Submitted by Fabíola Silva (fabiola.silva@famerp.br) on 2018-01-09T11:15:21Z No. of bitstreams: 1 marcospaulomiola_dissert.pdf: 10829870 bytes, checksum: 279acd690e09b25b71e67463ae29eb6b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-09T11:15:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marcospaulomiola_dissert.pdf: 10829870 bytes, checksum: 279acd690e09b25b71e67463ae29eb6b (MD5) Previous issue date: 2017-03-13 / Introduction. ABO histo-blood group system is the most important transfusional system and the identification of its phenotypes is often performed by means of direct and reverse typing, which must always present concordant results. However, some genetic factors such as natural chimerisms and point mutations in the ABO gene may affect the expression of the antigens and antibodies of this system, contributing to the discrepancy in the phenotyping, requiring investigations to define the correct phenotype of receptors and blood donors. Objectives. The main objective of this study was to investigate the variations in the expression of the antigens of the ABO histo-blood group system. Its specific objectives were: 1. Selection of recipients and blood donors that presented discrepancies between the results of the direct and reverse phenotyping of the ABO histo-blood group system; 2. Investigation, using serological and molecular methods, of the causes of phenotypic changes and discrepancies between the results of direct and reverse phenotypes in the ABO histo-blood group system in the recipients and donors of blood. Material and Methods. Samples of recipients (n = 2) and blood donors (n = 7) presenting discrepancies between the direct and reverse phenotyping were selected. Phenotyping were performed using conventional and modified hemagglutination methods in tubes and gel columns with commercial antisera and lectins. Molecular investigations were performed using PCR-RFLP method and sequencing of exons 6 and 7 of the ABO gene and exon 2 of the FUT2 gene. Results. Four cases with poor expression of antigen A and absence of expected antibody, observed in hemagglutination, were identified as A2B, Ael and Aw. Four cases without antigenic alteration but carrying an irregular antibody anti-A1 or absence of expected antibody were characterized as AB, A1 and O and presented common ABO alleles. A case of non-dizygotic twins, phenotyped as AB and with double red blood cell population was characterized as hematopoietic chimera after extensive family analysis. The DNA extracted from buccal swab revealed the ABO (A101/B101) and FUT2 (SE*25.01.01/SE*25.01.01) genotypes in the male twin and the ABO (O01/O02) and FUT2 (SE*01.04.01/SE*01.06.03) genotypes in the female twin. Sequences of two new ABO (ABO*Aw.38; KT906366.1) and FUT2 (SE*01.06.03; KX550421) allele sequences were deposited on GenBank. Conclusions. Our results demonstrate that the use of serum and salivary serological assays combined with molecular methods are good tools to solving discrepancies between the direct and reverse phenotyping of the ABO histo-blood group system as well as elucidate cases of twin chimerism in humans, with a double population of red blood cells. In addition, they contribute to the identification of new alleles of the ABO and FUT2 genes. / Introdução. O sistema histo-sanguíneo ABO é o de maior importância transfusional e a identificação de seus fenótipos é frequentemente realizada por meios das tipagens direta e reversa as quais sempre devem apresentar resultados concordantes. Entretanto, alguns fatores genéticos como quimerismos naturais e mutações pontuais no gene ABO, podem afetar a expressão dos antígenos e anticorpos deste sistema, contribuindo com a discrepância nas fenotipagens, requerendo investigações para se definir o correto fenótipo de receptores e doadores de sangue. Objetivos. O objetivo geral deste estudo foi investigar as variações na expressão dos antígenos do sistema histo-sanguíneo ABO. Seus objetivos específicos compreenderam: 1. Seleção de receptores e doadores de sangue que apresentaram discrepâncias entre os resultados das fenotipagens direta e reversa do sistema histo-sanguíneo ABO; 2. Investigação, com o uso de métodos sorológicos e moleculares, das causas das alterações fenotípicas e discrepâncias entre os resultados das fenotipagens direta e reversa no sistema histo-sanguíneo ABO nos receptores e doadores de sangue. Material e Método. Foram selecionadas amostras de receptores (n=2) e doadores (n=7) de sangue com discrepâncias entre as fenotipagens direta e reversa. As fenotipagens foram realizadas com o uso dos métodos de hemaglutinação convencional e modificada, em tubos e colunas de gel, com antissoros comerciais e lectinas. As investigações moleculares foram realizadas com o uso dos métodos PCR-RFLP e sequenciamento dos exons 6 e 7 do gene ABO e do exon 2 do gene FUT2. Resultados: Quatro casos com fraca expressão do antígeno A e ausência do anticorpo esperado, observados na hemaglutinação, foram identificados como A2B, Ael e Aw. Quatro casos sem alteração antigênica, mas com presença de anticorpo irregular ou ausência do anticorpo esperado, foram caracterizados como AB, A1 e O e apresentaram alelos comuns. Um caso de gêmeos não dizigóticos, fenotipados como AB e com dupla população de hemácias foi caracterizado como quimera hematopoiética, após extensa análise familiar. O DNA extraído de swab bucal revelou os genótipos ABO (A101/B101) e FUT2 (SE*25.01.01/SE*25.01.01) no gêmeo masculino e os genótipos ABO (O01/O02) e FUT2 (SE*01.04.01/SE*01.06.03) no gêmeo feminino. As sequências de dois novos alelos dos genes ABO (ABO*Aw.38; KT906366.1) e FUT2 (SE*01.06.03; KX550421) foram depositadas no GenBank. Conclusões: Nossos resultados demonstram que o uso de análises sorológicas eritrocitárias e salivares combinadas a métodos moleculares são fundamentais na resolução de discrepâncias entre as fenotipagens direta e reversa do sistema histo-sanguíneo ABO bem como no esclarecimento de casos de quimerismo gemelar em humanos, contendo dupla população de hemácias. Além disso, contribuem para a identificação de novos alelos dos genes ABO e FUT2.

Submitted by Carvalho Dias João Paulo (joao.dias@famerp.br) on 2018-04-09T14:42:14Z No. of bitstreams: 1 fernandohenriqueamurata_dissert.pdf: 1552059 bytes, checksum: 21664cbdf1320b051bb618047511b2eb (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-09T14:42:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fernandohenriqueamurata_dissert.pdf: 1552059 bytes, checksum: 21664cbdf1320b051bb618047511b2eb (MD5) Previous issue date: 2016-04-13 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo - FAPESP / Introduction: T. gondii infection is high in Brazil and could lead to the development of serious sequelae such as ocular and neurological injuries, especially when it occurs during pregnancy for the risk of congenital transmission, and in immunocompromised patients. Clinical diagnosis is often difficult because the majority of affected people do not develop symptoms, therefore the use of serological and molecular methods are essential to support the diagnosis. Thus the use of sensitive and specific tests for the diagnosis of this condition is necessary. Objectives: To investigate and characterize the infection by T. gondii in their serological and molecular aspects in the northwest region of São Paulo. Methods: Peripheral blood samples were collected from patients treated in the Outpatient Clinic of High Risk Pregnancy and Fetal Medicine, and Retinopathy to analyze the serological methods (ELISA and ELFA) and molecular (cnPCR, Nested PCR and qPCR). Amniotic fluid samples were collected from pregnant women with suspect toxoplasmosis to perform the cnPCR. The results were compared using the Kappa index and calculated the sensitivity (S), specificity (SP), positive predictive value (PPV) and negative (NPV). Results: For the group of pregnant women, serological tests showed good agreement when applied to the Kappa index, G1: IgG = 0.83, IgM = 1.0; G2: IgG = 1.0, IgM = 0.78. When compared to IgM class antibodies by ELISA and ELFA had S = 75.5%, E = 100.0%, PPV = 100.0%, NPV = 87.8% and S = 79.2%, and = 100.0%, PPV = 100.0%, NPV = 89.5%, respectively. When compared to IgG showed S = 100.0%, E = 46.8%, PPV = 51.5%, NPV = 100.0% and 100.0% S = E = 38.3%, PPV = 47 7% NPV = 100.0%, respectively, and molecular methods performed by PCRs cnPCR (JW62 / 63), nested PCR, cnPCR (B22 / 23) and qPCR showed 0.0% S = E = 100, 0%, PPV = 0.0%, NPV = 63.9%, S = 5.7%, E = 100.0%, PPV = 100.0%, NPV = 65.3%, S = 7.5 % E = 98.9%, PPV = 80.0%, NPV = 65.5% and S = 1.9%, E = 100.0%, PPV = 100.0%, NPV = 64.4%, respectively. For the group of patients treated in the Retinopathy Clinic, serological tests for detection of anti-T. gondii IgG antibodies showed good agreement when applied to the Kappa index, G1: IgG = 0.97, IgM = 0.49; G2: = 0.85 IgG, IgM = 0.74. When compared to IgM class antibodies by ELISA and ELFA had S = 6.1% and = 96.8%, PPV = 62.5%, NPV = 53.7% and S = 3.7%, and = 98.9%, PPV = 75.0%, NPV = 53.7% respectively. When compared to IgG showed S = 96.3%, E = 34.6%, PPV = 56.6%, NPV = 91.4% and S = 95.1%, E = 35.7%, PPV = 56 , 7%, NPV = 89.2%, respectively, and the molecular methods performed by PCRs cnPCR (JW62 / 63), Nested, cnPCR (B22 / 23) and qPCR showed S = 1.8% and = 99.5 %, PPV = 75.0%, NPV = 53.3%, S = 2.4%, and 99.5%, PPV = 80.0%, NPV = 53.5%, S = 6.1% E = 98.4%, PPV = 76.7%, NPV = 54.2% and S = 8.5% and = 98.4%, PPV = 82.3%, NPV = 54.8%, respectively. For the group of neonates of 50 samples tested, 45 (90.0%) were positive for IgG 1 (2.0%) for IgM, 3 (6.0%) for IgA and 13 (26.0%) in cnPCR. Conclusion: The commercial serological tests for identifying anti- T. gondii IgG and IgM antibodies by ELISA and ELFA showed concordant results, and the molecular conventional PCR tests (cnPCR), Nested PCR and real-time PCR (qPCR) were discordant. / Introdução: A infecção por T. gondii é elevada no Brasil, podendo levar ao desenvolvimento de sequelas graves como lesões oculares e neurológicas, principalmente quando ocorre durante a gestação com risco de transmissão congênita, e em pacientes imunocomprometidos. A maioria dos indivíduos acometidos não desenvolvem sintomas, tornando o diagnóstico clínico difícil, sendo assim necessária a utilização de testes que auxiliem no diagnóstico, como o uso dos métodos sorológicos e moleculares. Desta forma, é essencial a utilização de testes sensíveis e específicos para o correto diagnóstico da doença. Objetivos: Investigar e caracterizar a infecção por T. gondii em seus aspectos sorológicos e moleculares em pacientes da região noroeste do Estado de São Paulo. Casuística e métodos: Foram coletadas amostras de sangue periférico de gestantes, neonatos e pacientes com doenças oculares sugestivas e não sugestivas de toxoplasmose, atendidos nos Ambulatórios de Gestação de Alto Risco e Medicina Fetal, e Retinopatia para realização dos métodos sorológicos (ELISA e ELFA) e moleculares (cnPCR, Nested PCR e qPCR). Foram coletadas também amostras de líquido amniótico para realização da cnPCR das gestantes com suspeita clínica de toxoplasmose. Os resultados foram comparados pelo índice Kappa, e calculados os valores de sensibilidade (S), especificidade (E), valor preditivo positivo (VPP) e negativo (VPN). Resultados: Para o grupo de gestantes analisadas, os testes sorológicos apresentaram concordância quando aplicados ao Kappa, G1: IgG = 0,83, IgM = 1,0; G2: IgG = 1,0, IgM = 0,78 . Quando comparados a pesquisa de anticorpos da classe IgM por ELISA e ELFA apresentaram S=75,5%, E=100,0%, VPP=100,0%, VPN=87,8% e S=79,2%, E=100,0%, VPP=100,0%, VPN=89,5%, respectivamente. Quando comparados com IgG apresentaram S=100,0%, E=46,8%, VPP=51,5%, VPN=100,0% e S=100,0%, E=38,3%, VPP=47,7%, VPN=100,0%, respectivamente, e para os métodos moleculares realizados pelas PCRs cnPCR (JW62/63), Nested PCR, cnPCR (B22/23) e qPCR apresentaram S=0,0%, E=100,0%, VPP=0,0%, VPN=63,9%, S=5,7%, E=100,0%, VPP=100,0%, VPN=65,3%, S=7,5%, E=98,9%, VPP=80,0%, VPN=65,5% e S=1,9%, E=100,0%, VPP=100,0%, VPN=64,4%, respectivamente. Para o grupo de pacientes atendidos no ambulatório de Oftalmologia, os testes sorológicos para pesquisa de anticorpos anti-T.gondii da classe IgG apresentaram boa concordância quando aplicados ao índice Kappa, G1: IgG = 0,97, IgM = 0,49; G2: IgG = 0,85, IgM = 0,74. Quando comparados à pesquisa de anticorpos da classe IgM por ELISA e ELFA, apresentaram S=6,1%, E=96,8%, VPP=62,5%, VPN=53,7% e S=3,7%, E=98,9%, VPP=75,0%, VPN=53,7%, respectivamente. Quando comparados com IgG apresentaram S=96,3%, E=34,6%, VPP=56,6%, VPN=91,4% e S=95,1%, E=35,7%, VPP=56,7%, VPN=89,2%, respectivamente, e para os métodos moleculares realizados pelas PCRs cnPCR (JW62/63), Nested, cnPCR (B22/23) e qPCR, apresentaram S=1,8%, E=99,5%, VPP=75,0%, VPN=53,3%, S=2,4%, E=99,5%, VPP=80,0%, VPN=53,5%, S=6,1%, E=98,4%, VPP=76,7%, VPN=54,2% e S=8,5%, E=98,4%, VPP=82,3%, VPN=54,8%, respectivamente. Para o grupo de neonatos, das 50 amostras analisadas, 45 (90,0%) foram positivas para IgG, 1 (2,0%) para IgM, 3 (6,0%) para IgA e 13 (26,0%) no cnPCR. Conclusão: Os testes sorológicos comerciais na identificação de anticorpos anti-T.gondii das classes IgG e IgM por ELISA e ELFA apresentaram resultados concordantes, e os testes moleculares PCR convencional (cnPCR), PCR Nested e PCR em tempo real (qPCR) apresentaram resultados discordantes.

Introdução: recente estudo brasileiro detectou a presença concomitante do Mycoplasma pneumoniae e Chlamydia pneumoniae em lesões ateromatosas coronárias estáveis e instáveis. O objetivo do presente estudo foi testar a associação entre títulos sorológicos de anticorpos anti-Chlamydia pneumoniae e anti-Mycoplasma pneumoniae e as Síndromes Isquêmicas Miocárdicas Instáveis. Métodos: foram incluídos de forma prospectiva, 138 pacientes divididos em 4 grupos: 34 pacientes com Síndrome Isquêmica Miocárdica Instável com supradesnível do segmento ST, 40 pacientes com Síndrome Isquêmica Miocárdica Instável sem supradesnível ST, 30 pacientes com aterosclerose crônica assintomática e 34 doadores de sangue sem doença coronária conhecida. Nos dois primeiros grupos, as amostras sorológicas foram colhidas durante o evento agudo e com seis meses de seguimento, enquanto nos outros dois (aterosclerose crônica e controle) as mesmas foram colhidas uma única vez. Em todas as amostras foram dosados anticorpos da classe IgG anti-Chlamydia pneumoniae e anti-Mycoplasma pneumoniae utilizando a técnica de imunoflorescência indireta.. Resultados: seis meses após a internação, os pacientes com síndrome isquêmica miocárdica instável com supradesnível ST apresentaram significativa redução dos títulos sorológicos, em relação às sorologias colhidas durante o evento coronário agudo, o que ocorreu tanto com a chlamydia (307,5+47,5 versus 650+115,7 p=0,0001) quanto com o mycoplasma (21,5+3,5 versus 36,5+5 p=0,0004). O grupo sem supradesnível ST não teve variação significativa dos níveis sorológicos em seis meses de seguimento (522,6+102,7 versus 576+84,1 p=0,27) para chlamydia e 27,6+5,8 versus 27,6 + 5,8 p >0,99 para mycoplasma. Foi realizada também uma comparação entre os níveis sorológicos de todos os grupos analisados, e observou-se que os grupos com síndrome isquêmica miocárdica instável (com e sem supra ST), tiveram valores sorológicos mais elevados do que os grupos aterosclerose crônica e controle, mas as diferenças não foram significativas. Os valores para chlamydia foram: 650+115,7 (com supra), 576+84 (sem supra), 373,3+65 (aterosclerose crônica) e 343,5+57,2 (controle), p=0,083; e os valores para mycoplasma foram: 36,5+5 (com supra), 27,6+5,8 (sem supra), 23+4,3 (aterosclerose crônica) e 26,7+3,3 (controle), p=0,171. Conclusões: o presente estudo demonstra associação entre títulos de anticorpos anti-Chlamydia pneumoniae e anti-Mycoplasma pneumoniae e a instabilização da placa coronária. Demonstra ainda a normalização dos mesmos títulos em um período de até seis meses, a partir do quadro agudo. / Objective of the study: to test the association of serum titers of anti-Chlamydia pneumoniae and anti-Mycoplasma pneumoniae antibodies and Acute Coronary Syndrome (ACS). The patients were divided into 4 groups: ACS with ST-segment elevation, ACS without ST-segment elevation, chronic asymptomatic atherosclerosis and blood donors without known coronary disease. Serum samples were collected during the acute event and after six months of follow-up. Six months after the acute event, patients with ACS with St-segment elevation showed a significant decrease of serum titers, when compared to the other one. That\'s show the association between anti-Chlamydia pneumoniae and anti-Mycoplasma pneumoniae antibody titers and acute coronary syndrome.

Strongyloidiasis stercoralis hyperinfection presenting as vasculitic-like skin lesions is rare. An autoinfection cycle allows intestinal strongyloidiasis, usually a benign infection, to persist for many decades. We report a woman with disseminated S stercoralis infection presenting as nonpalpable purpuric skin rash and syndrome of inappropriate secretion of antidiuretic hormone (SIADH). Upon admission, she was treated with corticosteroids for her vasculitic skin lesions, which then worsened her status. When the diagnosis was recognized, steroids were stopped, thiabendazole treatment was instituted, and she gradually recovered. Serious or fatal infection can occur in patients with strongyloidiasis who were treated with immunosuppressive drugs. Stool specimen screening and/or serological tests for S stercoralis infection in patients who require immunosuppressive therapy helps to prevent complications before embarking on such treatment. Unexplained hyponatremia, severe hypoalbuminemia without proteinuria, and unusual skin rashes, especially over the lower aspect of the abdomen and upper aspects of the thighs, in persons living in areas endemic to S stercoralis should raise suspicion of S stercoralis infection.

Devido ao largo espectro de manifestações na leishmaniose visceral canina (LVC), o exame clínico não é capaz de confirmar o diagnóstico, já que muitos dos sinais clínicos não são exclusivos da LVC, tornando-se imprescindível o diagnóstico laboratorial para confirmação da infecção por L. (L.) infantum chagasi. A sorologia tem sido a primeira escolha para o diagnóstico da leishmaniose canina; porém, a diversidade de técnicas empregadas e de antígenos tem levado a resultados conflitantes. O emprego de formas promastigotas e amastigotas do parasito tem boa concordância no sorodiagnóstico de LVC pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), porém o teste com amastigotas mostrou-se mais sensível sem perda da especificidade. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o desempenho do ELISA no sorodiagnóstico da LVC empregando antígeno total bruto de formas amastigotas provenientes de cultura axênica (ELISA-AXE) e amastigotas purificadas de tecido de animal experimental cronicamente infectado (ELISA-AMA) comparando com o desempenho do ELISA feito com antígeno total bruto de formas promastigotas (ELISA-PRO) de L. (L.) infantum chagasi. Foram avaliados 115 soros de cães parasitologicamente positivos para a pesquisa de DNA de Leishmania por PCR, domiciliados a pelo menos 2 anos em municípios com alta transmissão de leishmaniose visceral, classificados em sintomáticos (n=67) e assintomáticos (n=48) de acordo com sinais clínicos e exames laboratoriais. Como controle, foram utilizados 81 soros de cães parasitologicamente negativos oriundos do município sem transmissão comprovada de leishmaniose visceral e 13 soros de cães com outras enfermidades. Os resultados não mostraram diferença significante em sensibilidade, especificidade, valores preditivos e acurácia entre os testes ELISA-AXE, ELISA-AMA e ELISA-PRO, com forte correlação e concordância entre os três antígenos testados. O ensaio de Western Blot mostrou reatividade para proteínas de diferentes pesos moleculares, entre 14 a 178kDa dependendo da fonte de antígeno. Os resultados mostraram desempenho semelhantes nos testes de ELISA com amastigotas axênicas, amastigotas purificadas e promastigotas como fonte de antígeno para sorologia da leishmaniose canina. A ampla e diversificada reatividade no Western Blot com poucas bandas altamente especificas sugere o emprego de quimeras de antígenos de diferentes pesos moleculares oriundos tanto de formas amastigotas como de formas promastigotas do parasito no diagnóstico da LVC / Due to the wide spectrum of manifestations in canine visceral leishmaniasis (CVL), clinical exam is not able to confirm the diagnosis, since many of the signs and symptoms are not exclusive of CVL, making it imperative that the laboratory diagnosis for infection confirmation by L. (L.) infantum chagasi. Since the direct search involves invasive material collection, time-consuming and expensive; the serology has been the first choice for diagnosis of canine leishmaniasis. However, the diversity of techniques employed and antigens have led to conflicting results in both diagnostic routine and applied research. Since the use of promastigotes and amastigotes of L. (L.) infantum chagasi have good agreement on serum diagnosis of CVL by reaction of Indirect Immunofluorescence (RIFI), despite the amastigote test proved more sensitive without loss of specificity. The main objective of this study was to evaluate and compare the performance of ELISA in the CVL using crude total antigen of axenic amastigote and promastigote culture, and purified amastigote from experimental chronically infected animal tissue of L. (L.) infantum chagasi. One hundred and fifty-five sera from dogs residing on areas with high disease incidence were evaluated by PCR and diagnosed positive for Leishmania, these were used as positive control on the present study. The animals were examined clinically and in accordance with the characteristic clinical signs of visceral leishmaniasis and laboratory tests, then were classified into 2 groups: symptomatic (n=67) and asymptomatic (n=48) animals. As negative control, eighty-one sera were used from dogs parasitologically negative by PCR in real time from the municipality without proven transmission of visceral leishmaniasis. The results showed no significant difference in sensitivity, specificity, predictive values and accuracy between ELISA-AXE, ELISA-AMA and ELISA-PRO, with strong correlation and concordance between the three antigens tested. The Western Blot assay showed reactivity for proteins of different molecular weights ranging from 14 to 178kDa depending on the antigen source. The results showed similar performance in the ELISA tests with axenic amastigotes, purified amastigotes and promastigotes as source of antigen for serology of canine leishmaniasis. The broad and diverse reactivity in Western Blot with few highly specific bands suggests the use of antigen chimeras of different molecular weights derived from both amastigote and promastigote forms of the parasite in the diagnosis of LVC

O estudo do perfil de doadores de sangue com sorologias alteradas é essencial para direcionar a triagem clínica e sorológica nos serviços de hemoterapia e as políticas de sangue que, em última análise, vão se refletir na segurança do sangue disponível para nossa comunidade. O perfil dos doadores de sangue com diagnóstico sorológico de sífilis foi avaliado através de um estudo transversal no qual doadores de sangue com sífilis recente (n=278) foram comparados com doadores com sífilis pregressa (n=2 161). O perfil de doadores de sangue portadores do HIV foi avaliado através de um estudo caso-controle, no qual doadores de sangue confirmadamente positivos para o HIV (n=272) foram comparados com um grupo controle de doadores com resultado falso-positivo no teste de triagem para HIV (n=468). Ambos os estudos foram realizados entre janeiro de 1999 e dezembro de 2003. Os dados demográficos, categorias de doação, número de doações prévias, potenciais fatores de risco para as infecções estudadas, comportamento sexual e associação com os demais marcadores de triagem sorológica foram avaliados em entrevistas pós-doação, por ocasião da notificação dos doadores acerca de seu status sorológico. Os fatores de risco para HIV que deveriam ter gerado a recusa dos doadores foram relatados por 48,9% dos casos e 9,4% dos controles. Na análise multivariada os preditores de infecção pelo HIV em homens foram: homem que mantém/manteve relação sexual com outro homem, pagar ou receber dinheiro por sexo, dois ou mais parceiros sexuais nos últimos 12 meses, passado de doença sexualmente transmissível e positividade nos testes anti- HCV e anti-HBc total. Entre as mulheres, parceiro sexual usuário de drogas intravenosas, parceiro sexual com cinco ou mais parceiras nos últimos 12 meses ou sexo com prostitutas e dois ou mais parceiros nos últimos 12 meses foram associados à infecção pelo HIV. Quanto aos doadores de sangue com marcadores sorológicos para sífilis, estes eram predominantemente heterossexuais masculinos. Doadores com sífilis pregressa eram mais velhos, na maioria das vezes, doadores vinculados e uma porcentagem importante deles referiram estilo de vida de risco no passado. Doadores com sífilis recente eram mais jovens, em sua maioria, doadores altruístas, apresentaram mais relatos de orientação homossexual ou bissexual e uma associação com o HIV 18 vezes maior do que aqueles com sífilis pregressa. Na análise multivariada os fatores de risco associados com sífilis recente foram: idade mais jovem, duas doações prévias, homem que mantém/manteve relação sexual com outro homem, dois ou mais parceiros sexuais nos últimos 12 meses e positividade confirmada no teste de HIV. Conclui-se que: um número substancial de doadores de sangue infectados pelo HIV nega fatores de risco que deveriam ter gerado recusa na triagem clínica; homem que mantém/manteve relação sexual com outro homem continua sendo o maior preditor da infecção pelo HIV na população estudada; doadores com sífilis recente constituem um grupo com atividades sexuais de risco em relação às demais doenças sexualmente transmissíveis e à doação de sangue; doadores de sangue vinculados e posteriormente fidelizados são preferíveis aos altruístas. / The study of the epidemiological profile of seropositive blood donors is essential to improve blood banks pre-donation and serologic screenings and guide blood safety policies. The profile of blood donors with serologic diagnosis of syphilis was studied in a retrospective cross-sectional study in which blood donor with recent syphilis (N=278) were compared to blood donor with past disease (N=2 161). The profile of blood donors HIV seropositive was studied in a case-control study in which HIV infected blood donor cases (N=272) were compared to HIV false positive blood donor controls (N=468). Both studies were conducted between January, 1999 and December, 2003. Demographic characteristics, category of donation, number of previous donations, potential risk factors for syphilis and HIV infection, number of previous donations, sexual behavior and reactivity on other serologic screening tests were assessed after donation when donors returned to be notified about their serologic status. Risk factors used as donor deferral criteria were reported by 48.9% of cases and 9.4% of controls during post-donation counseling. In multivariate analysis, male cases were significantly more likely to report male-male sex, a previous sexual transmitted disease diagnosis, exchanging money for sex and two or more partners in the past 12 months. HIV-positive male donors were also more likely to be anti-HCV and HBV core antibody reactive. Female cases were more likely to report an intravenous drug user partner, a sexual partner with multiple sex partners or who had a history of sex with a sex worker, and two or more partners in the past 12 months. Syphilis seropositive blood donors were predominantly heterosexual males. Donors with past syphilis were more likely to be older, replacement donors and part of them referred past of high risk behavior when compared to those with past disease. On the other hand, donors with recent syphilis were younger, the majority of them community donors, referred male-male sex more frequently and presented an association with HIV 18 times higher when compared to those with past disease. In multivariate analyses factors associated with recent infection for syphilis included younger ages, two previous donations, male-male sex, two or more sexual partners in the last 12 months and HIV seropositivity. In conclusion, a substantial number of HIV infected donors reported a risk factor that could have been identified in the pre-donation screening, male-male sexual behavior was still the strongest determinant of HIV status in the studied population, blood donors with recent syphilis represent a group of high risk sexual behavior in relation either to blood donation or to acquire other sexually transmitted diseases, it is a reasonable approach to enhance efforts to retain qualified replacement donors in the pool of repeat donors as a safe resource for the blood supply.

Submitted by Priscila Nascimento (pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2012-11-12T12:44:48Z No. of bitstreams: 1 dulce-lemos-lopes.pdf: 771261 bytes, checksum: c267c2bc34c9977f6022766515a8dd61 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-12T12:44:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dulce-lemos-lopes.pdf: 771261 bytes, checksum: c267c2bc34c9977f6022766515a8dd61 (MD5) Previous issue date: 2005-03 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Como rege a constituição brasileira, “a saúde é direito de todos e dever do Estado”. No âmbito da política de sangue atualmente vigente no Brasil, é dever do Estado prover acesso universal e de boa qualidade aos serviços de hemoterapia em funcionamento no país. Instaurar, sustentar e expandir a qualidade dos serviços de hemoterapia implica em garantir a segurança das transfusões sanguíneas, o que somente pode ser alcançado através da prevenção da disseminação dos agentes causadores dedoenças infecto-contagiosas. Visando o fornecimento de “sangue com garantia de qualidade em todo o seu processo” – meta mobilizadora nacional para o setor saúde até 2003 – o Ministério da Saúde lançou, através da GerênciaGeral de Sangue e Outros Tecidos e Órgãos da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (GGSTO/ANVISA) a implantação de um sistema de controle e avaliação externa da qualidade. Tal projeto – objeto desta dissertação – teve como objetivo garantir a exatidão dos resultados dos testes sorológicos assegurando a confiabilidade dos resultados obtidos por 130 Serviços de Hemoterapia do Brasil denominados laboratórios participantes do programa de avaliação externa da qualidade. A confiabilidade dos testes realizados por estes laboratórios participantes - testes anti-HIV-1/2; testes anti-HTLV-I/II; testes anti-HBV; testes anti-HCV; testes para detecção do HBsAg; e testes de triagem para Doença de Chagas e Sífilis - foram aferidas através do índice estatístico Kappa (K). Os resultados dos testes obtidos pelos laboratórios participantes foram analisados através índice do Kappa, aos resultados dos testes já conhecidos pelo Laboratório Organizador (LAPPS/Bio-Manguinhos/FIOCRUZ). Os testes de triagem realizados pelos laboratórios participantes foram, então, classificados segundo o grau de concordância, como sofríveis, ruins, regulares, moderados, bons ou excelentes. Além de fornecer informações a respeito da confiabilidade dos Serviços de Hemoterapia no país,é descrita a implantação e operacionalização do programa de controle externo da qualidade do sangue no Brasil, os quais poderão contribuir para a auto-avaliação e, se necessário, re-estruturação destes serviços para melhor servir e proteger a saúde do cidadão brasileiro. / As stated in the Brazilian Constitution “health is the right of all citizens and a State duty”. According to the current blood policy established in Brazil, it is the State´s duty to provide universal access to good quality blood banking services operating in the country. To install, maintain and expand the quality of blood banking services, one must assure the safety of blood transfusions. This, in turn, can only be accomplished through the prevention of the dissemination of pathologens responsible for causing infectious diseases. Seeking the provision of “blood with quality assurance throughout its process” – a national mobilization goal for the health sector until 2003 – the Ministriy of Health has launched, through the General Management for blood and Other Tissues and Organs of the National Agengy of Health Surveillance (GGSTO/ANVISA) the implantation of an external quality control and assurance system. This project had as its goal to assure the reability of the serological test results obtained in 130 blood banking services, participating in the external quality evaluation program in Brazil. The reliability of the tests carried out by these blood banking services – tests anti-HIV-1/2; tests anti-HTLV-I/II; tests anti-HBV; tests anti-HCV; tests for the detection of HBsAg; and screening tests for Chagas disease and Syphilis – were measured by means of a statistical index Kappa (K). The test results obtained by the participating laboratories were compared to the already known test results of the Organizing Laboratory (LAPPS/Bio-Manguinhos/FIOCRUZ) by using Kappa values. The serological tests carried out by the participating laboratories were thus classified according to their degree of proximity to the true test results, as bad, regular, moderate, good or excellent. Besides describing information as to thereliability and quality level of the blood banking services in the country, this dissertation also offers the implementation and operationalization of the external quality evaluation program/system for blood in Brazil. This dissertation also constitutes an essential tool for self-evaluation and, if necessary, re-structuring on the part of such services so that they may better serve and protect the health status of the Brazilian citizen.

Submitted by Priscila Nascimento (pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2013-03-28T17:37:00Z No. of bitstreams: 1 Carlos_Augusto_S_Fernandes.pdf: 3137240 bytes, checksum: a923f912893f0a2f21b79d189189ec4a (MD5) / Approved for entry into archive by Priscila Nascimento(pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2013-03-28T17:53:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Carlos_Augusto_S_Fernandes.pdf: 3137240 bytes, checksum: a923f912893f0a2f21b79d189189ec4a (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-28T17:53:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carlos_Augusto_S_Fernandes.pdf: 3137240 bytes, checksum: a923f912893f0a2f21b79d189189ec4a (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / A partir da descoberta do vírus da hepatite C (HCV), vários testes sorológicos e moleculares têm sido desenvolvidos para auxiliar no diagnóstico da infecção pelo HCV. Os objetivos deste estudo foram avaliar a dinâmica dos anticorpos anti-HCV, obtida pela leitura em densidade ótica/ponto de corte (do/co) dos testes sorológicos e, principalmente, o desempenho de metodologias moleculares para detecção do RNA do HCV em pacientes com resultados intermitentes na fase inicial da doença. Nos estudos sorológicos, foram realizados levantamentos epidemiológicos e dos valores de do/co dos anticorpos anti-HCV em 65 amostras de pacientes acompanhados desde a fase inicial de infecção pelo HCV. No estudo molecular, 244 amostras seriadas, coletadas durante a fase inicial de infecção pelo HCV, foram obtidas de 50 indivíduos que apresentavam viremia intermitente. As amostras foram submetidas a várias técnicas qualitativas para detecção do RNA do HCV e que foram realizadas de acordo com a disponibilidade à época dos testes. Porém, todas foram testadas pela técnica de Amplificação Mediada por Transcrição (TMA), que possui o maior limite inferior de detecção atualmente (9,6 Ul/mL). Nos testes sorológicos constatamos uma relação significante entre os valores dos anticorpos, medidos em do/co, com a evolução da infecção pelo HCV em fase inicial da doença e, verificando a dinâmica dos anticorpos, observamos que a queda rápida dos valores de do/co do anti-HCV é um excelente preditor de cura espontânea. Todas as técnicas moleculares obtiveram percentual elevado de resultados discordantes e acurácia baixa ou moderada, demonstrando a dificuldade em detectar níveis muito baixos de viremia. Nossos dados sorológicos demonstraram que o comportamento dos valores de leitura do/co dos anticorpos anti-HCV, em amostras seriadas mais frequentes, podem auxiliar no prognóstico de cura do paciente e na decisão de iniciar ou não o tratamento antiviral ainda no início da doença. O resultado não detectável por técnicas moleculares, dependendo dos limites de detecção da técnica utilizada, deve ser avaliado com cautela e, em caso de dúvida, optar pela realização de metodologias mais sensíveis. / Since the discovery of the hepatitis C virus (HCV), several serological and molecular tests have been developed to aid in the diagnosis of HCV infection. The objectives of this study were to evaluate the dynamics of anti-HCV antibodies, obtained by reading optical density/cut-off (od/co) of serological tests, and especially the performance of molecular methods for detection of HCV RNA in patients with intermittent results in the initial phase of the disease. In the serological studies, epidemiological surveys were performed and values od/co from the anti-HCV antibodies of the samples from 65 patients treated at an early stage of HCV infection. In the molecular study, 244 serial samples collected during the initial phase of HCV infection were obtained from 50 individuals who presented intermittent viremia. The samples were subjected to several qualitative techniques for detection of HCV RNA which was performed according to the availability at the time of testing. However, all were tested by the Transcription Mediated Amplification (TMA), which currently has the highest sensitivity (9.6 IU / mL). In the serological tests we found a significant relationship between the values of antibodies measured in the od/co, with the evolution of HCV infection in the early stages of the disease, and verifying the dynamic of the antibodies, we observed that the quickly drop of the values of od/co from anti-HCV antibodies is an excellent predictor of spontaneous healing. All molecular techniques had a high percentage of discordant results and low or moderate accuracy, demonstrating the difficulty in detecting very low levels of viremia. Our serological data showed that the behavior of the reading values of od/co from anti-HCV antibodies in fresh serial samples may help in the healing prognosis of the patient and the decision to start or not the antiviral treatment yet in the initial phase of the disease. The results not detectable by molecular techniques, depending on the detection limits of the technique used, must be evaluated carefully and, if in case of doubt, choose to take more sensitive methodologies.

Devido ao largo espectro de manifestações na leishmaniose visceral canina (LVC), o exame clínico não é capaz de confirmar o diagnóstico, já que muitos dos sinais clínicos não são exclusivos da LVC, tornando-se imprescindível o diagnóstico laboratorial para confirmação da infecção por L. (L.) infantum chagasi. A sorologia tem sido a primeira escolha para o diagnóstico da leishmaniose canina; porém, a diversidade de técnicas empregadas e de antígenos tem levado a resultados conflitantes. O emprego de formas promastigotas e amastigotas do parasito tem boa concordância no sorodiagnóstico de LVC pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), porém o teste com amastigotas mostrou-se mais sensível sem perda da especificidade. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o desempenho do ELISA no sorodiagnóstico da LVC empregando antígeno total bruto de formas amastigotas provenientes de cultura axênica (ELISA-AXE) e amastigotas purificadas de tecido de animal experimental cronicamente infectado (ELISA-AMA) comparando com o desempenho do ELISA feito com antígeno total bruto de formas promastigotas (ELISA-PRO) de L. (L.) infantum chagasi. Foram avaliados 115 soros de cães parasitologicamente positivos para a pesquisa de DNA de Leishmania por PCR, domiciliados a pelo menos 2 anos em municípios com alta transmissão de leishmaniose visceral, classificados em sintomáticos (n=67) e assintomáticos (n=48) de acordo com sinais clínicos e exames laboratoriais. Como controle, foram utilizados 81 soros de cães parasitologicamente negativos oriundos do município sem transmissão comprovada de leishmaniose visceral e 13 soros de cães com outras enfermidades. Os resultados não mostraram diferença significante em sensibilidade, especificidade, valores preditivos e acurácia entre os testes ELISA-AXE, ELISA-AMA e ELISA-PRO, com forte correlação e concordância entre os três antígenos testados. O ensaio de Western Blot mostrou reatividade para proteínas de diferentes pesos moleculares, entre 14 a 178kDa dependendo da fonte de antígeno. Os resultados mostraram desempenho semelhantes nos testes de ELISA com amastigotas axênicas, amastigotas purificadas e promastigotas como fonte de antígeno para sorologia da leishmaniose canina. A ampla e diversificada reatividade no Western Blot com poucas bandas altamente especificas sugere o emprego de quimeras de antígenos de diferentes pesos moleculares oriundos tanto de formas amastigotas como de formas promastigotas do parasito no diagnóstico da LVC / Due to the wide spectrum of manifestations in canine visceral leishmaniasis (CVL), clinical exam is not able to confirm the diagnosis, since many of the signs and symptoms are not exclusive of CVL, making it imperative that the laboratory diagnosis for infection confirmation by L. (L.) infantum chagasi. Since the direct search involves invasive material collection, time-consuming and expensive; the serology has been the first choice for diagnosis of canine leishmaniasis. However, the diversity of techniques employed and antigens have led to conflicting results in both diagnostic routine and applied research. Since the use of promastigotes and amastigotes of L. (L.) infantum chagasi have good agreement on serum diagnosis of CVL by reaction of Indirect Immunofluorescence (RIFI), despite the amastigote test proved more sensitive without loss of specificity. The main objective of this study was to evaluate and compare the performance of ELISA in the CVL using crude total antigen of axenic amastigote and promastigote culture, and purified amastigote from experimental chronically infected animal tissue of L. (L.) infantum chagasi. One hundred and fifty-five sera from dogs residing on areas with high disease incidence were evaluated by PCR and diagnosed positive for Leishmania, these were used as positive control on the present study. The animals were examined clinically and in accordance with the characteristic clinical signs of visceral leishmaniasis and laboratory tests, then were classified into 2 groups: symptomatic (n=67) and asymptomatic (n=48) animals. As negative control, eighty-one sera were used from dogs parasitologically negative by PCR in real time from the municipality without proven transmission of visceral leishmaniasis. The results showed no significant difference in sensitivity, specificity, predictive values and accuracy between ELISA-AXE, ELISA-AMA and ELISA-PRO, with strong correlation and concordance between the three antigens tested. The Western Blot assay showed reactivity for proteins of different molecular weights ranging from 14 to 178kDa depending on the antigen source. The results showed similar performance in the ELISA tests with axenic amastigotes, purified amastigotes and promastigotes as source of antigen for serology of canine leishmaniasis. The broad and diverse reactivity in Western Blot with few highly specific bands suggests the use of antigen chimeras of different molecular weights derived from both amastigote and promastigote forms of the parasite in the diagnosis of LVC

O estudo do perfil de doadores de sangue com sorologias alteradas é essencial para direcionar a triagem clínica e sorológica nos serviços de hemoterapia e as políticas de sangue que, em última análise, vão se refletir na segurança do sangue disponível para nossa comunidade. O perfil dos doadores de sangue com diagnóstico sorológico de sífilis foi avaliado através de um estudo transversal no qual doadores de sangue com sífilis recente (n=278) foram comparados com doadores com sífilis pregressa (n=2 161). O perfil de doadores de sangue portadores do HIV foi avaliado através de um estudo caso-controle, no qual doadores de sangue confirmadamente positivos para o HIV (n=272) foram comparados com um grupo controle de doadores com resultado falso-positivo no teste de triagem para HIV (n=468). Ambos os estudos foram realizados entre janeiro de 1999 e dezembro de 2003. Os dados demográficos, categorias de doação, número de doações prévias, potenciais fatores de risco para as infecções estudadas, comportamento sexual e associação com os demais marcadores de triagem sorológica foram avaliados em entrevistas pós-doação, por ocasião da notificação dos doadores acerca de seu status sorológico. Os fatores de risco para HIV que deveriam ter gerado a recusa dos doadores foram relatados por 48,9% dos casos e 9,4% dos controles. Na análise multivariada os preditores de infecção pelo HIV em homens foram: homem que mantém/manteve relação sexual com outro homem, pagar ou receber dinheiro por sexo, dois ou mais parceiros sexuais nos últimos 12 meses, passado de doença sexualmente transmissível e positividade nos testes anti- HCV e anti-HBc total. Entre as mulheres, parceiro sexual usuário de drogas intravenosas, parceiro sexual com cinco ou mais parceiras nos últimos 12 meses ou sexo com prostitutas e dois ou mais parceiros nos últimos 12 meses foram associados à infecção pelo HIV. Quanto aos doadores de sangue com marcadores sorológicos para sífilis, estes eram predominantemente heterossexuais masculinos. Doadores com sífilis pregressa eram mais velhos, na maioria das vezes, doadores vinculados e uma porcentagem importante deles referiram estilo de vida de risco no passado. Doadores com sífilis recente eram mais jovens, em sua maioria, doadores altruístas, apresentaram mais relatos de orientação homossexual ou bissexual e uma associação com o HIV 18 vezes maior do que aqueles com sífilis pregressa. Na análise multivariada os fatores de risco associados com sífilis recente foram: idade mais jovem, duas doações prévias, homem que mantém/manteve relação sexual com outro homem, dois ou mais parceiros sexuais nos últimos 12 meses e positividade confirmada no teste de HIV. Conclui-se que: um número substancial de doadores de sangue infectados pelo HIV nega fatores de risco que deveriam ter gerado recusa na triagem clínica; homem que mantém/manteve relação sexual com outro homem continua sendo o maior preditor da infecção pelo HIV na população estudada; doadores com sífilis recente constituem um grupo com atividades sexuais de risco em relação às demais doenças sexualmente transmissíveis e à doação de sangue; doadores de sangue vinculados e posteriormente fidelizados são preferíveis aos altruístas. / The study of the epidemiological profile of seropositive blood donors is essential to improve blood banks pre-donation and serologic screenings and guide blood safety policies. The profile of blood donors with serologic diagnosis of syphilis was studied in a retrospective cross-sectional study in which blood donor with recent syphilis (N=278) were compared to blood donor with past disease (N=2 161). The profile of blood donors HIV seropositive was studied in a case-control study in which HIV infected blood donor cases (N=272) were compared to HIV false positive blood donor controls (N=468). Both studies were conducted between January, 1999 and December, 2003. Demographic characteristics, category of donation, number of previous donations, potential risk factors for syphilis and HIV infection, number of previous donations, sexual behavior and reactivity on other serologic screening tests were assessed after donation when donors returned to be notified about their serologic status. Risk factors used as donor deferral criteria were reported by 48.9% of cases and 9.4% of controls during post-donation counseling. In multivariate analysis, male cases were significantly more likely to report male-male sex, a previous sexual transmitted disease diagnosis, exchanging money for sex and two or more partners in the past 12 months. HIV-positive male donors were also more likely to be anti-HCV and HBV core antibody reactive. Female cases were more likely to report an intravenous drug user partner, a sexual partner with multiple sex partners or who had a history of sex with a sex worker, and two or more partners in the past 12 months. Syphilis seropositive blood donors were predominantly heterosexual males. Donors with past syphilis were more likely to be older, replacement donors and part of them referred past of high risk behavior when compared to those with past disease. On the other hand, donors with recent syphilis were younger, the majority of them community donors, referred male-male sex more frequently and presented an association with HIV 18 times higher when compared to those with past disease. In multivariate analyses factors associated with recent infection for syphilis included younger ages, two previous donations, male-male sex, two or more sexual partners in the last 12 months and HIV seropositivity. In conclusion, a substantial number of HIV infected donors reported a risk factor that could have been identified in the pre-donation screening, male-male sexual behavior was still the strongest determinant of HIV status in the studied population, blood donors with recent syphilis represent a group of high risk sexual behavior in relation either to blood donation or to acquire other sexually transmitted diseases, it is a reasonable approach to enhance efforts to retain qualified replacement donors in the pool of repeat donors as a safe resource for the blood supply.