La tuberculose (TB) est une maladie infectieuse causée par M. tuberculosis. En 2009, la mortalité était élevée avec 1,7 millions de décès enregistrés dans le monde. La co-infection par le VIH, notamment en Afrique, et les tuberculoses à bacilles multi-résistants aux antibiotiques, rendent la maîtrise de la pandémie encore plus complexe. Les tests actuels de diagnostic présentent des lacunes notamment en terme de sensibilité pour la microscopie qui est le test le plus utilisé, ou en terme de praticité, en ce qui concerne la culture qui est le test de référence. Le développement de nouveaux tests pour le diagnostic de la TB active représente un enjeu majeur de nos sociétés modernes. Les tests immunologiques, en particulier les tests sérologiques actuellement disponibles, présentent une alternative aux tests bactériologiques couramment utilisés mais leurs performances restent faibles. Pour cela, il est indispensable de cibler de nouveaux biomarqueurs pour développer un test efficace, sensible, rapide et peu onéreux. C'est dans de cadre que s'inscrit ce travail de thèse.Nous rapportons dans ce mémoire, la recherche de marqueurs innovants dans le cadre de la mise au point d'un test de diagnostic de la tuberculose. Nous avons ciblé plusieurs marqueurs protéiques (OmpATb, LipY, Rv0183, Rv1984c et Rv3452) et un marqueur glycolipide, le tréhalose-6,6'-dimycolate (TDM). Parmi ces candidats, plusieurs présentent de réelles performances sur le plan diagnostique. Parallèlement à cette étude, nous avons mis au point une technique de séparation des différentes formes de TDM. La séparation des différentes formes de TDM devrait permettre de déterminer de façon précise les fonctions de ces composants majeurs de la paroi de M. tuberculosis et d'évaluer leur potentiel en terme de diagnostic.Mots clés : tuberculose, sérodiagnostic, détection antigène, détection anticorps, enzymes lipolytiques, glycolipide. / Tuberculosis (TB) is an infectious disease caused by M. tuberculosis. In 2009, mortality was high with 1,7 million of recorded deaths in the world. The co-infection by the HIV, in particular in Africa, and tuberculosis with multi-resistant bacilli to antibiotics, make the control of pandemia more complex. The current tests of diagnosis present gaps, in particular, in term of sensitivity for microscopy, which is currently the used test, or in term of praticity, for the culture which is considered as the gold standard.The development of new tests for the diagnosis of TB active represents a major challenge of our modern societies. The immunological tests, in particular the serologic tests available, can present an alternative to the currently bacteriological tests. However, their performances are not sufficient. That's why, it is essential to target new biomarkers which permit to establish an effective, sensitive, fast and cheap test. It is in this context that my study takes place.We report in this memory, the research of innovating markers for the development of a diagnostic test of tuberculosis. We targeted several protenic markers (OmpATb, LipY, Rv0183, Rv1984c and for Rv3452) and a glycolipid marker, the trehalose-6,6'-dimycolate (TDM). Among these candidates, several shown good performances for active TB diagnosis. In parallel to this study, a technique of separation of the various forms of TDM was developed. The separation of the various forms of TDM will permit to study their role on the biological activities and evaluate their potential in term of diagnosis.Key words: tuberculosis, serodiagnostic, antigen detection, antibody detection, lipolytic enzymes, glycolipid.

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A Leishmaniose visceral é um problema que cresce no Estado de São Paulo afetando o homem e o cão. Os exoantígenos da membrana das leishmanias são liberados no meio de cultura. Os exoantígenos são importantes na indução da imunidade mediada pelas células T e B estimulando a produção elevada de anticorpos. Realizamos uma avaliação comparativa por ELISA e Immunoblotting de exoantígenos e antígenos totais de L. (L.) amazonensis, L. (V.) braziliensis e L. (L.) chagasi, no diagnóstico da leishmaniose visceral humana e canina. Obteve-se por ELISA sensibilidade de 100% para ambos os preparados antigênicos independente da espécie de Leishmania. A melhor especificidade em humanos e cães foi com os exoantígenos. O exoantígeno da L. (L.) chagasi teve a melhor especificidade e média de absorbâncias comparadas aos das outras espécies (p<0.005). Para o hospedeiro humano o ELISA com exoantígenos, não discriminou pacientes com leishmaniose cutânea e ou mucocutânea. O Immublotting dos exoantígenos de L. (L.) chagasi (IBleish) apresentou 100% de sensibilidade e especificidade para os cães. Os dados do IBleish-L. (L.) chagasi demonstraram a possibilidade de sua utilização como método confiável para a confirmação do diagnóstico da leishmaniose canina. / The visceral leishmaniasis is a new problem that grows in the State of São Paulo, affecting men and dogs. The exoantigens from the membrane of the Leishmania, are released out of culture medium. The exoantigens are important in the induction of immunity mediated by T and B cells, stimulating the production of antibodies. This work was carried out an evaluation of ELISA and Immunoblotting using comparatively exoantigens and total antigens of L. (L.) amazonensis, L. (V.) braziliensis and L. (L.) chagasi for the diagnosis of canine and human visceral leishmaniasis. ELISA sensitivity was 100% for all different antigens, independent of the species of Leishmania employed. The best specificity for both human and dogs were obtained with exoantigens. Exoantigen from L. (L.) chagasi was what showed the best specificity and mean absorbance compared to those of other species (p<0.05). The ELISA with exoantigens for the human host not discriminate individuals with leishmaniasis cutaneous or mucocutaneous. The Immunoblotting that used the exoantigens of L. (L.) chagasi (IBleish) showed 100% sensitivity and specificity for the dogs. The IBleish-L. (L.) chagasi showed the possibility of its use as a reliable method to confirm the diagnosis of canine leishmaniasis.

La mucoviscidose est la maladie génétique la plus fréquente dans la population caucasienne. Le genre Scedosporium se situe au deuxième rang parmi les champignons filamenteux isolés des expectorations dans ce contexte. Au niveau pulmonaire, les colonisations/infections entraînent le recrutement de phagocytes qui induisent un stress oxydatif normalement délétère pour les pathogènes. Pour se défendre, ceux-ci ont développé des systèmes antioxydants, notamment diverses enzymes. Ce travail de thèse visait à étudier la réponse au stress oxydatif chez Scedosporium. Tout d’abord, la capacité à germer en présence d’oxydants a été évaluée. Par la suite, trente-trois gènes potentiellement impliqués dans la défense contre le stress oxydatif ont été identifiés. Leur expression en présence d’oxydants et en co-cultures avec des phagocytes suggère un rôle majeur, notamment pour une catalase, une peroxyrédoxine et deux thiorédoxine réductases. Par ailleurs, un mutant défectif pour un gène codant une superoxyde dismutase (SOD) pariétale et spécifique des spores a été produit. L’auranofin, un inhibiteur des thiorédoxine réductases, présente une activité vis-à-vis des Scedosporium et un effet additif avec des triazolés. Un test ELISA a été développé pour le sérodiagnostic des scédosporioses, utilisant une catalase et une Cu/Zn-SOD recombinantes. Ce test sensible et spécifique permet de distinguer les infections à Scedosporium de celles à Aspergillus fumigatus et des colonisations à Scedosporium. Au final, ces résultats indiquent un rôle majeur des enzymes antioxydantes chez Scedosporium, qui pourraient être de véritables facteurs de virulence et donc de nouvelles cibles thérapeutiques. / Cystic fibrosis (CF) is the most common genetic disease in Caucasian populations. The Scedosporium genus ranks the second among the filamentous fungi colonizing the airways of CF patients. In the respiratory tract, colonizations/infections lead to the recruitment of phagocytes which produce an oxidative stress, usually deleterious for pathogens. To defend themselves, pathogens have developed protective antioxidant systems, especially various enzymes. This thesis aimed to study the oxidative stress response in Scedosporium species. First, capacity of several Scedosporium isolates to germinate upon oxidative stress conditions was evaluated. Then, thirty-three genes potentially involved in protection against the oxidative stress were identified. Their overexpression in response to oxidants and in co-cultures with phagocytes suggested a crucial role, especially for one catalase, one peroxiredoxin and the two thioredoxin reductases. A mutant defective for the gene encoding a superoxide dismutase (SOD) anchored to the cell wall and specific for the conidia was produced. Auranofin, a thioredoxin reductase inhibitor, exhibits little anti-Scedosporium activity and an additive effect with triazole drugs. An ELISA was developed for serodiagnosis of scedosporiosis, using recombinant proteins derived from one catalase and a Cu/Zn-SOD. This sensitive and specific assay allows to differentiate Scedosporium infections from Aspergillus fumigatus infections and Scedosporium colonizations. Finally, these results indicate a crucial role of antioxidant enzymes in Scedosporium species, which could therefore be considered as virulence factors and as possible new therapeutic targets.

A magnitude e as modificações resultantes da epidemia de Aids no Brasil levaram o Ministério da Saúde a recomendar, a partir de 2001, a incorporação do diagnóstico sorológico da infecção pelo HIV em serviços de atenção básica da rede pública de saúde, visando a universalidade e a ampliação do acesso da população a esses exames. O processo diagnóstico, no caso da AIDS, envolve para além da simples disponibilização da testagem; cobre demandas de prevenção, profilaxia, tratamento e referências adequadas para o interior do sistema assistencial. O estudo realizado teve por objetivo investigar como vem se dando a oferta deste diagnóstico, previsto de estar acontecendo acompanhado de aconselhamento pré e pós-teste, usando como lócus um conjunto de serviços da rede básica de saúde no Município do Rio de Janeiro. Do tipo descritivo-analítico, o trabalho utilizou-se de uma abordagem metodológica qualitativa, realizando entrevistas semi-estruturadas com vinte e dois profissionais de saúde de diversas categorias, envolvidos nos processos de testagem anti-HIV, e com três gestores, buscando compreender como vem sendo ofertado esse cuidado em saúde. O exame do material obtido permitiu a identificação das seguintes categorias analíticas: oferta do teste na rede de atenção básica e dilemas relacionados a esse processo; ações de aconselhamento que acompanham a testagem; resultados do teste anti-HIV e dificuldades na sua comunicação aos usuários; dimensões estrutural e organizacional e gestão do processo de testagem; capacitação dos recursos humanos. Identificou-se que o processo de oferta do teste anti-HIV se circunscreve frequentemente à representação da doença e é necessária maior interlocução na relação profissional de saúde/usuário, considerando a intersubjetividade dos sujeitos envolvidos. Este processo diagnóstico demanda técnicas como apoio, acolhimento e escuta qualificada das necessidades de saúde, entendidas para além das queixas biológicas dos sujeitos, que nem sempre estão se fazendo presentes nos serviços de atenção investigados. Como desafio premente na oferta do diagnóstico anti-HIV, destaca-se que o aconselhamento deve ser uma ferramenta utilizada e reforçada no contexto dos serviços de saúde que atendem pacientes com DST/Aids. Outro desafio, além da capacitação qualificada dos recursos humanos envolvidos, é necessidade de permanente avaliação do processo de oferta que vem sendo oferecido nos serviços da rede básica, que possibilite repensar as atividades de prevenção, o acolhimento e a escuta, e o compartilhamento de idéias entre profissionais que atuam no cotidiano das unidades de saúde e os gestores locais. A pluralidade de questões no fazer em saúde exige que os serviços de saúde e seus responsáveis promovam novos arranjos para que a oferta do teste anti-HIV, como ação de saúde, seja realizada com base na humanização, na integralidade e no respeito aos direitos de cidadania, contribuindo para que a melhoria do atendimento na rede básica se concretize com qualidade.

Dentre os países da América Latina, o Brasil é o país que mais recebe doações de sangue em volume, alcançando mais de 3,5 milhões de bolsas anualmente só na hemorrede pública. Para que possam ocorrer as transfusões e processamento de hemoderivados é mandatória a realização de testes para detecção de agentes patológicos. Neste cenário está inserido o Instituto de Biologia Molecular do Paraná (IBMP) que, em parceria com a FIOCRUZ, é responsável pelo fornecimento do kit NAT destinado a detecção dos vírus da imunodeficiência humana (HIV), hepatite C (HCV) e hepatite B (HVB) à hemorrede pública brasileira. Visando implementar melhorias e novas tecnologias aos processos existentes, o Instituto adquiriu a licença para utilização da técnica de gelificação na produção de kits para diagnóstico. Esta técnica propõe a estabilização de biomoléculas sem afetar sua funcionalidade, proporcionando a redução de custos de produção, além de possibilitar que os kits sejam armazenados e transportados à temperatura ambiente, aspecto fundamental para simplificar sua cadeia logística e viabilizar a distribuição destes produtos em áreas remotas do Brasil e do mundo. No entanto, ainda há escassez de trabalhos que avaliem aspectos financeiros da implementação desta técnica na indústria. Cabe salientar ainda que a realização de testes em campo seria complexa e demandaria um alto investimento. Uma alternativa para realizar este tipo de avaliação é pelo uso de simulação computadorizada do processo. As ferramentas de simulação possibilitam avaliar diferentes cenários, obtendo dessa forma informações imprescindíveis para melhoria operacional e para tomada de decisões. Neste trabalho, são avaliados os impactos da implementação da técnica de gelificação no custo direto de produção de insumos para diagnóstico por meio de simulação discreta usando o software FlexSim®. Dados obtidos a partir de dezesseis cenários simulados usando a nova tecnologia foram comparados com registros históricos do IBMP na produção de insumos para diagnóstico pelo processo convencional. Dentre os cenários avaliados, seis atenderam às restrições impostas pelo processo e em todos foi possível verificar a redução nos custos diretos, que variou de 3,73% até 5,41% em relação às condições atuais. As reduções de custo ocorreram principalmente devido a reduções nos custos com matéria-prima, que alcançaram economia de 4,1% e nos custos com mão de obra, dada redução do número de operadores no processo. Ademais, os resultados indicam que a implementação da tecnologia propicia melhor aproveitamento da estrutura física da planta sem que ocorra saturação de linhas de processamento. Portanto, baseado em modelos de simulação, este trabalho demonstra a viabilidade do emprego da tecnologia de gelificação no IBMP em termos de custo direto de produção de insumos para diagnóstico. / Among Latin American countries, Brazil is the one that receives more blood donations in volume, reaching up to 3.5 million blood bags in the public blood donation network annually. In order to enable transfusions and processing of blood-derived products, it is mandatory to test the blood against pathologic agents. In association with the Oswaldo Cruz Foundation (FIOCRUZ), the Molecular Biology Institute of Paraná (IBMP) supplies the kit NAT for the detection of the human immunodeficiency, hepatitis B and C viruses (HIV, HBV and HCV) to the Brazilian public blood donation network. Aiming at the implementation of improvements and the introduction of new technologies to its processes, the Institute acquired a license to use the gelification technique in the production of diagnostic kits. The gelification technique proposes the stabilization of biomolecules without harming their functionality, while reducing production costs and allowing the products to be stored and transported at room temperature. It is a key aspect to simplify the logistics chain used to distribute the kit, allowing it to reach World`s remote areas. However, there is still a lack of published studies evaluating financial aspects of the implementation of this technique in the industry. It is worth emphasizing the cost to conduct field experiments of this kind of implementation. One alternative for such an evaluation is by the use of process computer simulation. Simulation tools could be used to analyze different scenarios, providing valuable information for process improvement and decision-making. In this work, the impacts of the gelification technique implementation in the direct production cost of reagents for diagnostic were evaluated using discrete simulation with FlexSim®. Data obtained from sixteen simulated scenarios deploying gelification were compared with historic records of the production of reagents for diagnosis using the conventional process at IBMP. Six of the sixteen evaluated scenarios satisfied the restrictions imposed by the process and all of them indicated a reduction of direct production costs, varying from 3.73% to 5.41% when compared to current conditions. The cost reduction is mainly associated to lower expenses with raw materials, representing savings of up to 4.1% and to the reduction in the number of operators needed. Additionally, results indicate that the implementation of the new technology leads to a better use of the physical structure of the production facility without saturating processing lines. Therefore, based on simulation models, this work shows that the employment of the gelification technology in the manufacturing process of diagnostic reagents at IBMP is viable in terms of direct production costs.

A magnitude e as modificações resultantes da epidemia de Aids no Brasil levaram o Ministério da Saúde a recomendar, a partir de 2001, a incorporação do diagnóstico sorológico da infecção pelo HIV em serviços de atenção básica da rede pública de saúde, visando a universalidade e a ampliação do acesso da população a esses exames. O processo diagnóstico, no caso da AIDS, envolve para além da simples disponibilização da testagem; cobre demandas de prevenção, profilaxia, tratamento e referências adequadas para o interior do sistema assistencial. O estudo realizado teve por objetivo investigar como vem se dando a oferta deste diagnóstico, previsto de estar acontecendo acompanhado de aconselhamento pré e pós-teste, usando como lócus um conjunto de serviços da rede básica de saúde no Município do Rio de Janeiro. Do tipo descritivo-analítico, o trabalho utilizou-se de uma abordagem metodológica qualitativa, realizando entrevistas semi-estruturadas com vinte e dois profissionais de saúde de diversas categorias, envolvidos nos processos de testagem anti-HIV, e com três gestores, buscando compreender como vem sendo ofertado esse cuidado em saúde. O exame do material obtido permitiu a identificação das seguintes categorias analíticas: oferta do teste na rede de atenção básica e dilemas relacionados a esse processo; ações de aconselhamento que acompanham a testagem; resultados do teste anti-HIV e dificuldades na sua comunicação aos usuários; dimensões estrutural e organizacional e gestão do processo de testagem; capacitação dos recursos humanos. Identificou-se que o processo de oferta do teste anti-HIV se circunscreve frequentemente à representação da doença e é necessária maior interlocução na relação profissional de saúde/usuário, considerando a intersubjetividade dos sujeitos envolvidos. Este processo diagnóstico demanda técnicas como apoio, acolhimento e escuta qualificada das necessidades de saúde, entendidas para além das queixas biológicas dos sujeitos, que nem sempre estão se fazendo presentes nos serviços de atenção investigados. Como desafio premente na oferta do diagnóstico anti-HIV, destaca-se que o aconselhamento deve ser uma ferramenta utilizada e reforçada no contexto dos serviços de saúde que atendem pacientes com DST/Aids. Outro desafio, além da capacitação qualificada dos recursos humanos envolvidos, é necessidade de permanente avaliação do processo de oferta que vem sendo oferecido nos serviços da rede básica, que possibilite repensar as atividades de prevenção, o acolhimento e a escuta, e o compartilhamento de idéias entre profissionais que atuam no cotidiano das unidades de saúde e os gestores locais. A pluralidade de questões no fazer em saúde exige que os serviços de saúde e seus responsáveis promovam novos arranjos para que a oferta do teste anti-HIV, como ação de saúde, seja realizada com base na humanização, na integralidade e no respeito aos direitos de cidadania, contribuindo para que a melhoria do atendimento na rede básica se concretize com qualidade.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2017-06-14T18:52:23Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Jane Martins Silveira - 2017.pdf: 5521995 bytes, checksum: 8a8b8599ca6b8a78ec5bea46163bf849 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2017-06-29T18:26:42Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Jane Martins Silveira - 2017.pdf: 5521995 bytes, checksum: 8a8b8599ca6b8a78ec5bea46163bf849 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-29T18:26:42Z (GMT). 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Through this study, it is possible to describe the target of this service by getting the percentage of users referred to the SAE; Data on the epidemiological profile of its users: sociodemographic profile, way of the transmission and clinical and laboratory profile, and the achievement of the millennium goals for 90% of people diagnosed with HIV in current treatment and 90% of those in treatmento with viral suppression, these goals of the United Nations-UN established a commitment to ensure the sustainability of our planet by signing with 192 countries the "Millennium Declaration" and one of its purposes was the fight against HIV/AIDS. The study targeted to answer the question "What is the profile of SAE-Goiânia, how long time is the demand of the city, who is its user, how is this people exposed and how to reach the mundial goals in the service?" It was a quantitative and descriptive. Data were collected from 182 SAE users in the secondary banks of the systems: Information System of Notification Appeal (SINAN-2015), Logistic Control System for Antiretroviral Medicines (SICLON-2016), Ambulatory Care System (SICAA-2016), files and documents from the SAE Pharmacy of the Reference Center for Diagnosis and Therapeutics (CRDT-2016). The results were: about the percentage of patients reffered to the SAE was 17.38% of the demand for diagnosed users living in Goiânia city, about the epidemiological profile the predominance of male gender was of 92.31%, the age group in both genders was between 20 to 34 years old in 65.4%. The most reported schooling was high school (30.2%) followed by not completed college education (17.0%). The most self-reported race in this study was brown (42.9%). About the behavioral aspects there was the predominance of heterosexual relations among women (78.6%) and homosexual relationships (50.0%) among men. Regarding the transmission of disease way, "sexual intercourse" predominated (88.3%) followed by other ways such as: blood (injecting drugs 2.7%) and vertical transmission (0.5%). The dropout rate was 4.4% of users of antiretroviral therapy (TARV). Regarding the suppression of the viral charge 60.5% of the users had an undetectable viral charge in the next year of beginning of treatment disease. It is concluded that the SAE, during the analyzed period, it has not yet reached the global targets related to 90% of people diagnosed with HIV in treatment on TARV and 90% of people in treatment with viral suppression. The knowledge of reality contributes to the improvement of the HIV/AIDS epidemiological surveillance system in our area, to describe the profile of the service provided and to reach the indicators for the two world goals 90-90-90, in the SAE it is a subsidy for the local managers in the structuring and/or readaptation of these services and focus on the actions aimed at the treatment and continuous care of users. / O Serviço de Assistência Especializada (SAE) se constitui em importante recurso para saúde, uma vez que oferece o tratamento especializado para a população do município de Goiânia e dos municípios pactuados aos portadores do Vírus da Imunodeficiência Humana/Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (HIV/AIDS). Por intermédio deste estudo, pode-se descrever o perfil deste serviço levantando o percentual de usuários encaminhados para o SAE; os dados sobre o perfil epidemiológico dos seus usuários: perfil sóciodemográfico, modo de transmissão e perfil clínico- laboratorial e o alcance das metas mundiais do milênio referentes à 90% de pessoa diagnosticadas com HIV em tratamento e 90% das pessoas em tratamento com supressão viral, essas metas da Organização das Nações Unidas-ONU estabeleceu o compromisso de garantir a sustentabilidade do planeta Terra firmando com 192 países a “Declaração do Milênio” e um dos seus objetivos foi o Combate ao HIV/aids. O Estudo buscou responder a pergunta “Qual o perfil do SAE-Goiânia, em quanto absorve a demanda do município, quem é seu usuário, como se expõe e qual o alcance das metas mundiais no serviço?” Tratou-se de um estudo quantitativo e descritivo. Foram coletados dados de 182 usuários do SAE nos bancos secundários dos sistemas: Sistema de Informação de Agravos de Notificação (SINAN-2015), Sistema de Controle Logístico de Medicamentos Antirretrovirais (SICLON-2016), Sistema de Atendimentos Ambulatoriais (SICAA- 2016) e Pastas arquivos da Farmácia SAE do Centro de Referência Diagnóstico e Terapêutica (CRDT-2016). Os resultados foram os seguintes: quanto ao percentual de encaminhados ao SAE foi de 17,38% da demanda de usuários diagnosticados, residentes no município de Goiânia, quanto ao perfil epidemiológico observou-se a predominância do sexo masculino (92,31%), a faixa etária em ambos os sexos foi de 20 a 34 anos em 65,4%. A escolaridade mais relatada foi o ensino médio completo (30,2%) seguido pelo ensino superior incompleto (17,0%). A raça/cor mais autodeclarada no estudo foi à parda (42,9%). Quanto às variáveis comportamentais houve predomínio das relações heterossexuais entre as mulheres (78,6%) e de relações homossexuais (50,0%) entre os homens. Em relação à via de transmissão, predominou a “relação sexual” (88,3%) seguida por outras formas como: sanguínea (drogas injetáveis 2,7%) e transmissão vertical (0,5%). A taxa de abandono do serviço foi de 4,4% dos usuários em Terapia Antirretroviral (TARV). Em relação à supressão da carga viral 60,5%, dos usuários se encontravam com carga viral indetectável, no ano seguinte ao início do tratamento. Conclui-se que o SAE, no período analisado, ainda não alcançou as metas mundiais relacionadas a 90% de pessoas diagnosticadas com HIV em tratamento com TARV e 90% de pessoas em tratamento com supressão viral. O conhecimento da realidade contribui para o aprimoramento do sistema de vigilância epidemiológica do HIV/aids, em nossa região, descrever o perfil do serviço prestado e o alcance dos indicadores referentes às duas metas mundiais 90-90-90, no SAE é subsidio para os gestores locais na estruturação e/ou readequação desses serviços e focalização de ações voltadas ao tratamento e ao cuidado contínuo dos usuários.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-01-10T11:15:29Z No. of bitstreams: 1 lilypaolamartinezabad.pdf: 2623487 bytes, checksum: bd4d6d3010f0286720ab5bcfb393b5ea (MD5) / Approved for entry into archive by Diamantino Mayra (mayra.diamantino@ufjf.edu.br) on 2017-01-31T11:20:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 lilypaolamartinezabad.pdf: 2623487 bytes, checksum: bd4d6d3010f0286720ab5bcfb393b5ea (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-31T11:20:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 lilypaolamartinezabad.pdf: 2623487 bytes, checksum: bd4d6d3010f0286720ab5bcfb393b5ea (MD5) Previous issue date: 2016-09-30 / A leishmaniose visceral canina (LVC) representa um grave problema de saúde pública. No Brasil, a prevalência da infecção nos cães é bastante variável, podendo atingir níveis superiores a 60% em alguns surtos. O teste rápido Dual Path Platform (TRDPP®-Bio-Manguinhos), como teste de triagem, seguido por ELISA (EIE-BioManguinhos), como teste confirmatório, tornaram-se parte do protocolo de diagnóstico da LVC, credenciado no Brasil desde 2011. No entanto, o diagnóstico da LVC ainda precisa ser melhorado para alcançar uma taxa de detecção mais precisa. Recentemente, rKLO8, uma nova proteína antigênica de L. donovani do Sudão foi clonada e purificada, e mostrou alta reatividade para diagnosticar leishmaniose visceral em humanos. O presente estudo teve como objetivo avaliar a reatividade de soros de cães frente ao antígeno rKL08 e o antígeno de referência rK26, comparando ambas as proteínas, utilizadas como antígenos em testes de ELISA, com os testes DPP® e EIE, usados como testes de diagnóstico da LVC. Amostras de soros de cães de Governador Valadares, uma área endêmica para leishmaniose em Minas Gerais, Brasil, foram agrupadas da seguinte forma: (I) DPP®/EIE negativo (n = 100), (II) DPP® positivo / EIE negativo e (III) DPP® / EIE positivo (n = 100). Níveis séricos elevados de IgM e IgG para ambos os antígenos, rKLO8 e rK26, foram encontrados no grupo III (p <0,0001). Interessantemente, foram detectados níveis elevados de IgG2 e baixos níveis de IgG1 contra ambos os antígenos no grupo de cães DPP®/EIE positivo, sugerindo a ocorrência de um fenótipo predominantemente do tipo Th1 associado com infecção subclínica. O ELISA-rKLO8 (IgG) e o ELISA-rK26 (IgG) mostraram uma sensibilidade de 68% e 77%, e especificidade de 92% e 91%, respectivamente, determinado através da análise da curva ROC. Além disso, o coeficiente Kappa indicou boa concordância (0,739) entre o ELISA-rKLO8 versus o ELISA-rK26. Ainda, a combinação de antígenos rKLO8 e rK26 (rKLO8+rK26) em um mesmo teste exibiu maior sensibilidade (85%) e especificidade (93%). A análise kappa mostrou que o ELISA-rKLO8 + rK26 (IgG) teve melhor concordância com ambos os testes, DPP® e EIE, com valores de kappa igual a 0,700. Estes dados indicaram que a combinação dos antígenos rKLO8 e rK26 gera uma melhor acurácia no diagnóstico da LVC que os antígenos rKLO8 e rK26 usados em separado na detecção de IgG. Estes resultados demonstraram, pela primeira vez, a utilidade do antígeno rKLO8 no diagnóstico da LVC, e que ELISA-rKLO8, pode representar uma potencial ferramenta adicional para o diagnóstico de LVC. / Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) represents a serious public health issue. In Brazil, the prevalence of infection in dogs is quite variable and may reach levels above 60% in some outbreaks. The dual Path Platform (DPP®-Bio-Manguinhos) as quick screening test followed by ELISA (EIE-Bio-Manguinhos) as a confirmatory test became part of the diagnostic protocol of CVL, nationally accreditated in Brazil since 2011. However, CVL diagnosis still needs to be improved to achieve a more accurate detection rate. Recently, rKLO8, a new antigenic protein of Sudanese L. donovani, was cloned and purified and had high reactivity to diagnose human VL. The present study aimed to evaluate serum reactivity to rKL08 and to the reference antigen rK26, and to compare both diagnostic proteins used in ELISA with the combined DPP® and EIE as diagnostic tests of CVL. Dog sera samples from Governador Valadares, an area endemic for leishmaniasis in Minas Gerais, Brazil, were grouped in the following way: (I) DPP®/EIE negative (n = 100), (II) DPP® positive/EIE negative and (III) DPP®/EIE positive dog sera (n = 100). Enhanced serum levels of IgM and IgG to both rKLO8 and rK26 were found in group III (p<0.0001). Interestingly, high IgG2 and low IgG1 levels against both antigens were detected in DPP®/EIE positive dogs, suggesting the occurrence of a predominant Th1 phenotype associated with subclinical infection. The rKLO8-ELISA (IgG) and the rK26-ELISA (IgG) showed a sensitivity of 68% and 77% and specificity of 92% and 91%, respectively, determined by ROC curve analysis. In addition, Kappa coefficient indicated good agreement (0.739) between rKLO8-ELISA and rK26-ELISA. Moreover, the combination of rKLO8 and rK26 antigens (rKLO8+rK26) exhibited higher sensitivity (85%) and specificity (93%). Kappa analysis established that rKLO8+rK26-ELISA (IgG) had better agreement with both DPP® and EIE, with kappa values of 0.700. These data indicate that the combination of rKLO8 and rK26 antigens has better accuracy in the diagnosis of CVL than rKLO8 and rK26 used separately at detecting IgG. These results showed for the first time the usefulness of rKLO8 antigen in the diagnosis of CVL, and that rKLO8-ELISA may represent a potential additional tool for the diagnosis of CVL.

A Leishmaniose visceral é um problema que cresce no Estado de São Paulo afetando o homem e o cão. Os exoantígenos da membrana das leishmanias são liberados no meio de cultura. Os exoantígenos são importantes na indução da imunidade mediada pelas células T e B estimulando a produção elevada de anticorpos. Realizamos uma avaliação comparativa por ELISA e Immunoblotting de exoantígenos e antígenos totais de L. (L.) amazonensis, L. (V.) braziliensis e L. (L.) chagasi, no diagnóstico da leishmaniose visceral humana e canina. Obteve-se por ELISA sensibilidade de 100% para ambos os preparados antigênicos independente da espécie de Leishmania. A melhor especificidade em humanos e cães foi com os exoantígenos. O exoantígeno da L. (L.) chagasi teve a melhor especificidade e média de absorbâncias comparadas aos das outras espécies (p<0.005). Para o hospedeiro humano o ELISA com exoantígenos, não discriminou pacientes com leishmaniose cutânea e ou mucocutânea. O Immublotting dos exoantígenos de L. (L.) chagasi (IBleish) apresentou 100% de sensibilidade e especificidade para os cães. Os dados do IBleish-L. (L.) chagasi demonstraram a possibilidade de sua utilização como método confiável para a confirmação do diagnóstico da leishmaniose canina. / The visceral leishmaniasis is a new problem that grows in the State of São Paulo, affecting men and dogs. The exoantigens from the membrane of the Leishmania, are released out of culture medium. The exoantigens are important in the induction of immunity mediated by T and B cells, stimulating the production of antibodies. This work was carried out an evaluation of ELISA and Immunoblotting using comparatively exoantigens and total antigens of L. (L.) amazonensis, L. (V.) braziliensis and L. (L.) chagasi for the diagnosis of canine and human visceral leishmaniasis. ELISA sensitivity was 100% for all different antigens, independent of the species of Leishmania employed. The best specificity for both human and dogs were obtained with exoantigens. Exoantigen from L. (L.) chagasi was what showed the best specificity and mean absorbance compared to those of other species (p<0.05). The ELISA with exoantigens for the human host not discriminate individuals with leishmaniasis cutaneous or mucocutaneous. The Immunoblotting that used the exoantigens of L. (L.) chagasi (IBleish) showed 100% sensitivity and specificity for the dogs. The IBleish-L. (L.) chagasi showed the possibility of its use as a reliable method to confirm the diagnosis of canine leishmaniasis.