotypic profile, reiterating the need for compatible phenotype transfusions and prophylaxis to alloimmunization.

A presente investigação teve o objetivo de avaliar quantitativa e qualitativamente a celularidade de cabras hígidas criadas no Estado de São Paulo, assim como correlacionar as células somáticas do leite com os leucócitos presentes no sangue, informações que, além de raras em relação à glândula mamária de cabras sadias, são extremamente conflitantes. Foram colhidas amostras de cada metade mamária, provenientes de 51 cabras hígidas das raças Saanen, Alpina e Toggenburg, em diferentes fases de lactação, pertencentes a diferentes criatórios do Estado de São Paulo. As amostras de leite foram submetidas ao California Mastitis Test (CMT), a contagem eletrônica de células somáticas e microscopia direta, utilizando o corante de verde de metil e pironina-Y, além da citocentrifugação para a avaliação dos leucócitos; com as amostras de sangue foi realizado o leucograma. Associando-se os escores do CMT com a contagem celular eletrônica foram encontrados os valores medianos de 181.000, 578.000, 628.000, 1.421.500 e 5.542.000, respectivamente. Já na contagem celular por microscopia direta os valores medianos obtidos foram de 74.991, 271.396, 71.420, 640.995 e 5.049.394, correspondendo, respectivamente aos escores negativo, traços, 1+, 2+ e 3+. Relacionando-se as contagens celulares de acordo com as fases da lactação, os valores medianos obtidos não apresentaram diferenças significativas entre as fases inicial, intermediária e final da lactação tanto para a contagem eletrônica quanto para a contagem microscópica direta, respectivamente. A correlação entre a contagem celular automática e microscópica direta foi de 88%. Não foram encontradas diferenças significativas quando se comparou a contagem de células somáticas nas glândulas direita e esquerda, tanto na contagem automática quanto na microscópica direta. Os valores relativos dos leucócitos presentes no leite foram determinados, obtendo-se os valores médios e desvios-padrão de 77,0 ± 30,5%; 76,5 ± 20,9% e 65,3 ± 25,6% de neutrófilos, 2,24 ± 3,26%; 2,04 ± 2,33% e 2,14 ± 2,81% de linfócitos e 22,6 ± 20,2%, 21,4 ± 20,0% e 23,0 ± 16,2% de monócitos, correspondendo às fases inicial, intermediária e final da lactação, respectivamente. No sangue, determinou-se o valor total de leucócitos, obtendo-se o valor médio de 8525 ± 3244 células/mL. Os valores relativos médios dos diferentes tipos de leucócitos presentes no sangue de cabras sadias foram de 56,8 ± 11,8% de neutrófilos, 38,5 ± 11,8% de linfócitos, 2,8 ± 1,7% de monócitos e 1,9 ± 1,6% de eosinófilos. Correlacionando-se os leucócitos presentes no sangue com os presentes no leite, não foram observadas correlações significativas, porém, quando se analisou os leucócitos do sangue com as fases da lactação, foram encontradas diferenças significativas nos valores relativos médios de neutrófilos e linfócitos, respectivamente, na fase final da lactação. Os resultados obtidos permitiram concluir que existiu diferença entre a contagem celular automática e a microscópica direta na determinação do número de células somáticas no leite caprino; os valores celulares aumentam conforme o escore do CMT, o leucócito predominante no leite e sangue de cabras hígidas é o neutrófilo e existe relação íntima entre o neutrófilo e o linfócito no sangue de cabras, sendo estes influenciados pela fase da lactação. / The present investigation had the objective to evaluate quantitatively and qualitatively the celularity of created healthy goats in Sao Paulo state, as well as correlating the somatic cells of milk with the leukocytes in the blood, information that, beyond rare in relation to the mammary gland of healthy goats, are extremely conflicting. Samples of each mammary half had been harvested, proceeding from 51 Saanen, Alpina and Toggenburg healthy goats, in different phases of lactation, from the different breeders of Sao Paulo state. The milk samples had been submitted to California Mastitis Test (CMT), the electronic counting of somatic cells and direct microscopy, using the pyronin Y-methyl green stain, beyond the cytospin centrifuge for the evaluation of leukocytes; with the samples of blood the leucogram was carried through. Associating you prop up of the CMT with electronic the cellular counting had been found the medium values of 181.000, 578.000, 628.000, 1.421.500 and 5.542.000, respectively. Already in the cellular counting for direct microscopy the gotten medium values had been of 74.991, 271,396, 71,420, 640,995 and 5.049.394, corresponding, respectively to negative, traces, 1+, 2+ and 3+ scores. Becoming related the cellular counting in accordance with the phases of the lactation; the gotten medium values had not presented significant differences between the phases, initial, intermediate and final of the lactation in such for the electronic counting how much for the direct microscopically counting, respectively. The correlation between the automatic and direct microscopically counting cellular was of 88%. Significant differences had not been found when the counting of somatic cells in the glands was compared right and left, as much in the microscopically automatic counting in the direct one. The relative values of the leucocytes gifts in milk had been determined, getting the average values and 77,0 ± 30,5%; 76,5 ± 20.9% and 65,3 ± 25.6% of neutrophils, 2,24 ± 3,26%; 2,04 ± 2.33% and 2,14 ± 2.81% of lymphocytes and 22,6 ± 20.2%, 21,4 ± 20.0% and 23,0 ± 16.2% of monocytes, corresponding the phases initial, intermediate and final of the lactation, respectively. In the blood, the total value of leucocytes was determined, getting itself the average value of 8525 ± 3244 céls/mL. The average relative values of the different types of leukocytes gifts in the blood of healthy goats had been of 56,8 ± 11.8% of neutrophils, 38,5 ± 11.8% of lymphocytes, 2,8 ± 1.7% of monocytes and 1,9 ± 1.6% of eosinophils. Correlating the leukocytes gifts in the blood with the gifts in milk, significant correlation had not been observed, however, when it analyzed the leucocytes of the blood with the phases of the lactation, significant differences in the average relative values of neutrophils and lymphocytes had been found, respectively, in the final phase of lactation. The gotten results allow to conclude that difference between the automatic cellular counting and the direct microscopically one in the determination of the somatic frame number in goat milk exists, the cellular values increase as prop up it of the CMT, the predominant leucocyte in milk and blood of healthy goats is neutrophil, exists close relation between neutrophil and lymphocytes in the blood of goats, being these influenced by the phase of the lactation.

No período de março a maio de 2004, foram estudados 351 primo doadores de sangue do Centro Regional de Hemoterapia de Ribeirão Preto (CRHRP), objetivando investigar os seguintes itens: adequação do tempo utilizado na triagem clínica; entendimento acerca do processo de auto-exclusão e de suas implicações; compreensão sobre as orientações contidas em material informativo, de modo particular em relação ao conceito de janela imunológica; entendimento do termo de consentimento e suas implicações; e entendimento com relação aos comportamentos de risco para a AIDS e para as hepatites B e C. Os participantes foram entrevistados após o término da doação, com as informações sendo obtidas através da aplicação de um questionário e da busca junto à Central de Processamentos de Dados do CRHRP. As entrevistas foram realizadas em todos os dias da semana e durante o horário de funcionamento do Serviço, das 7:00 as 13:00. Nos dias em que o número de primo doadores ultrapassou a capacidade de aplicação do questionário, a escolha dos participantes foi realizada através de sorteio. As variáveis grau de instrução, número de doadores por dia, tempo médio utilizado na triagem clínica e triador foram determinantes para quantificar e qualificar o entendimento dos doadores com relação ao processo de seleção. Verificou-se que 11,4% dos doadores não recebeu o material informativo, e, dos que o receberam, 21,2% não realizou a leitura. O tempo médio gasto na triagem clínica foi igual ou inferior a 3 minutos em cerca de 42,7% dos casos, com variabilidade de 1,2 a 18,2 minutos. Boa compreensão do termo de consentimento e do conceito de janela imunológica ocorreu em 54,4% e 35,3% dos doadores, respectivamente. Evidenciou-se um nítido contraste de boa compreensão sobre comportamento de risco para AIDS e para hepatites B e C, com valores respectivamente iguais a 81,5% e 8,6%. Os resultados apontam para a necessidade de aprimoramento do processo de triagem clínica, bem com de novas pesquisas que contribuam para melhorar o entendimento acerca dos determinantes das deficiências verificadas. / Three hundred fifty-one first time blood donors at the Centro Regional de Hemoterapia in Ribeirão Preto (CRHRP) were studied from March to May 2004, in an attempt to investigate the following items: adequacy of the time spent in the clinical selection; agreement concerning the self-exclusion process and its implications; understanding information contained in informative material, particularly in relation to the immunologic window; understanding consent form and its implications; and understanding risk behaviors for AIDS and hepatitis B and C. The participants were interviewed just after donation; the information was pooled through a questionnaire and a data search at the Data Processing Center at CRHRP. The interviews were performed every weekday during working time, from 7:00 a.m. to 1:00 p.m. During the days when the number of first time blood donors exceeded allocated time for questionnaire completion, the participants were chosen through a raffle. The variables, educational level, number of donors a day, average time used for clinical selection and selector were determinants to quantify and qualify donors' understanding of the selection process. 11,4% of the donors were found not to have received informative material and among the ones who had, 21,2% had not read it. The average time spent in clinical selection was less or equal to 3 minutes in about 42,7% of the cases, with variability of 1,2 to 18,2 minutes. A clear understanding of the consent form and the immunologic window was found in 54,4% and 35,3% of the donors respectively A clear understanding contrast about risky behavior for AIDS and for types B and C hepatitis, 81,5% and 8,6% respectively, stood out. The results show a clear need for improvement of the clinical selection process as well as new studies that would contribute improving understanding concerning the determinants of the flaws detected.

Orientador: José Geraldo Nery / Banca: Marilia de Freitas Calmon / Banca: Margarete Teresa Gottardo de Almeida / Banca: Moacir Fernandes de Godoy / Banca: Marcia Perez dos Santos Cabrera / Resumo: Apesar dos avanços na intervenção médica, hemorragia traumática fatal continua a ser uma das principais causas de morte no mundo. Nesse sentido muitos esforços têm sido dedicados à pesquisa e ao desenvolvimento de novos agentes hemostáticos que possam atuar mais efetivamente no controle de hemorragias. Embora a maior parte dos agentes hemostáticos seja de natureza orgânica, recentemente estudos envolvendo a utilização de zeólitas como agentes hemostáticos têm demonstrado resultados promissores para o controle de sangramento. Estes estudos revelam que quando em contato com o sangue, as zeólitas adsorvem rapidamente as moléculas de água, com isso, concentrando as proteínas e elementos celulares essenciais para a formação do coágulo. Além disso, a superfície da zeólita que contém cargas negativas fornece um ambiente químico favorável que funciona como um ativador de contato do padrão intrínseco do processo de coagulação. Neste contexto, os objetivos deste trabalho são as sínteses, caracterização e modulação de diferentes materiais zeolíticos nas escalas nanométricas e micrométricas (Faujasita (FAU), Gismondina (GIS), Mordenita (MOR), zeólita A (LTA), zeólita Beta (BEA), Titâno Silicato (TS-1)) juntamente com seus derivados de troca iônica para que os mesmos possam ser utilizados como agentes hemostáticos coagulantes no controle de sangramentos através da aceleração do processo de coagulação. As caracterizações fisico-química (DRX, MEV, AFM, Microscopia de contraste de fase, BET,... / Abstract: Despite the advances in medical intervention, traumatic fatal hemorrhage remains a major cause of death worldwide. In this direction, many efforts have been dedicated to the research and development of new hemostatic agents that can act more effectively to control hemorrhages. Although the majority of hemostatic agents is of an organic nature recently studies involving the use of zeolites as hemostatic agents have shown encouraging results for the control of bleeding. These studies shows that when in contact with the blood, zeolites adsorbs rapidly the water molecules in their pores, thereby concentrating the proteins and cellular elements to clot formation. Moreover, the surface of the zeolite containing negative charge provides a chemical environment favorable which acts as an activator of the contact pattern of the intrinsic coagulation cascade. In this context, the main of this research are the synthesis, characterization and modulation of different zeolitic materials in both micrometric and nanometric scales (Faujasite (FAU), Gismondine (GIS), Mordenite (MOR), zeolite A (LTA), Beta zeolite (BEA), Titanium-Silicate (TS-1)) with their derivate ion exchange, so that they can be used as hemostatic agents to control bleeding by accelerating the clotting process. The physico-chemical characterizations (XRD, SEM, AFM, Phase Contrast Microscopy, BET, MAS-NRM, FTIR) showed that the synthesized materials are in agreement with data reported in the literature for these materials. ... / Doutor

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 418143.pdf: 285814 bytes, checksum: 88313ad8173e10bd8abedb6c2a800e24 (MD5) Previous issue date: 2009-03-31 / Manchas de sangue s?o vest?gios de grande import?ncia para a elucida??o de um crime. Sangue dilu?do, invis?vel a olho nu, ou em superf?cies escuras, pode ser detectado utilizando reagentes especiais, atrav?s dos chamados "testes presuntivos". Os efeitos dos testes preliminares para sangue utilizando luminol, Luminol 16?, Bluestar? Forensic e benzidina sobre os m?todos de inibi??o da antiglobulina humana, imunocromatogr?fico para hemoglobina humana e sobre o exame de DNA foram avaliados nesse trabalho. As manchas de sangue foram produzidas atrav?s da aplica??o de 2 μL de sangue venoso em fragmentos de tecido branco (100% algod?o). As amostras foram submetidas aos exames presuntivos e deixadas para secar por 48 horas antes da realiza??o dos testes de inibi??o da antiglobulina humana e imunocromatogr?fico para hemoglobina humana. O DNA foi extra?do pelo m?todo org?nico e quantificado com Quantifiler? Human DNA Quantification (Applied Biosystems) em 48 horas, 7 dias, 30 dias ou 120 dias ap?s a aplica??o dos reagentes. As amostras tratadas com ambas as prepara??es de luminol ou com Bluestar? Forensic obtiveram resultado positivo nos exames imunol?gicos, mostrando que n?o influenciam nos testes confirmat?rios para sangue humano. As 20 amostras tratadas com benzidina tiveram resultado negativo no teste de inibi??o da antiglobulina humana. Das 20 amostras submetidas ao teste imunocromatogr?fico, 18 obtiveram resultado negativo, evidenciando o efeito delet?rio da benzidina sobre os testes confirmat?rios para sangue humano. Atrav?s de PCR em tempo real foi poss?vel observar que, 48 horas ap?s contato com a solu??o de benzidina, as amostras tiveram o DNA degradado. Todos os reagentes testados causaram degrada??o do DNA, em diferentes extens?es, ap?s 120 dias de sua aplica??o.

A presente dissertação abordou o nível sérico da Cocaine and Amphetamine Regulated Transcript (CART) em uma população altamente vulnerável – díades mães/bebês com história de exposição ao crack na gestação. A CART é um antioxidante endógeno presente desde o período embrionário e ativado por maiores níveis de dopamina. Foram avaliados 57 recém-nascidos expostos (RNE) e 99 não expostos (RNNE), e as suas mães. Utizou-se uma amostragem consecutiva, em um delineamento transversal. Foram considerados potenciais confundidores: dados maternos, como psicopatologia, QI, intensidade do uso de outras substâncias além de crack nos últimos três meses, doenças infecto-contagiosas e outros. Também foram considerados dados dos recém-nascidos (RNs), como apgar, peso e gênero, entre outros. No primeiro artigo, foram comparados os níveis de CART entre RNs com exposição intrauterina (EIU) ao crack vs RNs controles. Além disso, comparamos os níveis séricos de CART entre as mães desses RNs, no período pós-parto imediato. A análise estatística foi através de General Linear Model. A média ajustada da CART foi significativamente maior em RN expostos em comparação aos não expostos (0,18, IC95% 0,09 - 0,27 vs 0,05, IC95% 0,02 - 0,07; p = 0,002, d = 0,68), mesmo considerando-se o efeito da intensidade do uso de álcool nos últimos três meses. Já nas mães, não houve diferença nos níveis da CART entre expostas (mediana = 0,024, amplitude interquartil 1,123, amplitude 0,006222 – 1,126010, n = 44) e não expostas (mediana = 0,031, amplitude interquartil 3,439, amplitude 0,003739 – 3,442805, n= 90, p = 0,08, Mann-Whitney U Test). No segundo artigo, foi analisada a correlação (Spearman correlation test) entre CART no SCU e no sangue periférico materno das usuárias de crack desta mesma amostra. Encontramos correlação direta e moderada (rs= 0,350, p = 0,043). Através dos resultados do primeiro estudo, confirmamos alterações no sistema REDOX destas díades, sendo a CART mais mobilizada na dupla com exposição. A falta de diferença entre as puérperas sugere que a resposta antioxidante endógena possa variar de acordo com a etapa do ciclo vital e, talvez, a cronicidade do estressor – no caso, tempo de uso de crack. Através dos resultados do segundo artigo, concluímos que há um sistema antioxidante endógeno atuando desde cedo no feto em desenvolvimento. Em conjunto, trata-se de dados inovadores, com características de neuroproteção em RNs. Estes achados podem ajudar a elucidar os caminhos neurobiológicos responsáveis pelas alterações de neurodesenvolvimento, contribuindo para a ampliação das possibilidades de intervenções precoces. / The present master’s dissertation addressed the serum level of Cocaine and Amphetamine Regulated Transcript (CART) in a highly vulnerable population - mother/newborn dyads with a history of exposure to crack/cocaine during pregnancy. CART is an endogenous antioxidant present since the embryonic period and activated by higher levels of dopamine. We evaluated 57 exposed and 99 unexposed infants, and their mothers. A consecutive sampling was used in a cross-sectional design. Potential confounders were considered: maternal data, such as psychopathology, IQ, intensity of use of other substances besides crack/cocaine in the last three months, infectious diseases and others. Data on newborns, such as apgar, weight and gender, among others, were also considered. In the first article, we compared the levels of CART among newborns with intrauterine exposure to crack/cocaine vs newborns controls. In addition, we compared the serum levels of CART among the mothers of these newborns in the immediate postpartum period. The statistical analysis was through General Linear Model. The CART adjusted mean was significantly higher in exposed infants compared to non-exposed infants (0.18, 95% CI 0.09 - 0.27 vs 0.05, 95% CI 0.02-0.07, p = 0.002, D = 0.68), even considering the effect of the intensity of alcohol use in the last three months. In the mothers, there was no difference in the CART levels between exposed (median = 0.024, interquartile range 1,123, range 0.006222 - 1.126010, n = 44) and not exposed (median = 0.031, interquartile range 3,439, range 0.003739 - 3,442,805, n = 90, p = 0.08, Mann-Whitney U Test). In the second article, the correlation (Spearman correlation test) between CART in the umbilical cord blood (UCB) and the maternal peripheral blood of the crack/cocaine users of this same sample was analyzed. We found direct and moderate correlation (rs = 0.350, p = 0.043). Through the results of the first study, we confirmed changes in the REDOX system of these dyads, with CART being more mobilized in the pair with exposure. The lack of difference between postpartum women suggests that the endogenous antioxidant response may vary according to the stage of the life cycle and perhaps the chronicity of the stressor - in this case, crack/cocaine use duration. Through the results of the second article, we conclude that there is an endogenous antioxidant system acting at an early stage in the developing fetus. Together, these are innovative data, with characteristics of neuroprotection in newborns. These findings may help elucidate the neurobiological pathways responsible for neurodevelopmental changes, contributing to the expansion of the possibilities of early intervention.

Resumo:Os dímeros-D constituem os menores fragmentos dos produtos de degradação da fibrina e são produzidos após a lise pela plasmina da ligação cruzada da fibrina. Desta forma, os objetivos deste estudo foram determinar as concentrações plasmáticas de dímero-D e fibrinogênio de bezerros recém-nascidos e em vacas pós-parto e comparar as concentrações plasmáticas deste marcador hemostático entre os dois grupos. Aumentos significativos nas concentrações plasmáticas de dímero-D estão ligadas a ocorrência processo inflamatórios (como peritonite, sepse), coagulação intravascular disseminada, trombose de veia cava como por exemplo. As concentrações plasmáticas de dímero-D e de fibrinogênio não foram diferentes entre vacas pós-parto e bezerros com até 24 horas de idade. Houve correlação positiva significativa entre as concentrações plasmáticas de fibrinogênio entre os dois grupos. Não houve correlação entre as concentrações plasmáticas de dímero-D entre os dois grupos. Sendo assim, foi possível estabelecer intervalos de referência para as concentrações plasmáticas de dímero-D em vacas pós-parto e em bezerros recém-nascidos. / Abstract:The D-dimers are the smallest fragments of fibrin degradation products and are produced by plasmin after lysis of fibrin cross-connection. Thus, the objectives of this study were to determine plasma concentrations of D-dimer and fibrinogen in newborn calves and postpartum cows and to compare plasma concentrations of this hemostatic marker between these two groups. Significant increases in plasma concentrations of D-dimers occur during inflammatory processes (such as peritonitis, sepsis), disseminated intravascular coagulation and vena cava thrombosis for example. Plasma concentrations of D-dimer and fibrinogen were not different between groups. There was a significant positive correlation between plasma fibrinogen concentrations between groups. There was no correlation between plasma D-dimer between groups. Therefore, it was possible to establish reference intervals for plasma concentrations of D-dimer in postpartum cows and their newborn calves. / Orientador:Juliana Regina Peiró / Banca:Lina Maria Wehrle Gomide / Banca:Raimundo Souza Lopes / Mestre

SOUSSUMI, LMT. Estudo da distribuição de doadores reativos para a doença de Chagas no Hemocentro de Ribeirão Preto, SP. 2004. 106f. Dissertação (Mestrado) – Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2004. Este estudo, de que participaram 25.891 doadores de sangue que compareceram pela primeira vez ao Hemocentro de Ribeirão Preto, de junho de 1996 a junho de 2001, teve por objetivos: 1) estudar a freqüência de resultados sorológicos positivos e inconclusivos na triagem sorológica para a doença de Chagas; 2) estimar a prevalência de doadores infectados com T. cruzi entre os doadores acima definidos, através da aplicação de testes confirmatórios; e 3) caracterizar os doadores infectados segundo algumas variáveis de interesse epidemiológico. Foram levantados dados registrados no sistema informatizado do Hemocentro de Ribeirão Preto, coletando-se informações referentes ao doador, ao tipo de doação e ao resultado de teste de triagem para doença de Chagas. Foram estudados ainda os resultados dos testes confirmatórios, além de algumas variáveis de interesse epidemiológico, como idade, local de procedência e de nascimento, tipo da doação e motivo da doação. A população foi composta majoritariamente por homens (83,6%) e indivíduos de 26 a 45 anos de idade (64,1%), em sua maioria residente no Estado de São Paulo (88,2%). Predominaram as doações vinculadas (85,4%), tendo como principal motivação a solicitação de amigos ou razões familiares. A triagem sorológica foi realizada com a aplicação de dois testes (ELISA e IHA), com 244 resultados positivos e 386 inconclusivos; destes, 236 foram submetidos a testes confirmatórios, dos quais 28 (11.9%) tiveram resultado positivo confirmado. Os 272 com resultado positivo correspondem um valor de prevalência de 1,1% (IC95%: 0,9 – 1,2). A situação sorológica dos demais candidatos foi classificada em: negativa (n=25.521; 98,6%), indeterminada (n=14; 0,1%) e desconhecida (n=84; 0,3%). Do grupo dos doadores com situação sorológica desconhecida, 80 não compareceram ao retorno e 4 apresentaram problemas relacionados às amostras de sangue. A grande maioria dos doadores infectados, apesar de residir na região administrativa da cidade de Ribeirão Preto, no Estado de São Paulo, migrou de outras Unidades Federadas, onde era alta a prevalência da doença de Chagas no passado. Esse fato ficou evidenciado pela elevação progressiva e constante da prevalência da doença, intimamente relacionada com a idade mais avançada dos procedentes de Minas Gerais e, especialmente, de São Paulo. Os baixos percentuais de soropositividade entre os jovens nascidos em São Paulo evidenciam os avanços obtidos no controle da doença neste estado, que antecederam aqueles realizados em outras UFs do Brasil. Entretanto, os resultados deste estudo mostraram que ainda existem doadores jovens infectados procedentes de áreas onde o Programa Nacional de Controle da Doença de Chagas tem sofrido problemas crônicos de continuidade. / SOUSSUMI, LMT. Seropositivity for Chagas’ disease among blood donators in the Regional Blood Bank of Ribeirão Preto, State of São Paulo, Brazil. 2004. 106f. Dissertação (Mestrado) – Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2004. This study involved 25.891 subjects who donated blood for the first time at the Blood Center of Ribeirao Preto, State of Sao Paulo, Brazil, from June 1996 to June 2001. The investigation had the following objectives: 1) to study the frequency of positive and indeterminate results for Chagas’ disease in screening tests; 2) to estimate the prevalence of blood donors infected with Trypanosoma cruzi through confirmatory assays; and 3) to describe the infected individuals according to some variables of epidemiological interest. Information was obtained from the computerized system of the Blood Center, by collecting data about blood donors, type of donation and results of screening and confirmatory tests for Chagas´ disease. In addition, some variables of epidemiological interest, such as age, origin, place of birth, type of donation and motive for donation were also studied. The population was mostly composed of men (83,6%) and individuals from 26 to 45 years of age (64,1%), most of them resident in the State of Sao Paulo (88,2%). Family reasons and friends’ requests were the main determinants for blood donation (85,4%). The serological screening was carried out by applying two tests (ELISA and IHA), resulting 244 positive and 386 inconclusive. Of the latter group, 386 inconclusive results, 236 were submitted to confirmatory assays, 28 of whom (11.9%) were found to be positive. In the total, there were 272 positive results, corresponding to a prevalence rate of 1,1% (CI95%: 0,9 – 1,2). Regarding the serological situation, the other subjects were classified as: negative (n=25.521; 98,6%), indeterminate (n=14; 0,1%) and unknown (n=84, 0,3%). Of this last group, 80 did not attend to the return visit and 4 presented problems related to blood samples. Despite living in the area around Ribeirao Preto, the great majority of infected donors migrated from other States, where the prevalence of Chagas´ disease was high in the past. This fact was evidenced by the progressive and constant elevation of prevalence rates, closely related to older ages among donors coming from the State of Minas Gerais and, especially, from the State of Sao Paulo. The low rate of positive results among young individuals born in Sao Paulo confirms the improvements obtained in the control of the disease in this State, that preceded those accomplished in other parts of Brazil. However, this study still shows the existence of infected young blood donors, originally living in areas where the National Program for Control of Chagas’ Disease has been suffering chronic operational problems.