No início da década de 50 foi primeiramente descrito que mamíferos apresentam um período de hiporresponsividade ao estresse, durante o qual estímulos normalmente estressores não elicitam uma resposta clássica, com aumento de glicocorticóides circulantes. Desde então, tem-se estudado intervenções nesse período e efeitos na idade adulta. Algumas intervenções, consideradas severas, conseguem induzir resposta ao estresse, como separação maternal repetida (mais de 30 minutos por dia) e privação materna (separação da mãe por 24h ou mais). No entanto, intervenções moderadas, como a manipulação neonatal (separação acompanhada de manipulação gentil durante 1 a 10 minutos por dia), não desencadeiam resposta ao estresse, mas levam a uma série de alterações morfofuncionais e comportamentais, indicando que algum tipo de resposta às variações ambientais está presente. Existem muitos trabalhos descrevendo os efeitos a curto e longo prazo da manipulação neonatal, no entanto pouco se sabe sobre os mediadores de tais alterações. As citocinas imunológicas vêm sendo descritas como de grande importância para o funcionamento do sistema nervoso central (SNC), tanto em processos patológicos quanto fisiológicos. Estão presentes durante a formação e desenvolvimento do SNC desempenhando funções como indução da proliferação, migração e diferenciação celular. Nesse contexto, ao estudarmos o perfil citocinérgico no hipocampo de ratos manipulados até o 5º dia de vida pós-natal, encontramos aumento nos níveis de interleucina 1 beta (IL-1b) e redução nos níveis de interleucina 6. A IL-1b tem sido descrita como um importante indutor de neurogênese hipocampal em animais jovens e adultos, enquanto a interleucina 6 apresenta efeito oposto. Juntos, o aumento de IL-1b e a redução de IL-6 podem estar criando um ambiente favorável à proliferação celular hipocampal que, por sua vez, pode estar envolvido nas alterações cognitivas e de regulação do eixo hipotálamo-hipófise-adrenal encontradas em animais manipulados no período neonatal.

O exercício físico moderado e regular é considerado uma estratégia neuroprotetora promissora. Os mecanismos pelos quais o exercício físico altera a função cerebral não foram completamente esclarecidos. Nossa hipótese de trabalho foi que estas propriedades neuroprotetoras estejam relacionadas com o remodelamento da cromatina, especificamente alterando os níveis de acetilação de histonas através da modulação da atividade das enzimas Histona Acetiltransferase (HAT) e Histona Desacetilase (HDAC). O objetivo do estudo foi investigar o efeito do exercício na atividade da Histona Acetiltransferase (HAT) e Histona Desacetilase (HDAC) em hipocampo de ratos em diferentes tempos após o treinamento. Ratos Wistar machos adultos foram distribuídos em um grupo não-exercitado (sedentário) e um grupo exercitado em diferentes protocolos: sessão única de exercício (corrida de 20 min) e treinamento crônico de exercício (corrida de 20 min, uma vez por dia, durante duas semanas). Os efeitos do exercício na atividade da Histona Acetiltransferase (HAT) e Histona Desacetilase (HDAC) foram mensurados imediatamente, 1 h e 18 h após a sessão única ou após a última sessão do treinamento crônico de exercício, utilizando kits ELISA específicos. A sessão única de exercício reduziu a atividade da Histona Desacetilase (HDAC) e aumentou a atividade da Histona Acetiltransferase (HAT), bem como aumentou o balanço HAT/HDAC em hipocampos de ratos, imediatamente e 1 h após o exercício, indicando um estado de hiperacetilação de histonas. O treinamento crônico não alterou a atividade das enzimas Histona Acetiltransferase (HAT) e Histona Desacetilase (HDAC). As atividades das enzimas Histona Acetiltransferase (HAT) e Histona Desacetilase (HDAC) foram influenciadas pelo ritmo circadiano, uma vez que o balanço HAT/HDAC foi significativamente menor durante o período da manhã em comparação ao período da tarde. O exercício físico alterou a atividade das enzimas Histona Acetiltransferase (HAT) e Histona Desacetilase (HDAC) em hipocampos de ratos Wistar, apresentando efeito de curta duração. / Regular and moderate exercise has been considered a promising neuroprotective strategy. The mechanisms by which physical exercise alters brain function are not completely clear. Our work hypothesis was that these neuroprotective properties could be related to chromatin remodeling, specifically altering the histone acetylation levels through modulation of Histone Acetyltransferase (HAT) and Histone Desacetylase (HDAC) enzyme activities. The aim of the work was to investigate the effect of exercise on Histone Acetyltransferase (HAT) and Histone Desacetylase (HDAC) activities in rat hippocampus at different times after treadmill exercise. Adult male Wistar rats were assigned to a non-exercised (sedentary) group and an exercised group on different protocols: a single session of exercise (running for 20 min) and a chronic treadmill exercise (running once daily for 20 min, for 2 weeks). The effects of exercise on Histone Acetyltransferase (HAT) and Histone Desacetylase (HDAC) activities were measured immediately, 1 h and 18 h after the single session or the last session of chronic treadmill exercise using specific ELISA kits. The single session of exercise reduced the Histone Desacetylase (HDAC) activity and increased the Histone Acetyltransferase (HAT) activity, as well increased the HAT/HDAC balance in rat hippocampus, immediately and 1 h after exercise, indicative of histone hyperacetylation status. The chronic treadmill did not alter the Histone Acetyltransferase (HAT) and Histone Desacetylase (HDAC) enzymes activity. The Histone Acetyltransferase (HAT) and Histone Desacetylase (HDAC) enzymes activities were influenced by the circadian rhythm, since the HAT/HDAC ratio was significantly decreased in the early morning when compared to the afternoon. The physical exercise altered the Histone Acetyltransferase (HAT) and Histone Desacetylase (HDAC) enzymes activities in Wistar rats hippocampus, presenting short term effects.

Sabe-se que o sistema canabinóide endógeno está envolvido com os processos de formação e evocação da memória. Agonistas dos receptores CB1 exibem diferentes efeitos conforme a via de infusão, seja ela sistêmica, seja local, atingindo estruturas específicas do encéfalo. Neste estudo pretendemos estabelecer o perfil farmacológico-comportamental e eletrofisiológico do agonista CP55,940 quando administrado no hipocampo dorsal de ratos, estrutura em que há poucos estudos prévios com este fármaco: diferente de outros agonistas como a WIN55,212 e mesmo a pouco seletiva anandamida, o CP55,940 restringe-se a receptores canabinóides e chega a ser mais potente que o Δ9-THC, embora não discrimine entre os receptores CB1 (central) e CB2 (periférico). Os fármacos foram infundidos bilateralmente, em diferentes concentrações, na área CA1 do hipocampo, imediatamente após o treino ou antes do teste na tarefa de Condicionamento Aversivo ao Contexto (CAC), visando estudar seus efeitos, respectivamente, na consolidação e na evocação da memória. A CP55,940 pós-treino foi amnéstica apenas na concentração de 5 μg/μl, e esse efeito foi revertido pelo antagonista AM251, seletivo para CB1, em concentração sem efeito próprio, comprovando tal efeito dever-se à ação sobre os receptores CB1. O mesmo efeito foi observado 24h após o treino, na infusão pré-teste, se bem que agora a CP55,940 foi efetiva também em concentrações mais baixas, sugerindo que os receptores desse sistema endógeno tenham ficado mais sensíveis a seus ligantes em função do aprendizado; a seletividade por CB1 neste caso, porém, não ficou claramente atestada pois o efeito de 5 μg/μl de CP55,940 só foi revertido com uma concentração maior de AM251. Na eletrofisiologia, uma concentração de CP55,940 comparável à efetiva sobre a CAC (10μM), não foi capaz de inibir a indução da LTP, já que a potenciação só se sustentou por cerca de 30min – não passou de uma LTP. Esses resultados reforçam e diversificam estudos anteriores, inclusive de nosso grupo, que comprovam a participação dos receptores CB1 na formação e/ou evocação de novas memórias aversivas, bem como possíveis alterações plásticas na densidade desses receptores em função da experiência cognitiva, embora não necessariamente mediadas por eventos sinápticos plásticos como a LTP. / The endogenous cannabiboid system is known to be involved memory formation and retrieval processes. CB1 agonists may cause different effects according to the administration pathway, be it systemic or local/intrastructure. Here we try to establish the behavioral-pharmacologic and electrophysiologic profile of the agonist CP55,940 infused into the rat dorsal hippocampus, a structure less studied with this drug: different from other agonists such as WIN55,212 or even the poorly selective anandamida, CP55,940 sticks only to cannabinoid receptors and is more potent than Δ9-THC, but does not distinguish between central CB1 and peripherical CB2 receptors. The drug was infused bilaterally in different concentrations into the CA1 area of the hippocampus, right after training or pre-test in the Context Fear Conditioning (CFC) task, in order to study its effects upon memory consolidation and retrieval, respectively. Post-training CP55,940 was amnestic only at 5 μg/μl, and the CB1-selective antagonist AM251 reverted this effect in a concentration without action per se, which proves that the original effect is mediated by CB1 receptors. The same amnestic effect was observed 24h after training, in the pretest infusion, only that now CP55,940 was affective also with lower concentrations, suggesting that these receptors are now more sensitive to its endogenous ligands due to learning; CB1-selectivity, however, is not clearly proven here since 5 μg/μl of CP55,940 was reverted only by a higher concentration of AM251. In electrophysiology, a concentration of CP55,940 compatible with that found effective upon CFC (10μM), was not able to block LTP induction, since the potentiation was not sustained for more than 30min – it was only a STP. These results teinforce and diversify previous findings, including some from our own lab, that prove the involvement of CB1 receptors in memory consolidation and/or recall, as well as possible plastic changes in receptor density due to the cognitive experience, despite not necessarily mediated by plastic synaptic events such as LTP.

A linhagem de glioma de rato C6 tem sido amplamente utilizada para investigar vários aspectos da biologia celular. Esta linhagem apresenta variações morfológicas, bioquímicas e fisiológicas de acordo com o número de passagens em cultivo. Segundo a literatura, culturas de passagens recentes apresentam características similares a glioblastomas, enquanto que culturas de passagens tardias assemelham-se à astroglia madura. Devido a isso, muitos estudos têm utilizado a linhagem C6 como modelo celular de glioblastoma e de astrócitos para investigar parâmetros relacionados ao sistema glutamatérgico, como por exemplo, captação de glutamato. Entretanto, até o presente momento a caracterização e comparação desses parâmetros entre as culturas da linhagem C6 de passagens recentes e tardias ainda não foram avaliadas. O objetivo desta dissertação foi investigar e comparar alguns parâmetros do sistema glutamatérgico entre as culturas de C6 com passagens recentes e tardias. As passagens recentes apresentaram um conteúdo intracelular de [3H] derivado da captação de L-[3H]-Glu 55% maior quando comparadas às passagens tardias e ambas as culturas atingiram o platô a partir dos 120min de incubação. Além disso, ambas as culturas apresentaram, após incubação com glutamato, os mesmos níveis de incorporação de iodeto de propídeo. Este resultado indica que o menor nível intracelular de [3H] observado nas culturas de passagens tardias não se deve a uma alteração na permeabilidade ou integridade de membrana dessas células. Ambas as culturas expressam somente o transportador Na+ dependente de alta afinidade EAAC1 (carreador de aminoácido excitatórios 1), sendo que sua expressão total foi similar tanto nas culturas de passagens recentes quanto nas tardias. Para verificar se a captação de L-[3H]-Glu estava ocorrendo através de outro sistema de transporte, as culturas foram incubadas na presença ou ausência de PDC (L-trans-2,4--trans-Pyrrolidine-2,4-dicarboxylic acid ) ou TBOA (DL-threo-β-Benzyloxyaspartic acid). O tratamento com os inibidores reduziu de forma similar a captação de L-[3H]-Glu tanto nas culturas de passagens recentes quanto nas tardias, indicando que este aminoácido é captado principalmente através do transportador de alta afinidade EAAC1. Com relação à liberação de glutamato, observou-se que 50% da radioatividade incorporada na forma de L-[3H]-Glu foi liberada para o meio extracelular tanto nas passagens recentes quanto nas tardias após 2h de incubação. Este resultado pode estar relacionado com o estabelecimento do platô do conteúdo intracelular de [3H] observado após 120 min de captação de L-[3H]-Glu. Para investigar se a liberação de L-[3H]-Glu ocorreu via transporte reverso dos transportadores Na+ dependentes de alta afinidade, ambas as culturas foram incubadas na presença do inibidor não transportável TBOA. Não foi observada alteração no perfil de liberação de radioatividade intracelular nas culturas após incubação com TBOA. Para verificar se a metabolização do L-[3H]-Glu estaria relacionado com a diferença nos níveis intracelulares de [3H], ambas as culturas foram incubadas com o análogo não-metabolizável D-[3H]-Asp. Tanto as passagens recentes como as tardias apresentaram um aumento tempo-dependente do conteúdo de [3H] derivado da captação de D-[3H]-Asp, não atingindo o platô. Além disso, o bloqueio dos transportadores Na+ dependentes de alta afinidade por PDC ou TBOA reduziu a captação de D-[3H]-Asp em ambas as culturas, indicando que sua captação ocorreu principalmente através deste tipo de transporte. Além disso, diferentemente do observado com L-[3H]-Glu, apenas 10% do D-[3H]-Asp captado é liberado após 2h de incubação em ambas as culturas. Este resultado, juntamente com a não inibição por TBOA da liberação da radioatividade captada na forma de L-[3H]-Glu, indica que possivelmente o que está sendo liberado para o meio extracelular é um metabólito marcado com [3H] e não o próprio L-[3H]-Glu. Além disso, nas passagens tardias, o conteúdo de [3H] derivado da captação de D-[3H]-Asp foi menor quando comparado com as passagens recentes aos 60 e 120 min de incubação, sugerindo que as passagens recentes possuem intrinsecamente uma maior capacidade de transporte tanto de L-[3H]-Glu quanto de D-[3H]-Asp quando comparadas às passagens tardias. Os resultados dessa dissertação demonstram que as passagens recentes e tardias da linhagem de glioma C6 diferem na sua capacidade de acumular o [3H] derivado da captação de L-[3H]-Glu. A maior capacidade das passagens recentes da linhagem C6 em acumular a radioatividade não está relacionada a uma maior expressão dos transportadores de glutamato e nem a uma reduzida liberação de L-[3H]-Glu para o meio extracelular. Como conclusão, os resultados obtidos nesta dissertação indicam que o número de passagens deve ser considerado em futuros estudos que pretendam avaliar parâmetros relacionados ao sistema glutamatérgico utilizando a linhagem C6 como modelo celular. / Rat C6 lineage has been widely used to investigate several aspects of cell biology. This lineage presents morphological, biochemical and physiological variations according to number of passages in culture. Early passage cells exhibit characteristics similar to glioblastomas, whereas later passage cells resemble mature astroglia. Thus, many studies have been using C6 lineage as astroglial and glioma model to investigate several parameters related to glutamatergic system, such as glutamate uptake. However, the characterization and comparison of these parameters between C6 cultures at early and late passages have not been evaluated. Therefore, the aim of this study was to investigate and compare some glutamatergic system parameters between early and late passage C6 cells in cultures. Early passages have an L-[3H]-Glu-derived intracellular content of [3H] 55% higher when compared to later passages and both cultures reached plateau at 120 min. In addition, after incubation with glutamate, both cultures showed the same levels of propidium iodide incorporation. This result indicates that lower levels of intracellular [3H] in later passages are not due to an alteration of cellular membrane permeability. Both cultures expressed only the higher affinity Na+ dependent transporter EAAC1, and its total expression was similar in early and later passage cultures. To verify if L-[3H]-Glu uptake occurred through another kind of glutamate transport system, the cultures were incubated in the presence or absence of PDC or TBOA. Treatment with this inhibitors reduced the L-[3H]-Glu uptake in both cultures at same levels, indicating that glutamate is taken up mainly by the higher affinity transporter system. Regarding the release of glutamate, it was observed that 50% of the radioactivity incorporated as L-[3H]-Glu was released to extracellular medium in both early and late passages after 2 h of incubation. This result could be related to the establishment of the plateau observed after 120 min for intracellular content of [3H] derived from L-[3H]-Glu uptake. To investigate if the release of L-[3H]-Glu occurred trough reverse transport, both cultures were incubated in the presence of non-transportable inhibitor TBOA. There was no alteration of intracellular radioactivity release in cultures after incubation with TBOA. In order to verify if the metabolism of L-[3H]-Glu could be related to the differences in intracellular levels of [3H], both cultures were incubated with the non-metabolizable analogue D-[3H]-Asp. Early and late passage C6 cells showed a time-dependent increase in intracellular content of [3H] derived from D-[3H]-Asp uptake, without reaching the plateau. Moreover, blockade of Na+ dependent transporters of high affinity by PDC or TBOA reduced D-[3H]-Asp uptake in both cultures, indicating that uptake occurred mainly through EAAC1. Moreover, differently from L-[3H]-Glu, only 10% of D-[3H]-Asp captured is released after 2 h of incubation in both cultures. This result, taken together with the fact that TBOA did not inhibit the release of radioactivity captured as L-[3H]-Glu, indicates that a [3H]-metabolite is being released to extracellular medium and not L-[3H]-Glu itself. Moreover, in later passages, D-[3H]-Asp-derived intracellular content of [3H] was lower when compared to early passages at 60 and 120 min of incubation, suggesting that early passage C6 cells intrinsically have a greater capacity to transport both L-[3H]-Glu and D-[3H]-Asp when compared to later passages. This study demonstrates that early and late passage C6 cells differ in their ability to accumulate L-[3H]-Glu-derived intracellular content of [3H]. From 60 min of incubation, early passages have an intracellular content of [3H] derived from L-[3H]-Glu uptake 55% higher in relation to later passages. This increased capacity is not related to a higher expression of glutamate transporters nether nor by reduced release of L-[3H]-Glu to extracellular medium. In conclusion, our results indicate that the number of passages should be considered in future studies that intent to evaluate parameters relating to glutamatergic system using Rat C6 lineage as cell model.

Resumo não disponível

Ciclooxigenase (COX) é a enzima marca-passo na rota metabólica onde o ácido araquidônico é convertido em prostaglandinas. COX-2 é a isoforma que é induzida em sítios de lesão/inflamação e expressa constituivamente em alguns poucos tecidos, como o sistema nervoso central. Tem sido sugerido que a COX-2 tem um papel importante em várias doenças neurodegenerativas, incluindo epilepsia. Neste estudo nós testamos se o celecoxib, um inibidor seletivo da COX-2 (0,2; 2 ou 20 mg/kg, p.o.) protege contra as convulsões, carbonilação de proteínas e inibição da atividade da Na+,K+-ATPase induzidas por pentilenotetrazol (PTZ), um agente convulsivante clássico que tem sido largamente usado para estudo da epilepsia e na busca de novos compostos com atividade anticonvulsivante. A administração de celecoxib (2 mg/kg) atenuou as convulsões comportamentais e eletrográficas e a inibição da atividade da Na+,K+- ATPase induzidas por PTZ no hipocampo e córtex cerebral de ratos, sugerindo um papel facilitatório para COX-2 nos efeitos do PTZ. Já que existem evidências que a PGE2 é um mediador chave na via de sinalização da COX-2, nós decidimos investigar o efeito da administração intracerebroventricular de anticorpos anti-PGE2 (4 μg/2 μl, i.c.v.) sobre os episódios convulsivos e inibição da atividade da Na+,K+-ATPase induzidas por PTZ. A administração de anticorpos anti- PGE2 atenuou as convulsões comportamentais e eletrográficas e a inibição da atividade da Na+,K+-ATPase induzidas por PTZ no hipocampo e córtex cerebral de ratos. Em outro experimento, nós mostramos que a administração intracerebroventricular de PGE2 (100 ng/2 μl, i.c.v.) não causou convulsões per se, mas induziu o aparecimento de convulsões eletrográficas em combinação com uma dose subconvulsivante de PTZ (20 mg/kg, i.p.), reforçando um importante papel para PGE2 nas convulsões induzidas por PTZ. Em conjunto estes dados suportam um papel facilitatório para a via COX-2/PGE2 nas convulsões e inibição da atividade da Na+,K+-ATPase induzidas por PTZ. / Cyclooxygenase (COX) is the rate-limiting enzyme in the metabolic pathway where arachidonic acid is converted to prostaglandins. COX-2 is the isoform of cyclooxygenase which is inducible at injury/inflammation sites and expressed constitutively in a few tissues, such as the central nervous system. It has been suggested that COX-2 plays a role in several disorders, including convulsive behavior. In this study we tested whether celecoxib, a selective COX-2 inhibitor (0.2, 2 or 20 mg/kg, p.o.) protects against the convulsions, protein carbonylation and inhibition of Na+,K+- ATPase activity induced by pentylenetetrazol (PTZ; 60 mg/kg, i.p.), a classical convulsant agent that has been fairly used for the study of epilepsy and screening of new compounds with antiepileptic activity. The systemic administration of celecoxib (2 mg/kg) attenuated PTZ-induced behavioral and electroencephalographic seizures and Na+,K+-ATPase activity inhibition in the hippocampus and cerebral cortex of rats, suggesting a facilitatory role for COX-2 on the PTZ-induced effects. Since there is a bulk of evidence showing that PGE2 is a key mediator in COX-2 signaling, we decided to investigate the effect of the intracerebroventricular administration of anti-PGE2 antibodies (4 μg/2 μl, i.c.v.) on the convulsive episodes and inhibition of Na+,K+- ATPase activity induced by PTZ. Administration of anti-PGE2 antibodies attenuated PTZ-induced behavioral and electroencephalographic seizures and Na+,K+-ATPase activity inhibition in the hippocampus and cerebral cortex of rats. In a reverse approach, we showed that intracerebroventricular administration of PGE2 (100 ng/2 μl, i.c.v.) did not cause electrographic alterations per se, but elicits electroencephalographic convulsions if given in combination with a subconvulsant dose of PTZ (20 mg/kg, i.p.), further suggesting an important role for this prostaglandin in the convulsant effects of PTZ. Collectively, these data support a facilitatory role for the COX-2/PGE2 pathway in PTZ-induced convulsions and Na+,K+-ATPase activity inhibition.

Os hormônios da tireóide (HT) têm sido descritos agindo em sítios nucleares e extranucleares, induzindo respostas celulares através de diversos mecanismos. Também tem sido reportado que as proteínas do citoesqueleto são alvos para os HT durante o desenvolvimento do testículo e do sistema nervoso. Os efeitos dos HT durante o desenvolvimento são mediados principalmente por receptores nucleares modulando a expressão gênica. Entretanto, há diversas evidências de mecanismos não genômicos dos HT associados a vias de sinalização ativadas por Ca2+ e proteínas quinases. Nesse contexto, nosso estudo investigou as ações genômicas e não genômicas dos HT em células testiculares e neurais durante o desenvolvimento. Nós inicialmente demonstramos o envolvimento de mecanismos mediados por Ca2+ na fosforilação da vimentina induzida por T3 em testículos de ratos imaturos através de mecanismos independentes da síntese de proteínas. Também observamos um acúmulo de vimentina fosforilada em testículos de ratos hipertireoideos, podendo ser conseqüência da ativação da ERK regulando o citoesqueleto. Nós ainda demonstramos um aumento no metabolismo basal através da medida do consumo de O2 e dos níveis de TBARS. Além disso, as defesas antioxidantes enzimáticas e não enzimáticas modificaram-se aparentemente de acordo com o aumento no consumo de O2. E Esses resultados corroboram com a idéia de que um aumento na geração de ROS induz estresse oxidativo e pode ser responsável pelas alterações bioquímicas envolvidas no aumento da capacidade metabólica em testículos de ratos hipertireoideos. Além disso, o hipotireoidismo inibiu a atividade das NTPDases em culturas de células de Sertoli sem alterar a expressão das NTPDases 1, 2 e 3. Os HT modificaram a atividade NTPDásica, provavelmente através de mecanismos não genômicos e, consequentemente, podem influenciar a função reprodutiva durante o desenvolvimento. Considerando-se os efeitos dos HT em células neurais, nós primeiramente demonstramos que T3 e T4 estimularam a fosforilação dos filamentos intermediários (FI) através de mecanismos GABAérgicos via PKA e PKCaMII em córtex cerebral de ratos de 10 dias de idade. A dependência de PKA, PKC e canais de Ca2+ tipo-L e -T também foi evidenciada no efeito dos HT sobre a captação de 45Ca2+. Surpreendentemente, em córtex cerebral de ratos de 15 dias de idade, apenas o T4 estimulou a fosforilação dos FIs. Os mecanismos envolvidos na ação do T4 sobre o citoesqueleto dependem da ativação de um receptor acoplado a proteínas Gi, além da participação da PLC, PKC, MAPK, PKCaMII e níveis intracelulares de Ca2+. Estes dados demonstram que o T4 tem importantes funções fisiológicas modulando o citoesqueleto de células neurais durante o desenvolvimento. Nós também demonstramos a reorganização e a fosforilação do citoesqueleto induzidas por HT em células de glioma C6 e astrócitos, e a participação da via de sinalização da RhoA mediando a ação hormonal. Concluindo, nossos resultados evidenciaram ações genômicas e não genômicas dos HT promovendo a fosforilação dos FI, reorganização do citoesqueleto, influxo de Ca2+ e modulação da atividade das NTPDases via mecanismos mediados por Ca2+ e proteínas quinases. Estes resultados podem contribuir para o melhor entendimento dos mecanismos envolvidos nas desordens observadas no hipo e hipertireoidismo durante o desenvolvimento e maturação do cérebro e do testículo. / Thyroid hormones (TH) have been shown to act at nuclear and extra nuclear sites, inducing cell responses by several mechanisms. It has also been reported that cytoskeletal proteins are a target for TH during hormone-induced differentiation and development of nervous system and testicular cells. The developmental effects of TH are mainly mediated by nuclear receptors regulating gene expression. However, there are increasing evidences of nongenomic mechanisms of TH associated with kinase- and Ca2+-activated signaling pathways. In this context, our study investigated the genomic and nongenomic actions of TH on testicular and neural cells from developing rats. We first described the involvement of Ca2+-mediated mechanisms on vimentin phosphorylation induced by T3 in immature rat testis. This effect was demonstrated to be independent of protein synthesis. Furthermore, we observed an accumulation of phosphorylated vimentin in hyperthyroid rat testes, which could be a consequence of the extracellular-regulated kinase (ERK) activation regulating the cytoskeleton. We also demonstrate increased basal metabolic rate, measured by tissue oxygen consumption, as well as, increased TBARS levels. Moreover, the enzymatic and non-enzymatic antioxidant defences were modified apparently to respond according to the augmented oxygen consumption. These results support the idea that an increase in mitochondrial ROS generation, underlying cellular oxidative damage, is a side effect of hyperthyroid-induced biochemical changes by which rat testis increase their metabolic capacity. In addition, hypothyroidism inhibited NTPDase activity in Sertoli cell cultures from young rats without alter the expression of NTPDase 1, 2 and 3. Our findings also demonstrate that TH modifies the NTPDase activities, probably via non-genomic mechanisms and consequently may influence the reproductive function throughout development. Concerning the effect of TH on neural cells, we first demonstrate that T3 and T4 stimulate the intermediate filament (IF) phosphorylation through PKA, PKCaMII and GABAergic mechanisms in cerebral cortex of 10 day-old rats. The dependence of PKA, PKC, L- and T-type Ca2+ channels were also evidenced on the effect of TH on 45Ca2+ uptake. Surprisingly, in cerebral cortex of 15 day-old rats, only T4 stimulate IF phosphorylation. The mechanisms underlying the action of T4 involve the activation of a Gi-protein coupled receptor. Moreover, we showed the participation of PLC, PKC, MAPK, PKCaMII and intracellular Ca2+ levels mediating the effects of T4 on the cytoskeleton. These findings demonstrate that T4 have important physiological roles modulating the cytoskeleton of neural cells during development. We further demonstrate that TH induce cytoskeleton reorganization and phosphorylation in C6 glioma cells and astrocytes and the participation of RhoA signaling pathway mediating this action. In conclusion, our results evidence genomic and nongenomic actions of TH promoting IF phosphorylation, cytoskeletal reorganization, Ca2+ influx and modulation of NTPDase activity by Ca2+- and kinase-mediated mechanisms. These results may contribute to a better knowledge of the mechanisms involved in the disorders observed in hyper and hypothyroidism during brain and testis maturation and development.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Educação Física, Programa de Pós-Graduação Strictu-Sensu em Educação Física, 2014. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2014-10-17T12:39:08Z No. of bitstreams: 1 2014_ClaudioHiroshiNakata.pdf: 5058457 bytes, checksum: 613c33deb6ae4db6c881933091a5f045 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-10-24T14:57:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_ClaudioHiroshiNakata.pdf: 5058457 bytes, checksum: 613c33deb6ae4db6c881933091a5f045 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-24T14:57:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_ClaudioHiroshiNakata.pdf: 5058457 bytes, checksum: 613c33deb6ae4db6c881933091a5f045 (MD5) / OBJETIVO: Analisar os efeitos agudos da corrente interferencial ganglionar em mulheres sadias. MATERIAIS E MÉTODOS: Estudo do tipo experimental aleatorizado e transversal. Vinte e uma mulheres militares do Exército Brasileiro divididas em dois grupos, conforme IPAQ, em ativas (média de idade de 32,80 ± 3,011 anos, massa 56,50 ± 5,523 Kg, estatura de 164,30 ± 6,993 cm e IMC de 20,90 ± 1,729 kg/m2 e 80% com conceito excelente no teste de aptidão física) e irregularmente ativas (média de idade de 33,45 ± 1,968 anos, massa 67,64 ± 10,072 Kg, estatura de 163,36 ± 7,698 cm e IMC de 25,18 ± 2,401 kg/m2 e 80% com conceito bom no teste de aptidão física) realizaram dois protocolos - eletroestimulação interferencial e placebo. A eletroestimulação interferencial foi aplicada na região cervicotorácica (C7 a T4) com uma frequência fixa de 5000 Hz, amplitude de modulação de frequência de 100Hz com variação de 25% e intensidade ajustada no limiar sensitivo, sem contração muscular, durante 30 minutos. Os protocolos foram aleatorizados e aplicados em dias distintos com intervalo mínimo de 24 horas. Foram analisadas os ajustes cardiovasculares e a variabilidade da frequência cardíaca. RESULTADOS: A corrente interferencial não provocou grandes repercussões no comportamento cardiovascular. Ocorreu um padrão de elevação da pressão arterial sistólica (PAS, mmHg) nos dois grupos e uma tendência de diminuição da pressão arterial diastólica (PAD, mmHg) nas ativas. Quanto a variabilidade da frequência cardíaca, a corrente interferencial provocou nas militares irregularmente ativas elevação das variáveis Baixa Frequência (BF, nu) 13,97 ± 3,588 nu, p<0,01 e BF/AF (0,53 ± 0,183 nu; p<0,05) e diminuição da variável Alta Frequência (AF, nu) 13,75 ± 3,627 nu, p<0,01. Adicionalmente, verificamos no grupo das ativas, um efeito de maior magnitude da corrente interferencial em relação ao placebo. A variável BF (11,97 ± 3,588 nu; p<0,05) e a relação BF/AF (0,7 ± 0,183 nu; p<0,001) tiveram elevação e a variável AF (11,36 ± 3,627nu; p<0,05) uma diminuição. CONCLUSÃO: A corrente interferencial promoveu alterações na variabilidade da frequência cardíaca aumentando a atividade simpática e atenuando a parassimpática em mulheres irregularmente ativas. Adicionalmente, essa corrente também teve um maior efeito nas variáveis BF, AF e BF/AF no grupo das ativas em relação ao placebo, reforçando a hipótese que seus efeitos podem sofrer influências das características da população, como o nível de condicionamento físico. __________________________________________________________________________ ABSTRACT / OBJECTIVE: Analyze the cardiovascular adjustments against interferential current ganglionic in women with different levels of cardiorespiratory fitness. METHODS: A randomized, cross the experimental type. Twenty-one of the Brazilian Army military women divided into two groups, trained (mean age of 32.80 ± 3.011 years, mass 56.50 ± 5.523 kg, height was 164.30 ± 6.993 cm and BMI of 20.90 ± 1.729 kg/m2 and 80% with excellent reputation in the physical fitness test) and untrained (mean age of 33.45 ± 1.968 years, mass 67.64 ± 10,072 kg, height was 163.36 ± 7.698 cm and BMI of 25, 2,401 ± 18 kg/m2 and 80% with good concept in physical fitness test) performed two protocols - interferential electrostimulation and placebo. The interferential electric stimulation was applied at the cervico-thoracic region (C7 to T4) at a fixed frequency of 5,000 Hz, amplitude modulation frequency of 100 Hz with a variation of 25% and adjusted in intensity sensory threshold, no muscle contraction for 30 minutes. Placebo in the same procedures without the application of interferential current, which did not produce therapeutic effects were adopted. The protocols were randomized and applied on different days with an interval of 24 hours. Cardiovascular adjustments and cardiac autonomic modulation were analyzed. RESULTS: Interferential current caused no major impact on cardiovascular behavior. A trend of increase in systolic blood pressure (SBP, mmHg) in both groups and a trend of decreased diastolic blood pressure (DBP, mmHg) occurred in trained. As for heart rate variability, interferential current caused the untrained military elevation of the variables Low Frequency (LF, nu) nude 13.97 ± 3.588, p <0.01 and LF / HF (0.53 ± 0.183 nu, p <0.05) and decreased variable High Frequency (HF, nu) nude 13.75 ± 3.627, p <0.01. Additionally, we found the group of trained, an effect of greater magnitude of interferential current versus placebo. The variable BF (11.97 ± 3.588 nu, p <0.05) and BF relationship / AF (0.7 ± 0.183 nu, p <0.001) had high and variable AF (11.36 ± 3.627 naked: p <0.05) decreased. CONCLUSION: Interferential current changes promoted the sympathovagal balance by increasing sympathetic activity and attenuating parasympathetic in untrained women. Additionally, this current also had a greater effect in LF, HF and LF / HF variables in the trained group compared to placebo, reinforcing the hypothesis that its effects may be influenced population characteristics such as fitness level.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008. / Submitted by Suelen Silva dos Santos (suelenunb@yahoo.com.br) on 2009-10-06T18:20:05Z No. of bitstreams: 1 2008_SueliDaRochaFalcao.BAK.pdf: 769822 bytes, checksum: a1ba6c339c1420e9db7e1f8db27f9af1 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2009-10-08T12:51:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_SueliDaRochaFalcao.BAK.pdf: 769822 bytes, checksum: a1ba6c339c1420e9db7e1f8db27f9af1 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-10-08T12:51:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_SueliDaRochaFalcao.BAK.pdf: 769822 bytes, checksum: a1ba6c339c1420e9db7e1f8db27f9af1 (MD5) Previous issue date: 2008 / O estudo teve como objetivo analisar o funcionamento do sistema nervoso autônomo, através da variabilidade da freqüência cardíaca (VFC), durante o sono em crianças e adolescentes portadores de anemia falciforme (AF). Quarenta e quatro pacientes, com idade média de 13.7 anos foram submetidos à polissonografia e monitorização cardíaca pelo sistema holter para avaliação da VFC durante a noite. Ambos os equipamentos foram sincronizados, para permitir análise simultânea. A potência espectral total, os componentes de baixa freqüência (BF), alta freqüência (AF) e a relação BF/AF, BF e AF normalizada foram analisados durante a vigília, fase 4 do sono e REM. Níveis de saturação de O2 e hemoglobina foram analisados e correlacionados com a VFC. Ocorreu uma variação na potência espectral total (Ptotal) em relação aos estágios do sono, sendo que na fase REM o valor foi significantemente mais elevado que na fase 4 do sono (p=0,005) o que vem em concordância com dados da literatura para indivíduos normais. O componente AF(nu) no estágio 4 apresentou um significante aumento quando comparado a vigília (p=0,019), correspondendo a aumento da atividade simpática, o que é encontrado em indivíduos normais . A relação AF/BF não alcançou níveis de significância estatística entre os estágios do sono, mas manteve-se elevada em todos os estágios. Com o objetivo de enriquecer o estudo, comparamos nossos resultados com os valores encontrados pelo Dr Finley em indivíduos normais (sob autorização prévia) e observamos uma redução significativa no estágio REM do sono, que pode caracterizar diminuição da atividade simpática. Os componentes AF e BF atingiram seus valores mais elevados no estágio REM, e BF(nu) manteve-se elevado em todos os estágios do sono, porém sem significado estatístico. Baixos níveis de saturação de oxigênio estiveram presentes durante todos os estágios do sono (média acordado- 87.76, estágio 4- 86.52, REM- 87.85), sem apresentar significância estatística entre os estágios do sono e a VFC. Os indivíduos portadores de AF não apresentaram as variações na análise espectral que habitualmente ocorre, nos diferentes estágios do sono, com os indivíduos normais. O predomínio da atividade simpática em todos os estágios do sono e a redução desses valores no estágio REM sugere perda da capacidade de regulação autonômica do coração com comprometimento do ritmo circadiano. _____________________________________________________________________________________ SUMMARY / Objectives – To analyze the autonomic nervous system behavior, through HRV, during sleep, in children and adolescents with sickle cell disease (SCD). Methods - Forty four SCD patients, mean age 13.7 were submitted to polysomnography and Holter monitoring to assess HRV during the night. Both equipments were synchronized, to allow for simultaneous analyzes. The total spectrum power, low frequency (LF), high frequency (HF) component and LF/HF ratio, LF, HF normalized units were evaluated wakefulness, stage 4 and REM sleep. Oxygen saturation and hemoglobin level were check out and correlated with the HRV. Result – The individual sleep stages differed in total spectrum power. Its values were significantly higher in the REM stage than in stage 4 (p=0,005).There was a significant increase in HF (nu) at stage 4 when compared to wakefulness (p=0,019). The LF/HF ratio did not reach statistical significance between stages of sleep, but there was an uncommon decrease at the REM stage. The LF and HF components reached their highest values at REM stage, and LF (nu) was kept elevated in all stages of sleep, but without statistic significance. Low level of oxygen saturation was present in all sleep stages (mean at wakefulness-87.76, stage 2- 87.41, stage4 - 86.52, REM - 87.85), without significance between stages of sleep and HRV. Conclusion – SCD patient shown predominance of sympathetic activity in all stages of sleep, and loss of regulation capacity of the autonomic nervous system. The shift in xiv spectral analyze, which occurs at different sleep stages in health subjects, did not occur in patient with SCD.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2006. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-11-17T22:10:00Z No. of bitstreams: 1 Dissert Telma Leonel Ferreira.pdf: 1211297 bytes, checksum: 2ac5d981d6cea967b043b9328792f359 (MD5) / Approved for entry into archive by Carolina Campos(carolinacamposmaia@gmail.com) on 2009-11-26T17:32:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissert Telma Leonel Ferreira.pdf: 1211297 bytes, checksum: 2ac5d981d6cea967b043b9328792f359 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-11-26T17:32:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissert Telma Leonel Ferreira.pdf: 1211297 bytes, checksum: 2ac5d981d6cea967b043b9328792f359 (MD5) Previous issue date: 2006 / A lesão dos nervos periféricos nos membros superiores pode provocar comprometimento da motricidade e da sensibilidade nas mãos, causando limitações nas atividades manuais, que alteram a realização das atividades de vida diária. Essas limitações podem ser avaliadas e quantificadas com o uso de questionários, verificando-se, na literatura, o uso crescente deste instrumento na avaliação funcional dos segmentos corporais. Observou-se que os questionários disponíveis na literatura mundial não avaliam, de forma adequada, a função das mãos nas lesões dos nervos ulnar, mediano e radial. O objetivo deste estudo foi identificar as principais dificuldades que os portadores de lesão isolada ou associada dos nervos ulnar, mediano e radial apresentam nas atividades de vida diária e elaborar um questionário de avaliação funcional capaz de detectar e quantificar estas limitações ou ncapacidades. A pesquisa foi dividida em três etapas. A primeira foi realizada com a entrevista de 50 pacientes adultos, portadores de lesão dos nervos ulnar, mediano e radial para identificar as principais dificuldades manuais apresentadas nas atividades de vida diária. Na segunda etapa, 6 cirurgiões de mão e 9 terapeutas de mão analisaram as atividades listadas pelos pacientes e classificaram essas atividades em ordem crescente de importância para uma avaliação funcional das mãos. Na terceira etapa, a pesquisadora analisou a classificação realizada pelos profissionais e elaborou o questionário de avaliação funcional das mãos. Durante a entrevista com os pacientes, constatou-se a dificuldade na realização de atividades como vestuário, alimentação, higiene pessoal, cuidados com a casa, profissão, lazer, escrita, uso de computador, entre outras. As dificuldades estavam relacionadas com a realização da preensão de precisão, para algumas atividades e, da preensão de força, para outras. O questionário elaborado contém 30 questões objetivas classificadas em 5 categorias. O escore final é obtido pela soma dos escores de cada questão, dividido pelo número de atividades aplicáveis. O instrumento foi respondido por 32 pessoas com seqüela de hanseníase. Com a determinação do coeficiente alfa de Cronbach observou-se que as atividades de número 18 e 19 do questionário apresentavam baixa magnitude e correlação com o total da escala. A exclusão dessas atividades aumentou a confiabilidade do questionário, verificada pelo coeficiente de consistência interna que passou para 0,90, valor considerado altamente satisfatório. __________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The peripheral nerves lesion of the upper limbs may impair the movement and sensation of the hands, causing limitation in the manual activities, which modify the performance of daily life activities. Questionnaires may aid evaluating and quantifying these limitations by checking in the literature, the increasing use of these instruments in the functional evaluation of body segments. We observed that the questionnaires available in the world literature a not suitable to evaluate the function of the hands in the lesions of the ulnar, median and radial nerves. The objective of this study is to identify the main difficulties that isolated or associated ulnar, median and radial nerve lesion patients have in their everyday life, as well as to create a questionnaire of functional evaluation capable of detecting and quantifying these limitations or impairment. The research was divided in three steps. The first step was an interview with 50 adult patients, with ulnar, median and radial nerves disabilities aiming at identifying the main manual difficulties they had in their daily life activities. In the second step, six hand surgeons and nine hand therapists analyzed the activities mentioned by the patients and classified them in an increasing order of importance regarding the functional evaluation of the hands. In the third step, the researcher analyzed the classification done by those professionals and developed a questionnaire to evaluate the function of the hands. During the interview with patients, the difficulties they faced in performing activities such as dressing up, eating, bathing and brushing the teeth, cleaning the house, doing their professional activities, writing, using computer or in their leisure time activities, among others were observed. The difficulties concerned the performance of the accurate grasping movement, for some activities and the strength grasping movement for others. The questionnaire developed contains 30 multiple choice questions classified in five categories. The final score is obtained by summing up the scores of each question and dividing them by the number of relevant activities. This instrument was answered by 32 patients with sequels of Hansen’ disease. By determining Cronbach alfa coefficient we observed that activities numbers 18 and 19 of the questionnaire presented a low importance and interconnection to the total scale. The removal of these activities resulted in a greater reliability of the questionnaire. This was confirmed by the internal consistency which was increased to 0,90, an amount considered highly satisfactory.