Após a inseminação artificial, as fêmeas apresentam reação inflamatória transitória e fisiológica, que pode resultar em alterações na vascularização uterina. A ultrassonografia Doppler colorido é uma técnica não invasiva, que vem sendo utilizada para estudar a hemodinâmica do trato reprodutivo de bovinos. Os objetivos deste trabalho foram verificar a resposta inflamatória uterina por ultrassonografia Doppler colorido e a taxa de fertilidade em bovinos após inseminação artificial (IA) com sêmen avaliado por sondas fluorescentes. Para isso foram delineados dois experimentos. O experimento 1 foi realizado para estudar a hemodinâmica uterina por ultrassonografia Doppler colorido em bovinos após a IA. Foram utilizadas 18 vacas da raça Nelore, submetidas a um protocolo para a inseminação artificial em tempo fixo (IATF) e divididas em dois grupos: Grupo não inseminado (controle, GC, n=9) e grupo submetido à inseminação artificial (GIA, n=9). Avaliações por ultrassonografia foram realizadas em cinco momentos em modo espectral (30 horas antes da IA, 4, 24, 48 e 168 horas após a IA) para avaliar o índice de resistência (RI) da artéria uterina e em quatro momentos em modo color Doppler (4, 24, 48 e 168 horas após a IA) para avaliar a vascularização dos cornos uterinos. O diagnóstico de gestação foi feito após 30 dias da IA. No experimento 2 objetivou-se verificar se o percentual de espermatozóides com integridade das membranas plasmática e acrossomal e função mitocondrial (PIAIC) avaliadas por sondas fluorescentes influencia a fertilidade e estudar a hemodinâmica uterina após a deposição do sêmen com diferentes percentuais de espermatozóides PIAIC. Foram utilizadas 182 vacas paridas da raça Nelore, submetidas a um protocolo para IATF e divididas em três grupos de acordo com a qualidade do sêmen: Bom (B) 44,5%, Médio (M) 23% e Regular (R) 8,5% de espermatozóides PIAIC/palheta. Uma amostra de 30% das fêmeas (54, sendo 18 de cada grupo) foram submetidas a avaliações com ultrassonografia Doppler colorido 30 horas antes da IA, 4 e 24 horas após a IA. Foram considerados os RI das artérias uterinas direita (AD) e esquerda (AE) e vascularização subjetiva dos cornos uterinos direito (CD) e esquerdo (CE). Posteriormente, foram separados levando em consideração o lado do ovário contendo o folículo dominante para comparar RI das artérias ipsi (AI) e contralateral (AC) e vascularização subjetiva dos cornos uterinos ipsi (CI) e contralateral (CC). O diagnóstico de gestação foi realizado 30 dias após a IA. Para a análise estatística foi utilizado o programa SAS versão 9.2 (SAS 2010). As variáveis foram analisadas pelo PROC MIXED, utilizando modelo linear misto para medidas repetidas no tempo. Foram considerados os efeitos fixos de grupo, tempo e interação grupo x tempo. Os dados obtidos foram submetidos à análise de variância e ao teste de Duncan, pelo PROC GLM. A análise de Qui-Quadrado foi utilizada para determinar a taxa de prenhez, de acordo com a qualidade do sêmen pelo PROC FREQ. O nível de significância considerado foi de 5%. No experimento 1 não foram observadas diferenças dos parâmetros avaliados por ultrassom Doppler entre GIA e GC, mas foram notados efeitos do tempo para RI, sendo mais baixos 4 horas após a IA. Quando os dados foram avaliados de acordo com o lado do folículo dominante foi observado que 4 e 24 horas após a IA, RI da AC do GIA foi mais baixo do que o GC. No experimento 2 não houve diferença entre os animais inseminados com sêmen B, M ou R quanto a hemodinâmica uterina, mas houve efeito do tempo, sendo que 4 horas após a IA verificou-se menor valor de RI e maior fluxo sanguíneo. A taxa de prenhez dos animais inseminados com o sêmen B (64,7%) foi maior quando comparada ao sêmen R (36,2%), sendo que ambos não diferiram do sêmen M (50,0%). Pode-se concluir que não é possível detectar por ultrassonografia Doppler alterações na hemodinâmica uterina devido à IA em fêmeas bovinas. A deposição de sêmen com diferentes qualidades não altera a hemodinâmica uterina de forma detectável por ultrassonografia Doppler em bovinos. Por outro lado, é possível detectar por ultrassonografia Doppler mudanças na perfusão sanguínea do útero em relação ao tempo da IA, o que pode ser devido a alterações hormonais que ocorrem durante o ciclo estral. Por fim, a IA com sêmen contendo menor percentual de espermatozoides PIAIC causa redução na taxa de fertilidade em bovinos. / After insemination, females have physiological and transient inflammatory reaction, which can result in changes in the uterine vasculature. The color Doppler ultrasound is a noninvasive technique that has been used to study the hemodynamics of cattle reproductive tract.The purposes of this work were to verify uterine inflammatory response by color Doppler ultrasound and fertility rate in cattle after artificial insemination (IA) with semen evaluated by fluorescent probes. For this, two experiments were delineated. The first experiment was conducted to study the uterine hemodynamic by color Doppler ultrasound in cattle after AI. Were used 18 Nellore cows that were subjected to a protocol for fixed timed artificial insemination (IATF). The animals were divided in two groups: Not inseminated group (control, GC, n=9) and inseminated group (GIA, n=9). Ultrasonografic evaluation were done in five moments on spectral mode (30 hours before AI, 4, 24, 48 e 168 hours after IA) to evaluate the resistence index (RI) of uterine artery and in four moments in color Doppler mode to evaluate the uterine horns vascularization. The pregnancy diagnostic was done 30 days after IA. In the second experiment the objective was to evaluate whether the percentage of sperm with plasma membrane integrity and acrossomal and mitochondrial function (PIAIC) assessed by fluorescent probes influences fertility and study the uterine hemodynamic after the deposition of semen with different percentages of PIAIC sperm. Were used 182 caved Nellore cows submitted to a protocol for IATF and divided into three groups according to semen quality: Good (B) 44.5%, Medium (M) 23% and Regular (R) 8,5% of PIAIC sperm/blade. A sample of 30% of female (54, 18 in each group) were submitted to evaluation by color Doppler ultrasound 30 hours before IA, 4 and 24 hours after IA. Were considered RI of right (AD) and left (AE) uterine arteries and subjective vascularization of right (CD) and left (CE) uterine horns. Later, they were separated taking into account the side of the ovary containing the dominant follicle to compare RI of ipsi (AI) and contralateral (AC) arteries and subjective vascularization of ipsi (CI) and contralateral (CC) uterine horns. The pregnancy diagnostic was done 30 days after IA. Statistical analysis was performed using the program SAS version 9.2 (SAS 2010). The variables were analyzed by PROC MIXED, using mixed linear model for repeated measures in time. We considered effects of group, time and group x time interaction. The data obtained were submitted to ANOVA and Duncan test, using PROC GLM. The chi-square analysis was used to determine pregnancy rate, according to the quality of semen by PROC FREQ. the significance level was 5%. In experiment 1 there were no differences of the parameters evaluated by Doppler ultrasound between GIA and GC, but time effects were noted for RI, it was lower four hours after IA. When the data were evaluated according to the side of the dominant follicle was observed that 4 and 24 hours after IA, RI of AC of GIA was lower when it was compared with GC. In experiment 2 there was no difference between animals inseminated with semen B, M or R about uterine hemodynamics, but there were effects of time, so that 4 hours after IA showed lower value of RI and increased blood flow. The pregnancy rate of animals inseminated with semen B (64.7%) was higher when compared with semen R (36.2%), both of them did not differ of semen M (50.0%). It can be concluded that is not possible to detect uterine hemodynamic changes by Doppler ultrasound due to IA in cattle. The deposition of semen with different qualities does not change the uterine hemodynamics enough to be detectable by Doppler ultrasonography in cattle. On the other hand, is possible to detect changes in blood perfusion of the uterus in relation to the time of IA by Doppler ultrasound, which may be due to hormonal changes that occur during the estrous cycle. Finally, IA with semen containing a lower percentage of PIAIC sperm causes a reduction in fertility rate in cattle.

Many Neotropical primate species are endangered of extinction. Reproductive biotechnologies can consistently contribute to species conservation, being among them the genetic resource banks. However, success in the use of such technologies relies on advances in the knowledge of basic reproductive biology of a given species. During these processes, assessment of sperm quality is of supreme importance. We focused our work in captive golden-headed lion tamarins (Leontopithecus chrysomelas), housed at São Paulo Zoological Park Foundation. Leontopithecus sp. is a very important target for the development of reproductive techniques aiming conservation, as all species from this genus are classified as endangered or critically endangered of extinction by IUCN. For the evaluation of sperm quality in L. chrysomelas, techniques like sperm-binding assay, and the non-fluorescent staining for evaluation of acrosome integrity fast-green/rose-bengal, plasma membrane integrity eosin-nigrosin and mitochondrial activity 3.3 diaminobenzidine were validated for fresh semen. We have also validated an acrosome integrity evaluation technique coomassie blue staining, for thawed samples due to the inadequacy of the method used for fresh semen. Some Neotropical primates species show variation in semen quality over the year. In order to assess semen quality for this species and to verify if golden-headed lion tamarin presents this variation, we collected semen in dry and rainy seasons, during different periods of breeding season in the interval of conceptive periods and in the end of the second conceptive period. Testicular measurements were taken prior each semen collection, and a significant difference was found in total testicular volume between seasons, with major volumes found during dry season (p = 0.0011). Samples collected during rainy season showed higher percentage of total motility (x = 93.85) and intact plasma membrane (x = 95.54) (p = 0.0149 and p = 0.0279, respectively), in comparison with dry season (total motility x = 90.96 and intact plasma membrane x = 92.46). Even with those differences, semen from both seasons presented good quality. The success rate for collection with penile vibrostimulation technique was of 100%, and all samples obtained were constituted by only a coagulated fraction. Despite not achieving coagulum dissolution, we were able to access a high number of spermatozoa by adding Biggers-Whitten-Whittingham (BWW) medium to the coagulum for 30 min at 37°C, and performed all proposed analyzes. The same samples used of fresh analyzes were subsequently submitted to cryopreservation using two different commercial extenders BotuBOV® (BB) and Freezing Medium with Glycerol and Gentamicin Test Yolk Buffer® (TYB). Thawed semen samples were analyzed with the same methods previously validated and were also evaluated for the susceptibility to oxidative stress through quantification of induced thiobartituric acid reactive substances (TBARS). For all seminal parameters assessed, no significant difference was observed between BB and TYB, except that BB presented a higher percentage of intact acrosome (p = 0.0101) and concentration of TBARS (p = 0.0005). Despite those differences, thawed semen from both extenders performed similarly at spermegg binding assay. From our work, we observed that the proposed methods were successfully validated for L. chrysomelas. Fresh semen quality was very high and both extenders were successful in cryopreserving semen. / Muitas espécies de primatas neotropicais são ameaçadas de extinção. As biotecnologias da reprodução podem contribuir consistentemente para a conservação das espécies, estando entre elas os bancos de recurso genético. Entretanto, o sucesso no uso de tais tecnologias depende de avanços no conhecimento da biologia reprodutiva básica de uma certa espécie. Durante esse processo, a avaliação da qualidade espermática é de suprema importância. Nós concentramos nosso trabalho em micos-leões-de-cara-dourada (Leontopithecus chrysomelas), mantidos na Fundação Parque Zoológico de São Paulo. Leontopithecus sp. é um alvo importante para o desenvolvimento de técnicas reprodutivas com o propósito da conservação, sendo que todas as espécies do gênero são classificadas como ameaçadas ou criticamente ameaçadas de extinção pela IUCN. Para a avaliação da qualidade espermática em L. chrysomelas, técnicas como o teste de ligação do espermatozoide, e as colorações não fluorescentes para a avaliação de integridade de acrossomo fast-green/rosa bengala, integridade de membrana plasmática eosina-nigrosina e atividade mitocondrial 3,3 diaminobenzidina foram validados para sêmen fresco. Nós também validamos uma técnica de avalição de integridade de acrossomo corante azul de coomassie, para amostras descongeladas devido a inadequação do método utilizado em sêmen fresco. Algumas espécies de primatas neotropicais apresentam variação na qualidade seminal ao longo do ano. Para avaliar a qualidade do sêmen para essa espécies e para verificar se mico-leão-de-cara-dourada possui essa variação, nós colhemos sêmen nas estações de seca e chuva, durante diferentes períodos da estação reprodutiva no intervalo dos períodos conceptivos e no final do segundo período conceptivo. As medições dos testículos foram realizadas previamente a cada colheita de sêmen, e uma diferença significativa foi encontrada no volume testicular total entre as estações, com maiores volumes encontrados durante a estação de seca (p = 0,0011). As amostras colhidas durante a estação de chuva mostraram uma maior porcentagem de motilidade total (x = 93,85) e integridade de membrana plasmática (x = 95,54) (p = 0,0149 e p = 0,0279, respectivamente), em comparação com a estação seca (motilidade total x = 90,96 e integridade de membrana plasmática x = 92,46). Mesmo com essas diferenças, sêmen de ambas as estações apresentaram boa qualidade. A taxa de sucesso das colheitas com a técnica de vibroestimulação peniana foi de 100%, e todas as amostras eram constituídas de somente uma fração coagulada. Apesar de não obtermos a dissolução completa do coágulo, nós pudemos acessar um grande número de espermatozóides pela adição do meio Biggers-Whitten-Whittingham (BWW) ao coágulo por 30 minutos a 37°C, e realizamos todas as análises propostas. As mesmas amostras usadas nas avaliações do sêmen fresco foram subsequentemente submetidas à criopreservação usando dois diluidores comerciais diferentes BotuBOV® (BB) e Freezing Medium with Glycerol and Gentamicin Test Yolk Buffer® (TYB). As amostras descongeladas foram analisadas com os mesmos métodos previamente validados e também foram avaliadas para a suscetibilidade ao estresse oxidativo pela quantificação de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Para todos os parâmetros seminais avaliados, não houveram diferenças significativas entre BB e TYB, exceto que o BB apresentou porcentagem de acrossomos íntegros (p = 0.0101) e concentração de TBARS (p = 0.0005) maiores. Apesar dessas diferenças, as amostras descongeladas de ambos diluidores mostraram resultados similares no ensaio de ligação do espermatozoide à membrana perivitelínica do ovo de galinha. Do nosso trabalho, podemos observar que os métodos propostos foram validados com sucesso para L. chrysomelas. A qualidade do sêmen fresco foi muito alta e ambos diluidores obtiveram sucesso na criopreservação do sêmen.

L’emtricitabine est une molécule centrale dans la stratégie de lutte contre l’infection à VIH. En effet, elle est recommandée en première intention pour le traitement de l’infection chez l’adulte, ainsi que pour la prévention de la transmission de l’infection. Bien que l’emtricitabine soit une molécule clé, elle reste jusqu’à présent peu étudiée. Il est donc primordial d’analyser et de caractériser la pharmacocinétique de l’emtricitabine dans les différentes populations susceptibles d’être exposées à cette molécule. Une approche de population a été utilisée pour réaliser les analyses pharmacocinétiques, nous permettant de décrire la pharmacocinétique avec peu de prélèvements par individu (contraintes éthiques, difficulté de recueil des prélèvements…) et nous permettant d’expliquer la variabilité observée. L’étude rapportant la pharmacocinétique de l’emtricitabine chez l’adulte a mis en évidence une modification du profil cinétique selon l’état de la fonction rénale. Le modèle développé nous a permis d’évaluer les recommandations posologiques actuelles. Afin d’optimiser l’efficacité, la simulation de schémas thérapeutiques alternatifs chez les patients avec une insuffisance rénale modérée a été réalisée. Dans le cadre de la prévention de la transmission mère-enfant, l’étude décrivant la pharmacocinétique de l’emtricitabine chez les femmes enceintes a mis en évidence une modification de la pharmacocinétique au cours de la période gestationnelle. Toutefois, il ne semblait pas nécessaire d’adapter la posologie au cours de la grossesse. La dernière étude a permis d’étudier la pharmacocinétique de l’emtricitabine dans le tractus génital masculin. L’étude de la pénétration dans le compartiment génital est d’un intérêt capital pour le traitement mais aussi pour la prévention de la transmission de l’infection à VIH dans le cadre de la prophylaxie pré-exposition. Notre étude a rapporté une distribution importante de l’emtricitabine dans le tractus génital, avec des concentrations séminales supérieures aux concentrations plasmatiques. / Emtricitabine is a key antiretroviral drug in the strategy to fight against HIV infection. Indeed, emtricitabine is recommended in first-line treatment for HIV infection in adults, as well as for the prevention of HIV transmission. Although emtricitabine is a key molecule, it remains poorly studied until now. It is therefore essential to analyze and characterize the pharmacokinetics of emtricitabine in the different populations that may be exposed to this drug. A population approach was used to perform pharmacokinetic analyses, allowing us to describe the pharmacokinetics with few samples per individual (ethical constraints, difficulty of samples collection...) and allowing us to explain the observed variability. The study reporting emtricitabine pharmacokinetics in adults highlighted a change in emtricitabine kinetic profile depending on the state of renal function. The developed model allowed us to evaluate the current dosing recommendations. To optimize efficiency, simulations of alternative regimens in patients with moderate renal impairment were performed. As part of the prevention of mother to child transmission, the study describing emtricitabine pharmacokinetics in pregnant women showed a change in pharmacokinetics during the gestational period. However, it did not seem necessary to adjust the dosage during pregnancy. The latest work focused on emtricitabine pharmacokinetics in the male genital tract. Studying the penetration in the genital tract is of major interest for treatment but also for prevention of HIV transmission in the context of pre-exposure prophylaxis. Our study reported a significant distribution of emtricitabine in the genital compartment, with concentrations in seminal plasma higher than concentrations in blood plasma.

Após a inseminação artificial, as fêmeas apresentam reação inflamatória transitória e fisiológica, que pode resultar em alterações na vascularização uterina. A ultrassonografia Doppler colorido é uma técnica não invasiva, que vem sendo utilizada para estudar a hemodinâmica do trato reprodutivo de bovinos. Os objetivos deste trabalho foram verificar a resposta inflamatória uterina por ultrassonografia Doppler colorido e a taxa de fertilidade em bovinos após inseminação artificial (IA) com sêmen avaliado por sondas fluorescentes. Para isso foram delineados dois experimentos. O experimento 1 foi realizado para estudar a hemodinâmica uterina por ultrassonografia Doppler colorido em bovinos após a IA. Foram utilizadas 18 vacas da raça Nelore, submetidas a um protocolo para a inseminação artificial em tempo fixo (IATF) e divididas em dois grupos: Grupo não inseminado (controle, GC, n=9) e grupo submetido à inseminação artificial (GIA, n=9). Avaliações por ultrassonografia foram realizadas em cinco momentos em modo espectral (30 horas antes da IA, 4, 24, 48 e 168 horas após a IA) para avaliar o índice de resistência (RI) da artéria uterina e em quatro momentos em modo color Doppler (4, 24, 48 e 168 horas após a IA) para avaliar a vascularização dos cornos uterinos. O diagnóstico de gestação foi feito após 30 dias da IA. No experimento 2 objetivou-se verificar se o percentual de espermatozóides com integridade das membranas plasmática e acrossomal e função mitocondrial (PIAIC) avaliadas por sondas fluorescentes influencia a fertilidade e estudar a hemodinâmica uterina após a deposição do sêmen com diferentes percentuais de espermatozóides PIAIC. Foram utilizadas 182 vacas paridas da raça Nelore, submetidas a um protocolo para IATF e divididas em três grupos de acordo com a qualidade do sêmen: Bom (B) 44,5%, Médio (M) 23% e Regular (R) 8,5% de espermatozóides PIAIC/palheta. Uma amostra de 30% das fêmeas (54, sendo 18 de cada grupo) foram submetidas a avaliações com ultrassonografia Doppler colorido 30 horas antes da IA, 4 e 24 horas após a IA. Foram considerados os RI das artérias uterinas direita (AD) e esquerda (AE) e vascularização subjetiva dos cornos uterinos direito (CD) e esquerdo (CE). Posteriormente, foram separados levando em consideração o lado do ovário contendo o folículo dominante para comparar RI das artérias ipsi (AI) e contralateral (AC) e vascularização subjetiva dos cornos uterinos ipsi (CI) e contralateral (CC). O diagnóstico de gestação foi realizado 30 dias após a IA. Para a análise estatística foi utilizado o programa SAS versão 9.2 (SAS 2010). As variáveis foram analisadas pelo PROC MIXED, utilizando modelo linear misto para medidas repetidas no tempo. Foram considerados os efeitos fixos de grupo, tempo e interação grupo x tempo. Os dados obtidos foram submetidos à análise de variância e ao teste de Duncan, pelo PROC GLM. A análise de Qui-Quadrado foi utilizada para determinar a taxa de prenhez, de acordo com a qualidade do sêmen pelo PROC FREQ. O nível de significância considerado foi de 5%. No experimento 1 não foram observadas diferenças dos parâmetros avaliados por ultrassom Doppler entre GIA e GC, mas foram notados efeitos do tempo para RI, sendo mais baixos 4 horas após a IA. Quando os dados foram avaliados de acordo com o lado do folículo dominante foi observado que 4 e 24 horas após a IA, RI da AC do GIA foi mais baixo do que o GC. No experimento 2 não houve diferença entre os animais inseminados com sêmen B, M ou R quanto a hemodinâmica uterina, mas houve efeito do tempo, sendo que 4 horas após a IA verificou-se menor valor de RI e maior fluxo sanguíneo. A taxa de prenhez dos animais inseminados com o sêmen B (64,7%) foi maior quando comparada ao sêmen R (36,2%), sendo que ambos não diferiram do sêmen M (50,0%). Pode-se concluir que não é possível detectar por ultrassonografia Doppler alterações na hemodinâmica uterina devido à IA em fêmeas bovinas. A deposição de sêmen com diferentes qualidades não altera a hemodinâmica uterina de forma detectável por ultrassonografia Doppler em bovinos. Por outro lado, é possível detectar por ultrassonografia Doppler mudanças na perfusão sanguínea do útero em relação ao tempo da IA, o que pode ser devido a alterações hormonais que ocorrem durante o ciclo estral. Por fim, a IA com sêmen contendo menor percentual de espermatozoides PIAIC causa redução na taxa de fertilidade em bovinos. / After insemination, females have physiological and transient inflammatory reaction, which can result in changes in the uterine vasculature. The color Doppler ultrasound is a noninvasive technique that has been used to study the hemodynamics of cattle reproductive tract.The purposes of this work were to verify uterine inflammatory response by color Doppler ultrasound and fertility rate in cattle after artificial insemination (IA) with semen evaluated by fluorescent probes. For this, two experiments were delineated. The first experiment was conducted to study the uterine hemodynamic by color Doppler ultrasound in cattle after AI. Were used 18 Nellore cows that were subjected to a protocol for fixed timed artificial insemination (IATF). The animals were divided in two groups: Not inseminated group (control, GC, n=9) and inseminated group (GIA, n=9). Ultrasonografic evaluation were done in five moments on spectral mode (30 hours before AI, 4, 24, 48 e 168 hours after IA) to evaluate the resistence index (RI) of uterine artery and in four moments in color Doppler mode to evaluate the uterine horns vascularization. The pregnancy diagnostic was done 30 days after IA. In the second experiment the objective was to evaluate whether the percentage of sperm with plasma membrane integrity and acrossomal and mitochondrial function (PIAIC) assessed by fluorescent probes influences fertility and study the uterine hemodynamic after the deposition of semen with different percentages of PIAIC sperm. Were used 182 caved Nellore cows submitted to a protocol for IATF and divided into three groups according to semen quality: Good (B) 44.5%, Medium (M) 23% and Regular (R) 8,5% of PIAIC sperm/blade. A sample of 30% of female (54, 18 in each group) were submitted to evaluation by color Doppler ultrasound 30 hours before IA, 4 and 24 hours after IA. Were considered RI of right (AD) and left (AE) uterine arteries and subjective vascularization of right (CD) and left (CE) uterine horns. Later, they were separated taking into account the side of the ovary containing the dominant follicle to compare RI of ipsi (AI) and contralateral (AC) arteries and subjective vascularization of ipsi (CI) and contralateral (CC) uterine horns. The pregnancy diagnostic was done 30 days after IA. Statistical analysis was performed using the program SAS version 9.2 (SAS 2010). The variables were analyzed by PROC MIXED, using mixed linear model for repeated measures in time. We considered effects of group, time and group x time interaction. The data obtained were submitted to ANOVA and Duncan test, using PROC GLM. The chi-square analysis was used to determine pregnancy rate, according to the quality of semen by PROC FREQ. the significance level was 5%. In experiment 1 there were no differences of the parameters evaluated by Doppler ultrasound between GIA and GC, but time effects were noted for RI, it was lower four hours after IA. When the data were evaluated according to the side of the dominant follicle was observed that 4 and 24 hours after IA, RI of AC of GIA was lower when it was compared with GC. In experiment 2 there was no difference between animals inseminated with semen B, M or R about uterine hemodynamics, but there were effects of time, so that 4 hours after IA showed lower value of RI and increased blood flow. The pregnancy rate of animals inseminated with semen B (64.7%) was higher when compared with semen R (36.2%), both of them did not differ of semen M (50.0%). It can be concluded that is not possible to detect uterine hemodynamic changes by Doppler ultrasound due to IA in cattle. The deposition of semen with different qualities does not change the uterine hemodynamics enough to be detectable by Doppler ultrasonography in cattle. On the other hand, is possible to detect changes in blood perfusion of the uterus in relation to the time of IA by Doppler ultrasound, which may be due to hormonal changes that occur during the estrous cycle. Finally, IA with semen containing a lower percentage of PIAIC sperm causes a reduction in fertility rate in cattle.

Este trabajo se ha centrado en el estudio de diferentes factores que afectan a la capacidad fecundante del semen congelado, como la velocidad de descongelación y el sistema antioxidante del semen porcino. También se ha estudiado la capacidad predictiva de la fertilidad in vivo que tienen las diferentes técnicas de análisis seminal tanto para el semen congelado como en condiciones de campo para el semen refrigerado. Se pudo determinar que la velocidad de descongelación más rápida tiene un efecto positivo sobre la funcionalidad espermática de las muestras evaluada mediante un sistema de FIV. Igualmente se concluyó también que el sistema de FIV parece ser la mejor herramienta disponible para evaluar la calidad del semen congelado-descongelado. Se evidenció que el proceso de crioconservación del semen supuso una pérdida siginificativa en el contenido de GSH intracelular. Finalmente, se demostró que el análisis seminal sólo puede identificar eyaculados con bajo potencial fértil. / Boar frozen-thawed semen is still a valuable tool as a complement to artificial insemination with fresh semen in some conditions. The objectives were firstly, the design of better freezing methods in order to obtain acceptable semen quality (freezing-thawing procedures) and secondly, to address the question of whether differences in farrowing rate and litter size after the use of different ejaculates could be predicted using the standard semen parameters under commercial conditions.We can determine that the IVF fertilization system seems to be a good tool to evaluate the quality of frozen-thawed boar semen previous to its commercial way. In other way, we found that there was a loss in GSH content after cryopreservation of boar semen and the addition of GSH to the thawing extender resulted in a significant increase in sperm fertilizing ability. Finally, semen analysis, under commercial conditions, allows to identify ejaculates with very low fertility potential. Therefore, it is unlikely to detect fertility differences associated with seminal parameters.

Artificial insemination using cooled, transported semen has become a popular practice in the equine industry. However, equine sperm are assumed to show a decline in their fertilizing ability after 24 to 48 hours of cooled storage. Two measures that are commonly used to estimate the fertility of an ejaculate are sperm motility and sperm membrane integrity (SMI). Recently, it has been suggested that SMI may have a better correlation with fertility of an inseminate than sperm motility. The effect of cooled-storage on sperm quality over an extended time period was evaluated to illustrate changes in sperm characteristics that might be related to an ejaculate’s fertility. Semen was stored at 4°C in INRA 96 extender containing 10% seminal plasma for a period of 10 days. Data were collected daily on sperm motion characteristics, SMI, mitochondrial membrane potential, and DNA quality. To measure daily changes in SMI in stallion sperm, two fluorescent vital-staining protocols used in flow cytometric analysis were compared – a combination of SNARF-1, Yo-Pro-1, and Ethidium Homodimer 1 (SYE) and a combination of lectin from Pisum sativum and propidium iodide (PSA/PI). We hypothesized that the SYE protocol adapted for use with stallion sperm could detect more subtle, and perhaps earlier, damage to the sperm plasma membrane than the PSA/PI protocol. A combination of SYBR 14, propidium iodide, and JC-1 (SYPIJC) was used to measure mitochondrial membrane potential, as well as SMI. A computer-assisted sperm motion analysis (CASA) instrument was used to evaluate sperm motion characteristics; the sperm chromatin structure assay (SCSA) was used to measure the degree of DNA fragmentation. In this study, with the exception of sperm motility, the measures of sperm quality retained values consistent with “viability” after 10 days of cooled-storage. This suggests that the fertility of some stallions may last considerably longer than previously assumed, which could ultimately alter the time-table used for artificial insemination using cooled, transported semen.

O objetivo do experimento foi avaliar o efeito da suplementação de touros adultos com sabões cálcicos de ácidos graxos poli-insaturados (PUFA) sobre as características qualitativas do sêmen pré e pós-descogelação. Foram utilizados vinte touros com idades entre 4 e 10 anos, das raças Angus, Braford, Brangus e Hereford distribuídos aleatoriamente em dois grupos com dez touros cada um. Os tratamentos avaliados foram: sabões cálcicos ou suplementação energética. Os touros foram mantidos em piquetes individuais e alimentados durante 77 dias com dietas isoenergéticas elaboradas com: forragem verde, concentrado comercial, sal mineral e sabões cálcicos ou suplemento energético. Os touros recebendo o tratamento com sabões cálcicos (SF) receberam 200 g/dia de Megalac-E® e os do tratamento com suplemento energético (SE) receberam 750 g/dia de raspa de mandioca (Manihot esculenta, Crantz). A coleta do sêmen foi realizada a cada 15 dias utilizando vagina artificial e as amostras de sêmen avaliadas quanto ao volume, concentração, motilidade, morfologia, avaliação da integridade do acrossoma e diferenciação de espermatozóides vivos de mortos por meio de coloração tripa azul/giemsa, avaliação da integridade da membrana da cauda por meio de teste hipoosmóstico (HO) e longevidade dos espermatozóides por meio de teste de termorresistência (TTR). Também foram coletadas amostras de sangue para avaliação das concentrações de testosterona. O tipo de suplemento energético não afetou o volume e a concentração de espermatozóides, nem a concentração de testosterona no sangue. O sêmen de touros suplementados com sabões cálcicos de PUFA apresentou valores superiores quanto à motilidade espermática (83.3% vs. 75.3%), percentagem de espermatozóides vivos (94,8% vs. 91,8%) e número de espermatozóides com acrossoma íntegro (98,0% vs. 96,6%). Interações significativas foram encontradas entre tratamento e coleta para percentagens de espermatozóides normais (p = 0.0344) e percentagens de espermatozóides positivos ao HO (p = 0.0168). Não foi encontrada diferença significativa entre os grupos para percentagens de motilidade dos espermatozóides pós-congelação, nem motilidade após o teste de termorresistência (TTR) aos 30 minutos e aos 60 minutos. Os resultados do HO do grupo recebendo suplemento funcional não foi diferente do grupo com suplemento energético. Durante o período de suplementação o grupo com suplemento funcional teve percentagens maiores de espermatozóides vivos (51,5% vs. 42,2%) e com acrossoma íntegro (48,0% vs. 39,2%) quando comparado com o grupo que recebeu suplemento energético. A suplementação com sabões cálcicos de PUFA em touros pode influenciar positivamente nas características qualitativas do ejaculado conferindo maior resistência aos espermatozóides submetidos a processos de criopreservação. / The aim of this experiment was evaluate of the effect of the supplementation of adult bulls with calcium soaps of polyunsaturated fatty acids (PUFA) on the qualitative characteristics of the semen subjected to cryopreservation and thawing. Twenty adult bulls Angus, Hereford, Brangus and Braford were randomly assigned into two groups; they were subjected to two types of treatment: (SF) calcium soap; (SE) and energy source. The bulls were kept in individual pens and, during 77 days, they were fed on isoenergetic diets prepared with green grass, commercial concentrate, mineral salt, and calcium soaps of PUFA or energy supplement. The treatment supplemented with calcium soaps of PUFA received 200 g/d of Megalac-E®; and the treatment supplemented with other energy source received 750 g/d from cassava meal (Manihot esculenta, Crantz). During the period of the experiment, five collections of semen were performed with artificial vagina; the semen samples were evaluated considering the following variables: seminal volume, sperm concentration, sperm motility, morphology, evaluation of acrosome intact and differentiation of live and dead spermatozoa by staining tripan blue/giemsa, evaluation of the integrity membrane sperm through hypoosmotic swelling test (HO) and evaluation of longevity of sperm using the heat resistance tests (TTR). Two blood samplings were performed for assessing the concentration of blood testosterone. The results regarding the volume, sperm concentration and blood testosterone concentrations did not differ significantly between treatments during the experimental period. The group supplemented with calcium soaps of PUFA presented improvements in the percentages of sperm motility (83.3% vs. 75.3%). The percentages of live sperm (94,8% vs. 91,8%) and those with intact acrosome (98,0% vs. 96,6%) were higher compared with the group that received energy supplement. No significant differences were found between treatments in the percentages of the post-freezing motility and the motility of sperm subjected to TTR after 30 minutes and after 60 minutes showed no significant differences between treatments. The results of HO were not different between the groups with functional and energy supplement. During the supplementation period, the group with functional supplement presented higher percentages of live sperm (51,5% vs. 42,2%) and sperms with intact acrosome (48,0% vs. 39,2%) when compared with the group that received energy supplement. Supplementation with calcium soaps of PUFA can provide better features and higher resistance to sperm when submitted to the process of cryopreservation and thawing.

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Desempenho, consumo de matéria seca, parâmetros seminais e proteômica do plasma seminal e da membrana espermática de carneiros Morada Nova alimentados com dieta à base de castanha de caju. 2013. 65 f. : Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências Agrárias, Departamento de Zootecnia, Fortaleza-CE, 2013 / The cashew nut meal is alternative food for ruminant nutrition which is rich in lipids, proteins and minerals. However, its nutrition influences on male development and reproduction are still unknown. In this context, seminal and sperm protein analysis can show metabolic consequences from cashew nut meal on sheep reproductive efficiency. Therefore, the current dissertation aims evaluate the effects of 13% of cashew nut meal in the ration on the weight gain, food intake, carcass yield, weight of sexual organs, sperm quality and, seminal and sperm membrane proteins of Morada Nova Rams. Twenty rams were divided in two groups: cashew nut and control, which received 13% or 0% of cashew nut meal in the diet, respectively. During ninety days, the animals were kept in individual boxes and evaluated for ration consumption and weight gain. The sperm collections by eletroejaculation were made by weekly and, the volume, sperm concentration and motility were analyzed. After ninety days, the seminal and sperm membrane proteins were analyzed by two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis. The gels were digitalized, and their images were evaluated by computer software. At the end of the experiment, the rams were slaughtered and, the weight gain, carcass yield and weight of sexual organs were measured. There was not effect of cashew nut meal addition in the diet on the weight gain, carcass yield and weight of sexual organs. But, after sixty days, there was a reduction on food intake in the cashew nut group (P < 0,05). The sperm quality was not influenced by the diet. We observed an effect of cashew nut diet on the expression of seminal and sperm proteins. Seven spots from seminal plasma were expressed differently between cashew nut and control groups (P < 0,05). The spot 2206 (21,82 kDa; pI: 5,04) was negatively correlated with the individual motility score (r = -0,49). Additionally, seven spots from sperm membrane protein also differ between rams from cashew nut and control groups (P < 0,05). In conclusion, the addition of 13% of cashew nut meal in the diet alters the expression of sheep seminal plasma and sperm membrane proteins. / O presente estudo foi conduzido com o objetivo de avaliar os efeitos da inclusão de 13% de farelo de castanha de caju na dieta de carneiros da raça Morada Nova sobre o ganho de peso, consumo de matéria seca, rendimento de carcaça, pesos dos órgãos sexuais, qualidade seminal e proteínas seminais e membranares do espermatozoide. Para tanto, vinte carneiros foram divididos em dois grupos alimentados com dietas contendo 13% (GCA, n=10) ou 0% (GCO, n=10) de farelo de castanha de caju. As dietas foram isoproteicas e isoenergeticas, com uma relação de 50/50 de concentrado/volumoso (feno de Tifton 85) e água e sal mineral à vontade. Durante noventa dias, os animais foram mantidos em baias individuais e avaliados quanto ao consumo de matéria seca e ganho de peso. As coletas seminais por eletroejaculação ocorreram semanalmente com a determinação do volume ejaculado e, concentração, motilidade e morfologia espermática. Após os noventa dias, as proteínas seminais e espermáticas foram analisadas por meio de eletroforese bidimensional em gel de poliacrilamida. Os mapas proteícos foram avaliados por meio do aplicativo PDQuest, version 8.0; Bio Rad, USA. Ao final do experimento, os carneiros foram abatidos e, o peso vivo, rendimento de carcaça e peso dos órgãos sexuais foram mensurados. O consumo de matéria seca total permaneceu sem alterações nos dois grupos experimentais durante os primeiros 60 dias do estudo. Porém, após 60 dias, houve e redução no consumo de matéria seca no grupo alimentado com castanha (P < 0,05). Não houve efeito da inclusão do farelo de castanha sobre o ganho de peso, rendimento de carcaça, desenvolvimento dos órgãos sexuais e parâmetros seminais dos animais. No entanto, a inclusão do farelo de castanha de caju esteve associada à expressão de proteínas seminais e espermáticas. Sete spots proteicos presentes nos mapas de plasma seminal foram expressos diferencialmente entre os grupos castanha e controle (P < 0,05) e um spot proteico (21,8 kDa; pI: 5) correlacionou-se negativamente com o vigor espermático (r = -0,49; P<0,05). Adicionalmente, sete spots proteicos dos géis com proteinas da membrana dos espermatozoides também diferiram entre os carneiros alimentados com e sem farelo de castanha de caju (P < 0,05). Conclui-se, portanto, que a inclusão de 13% de farelo de castanha de caju na dieta altera a expressão de proteínas seminais e espermáticas em ovinos.

O objetivo do experimento foi avaliar o efeito da suplementação de touros adultos com sabões cálcicos de ácidos graxos poli-insaturados (PUFA) sobre as características qualitativas do sêmen pré e pós-descogelação. Foram utilizados vinte touros com idades entre 4 e 10 anos, das raças Angus, Braford, Brangus e Hereford distribuídos aleatoriamente em dois grupos com dez touros cada um. Os tratamentos avaliados foram: sabões cálcicos ou suplementação energética. Os touros foram mantidos em piquetes individuais e alimentados durante 77 dias com dietas isoenergéticas elaboradas com: forragem verde, concentrado comercial, sal mineral e sabões cálcicos ou suplemento energético. Os touros recebendo o tratamento com sabões cálcicos (SF) receberam 200 g/dia de Megalac-E® e os do tratamento com suplemento energético (SE) receberam 750 g/dia de raspa de mandioca (Manihot esculenta, Crantz). A coleta do sêmen foi realizada a cada 15 dias utilizando vagina artificial e as amostras de sêmen avaliadas quanto ao volume, concentração, motilidade, morfologia, avaliação da integridade do acrossoma e diferenciação de espermatozóides vivos de mortos por meio de coloração tripa azul/giemsa, avaliação da integridade da membrana da cauda por meio de teste hipoosmóstico (HO) e longevidade dos espermatozóides por meio de teste de termorresistência (TTR). Também foram coletadas amostras de sangue para avaliação das concentrações de testosterona. O tipo de suplemento energético não afetou o volume e a concentração de espermatozóides, nem a concentração de testosterona no sangue. O sêmen de touros suplementados com sabões cálcicos de PUFA apresentou valores superiores quanto à motilidade espermática (83.3% vs. 75.3%), percentagem de espermatozóides vivos (94,8% vs. 91,8%) e número de espermatozóides com acrossoma íntegro (98,0% vs. 96,6%). Interações significativas foram encontradas entre tratamento e coleta para percentagens de espermatozóides normais (p = 0.0344) e percentagens de espermatozóides positivos ao HO (p = 0.0168). Não foi encontrada diferença significativa entre os grupos para percentagens de motilidade dos espermatozóides pós-congelação, nem motilidade após o teste de termorresistência (TTR) aos 30 minutos e aos 60 minutos. Os resultados do HO do grupo recebendo suplemento funcional não foi diferente do grupo com suplemento energético. Durante o período de suplementação o grupo com suplemento funcional teve percentagens maiores de espermatozóides vivos (51,5% vs. 42,2%) e com acrossoma íntegro (48,0% vs. 39,2%) quando comparado com o grupo que recebeu suplemento energético. A suplementação com sabões cálcicos de PUFA em touros pode influenciar positivamente nas características qualitativas do ejaculado conferindo maior resistência aos espermatozóides submetidos a processos de criopreservação. / The aim of this experiment was evaluate of the effect of the supplementation of adult bulls with calcium soaps of polyunsaturated fatty acids (PUFA) on the qualitative characteristics of the semen subjected to cryopreservation and thawing. Twenty adult bulls Angus, Hereford, Brangus and Braford were randomly assigned into two groups; they were subjected to two types of treatment: (SF) calcium soap; (SE) and energy source. The bulls were kept in individual pens and, during 77 days, they were fed on isoenergetic diets prepared with green grass, commercial concentrate, mineral salt, and calcium soaps of PUFA or energy supplement. The treatment supplemented with calcium soaps of PUFA received 200 g/d of Megalac-E®; and the treatment supplemented with other energy source received 750 g/d from cassava meal (Manihot esculenta, Crantz). During the period of the experiment, five collections of semen were performed with artificial vagina; the semen samples were evaluated considering the following variables: seminal volume, sperm concentration, sperm motility, morphology, evaluation of acrosome intact and differentiation of live and dead spermatozoa by staining tripan blue/giemsa, evaluation of the integrity membrane sperm through hypoosmotic swelling test (HO) and evaluation of longevity of sperm using the heat resistance tests (TTR). Two blood samplings were performed for assessing the concentration of blood testosterone. The results regarding the volume, sperm concentration and blood testosterone concentrations did not differ significantly between treatments during the experimental period. The group supplemented with calcium soaps of PUFA presented improvements in the percentages of sperm motility (83.3% vs. 75.3%). The percentages of live sperm (94,8% vs. 91,8%) and those with intact acrosome (98,0% vs. 96,6%) were higher compared with the group that received energy supplement. No significant differences were found between treatments in the percentages of the post-freezing motility and the motility of sperm subjected to TTR after 30 minutes and after 60 minutes showed no significant differences between treatments. The results of HO were not different between the groups with functional and energy supplement. During the supplementation period, the group with functional supplement presented higher percentages of live sperm (51,5% vs. 42,2%) and sperms with intact acrosome (48,0% vs. 39,2%) when compared with the group that received energy supplement. Supplementation with calcium soaps of PUFA can provide better features and higher resistance to sperm when submitted to the process of cryopreservation and thawing.

O objetivo do experimento foi avaliar o efeito da suplementação de touros adultos com sabões cálcicos de ácidos graxos poli-insaturados (PUFA) sobre as características qualitativas do sêmen pré e pós-descogelação. Foram utilizados vinte touros com idades entre 4 e 10 anos, das raças Angus, Braford, Brangus e Hereford distribuídos aleatoriamente em dois grupos com dez touros cada um. Os tratamentos avaliados foram: sabões cálcicos ou suplementação energética. Os touros foram mantidos em piquetes individuais e alimentados durante 77 dias com dietas isoenergéticas elaboradas com: forragem verde, concentrado comercial, sal mineral e sabões cálcicos ou suplemento energético. Os touros recebendo o tratamento com sabões cálcicos (SF) receberam 200 g/dia de Megalac-E® e os do tratamento com suplemento energético (SE) receberam 750 g/dia de raspa de mandioca (Manihot esculenta, Crantz). A coleta do sêmen foi realizada a cada 15 dias utilizando vagina artificial e as amostras de sêmen avaliadas quanto ao volume, concentração, motilidade, morfologia, avaliação da integridade do acrossoma e diferenciação de espermatozóides vivos de mortos por meio de coloração tripa azul/giemsa, avaliação da integridade da membrana da cauda por meio de teste hipoosmóstico (HO) e longevidade dos espermatozóides por meio de teste de termorresistência (TTR). Também foram coletadas amostras de sangue para avaliação das concentrações de testosterona. O tipo de suplemento energético não afetou o volume e a concentração de espermatozóides, nem a concentração de testosterona no sangue. O sêmen de touros suplementados com sabões cálcicos de PUFA apresentou valores superiores quanto à motilidade espermática (83.3% vs. 75.3%), percentagem de espermatozóides vivos (94,8% vs. 91,8%) e número de espermatozóides com acrossoma íntegro (98,0% vs. 96,6%). Interações significativas foram encontradas entre tratamento e coleta para percentagens de espermatozóides normais (p = 0.0344) e percentagens de espermatozóides positivos ao HO (p = 0.0168). Não foi encontrada diferença significativa entre os grupos para percentagens de motilidade dos espermatozóides pós-congelação, nem motilidade após o teste de termorresistência (TTR) aos 30 minutos e aos 60 minutos. Os resultados do HO do grupo recebendo suplemento funcional não foi diferente do grupo com suplemento energético. Durante o período de suplementação o grupo com suplemento funcional teve percentagens maiores de espermatozóides vivos (51,5% vs. 42,2%) e com acrossoma íntegro (48,0% vs. 39,2%) quando comparado com o grupo que recebeu suplemento energético. A suplementação com sabões cálcicos de PUFA em touros pode influenciar positivamente nas características qualitativas do ejaculado conferindo maior resistência aos espermatozóides submetidos a processos de criopreservação. / The aim of this experiment was evaluate of the effect of the supplementation of adult bulls with calcium soaps of polyunsaturated fatty acids (PUFA) on the qualitative characteristics of the semen subjected to cryopreservation and thawing. Twenty adult bulls Angus, Hereford, Brangus and Braford were randomly assigned into two groups; they were subjected to two types of treatment: (SF) calcium soap; (SE) and energy source. The bulls were kept in individual pens and, during 77 days, they were fed on isoenergetic diets prepared with green grass, commercial concentrate, mineral salt, and calcium soaps of PUFA or energy supplement. The treatment supplemented with calcium soaps of PUFA received 200 g/d of Megalac-E®; and the treatment supplemented with other energy source received 750 g/d from cassava meal (Manihot esculenta, Crantz). During the period of the experiment, five collections of semen were performed with artificial vagina; the semen samples were evaluated considering the following variables: seminal volume, sperm concentration, sperm motility, morphology, evaluation of acrosome intact and differentiation of live and dead spermatozoa by staining tripan blue/giemsa, evaluation of the integrity membrane sperm through hypoosmotic swelling test (HO) and evaluation of longevity of sperm using the heat resistance tests (TTR). Two blood samplings were performed for assessing the concentration of blood testosterone. The results regarding the volume, sperm concentration and blood testosterone concentrations did not differ significantly between treatments during the experimental period. The group supplemented with calcium soaps of PUFA presented improvements in the percentages of sperm motility (83.3% vs. 75.3%). The percentages of live sperm (94,8% vs. 91,8%) and those with intact acrosome (98,0% vs. 96,6%) were higher compared with the group that received energy supplement. No significant differences were found between treatments in the percentages of the post-freezing motility and the motility of sperm subjected to TTR after 30 minutes and after 60 minutes showed no significant differences between treatments. The results of HO were not different between the groups with functional and energy supplement. During the supplementation period, the group with functional supplement presented higher percentages of live sperm (51,5% vs. 42,2%) and sperms with intact acrosome (48,0% vs. 39,2%) when compared with the group that received energy supplement. Supplementation with calcium soaps of PUFA can provide better features and higher resistance to sperm when submitted to the process of cryopreservation and thawing.