Carrapatos são artrópodes hematófagos de distribuição cosmopolita que têm grande importância médica e veterinária devido ao efeito deletério direto causado por se fixarem e sugarem seus hospedeiros, como também por serem importantes vetores de doenças para o homem e para os animais domésticos. Sabendo que carrapatos permanecem fixos em seus hospedeiros por longos períodos de tempo sem serem rejeitados, é possível inferir que esses ácaros possuam um arsenal de mecanismos que atuem no controle da resposta imune do hospedeiro. De fato, diversos trabalhos têm demonstrado que carrapatos são capazes de modular a resposta imune de seus hospedeiros através de componentes presentes na saliva, que são inoculados durante o repasto sangüíneo. Assim, este trabalho procurou investigar se carrapatos exercem a modulação da resposta imune do hospedeiro através do recrutamento de células T regulatórias CD4+CD25+ (Tregs), com a intenção de conter uma resposta inflamatória / imune prejudicial à sua alimentação. Para isso, células isoladas de amostras de pele e linfonodos de camundongos BALB/c infestados com carrapatos Rhipicephalus sanguineus foram analisadas quanto à expressão das moléculas de superfície CD4, CD25, CTLA-4, CD45RB, GITR e CD103 (fenótipo de células Tregs), por citometria de fluxo. Adicionalmente, as células obtidas dos linfonodos foram avaliadas quanto à expressão de mensagem para o fator de transcrição Foxp3 (característico da função regulatória), por PCR quantitativo. Paralelamente, saliva de R. sanguineus foi inoculada na orelha de animais da mesma linhagem, a fim de se comparar o infiltrado celular com o obtido na pele dos camundongos infestados com carrapatos. Os resultados mostraram que as infestações não alteraram a percentagem de células T CD4+CD25+ nem a expressão de moléculas associadas ao fenótipo de células Tregs nas células infiltradas na lesão de fixação dos carrapatos ou nos linfonodos em comparação a camundongos controles. Também não se verificou aumento da expressão do gene para Foxp3 nos linfonodos em nenhum dos grupos analisados. Por outro lado, a inoculação de saliva na orelha de camundongos induziu um aumento significativo da população de células T CD4+, porém estas também não apresentavam fenótipo regulatório, sugerindo que o mecanismo de imunomodulação exercido pelos carrapatos sobre seus hospedeiros não é mediado por essas células. Resultados adicionais mostraram que a saliva de carrapatos reduziu significativamente a percentagem de células dendríticas nas orelhas dos camundongos, sugerindo que carrapatos podem estar modulando a resposta imune de seus hospedeiros por diminuírem o repovoamento da pele com células dendríticas, as quais são essenciais na vigilância imune dos tecidos periféricos. / Ticks are bloodsucking arthropods that feed on vertebrates and are responsible for serious global economic losses both through the effects of blood sucking and as vectors of pathogens. A tick?s bloodmeal lasts for several days, during which it remains fixed to the host and avoids rejection by local inflammatory and immunological reactions. This status is achieved by the escape mechanisms ticks have evolved. In fact, many studies have demonstrated that ticks modulate the host immune response through salivary compounds inoculated during their bloodmeals. This study investigated if during bloodfeeding ticks can recruit regulatory T cells in an attempt to modulate the host immune response and to control inflammatory responses that could be harmful to tick feeding. BALB/c mice were infested with Rhipicephalus sanguineus, the skin at feeding sites and the regional lymph nodes were collected, and the cells forming the local infiltrates were analyzed by flow cytometry for simultaneous expression of CD4, CD25, CTLA-4, CD45RB, GITR and CD103 molecules. Additionally, expression of mRNA for Foxp3 was measured in the lymph node cells. Tick saliva was also inoculated into the ears of BALB/c mice in order to compare the local cellular infiltrate with that elicited by artificial infestation. Control animals were sham infested. The results show that, relative to sham-infested tissues, tick infestations did not alter the percentage of CD4+CD25+ T cells present at the site of their attachment or in draining lymph nodes. Infestations also did not increase the expression of Foxp3 in skin and lymph nodes. On the other hand, saliva inoculated into the ear induced a significant increase in the number of CD4+ T lymphocytes recruited to the site of inoculation, although these cells did not express a regulatory phenotype. These results suggest that the modulation of the host immune response by ticks does not involve CD4+CD25+ T cells. Additional results showed that tick saliva reduced the percentage of dendritic cells in the skin of infested mice. This finding indicates that ticks may modulate the host immune response by diminishing the repopulation of skin with dendritic cells, which are essential for maintaining surveillance of peripheral tissues for incoming antigens.

Orientador: Marines Nobre dos Santos Uchoa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-13T08:04:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Steiner-Oliveira_Carolina_D.pdf: 11802864 bytes, checksum: 338ee3278fb157bb1cb37edb2e6d1a5d (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Os efeitos causados pelas modificações promovidas pela irradiação com laser de CO2 podem inibir a desmineralização dos tecidos dentários e podem ser potencializados quando associados ao fluoreto. Apesar de amplo uso do fluoreto e da redução da prevalência de cárie, essa doença ainda acomete grupos de alto risco. Por outro lado, tem sido observado um aumento da prevalência da erosão dentária. Os objetivos dessa tese, composta por 4 manuscritos, foram: (1) descrever as características do laser de CO2 e seus mecanismos de ação na inibição da desmineralização do esmalte; (2) desenvolver um modelo microbiológico, in vitro, de produção de lesão de cárie em dentina e testar duas hipóteses: (a) de que não há diferença na produção de cárie artificial em dentina utilizando um modelo microbiológico com regimes de 3 e 6 imersões ao dia em sacarose, avaliados por contagem bacteriana da dentina (UFC), análise microrradiográfica (AM) e análise de polissacarídeo insolúvel (API); (b) de que não há diferença no pH do biofilme antes e após sua imersão em sacarose; (3) avaliar, in vitro, a efetividade do laser de CO2 (? = 10,6 µm) pulsado, associado ou não ao fluoreto, na redução da desmineralização da dentina radicular usando um modelo microbiológico, avaliado por AM; (4) avaliar, in vitro, o efeito do mesmo laser, associado ou não ao fluoreto, na redução da desmineralização do esmalte e da dentina submetidos a um desafio erosivo, pela mensuração da perda de superfície e análise da concentração de cálcio, fósforo e fluoreto das soluções desmineralizadoras. Os dados foram analisados quanto à normalidade e testes apropriados foram realizados com nível de significância de 5%. No estudo 1, os efeitos do laser no esmalte, seu mecanismo de ação na redução da desmineralização, combinados ou não ao fluoreto, foram discutidos. No estudo 2, o pH do biofilme diminuiu imediatamente após a imersão em sacarose, mas aumentou novamente 5 min depois. Lesões em dentina foram produzidas com sucesso e a adição de sacarose mostrou as maiores perdas minerais, no entanto não diferiu entre os dois regimes de sacarose. A UFC não mostrou nenhuma diferença e a API dos tratamentos foram maiores que a do grupo controle. No estudo 3, os espécimes radiculares foram tratados ou não com laser de CO2 e com ou sem fluoreto antes ou após a irradiação com laser. O modelo microbiológico utilizado foi efetivo em produzir lesões dentinárias e as terapias combinadas mostraram as lesões dentinárias mais rasas. No estudo 4, espécimes de esmalte e dentina foram tratados com fluoreto, laser e fluoreto/laser e submetidos a um desafio erosivo. Os resultados de desgaste indicaram que o tratamento combinado interferiu com as perdas minerais do esmalte e da dentina, mesmo sem mostrar efeito sinérgico. Houve uma tendência de retenção de fluoreto no esmalte pelo tratamento combinado e também de liberação de menores quantidades de cálcio, fósforo e fluoreto para as soluções desmineralizadoras. Em conclusão, o mecanismo de ação do laser de CO2 na inibição da desmineralização do esmalte ainda não está completamente esclarecido e seu efeito pode ser aumentado quando associado ao fluoreto. O modelo microbiológico foi efetivo em produzir lesões de cárie dentinária. A irradiação da dentina radicular com laser inibiu a desmineralização dessa superfície apenas quando associado com o fluoreto; no entanto, não foi observado efeito sinérgico. O tratamento isolado com laser não foi capaz de prevenir a perda de superfície do esmalte e da dentina devido à erosão. Sua combinação com fluoreto mostrou alguma proteção, mas principalmente devido ao efeito do fluoreto. Não foi observada interação sinérgica significativa ou proteção duradoura com a terapia de laser. / Abstract: The effects caused by the modifications promoted by the CO2 laser irradiation can inhibit the dental tissues demineralization and may be enhanced when associated with fluoride. Despite the widespread use of the fluoride and the reduction of the caries prevalence, this disease still occurs in the high risk groups. On the other hand, an increase of the dental erosion prevalence was observed. This thesis, comprised by 4 manuscripts, aimed: (1) to describe the CO2 laser characteristics and its action mechanisms in the enamel demineralization inhibition; (2) to develop an in vitro microbial model to produce dentin caries lesions and test two hypotheses - (a) that there is no difference in the artificial caries production in dentin using a microbial model with 3 and 6 sucrose bath immersions, as assessed by bacterial counts on the dentin (CFU), microradiographic analysis (TMR) and extracellular polysaccharide analysis (EPS); (b) that there is no difference in the biofilm pH before and after each sucrose bath; (3) to assess, in vitro, the effectiveness of a pulsed CO2 laser (? = 10.6 µm) associated or not with fluoride, in reducing the root demineralization using a microbial model, as assessed by TMR; (4) to assess, in vitro, the effect of the same laser, associated or not with fluoride, on the prevention of the enamel and dentin erosions by means of surface loss measurement and analysis of the calcium, phosphorus and fluoride concentrations in the demineralizing solutions. The data were checked for normality and appropriated tests were performed with a significance level of 5%. In study 1, the laser effects on the enamel and its action mechanisms in the demineralization reduction, combined or not with fluoride, were discussed. In study 2, the biofilm pH decreased immediately after the sucrose bath but increased again after 5 min. Dentin lesions were successfully produced, and the sucrose addition showed the highest mineral losses, even though there was no difference between the sucrose regimens. The CFU did not show any difference and the EPS from the treatment groups were higher than for the control. In study 3, root specimens were treated with/without CO2 laser and with/without fluoride prior or after the laser irradiation. The microbial model utilized was effective in developing dentin lesions and the combined therapies showed the shallowest dentin lesions. In study 4, specimens of enamel and root dentin were treated with fluoride, laser and fluoride/laser and submitted to an erosive challenge. The wear results indicated that the combined treatment interfered with the enamel or dentin surface losses, although no synergistic effect was observed. There was a trend for the combined treatment to retain more fluoride in enamel and release lower amounts of calcium and phosphorus into the demineralizing solutions. In conclusion, the CO2 mechanism action on the enamel demineralization reduction is still not elucidated and its effects can be increased when associated with fluoride. The microbial model was effective in producing dentin caries lesions. However, it did not reproduce the remineralizing phase of the caries process. Irradiation of the root dentin with laser inhibited the root surface demineralization only when associated with fluoride; however, no synergic effect was observed. The laser treatment alone was not able to prevent enamel or dentin surface losses due to erosion. Its combination with fluoride showed some protection, but mostly due to the fluoride effect. No significant synergistic interaction or lasting protection could be observed for the laser therapy. / Doutorado / Odontopediatria / Doutor em Odontologia

Hipótese do estudo: O presente trabalho foi desenvolvido a partir da hipótese de que existe relação entre o órgão subfornicial de ratos (OSF) e o fluxo, conteúdo protéico e eletrolítico da saliva, pressão arterial e frequência cardíaca. Proposição: Objetivo deste estudo foi investigar a possível relação entre o órgão subfornicial (OSF) e o fluxo, conteúdo proteico e eletrolítico da saliva, pressão arterial e frequência cardíaca em ratos. Metodologia: Para o desenvolvimento do estudo, foram utilizados vinte ratos machos adultos da raça Wistar (Rattus norvegicus var. albinus), pesando entre duzentos e cinquenta e trezentas gramas por meio de experimentação progressiva da fase 0 (F0) até a fase III (FIII); Os vinte animais passaram pela estimulação salivar (F0 e FI), depois pela canulação do OSF- lesão fictícia(FII) e posteriormente pela lesão eletrolítica (FIII), Com a lesão no OSF, permitiu averiguar a participação dos corpos celulares e fibras de passagem presentes na região reguladora da secreção salivar, fluxo salivar, conteúdo proteico e eletrolítico da saliva e as alterações nos padrões cardiovasculares. Para efetivação da lesão no OSF,(FIII) um eletrodo de aço inoxidável com 0.5mm de diâmetro de ponta, sem isolamento, foi introduzido na área do OSF pela cânula previamente posicionada na (FII). No quinto dia do período pós-operatório, o fluxo salivar foi estimulado com uso da pilocarpina injetada intraperitonealmente (IP) em todas as fases e os animais da (FI) usados como referência em relação aos lesionados fictícios e eletrolíticos considerados Fase III. Em todas as fases do experimento, determinou-se o conteúdo protéico e eletrolítico da saliva, e os padrões cardiovasculares e pressóricos. Resultados: Os resultados foram apresentados como média e erro padrão médio. Para avaliação da interação entre fatores (lesão/droga/efeito) foi utilizada o teste de Newman post-hoc (p<0,05). Foi evidenciada relação da lesão do OSF (FIII) com os padrões cardiovasculares, demonstrando efeito hipertensor da pilocarpina (FII) (326mmHg) em relação à (FIII) (94mmHg), aumento da Freqüência Cardíaca (F0 e FII) (31018bpm) e redução significativa da FC em (FIII) (23323bpm) (p<0,05) Com relação ao Fluxo salivar houve redução em (FIII) em relação à (FI e FII) (177 17mg/7min), (50124mg/7min) respectivamente. Conclusões: O OSF está intimamente relacionado com as alterações do fluxo salivar, secreção, conteúdo protéico e eletrolítico da saliva e alterações cardiovasculares em ratos. / Hypothesis of the study: Hypothesis of the study: The present work was developed from the hypothesis that exists a relation enters the subfornical agency of rats (OSF) and the flow, protein and electrolyte content of the saliva, blood pressure and heart rate. Proposition: Objective of this study was to investigate the possible relation between the subfornical agency (OSF) and the flow, content protein and electrolyte of the saliva, blood pressure and heart rate in rats.Methodology: For the development of the study, (20) twenty adult male rats of the race Wistar (Rattus norvegicus var. albinus), weighing between two hundred and fifty and three hundred grams by means of gradual experimentation of phase 0 (F0) until the III phase (FIII); The twenty animals had passed for the salivary stimulation (F0 and FI), later for the cannulation of the OSF- fictitious injury (FII) and later for the electrolyte injury (FIII), With the injury in the OSF, allowed to inquire the participation of the cellular bodies and staple fibres present in the regulatory region of the salivary secretion , salivary flow , protein and electrolyte content of the saliva and the changes in the cardiovascular standards. For efficacy of the injury in the OSF, (FIII) a stainless steel electrode with 0.5mm of tip diameter, without isolation, was introduced in the area of the OSF for the cannula previously located in (FII). In the fifth day of the postoperative period, the salivary flow was stimulated with use of the pilocarpine injected intraperitoneally (IP) in all the phases and the animals of (FI) used ones as reference in relation to the fictitious and electrolyte injured ones considered Phase III. At all stages of the experiment, we determined the protein and electrolyte content of saliva, and blood pressure patterns and cardiovascular. Results: The results had been presented as average and error average standard. For evaluation of the interaction between factors (injury/drug/effect) the test of Newman was used posthoc (p< 0,05). Was evidenced relation of injury of OSF (FIII) with cardiovascular standards , demonstrating effect hypertensive of pilocarpine (FII) (32 (6mmHg) in relation to (FIII) (9 (4mmHg), increase of Heart Rate(F0 and FII) (310 (18bpm) and significant reduction of the FC in (FIII) (233 (23bpm) (p< 0,05) With regard to the salivary flow had reduction in (FIII) in relation to (FI and FII) (177 (17mg/7min), (501 (24mg/7min) respectively.Conclusions: The OSF is closely related to changes in salivary flow, secretion, protein and electrolyte content of saliva and cardiovascular changes in rats.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-05-25T15:45:53Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Diego Antônio Costa Arantes - 2015.pdf: 5243498 bytes, checksum: 85643aafc3a6a4e6090981926b875c7f (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-05-25T15:48:09Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Diego Antônio Costa Arantes - 2015.pdf: 5243498 bytes, checksum: 85643aafc3a6a4e6090981926b875c7f (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-25T15:48:09Z (GMT). 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The association of these cytokines with clinical parameters of prognosis (staging, metastasis and survival) and histological grade of malignancy (WHO grading) was also investigated. Cytokines in the tissue (OSCC, n = 65; Control, n = 30) were identified using the immunohistochemistry technique (IHC) and in the saliva (OSCC, n = 22; Control, n = 23) the Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) was used. The tissue expression of TGF-β and IL-10 in metastatic lymph nodes (n = 23) of OSCC patients was investigated. The expression of TGF-β and IL-10 in the tissue was measured using a semi-quantitative method in conjunction with staining intensity. Our findings demonstrated a high tissue expression of IL-10 and TGF-β2, and a low or absent expression of TGF-β1, in the majority of OSCC samples when compared to the group with clinically healthy oral mucosa (Control) (p < 0.05 for IL-10 and TGF-β2). The salivary concentration of IL-10 was also high, and distinguished the OSCC patients from their healthy counterparts (p = 0.04), while the salivary concentration of TGF-β1 was similar for both the OSCC and control groups (p = 0.97). The relationship between the cytokine expression and clinical and microscopic prognostic factors showed that the expression of IL-10 and TGF-β2 in neoplastic cells of the primary tumor was maintained by the metastatic neoplastic cells in the cervical lymph nodes. The expression of TGF-β1 remained low or absent in the metastatic lymph nodes. It was shown that there was an association between the high expression of IL-10 by tumor cells and the advanced clinical stages (T3-T4) of patients (p = 0.02). Although not statistically significant, the expression of TGF-β2 was higher in tumors at more advanced stages (p > 0.05). These findings demonstrate that OSCC provides an immunosuppressive environment conducive to tumor proliferation, with high expression of IL-10 and TGF-β2, which contributes to a worse clinical prognosis. In addition, of the immunosuppressive cytokines investigated, IL-10 has greater potential for becoming salivary biomarker when associated with an unfavorable clinical prognosis of OSCC patients. / Fator de crescimento transformador β (TGF-β) e interleucina 10 (IL-10) são citocinas imunossupressoras que propiciam a falha da resposta imune anti-tumoral local e influenciam, assim, na progressão e prognóstico de neoplasias malignas. O objetivo deste estudo foi investigar a expressão tecidual e salivar de TGF-β e IL-10 em pacientes com carcinoma espinocelular de cavidade oral (CECO) e comparar essa expressão com aquela dos indivíduos saudáveis (Controle). A associação dessas citocinas com parâmetros clínicos de prognóstico (estadiamento, metástase e sobrevida) e grau histológico de malignidade (segundo a OMS) também foi investigado. A identificação das citocinas no tecido (CECO - n= 65 e Controle - n=30) foi feita pela técnica de imunohistoquímica (IHC) e na saliva (CECO - n=22 e Controle - n=23) pelo ensaio imunoenzimático (ELISA). A expressão tecidual de TGF-β e IL-10 em linfonodos metastáticos (n= 23) de pacientes com CECO foi investigada. No tecido, a expressão de TGF-β e IL-10 foi mensurada por método semi-quantitativo associada à intensidade de marcação. Nossos achados demonstraram uma alta expressão tecidual de IL-10 e TGF- β2 e, baixa ou ausente expressão de TGF-β1, na maioria das amostras de CECO se comparada ao grupo de mucosa oral clinicamente saudável (Controle) (P<0,05 para IL-10 e TGF-β2). A concentração salivar de IL-10 também foi elevada e distinguiu o paciente com CECO dos indivíduos saudáveis (P= 0,04). Já a concentração salivar de TGF-β1 foi similar entre o grupo de paciente com CECO e o controle (P= 0,97). A relação da expressão das citocinas com fatores clínicos e microscópicos de prognóstico revelou que a expressão de IL-10 e TGF-β2 nas células neoplásicas do tumor primário foi mantida pelas células neoplásicas metastáticas nos linfonodos cervicais. A expressão de TGF-β1 se manteve baixa ou ausente em linfonodos mestastáticos. Associação entre alta expressão de IL-10 pelas células neoplásicas e o estadiamento clínico avançado (T3-T4) dos pacientes foi evidenciada (P=0,02). Embora sem diferença estatística, a expressão de TGF-β2 foi maior nos tumores em estágios mais avançados (P>0,05). Esses achados demonstram que o CCEO possui um ambiente imunossupressor propício para progressão tumoral, com elevada expressão de IL-10 e TGF-β2, o qual contribui para um pior prognóstico clínico dos pacientes. Além disso, das citocinas imunosupressoras investigadas, a IL-10 apresenta maior potencial para se tornar um biomarcador salivar associado ao prognóstico clínico desfavorável do paciente com CECO.

Este estudo teve como objetivo analisar o efeito da contaminação por saliva humana na resistência de união (RU) da interface adesiva em dentina por microtração, nas características morfológicas da camada híbrida (CH) em microscopia confocal e no grau de conversão (GC) de 2 sistemas adesivos: Adper Single bond 2 (SB) e Single Bond® Universal (SU). Cento e oitenta dentes terceiros humanos hígidos foram divididos em 12 grupos (n=10), de acordo com o sistema adesivo utilizado, a presença de saliva e o tempo de armazenagem. Após o procedimento adesivo e aplicação da resina composta Filtek Z250, os dentes foram mantidos em água destilada em estufa a 37°C por 48 horas, 6 meses ou 12 meses antes de serem seccionados em palitos (0,8mm x 0,8mm, aproximadamente) para serem levados à máquina de ensaios universal Instron para os testes de microtração. Para à análise da interface adesiva em microscopia confocal de varredura a laser para verificação e mensuração de alterações internas na interface foram utilizados 60 dentes divididos em 6 grupos (n=10) de acordo com os tempos de 48 horas, 6 meses, e 12 meses respectivamente, empregando os sistemas adesivos (SB) e (SU). O efeito da presença de saliva também foi avaliado pelo grau de conversão dos adesivos, empregando-se espectroscopia de infravermelho transformada de Fourier empregando os sistema adesivos (SB) e (SU) com incorporação de saliva humana na sua composição (n=5) com concentrações 10%, 25% e 50% em vol. Para a comparação das variáveis: RU, (GC), espessura da CH, na presença de saliva e tempo de armazenamento foram utilizados os testes de Análise de Variância a três critérios e de comparações múltiplas de Tukey (p<0,05). Os valores de RU (MPa±dp: 48horas/6meses/1ano) foram: SB (43,53 ±6,0; 40,10±3,4; 38,59±5,4); SalSB (43,09±6,2; 39,86±6,6; 37,255,8); SU (42,98±4,3; 39,30±3,6; 40,44±5,7); Sal SU (44,39±4,2; 42,26±2,5; 38,26±5,7). Os Valores médios da CH (MPa±dp: 48horas/6meses/1ano) foram: SalSB (3,59±0,8; 3,59±1,0; 2,08±1,5). SalSU (1,26±0,5; 1,73±0,8; 1,07±0,3). Os valores de GC (MPa±dp: 10%/25%/50%vol) foram: SB (85,59±3,4; 49,68±12,8; 38,56±11,8); SU (85,52±3,3; 86,27±3,5; 57,82±11,1).Conclui-se, portanto, que a contaminação por saliva humana não interferiu na RU da interface dentina/resina composta após 48 horas, 6 meses e 12 meses. A morfologia da camada hibrida foi alterada pela presença da saliva nos períodos 6 e 12 meses,. O GC dos sistemas adesivos foi afetado pela presença de saliva após a polimerização imediata. Entretanto o fator tempo foi determinante para a deformação da interface dentina/resina para ambos os sistemas adesivos. / The objective of this study was to analyze the effect of human saliva contamination on bond strength of the dentin/adhesive interface, morphology of the hybrid layer by confocal microscopy and SEM analysis and degree of conversion of 2 adhesive systems: Adper Single bond 2 (SB) and Single Bond® Universal ( SU). One hundred and eighty healthy human third teeth were divided into 12 groups (n = 10), according to the adhesive system used, the presence of saliva and the storage time. After the adhesive procedure and placement of resin composite (Filtek Z250), the teeth were stored in distilled waterat 37 ° C for 48 hours, 6 months or 12 months before being cut into sticks (0.8mm x 0.8mm, approximately) to the microtensile strength tests. For the analysis of the adhesive interface in confocal microscopy of laser scanning for verification and measurement of internal interface changes, 60 teeth were used divided into 6 groups (n = 10) according to the storage time: 48 hours, 6 months, and 12 monthsand (SB) and (SU). The effect of the presence of saliva was also evaluated by the degree of conversion of the adhesives using Fourier transform infrared spectroscopy employing adhesive (SB) and (SU) systems incorporating human saliva in its composition (n = 5) with 10%, 25% and 50% vol. For the comparison of the variables: bond strength, degree of conversion, and hybrid layer thickness in the presence of saliva and storage time, the three criteria Variance Analysis and Tukey multiple comparisons tests (p <0.05) were used. The values of bond strength (MPa ± dp: 48hours / 6meses / year) were: SB (43.53 ± 6.0, 40.10 ± 3.4, 38.59 ± 5.4); SalSB (43.09 ± 6.2, 39.86 ± 6.6, 37.255.8); SU (42.98 ± 4.3, 39.30 ± 3.6, 40.44 ± 5.7); SU salt (44.39 ± 4.2, 42.26 ± 2.5, 38.26 ± 5.7). The mean values of hybrid layer thickness (MPa ± dp: 48hours / 6meses / year) were: SalSB (3.59 ± 0.8, 3.59 ± 1.0, 2.08 ± 1.5). SalSU (1.26 ± 0.5, 1.73 ± 0.8, 1.07 ± 0.3). The values of degree of conversion (MPa ± dp: 10% / 25% / 50% vol) were: SB (85.59 ± 3.4, 49.68 ± 12.8, 38.56 ± 11.8); (85.52 ± 3.3, 86.27 ± 3.5, 57.82 ± 11.1). It was therefore concluded that human saliva contamination did not interfere on bond strength of the dentin/adhesive interface after 48 hours, 6 months and 12 months. The morphology of the hybrid layer was altered by the presence of saliva after 6 and 12 months. The degree of conversion of adhesive systems was affected by the presence of saliva immediately after polymerization. However, the time factor was determinant for the dentine/resin interface deformation for both adhesive systems.

Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2017-05-10T20:18:04Z No. of bitstreams: 2 Tese - Heloisa de Sousa Gomes Rodrigues - 2016.pdf: 24514601 bytes, checksum: 5d8491e9be339376d5b3114ac0b8fd41 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-05-11T12:08:41Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Heloisa de Sousa Gomes Rodrigues - 2016.pdf: 24514601 bytes, checksum: 5d8491e9be339376d5b3114ac0b8fd41 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-11T12:08:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Heloisa de Sousa Gomes Rodrigues - 2016.pdf: 24514601 bytes, checksum: 5d8491e9be339376d5b3114ac0b8fd41 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-12-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Paediatric dental treatment may stress children and their parents influencing the child behaviour and the maternal dental anxiety. It is important to understand those behavioural and physiological alterations to aid using of adequate sedatives techniques during paediatric dental procedure. The aim of this study was to evaluate the stress of children and their mothers during the paediatric dental treatment using different sedation protocols. Also, the maternal dental anxiety, the child’s behaviour and age and its associations were evaluated. This observational study is a secondary analysis of two randomised controlled clinical trials. Children aged 2-6 years old received one tooth restoration under moderate sedation according to the groups: [A] 18 children received oral midazolam (1.0 mg/kg) and [B] 18 children received placebo in a crossover design [Clinical Trials database (NCT01795222)]; [C] 14 children received oral midazolam (0.5 mg/kg) and oral ketamine (3.0 mg/kg) plus sevoflurane inhalation (0.3% - 0.4%) and [D] 13 children had oral midazolam (0.5 mg/kg) and oral ketamine (3.0 mg/kg) plus oxygen inhalation in a parallel design (NCT02284204). The sessions were video recorded for evaluation of child behaviour using OSUBRS scale (Ohio State University Behavioural Rating Scale) and mothers answered the Brazilian version of Dental Anxiety Scale (DAS). The saliva samples were collected on children and on their mothers at 4 moments: waking up (T0), upon arrival at Dental School (T1), 25 minutes after the local anaesthesia injection on child (T2) and 25 minutes after the end of procedure (T3). Salivary cortisol was measured using an immunoassay kit (ELISA). As the data presented non normal distribution (Shapiro Wilk, p>0,05), Kruskal-Wallis and Mann-Whitney tests were used for non paired comparisons and Mann-Whitney for associations among the variables. For paired comparisons, Friedman and Wilcoxon tests were used (p<0,05). The increase of cortisol levels from T1 to T2 (reactivity to stressful stimulus – local anaesthesia) was higher in children of group [B] [median (interquartile)] – [0.53 (0.60)] following by groups [D] – [0.21 (0.35)], [C] – [0.11 (0.49)] and [A] – [0.02 (0.59)] (p=0.02). The decrease of cortisol levels from T2 to T3 (regulation to stress) was higher in children of group [B] – [0.08 (0.29)] following by groups [A] [-0.02 (0.40)], [C] – [-0.18 (0.41)] and [D] – [-0.19 (0.8)] (p=0.02). Majority of mothers were not stressed during their child’s local anaesthesia injection (67.9%) and presented low/moderate anxiety (69.6%), while 25.0% of them presented high/severe anxiety (DAS scale). Mothers who reacted to stress (increasing of cortisol at least 10% from T1 to T2) had higher cortisol levels at the moments T2 [0.15 (0.48)] and T3 [0.16 (0.50)] compared to T1 [0.09 (0.17)] (p<0.01 and p<0.006, respectively). On the other hand, mothers who did not react to stress had higher cortisol levels at the moments: T1 [0.36 (0.18)] compared to T2 [0.16 (0.18)] (p<0.01) and T3 [0.10 (0.12)] (p<0.01) and T2 compared to T3 (p=0.01). There was no statistically significant association between maternal stress (salivary cortisol levels) with child behaviour (p=0.56), child’s age (p=0.48) and maternal dental anxiety (DAS) (p=0.69). The findings of this study allow to conclude that sedation protocol using oral ketamine caused higher liberation of salivary cortisol at the moments of local anaesthesia and at the end of procedure (higher reactivity and lower regulation) indicating a prolonged response to physiological stress in children, which was not observed during the use of oral midazolam. Although, there was any maternal dental anxiety most of mothers were not stressed during the dental treatment under sedation of their children. Also, maternal dental anxiety, child’s age and child behaviour did not influence the maternal stress. / O tratamento odontopediátrico pode causar estresse em crianças e em seus acompanhantes prejudicando o comportamento infantil e a ansiedade odontológica materna. A compreensão dessas alterações fisiológicas e comportamentais é de suma importância a fim de auxiliar no uso de técnicas sedativas adequadas durante o atendimento odontológico infantil. O objetivo deste estudo foi avaliar o estresse de crianças e de suas respectivas mães durante o tratamento odontopediátrico sob diferentes protocolos de sedação. Além disso, objetivou-se avaliar a ansiedade odontológica materna e o comportamento infantil, bem como a associação destas características. Este estudo observacional é uma análise de dados de dois ensaios clínicos randomizados e controlados. Crianças de 2 a 6 anos de idade receberam tratamento odontológico restaurador padronizado sob sedação moderada de acordo com os grupos: [A] 18 crianças receberam midazolam oral 1,0 mg/kg e [B] 18 crianças receberam placebo, em um desenho cruzado [Clinical Trials database (NCT01795222)]; [C] 14 crianças receberam midazolam oral 0,5 mg/kg e cetamina oral 3,0 mg/kg mais inalação de sevoflurano (0,3% - 0,4%) e [D] 13 crianças tiveram midazolam oral 0,5 mg/kg e cetamina oral 3,0 mg/kg mais inalação de oxigênio, em um desenho paralelo (NCT02284204). As sessões foram filmadas para posterior avaliação do comportamento infantil usando a escala OSUBRS (Ohio State University Behavioural Rating Scale) e as mães responderam a versão Brasileira da Dental Anxiety Scale (DAS). As coletas de saliva foram realizadas concomitantemente nas crianças e mães em 4 momentos: ao acordar (T0), na chegada na clínica (T1), 25 minutos após a aplicação da anestesia local na criança (T2) e 25 minutos após o término do procedimento (T3). O cortisol salivar foi mensurado por meio de ensaio imunoenzimático (ELISA). Como os dados apresentaram distribuição não normal (Shapiro Wilk, p>0,05), o teste de KruskalWallis seguido de Mann-Whitney foram utilizados para comparações não pareadas e MannWhitney para associação entre as variáveis. Para análises pareadas, o teste de Friedman seguido de Wilcoxon foi utilizado adotando-se como nível de significância um valor de 5% (p<0,05). O aumento do cortisol de T1 para T2 (reatividade ao estímulo estressor – anestesia) foi maior em crianças do grupo [B] [mediana (interquartil)] – [0,53 (0,60)] seguido dos grupos [D] – [0,21 (0,35)], [C] – [0,11 (0,49)] e [A] – [0,02 (0,59)] (p=0,02). Já a redução do cortisol de T2 para T3 (regulação ao estresse) foi maior em crianças do grupo [B] – [0,08 (0,29)] seguido dos grupos [A] [-0,02 (0,40)], [C] – [-0,18 (0,41)] e [D] – [-0,19 (0,8)] (p=0,02). A maioria das mães não ficaram estressadas durante a aplicação da anestesia local em seus filhos (67,9%) e apresentaram ansiedade baixa/moderada (69,6%), enquanto 25,0% delas apresentaram alta/severa ansiedade (escala DAS). As mães que reagiram ao estresse (aumento de pelo menos 10% do nível de cortisol salivar do momento T1 ao T2) tiveram maiores níveis de cortisol nos momentos T2 [0,15 (0,48)] e T3 [0,16 (0,50)] comparado com T1 [0,09 (0,17)] (p<0,01 e p=0,006, respectivamente). Por outro lado, mães que não reagiram tiveram maior nível de cortisol nos momentos: T1 [0,36 (0,18)] comparado a T2 [0,16 (0,18)] (p<0,01) e T3 [0,10 (0,12)] (p<0,01); T2 comparado a T3 (p=0,01). Não houve associação estatisticamente significante entre o nível de cortisol salivar das mães com o comportamento infantil (p=0,56); idade das crianças (p=0,48) e ansiedade odontológica materna (DAS) (p=0,69). Os achados obtidos no presente estudo permitem concluir que o uso do protocolo de sedação com cetamina oral provocou aumento da liberação de cortisol salivar tanto no momento da anestesia quanto ao final do tratamento (maior reatividade e menor regulação) indicando uma resposta prolongada ao estresse fisiológico das crianças, o que não foi observado com o uso de midazolam oral. Embora algum grau de ansiedade odontológica materna tenha sido evidenciada, a maioria das mães não ficaram estressadas durante o tratamento odontológico sob sedação de seus filhos. Adicionalmente, a ansiedade odontológica das mães, bem como a idade e o comportamento infantil não influenciaram o estresse materno.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-04-22T16:31:15Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Heloisa de Sousa Gomes - 2013.pdf: 3199526 bytes, checksum: fedf466f42b9c4b911e2e0c9629d72de (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-04-22T16:33:58Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Heloisa de Sousa Gomes - 2013.pdf: 3199526 bytes, checksum: fedf466f42b9c4b911e2e0c9629d72de (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-22T16:33:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Heloisa de Sousa Gomes - 2013.pdf: 3199526 bytes, checksum: fedf466f42b9c4b911e2e0c9629d72de (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2013-02-26 / The fear and anxiety represent a barrier for dental care and can cause behavioral and physiological changes. These changes can be evaluated through behavioral scales and the measurement of salivary cortisol levels. The aim of this study was to evaluate the level of salivary cortisol in children during restorative dental treatment under moderate sedation with midazolam and taken a placebo and verify the correlation between this physiological measure and the assessment of the behavior conducted through the scale Ohio State University Behavioral Rating Scale (OSUBRS). A randomized controlled crossover triple-blind clinical trial was conducted with 18 healthy children from 2 to 5-year olds with necessity of at least two sessions of restorative dental treatment. Each child was undergo treatment under sedation with 1mg/kg oral midazolam in one session and the other with a placebo and in both sessions protective stabilization was associated. The assessment of child behavior was conducted from videos of clinical sessions using the scale of OSUBRS and the salivary cortisol level was evaluated in 4 moments on the two sessions (waking up, on arrival at the Dental School (DS), 25 minutes after the anesthesia and 25 minutes after finishing the procedure). The saliva samples were analyzed by the Enzyme Immunoassay test to get the mean salivary cortisol level. The results showed that the salivary cortisol level was lower when the children had received midazolam than when they had received the placebo at the moment of anesthesia (p=0.004). It was! Observed greater variation in cortisol level when the children received placebo than when they received midazolam. However, there were no differences between salivary cortisol levels observed in the four moments during treatment with sedation (p = 0.319) or placebo (p = 0.080). Regarding the child behavior it was not observed improvement during the treatment with sedation compared with placebo. The salivary cortisol levels showed no statistically significant correlation with the child’s behavior assessed by the scale OSUBRS during dental treatment under sedation or placebo. Therefore it was concluded that the oral midazolam dose of 1.0 mg/kg is effective in reducing the levels of salivary cortisol of children from 2 to 5-year olds during restorative dental treatment. However, this reduction in the level of cortisol in saliva did not reflect in better clinical behavior of these children. / O medo e ansiedade representam uma barreira durante o atendimento odontológico e podem causar alterações comportamentais e fisiológicas. Essas alterações podem ser avaliadas através de escalas comportamentais e da mensuração do nível de cortisol salivar. O objetivo do presente estudo foi avaliar o nível de cortisol salivar de crianças durante o tratamento odontológico restaurador sob sedação moderada com midazolam e com placebo, e verificar a correlação entre esta medida fisiológica e a avaliação do comportamento realizada através da escala Ohio State University Behavioral Rating Scale (OSUBRS). Realizou-se um ensaio clínico randomizado controlado cruzado triplo-cego com 18 crianças saudáveis de 2 a 5 anos de idade com necessidade de pelo menos duas sessões de tratamento odontológico restaurador. Cada criança foi submetida a tratamento sob sedação com midazolam oral (1 mg/kg) e outra sessão com placebo, sendo que em ambas as sessões realizou-se estabilização protetora. A avaliação do comportamento infantil foi realizada a partir de vídeos das sessões clínicas utilizando-se a escala OSUBRS e o nível de cortisol salivar foi avaliado em 4 momentos nas duas sessões (ao acordar, ao chegar na Faculdade de Odontologia (FO), 25 minutos após a anestesia e 25 minutos após o término do procedimento). As amostras de saliva foram analisadas por um ensaio imunoenzimático para obter a média do nível de cortisol salivar. Os resultados demonstraram que o nível de cortisol salivar foi menor quando as crianças receberam o midazolam do que quando receberam o placebo no momento da anestesia (p=0,004). Observou-se maior variação no nível de cortisol salivar quando as crianças receberam o placebo do que quando receberam o midazolam. No entanto, não foi demonstrada diferença entre os níveis de cortisol salivar verificados nos quatro momentos de coleta durante o tratamento com sedação (p=0,319) e com o placebo (p=0,080). Em relação ao comportamento infantil, não foi observado melhora durante o atendimento com sedação comparado com o placebo. Os níveis de cortisol salivar não apresentaram correlação com o comportamento infantil avaliado através da escala OSUBRS, tanto durante o tratamento sob sedação quanto com o placebo. Portanto, concluiu-se que o midazolam oral na dose de 1,0 mg/kg é eficaz na redução do nível de cortisol salivar de crianças de 2 a 5 anos de idade durante o tratamento odontológico restaurador. Entretanto, essa redução do nível de cortisol na saliva não refletiu em um melhor comportamento clínico dessas crianças.

Nós investigamos os efeitos da saliva de Lutzomyia longipalpis capturados no campo e colonizados em laboratório, na evolução da lesão e imunomodulação da infecção por Leishmania (Leishmania) amazonensis, uma espécie que é endêmica na América do Sul, onde causa Leishmaniose Cutânea, Leishmaniose Cutânea Disseminada Bordeline e Leishmaniose Cutânea Difusa Anérgica, com conseqüências graves aos pacientes. Com o intuito de comparar o efeito dos dois tipos de extrato de glândula salivar, camundongos C57BL/6 foram inoculados subcutaneamente no coxim plantar das patas traseiras e nas orelhas com 106 formas promastigotas de Leishmania (L.) amazonensis na presença de extrato de glândula salivar de vetores de captura e de colônia. O tamanho da lesão foi significantemente menor nos camundongos infectados com extrato de glândula salivar de vetores capturados, o que também determinou uma infiltração menos proeminente de macrófagos nas lesões e uma resposta Th2 mais branda quando comparada com aqueles inoculados com extrato de glândula salivar de vetores colonizados. Recentemente, foi mostradas diferenças nos compostos protéicos das glândulas salivares que poderiam parcialmente justificar a expressão da lesão. Portanto, nossos achados ressaltam que a extrato de glândula salivar de flebótomos provavelmente não desempenha um papel importante na exacerbação da infecção por Leishmania já que a transmissão natural do parasito ocorre através de vetores selvagens e não através de vetores colonizados em laboratório / We investigated the effects of Lutzomyia longipalpis saliva of vectors captured in the field and colonized in laboratory on the lesion evolution and immunomodulation of the infection by Leishmania (Leishmania) amazonensis, a species that is endemic in South America where it causes cutaneous leishmaniasis, borderline disseminated cutaneous leishmaniasis and anergic diffuse cutaneous leishmaniasis, with devastating consequences to the patients. In order to compare the effect of both salivas, C57BL/6 mice were inoculated subcutaneously into the hind footpads or into the ear dermis with 106 promastigotes in the presence of salivary gland homogenate from wildcaught and lab-colonized vectors. Lesion size was significantly lower in the mice infected with saliva from wild-caught sandflies that also determined a less prominent infiltration of macrophages in the lesions and a weaker Th2 response in comparison with those co-inoculated with colonized saliva. Recently, differences were shown in the protein compounds in the salivary glands that could partially account for the lesion size outcome. In conclusion, our findings highlight that phlebotomine saliva probably does not play an important role in the exacerbation of Leishmania infection as the natural parasite transmission occurs through wild and not laboratory colonized vectors.

No Brasil, cerca de 65% da população é infectada por H. pylori, bactéria associada à patogênese de gastrite, úlcera péptica e considerada fator de risco de câncer gástrico. A transmissão da bactéria parece ocorrer de pessoa para pessoa, nas formas oral-oral, gástrica-oral e fecal-oral, e a cavidade bucal pode ser importante neste processo de transmissão. Os objetivos deste estudo foram: pesquisar a presença de H. pylori na cavidade bucal de pacientes dispépticos e identificar as possíveis cepas existentes. Para tanto, 43 pacientes com dispepsia funcional do Ambulatório de Estômago do Departamento de Gastroenterologia, Disciplina de Gastroenterologia Clínica FMUSP foram selecionados para o estudo. Todos realizaram exame de endoscopia digestiva alta e coleta de fragmento da mucosa gástrica para pesquisa de H. pylori através de teste da urease. A presença de H. pylori no estômago foi também evidenciada pelo teste respiratório com 14C ou sorologia, e em 30 pacientes foi identificado H. pylori no estômago. Foram coletadas 144 amostras da cavidade bucal: 43 de saliva, 43 de dorso de língua, 43 de placa supra-gengival e 15 de placa sub-gengival. A detecção de H. pylori das amostras bucais realizou-se através de PCR utilizando os primers espécie-específicos: P1/P2, Urease A/B e primers para investigar os genótipos cagA e vacA (m1, m2, s1a, s1b, s2). Não foi possível detectar o microorganismo em nenhuma amostra da cavidade bucal. Esse estudo mostrou que a cavidade bucal de pacientes dispépticos não representa reservatório para a bactéria. / Helicobacter pylori (H. pylori) infection is very prevalent in Brazil, infecting almost 65% of our population, being associated with peptic ulcer disease, gastric cancer, lymphoma and functional dyspepsia. The aim of this study was to evaluate the presence of this bacterium in the oral cavity of epigastric pain syndrome (functional dyspepsia) patients and assess the frequency of cagA and vacA genotypes of oral H. pylori. All 43 epigastric pain syndrome outpatients, who entered the study, were submitted to upper gastrointestinal endoscopy to rule out organic diseases. H. pylori infection was confirmed by rapid urease test, urea breath test and sorology, and thirty patients harbored H. pylori in the stomach. 144 samples of the oral cavity were collected: 43 samples of saliva, 43 of the tongue dorsum and 43 of supragingival dental plaque and 15 of sub-gingival dental plaque which were collected from the patients with periodontitis; H. pylori infection was verified by polymerase chain reaction (PCR) using primers (P1 and P2) that amplify the DNA sequence of a species-specific antigen present in all H. pylori strains, primers Urease A/B and primers for cagA and vacA (m1, m2, s1a, s1b, s2) genotyping. It was not possible to detect H. pylori in any oral samples using P1/P2 and Urease A/B. The genotype cagA was also negative in all samples and vacA genotype could not be characterized (s-m-). In this study, the oral cavity seemed not to be a reservoir for H. pylori in patients with epigastric pain syndrome being detected exclusively in the stomach.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-06-28T12:37:36Z No. of bitstreams: 1 carlaalicetheodorobatista.pdf: 1563638 bytes, checksum: 1ab6a3b656a9e8afc9dccb7d96235060 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-06-28T12:51:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 carlaalicetheodorobatista.pdf: 1563638 bytes, checksum: 1ab6a3b656a9e8afc9dccb7d96235060 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-28T12:51:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 carlaalicetheodorobatista.pdf: 1563638 bytes, checksum: 1ab6a3b656a9e8afc9dccb7d96235060 (MD5) Previous issue date: 2012-07-03 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Neste trabalho são apresentados resultados relacionados a estudos sobre o comportamento eletroquímico do lactato e do peróxido de hidrogênio em diversos eletrodos utilizando voltametria cíclica. O comportamento eletroquímico do peróxido de hidrogênio em eletrodos modificados com filme de Azul da Prússia utilizando eletrodos de ouro, compósito e carbono vítreo também foi investigado. Em uma segunda etapa desenvolveu-se um biossensor eletroquímico para determinar lactato por meio do monitoramento do peróxido de hidrogênio produzido na reação catalisada do lactato com oxigênio na presença da enzima lactato oxidase. Nessa etapa, o trabalho consistiu em imobilizar a enzima lactato oxidase na superfície do eletrodo, previamente, modificado com Azul da Prússia, com o auxílio de Nafion. Após a construção do biossensor e a otimização das condições de análise (vazão, potencial, volume de amostra, quantidade de enzima e volume de Nafion) para obtenção de maior sensibilidade no desenvolvimento do método para a determinação de lactato por análise em fluxo, averiguou-se a repetibilidade das medidas (Clactato = 0,20 mmol.L-1) obtendo-se um desvio padrão de 7,1% para 27 repetições. A frequência analítica foi estimada em 41 injeções por hora. Foi obtido um limite de detecção de 2,95 μmol.L-1 e um limite de quantificação igual a 9,84 μmol.L-1. O biossensor foi aplicado na quantificação de lactato em amostras biológicas (urina e saliva). Os resultados obtidos pelo método proposto foram comparados com aqueles oriundos do uso de método de referência. / This paper presents findings related to studies on the electrochemical behavior of lactate and hydrogen peroxide in various electrodes using cyclic voltammetry. The electrochemical behavior of hydrogen peroxide on modified electrodes with Prussian blue film using gold electrodes, composite and glassy carbon was also investigated. In a second step it was developed an electrochemical biosensor for determining lactate by monitoring the hydrogen peroxide produced in the reaction catalyzed lactate with oxygen in the presence of the enzyme lactate oxidase. At this stage, the work consisted of the enzyme lactate oxidase immobilized on the electrode surface, previously modified with Prussian Blue, with the aid of Nafion®. After the construction and optimization of the biosensor analysis conditions (flow rate, potential, sample volume, amount of enzyme and volume of Nafion) for obtaining greater sensitivity in development of the method for the determination of lactate by flow analysis, it was investigated whether the repeatability of measurements (Clactate = 0.20 mmol.L-1) obtaining a standard deviation of 7.1% to 27 repetitions. The analytical frequency was estimated to 41 injections per hour. It was obtained a detection limit of 2.95 μmol.L-1 and a limit of quantification equal to 9.84 μmol.L-1. The biosensor was applied to the quantification of lactate in biological samples (urine and saliva). The results obtained by the proposed method were compared with those from the use of the reference method.