A compreensão da fisiologia e dos mecanismos moleculares da sepse tem sido foco de muitos estudos. As infecções severas, como a sepse, são responsáveis por 10% do total de mortes registradas em Unidades de Tratamento Intensivo em todo o mundo. O desfecho da sepse ocorre devido a influência de fatores ambientais e genéticos, cuja expressão de variantes genéticas suportam ou não este desfecho. Muitos mecanismos estão envolvidos na sepse, incluindo a liberação de citocinas e a ativação de neutrófilos, de monócitos e de células endoteliais. Há associação entre superprodução de óxido nítrico, produção excessiva de radicais livres, depleção de antioxidantes, e déficit energético celular. Enzimas antioxidantes endógenas como a Superóxido Dismutase, a Glutationa Peroxidase e a Catalase protegem a célula do dano oxidativo. A enzima superóxido dismutase dependente de manganês é um potente antioxidante intracelular codificada por um gene (SOD2; 6q25-2) que tem sua expressão induzida por mediadores inflamatórios tais como interleucina 1, interleucina 4, interleucina 6, Fator de Necrose Tumoral – α, lipopolisacarídeos. O gene SOD2 apresenta um polimorfismo de mutação de base C47T no exon 2, o qual resulta na substituição do resíduo 16 (Ala16Val) pertencente ao peptídeo sinal da proteína. O objetivo deste trabalho foi estudar o efeito diferencial das variantes - 9Ala e -9Val da superóxido dismutase dependente de manganês sobre as células mononucleares de sangue periférico humano (in vitro) durante um processo infeccioso (induzido por lipopolisacarídeos), investigando sua implicação: (I) na produção de Espécies Reativas; (II) na atividade e imuno-conteúdo da Superóxido Dismutase dependente de Manganês; (III) na atividade e imuno- conteúdo da Catalase; (IV) na atividade e imunoconteúdo da Glutationa Peroxidase; (V) na produção de nitrotirosina; (VI) na produção de nitrito/nitrato; (VII) na liberação de Fator de Necrose Tumoral - α; (VIII) na produção de Carboximetil-lisina; (IX) dienos conjugados; (X) no imuno-conteúdo da Poli (ADP ribose) Polimerase; (XI) no imuno-conteúdo do Receptor de Produtos Avançados de Glicação; (XII) no imuno-conteúdo da Proteína de Choque Térmico; (XIII) no imuno-conteúdo do Fator Nuclear κB; (XIV) no dano ao DNA celular; (XV) na determinação das defesas antioxidantes totais não enzimáticas. Os resultados demonstraram que o polimorfismo Ala-9Val participa na regulação do ambiente redox celular, e que o alelo 47C permite que as células no estado basal (sem lipopolisacarídeos) respondam com mais eficiência ao estresse oxidativo celular. Este alelo apesar de produzir mais espécies reativas também aumenta o mecanismo de defesa antioxidante. Porém, quando em uma doença que produza estresse oxidativo, no caso a sepse, o alelo 47C torna o ambiente intracelular pró-oxidativo podendo agravar a condição celular. Em suma, os dados aqui apresentados sugerem que o polimorfismo Ala-9Val é um alvo promissor para novos estudos com o objetivo de usar marcadores genéticos para direcionar a terapia necessária para cada paciente. / The understanding of the physiology and of molecular mechanisms of sepsis has been focus of many studies. The severe infections, as the sepsis, are responsible for 10% of total of deaths registered in Intensive Care Units all over the world. The outcome of sepsis happens due to influence of environmental and genetic factors, whose the expression of genetic variants supports or not this outcome. Many mechanisms are involved in sepsis, including the cytokines liberation and the neutrophils activation, of monocytes and of endothelial cells. There is association among overproduction of nitric oxide, excessive production of free radicals, depletion of antioxidants, and cellular energy deficit. Endogenous antioxidant enzymes as Superoxide Dismutase, Glutathione Peroxidase and Catalase protect the cell of oxidative damage. The manganese superoxide dismutase enzyme it is a potent antioxidant intracellular codified by a gene (SOD2; 6q25-2) that has her expression induced by the inflammatory mediators such as interleukin 1, interleukin 4, interleukin 6, tumor necrosis factor – α, lipopolysaccharide. The SOD2 gene presents a single-nucleotide polymorphism C47T in the exon 2, which results in the substitution of the residue 16 (Ala16 Val) belonging to the signal peptide of the protein. The aim of this work was to study the differential effect of the variants -9Ala and -9Val of manganese superoxide dismutase on the Peripheral Blood Mononuclears Cells human (in vitro) during an infectious process (induced by lipopolysaccharide), investigating her implication: (I) in the production of Reactive Species; (II) in the activity and immunocontent of Manganese Superoxide Dismutase; (III) in the activity and immunocontent of Catalase; (IV) in the activity and immunocontent of Glutathione Peroxidase; (V) in the nitrotyrosine production; (VI) in the nitrite/nitrate production; (VII) in the production of tumor necrosis factor - α; (VIII) in the production of carboxymethyl lysine; (IX) conjugated dienos; (X) in the immunocontent of the Poly (ADP-ribose) Polymerase; (XI) in the immunocontent of the Receptor for Advanced Glycation Endproducts; (XII) in the immunocontent of Heat Shock Protein; (XIII) in the immunocontent of the Nuclear Factor kappa B; (XIV) in the damage to cellular DNA; (XV) in the determination of the non-enzymatic antioxidant cellular defenses. The results demonstrated that the polymorphism Ala-9Val it participates in the regulation of the cellular redox environment, and that the 47C allele allows that the cells in the basal state (without lipopolysaccharide) they answer with more efficiency to the stress oxidative cellular. This allele in spite of producing more RS also increases the mechanism of antioxidant defense. However when in a disease that produces oxidative stress, in the case the sepsis, the 47C allele turns intracellular environmental pro-oxidative could worsen the cellular condition. In summary, the data presented here suggest that the polymorphism Ala- 9Val is a promising target for new studies with the goal of using genetic markers to guide therapy required for each patient.

A sepse é um conjunto complexo de interações moleculares e celulares mediado pela estimulação de receptores celulares envolvidos na inflamação. O controle desta rede de sinalização é compensado pela resposta pró- e antiinflamatória do organismo. Os desequilíbrios inflamatórios induzidos alteram o estado fisiológico de diversos órgãos. No cérebro, observam-se diversas modificações que envolvem desde o aumento na permeabilidade da barreira hematoencefálica (BHE), morte de células neurais por apoptose ou necrose, redução do fluxo sanguíneo e aumento do estresse oxidativo, resultando no desenvolvimento do delirium associado à sepse. O delirium associado à sepse é um conjunto de disfunções neurológicas induzidas por uma resposta inflamatória sistêmica. Assim, é possível que diferentes mecanismos compensatórios estejam envolvidos durante a sepse. Este estudo objetivou analisar a influência do modelo de ligação cecal e punção (CLP), na excreção de ligantes do receptor para produtos finais de glicação avançada (RAGE) e as modificações ocasionadas no cérebro pela inflamação sistêmica decorrente da sepse. Nossos resultados demonstraram que os níveis séricos de TNF-α aumentaram após a indução da CLP, confirmando o estado inflamatório dos animais CLP, ocorrendo um aumento nos níveis de proteínas carboniladas, HSP70 e HMGB-1 no soro desses animais, indicando um aumento de estresse oxidativo nesses animais e liberação de proteínas associadas a manutenção e estabilização intracelular. Entretanto, encontramos uma redução no imunoconteúdo de destas proteínas no hipocampo e córtex, possivelmente por aumento nos níveis de necrose/lise celular ou por eliminação durante o período de disrupção da BHE. Assim, concluímos que durante a sepse ocorre uma aumento expressivo nos níveis séricos de proteínas associadas a resposta inflamatória crônica, além de alterações nos níveis destas proteínas relacionadas a proteção intracelular no hipocampo e córtex, que pode ter relação com as alterações observadas em pacientes e modelos animais. / Sepsis is a complex whole of molecular and cellular interactions mediated stimulation of cellular receptors involved in inflammation. The control of this system is compensated by pro and anti-inflammatory response in organism. The imbalance induced inflammatory alters the physiological state of different organs. In the brain, there are various modifications that involve from the increase in permeability of the blood-brain barrier (BBB), neural cell death by apoptosis or necrosis, reduced blood flow and increased oxidative stress, resulting in the development of sepsis-associated delirium. Sepsis-associated delirium is a whole of neurological dysfunctions induced a systemic inflammatory response. Thus, it is possible that different compensatory mechanisms are involved during sepsis. The aim of the study was to analyze the influence of the model cecal ligation and puncture (CLP), in the excretion of agonists for receptor advanced glycation end products (RAGE) and alterations in the brain caused by systemic inflammation caused by sepsis. Our results showed that serum levels of TNF-α increased after the induction of CLP, confirming the inflammatory status of CLP animals, which results in increased levels of carbonylated proteins, HSP70 and HMGB-1 in the serum of these animals, indicating an increase of stress oxidative these animals and release of proteins associated with maintaining and stabilizing intracellular. However, happened a reduction in immunocontent these proteins in the hippocampus and cortex, possibly by increased levels of necrosis/lysis cell or by removal during the period of disruption of the BBB. Therefore, concluded that during sepsis occurs a significant increase in serum proteins associated with chronic inflammatory response and changes in levels of proteins related to intracellular protection in the hippocampus and cortex, which may be related to the changes observed in patients and models animals.

Resumo não disponível.

Sepsis is the expression of a complex network of mediators of inflammation. To define which of these biological indicators discriminate the diagnosis and prognosis is the focus of current researches. To evaluate the role and the diagnostic and prognostic value of lactate, ultrasensitive C-reactive protein (CRP-US), procalcitonin (PCT) and interleukin-6 (IL-6) in adult patients at the ICU with sepsis. Observational, cohort study was conducted between October 2009 and April 2010, enrolling adult patients admitted to two general ICUs of Aracaju, Sergipe, Brazil, diagnosed with severe sepsis (S) or septic shock (SS). There was no interference of researchers in therapeutic regimens and the patients were followed until discharge, death or the 28th day of ICU stay. APACHE II score was calculated at admission (D1) and SOFA score, at D1 and D3. Lactate was measured at D1 and D2 and CRP-US, PCT and IL-6 at D1. The scores and biomarkers were compared between S and SS subgroups and among non-survivors (NS) and survivors (SU). Were evaluated 30 patients, of which S was diagnosed in 23.3% and SS in 76.7% . The mean age was 67.8 ± 18.9 years and it was a single factor predictive of death. Death was the outcome in 53.3% of patients (S = 14.3% and SS = 65.2%). The mean APACHE II was 22.1 ± 8.2 and had good accuracy to predict both the diagnosis and mortality; the mean SOFA at D1 was 9.2 ± 3.5; at D3 was 7.7 ± 3.5, with good accuracy to predict both the diagnosis and mortality; and the Δ SOFA was 1.5 ± 1.5, with no statistical significance. The average of lactate at D1 was 3.7 ± 1.6 mmol/l; at D2 was 2.7 ± 0.7 mmol/l (S = 2.2 ± 0.5; SS = 2.8 ± 0.7); and the lactate clearance was 19.0 ± 39.5. The average of CRP-US was 7.8 ± 14.4 mg / dl (S = 8.9 ± 4.9; SS = 16.0 ± 7.8). The average of PCT was 4.2 ± 8.5 ng / ml and the mean IL-6 was 2.9 ± 0.4 pg / ml. This study showed that the APACHE II and SOFA scores have good accuracy to predict both the diagnosis and mortality among patients with sepsis and that agewas the single factor predictive of death but did not discriminate the diagnosis; the lactate of the second day, and the US-CRP at the admission discriminated the diagnosis, but were unable to predict the outcome; and that the Δ SOFA, lactate clearance, PCT and IL-6 had no discriminatory power in predicting, separately, both the diagnosis and prognosis. Thus, no single biomarker to provide an absolute ability to distinguish sepsis from other inflammatory conditions, nor to monitor and predict its progression or response to treatment; all of them can be used in its proper clinical context, as adjuncts to decision making regarding diagnosis and treatment. / Sepse é a expressão de uma complexa rede de mediadores da inflamação. Definir quais desses indicadores biológicos discriminam o diagnóstico e o prognóstico é o foco das pesquisas atuais. Avaliar o valor diagnóstico e prognóstico do APACHE II, do SOFA, do lactato, da proteína C reativa ultrassensível (PCR-US), da procalcitonina (PCT) e da interleucina-6 (IL-6) em pacientes adultos internados em UTI com sepse. Estudo observacional, de coorte, desenvolvido entre outubro de 2009 e abril de 2010, com adultos admitidos em duas UTIs gerais de Aracaju, Sergipe, Brasil, com sepse grave (SG) ou choque séptico (CS). Não houve intervenção dos pesquisadores na terapêutica instituída e os pacientes foram seguidos até a alta, o óbito ou o 28° dia de permanência na UTI. O APACHE II foi calculado na admissão (D1) e o SOFA no D1 e D3. O lactato foi dosado no D1 e D2 e a PCR-US, a PCT e a IL-6 no D1. Estas variáveis foram comparados entre os subgrupos SG e CS e sobreviventes (S) e os não-sobreviventes (NS). Foram avaliados 30 pacientes, dos quais 23,3% com SG e 76,7% com CS. A média de idade foi de 67,8 ± 18,9 anos e foi significativo preditor da mortalidade. O óbito foi o desfecho em 53,3% dos pacientes (CS = 65,2%). A média do APACHE II foi de 22,1 ± 8,2 e apresentou significância para o diagnóstico e o desfecho. O SOFA do D1 foi de 9,2 ± 3,5 e o do D3 de 7,7 ± 3,5, com significância para o diagnóstico e o desfecho; o Δ SOFA de 1,5 ± 1,5, sem significância estatística. A média do lactato do D1 foi de 3,7 ± 1,6 mmol/l, do D2 de 2,7 ± 0,7 mmol/l (SG = 2,2 ± 0,5; CS = 2,8 ± 0,7) e o clearance do lactato foi de 19,0 ± 39,5%. A média da PCR-US foi de 14,4 ± 7,8 mg/dl (SG = 8,9 ± 4,9; CS = 16,0 ± 7,8). A PCT foi de 4,2 ± 8,5 ng/ml e a média de IL-6 foi de 2,9 ± 0,4 pg/ml. O estudo evidenciou que os escores APACHE II e SOFA têm boa acurácia para predizer o diagnóstico e a mortalidade entre pacientes com sepse e que a idade foi o fator isolado preditivo de morte, mas não discriminou o diagnóstico; que o lactato do segundo dia e a PCR-US da admissão discriminaram o diagnóstico, mas foram incapazes de predizer o desfecho; e que o Δ SOFA, o clearance do lactato, a PCT e a IL-6 não tiveram poder discriminatório em predizer, isoladamente, nem o diagnóstico nem o prognóstico. Assim, não há um único biomarcador que apresente habilidade absoluta para distinguir sepse de outras condições inflamatórias, nem para monitorizar e predizer sua progressão ou resposta ao tratamento; todos eles podem ser usados, em seu apropriado contexto clínico, como coadjuvantes para a tomada de decisão quanto ao diagnóstico e ao tratamento.

A sepse é descrita como uma disfunção orgânica ameaçadora à vida secundária à resposta desregulada do organismo a uma infecção, e é responsável por uma alta e crescente taxa de internação hospitalar no Brasil e no mundo. Apesar da diminuição da mortalidade ao longo do tempo, efeitos da doença a longo prazo como infecções secundárias e mortes tardias têm sido observadas. A sepse caracteriza-se pela liberação de mediadores inflamatórios e posterior imunossupressão compensatória, e o distúrbio na homeostase pode causar danos às células e órgãos levando a um estado mais grave da doença. Os linfócitos T reguladores (Tregs) são células responsáveis pela tolerância periférica e modulação de processos inflamatórios e são essenciais na imunossupressão observada na sepse. Este trabalho teve por objetivo estudar a relação entre a atividade imunológica (quantificação de Tregs, monócitos e citocinas inflamatórias) e a susceptibilidade a novas infecções e mortalidade em pacientes sépticos admitidos na Unidade de Emergência do HC-FMRP-USP. Foram incluídos 33 pacientes sépticos e 34 controles saudáveis, entre outubro de 2014 e novembro de 2015. Os pacientes foram acompanhados durante a internação na admissão (D0), D2, D7, D14, D21 e D28, e 12 pacientes retornaram para avaliação pelo menos três meses após a alta. Os pacientes tiveram porcentagens de Treg em linfócitos CD4+ elevados em relação aos controles nos momentos D2 e retorno (p = 0,0004), sendo que no D2 pacientes que desenvolveram complicação infecciosa tiveram porcentagens significativamente menores que os que não desenvolveram complicação (p = 0,0015). Além disso, porcentagens altas de Treg na admissão (D0) correlacionaram-se inversamente com o tempo de internação dos pacientes sobreviventes (p = 0,0271). Valores absolutos de Treg nos pacientes estiveram significativamente elevados no retorno em relação à admissão (p = 0,0074). Pacientes no retorno tiveram maior porcentagem de monócitos CD163+ em relação aos controles (p = 0,036). Pacientes na admissão tiveram menor porcentagem demonócitos HLA-DR+ em relação aos controles e aos pacientes no retorno (p = 0,0057). Pacientes tiveram valores de IL-6, IL-8, IL-10 e ST2 superiores em relação aos controles em diversos momentos da internação e retorno (p < 0,0001, p < 0,0001, p = 0,0030 e p < 0,0001, respectivamente). Valores de ST2 na admissão correlacionaram-se com o escore SOFA (p = 0,0252), tempo de internação (p = 0,0105), presença de complicação infecciosa (p = 0,0356) e mortalidade (p = 0,0114) dos pacientes. Valores de IL-8 na admissão também se correlacionaram com a presença de complicação infecciosa (p = 0,0387). Podemos inferir, portanto, que apesar de uma inflamação exacerbada já na admissão dos pacientes, evidenciada por altos valores de citocinas inflamatórias, há um aumento posterior de células Treg, imunorreguladoras, no D2, e o mesmo foi benéfico em relação à recuperação mais rápida dos pacientes e instalação de uma nova infecção. Porém, a imunossupressão continua sendo exibida mesmo após a alta dos pacientes, como podemos observar com a alta porcentagem de Tregs e monócitos CD163+ e valores de IL-10 nos pacientes em retorno em relação aos controles. Além disso, muitos dos pacientes sobreviventes à primeira internação foram internados novamente, e alguns deles foram a óbito no ano seguinte. / Sepsis is defined by a life-threatening organ dysfunction caused by a dysregulated host response to infection, and it is responsible for a high and increasing rate of hospital admission in Brazil and worldwide. Despite the decrease in mortality over time, long-term disease effects such as secondary infections and late deaths have been observed. Sepsis is characterized by the release of inflammatory mediators and subsequent compensatory immunosuppression, and the homeostasis disorder can cause damage to cells and organs leading to a more severe disease state. Regulatory T lymphocytes (Tregs) are cells responsible for peripheral toleran ce and modulation of inflammatory processes and are essential in the immunosuppression observed in sepsis. This study aimed to investigate the relationship between immunological activity (quantification of Tregs, monocytes and inflammatory cytokines) and susceptibility to new infections and mortality in septic patients admitted to the HC-FMRP-USP Emergency Unit. Thirty-three septic patients and 34 healthy controls were included between October 2014 and November 2015. Patients were followed up at admission (D0) and during hospitalization at D2, D7, D14, D21 and D28, and 12 patients returned for evaluation at least three months after discharge. Patients had higher Treg percentages on CD4 + lymphocytes than had controls at D2 and on return (p = 0.0004), whereas in D2 patients who developed infectious complications had significantly lower percentages than those who did not develop complications (p = 0.0015). In addition, high percentages of Treg at admission (D0) correlated inversely with the length of hospital stay of surviving patients (p = 0.0271). Absolute values of Treg in patients were significantly elevated in the return relative to admission (p = 0.0074). Patients on return had a higher percentage of CD163 + monocytes than controls (p = 0.036). Patients on admission had a lower percentage of HLA-DR+ monocytes than controls and patients on return (p = 0.0057). Patients had higher IL-6, IL-8, IL-10 and ST2 levels than controls at various times ofhospitalization and return (p < 0.0001, p < 0.0001, p = 0.0030 and p < 0.0001, respectively). ST2 values at admission were correlated with SOFA score (p = 0.0252), length of hospital stay (p = 0.0105), presence of infectious complication (p = 0.0356) and mortality (p = 0.0114). IL-8 values at admission also correlated with the presence of infectious complication (p = 0.0387). We can infer, therefore, that despite exacerbated inflammation as soon as at the admission of the patients, demonstrated by high levels of inflammatory cytokines, there is a posterior increase of immunoregulatory Treg cells at D2, and that was beneficial in relation to the faster recovery of the patients and setting up of new infection. However, immunosuppression continues to appear even after discharge of patients, as can be observed with the high percentage of CD163 + monocytes, Tregs and L-10 levels in patients on return compared to controls. In addition, many of the patients surviving the first hospitalization were hospitalized again, and some of them died the following year.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Estudos jà demonstraram que a resposta metabÃlica ao trauma cirÃrgico, queimaduras, infecÃÃo, trauma mÃsculo-esquelÃtico e sepse apresenta caracterÃsticas similares. A duraÃÃo e magnitude dessa resposta sÃo proporcionais à gravidade do trauma, estado nutricional e hormonal, sexo e idade do indivÃduo e à temperatura ambiente. A formaÃÃo de radicais livres à intensificada nestas situaÃÃes. O desequilÃbrio relacionado Ãs defesas antioxidantes em favor dos radicais livres cria uma situaÃÃo de agressividade ao organismo denominada de estresse oxidativo. O objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos da L-alanil-glutamina (L-ala-gln) e dos Ãcidos graxos poliinsaturados Ãmega-6 e Ãmega-3 sobre a resposta metabÃlica e o estresse oxidativo em ratos Wistar submetidos ao trauma operatÃrio e à sepse. Trata-se de um estudo prospectivo, controlado e comparativo em 150 ratos divididos em 9 grupos, submetidos ao estado de sepse. O trauma operatÃrio foi desencadeado por laparotomia e ligadura do mesoceco. A sepse foi induzida a partir da ligadura e punÃÃo do ceco, que produziu infecÃÃo peritonial, peritonite e sepse. Os grupos testes sofreram intervenÃÃo atravÃs da infusÃo EV de L-ala-gln e dos Ãleos poliinsaturados Ãmega-6 e Ãmega-3 que foram administrados nos 4 dias antes do ato operatÃrio, 1 vez a cada dia. Doze, 24 e 48 horas apÃs a intervenÃÃo operatÃria os grupos do estudo foram reoperados para coleta de sangue e de tecidos hepÃtico e muscular. As concentraÃÃes de piruvato, lactato, glicose, acetoacetado, 3-OH-butirato avaliaram a resposta metabÃlica e de glutationa (GSH) e TBARS, o estresse oxidativo. A anÃlise estatÃstica foi feita a partir dos resultados obtidos e expressos como mÃdia  E.P.M. (Erro PadrÃo da MÃdia) acompanhada pelo nÃmero n de observaÃÃes. A significÃncia estatÃstica foi calculada usando testes nÃo paramÃtricos. O nÃvel de significÃncia foi de 95% (p<0,05). O trauma induziu aumentos significantes nas concentraÃÃes sangÃÃneas de piruvato, lactato e glicose nas 12h e 24h e hipercetonemia 48h pÃs-trauma. A sepse induziu alteraÃÃes similares e falha da hipercetonemia adaptativa ao jejum. A oferta exÃgena de L-ala-gln no grupo trauma aumentou a gliconeogÃnese e a cetogÃnese 12, 24 e 48h pÃs-trauma com aumento da atividade dos ciclo de Cori e de glicose-alanina. A peroxidaÃÃo lipÃdica aumentou no fÃgado e houve reduÃÃo da glutationa hepÃtica e musculare em ratos sÃpticos tratados com L-ala-gln. O prÃ-tratamento utilizando soluÃÃes lipÃdicas enriquecidas com Ãmega-3 promoveu reduÃÃo nas concentraÃÃes de GSH e aumento das concentraÃÃes hepÃticas e musculares de TBARS em ratos sÃpticos. Conclui-se assim que o trauma induziu aumento no "turnover" da glicose associado ao aumento da cetonemia adaptativa do jejum. A sepse induziu alteraÃÃes semelhantes no metabolismo da glicose e falha adaptativa da cetonemia do jejum. A administraÃÃo intravenosa de L-ala-gln induziu maior glicÃlise nos tecidos perifÃricos e aumento da neoglicogÃnese e cetogÃnese hepÃticas. NÃo houve efeitos protetores efetivos e consistentes, dos nutracÃuticos estudados, contra o estresse oxidativo ou a peroxidaÃÃo lipÃdica na vigÃncia de trauma ou sepse / It has been demonstrated that metabolic response to surgical and musculoskeletal trauma, burns, infection, and sepsis share common characteristics. The duration and intensity of the response are proportional to the severity of the trauma, nutrition and hormone status, sex, age and local temperature. Generation of free radicals is more intense under these circumstances. The study was aimed at studying the effects of l-alanyl-glutamine (L-Ala-Gln) and polyunsaturated fatty acids omega-6 and omega-3 on the metabolic response and the oxidative stress in Wistar rats subjected to surgical trauma and sepsis. It is a prospective and controlled study of 150 rats distributed in 9 groups and exposed to sepsis. Surgical trauma resulted from laparotomy and mesocecal ligation. Cecal puncture and ligation induced peritoneal infection, peritonitis and sepsis. Experimental groups received daily i.v. infusions of L-Ala-Gln and omega-6 and omega-3 during four days prior to laparotomy. Arterial blood, liver and muscle samples were collected 12, 24 and 48h after laparotomy for enzymatic analyses (pyruvate, lactate, acetoacetate, 3-hydroxybutyirate, GSH and TBARS) for evaluation of metabolic response and oxidative stress. Parametric and non-parametric were used for statistical analyses. Results were expressed as meanÂSEM (standard error) accompanied by the number of observations (n). P<0.05 was accepted as significant. Trauma induced significant increase in blood concentrations of pyruvate, lactate and glucose 12 and 24h post-trauma and ketonemia. Sepsis induced similar alterations but failed to induce increased ketogenesis. L-ala-gln exogenous offer resulted in increased gluconeogenesis and ketogenesis 12, 24 and 48h pos-trauma, along with enhancement of Cori cycle and glucose-alanine cycle. Lipid peroxidation in liver increased and GSH concentrations were reduced in liver and muscle in septic rats pretreated with L-ala-gln. Omega-3 lipid emulsion pretreatment induced reduction of liver and muscle GSH and increased TBARS concentrations in septic rats. It is concluded that trauma model induced increased glucose turnover associated with fast adapting hyperketonemia. The septic model promoted similar alterations in glucose and a flaw of the fast adapting hyperketonemia. L-ala-gln intravenous administration induced increased glycolysis in peripheral tissues and increased hepatic neoglucogenesis and ketogenesis. Similar alterations were observed with omega-3 enriched lipid emulsion intravenous administration. Nutraceuticals used in this study did not promote compatible protection against oxidative stress or lipid peroxidation in trauma and sepsis models.

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In this sense, the objective of the present work was to investigate the colonization by Group B Streptococcus (GBS) of pregnant women who used the prenatal unity of the Balbina Mestrinho State Hospital Maternity, ManausAM, pregnant service unit of low risk obstetric and reference to high risk obstetric. To this end, 174 were studied pregnant women who were between the 35th and 37th weeks of pregnancy, confirmed by ultrasound or by the first day of last the period, met in the period from April to November 2012. During the prenatal query were collected demographic, socioeconomic information, previous obstetric history and sexual activity, as well as data from the actual pregnancy and vaginal and anorectal specimens were collected for bacteriological and molecular tests. Bacteriological examination was conducted the cultivation, which in the case of positivity to the streptococcus was submitted to taxonomic identification. The clinical samples with Streptococcus isolates were subjected to analyses of DNA detection by PCR. For the purposes of analysis of the results, as the proposed objectives, the colonization by EGB was determined when one or more of the diagnostic methods (cultivation, or PCR "in house") in any of the samples collected (vaginal and anorectal), provided a positivity to the EGB. For analysis of the quantitative variables were calculated the percentages of occurrence of events. For the analysis of sensitivity and specificity of diagnostic methods, as well as their positive and negative predictive values were used type 2 x 2 contingency tables. Were also calculated the respective confidence intervals at 95% (95%) and comparison of proportions, the test Chi Square (X2) Pearson, and the impossibility of implementation, we used the exact test Fisher. Among the results obtained are distinguished colonization rate by cultivation of 51.02% and 69.39% by PCR, with the latter provided a magnification of 18.37%. At the vagina cultivation method, such as collection site, it was more efficient than anorectal, although at 17.33% colonization have been obtained only in the anorectal samples. The characterization of high and low risk did not translate into a risk factor for colonization, although that was higher in high-risk pregnancies. In this series, the occurrence of urinary tract infections was statistically significant protective factor for colonization by EGB. / O Streptococcus agalactiae ou Streptococcus β-hemolítico do grupo B de Lancefield é responsável pela ocorrência de abortamento, infecção urinária, prematuridade, corioamnionite, endometrite puerperal e sepse neonatal precoce com uma alta mortalidade, principalmente entre prematuros. A taxa de colonização materna, a incidência de complicações perinatais causadas pelo EGB, a inquestionável eficácia da intervenção e a escassez de trabalhos nacionais que revele a realidade brasileira, justificam a realização de estudos que possam gerar e ampliar conhecimentos. Nesse sentido, o objetivo do presente trabalho foi de investigar a colonização por Estreptococo do grupo B (EGB) de gestantes que utilizaram o serviço de pré-natal da Maternidade Estadual Balbina Mestrinho, Manaus/AM, unidade de atendimento as grávidas de baixo risco obstétrico e de referência para alto risco obstétrico. Para tanto, foram estudadas 174 gestantes que se encontravam entre a 35ª e 37ª semanas de gestação, confirmadas pela ultrassonografia e/ou pela data da última menstruação, atendidas no período compreendido de abril a novembro de 2012. Durante a consulta de pré natal foram colhidas as informações demográficas, socioeconômicos, história obstétrica pregressa e atividade sexual, assim como, dados da gestação atual e coletadas amostras clínicas vaginais e anorretais para a realização de exames bacteriológicos e moleculares. Nos exames bacteriológicos foi realizado o cultivo, que no caso de positividade para o estreptococo foi submetido à identificação taxonômica. As amostras clínicas com os isolados de estreptococos foram submetidas às análises de detecção de DNA por técnica de PCR. Para fins de análise dos resultados, conforme os objetivos propostos, a colonização pelo EGB foi determinada quando um ou mais dos métodos diagnósticos (cultivo, ou PCR “in house”) em qualquer das amostras coletadas (vaginal e anorretal), proporcionou uma positividade para o EGB. Para análise das variáveis quantitativas, foram calculados os percentuais de ocorrência dos eventos. Para as analises de sensibilidade e especificidade dos métodos diagnósticos, assim como seus valores preditivos positivos e negativos, foram utilizadas tabelas de contingência do tipo 2x2. Também foram calculados os respectivos Intervalos de Confiança ao nível de 95% (IC95%) e na comparação das proporções foi utilizado o teste do Chi Quadrado (X2) de Pearson, sendo que na impossibilidade da aplicação do mesmo, foi utilizado o teste exato de Fisher. Entre aos resultados obtidos destaca-se uma taxa de colonização de 51,02% pelo cultivo e de 69,39% pela PCR, sendo que essa última forneceu uma ampliação de 18,37%. Pelo método de cultivo a vagina, como local de coleta, mostrou-se mais eficiente que anorretal, apesar de que em 17,33% a colonização ter sido obtida apenas nas amostras anorretal. A caracterização de alto e baixo risco não se traduziu em fator de risco para a colonização, apesar de essa ter sido maior nas gestações de alto risco. Na presente casuística, a ocorrência de infecções do trato urinário apresentou significância estatística como fator de proteção à colonização pelo EGB.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / O lÃtex da planta medicinal Calotropis procera (Apocynaceae) possui molÃculas com diferentes atividades farmacolÃgicas, dentre estas, prÃ- e antiinflamatÃria. Neste trabalho, o efeito imunomodulatÃrio da fraÃÃo de proteÃnas solÃveis do lÃtex (PL) foi investigado em modelos experimentais de sepse induzida por CLP e por inoculaÃÃo de S. Typhimurium. Aspectos bioquÃmicos das proteÃnas do lÃtex foram investigados e parÃmetros bioquÃmicos, hematolÃgicos e histopatolÃgicos foram determinados em animais experimentais. PL exibiu um significativo efeito protetor nos animais. Uma dose de 30 mg/Kg levou à sobrevivÃncia de atà 100%, comparada com 100% de mortalidade no grupo de animais infectados e nÃo tratados (grupo Salmonella). Este efeito foi somente observado quando PL foi administrado 24 horas antes da induÃÃo da sepse. PL nÃo apresentou atividade antibacteriana in vitro sugerindo um mecanismo de aÃÃo indireto, possivelmente intervindo nos processos imunes. A populaÃÃo microbiana no fÃgado, baÃo e fluido peritoneal - local do foco infeccioso - estava similar entre todos os grupos, 4 e 24 horas apÃs inoculaÃÃo bacteriana. No sangue, entretanto, a quantidade de bactÃrias viÃveis estava reduzida apenas nos animais tratados com proteÃnas do lÃtex. O efeito protetor de PL foi revisto atravÃs de suas trÃs sub-fraÃÃes protÃicas, denominadas de PI, PII e PIII, obtidas atravÃs de fracionamento por cromatografia de troca iÃnica em coluna de CM-Sepharose a pH 5,0. As trÃs sub-fraÃÃes protÃicas apresentaram efeito protetor e de forma similar. Nem o tratamento tÃrmico de PL (100 ÂC, 30 min.) ou inibiÃÃo de suas proteases endÃgenas com iodoacetamida alterou o efeito protetor observado. O Ãxido nÃtrico (NO), um importante sinalizador molecular, estava aumentado no soro de animais do grupo Salmonella enquanto que animais protegidos com doses de PL e PI apresentaram nÃveis similares ao controle apÃs 24 horas da infecÃÃo. Este resultado corroborou com a observaÃÃo de que animais com sepse letal apresentaram falÃncia na migraÃÃo de neutrÃfilos para o foco infeccioso enquanto que, de forma evidente, animais tratados com PL ou PI favoreceram o influxo de cÃlulas para a cavidade peritoneal. AlÃm disto, nestes animais, o nÃvel de NO estava aumentado no foco infeccioso, uma provÃvel atividade dos neutrÃfilos presentes como parte de sua atividade microbicida. A atividade da adenosina desaminase (ADA) mensurada no foco infeccioso, apÃs 4 e 24 horas de infecÃÃo, estava aumentada apenas nos animais tratados com PL ou PI, e inalterada em animais do grupo Salmonella. Plaquetopenia foi observada em animais com sepse, mas nÃo em animais protegidos com PL ou PI. Neutrofilia e linfopenia ocorreram em animais do grupo Salmonella. Neutrofilia seria concordante com o elevado teor de NO, um inibidor da migraÃÃo de neutrÃfilos, enquanto que a linfopenia à parte da imunossupressÃo estabelecida na sepse. Em animais tratados com PL ou PI foi observada neutrofilia sete dias apÃs a infecÃÃo, sugerindo um estÃmulo na hematopoiese. Linfopenia, observada no inÃcio da sepse (24 h), sà ocorreu aos sete dias nos animais tratados com PL ou PI. Atividade de transaminase glutÃmico oxalacÃtica estava aumentada em todos os grupos. Transaminase glutÃmico pirÃvica nÃo teve atividade alterada. A atividade da lactato desidrogenase estava aumentada em todos os grupos. AnÃlises histopatolÃgicas do fÃgado e baÃo mostraram que os danos teciduais causados pela sepse foram retardados nos animais tratados com PL, como observado apÃs sete dias. A anÃlise integrada de todos os resultados sugere que as proteÃnas do lÃtex modulam a resposta imunoinflamatÃria por mecanismo indireto, revertendo à falÃncia da migraÃÃo de neutrÃfilos causada pela sepse letal e, desta forma, induzem uma resposta imunolÃgica ainda nÃo esclarecida, que permite a sobrevivÃncia dos animais, mesmo sob infecÃÃo. Os resultados sugerem que a modulaÃÃo de NO estaria diretamente envolvida no efeito protetor final observado. As propriedades farmacolÃgicas de PL previamente descritas em modelos clÃssicos de inflamaÃÃo sÃo agora confirmadas em um modelo de resposta inflamatÃria sistÃmica resultante de um processo infeccioso previamente estabelecido. / Latex of the medicinal plant Calotropis procera (Apocynaceae) possesses molecules displaying different pharmacological activities, including pro- and anti-inflammatory. In this study immune inflammatory modulation of the soluble protein fraction (LP) recovered from the latex was investigated in experimental models of sepsis induced by CLP and inoculation of the S. Typhimurium. Biochemical aspects of laticifers proteins were investigated and biochemical, pharmacological and histopathological parameters were evaluated in experimental animals. LP protected animals and a unique dose (30 mg/Kg; i.p.) lead to 100% survival while non-treated infected animals (Salmonella group) reached 100% mortality within 24 h. Protection was only observed when LP was given 24 earlier of infection. LP did not exhibit in vitro bactericide activity suggesting indirect mechanism of action, probably by immune modulation. After 4 and 24 h of infection bacteria was similarly disseminated in liver, spleen and peritoneal fluid, local of bacteria inoculum. However, in blood viable bacteria was reduced only in animals given laticifers proteins. The protective effect of LP was also observed in its three sub-fraction, denominated of PI, PII and PIII, obtained after protein fractionation by ion exchange chromatography on a CM-Sepharose performed at pH 5.0. Neither, heat-treatment (100 &#61616;C, 30 min) nor inhibition of its endogenous proteolytic enzymes, by iodoacetamide, eliminated the protective effect of LP. Nitric oxide (NO) an important signaling molecule was augmented in serum of non-treated animals whereas it was unaltered in control and LP/PI-treated animals 24 h after infection. Increasing of NO in serum is known to directly contribute to inhibit neutrophil migration in septic animals. Accordingly, failure of neutrophil migration to the infectious focus in septic animals was confirmed. Conversely, in animals given LP and PI, influx of neutrophils was evident. In addition, NO was also elevated in the infectious focus of LP/PI treated animals, probably due neutrophil activity as part of their microbicidal activity. Activity of adenosine deaminase (ADA) was measured locally after 4 and 24 h of infection was initiated. ADA was augmented in LP/PI treated animals and unaltered in non treated animals. Thrombocytopenia was observed in non treated animals but not in LP/PI protected animals. Neutrophilia and lymphopenia were documented in non-treated animals. Neutrophilia would result of high NO content in serum, which inhibits neutrophil migration and lymphopenia is part of immune suppression caused by sepsis. Neutrophilia was observed 7 days after infection in animals given LP/PI, suggesting a hematopoiesis stimulus. Lymphopenia first observed (24 h) in septic animals was only detected after 7 days in PL/PI treated animals. Activity of oxalacetic-glutamic transaminase was altered in all groups while glutamic-pyruvic transaminase not. Lactate dehydrogenase was augmented in all groups. Histopathological examination of liver and spleen revealed tissue damage caused by sepsis, but these alterations appeared later (7 days) in PL/PI-treated animals. Results reported in this study suggest that PL modulates immune inflammatory activity in septic animals by an indirect mechanism that remains to be investigated. Activity of LP leads to animal survival, even under infection. It is proposed that LP modulates NO synthesis, reducing NO levels in serum of infected animals and abolishing the failure of neutrophil migration. The pharmacological properties of LP previously described in classical models of inflammation, is now confirmed in a model of systemic inflammatory response elicited by microbial infection.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / As proteases de lÃtex tÃm atraÃdo atenÃÃo devido à habilidade de exibir atividades semelhantes à trombina e à plasmina. Neste estudo, as proteÃnas do lÃtex das plantas Calotropis procera (CpPL), Cryptostegia grandiflora (CgPL) e Plumeria rubra (PrPL) foram avaliadas em termos destas atividades. Para tanto, as amostras foram investigadas quanto as suas atividades fibrinogenolÃticas e fibrinolÃticas, em plasma humano e por incubaÃÃo com fibrinogÃnio humano atravÃs da medida do tempo de coagulaÃÃo, ensaios eletroforÃticos, espectrofotomÃtricos, ou de difusÃo em gel de agarose. O efeito de CpPL in vivo, sobre o tempo de coagulaÃÃo no plasma de camundongos saudÃveis ou sÃpticos, que foram experimentalmente infectados com a bactÃria Salmonella enterica sorotipo Typhimurium, tambÃm foi estudado. Grupos de cinco camundongos foram tratados com CpPL (30 mg/Kg), S. enterica (107 UFC/mL) ou CpPL 24 h antes da inoculaÃÃo bacteriana. Depois do sacrifÃcio dos animais, as amostras de sangue foram examinadas quanto ao tempo de coagulaÃÃo, conteÃdo de plaquetas e perfil protÃico. As fraÃÃes protÃicas de C. procera exibindo atividade proteolÃtica foram capazes de hidrolisar o fibrinogÃnio de forma similar à trombina, enquanto que as fraÃÃes protÃicas de Cr. grandiflora exibindo atividade proteolÃtica foram capazes de hidrolisar o fibrinogÃnio de forma similar à plasmina. As amostras exibiram atividade fibrinogenolÃtica de forma dose e tempo dependente, mas nÃo foram capazes de dissolver totalmente o coÃgulo de fibrina. As atividades fibrinogenolÃticas foram eliminadas pela inibiÃÃo das proteases dos lÃtices com E-64, um inibidor de protease cisteÃnica. Pepstatina, PMSF e EDTA nÃo se mostraram inibitÃrios. O tempo de formaÃÃo do coÃgulo no plasma de camundongos sÃpticos e o conteÃdo de plaquetas foram consistentemente reduzidos quando comparados aos animais saudÃveis. CpPL exibiu efeitos antagonistas. Foi capaz de reverter, estatisticamente, o efeito da sepse no tempo de formaÃÃo do coÃgulo associado à preservaÃÃo do conteÃdo de plaquetas. Contudo, CpPL exibiu efeito oposto em camundongos nÃo sÃpticos, induzindo rÃpida formaÃÃo do coÃgulo, comparado aos animais saudÃveis, porÃm sem alterar o conteÃdo de plaquetas. Os resultados relatados neste trabalho confirmam a atividade fibrinogenolÃtica associada a proteases cisteÃnicas de lÃtex e mostram uma efeito protetor in vivo muito intrigante de CpPL no conteÃdo de plaquetas em animais sÃpticos, com aparentes efeitos benÃficos contra a coagulaÃÃo intravascular disseminada, um evento crucial associado à sepse letal. Este efeito, porÃm, nÃo foi observado quando CpPL foi dado aos animais saudÃveis. / Latex proteases have grown in attention because of their ability to exhibit both thrombin and plasmin-like effects. In this study, the plant latex proteins Calotropis procera (CpLP), Cryptostegia grandiflora (CgLP) and Plumeria rubra (PrLP) were investigated in terms of these activities. For both samples were investigated for their fibrinogenolytic and fibrinolytic activity in human plasma and by incubation with human fibrinogen by measuring the clotting time, electrophoretic or spectrophotometric assays and diffusion in agarose gel. In vivo effect of CpLP on clot formation of plasma of healthy and septic mice that have been experimentally infected with Salmonella enterica serovar Typhimurium was also studied. Groups of five mice were treated with CpLP (30 mg/Kg), S. enterica (107 CFU/mL) or CpLP 24 h prior bacteria. After sacrificing animals, blood samples were examined for coagulation time, platelet content and protein profile. The protein fractions of C. procera exhibiting proteolytic activity were capable to hydrolyze fibrinogen similar to thrombin, while the protein fractions of Cr. grandiflora exhibiting proteolytic activity were capable to hydrolyze fibrinogen similar to plasmin. The samples exhibited fibrinogenolytic activity in a dose and time manner, but were not able to dissolve the fibrin clot. Procoagulant activity was eliminated by inhibition of latex proteases with cysteine proteinase inhibitor E-64. Pepstatin, PMSF and EDTA were not inhibitory. Time of clot formation of plasma in septic mice and platelet content were consistently reduced as compared to healthy animals. CpLP exhibited antagonistic effects. It statistically reversed the effects of sepsis on clot-time formation associated to preservation on platelet content. However, CpLP exhibited opposite effect on non-septic mice, inducing faster clot formation, compared to healthy animals but without changing platelet content. Results reported in this work confirm fibrinogenolytic activity associated to cysteine proteases of latex and show a very intriguing in vivo protective activity of CpLP on platelet content on septic animals with apparent benefit effect against disseminated vascular coagulation, a pivotal event associated to lethal sepsis. This effect was however not observed when CpLP was given to healthy animals.

Evidências sugerem que os leucotrienos (LTs) e óxido nítrico (NO) podem apresentar um papel na liberação de vasopressina (AVP) que ocorre durante a fase inicial da sepse. Além disso, é conhecido que os LTs afetam a produção de NO. Nosso objetivo foi analisar o efeito do MK-886, um inibidor da síntese de LTs, na produção de NO e na liberação de AVP durante sepse experimental. Ratos Wistar receberam injeções i.p. de MK-886 (1.0, 2.0 ou 4.0mg/kg) ou veículo (DMSO 5%) 1h antes da ligadura e perfuração cecal (CLP) ou operação fictícia. Em um grupo a taxa de sobrevida foi monitorada durante 3 dias. Em outro grupo, os animais foram decapitados em 0, 4 e 24h após CLP ou operação fictícia, e o sangue foi coletado para a determinação da osmolalidade, sódio sérico, hematócrito, proteínas plasmáticas, nitrato sérico e cis-LTs e AVP plasmáticos. Além disso, foi avaliado o recrutamento de neutrófilos para a cavidade peritoneal dos ratos. O CLP aumentou os níveis de nitrato sérico, perda de proteínas, hematócrito e AVP plasmática 4h após a cirurgia, além disso, causou uma mortalidade de 80% após 3 dias de observação. Os níveis de sódio sérico e a osmolalidade apresentaram reduções pequenas, enquanto os níveis de cis-LTs e o recrutamento de neutrófilos permaneceram inalterados. O pré-tratamento com qualquer concentração de MK-886 não diminuiu a produção de nitrato sérico, a perda de proteínas plasmáticas e o hematócrito. Além disso, não alterou os níveis de sódio sérico, osmolalidade, cis-LTs plasmáticos, o recrutamento de neutrófilos e a taxa de sobrevida. Porém, a liberação de AVP foi afetada de uma maneira dose-dependente na fase inicial da sepse. Na fase tardia, a AVP plasmática se manteve em concentrações basais e a administração de MK-886 não alterou essas concentrações. Os resultados sugerem que o MK-886, um inibidor da síntese de leucotrienos, pode afetar a liberação de vasopressina na fase inicial da sepse e esse efeito parece ser independente da produção de óxido nítrico. / Evidence suggests that leukotrienes (LTs) and nitric oxide (NO) may have a role in vasopressin (AVP) release that occurs during the early phase of sepsis. Moreover, LTs are thought to affect NO production. Our objective was to analyze the effect of MK-886, a LTs synthesis inhibitor, on NO production and AVP release. Male Wistar rats received i.p. injections of MK-886 (1.0, 2.0 or 4.0mg/kg) or vehicle (DMSO 5%) 1h before cecal ligation and puncture (CLP) or sham operation. In one group the survival rate was monitored for 3 days. In another group, the animals were decapitated at 0, 4 and 24h after CLP or sham operation, and blood was collected for osmolality, serum sodium, hematocrit, plasma protein, serum nitrate and plasma cys-LTs and AVP levels measurement. Moreover, was evaluated neutrophil recruitment into the peritoneal cavities of rat. CLP increased serum nitrate levels, protein leakage, hematocrit, plasma AVP 4h after CLP, besides causing 80% mortality after 3 days of observation. The serum sodium levels and osmolality presented small reduction, while cys-LT levels and neutrophil recruitment remained unchanged. Pretreatment with any dose of MK-886 did not diminish nitrate production, protein leakage and hematocrit. Besides, not did it alter serum sodium levels, osmolality, plasma cys-LT levels and neutrophil recruitment. It also did not affect survival rate. AVP release was, however, affected in a dose-dependent manner in the early phase of sepsis. In the final phase of sepsis, plasma AVP levels remained basal and the administration of MK-886 did not alter these hormone levels. The results suggest that the MK-886, a LTs synthesis inhibitor, may affect the release of vasopressin in the early phase of sepsis and that this effect seems to be independent of nitric oxide production.