Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-06-27T04:07:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 345674.pdf: 1470023 bytes, checksum: 4faf374b020e940956b261f21b7e631d (MD5) Previous issue date: 2016 / O Transtorno de Déficit de Atenção e Hiperatividade (TDAH) é o distúrbio psiquiátrico mais diagnosticado entre crianças e adolescentes, podendo persistir também durante a fase adulta. Atualmente, o modelo animal mais amplamente utilizado nos estudos pré-clínicos deste transtorno é a linhagem isogênica de ratos espontaneamente hipertensos (SHR). Apesar de muito valiosa, esta linhagem apresenta limitações, não sendo capaz de contemplar todas as questões levantadas na pesquisa do TDAH. Assim, no presente estudo, nós avaliamos a linhagem congênica SLA16, com a perspectiva que esta possa ser um modelo genético importante no estudo de endofenótipos do TDAH. No primeiro bloco experimental deste estudo, animais adultos de ambas as linhagens foram submetidos a testes comportamentais para avaliar sua emocionalidade, atividade locomotora, habituação e memória de trabalho e procedimento. Para isso, os animais foram expostos 5 dias consecutivos a: 5 minutos ou 1 hora de Campo Aberto (CA); 1 hora de Caixa de Atividades (CAtiv); 4 tentativas diárias no Labirinto Aquático de Morris (LAM). No segundo bloco experimental partimos para uma abordagem farmacológica, para isso avaliamos os efeitos de um tratamento crônico com cafeína (CAF), durante a fase de adolescência dos animais, sobre atividade locomotora, emocionalidade e memória de trabalho e procedimento, ao fim do tratamento e um mês depois, quando os animais eram jovens adultos. A CAF é a droga psicoativa mais consumida no mundo, sendo consumida por diversas faixas etárias, incluindo crianças e adolescentes. Além disso, já foram relatados importantes efeitos da CAF sobre outros fenótipos relacionados ao TDAH, além do clássico aumento na atenção. Neste bloco, utilizamos novamente o CA (5 minutos, uma vez) e o LAM (4 tentativas diárias, 5 dias), testando os animais 3 dias, ou um mês após o fim do tratamento. O terceiro e último bloco de experimentos foi dedicado a avaliar se o tratamento crônico com CAF durante a adolescência afetaria a resposta a uma dose aguda da mesma na fase adulta. Para isso, testamos os animais, previamente expostos ao tratamento ou não, após uma dose aguda de CAF (10 mg/kg) no CA (5 minutos, uma vez). Os nossos resultados mostraram que os SLA16 exibem menores índices experimentais de emocionalidade, além de apresentarem uma hiperatividade locomotora em relação aos SHR no CA, nosprotocolos de 5 minutos. Ao longo dos 5 dias de protocolo, ambas as linhagens habituaram-se a CAtiv, mas não ao CA. Os resultados do primeiro bloco também demonstraram que as memórias de trabalho e de procedimento de ambas as linhagens é equivalente. No segundo bloco experimental, o tratamento com CAF durante a adolescência pareceu diminuir a hiperatividade locomotora dos SLA16 ao fim do tratamento, e melhorar o desempenho dos SHR no protocolo de memória operacional, 30 dias após o fim tratamento. Estas evidências apontam para uma diferença farmacogenética na resposta à CAF, provavelmente devido à influência do locus diferencial localizado no cromossomo 4 destas duas linhagens. Os resultados do último bloco revelaram um aumento na sensibilidade à CAF da linhagem SLA16, mas não da SHR, quando previamente expostos ao tratamento crônico com a mesma. Estes dados são mais um indício de uma diferença farmacogenética entre as linhagens. Assim, concluímos que a linhagem SLA16 é equivalente à SHR quanto à memória operacional e habituação, e ainda mais hiperativa em situações de novidades ou desafio. O tratamento com CAF durante a adolescência dos animais melhorou certos endofenótipos relacionados ao TDAH, apesar de ter causado também uma sensibilidade aumentada. Por fim, o locus diferencial parece induzir importantes diferenças farmacogenéticas na resposta à CAF.<br> / Abstract : Attention Deficit and Hyperactivity Disorder (ADHD) is the most diagnosed psychiatric disorder among children and adolescents and may persist into adulthood. Currently, the animal model most widely used in preclinical studies of this disorder is the spontaneously hypertensive rats (SHR). Although very valuable, this strain has limitations, not being able to cover all the issues raised in ADHD research. In the present study, we evaluated the congenic strain SLA16, which might be an important genetic model in the study of endophenotypes of ADHD. In the first experimental unit of this study, adult rats of both strains were tested in behavioral paradigms to assess their emotionality, locomotor activity, habituation and working and procedure memory. For this, the animals were exposed 5 consecutive days: 5 minutes or 1 hour to Open Field (OF); 1 hour to Activities Box (AB); 4 daily trials in the Morris Water Maze (MWM). In the second experimental unit, we tried a pharmacologic approach, we evaluated the effect of chronic treatment with caffeine (CAF) during the adolescence stage on locomotor activity, emotionality and working and procedure memory, at the end of treatment and a month later, when the animals were young adults. CAF is the one psychoactive drug most consumed in the world, and it is consumed by all age?s, including children and teenagers. Moreover, it has already been reported that CAF influences ADHD related phenotypes, besides the classic increase of attention. For this second unit, we used the OF again (5 min, once) and MWM (4 trials/day, 5 days), testing the animals 3 days or one month after the end of treatment. The third and last unit of experiments was devoted to evaluate whether chronic treatment with CAF during adolescence affect the response to an acute dose of CAF in adulthood. For this, we test the animals previously exposed to treatment or not, following an acute dose of CAF (10 mg / kg) at the OF (5 minutes, once). Our results showed that SLA16 exhibit lower levels of emotionality and presented a higher activity than SHR in OF, in 5 minutes protocols. During the 5-day protocol, both strains habituate to AB, but not to the CA. The first part of the results also showed that working memory is equivalent in both strains. In the second experimental unit, treatment during adolescence CAF appeared to decrease the locomotor hyperactivity of SLA16 at the end of the treatment and improved the procedure memory of SHR 30 days after the end oftreatment. This evidence suggests a pharmacogenetic difference in response to CAF, probably due to the influence of the differential locus on chromosome 4. The last block of the results revealed that chronic treatment with CAF led to an increased sensitivity on SLA16 strain, but not on SHR. These data are evidence of a pharmacogenetic difference between strains. Thus, we conclude that the SLA16 line is equivalent to SHR as the working and procedure memory and habituation, and even more hyperactive in novelty or challenging situations. The treatment with CAF during adolescence improved endophenotypes related to ADHD, although it also caused increased sensitivity. Finally, the differential locus seems to lead relevant pharmacogenetic differences in response to CAF.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-03-25Bitstream added on 2014-06-13T19:01:26Z : No. of bitstreams: 1 pereira_ccs_dr_araca.pdf: 2797360 bytes, checksum: 8e541aa2583339f19774f548ff235f8c (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A hipertensão arterial sistêmica é uma condição clínica de etiologia multifatorial, com altos índices de complicações, como doenças cardiovasculares e renais, que tornam essa entidade um dos maiores problemas de saúde pública mundial. Sabe-se que esta patologia altera o padrão de regulação de cálcio induzindo a perda óssea. O objetivo deste estudo foi avaliar comparativamente o processo de reparo alveolar em ratos espontaneamente hipertensos (SHR) e Wistar e o efeito do losartan, droga inibidora dos receptores AT1 da angiotensina II na dinâmica óssea. Um total de 60 ratos foram divididos em 4 grupos com 3 períodos de avaliação: A. Wistar; B. SHR; C. Wistar tratado com losartan (30 mg/kg/dia); D:SHR tratado. Submetidos a exodontia do incisivo superior direito com eutanásia no 7º, 14º e 28º dia de pós-operatório. A análise dos mecanismos biológicos envolvidos no processo de reparo alveolar foi obtida pela histomorfometria e imunoistoquímica por meio da expressão das proteínas OPG, RANKL, TRAP e PECAM envolvidos na dinâmica do metabolismo ósseo. Os resultados foram submetidos a teste não paramétricos de Kruskal Wallis, seguido de Mann Whitney para comparação das amostras nos diferentes períodos. O grupo SHR apresentou atraso na cronologia do reparo alveolar. O losartan influenciou processo de reparo em Wistar e SHR, acarretando maior formação óssea, assim como maior espessura do trabeculado. Além disso, pode-se constatar que as referidas proteínas marcadas participam ativamente da dinâmica óssea, sofrendo ação do medicamento anti-hipertensivo proposto. Assim, sugere-se que o sistema renina-angiotensina interfere no metabolismo ósseo por meio da ação da angiotensina II / Hypertension is a multifactorial clinical condition, with high rates of complications, such as cardiovascular and renal disease, that make this organization one of the greatest public health problems worldwide. It is known that this disease alters the pattern of calcium regulation by inducing bone loss. The aim of this study was to comparatively evaluate the process of alveolar repair in spontaneously hypertensive rats (SHR) and Wistar and the effect of losartan (30 mg / kg / day), a drug inhibiting the angiotensin II AT1 receptors in bone dynamics. A total of 60 rats were divided into 4 groups with 3 evaluation periods: A. Wistar; B. SHR; C. Wistar treated; D: SHR treated. The rats underwent dental extraction of the upper right incisor, was proceeded euthanasia on the 7th, 14th and 28th day after surgery. The analysis of the biological mechanisms involved in alveolar repair was obtained by histomorphometry and immunohistochemistry through the expression of OPG protein, RANKL, TRAP and PECAM dynamics involved in bone metabolism. Results were submitted to nonparametric test of Kruskal Wallis followed by Mann Whitney test for comparison of samples in different periods. The SHR was late in the chronology of alveolar repair. Losartan influenced repair process in Wistar and SHR, resulting in increased bone formation, as well as greater trabecular thickness. Moreover, it can be seen that these tagged proteins actively participate in the dynamic bone, suffering the action of the antihypertensive drug proposed. Thus, it is suggested that losartan and the renin-angiotensin interfere with bone metabolism through the action of angiotensin II

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-29. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:47:12Z : No. of bitstreams: 1 000831217.pdf: 416876 bytes, checksum: 8613d4f25135ffe9c4661b38ebe09868 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Ratas prenhas normotensas ou hipertensas (SHR) apresentam redução da pressão arterial nos períodos finais da prenhez, associada à redução da atividade simpática perivascular de leitos mesentéricos e redução de respostas vasoconstritoras a alguns agonistas vasoconstritores. O endotélio vascular modula a resposta contrátil estimulada por vasoconstritores e, na prenhez, uma maior modulação do óxido nítrico (NO) sobre a reatividade vascular de aortas tem sido atribuída à maior atividade da sintase de óxido nítrico endotelial (eNOS). No entanto, nenhuma alteração da reatividade de aortas à Acetilcolina, ou a o A23187, foi observada em aortas de ratas prenhas. Foi sugerido que a participação de uma via de sinalização independente de ativação de receptores e menos dependente de cálcio, estaria envolvida na modulação endotelial sobre a vasoconstrição durante a prenhez. A expressão da eNOS fosforilada está aumentada em aorta de ratas prenhas. A eNOS pode ser fosforilada em resíduos de serina e treonina pela via PI3K/AKT. No entanto, a participação da via PI3K/AKT/eNOS na hiporreatividade de aortas de ratas prenhas à fenilefrina ainda não foi demonstrada. O objetivo deste estudo foi avaliar se o Wortmannin, um inibidor da via PI3K/AKT, poderia reverter a hiporreatividade de aortas à fenilefrina associada à prenhez e alterar as concentrações citosólicas de óxido nítrico (NO), cálcio (Ca2+) e de espécies reativas de oxigênio (ERO) em células endoteliais isoladas de aortas de ratas Wistar e SHR prenhas. Inicialmente, avaliamos as possíveis alterações nos parâmetros cardiovasculares e na sensibilidade barorreflexa associadas à prenhez de ratas espontaneamente hipertensas (SHR) por estudos in vivo. O efeito do Wortmannin foi avaliado na reatividade de aortas isoladas à fenilefrina por estudos funcionais e nas concentrações... / Normotensive or hypertensive pregnant rats (SHR) show a significant reduction in blood pressure in the final period of pregnancy, associated with reduced activity of perivascular sympathetic mesenteric beds and reduced vasoconstrictor responses to some vasoconstrictor agonists. The vascular endothelium modulates contractile response stimulated by vasoconstrictors and in pregnancy, an additional modulation of nitric oxide (NO) on vascular reactivity of aortas has been attributed to increased activity of endothelial nitric oxide synthase (eNOS). However, no change in the aortas of reactivity to acetylcholine or A23187 was observed in aortas of pregnant rats. The involvement of a signaling pathway independent of receptor activation and less dependent calcium was suggested. This pathway is involved in the modulation of endothelial vasoconstriction during pregnancy. The expression of phosphorylated eNOS is increased in the aorta of pregnant rats and this enzyme can be phosphorylated on serine and threonine residues of the PI3K/Akt pathway. However, the participation of the PI3K/AKT/eNOS pathway in hyporeactivity in the aortas of pregnant rats to phenylephrine has not been demonstrated. The aim of this study was evaluate if the PI3K/AKT pathway inhibitor (Wortmannin) could reverse the hyporeactivity of aortas to phenylephrine associated with the end of pregnancy and change the cytosolic concentrations of nitric oxide (NO), calcium (Ca2+) and reactive oxygen species (ROS) in isolated endothelial cells from aortas of pregnant Wistar rats and SHR. Initially, we evaluated the possible changes in cardiovascular parameters and baroreflex sensitivity associated with pregnancy in spontaneously hypertensive rats (SHR) by in vivo studies. The effect of Wortmannin was evaluated in the isolated aortas reactivity to phenylephrine and by functional studies through cytosolic concentrations of NO, Ca2+ and ROS... / FAPESP: 12/05746-8

Orientador: Cristina Antoniali Silva / Banca: Lusiane Maria Bendhack / Banca: Andre Sampaio Pupo / Banca: Carlos Renato Tirapelli / Eliana Hiromi Akamine / Resumo: O TERPY promove efeito hipotensor de maior magnitude em ratos hipertensos (SHR e 2R-1C) do que em ratos normotensos (Wistar e 2R). Foi demonstrado anteriormente que o endotélio prejudica o efeito vasodilatador do TERPY em aorta de Wistar. No entanto, observamos que o endotélio melhora os efeitos vasodilatadores do TERPY em aorta de SHR. Vasos sanguíneos de menor calibre, tais como as artérias de resistência, estão associadas ao controle da resitência vascular periférica e da pressão arterial. Nossa hipótese é que o TERPY induz relaxamento nas artérias mesentéricas de resistência em SHR e que as células endoteliais modulam positivamente o efeito do TERPY nestes vasos sanguíneos. Portanto, o nosso objetivo foi avaliar o efeito vasodilatador do TERPY em anéis com e sem endotélio de artéria mesentérica de ratos SHR, o seu mecanismo de relaxamento e a participação da NOS sobre esse efeito. e a Nossos resultados mostraram que o TERPY induziu um efeito vasodilatador dependente da concentração em anéis de artérias mesentéricas (2º e 3º ramos) de SHR e de ratos Wistar. A potência do TERPY foi maior em anéis intactos do que em anéis sem endotélio em artérias mesentéricas de SHR, mas em Wistar o endotélio prejudicou o efeito do TERPY. Nas artérias mesentéricas sem endotélio de SHR, o efeito do TERPY é dependente da atividade da guanilato ciclase solúvel e de canais para potássio. Nas artérias mesentéricas intactas de SHR, o efeito de TERPY depende da atividade de eNOS, mas não é depende... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: TERPY promotes a hypotensive effect with greater magnitude in hypertensive rats (SHR and 2K-1C) than in normotensive rats (Wistar and 2K). Previously, it was demonstrated that endothelium impairs vasodilatory effect of TERPY in Wistar aorta. However, we observed that endothelium improves the vasodilatory effect o f TERPY in SHR aorta. Smaller blood vessels, such as mesenteric arteries, are associa ted with the control of peripheral vascular resistance and blood pressure. We hypothesized that TERPY induces relaxation on mesenteric resistance arteries in SHR and endothelial cells modulate positively the TERPY's eff ect on these blood vessels. Therefore, our goal was to evaluate the vasodilator effect of TERPY in rings with and without endothelium of mesenteric arteries in SHR, the mecha nism of relaxation and the participation of NOS on this effect. Our results show TERPY induced a concentration-dependent vasodilator effect in mesenteric arteries (2 nd and 3 rd branches) rings from SHR and Wistar. The potency of TERPY was higher in intact than in denuded rings from SHR, but in Wistar, endothelium impair the TERP Y's effect. In denuded mesenteric arteries from SHR, the relaxation effect induced by TERPY is dependent of soluble guanylate cyclase and activation of pota ssium channel. However, in intact mesenteric arteries from SHR, TERPY ́s effect is modulated by eNOS activity, but it is not dependent of nNOS, iNOS or cyclooxygenase pathway activities. TERPY promotes eNOS3 Ser 1177 phosphorylation and increases nitric oxide concentration in isolated endothelial cells of mesen teric arteries from SHR. Together, our results showed that soluble guanylate cy clase, potassium channels, and eNOS are involved in the vasodilator effect of TE RPY in mesenteric resistance arteries from SHR. In a second part of this study, we aimed to evaluate the mechanism ...(Complete abstract electronic access below) / Doutor

Orientador: Sandra Helena Penha de Oliveira / Banca: Gustavo Pompermaier Garlet / Banca: Willian Fernando Zambuzzi / Resumo: Células-tronco mesenquimais (CTMs) obtidas a partir da medula óssea são capazes de se diferenciarem, sobretudo, em condrócitos, adipócitos e osteoblastos. Durante a osteogênese in vitro, alguns parâmetros são utilizados para caracterizar este processo, tais como atividade da fosfatase alcalina (FAL), mineralização e expressão de proteínas associadas à osteoblastos. Ratos espontaneamente hipertensos (SHR) são um modelo animal de hipertensão essencial humana e desenvolvem hipertensão após 4 semanas de idade. Esta linhagem apresenta alterações significativas no metabolismo ósseo. O objetivo do presente estudo foi investigar se, o genótipo hipertensivo poderia interferir na diferenciação osteoblástica das CTMs de ratos SHR e qual mecanismo está alterado quando comparadas com a linhagem progenitora, ratos Wistar. Para isso, nós obtivemos CTMs da medula óssea de ratos Wistar e SHR com 4 semanas de idade, sem a hipertensão estabelecida, afim de avaliar somente o possível efeito do genótipo hipertensivo na diferenciação osteogênica in vitro. Nós induzimos, ou não, a diferenciação osteogênica in vitro por meio da utilização dos indutores osteogênicos: ácido ascórbico, β-glicerofosfato e dexametasona. Os resultados demonstraram que, CTMs indiferenciadas de SHR (SHRC) demonstraram taxa de proliferação aumentada em comparação a CTMs, na mesma condição, de Wistar (WC), e após a indução da osteogênica, a taxa de proliferação apresentou uma diminuição acentuada no grupo SHR (SHRMO) do que no grupo Wistar na mesma condição (WMO). Embora não fora observada diferença significativa na atividade da FAL entre SHRMO e WOM no 7° dia, a mineralização e a diferenciação osteoblástica foram menores no grupo SHRMO no mesmo período experimental. Os fatores de transcrição Osterix e β-catenina parecem estar envolvidos na diferenciação reduzida no grupo SHRMO... / Abstract: Mesenchymal stem cells (MSCs) from bone marrow are able to differentiate mainly into chondrocytes, adipocytes and osteoblasts. During in vitro osteogenesis, some parameters are used to characterize this process, such as the activity of alkaline phosphatase (ALP), mineralization and osteoblast-associated proteins expression. Spontaneously hypertensive rats (SHR) is an animal model of human essential hypertension. This animals developing hypertension after 4 weeks of age. This strain shows significant changes in bone metabolism. The aim of this study was to investigate whether the hypertensive genotype could influence the osteoblastic differentiation of MSCs from SHR and which mechanism are altered when compared to the parental strain, Wistar rats. For that, we have obtained bone marrow MSCs from Wistar and SHR rats at 4 weeks of age, without hypertension established in order to evaluate only the possible effect of hypertensive genotype on osteogenic differentiation in vitro. We induced or non-osteogenic differentiation in vitro using osteogenic inducers: ascorbic acid, dexamethasone and β-glycerophosphate. The results demonstrate that undifferentiated MSCs SHR (SHRC) showed increased proliferation rate compared to MSCs, in the same condition Wistar (WC) and after osteogenic induction, proliferation rate showed a marked decrease in SHR (SHRMO) than in Wistar group in the same condition (WMO). Although it was not observed significant difference in ALP activity between WMO and SHRMO on day 7, mineralization and osteoblast differentiation were lower on group SHRMO in the same experimental period. The transcription factors Osterix and β-catenin appear to be involved in reduced differentiation in SHRMO group because they showed lower expression in this experimental group. Furthermore, the decreased... / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-07-25Bitstream added on 2014-06-13T18:09:13Z : No. of bitstreams: 1 nobre_mdp_me_sjc.pdf: 1018659 bytes, checksum: dbe488e3a217fc107f7384423ac8711f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho analisou a ação local do alendronato sódico no processo de reparação óssea em fêmures de ratos espontaneamente hipertensos (SHR). Foram utilizados quarenta ratos machos e quarenta fêmeas, para a confecção de um defeito ósseo de 2,5mm de diâmetro. De acordo com o material utilizado, criaram-se quatro grupos: controle (C), amido (Am), alendronato 1mol (A1) e alendronato 2mol (A2). Os animais do grupo C não tiveram seus defeitos ósseos preenchidos. Após o período de sete e 21 dias, os animais foram sacrificados. Foi realizada a análise histológica e histomorfométrica e os dados submetidos à análise estatística ANOVA. Aos sete dias, encontrava-se tecido conjuntivo com hemorragia e infiltrado inflamatório ocupando a área do defeito em todos os grupos experimentais e, em alguns grupos, focos de matriz osteóide. Os animais dos grupos A1 e A2 apresentavam uma rede de fibrina no tecido conjuntivo. Aos 21 dias, as trabéculas ósseas fechavam praticamente toda a extensão do defeito nos grupos C e Am. No grupo A1 de animais machos, observavam-se trabéculas que se irradiavam do interior da medula óssea até a área do defeito. Nos demais grupos A1 e A2 constatava-se apenas a presença de tecido conjuntivo, com deposição de fibras colágenas e mínima deposição de matriz osteóide. Um achado histológico marcante foi a formação de tecido ósseo extra-cortical subperiosteal nos animais dos grupos A1 e A2. O estudo concluiu que, neste modelo experimental, a administração local do alendronato sódico não contribuiu para o processo de reparação óssea nas concentrações molares utilizadas. / This study evaluated the local action of alendronate sodium on bone repair in spontaneously hypertensive rats (SHR). A bone defect of diameter 2,5mm was created in forty males and forty females. Four groups were created according to the treatment received: control (C), amido (Am), alendronate 1mol (A1) and alendronate 2mol (A2). The C group did not have their defect filled in with any material. The animals were sacrificed seven and 21 days after the surgical procedure. Histological and histomorfometric analyses were performed and the results submitted to ANOVA statistical analysis. On the seventh day, all groups presented a connective tissue with hemorrhage and inflammatory cells in the bone defect. In some groups osteoid matrix was observed. In A1 and A2 groups, the animals also presented a fibrin deposition. After 21 days, a formation of bone trabeculae was observed closing the superficial extension of the bone defect in C and Am groups. On male rats of group A1, the trabeculae formation projected from inside the bone medulla to the defect site, without completely closing it. In the others animals of groups A1 and A2, bone trabeculae were not observed in the defect site. It was only observed a deposition of dense collagen fibers and minimal osteoid matrix. An important histological feature found in this study was the formation of extra-cortical subperiosteal bone in the animals of A1 and A2 groups. The study concluded that the local administration of alendronate sodium did not contribute for the bone repair, in this experimental model.

Submitted by MURILO EDUARDO GRATON null (murilo.graton@yahoo.com.br) on 2017-05-30T04:15:45Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado - Murilo Eduardo Graton - Oficial.pdf: 2455052 bytes, checksum: 9fdb49043c056012a6f5db47564916b4 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-05-31T17:10:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 graton_me_me_araca.pdf: 2455052 bytes, checksum: 9fdb49043c056012a6f5db47564916b4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-31T17:10:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 graton_me_me_araca.pdf: 2455052 bytes, checksum: 9fdb49043c056012a6f5db47564916b4 (MD5) Previous issue date: 2017-05-12 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A enzima NAD(P)H oxidase (NOX) é a principal fonte de espécies reativas de oxigênio (ERO) no sistema cardiovascular e sua atividade e expressão podem ser regulada pela angiotensina (Ang) II. Demonstramos previamente que o tratamento crônico com apocinina, um inibidor de NOX, reduziu a pressão arterial e preveniu o desenvolvimento da disfunção endotelial em SHR. Estes efeitos da apocinina foram associados a redução de geração de ERO e ao aumento da biodisponibilidade de óxido nítrico em células endoteliais de SHR. Dados de nosso laboratório mostraram que o tratamento com apocinina, também reduziu o efeito pressor da Ang II em SHR. A associação entre Ang II, via receptores AT1, e o estresse oxidativo tem sido implicada na patogênese da hipertensão. Levantamos a hipótese que a apocinina, ao alterar a sinalização redox, reduz a expressão de receptores AT1 e a resposta vasoconstritora da Ang II em SHR. Neste estudo, avaliamos o efeito do tratamento crônico com apocinina sobre as respostas contráteis à Ang II em vasos sanguíneos de SHR e os mecanismos envolvidos nestes efeitos, utilizando ensaios bioquímicos, biomoleculares e funcionais. SHR foram tratados com apocinina (30 mg/Kg, v.o.) da 4ª a 10ª semana de vida e ratos Wistar foram utilizados como controle normotenso. Analisamos os efeitos da apocinina na capacidade antioxidante plasmática, expressão de NOX, geração de ERO, níveis de nitrato/ nitrito, expressão de receptores AT1 e AT2, e respostas vasoconstritoras à Ang II em artéria mesentérica e aorta. O tratamento de SHR com apocinina aumentou a capacidade antioxidante plasmática, os níveis de nitrato/nitrito, não alterou a expressão de receptores AT1 ou AT2 em artérias mesentéricas, mas aumentou a expressão de AT2, mas não de AT1, em aorta de SHR. Além disto, o tratamento com apocinina diminuiu a expressão de NOX2 e p47phox e a produção de ERO. O tratamento com apocinina aumentou a modulação do endotélio e/ou da atividade da NOS sobre as respostas vasoconstritoras à Ang II em artérias mesentéricas de SHR, mas não alterou a reatividade de aortas de SHR à Ang II. A menor reatividade de artérias de resistência à Ang II levaria a menor resistência vascular periférica e consequentemente a redução da pressão arterial média e do efeito pressor da Ang II em SHR tratados com apocinina, como observado previamente. O mecanismo de ação da apocinina envolvido neste efeito está associado a importantes alterações redox que determinam uma maior modulação endotelial dependente de NOS das respostas vasoconstritoras da Ang II, mas não envolve alterações na expressão de receptores AT1 em vasos de SHR. / NAD(P)H oxidase (NOX) is the major source of reactive oxygen species (ROS) in the cardiovascular system and its activity and expression could be regulated by angiotensin (Ang) II. We previously demonstrated that chronic treatment with apocynin, a NOX inhibitor, reduced blood pressure and prevented the development of endothelial dysfunction in SHR. These effects of apocynin have been associated with reduced generation of ROS and increased bioavailability of nitric oxide in endothelial cells of SHR. Data from our laboratory showed that treatment with apocynin also reduced the pressor effect of Ang II on SHR. The association between Ang II, via AT1 receptors, and oxidative stress has been implicated in the pathogenesis of hypertension. We hypothesized that apocynin, altering redox signaling, could reduce expression of AT1 receptors and Ang II vasoconstrictor response in SHR. In this study, we evaluated the effect of chronic treatment with apocynin on the contractile responses to Ang II in blood vessels of SHR and the mechanisms involved in the effects of these on biochemical, biomolecular and functional assays. SHR were treated with apocynin (30 mg/kg, p.o.) from the 4 th to the 10th week of life and Wistar rats were used as normotensive control. Analysis of the effects of apocynin on plasma antioxidant capacity, NOX expression, ROS generation, nitrate/ nitrite levels, expression of AT1 and AT2 receptors, and vasoconstrictor responses to Ang II on mesenteric and aortic arteries. Treatment of SHR with apocynin increased plasma antioxidant capacity, nitrate/ nitrite levels, did not alter AT1 or AT2 receptor expression in mesenteric arteries, but increased expression of AT2, but not AT1, in SHR aorta. In addition, treatment with apocynin decreased expression of NOX2 and p47phox and ROS generation. Treatment with apocynin increased endothelium modulation and/or NOS activity on Ang II vasoconstrictor responses in mesenteric arteries of SHR, but did not alter the reactivity to Ang II in aortas of SHR. The lower reactivity of Ang II in resistance arteries would lead to lower peripheral vascular resistance and consequently the reduction of mean arterial pressure and Ang II pressor effect in SHR treated with apocynin, as previously observed. The mechanism of action of the apostate involved in this effect is associated with important redox changes that determine a greater NOS-dependent endothelial modulation of the vasoconstrictor responses of Ang II, but does not involve expression in the expression of AT1 receptors in SHR vessels.

Orientador: Cristina Antoniali Silva / Banca: Graziela Scalianti Ceravolo / Banca: Carlos Alan Candido Dias Júnior / Resumo: Ratas prenhas normotensas ou hipertensas (SHR) apresentam redução da pressão arterial nos períodos finais da prenhez, associada à redução da atividade simpática perivascular de leitos mesentéricos e redução de respostas vasoconstritoras a alguns agonistas vasoconstritores. O endotélio vascular modula a resposta contrátil estimulada por vasoconstritores e, na prenhez, uma maior modulação do óxido nítrico (NO) sobre a reatividade vascular de aortas tem sido atribuída à maior atividade da sintase de óxido nítrico endotelial (eNOS). No entanto, nenhuma alteração da reatividade de aortas à Acetilcolina, ou a o A23187, foi observada em aortas de ratas prenhas. Foi sugerido que a participação de uma via de sinalização independente de ativação de receptores e menos dependente de cálcio, estaria envolvida na modulação endotelial sobre a vasoconstrição durante a prenhez. A expressão da eNOS fosforilada está aumentada em aorta de ratas prenhas. A eNOS pode ser fosforilada em resíduos de serina e treonina pela via PI3K/AKT. No entanto, a participação da via PI3K/AKT/eNOS na hiporreatividade de aortas de ratas prenhas à fenilefrina ainda não foi demonstrada. O objetivo deste estudo foi avaliar se o Wortmannin, um inibidor da via PI3K/AKT, poderia reverter a hiporreatividade de aortas à fenilefrina associada à prenhez e alterar as concentrações citosólicas de óxido nítrico (NO), cálcio (Ca2+) e de espécies reativas de oxigênio (ERO) em células endoteliais isoladas de aortas de ratas Wistar e SHR prenhas. Inicialmente, avaliamos as possíveis alterações nos parâmetros cardiovasculares e na sensibilidade barorreflexa associadas à prenhez de ratas espontaneamente hipertensas (SHR) por estudos in vivo. O efeito do Wortmannin foi avaliado na reatividade de aortas isoladas à fenilefrina por estudos funcionais e nas concentrações... / Abstract: Normotensive or hypertensive pregnant rats (SHR) show a significant reduction in blood pressure in the final period of pregnancy, associated with reduced activity of perivascular sympathetic mesenteric beds and reduced vasoconstrictor responses to some vasoconstrictor agonists. The vascular endothelium modulates contractile response stimulated by vasoconstrictors and in pregnancy, an additional modulation of nitric oxide (NO) on vascular reactivity of aortas has been attributed to increased activity of endothelial nitric oxide synthase (eNOS). However, no change in the aortas of reactivity to acetylcholine or A23187 was observed in aortas of pregnant rats. The involvement of a signaling pathway independent of receptor activation and less dependent calcium was suggested. This pathway is involved in the modulation of endothelial vasoconstriction during pregnancy. The expression of phosphorylated eNOS is increased in the aorta of pregnant rats and this enzyme can be phosphorylated on serine and threonine residues of the PI3K/Akt pathway. However, the participation of the PI3K/AKT/eNOS pathway in hyporeactivity in the aortas of pregnant rats to phenylephrine has not been demonstrated. The aim of this study was evaluate if the PI3K/AKT pathway inhibitor (Wortmannin) could reverse the hyporeactivity of aortas to phenylephrine associated with the end of pregnancy and change the cytosolic concentrations of nitric oxide (NO), calcium (Ca2+) and reactive oxygen species (ROS) in isolated endothelial cells from aortas of pregnant Wistar rats and SHR. Initially, we evaluated the possible changes in cardiovascular parameters and baroreflex sensitivity associated with pregnancy in spontaneously hypertensive rats (SHR) by in vivo studies. The effect of Wortmannin was evaluated in the isolated aortas reactivity to phenylephrine and by functional studies through cytosolic concentrations of NO, Ca2+ and ROS... / Mestre

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

No description available.