Introdução: Em torno de 15% dos casais apresentam o diagnóstico de infertilidade, sendo que 50% se devem a fatores masculinos. Diversos testes de função espermática são propostos para a avaliação da fertilidade, mas o espermograma é o principal exame para o diagnóstico de infertilidade masculina. O valor prognóstico das características seminais como concentração, morfologia e motilidade como marcadores de infertilidade masculina é confundido. A avaliação desses e a classificação quanto à normalidade dos mesmos permanece sendo tema de discussão frequente. Objetivos: Comparar as diferentes classificações de parâmetros seminais (OMS 1999, OMS 2010 e TMSC) e avaliar as características de pacientes em terapia de reprodução humana assistida que se relacionam com esses parâmetros. Métodos: Foi realizado estudo longitudinal, retrospectivo, baseado em revisão de banco de dados para avaliar as características e parâmetros seminais e comparar as mesmas conforme as classificações da OMS de 1999, OMS de 2010 e TMSC de 477 homens submetidos a investigação de infertilidade ou tratamentos de reprodução assistida na clínica Generar – Reprodução Humana, entre 2011 e 2015. Resultados: 401 pacientes tiveram alguma alteração pela OMS 1999, 223 pela OMS 2010 e 200 pela TMSC. O critério que mais alterou a condição de uma amostra seminal de anormal em 1999 para normal em 2010 foi a morfologia. Conclusão: Os parâmetros se tornaram menos rígidos de 1999 para 2010 alterando significativamente a proporção de indivíduos que deixaram de ser classificados como inférteis. A classificação baseada no TMSC pode ser útil na indicação de alguns tratamentos, mas não pode definir um indivíduo como fértil ou infértil em função de não levar em consideração a morfologia espermática. / Background: Approximately 15% of couples presenting the diagnosis of infertility, and 50% of cases are due to male factors. Several sperm function testing is proposed for the evaluation of male fertility, but sperm is the first test for the diagnosis of male infertility causes. The prognostic value of the seminal characteristics as concentration, morphology and motility as male infertility markers is often confused. Evaluation of semen parameters and classification for normality remains frequent topic of discussion. Objectives: Compare the different classifications of seminal parameters (OMS 1999, WHO 2010 and TMSC) and evaluate the characteristics of patients treated in assisted reproduction therapy relating to these parameters. Methods: Retrospective study based on chart review evaluated 477 semen samples from men undergoing investigation or infertility treatments in assisted reproduction between 2011 and 2015. Results: 401 patients were considered abnormal by the WHO 1999, 223 by WHO 2010 and 200 for TMSC. The criteria that most changed the classification was sperm morphology. Conclusion: The parameters have become less rigid 1999 to 2010 significantly changing the proportion of individuals who are no longer classified as infertile. The classification based on TMSC can’t define an individual as fertile or infertile regardless due to not take into account the sperm morphology, but may be helpful when it comes to the indication of the intrauterine insemination.

No presente estudo três concentrações de N-acetil-l-cisteina (NAC) foram avaliadas no diluente equino resfriado a 5°C através da motilidade do sêmen, integridade da cromatina espermática e choque hiposmótico sobre o ejaculado em diluente Kenney na proporção 1:2 com 50% de plasma seminal. O ejaculado de nove garanhões diluído na proporção 1:2 em meio Kenney foi dividido em 4 partes iguais e suplementado com 5,0, 2,5 e 0,5mM de NAC e um grupo não suplementado (0,0mM). As avaliações foram realizadas a fresco (0h), 24 e 48h de resfriamento. A análise de motilidade nos dois experimentos foi avaliada até às 24 horas. No experimento 2, a adição de 0,5 e 5,0mM de NAC resultou em áreas de dispersão da cromatina espermática similares (59,7 e 55,5μM2, respectivamente). Entretanto, a área de dispersão da cromatina no grupo não suplementado (65,3μM2) e com 2,5mM de NAC (52,8μM2) apresentou diferença (P<0,05). O percentual de células com membrana plasmática funcional foi similar entre o grupo não suplementado e o grupo suplementado com 0,5mM de NAC (39,7 e 39,8%, respectivamente), porém superior a NAC 2,5mM (34,5%) e 5,0mM (34,2%). A motilidade progressiva dos ejaculados suplementados com NAC foram similares entre si e somente o grupo NAC 0,5mM (35,2%) apresentou similaridade de células móveis com o grupo não suplementado (36,2%). Os maiores danos à cromatina espermática no sêmen equino diluído com 50% de plasma seminal mantido resfriado a 5°C ocorrem a partir de 24h de resfriamento. A adição de 2,5 e 5,0mM de NAC comprometem a motilidade e a funcionalidade de membrana espermática equina, mas não causa efeito deletério sobre a integridade do DNA. / In this study, three concentrations of N-acetyl- l-cysteine (NAC) were evaluated by sperm motility, membrane functionality (hypo-osmotic test), and sperm chromatin integrity. the hypo-osmotic test showed only 32.4% (P <0.05) of the cells having a functional membrane 12h into the cooling process, while the fresh semen (0h) was 53.5%. The percentage of motile cells decreased within 12h of cooling from 38.9 to 19.7%, with no difference between 12 and 24h of cooling. The tests of sperm chromatin dispersion and hypo-osmotic shock revealed similarities between the periods of cooling at 24 to 48h. In Experiment 2, the nine stallion ejaculates were divided into 4 equal parts, diluted in half with Kenney milk powder supplemented with 5.0, 2.5 and 0.5mM NAC and a group not supplemented (0.0mM). The evaluations were made fresh (0h), 24 and 48h after cooling. The analysis of motility was assessed in all experiments up to 24 hours. In experiment 2, the addition of 0.5 to 5.0mM NAC resulted in areas of similar sperm chromatin dispersion (59.7 and 55.5μM2, respectively). However, the area of the chromatin dispersion between non-supplemented group=0.0mM (65.3μM2) and 2.5mM NAC (52.8μM2) differ (P <0.05). The percentage of cells with plasma membrane function were similar between the supplemented with 0.5mM NAC and non-supplemented (0.0mM) groups with (39.7 and 39.8%, respectively), but higher than 2.5mM (34.5%) and 5.0mM (34.2%). Progressive motility of ejaculates supplemented with NAC were similar, but only the group with 0.5mM NAC which resulted in 35.2% of mobile cells showed similarities with the non-supplemented group (36.2%). The greatest damage to sperm chromatin in equine semen diluted with 50% seminal plasma kept cooled to 5°C was due to 24h cooling. The addition of 2.5 and 5.0mM NAC inhibits the mobility and functionality of the equine sperm membrane, but does not cause a deleterious effect on the integrity of the DNA.

Em todas as espécies de mamíferos estudadas, o gene PLCζ é responsável pelo aumento de cálcio no momento da fecundação do oócito. Recentemente, o gene WBP2NL, também esta sendo estudado por sua possível capacidade de iniciar a ativação de oócitos. O gene TNF-α é uma citocina pró-inflamatória que pode ser encontrada no plasma seminal, mas seu efeito na viabilidade espermática ainda não está claro. O objetivo desse trabalho foi investigar a expressão dos genes PLCζ, WPB2NL e TNF-α no espermatozoide e suas relações com a qualidade e fertilidade em equinos. Foram utilizados ejaculados de 40 garanhões da raça Crioula, de criatórios localizados próximos a Porto Alegre. A concentração espermática foi avaliada em câmara de Neubauer. As demais análises microscópicas foram realizadas através do Computer Assisted Sperm Analysis AndroVision. A análise da integridade física da membrana foi realizada utilizando-se sondas fluorescentes A integridade funcional da membrana plasmática foi avaliada por meio do teste hiposmótico. Para análise estatística foi utilizada correlação de Pearson, com nível de significância de P<0,05. Foi encontrada correlação positiva do gene PCLζ com integridade funcional da membrana plasmática (0,449), integridade física da membrana plasmática (0,438), taxa de prenhez (0,454), motilidade total (0,486), motilidade progressiva (0,413); correlação negativa com motilidade lenta (-0,427) e espermatozoides imóveis (-0,405). Não foram encontradas correlações dos genes WBP2NL e TNF-α. Concluí-se que a expressão do gene PCLζ no Espermatozoide equino pode ser utilizada com um marcador para a qualidade seminal e fertilidade do garanhão. / In all species of mammals studied, the PLCζ gene is a factor of calcium increase at the time of oocyte fertilization. Recently, the WBP2NL gene is also being studied for its potential ability to initiate oocyte activation during fertilization. The TNF-α is a pro-inflammatory cytokine found in seminal plasma but it effect on motility and viability sperm still unclear. The aim of this study was to verify the expression of PLCζ, WPB2NL and TNF-α genes in spermatozoa and their relationship with quality and fertility in horses. We used the ejaculates of 40 Crioulo stallions, were used from horse farms located near Porto Alegre. After semen collection, the ejaculate was diluted in a commercially available extender. Microscopic analysis of total and progressive motility was performed using a computer assisted sperm analysis system AndroVision. Membrane physical integrity was assessed by fluorescent probes and membrane functionality was analyzed by the hypo-osmotic test (HOST) Statistical analysis was performed using the Pearson correlation, with a significance level of P<0.05. A moderate positive correlation of the PCLζ gene was found with functional plasma membrane function (0.449), physical organization of the plasma membrane (0.438), conception rate (0.454), total motility (0.486), progressive motility (0.413) and negative correlation with slow motility (-0.427) and spermatozoa properties (-0.405). No correlation on WBP2NL and TNF-α genes were found, showing that those genes expression should not be used as a marker of seminal quality and fertility in stallions. It can be concluded that expression of the PCLζ gene on equine spermatozoa can be used as a marker for seminal quality and fertility in the stallion.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Asteraceae has attracted many embryologists because of its high variability of the embryological features. Nevertheless, nothing is known about the embryology of the species basal subfamily, Barnadesioideae. Thus, this paper aims to describe the processes of ginosporogenesis and ginogametogenesis in two species of Barnadesioideae, Sclechtendalia luzulaefolia, considered basal and sister to the other species that belong to family and Dasyphyllum brasiliense whose genus was also sometimes considered basal. Both species are native to Rio Grande do Sul. S. luzulaefolia was collected in São Pedro do Sul, RS, Brazil and D. brasiliense in Santa Maria, RS, Brazil and in São Pedro do Sul, RS, Brazil. The corolla is the first floral whorl to arise in both species, followed by the androecium, gynoecium and calyx in S. luzulaefolia; calyx, androecium and gynoecium in D. brasiliense. Tenuinucellate incomplete ovule, asymmetric integument and dual origin endothelium (funicule and integument) are new results for Asteraceae. The archesporium is usually unicellular, but ovules with two archesporial cells were observed. In S. luzulaefolia two types of tetrad are present, the linear tetrad being more commom than the tetrad with paired ginospores. The ginophyte development pattern in D. brasiliense can be an indication of its derived position in Barnadesioideae, since it has bisporic ginophyte of the Allium type and in S. luzulaefolia where ginophyte is monosporic of the Polygonum type, integrating these features simultaneity of mitotic cycles and cellularization of ginófito. The mature ginophyte is 4-cell, in both species, because of the degeneration of the antipodes, which can configure a plesiomorphic character for the family. The synergids extend into the micropile canal and they have fibrillar apparatus of typical morphology for Asteraceae. Labyrinthine walls of the middle cell and flange type wall thickening are present only in S. luzulaefolia in cells of the endothelium and micropilar canal. Therefore, common characteristics were identified for S. luzulaefolia and D. brasiliense which may be considered basal for Asteraceae and diagnostic for Barnadesioideae, as well as embryological characters that corroborate the position derived from D. brasiliense in this subfamily. / Asteraceae despertou interesse de muitos embriologistas devido a grande variabilidade das características embriológicas. Apesar disso, nada é sabido sobre a embriologia nas espécies de Barnadesioideae, sua subfamília basal. Sendo assim este trabalho objetiva descrever os processos de ginosporogênese e ginogametogênese em duas espécies de Barnadesioideae, Sclechtendalia luzulaefolia, considerada basal e irmã das demais pertencentes a família, e Dasyphyllum brasiliense cujo o gênero por vezes também foi considerado basal. Ambas as espécies são nativas do Rio Grande do Sul. S. luzulaefolia foi coletada em São Pedro do Sul, RS, Brasil e D. brasiliense em Santa Maria, RS, Brasil e em São Pedro do Sul, RS, Brasil. A corola é o primeiro verticilo floral a surgir em ambas as espécies, seguida pelo androceu, cálice e gineceu em S. luzulaefolia e pelo cálice, androceu e gineceu em D. brasiliense. O rudimento seminal tenuinucelado incompleto, a presença de tegumento assimétrico e de endotélio de origem dupla (funicular e tegumentar) são resultados inéditos para Asteraceae. O arquespório é usualmente unicelular, mas rudimentos seminais com duas células arquesporiais foram observados. Em Sclechtendalia luzulaefolia dois tipos de tétrade estão presentes, sendo a tétrade linear mais comum do que a tétrade com ginósporos pareados. O tipo de desenvolvimento do ginófito em D. brasiliense pode ser um indício de sua posição derivada para Barnadesioideae, já que possui ginófito bispórico do tipo Allium e em S. luzulaefolia o ginófito é monospórico do tipo Polygonum, integrando-se a estas características a simultaneidade dos ciclos mitóticos e da celularização do ginófito. O ginófito maduro é 4-celular, em ambas as espécies, devido degeneração das antípodas, o que pode configurar um caráter plesiomórfico para a família. As sinérgides estendem-se para o interior do canal micropilar e possuem um aparelho fibrilar de morfologia típica para Asteraceae. Somente em S. luzulaefolia foi observada a presença de parede labiríntica da célula média e espessamento de parede tipo flange em células do endotélio e canal micropilar. Portanto, neste trabalho foi possível identificar características comuns à S. luzulaefolia e D. brasiliense que podem ser considerados basais para Asteraceae e diagnósticas para Barnadesioideae, bem como caracteres embriológicos que corroboram a posição derivada de D. brasiliense nesta subfamília.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2007. / Submitted by Fabrícia da Silva Costa Feitosa (fabriciascf@gmail.com) on 2010-01-14T20:26:08Z No. of bitstreams: 1 2007_ThiagoAntoniodeSouzaNSilva.pdf: 338092 bytes, checksum: 8bebea45e3f4500b30877f51ec2c619a (MD5) / Approved for entry into archive by Carolina Campos(carolinacamposmaia@gmail.com) on 2010-01-19T19:16:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_ThiagoAntoniodeSouzaNSilva.pdf: 338092 bytes, checksum: 8bebea45e3f4500b30877f51ec2c619a (MD5) / Made available in DSpace on 2010-01-19T19:16:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_ThiagoAntoniodeSouzaNSilva.pdf: 338092 bytes, checksum: 8bebea45e3f4500b30877f51ec2c619a (MD5) Previous issue date: 2007-07-04 / Este trabalho teve por objetivo avaliar in vitro e pela inseminação artificial (IA) em ovelhas com estro sincronizado o efeito da adição do plasma seminal (PS) na descongelação do sêmen ovino criopreservado em “pellets”. Foram realizados dois trabalhos. No primeiro foi avaliado in vitro a adição do PS. Não houve diferença significativa para o parâmetro de motilidade entre os tratamentos. Mas com relação à integridade do acrossoma a adição do PS proporcionou uma média superior de espermatozóides vivos com acrossoma integro (P<0,05) em relação ao tratamento com PBS nas 2 e 6 horas de incubação. No segundo trabalho foi realizado a avaliação in vitro e in vivo com IA em ovelhas com estro sincronizado. Os resultados in vitro confirmaram os resultados encontrados no primeiro trabalho. As IA foram realizadas em tempo fixo a partir das 50 horas após a retirada dos pessários vaginais, pelo método transcervical sem tração. Conforme o grau de penetração do aplicador de sêmen no canal cervical das ovelhas considerou-se três graus de profundidade caracterizados como: grau 1: superficial; grau 2: intermediário; grau 3: profundo. Como grupo controle 61 ovelhas foram inseminadas com sêmen fresco/diluído com solução salina fosfatada (PBS). Das 100 restantes, metade foi inseminada com sêmen congelado/descongelado com PBS e a outra metade com sêmen congelado/descongelado com PS. Após 45 dias da IA, foi realizado o diagnóstico de prenhez, por ultra-sonografia. As ovelhas inseminadas apresentaram os percentuais de prenhez de 60,0% (50/30), 74,0% (50/38) e 67,2% (61/41), respectivamente, para sêmen congelado/descongelado, com PBS, com PS e fresco/diluído. Os índices de prenhez não diferiram entre os tratamentos (PBS/PS/FRESCO) nos graus 1 e 2 de penetração. No entanto, as percentagens de prenhez diagnosticadas nas ovelhas inseminadas com sêmen fresco (95,6%) e com sêmen congelado com PS (94,1%) foram superiores as obtidas com sêmen congelado com PBS (60,0%; P<0,05) no grau 3 de penetração. Tendo como base os resultados obtidos, conclui-se que, o sêmen congelado utilizado via cervical, adicionado de PS obteve índices de gestação satisfatórios no mesmo nível que o sêmen fresco, é capaz de proporcionar os mesmos índices obtidos com o sêmen fresco e realizar um efeito protetor nos espermatozóides contra a reação precoce do acrossoma. ________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The aim of the present experiment was to evaluate in vitro and artificial insemination (AI) in sheep with synchronized estrus the effect of addition of seminal plasma in ram semen frozen-thawed criopreserved at pellets. Two works were made. On the first was evaluate the addition of seminal plasma in vitro. To motility there wasn’t difference among treatments. But about the acrossome intact the addition of seminal plasma had a higher average of spermatozoa alives with acrossome intact (P<0,05) than PBS treatment at 2 and 6 hours of incubation period. On the second experiment was evaluate in vitro and in vivo with artificial insemination in sheep with synchronized estrus. The results in vitro confirmed the results found in the first experiment. The AI was in fixed time, at 50 hours after removing the vaginal device, by the method trans-cervical without traction. The penetration degree of the semen applicator in the ewe cervical channel was classified as following: degree 1: superficial; degree 2: intermediate; degree 3: deep. In control group 61 ewes were inseminated with fresh semen diluted with PBS and the other 100, half ewes were inseminated with frozen-thawed semen with PBS, and the other half ewes was inseminated with frozen-thawed semen with seminal plasma. The diagnosis of pregnancy was performed 45 days after AI with ultrasound. The pregnancy rate was 60.0% (50/30), 74.0% (50/37) and 67.2% (61/41), respectively for frozen semen and thawed without seminal plasma, with seminal plasma and fresh semen. The pregnancy rate did not differ among treatments in degrees 1 and 2. However, the pregnancy in ewes inseminated with fresh semen (95.6%) and with frozen-thawed semen with seminal plasma (94.1%) were higher than with frozen-thawed semen without plasma (60.0%; P<0.05) in degree 3. Based on results, the conclusion is, frozen semen additioned of seminal plasma used at cervical way had satisfactory pregnancy rates similar that fresh semen and had a protector effect on spermatozoa against the premature acrossome reaction.

O diagnóstico da infecção pelo papilomavírus humano (HPV) em homens tem ganhado importância já que o mesmo é freqüentemente assintomático, o que pode tornar o indivíduo contaminado num reservatório do vírus, com importante papel na transmissão e perpetuação da doença. Este trabalho teve como objetivo o estudo do HPV no espermatozóide, a fim de avaliar sua influência na qualidade seminal e no estresse oxidativo. Foram analisados 68 homens, dos quais 30 foram positivos para HPV/DNA e 38 foram negativos. Dos casos positivos, 8/30 apresentaram infecção pelo HPV dos tipos 16 ou 18, os quais são considerados os tipos de alto risco oncogênico com maior prevalência. A infecção e classificação dos tipos virais foram determinadas por nested-PCR, enquanto a atividade das enzimas superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT) foram determinadas por espectrofotometria. Os dados não apresentaram relação significativa entre as variáveis epidemiológicas estudadas e a presença do vírus. Os parâmetros de concentração e motilidade espermática foram avaliados manualmente, segundo o critério da Organização Mundial da Saúde (OMS) e, a morfologia avaliada, conforme os critérios da OMS e estrito de Tygerberg. Os dados mostram um aumento da incidência de espermatozóides com morfologia alterada nos pacientes com infecção por HPV. Os parâmetros seminais de concentração e motilidade não apresentaram diferenças significativas entre os grupos (com e sem HPV). Nos pacientes portadores do vírus, as medidas de catalase mostraram-se significativamente aumentadas em relação aos pacientes não infectados. O estresse oxidativo pode estar relacionado com a fisiopatologia da infertilidade em pacientes com infecção por HPV no sêmen. Esta infecção sinaliza uma piora na qualidade do sêmen, baseada na alteração da morfologia do espermatozóide. / Submitted by Marcelo Teixeira (mvteixeira@ucs.br) on 2014-05-22T16:46:36Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Leticia Lucchese.pdf: 4254447 bytes, checksum: 410f0fa2c8bc9751e9a9d21ab3033a19 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-22T16:46:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Leticia Lucchese.pdf: 4254447 bytes, checksum: 410f0fa2c8bc9751e9a9d21ab3033a19 (MD5) / The diagnosis of human papillomavirus infection (HPV) in men has gained importance due to the fact they are frequently asymptomatic, who may be a virus reservoir, with an important role in the transmission and perpetuation of the disease. The goal of this study was to identify the presence of HPV in the semen in order to evaluate its influence in semen quality as well as in seminal oxidative stress. Sixty-eight men were analyzed, from which 30 were positive for DNA/HPV and 38 negative. Of the positive cases, 8/30 had HPV infection with the subtypes 16 or 18, which are considered with high prevalence for oncogenic risks. The viral infection and the classification of the virus subtypes were determined with the nested-PCR technique, and the enzymatic activities of superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) were determined by spectrophotometry technique. There was no significant correlation among the studied epidemiological variables and the presence of the virus. The semen parameters sperm concentration and motility were evaluated manually according to the World Health Organization (WHO) criteria and the sperm morphology evaluated according to the WHO and Tygerberg´s strict criteria. The results show a higher incidence of sperm with abnormal morphology in patients with HPV infection compared to patients without the infection. Sperm concentration and motility did not show a difference between patients with or without HPV infection. In patients with the HPV, CAT levels were higher than patients without the HPV infection. Seminal oxidative stress may be related to the pathophysiology of infertility in patients with seminal HPV infection. This infection signalize for diminishing semen quality based on the damage of the sperm morphology seen in our study.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-23Bitstream added on 2014-06-13T20:19:19Z : No. of bitstreams: 1 alberti_k_me_botfmvz.pdf: 429138 bytes, checksum: 5c7610a2c5faf82b82e472d5ee545e50 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Dentre as biotecnologias de reprodução que visam acelerar os ganhos genéticos e econômicos dos rebanhos, a congelação de sêmen desponta como uma das principais. O sêmen congelado bovino é utilizado em larga escala há anos e não houve grandes evoluções nas técnicas de congelação visando minimizar os efeitos deletérios do processo nos espermatozóides, colaborando ativamente para o incremento da fertilidade dos rebanhos. Neste trabalho propôs inovações nas técnicas de congelação utilizando uma nova formulação de meio diluente, a introdução da centrifugação para a remoção do plasma seminal pré-congelação e a determinação do tempo ideal de estabilização do sêmen. Foram realizados três experimentos; o primeiro testou o efeito de três diferentes meios diluentes, com ou sem a remoção do plasma seminal, no ejaculado de 40 touros diferentes. Nos resultados exibidos o diluente M20 foi superior (p<0,01) aos demais diluentes na maioria das variáveis pesquisadas a remoção do plasma seminal melhorou (p<0,01) os índices de congelabilidade do sêmen. Outro experimento foi a verificação dos tempos de 60, 120, 180 e 240 min. de refrigeração do sêmen a 5ºC. O tempo de 180 minutos foi o considerado o melhor para a congelabilidade após a verificação dos resultados. No teste de fertilidade foram inseminados 418 vacas e o grupo que foi inseminado com sêmen congelado com M20 sem plasma seminal obteve uma tendência de superioridade (0,05<p<0,10) aos demais grupos. Com os resultados dos experimentos concluiu-se que as inovações propostas por este estudo incrementam os índices de congelabilidade do sêmen bovino. / Semen freezing is considered as one of the main reproduction biotechnologies that aim to accelerate genetic and economical gains of herds. Frozen bovine semen has been used in large scale for years and there were not great evolutions in freezing techniques to minimize the deleterious effects of the process in spermatozoa, actively contributing for the increase in herds fertility. Innovations in freezing techniques were proposed in this work by using a new formulation of the extenders, introducing centrifugation for the removal of prefreezing seminal plasma and determining the appropriate time for semen cooled. Three experiments were carried out: 1) the effect of three different extenders was tested, with or without the removal of seminal plasma, in the ejaculate of 40 different bulls; results showed that the extender M20 was superior (p<0,01) in relation to the other extenders in most of variables studied. The removal of the seminal plasma improved (P<0,01) semen freezability indexes. 2) verification of 60, 120, 180 and 240 min. times for semen cooling at 5ºC; after results, the time of 180 minutes was considered the most appropriate for freezability. 3) fertility test: 418 cows were inseminated and the group with frozen semen with M20 without seminal plasma obtained a superiority tendency (0,05<p<0,10) in relation to the other groups. The results of the experiments concluded that the innovations proposed in this work increase freezability indexes of bovine semen.

Orientador: Maria Denise Lopes / Resumo: Em climas temperados, variações sazonais na reprodução em cães têm sido reportadas, entretanto, em condições tropicais essa influência não tem sido estudada. O objetivo desse trabalho foi avaliar se as modificações ambientais, da Região Sudeste do Brasil, exercem efeitos sobre a função testicular. Neste estudo foram utilizados 8 cães adultos, com idade entre 1,2 a 6 anos, de três raças (1 Blood Hound, 2 Golden Retrivier, 4 Springer Spaniel), em atividade reprodutiva, de um mesmo canil, num período de 14 meses. Colheitas de sêmen foram realizadas quinzenalmente. O ejaculado foi imediatamente avaliado quanto à motilidade e vigor espermático, pH, concentração e morfologia dos espermatozóides. Após a centrifugação, o "pellet" foi ressuspendido e submetido a congelação. No plasma seminal foram determinadas as concentrações de proteínas totais, sódio, potássio, cálcio, magnésio e cloretos totais. A eletroforese SDS-PAGE foi realizada utilizando-se géis de poliacrilamida nas concentrações de 12 e 18%. Os géis foram corados com Coomasie azul brilhante R-250, as imagens digitalizadas e os pesos moleculares e a densidade óptica integrada estimada. Amostras de sangue foram obtidas a cada 15 dias, sempre no período da manhã, entre 8:30 e 11:30 h. As dosagens séricas de testosterona total foram determinadas por radioimunoensaio (RIA) em fase sólida. Foram realizadas mensurações de próstata e testículos. Os dados referentes às variações de temperatura ambiente (°C) e índice pluviométrico (mm3) foram obtidos no CIIAGRO. A variação de temperatura, nesse período, foi de 9ºC a 32,8ºC, e o índice pluviométrico de 26 mm3 a 476 mm3. A concentração média de testosterona nos animais foi de 131,65 ng/dL a 213,17 ng/dL, com uma grande variação individual. Houve uma queda acentuada no verão de 2003, onde a temperatura e a umidade foram altas...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In temperate zones, seasonal influence on reproductive performance of male dogs has been described, but in tropical conditions it hasn't been studied. The objective of this work was to evaluate the influence of seasonality on testis function. In the study 8 adult dogs were used, with age varying between 1.2 and 6 years old, from 3 breeds (1 Blood Hound, 2 Golden Retrivier, 4 Springer Spaniel). These dogs were active studs, and they were housed in the same cannel, during 14 months. Ejaculates were collected each 15 days. Immediately after the collection, spermatic progressive motility, progressive velocity, pH and sperm morphology, were evaluated. The samples were centrifuged, the pellet re-suspended and frozen, and supernatant was evaluated for total protein, cloride, potassium, sodium, calcium and magnesium. Ultrasonic measurements of canine testis and prostate were performed. Electrophoresis was performed using 12% and 18% SDS-PAGE. The electrophoresis gel was stained with Coomasie blue brilliant R-250, scanned and analysed by a software. Molecular weight was estimated based in a standard weight. Blood collections were performed every 15 days at morning (between 8:30 and 11:30 a.m). Testosterone serum concentrations were determined by solid phase RIA (radioimmunoassay). The data from environmental temperature and pluvial index were obtained from CIIAGRO. Testosterone mean concentrations varied from 1.31 ng/mL to 2.02 ng/mL. The temperature varied from 10.2º C to 32.8º C and the pluvial index was 33 mm3 to 476 mm3. Notable individual variation was observed on testosterone serum concentrations among dogs in all seasons. There was a remarkable decrease on testosterone levels in all animals during Summer, when temperature and humidity were high. Seminal parameters before and after thawing were normal during the study...(Complete abstract click eletronic access below) / Doutor

Em todas as espécies de mamíferos estudadas, o gene PLCζ é responsável pelo aumento de cálcio no momento da fecundação do oócito. Recentemente, o gene WBP2NL, também esta sendo estudado por sua possível capacidade de iniciar a ativação de oócitos. O gene TNF-α é uma citocina pró-inflamatória que pode ser encontrada no plasma seminal, mas seu efeito na viabilidade espermática ainda não está claro. O objetivo desse trabalho foi investigar a expressão dos genes PLCζ, WPB2NL e TNF-α no espermatozoide e suas relações com a qualidade e fertilidade em equinos. Foram utilizados ejaculados de 40 garanhões da raça Crioula, de criatórios localizados próximos a Porto Alegre. A concentração espermática foi avaliada em câmara de Neubauer. As demais análises microscópicas foram realizadas através do Computer Assisted Sperm Analysis AndroVision. A análise da integridade física da membrana foi realizada utilizando-se sondas fluorescentes A integridade funcional da membrana plasmática foi avaliada por meio do teste hiposmótico. Para análise estatística foi utilizada correlação de Pearson, com nível de significância de P<0,05. Foi encontrada correlação positiva do gene PCLζ com integridade funcional da membrana plasmática (0,449), integridade física da membrana plasmática (0,438), taxa de prenhez (0,454), motilidade total (0,486), motilidade progressiva (0,413); correlação negativa com motilidade lenta (-0,427) e espermatozoides imóveis (-0,405). Não foram encontradas correlações dos genes WBP2NL e TNF-α. Concluí-se que a expressão do gene PCLζ no Espermatozoide equino pode ser utilizada com um marcador para a qualidade seminal e fertilidade do garanhão. / In all species of mammals studied, the PLCζ gene is a factor of calcium increase at the time of oocyte fertilization. Recently, the WBP2NL gene is also being studied for its potential ability to initiate oocyte activation during fertilization. The TNF-α is a pro-inflammatory cytokine found in seminal plasma but it effect on motility and viability sperm still unclear. The aim of this study was to verify the expression of PLCζ, WPB2NL and TNF-α genes in spermatozoa and their relationship with quality and fertility in horses. We used the ejaculates of 40 Crioulo stallions, were used from horse farms located near Porto Alegre. After semen collection, the ejaculate was diluted in a commercially available extender. Microscopic analysis of total and progressive motility was performed using a computer assisted sperm analysis system AndroVision. Membrane physical integrity was assessed by fluorescent probes and membrane functionality was analyzed by the hypo-osmotic test (HOST) Statistical analysis was performed using the Pearson correlation, with a significance level of P<0.05. A moderate positive correlation of the PCLζ gene was found with functional plasma membrane function (0.449), physical organization of the plasma membrane (0.438), conception rate (0.454), total motility (0.486), progressive motility (0.413) and negative correlation with slow motility (-0.427) and spermatozoa properties (-0.405). No correlation on WBP2NL and TNF-α genes were found, showing that those genes expression should not be used as a marker of seminal quality and fertility in stallions. It can be concluded that expression of the PCLζ gene on equine spermatozoa can be used as a marker for seminal quality and fertility in the stallion.

Introdução: Em torno de 15% dos casais apresentam o diagnóstico de infertilidade, sendo que 50% se devem a fatores masculinos. Diversos testes de função espermática são propostos para a avaliação da fertilidade, mas o espermograma é o principal exame para o diagnóstico de infertilidade masculina. O valor prognóstico das características seminais como concentração, morfologia e motilidade como marcadores de infertilidade masculina é confundido. A avaliação desses e a classificação quanto à normalidade dos mesmos permanece sendo tema de discussão frequente. Objetivos: Comparar as diferentes classificações de parâmetros seminais (OMS 1999, OMS 2010 e TMSC) e avaliar as características de pacientes em terapia de reprodução humana assistida que se relacionam com esses parâmetros. Métodos: Foi realizado estudo longitudinal, retrospectivo, baseado em revisão de banco de dados para avaliar as características e parâmetros seminais e comparar as mesmas conforme as classificações da OMS de 1999, OMS de 2010 e TMSC de 477 homens submetidos a investigação de infertilidade ou tratamentos de reprodução assistida na clínica Generar – Reprodução Humana, entre 2011 e 2015. Resultados: 401 pacientes tiveram alguma alteração pela OMS 1999, 223 pela OMS 2010 e 200 pela TMSC. O critério que mais alterou a condição de uma amostra seminal de anormal em 1999 para normal em 2010 foi a morfologia. Conclusão: Os parâmetros se tornaram menos rígidos de 1999 para 2010 alterando significativamente a proporção de indivíduos que deixaram de ser classificados como inférteis. A classificação baseada no TMSC pode ser útil na indicação de alguns tratamentos, mas não pode definir um indivíduo como fértil ou infértil em função de não levar em consideração a morfologia espermática. / Background: Approximately 15% of couples presenting the diagnosis of infertility, and 50% of cases are due to male factors. Several sperm function testing is proposed for the evaluation of male fertility, but sperm is the first test for the diagnosis of male infertility causes. The prognostic value of the seminal characteristics as concentration, morphology and motility as male infertility markers is often confused. Evaluation of semen parameters and classification for normality remains frequent topic of discussion. Objectives: Compare the different classifications of seminal parameters (OMS 1999, WHO 2010 and TMSC) and evaluate the characteristics of patients treated in assisted reproduction therapy relating to these parameters. Methods: Retrospective study based on chart review evaluated 477 semen samples from men undergoing investigation or infertility treatments in assisted reproduction between 2011 and 2015. Results: 401 patients were considered abnormal by the WHO 1999, 223 by WHO 2010 and 200 for TMSC. The criteria that most changed the classification was sperm morphology. Conclusion: The parameters have become less rigid 1999 to 2010 significantly changing the proportion of individuals who are no longer classified as infertile. The classification based on TMSC can’t define an individual as fertile or infertile regardless due to not take into account the sperm morphology, but may be helpful when it comes to the indication of the intrauterine insemination.