Orientador: Jorge Alberto Achcar / Coorientador: Mario Hissamitsu Tarumoto / Banca: Fernando Antonio Moala / Banca: Emilio Augusto Coelho barros / Resumo: A análise de sobrevivência é uma das áreas da estatística com grande aplicabilidade em diversas áreas, especialmente em medicina, que é aplicada quando se pretende analisar um fenômeno em relação ao tempo transcorrido entre um evento inicial, no qual o indivíduo entra em um estado particular, e um evento nal que modi ca este estado. Uma particularidade na análise de dados de sobrevivência é a presença de dados censurados. Em muitas aplicações pode-se observar um grande número de indivíduos censurados, em geral à direita. Esse fato pode indicar que, em parte dos indivíduos em estudo, o evento de interesse nunca acontecerá, ou seja, pode se ter uma fração da população que é imune (ou que se cura). Neste caso, é importante estudar a proporção de pacientes que permanecem curados e analisar os efeitos das covariáveis, não só sobre o tempo de sobrevivência, como também sobre a fração de cura. Modelos para análise de dados com proporção de curados são frequentemente chamados de modelos com fração de cura. Em um estudo experimental que exista uma proporção substancial de indivíduos que não falhem ao nal do experimento, não faz sentido considerar tais índivíduos como observações censuradas vindas da mesma população daqueles que haviam morrido... / Abstract: A análise de sobrevivência é uma das áreas da estatística com grande aplicabilidade em diversas áreas, especialmente em medicina, que é aplicada quando se pretende analisar um fenômeno em relação ao tempo transcorrido entre um evento inicial, no qual o indiv íduo entra em um estado particular, e um evento nal que modi ca este estado. Uma particularidade na análise de dados de sobrevivência é a presença de dados censurados. Em muitas aplicações pode-se observar um grande número de indivíduos censurados, em geral à direita. Esse fato pode indicar que, em parte dos indivíduos em estudo, o evento de interesse nunca acontecerá, ou seja, pode se ter uma fração da população que é imune (ou que se cura). Neste caso, é importante estudar a proporção de pacientes que permanecem curados e analisar os efeitos das covariáveis, não só sobre o tempo de sobrevivência, como também sobre a fração de cura. Modelos para análise de dados com proporção de curados são frequentemente chamados de modelos com fração de cura. Em um estudo experimental que exista uma proporção substancial de indivíduos que não falhem ao nal do experimento, não faz sentido considerar tais índivíduos como observações censuradas vindas da mesma população daqueles que haviam morrido... / Mestre

Orientador: Roberto Lyra Villas Bôas / Banca: Iraê Amaral Guerrini / Banca: Magali Ribeiro da Silva / Banca: Paulo Cesar Costa / Banca: Pedro Roberto Furlani / Resumo: O trabalho objetivou estudar a formação de mudas de ipê amarelo (Tabebuia chrysotricha Standl.) em função de quatro substratos, variando as soluções de adubação de cobertura. Para compor os substratos foi utilizada fibra de coco fibrosa e granulada formando os tratamentos 100% fibrosa (100% F), 60% fibrosa e 40% granulada (60% F+40% G), 40% fibrosa e 60% granulada (40% F+60% G) e 100% granulada (100% G). A adubação de base foi igual para todos os tratamentos e as soluções de adubação de cobertura variaram a fim de se obter soluções completas com condutividades elétricas de 1,06 dS m-£, 2,12 dS m-£, 3,2 dS m-£ e 4,24 dS m-£. As sementes foram colocadas diretamente nos tubetes (120mL) contendo os respectivos substratos e receberam as adubações de cobertura por subirrigação uma vez por semana, respeitando-se os tratamentos de adubação. Quando as mudas atingiram aproximadamente 20 centímetros de altura foram realocadas sob tela de 9% de sombreamento, onde permaneceram até o plantio em Taubaté-SP. As análises químicas do substrato (CE e pH) pelo método de extração aquosa 1:1,5 (1 substrato : 1,5 água deionizada), as análises morfológicas (altura de parte aérea, diâmetro de coleto e número de pares de folhas verdadeiras), bem como a matéria seca total foram realizadas quinzenalmente. As análises químicas da parte aérea foram obtidas quando as mudas estavam prontas para expedição. Em praticamente todas as avaliações morfológicas, os substratos contendo fibra de coco granulada, assim como as menores CE das soluções de adubação, formaram mudas mais vigorosas, indicando crescimento mais rápido. As mudas produzidas em substratos 100% F e 2 60% F+40% G apresentaram maiores teores de N, S, B, Mn e Zn na parte aérea. A parte aérea acumulou... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The work aimed to study the formation of Tabebuia chrysotricha Standl. seedlings in function of four substrates, varying the covering fertilization solutions. To compose the substrate it was used fibrous and granulated coconut fiber obtaining the following treatments: 100% fibrous (100% F), 60% fibrous and 40% granulated (60% F+40% G), 40% fibrous and 60% granulated (40% F+60% G) and 100% granulated (100% G). The basis fertilization was the same for all treatments and the solutions of covering fertilization varied in order to obtain complete solutions with electric conductivities of 1,06 dS m-£, 2,12 dS m-£, 3,2 dS m-£ and 4,25 dS m-£. The propagative material was sowed directly in plastic containers (120mL) with the respective substrates. The covering fertilization was received through sub irrigation once a week, respecting the treatments of fertilizations. When the seedlings reached 20cm of height approximately they were replaced under black screen (9% of shading), where they remained until the planting in Taubaté-SP. The chemical analyses of the substrate (EC and pH), through aqueous extraction method 1:1.5 (1 substrate: 1.5 deionized water), the morphologic analyses (aerial part height, stem diameter and pairs true leaves number), as well as the total dry matter, were accomplished each 15 days. The chemical analyses of aerial part were obtained when the seedlings were ready for expedition. In almost every morphologic evaluation, the substrate with granulated coconut fiber, as well as the smallest EC of fertilization solutions, formed seedlings with higher averages, indicating faster growth. The seedlings production in substrate 100% F and 60% F+40% G allowed them to have higher N, S, B, Mn and Zn concentrations in 4 the aerial part. The aerial part accumulated... (Complete abstract, click electronic access below) / Doutor

Orientador: Ana Maria Minarelli Gaspar / Coorientador: Reinaldo Marchetto / Coorientador: Miguel Angel Rodriguez / Banca: Marlus Chorilli / Banca: Rondinelli Donizetti Herculano / Banca: Carlos Alberto Fortulan / Banca: Eliana Cristina da Silva Rigo / Resumo: O desenvolvimento de biomateriais que promovam a reparação de tecidos lesionados tem sido objeto de intensa investigação. Em relação à reparação do tecido ósseo, as cerâmicas são materiais muito pesquisados em função de sua ampla possibilidade de uso, inclusive na confecção de pastas cimentícias moldáveis. A sílica mesoporosa apresenta elevada área de superfície específica (~1000 m 2 .g - 1 ) e tamanho de poros usualmente em torno de 2 - 30 nm, atraindo atenção para aplicações como importantes carreadores de fármacos e proteínas. O peptídeo de crescimento osteogênico (OGP) é um tetradecapeptídeo endóge no, cuja forma ativa atua como agente anabólico e estimulador hematopoiético, promovendo a diferenciação osteoblástica. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi desenvolver um cimento ósseo injetável, reabsorvível e bioativo, com sílica mesoporosa e pept ídeo de crescimento osteogênico. O peptídeo foi sintetizado pelo método em fase sólida, purificado por Cromatografia Líquida (HPLC) e caracterizado por Espectrometria de Massas. O material mesoporoso foi sintetizado pela metodologia sol - gel e sua porosidad e confirmada por Adsorção - dessorção de N 2, Espalhamento de Raios X à Baixo Ângulo e Microscopia Eletrônica de Transmissão. Os cimentos foram preparados a partir de sulfato de cálcio (CaS), fosfato de cálcio (CaP) e aluminato de cálcio (CaAl), sem e com síl ica mesoporosa, e analisados quanto suas características físico - químicas. Os experimentos in vitro foram realizados para avaliar o potencial citotóxico e genotóxico dos cimentos em cultura de células de ovário (CHO - K1) e análise da viabilidade celular e fo rmação da matriz mineralizada em células pré - osteosblásticas (MC3T3 - E1). O estudo in vivo foi realizado em defeitos ósseos críticos em calvária de ratos e analisado quanto à formação de tecido ósseo, por histo... / Abstract: The development of biomaterials that promote repair of injured tissues ha s been the subject of intense research. Regarding the bone tissue repair, ceramics are one of the most researched biomaterials groups due to its wide possibility of use, including cement pastes with good moldability. The mesoporous silica has high specific surface area (~1000 m 2 .g - 1 ) and pore size usually around 2 - 30 nm attracting attention for its applications as drugs and proteins carriers. The osteogenic growth peptide (OGP) is an endogenous tetradecapeptide, whose active form acts as an anabolic agent a nd hematopoietic stimulator, promoting osteoblast differentiation. Thus, the aim of this study was to develop an injectable bone cement, resorbable and bioactive, mesoporous silica and osteogenic growth peptide. The peptide was synthesized by the solid pha se method, purified by High Performande Liquid Chromatography (HPLC) and characterized by Mass Spectrometry. The mesoporous materials were synthesized by sol - gel method and its porosity confirmed by Adsorption - desorption of N 2, Small - angle X - ray Scattering and Transmission Electronic Microscopy. Cements were prepared from calcium sulfate (CaS), calcium phosphate (CaP) and calcium aluminate (CaAl), without and with mesoporous silica, and analyzed for its physicochemical characteristics. In vitro experiments were carried out to evaluate the cements cytotoxic and genotoxic potential in CHO - K1 hamster ovary cell line and analysis of the mineralized matrix formation in MC3T3 - E1 osteosblastics cell line. The in vivo study was performed in critical defects in rat c alvaria, and it has analized as formation of bone tissue by histomorphometry and density of newly formed tissue by X - ray images. The cements analysis have shown that the presence of mesoporous silica particles promoted different physico - chemical behavior w hen compared to those without silica... / Doutor

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Dados faltantes são um problema comum em estudos epidemiológicos e, dependendo da forma como ocorrem, as estimativas dos parâmetros de interesse podem estar enviesadas. A literatura aponta algumas técnicas para se lidar com a questão, e, a imputação múltipla vem recebendo destaque nos últimos anos. Esta dissertação apresenta os resultados da utilização da imputação múltipla de dados no contexto do Estudo Pró-Saúde, um estudo longitudinal entre funcionários técnico-administrativos de uma universidade no Rio de Janeiro. No primeiro estudo, após simulação da ocorrência de dados faltantes, imputou-se a variável cor/raça das participantes, e aplicou-se um modelo de análise de sobrevivência previamente estabelecido, tendo como desfecho a história auto-relatada de miomas uterinos. Houve replicação do procedimento (100 vezes) para se determinar a distribuição dos coeficientes e erros-padrão das estimativas da variável de interesse. Apesar da natureza transversal dos dados aqui utilizados (informações da linha de base do Estudo Pró-Saúde, coletadas em 1999 e 2001), buscou-se resgatar a história do seguimento das participantes por meio de seus relatos, criando uma situação na qual a utilização do modelo de riscos proporcionais de Cox era possível. Nos cenários avaliados, a imputação demonstrou resultados satisfatórios, inclusive quando da avaliação de performance realizada. A técnica demonstrou um bom desempenho quando o mecanismo de ocorrência dos dados faltantes era do tipo MAR (Missing At Random) e o percentual de não-resposta era de 10%. Ao se imputar os dados e combinar as estimativas obtidas nos 10 bancos (m=10) gerados, o viés das estimativas era de 0,0011 para a categoria preta e 0,0015 para pardas, corroborando a eficiência da imputação neste cenário. Demais configurações também apresentaram resultados semelhantes. No segundo artigo, desenvolve-se um tutorial para aplicação da imputação múltipla em estudos epidemiológicos, que deverá facilitar a utilização da técnica por pesquisadores brasileiros ainda não familiarizados com o procedimento. São apresentados os passos básicos e decisões necessárias para se imputar um banco de dados, e um dos cenários utilizados no primeiro estudo é apresentado como exemplo de aplicação da técnica. Todas as análises foram conduzidas no programa estatístico R, versão 2.15 e os scripts utilizados são apresentados ao final do texto. / Missing data are a common problem in epidemiologic studies and depending on the way they occur, the resulting estimates may be biased. Literature shows several techniques to deal with this subject and multiple imputation has been receiving attention in the recent years. This dissertation presents the results of applying multiple imputation of missing data in the context of the Pro-Saude Study, a longitudinal study among civil servants at a university in Rio de Janeiro, Brazil. In the first paper, after simulation of missing data, the variable color/race of the female servants was imputed and analyzed through a previously established survival model, which had the self-reported history of uterine leiomyoma as the outcome. The process has been replicated a hundred times in order to determine the distribution of the coefficient and standard errors of the variable being imputed. Although the data presented were cross-sectionally collected (baseline data of the Pro-Saude Study, gathered in 1999 and 2001), the following of the servants were determined using self-reported information. In this scenario, the Cox proportional hazards model could be applied. In the situations created, imputation showed adequate results, including in the performance analyses. The technique had a satisfactory effectiveness when the missing mechanism was MAR (Missing At Random) and the percent of missing data was 10. Imputing the missing information and combining the estimates of the 10 resulting datasets produced a bias of 0,0011 to black women and 0,0015 to brown (mixed-race) women, what corroborates the efficiency of multiple imputation in this scenario. In the second paper, a tutorial was created to guide the application of multiple imputation in epidemiologic studies, which should facilitate the use of the technique by Brazilian researchers who are still not familiarized with the procedure. Basic steps and important decisions necessary to impute a dataset are presented and one of the scenarios of the first paper is used as an application example. All the analyses were performed at R statistical software, version 2.15 and the scripts are presented at the end of the text.

A longevidade é uma característica relacionada à lucratividade da atividade leiteira. Contudo, sua seleção em rebanhos de vacas Holandesas no Brasil ainda é pouco considerada. Objetivou-se determinar os fatores não genéticos que influenciam a longevidade funcional em vacas Holandesas no Brasil, bem como estimar os parâmetros genéticos e conhecer a contribuição das características de tipo e da contagem de células somáticas (CCS) sobre o risco relativo de descarte das vacas. Utilizou-se um modelo de riscos proporcionais Weibull estratificado. Os efeitos fixos foram independentes do tempo, como a idade ao primeiro parto, e dependentes do tempo, como o efeito da região por ano de parto, classes de produção de leite por ano de parto dentro de rebanho, classes de percentagem de proteína e gordura dentro de rebanho, classes de produção de leite por número de lactações dentro de rebanho e variação nas classes de tamanho de rebanho. Os efeitos aleatórios foram: rebanho-ano, touro e de touro-avô materno. O risco de descarte aumentou com a idade ao primeiro parto, com o tamanho do rebanho, com o número de lactações e com o estágio de lactação. A produção de leite apresentou maior efeito sobre o risco de descarte. Vacas de baixa produção de leite, gordura e proteína apresentaram maior probabilidade de descarte em comparação à classe mediana. Vacas pertencentes às regiões do Paraná e São Paulo permaneceram mais tempo no rebanho do que as vacas de outras regiões. Os valores de h² variam de 7,8% a 6,1% para a h² equivalente e a efetiva, respectivamente. Observou-se tendência genética positiva para a longevidade. As características de tipo, escore final, angularidade, nivelamento da linha superior, textura do úbere e ligamento suspensório foram as características que se apresentaram mais relacionadas com a longevidade funcional. Foram observadas diferenças no risco de descarte dependendo do número de vacas classificadas para tipo dentro de rebanho. Até a 4ª lactação, o risco de descarte foi menor para vacas com baixa CCS em comparação a vacas da classe mediana. Já para vacas na 5ª lactação, a alta CCS conduziu ao menor risco de descarte. A rotina de avaliação genética é necessária para melhorar a duração da vida produtiva de vacas da raça Holandesa no Brasil. Características preditivas, tais como escore final, angularidade, nivelamento da linha superior, textura do úbere, ligamento suspensório e a CCS podem ser utilizadas para aumentar a confiabilidade dos valores genéticos dos touros para longevidade funcional. / Longevity is a trait related to the profitability of dairy activity. However, its selection in Brazilian Holstein herds is still little considered. The aim of this study was to determine the non-genetic factors that influence functional longevity in Holstein cows in Brazil, as well as to estimate the genetic parameters and the contribution of somatic cell score (SCS) and type traits on the relative culling risk of cows. A piecewise Weibullproportional hazard model was used. The fixed effects were time-independent, as age at first calving, and time-dependent, as the interaction effects of region by year of calving, milk production class by year of calving within herd, within herd milk production class by lactation number, within herd fat and protein content, and variation in herd size class. The random effects were herd-year effect, additive genetic contribution from the sire and maternal grandsire of the cow. The relative risk increased with age at first calving, lactation number by stage of lactation, and herd size but lower risks were observed when herd size was increasing or decreasing, compared to stable herds. Milk production had a greater effect on the risk of culling. The relative risk increased as milk production, protein and fat decreased, but to a lesser extent for protein and fat compared to milk yield. Cows from Paraná and São Paulo regions remained longer in the herd than cows from the other regions. The h² values varied from 7.8% to 6.1% for equivalent and effective h², respectively. A positive genetic trend of functional longevity was observed. The type traits, final score, angularity, top line, udder texture and suspensory ligament showed the strongest relationship with productive life. Differences in risk of culling were observed depending on the fraction of type-scored animals within a herd. The absence of type trait phenotypes was associated with a strong increase of culling risk for the cows. The impact of SCS on longevity was high in cows from 1st to 4th lactation with high SCS. Interestingly, for 5th lactation, cows with lower SCS have higher culling risk compared to cows with higher SCS. A routine of genetic evaluation is necessary to improve length of productive life of Brazilian Holsteins under local conditions. The use of early predictors correlated with longevity, as final score, angularity, top line, udder texture, suspensory ligament and SCS, may be recommended to increase the reliability of sires’ estimated breeding values for functional longevity.

A compreensão da dinâmica populacional é fundamental para a conservação da biodiversidade, uma vez que as espécies são perdidas através de processos que ameaçam suas populações. Portanto, compreender como as condições ambientais determinam a dinâmica populacional é essencial, especialmente tendo em conta o cenário de mudanças climáticas. Um parâmetro populacional importante é a reprodução, que não só contribui para o tamanho da população, mas também pode afetar a condição corporal e a probabilidade de sobrevivência. Devido aos altos custos energéticos, a reprodução é freqüentemente associada com a disponibilidade de alimentos em ambientes tropicais, que por sua vez é altamente correlacionada com as condições climáticas, especialmente a precipitação. Além disso, o estudo de processos de populações ou comunidades requer dados de boa qualidade, que para vários grupos de animais depende da compreensão das interações entre os métodos de captura, condições climáticas e as características morfológicas e comportamentais de indivíduos e espécies. Através de um conjunto de dados de captura e recaptura de pequenos mamíferos em uma reserva de Mata Atlântica, compreendendo três grades de 2ha amostrados por quase dois anos, esta tese tem como objetivos contribuir com o entendimento: (1) de como as condições ambientais afetam a dinâmica de populações, especialmente a sobrevivência e reprodução, mais especificamente, como as condições climáticas afetam a demanda conflitante (trade-off) entre a sobrevivência e reprodução e quais são as gatilhos ambientais do início da reprodução, (2) de como o tipo de armadilha, características individuais e as condições climáticas interagem para determinar o sucesso de captura, visando a definição de diretrizes de protocolos de captura eficientes para a amostragem de pequenos mamíferos. No primeiro capítulo, mostramos que a precipitação afetou negativamente as taxas de sobrevivência, positivamente a freqüência de fêmeas reprodutivas e não afetou a condição corporal, o que sugere a existência de uma demanda conflitante entre sobrevivência e reprodução em populações de roedores. No segundo capítulo, corroboramos que a reprodução de marsupiais da Mata Atlântica é sazonal e sincrônica, ocorrendo no período quente e úmido, e seu gatilho é o fotoperíodo. Também apresentamos evidências de semelparidade em marsupiais de pequeno porte. No terceiro capítulo, mostramos que a eficiência de diferentes métodos de captura foi influenciada pelas condições climáticas, dependeu da idade e do sexo dos indivíduos e foi condicionada às variáveis quantificadas (número de espécies, de indivíduos ou de recapturas). Os resultados destacam a importância de armadilhas de queda para os estudos de comunidades e a utilização conjunta de armadilhas de queda e Sherman para estudos populacionais. / The understanding of population dynamics is central for biodiversity conservation, since species are lost through processes that threat their populations. Understanding how environmental conditions determine population dynamics is thus essential, especially given the climate change scenario. One important population parameter is reproduction, which not only contributes to population size, but can also affect body condition and survival probability. Given its high energetic costs, reproduction is frequently associated with food availability in tropical environments, which in turn is highly correlated to weather conditions, especially rainfall. However, studying population or community processes requires good-quality data, which for several animal groups depends on understanding the interactions among trapping methods, weather conditions and morphological and behavioral characteristics of individuals and species. Through a capture-recapture dataset on small mammals in an Atlantic Forest reserve, comprising three 2ha grids sampled for almost two years, this thesis aim at understanding: (1) how environmental conditions affect population dynamics, especially survival and reproduction; more specifically, how weather conditions affect the trade-off between survival and reproduction, and which are the environmental triggers for reproduction; (2) how the type of trap, individual traits and weather conditions interacts to determine capture success, aiming at defining guidelines for efficient protocols for small mammal sampling. In the first chapter, we show that rainfall negatively affected survival rates, positively affected the frequency of reproductive females and did not affect body condition, suggesting the existence of a trade-off between survival and reproduction in rodent populations. In the second chapter, we corroborated that reproduction of Atlantic Forest marsupials is seasonal and synchronous, occurring in the warm-wet season, and triggered by photoperiod cues. We also bring evidence for semelparity in small-sized marsupials. In the third chapter, we show that the efficiency of different trap methods was influenced by weather condition, depended on the age and sex of individuals, and was contingent on the quantified variables (number of species, of individuals or of recaptures). Results highlight the importance of Pitfalls for community studies and the joint use of Pitfall and Sherman traps for population studies.

A Brucelose é uma zoonose causada por bactérias do gênero Brucella que têm no leite cru, e seus derivados, uma importante via de transmissão para o homem. Considerando a situação endêmica da brucelose no Brasil e que o consumo de queijos fabricados com leite cru é um hábito persistente, torna-se relevante a organização das informações disponíveis para a futura e necessária estimativa do risco associado ao consumo deste tipo de produto. Os dados foram levantados com o uso da Revisão Sistemática de Literatura, sobre os diversos fatores que podem modular a sobrevivência da bactéria no queijo. Os resultados obtidos demonstraram que há poucos dados, especialmente quantitativos, sobre o tema. Forneceram dados qualitativos 16 artigos, dentre estes 4 (totalizando 9 experimentos) foram utilizados para análise quantitativa por meta-análise, pelo método de meta-regressão. Os resultados demonstraram existir influência do tempo de cura sobre a diminuição da população bacteriana, também associada a valores reduzidos de pH e atividade de água. Foram detectadas lacunas de conhecimento relacionadas a dose infectante, a interação deste agente com a microbiota natural do leite e do queijo, e a falta de dados experimentais sobre o comportamento de sobrevivência da Brucella em queijos. A obtenção destes dados poderá facilitar a construção de modelos de predição da sobrevivência deste agente nestes produtos futuramente. / Brucellosis is a zoonosis, caused by a bacterium from the genus Brucella that have in raw milk and dairy products an important route of transmission for man. Considering that bovine brucellosis is endemic in Brazil, and that the consumption of cheeses made with raw milk is a persistent habit, the organization of the available information becomes relevant, for the estimation of the risk associated with the consumption of this type of product in the future. The data were collected using systematic literature review, on the various factors that can modulate the survival of the bacteria in milk and cheese. The results obtained show that there are few data, especially quantitative, on the subject. Qualitative data were provided from 16 articles, 4 of which (9 different lab experiments) were used for quantitative analysis by meta-analysis, using the meta-regression method. The results detected the influence of de curing time on the decrease of the bacterial population, also associated to reduced values of pH and water activity. Knowledge gaps about infectious dose, antagonistic/synergistic interactions from this agent with the natural cheese/milk microbiota and a lack of experimental data about the Brucella survival behavior in cheeses were also detected by this research. The obtaining of these data may facilitate the construction of models for predicting the survival of this agent in these products in the future.

Resumo não disponível.

O objetivo deste experimento foi determinar a sobrevivência de blastocistos Mus domesticus domesticus vitrificado em palhetas na presença de uma haste metálica .Blastocistos Mus domesticus domesticus coletados no quarto dia após a fecundação, foram avaliados morfologicamente e divididos aleatoriamente em três grupos. Os embriões do grupo controle foram transferidos para gotas de meio KSOM e cultivados in vitro por 48 horas. Os embriões selecionados para criopreservação foram expostos a uma solução crioprotetora constituída por PBSm + de 10% etileno-glicol + 10% propileno-glicol, para promover uma desidratação das células embrionárias. Após foram transferidos para a solução de vitrificação que continha 20% etilenoglicol + 20% propilenoglicol diluídos em PBSm, e mantidos durante 25 segundos, sendo imediatamente imersos em nitrogênio submetido à vácuo. As taxas de sobrevivência embrionária revelaram uma maior eficiência da técnica com a inserção da peça metálica (56,21% - 86/153) em relação ao método convencional (18,84% - 26/138). Concluímos assim que a presença da peça metálica em contato com a amostra propiciou maior taxa de sobrevivência dos embriões submetidos à vitrificação envasados em palhetas de 0,25 mL. / The aim of this experiment was determine the Mus domesticus domesticus blastocysts survival rates after vitrification in straws containing a metallic stick, that allows to increase the temperature changes among the nitrogen and the embryo sample. Day 4 Mus domesticus domesticus blastocysts were collected from superovulated donnors and after morphologically evaluation were randomly divided in three groups. The embryos select as control group were transferred to KSOM medium drops and in vitro cultured during 48 hours. The crioperservation selected embryos were first exposed to a cryoprotective solution (modified PBS + 10% ethylene-glycol and 10% propylene-glycol) to promote embryo cell dehydration and after exposed during 25 seconds to the vitrification solution composed by modified PBS + 20% ethylene-glycol and 20% propylene-glycol, and immediately plunged into slush liquid nitrogen. The embryo survival rate in group vitrified in the straws containing the metallic stick (56,21% - 86/153) was significantly different from the observed in the group loaded in original straws (18,84% - 26/138). In conclusion, the presence of the metallic stick in contact with the sample was efficient to enhance more suitable survival rates after vitrification of Mus domesticus domesticus blastocysts loaded in 0,25 mL straws.

O desenvolvimento de protocolos eficientes para a vitrificação de embriões mamíferos ainda é um desafio para os especialistas em reprodução. Soluções crioprotetoras de baixa toxicidade associadas a técnicas seguras de envase são fatores fundamentais, para proporcionarem uma eficiente identificação e controle sanitário das amostras. Dois experimentos foram realizados para determinar a taxa de sobrevivência de embriões Mus domesticus domesticus envasados em palhetas convencionais (0,25 mL), na presença de uma haste metálica de ouro, empregando soluções crioprotetoras descritas para a vitrificação em microvolume. No experimento 1, avaliou-se a toxicidade da solução de desidratação (SD: PBSm + 10% EG + 10% PROH + 0,5 M sacarose), expondo-se os embriões por diferentes tempos: 1 (T1), 3 (T2) ou 10 min (T3). A toxicidade da solução de vitrificação (SV: PBSm + 20% EG + 20% PROH) foi determinada pela exposição dos embriões durante 25, 60 ou 180 seg, previamente desidratados por 1 ou 3 min. No experimento 2, avaliou-se a utilização do macrovolume (palhetas com a haste de ouro) e microvolume (micropipetas de vidro - GMP) na vitrificação dos blastocistos expostos à SV por 25 seg, previamente desidratados por 1 ou 3 min. Os dados foram analisados pelo teste Qui-Quadrado (P<0,05). No experimento 1, não foi observada diferença estatística entre as taxas de eclosão dos embriões desidratados: T1=68,0% (38/56), T2=72,0% (36/50), T3=71,0% (39/55) e o grupo controle, (74,0% - 48/65). No entanto, houve diferença significativa (P<0,05) na taxa de eclosão em relação ao tempo de exposição dos embriões à SV. Os embriões desidratados por 1 ou 3 min e expostos à SV por 25 seg proporcionaram maiores taxas de re-expansão (79,0% vs 84,0%) e de eclosão (58,0% vs 72,0%), em relação aos tempos de exposição de 60 e 180 seg. No experimento 2, após a vitrificação dos embriões envasados nas palhetas com a haste de ouro, a taxa de eclosão dos blastocistos previamente desidratados por 1 min foi de 16,0% (10/64) e de 4,0% (2/57) quando previamente desidratados por 3 min. Por outro lado, os embriões envasados nas GMP, e previamente desidratados por 3 min, foram os que apresentaram maior taxa de eclosão (60,0% - 52/86). A vitrificação de embriões utilizando soluções crioprototetoras descritas para microvolume não foi eficiente na crioproteção dos blastocistos envasados em palhetas convencionais com a haste de ouro. / The development of efficient vitrification protocols for mammalian embryos still is a challenge for reproductive biologists. Low toxicity cryoprotectant solutions and safe vitrifications procedures that allow sample identification and sanitary control are fundamental factors. Two experiments were conducted to determine the survival rate of vitrified Mus domesticus domesticus embryos loaded into straws containing a metallic piece (manufactured in gold), using cryoprotectant solutions described for microvolume vitrification procedures. In Experiment 1, the toxicity of the dehydratation solution (SD: PBSm +10% EG + 10% PROH + 0,5 M sucrose) was evaluated using three different embryo exposure times: 1 (T1), 3 (T2) or 10 min (T3), in addition as well as the toxicity of the vitrification solution (SV: PBSm + 20% EG + 20% PROH) was also tested upon embryo exposure for 25, 60 or 180 sec, previously dehydration for 1 or 3 min. In Experiment 2, the use of macrovolume (straw with a stem of gold) or microvolume (glass micropipettes – GMP) was evaluated for the vitrification of blastocysts after exposure to SV for 25 sec and previous dehydration for 1 or 3 min. Data were analized by the Chi-square test (P<0,05). In Experiment 1, statistical differences were not observed between hatching rates of dehydrated embryos: T1=68.0% (38/56), T2=72.0% (36/50), T3=71.0% (39/55) and control group embryos, (74.0% - 48/65). However, a significant difference (P <0,05) was observed between hatching rates after embryos exposure to the SV. Embryos dehydrated for 1 or 3 min and exposed for 25 sec to the SV showed higher re-expansion (79.0% vs. 84.0%) and hatching rates (58.0% vs. 72.0%) than embryos exposed to SV for 60 or 180 sec. In Experiment 2, after vitrification of the embryos loaded into straws containing a metallic piece showed a hatching rate of 16.0% (10/64) when previouslly dehydrated for 1 min, and 4.0% (2/57) when for 3 min. On the other hand, embryos loaded into GMP, previouslly dehydrated for 3 min, showed a higher hatching rate, (60.0% - 52/60). Embryo vitrification using a cryoprotectant solution described as suitable for microvolume was not efficient to cryoprotect blastocysts loaded into macrovolume straws containing a metallic piece.