Atualmente, diversas formulações de herbicidas a base de glifosato estão disponíveis no mercado. No entanto, diferentes surfactantes são também adicionados às formulações a fim de aumentar a eficácia do produto, o que pode contribuir significativamente para o aumento da toxicidade do herbicida aos organismos não alvos. Este estudo avaliou a genotoxicidade e o estresse oxidativo em planárias aquáticas (Dugesia schubarti) expostas às formulações de glifosato Roundup Original, Roundup Transorb e Roundup Ready. As planárias foram expostas à soluções de 0.5 mg/L de equivalente ácido de glifosato das três formulações durante 4, 8 e 16h. A genotoxicidade foi avaliada através do ensaio cometa e o estresse oxidativo foi medido através da atividade das enzimas superóxido dismutase (Sod) e catalase (Cat) e pelas substâncias reativas com o ácido tiobarbitúrico (TBARS). Todas as formulações foram capazes de induzir danos ao DNA e estresse oxidativo. A atividade de Sod aumentou entre 4 e 16h, enquanto os níveis de TBARS diminuíram entre 4 e 16h de tratamento. A atividade de Cat permaneceu diminuída em todos os tempos de exposição para as três formulações testadas. Esses resultados demonstram que formulações de herbicida contendo glifosato são capazes de causar dano ao DNA e alterar o balanço oxidativo em planárias indicando que a toxicidade deste herbicida não está restrita às plantas. / Currently, several glyphosate-based herbicide formulations are available in the market. However, different surfactants are also added to the formulation in order to increase the effectiveness of the product, what it can contribute significantly to the toxic effect exerted by the herbicide to the non target organisms. This study evaluated the genotoxicity and the oxidative stress in freshwater planarians exposed to the glyphosate formulations Roundup Original, Roundup Transorb and Roundup Ready. The planarians were submitted to 0.5 mg/L of glyphosate formulations during 4, 8, and 16h. The genotoxicity was evaluated through comet assay, and the oxidative stress was measured through the superoxide dismutase (Sod) and catalase (Cat) activity and by thiobarbituric acid reactive substances (TBARS). All three formulations were able to induce genotoxicity and to disturb the antioxidants activity in different ways. While Sod increased between 4 and 16h, TBARS decreased between 4 and 16h, and Cat stayed depressed during all time-points tested. These results demonstrate that herbicide formulations which contend glyphosate can induce damage to the DNA and to modify the oxidative balance in planarians, indicating that the toxicity of this herbicide is not restricted to the plants.

Oral and oropharyngeal squamous cell carcinoma (OOSCC) is a malignant neoplasm of epithelial origin that accounts for 90 to 95% of tumors in oral cavity. Alcohol and tobacco consumption are main risk factors, but the formation of reactive oxygen species (ROS) and presence of chronic inflammatory processes have been shown to favor the carcinogenesis process. Human serum paraoxonase 1 (PON1) is a protein with an important antioxidant action and prevents oxidative stress induced by ROS, in turn, high levels of tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) and transforming growth factor-beta (TGF-β) are commonly found in inflammatory processes, and changes in these proteins have been related to development of different neoplasms. Present study aims to investigate the prognostic value of functional polymorphisms in PON1, TNF-α and TGF-β genes in OOSCC. This is a prospective cohort study with patients attended at the Advanced Oncology Center of the North-Riograndense League against Cancer. Data collection of clinical variables was done through the form: gender, age, tumor site, TNM (primary tumor, regional nodule and distant metastasis) classification, clinical stage; and through interview: smoking habits and alcohol intake by the patient. A total of 163 samples from patients with OOSCC and 146 control samples were genotyped by real-time PCR. It was observed that 76.1% of the population was males, 84% older than 52 years, with a more frequent intra-oral clinical presentation (53.4%), in the tongue region (21.5%), tumors greater than 4cm (56.45%), presence of nodal involvement (58.9%) and stages III and IV (79.15%). There was a positive association between drinking and smoking habits in patients with OOSCC and between clinical stage and tumor site (p <0.05). The polymorphisms were in Hardy-Weinberg equilibrium, with exception of rs662 of PON1. TNF-α wild-type GG homozygous genotype (rs1800629) was associated with intra-oral lesions, clinical stage of the most advanced disease (III and IV), and decreased overall disease survival, whereas the polymorphic AA genotype was associated with lip lesion, clinical stage I and II and a longer overall disease survival (p <0.05). It was observed association of TGF-β polymorphic AG and AA genotypes (rs1800469) with larger diameter tumors (T3 and T4) (p <0.05). Finally, the polymorphic TT genotype of PON1 (rs662) in recessive model was associated with a shorter disease survival time within threshold of significance (p = 0.05). In view of the findings, it is suggested that wild-type GG homozygous genotype of TNF-α rs1800629 and TGF-β rs1800469 polymorphic AG and AA genotypes may exert an influence on more aggressive biological behavior of OOSCC and that AG genotype of TNF-α rs1800629 and TT genotype of PON1 rs662 could be prognostic markers in OOSCC. In the clinical practice of oncology, these genotypes can be used to perform early diagnosis, knowledge of the biological behavior of the tumor and choice of appropriate individualized therapy / O carcinoma de células escamosas oral e orofaríngeo (CCEO) é uma neoplasia maligna de origem epitelial que representa 90 a 95% dos tumores da cavidade oral. O consumo de álcool e de tabaco são os principais fatores de risco, mas a formação de espécies reativas de oxigênio (EROs) e a presença de processos inflamatórios crônicos têm-se mostrado favorável ao processo de carcinogênese. A paraoxonase de soro humano 1 (PON1) é uma proteína com importante ação antioxidante e previne o estresse oxidativo induzido pelas EROs, por sua vez, elevados níveis do fator de necrose tumoral-alfa (TNF-α) e do fator de crescimento transformante-beta (TGF-β) são comumente encontrados em processos inflamatórios, e alterações nessas proteínas têm sido relacionadas com o desenvolvimento de diferentes neoplasias. O presente estudo tem por objetivo investigar o valor prognóstico dos polimorfismos funcionais nos genes da PON1, TNF-α e TGF-β no CCEO. Trata-se de um estudo coorte prospectivo com pacientes atendidos no Centro Avançado de Oncologia da Liga Norte-Riograndense contra o Câncer. Realizou-se a coleta de dados das variáveis clínicas por meio de formulário: gênero, idade, localização do tumor, classificação TNM (Tumor primário, nódulo regional e metástase à distância), estadiamento clínico (EC); e por meio de entrevista: hábitos de fumo e ingestão alcoólica pelo paciente. Foram genotipadas 163 amostras de pacientes com CCEO e 146 amostras controle por meio de PCR em tempo real. Observou-se que 76,1% da população era do gênero masculino, sendo 84% com mais de 52 anos, com apresentação clínica mais frequente intra-oral (53,4%), na região da língua (21,5%), tumores maiores que 4cm (56,45%), presença de envolvimento nodal (58,9%) e em estágios III e IV (79,15%). Evidenciou-se associação positiva entre os hábitos de beber e fumar com pacientes portadores de CCEO e entre o EC e a localização do tumor (p<0,05). Os polimorfismos encontravam-se em equilíbrio de Hardy-Weinberg, com exceção do rs662 da PON1. O genótipo homozigoto selvagem GG do TNF-α (rs1800629) associou-se com lesões intra-orais, EC da doença mais avançado (III e IV) e menor sobrevida global da doença, enquanto o genótipo AA polimórfico associou-se a lesão de lábio, EC I e II e maior sobrevida global da doença (p<0,05). Observou-se associação dos genótipos AG e AA polimórfico do TGF-β (rs1800469) com tumores de maior diâmetro (T3 e T4) (p < 0,05). Por fim, o genótipo TT polimórfico da PON1 (rs662) no modelo recessivo apresentou associação com menor tempo de sobrevida da doença dentro do limiar de significância (p=0,05). Diante dos achados, sugere-se que o genótipo GG selvagem do rs1800629 do TNF-α e os genótipos AG e AA polimórfico do rs1800469 do TGF-β podem exercer influência no comportamento biológico mais agressivo do CCEO e que o genótipo AG do rs1800629 do TNF-α e o genótipo TT polimórfico do rs662 da PON1 poderiam ser marcadores com valor prognóstico no CCEO. Na prática clínica da oncologia, esses genótipos podem ser utilizados para realização de diagnóstico precoce, conhecimento do comportamento biológico do tumor e escolha da terapêutica individualizada adequada. / Lagarto, SE

Submitted by Amauri Alves (amauri.alves@ufv.br) on 2015-11-05T15:11:25Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 717308 bytes, checksum: 16968f8946338661e38f5f0a6839acb8 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-05T15:11:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 717308 bytes, checksum: 16968f8946338661e38f5f0a6839acb8 (MD5) Previous issue date: 2014-02-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Grande importância tem sido dada a problemas envolvendo poluição e seus efeitos sobre organismos vivos. Dentre os principais vilões, encontram-se os metais pesados que assumem papel de destaque. Um metal pesado conhecido por sua alta toxicidade é o mercúrio (Hg2+): um elemento químico não essencial que se acumula facilmente nos organismos vivos, causando danos fisiológicos e estruturais bastante acentuados. O objetivo do presente trabalho foi avaliar as alterações fisiológicas e bioquímicas em embriões de sementes de Plathymenia reticulata Benth. tratadas com cloreto de mercúrio (HgCl 2 ). Foi avaliado o efeito do HgCl 2 a 10 -5 , 10 -4 , 10 -3 e 10 -2 M na germinação de sementes e embebição e teor de água dos embriões oriundos de sementes hidratadas nestas soluções. Foi avaliado também a germinação de sementes hidratadas soluções de ditiotreitol (DTT) nas concentrações 10 -5 , 10 -4 , 10 -3 e 10 - M. Foi verificada a reversão, utilizando o DTT, dos danos causados pelo cloreto de mercúrio, avaliando a germinação de sementes e embebição e teor de água dos embriões oriundos de sementes hidratadas: nas seguintes soluções: HgCl 2 10 -3 M + DTT 10 -3 M e HgCl 2 10 -2 M + DTT 10 -3 M. Por fim, foi determinada a atividade das enzimas superóxido dismutase, catalase e peroxidases totais nos embriões durantes as primeiras horas de embebição de sementes nas soluções: DTT 10 -3 , HgCl 2 10 -3 M e HgCl 2 10 -3 M + DTT 10 -3 . O HgCl 2 altera as fases iniciais da embebição dos embriões de sementes de P. reticulata, modificando o teor de água dos embriões e a porcentagem e velocidade de germinação, sem promover estresse oxidativo. Em concentrações mais elevadas provoca a morte das sementes. O DTT é capaz de reverter o processo de inibição da embebição de embriões oriundos de sementes tratadas com cloreto de mercúrio, permitindo que o teor de água dos embriões e a porcentagem e velocidade de germinação das sementes sejam restabelecidos. / Great importance has been given to problems involving pollution and the effects on living organisms. Among the main pollution villain, heavy metals assume a relevant role. A heavy metal, referred by the high toxicity is Mercury (Hg 2+ ), a non-essential chemical element that can easily accumulate in all live organisms causing accented physiological and structural damages. The aim of this work was to evaluate physiological and biochemical changes in embryos from Plathymenia reticulate Benth. seeds subjected to mercury chloride (HgCl 2 ) and dithiothreitol (DTT). It was evaluated the effects of HgCl 2 solutions in the concentrations of 10 -5 , 10 -4 , 10 -3 and 10 -2 M on seed germination, embryo hydration and embryo moisture content. It was also evaluated he effects of DTT solutions in the concentrations of 10 -5 , 10 -4 , 10 -3 and 10 -2 M on seed germination. DTT was used to test the reversal of the damage caused by mercury chloride on seed germination, embryo hydration and embryo moisture content, thus was used the solutions of 10 -3 M HgCl 2 + 10 -3 M DTT and 10 -2 M HgCl 2 + 10 -3 M DTT. Lastly it was determined the activity of superoxide dismutase, catalase and total peroxidases in embryos during the initial 48 hours of seed imbibition in the solutions: water (control), 10 -3 M DTT, 10 -3 M HgCl 2 and10 -3 M HgCl 2 + 10 -3 M DTT. The imbibition of seeds in the concentration of 10 -3 M HgCl 2 delays the embryo hydration and reduces embryo moisture content and seed germination, without promoting oxidative stress. Imbibition of seeds in the concentration of 10 -2 M HgCl 2 kills the seeds. DTT reverses the inhibition on embryo imbibition, when seeds are subjected to mercury chloride and allows embryo moisture content and seed germination to restore.

Orientador: Maria Célia Bertolini / Co-orientador: Rodrigo Duarte Gonçalves / Banca: Iran Malavazi / Banca: Márcia Eliana da Silva Ferreira / Resumo: O fungo Neurospora crassa tem sido amplamente utilizado como organismo modelo para o estudo de alguns aspectos da biologia em eucariotos. O sequenciamento de seu genoma permitiu analisar funcionalmente diversos fatores de transcrição e, portanto, atribuir função a proteínas anotadas como hipotéticas. Neste estudo, está sendo investigado o papel funcional do produto de ORF NCU01629, um fator de transcrição que pertence à família zinc-finger sem homólogos funcionais nos bancos de dados de fungos filamentosos. Análises de interação DNA-proteína in vitro foram previamente realizadas por pesquisadores colaboradores, permitindo a identificação do seu motif de ligação ao DNA, bem como os genes provavelmente regulados por este fator de transcrição. A partir destes dados, estes genes foram classificados pelo FunCat. Os resultados revelaram o envolvimento do fator de transcrição em eventos celulares relacionados ao estresse oxidativo, bem como morte celular, entre outros processos celulares. Análises do crescimento radial do fungo foram realizadas em placas de Petri contendo agentes indutores de diferentes tipos de estresse, tais como osmótico, térmico e oxidativo. A linhagem mutante mostrou crescimento semelhante à linhagem selvagem, em condições de estresse osmótico (NaCl 0,1-1,5M e sorbitol 1-1,5M), pH (4,2 e 7,8) e térmico (45ºC). Entretanto, o crescimento da linhagem mutante foi influenciado quando a linhagem foi exposta a diferentes agentes indutores de EROs, como o paraquat (10 μM), menadiona (50 μM), H2O2 (2 mM) e farnesol (10 μM). A linhagem mutante mostrou crescimento radial reduzido, quando comparado à linhagem selvagem no tratamento com diferentes concentrações de paraquat e farnesol e aumento da resistência quando expostos a H2O2 e menadiona. A expressão de genes relacionados a EROs (cat-1, cat-2, cat-3, gst-1, gst-2, sod e nox) e genes apoptóticos... / Abstract: The fungus Neurospora crassa has been widely used as a model organism for the study of some aspects of biology in eukaryotes. The sequencing of its genome has enabled functionally analyze various transcription factors and therefore, assign function to hypothetical proteins. In this study, we investigated the functional role of the ORF NCU01629 product, a transcription factor that belongs to the zinc-finger protein family without functional homologues in fungi database. In vitro analysis of DNA-protein interaction, allowed the identification of its DNA binding motif and, as a consequence, the most likely genes regulated by this transcription factor. The genes were classified by FunCat. The results revealed the involvement of the transcription factor in multiple cellular processes including the response to oxidative stress and cell death. Analyses of radial growth were performed in Petri dishes containing agents that induce different types of stress such as osmotic, thermal and oxidative. The knockout strain showed similar growth to the wild type strain when exposed to osmotic (NaCl 0,1-1,5M and sorbitol 1-1,5M), pH (4.2 and 7.8) and heat (45°C) stresses. However, growth of the knockout strain was influenced when the strain was exposed to different ROS inducing agents, such as paraquat (10 μM), menadione (50 μM), H2O2 (2mM) and farnesol (10 μM). The knockout strain showed reduced radial growth, compared to the wild-type strain, when exposed to different concentrations of paraquat and farnesol and increased resistance to H2O2 and menadione. The expression of genes related to ROS (cat-1, cat-2, cat-3, gst-1, gst-2, sod, and nox) and apoptotic genes (bax, metascaspases, and p53) were analyzed by RT-qPCR. The results showed that the transcription factor is involved in the regulation of the oxidative stress response, controlling the expression of all genes. The gene encoding glutathione-S-transferase... / Mestre

Orientador: Sergio Aberto Rupp de Paiva / Coorientador: Bruna Paola Murino Rafacho / Resumo: Introdução: Após infarto do miocárdio (IM) ocorrem modificações complexas na estrutura do miocárdio. Essas alterações determinam a remodelação cardíaca (RC) e a disfunção ventricular. Alguns mecanismos como estresse oxidativo e inflamação modulam esse processo. O suco de laranja (SL) possui fitonutrientes na forma de polifenóis, como os flavonóides que têm ação anti-inflamatória e anti-estresse oxidativo. Levantamos a hipótese de que o consumo de SL atenua o processo de RC após IM, por ação no estresse oxidativo e na inflamação cardíaca. Objetivo: Avaliar a influência do consumo de SL na RC após IM por meio de variáveis morfológicas, funcionais, estresse oxidativo, inflamação e metabolismo energético. Materiais e métodos: Como delineamento do estudo foram 142 ratos machos pesando em torno de 200-250g, que sofreram um procedimento cirúrgico. Os animais foram alocados em 2 grupos, sham e infartados. Foi realizado ecocardiograma (ECO) inicial. Posteriormente, cada um desses grupos foi alocado em outros 2 grupos. O grupo sham controle (S0) recebeu água com maltodextrina, e o grupo sham tratado (SSL) recebeu SL; o grupo infarto controle (I0) recebeu água com maltodextrina e o grupo infarto tratado (ISL) recebeu SL. A análise estatística foi feita pela ANOVA de duas vias complementado por Holm-Sidak e os resultados apresentados em média ± desvio padrão, o nível de significância adotado foi de 0,05. Resultados: O estudo morfológico realizado pelo ECO mostrou que o infarto resultou e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: After myocardial infarction (MI) complex changes occur in myocardial structure. These changes determine cardiac remodeling (CR) and ventricular dysfunction. Some mechanisms such as oxidative stress and inflammation modulate this process. Orange juice (OJ) has phytonutrients in the form of polyphenols, such as flavonoids that have anti-inflammatory and anti-oxidative stress. We hypothesized that the consumption of OJ attenuates the CR process after MI, by action on oxidative stress and cardiac inflammation. Objective: To evaluate the influence of OJ consumption on CR after MI through variables functional, morphological, oxidative stress, inflammation and energy metabolism. Materials and methods: As a study design were 142 male rats weighing around 200-250 g, who underwent a surgical procedure. The animals were allocated in 2 groups, sham and infarcts. An initial echocardiogram (ECHO) was performed. Subsequently, each of these groups was allocated in 2 other groups. Sham control group (S0) received water with maltodextrin, and treated sham group (SSL) received OJ; control infarction group (I0) received water with maltodextrin and treated infarction group (ISL) received OJ. Statistical analysis was performed by the two-way ANOVA supplemented by Holm-Sidak and the results presented in mean ± standard deviation, the level of significance adopted was 0.05. Results: The morphological study performed by ECHO showed that the infarction resulted in an increase in LVDD, LVSD and AE, corrected for body weight and aorta, as well as LVMT, LVMI, and LV and RV weight corrected for body weight. In addition, infarction led to higher values Tei index and AE, lower values of endocardial fractional shortening, PESV, EF, AVF, S side, S septal and S mean. In relation to oxidative stress the infarction led to higher SOD and HL activity, and lower expression of... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Título original: Avaliação do potencial antigenotóxico e antimutagênico de Lycium barbarum (goji berry), nutracêutico usado como citoprotetor e antioxidante / Orientador: Maria Aparecida Marin-Morales / Coorientadora: Maria Tereza Pamplona da Silva / Banca: Daniela Morais Leme / Banca: Edson Luis Maistro / Resumo: O L. barbarum, popularmente conhecido goji berry, tem despertado o interesse da comunidade científica ocidental, devido a sua riqueza nutritiva e a ação antioxidante que promovem efeitos benéficos para a saúde humana. Entretanto, há poucos relatos na literatura sobre sua possível ação tóxica ou comprovação do seu potencial protetor. Sendo assim, o presente trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos citotóxicos (pelo MMT), genotóxicos e antigenotóxicos (pelo ensaio do cometa), mutagênicos, e antimutagênicos (pelo teste do micronúcleo com bloqueio de citocinese - MN), de estresse oxidativo (pela quantificação dos níveis de GSH e TBARS e pela atividade das enzimas SOD e GST), de potencial antioxidante, do teor de polifenóis totais e da fitoquímica qualitativa de 3 diferentes concentrações recomendadas para o uso diário do extrato de L. barbarum (0,2; 0,4 e 0,6 g/L), por meio de ensaios realizados com sistemas-teste in vitro e in vivo. Neste estudo foram utilizados o organismo teste Allium cepa e culturas de duas linhagens celulares: células de hepatocarcinoma humano (HepG2) e adenocarcinoma de mama humano (MCF-7). Para A. cepa, foram aplicados os testes de aberrações cromossômicas e de micronúcleos em células meristemáticas e dos micronúcleos em células F1. As análises de antigenotoxicidade e antimutagenicidade realizada com esse organismo seguiram protocolos convencionais de pré-tratamento, pós-tratamento e tratamento simultâneo simples. Os resultados destes testes mostrara... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The L. barbarum, popularly known as goji berry, has aroused the interest of the Western scientific community because of its nutritional richness and antioxidant action that promote beneficial effects on human health. However, there are few reports in the literature about its possible toxic action or proof of its protective potential. The present work aimed to evaluate the cytotoxic (by MMT test), genotoxic and antigenotoxic (by comet assay), mutagenic and antimutagenic effects (by micronucleus test with cytokinesis-block - MN), oxidative stress (quantification of GSH and TBARS levels and the activity of SOD and GST enzymes), antioxidant potential, total polyphenol content and qualitative phytochemical of 3 different concentrations recommended for daily use of L. barbarum extract (0.2; 0.4 and 0.6 g / L) by assays performed with in vitro and in vivo test systems. In this study, the test organism Allium cepa and cultures of two cell lines were used: human hepatocarcinoma cells (HepG2) and human breast adenocarcinoma (MCF-7). For A. cepa, the chromosomal aberrations and micronucleus tests wereapplied in meristematic cells and the micronuclei in F1 cells. The antigenotoxicity and antimutagenicity analyzes performed with this organism followed conventional protocols for pretreatment, post-treatment and simple simultaneous treatment. The results of these tests showed that L. barbarum did not present genotoxic or mutagenic potential for A.cepa, but presented positive responses to an... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Ivan de Godoy Maia / Banca: Jiri Boreck / Banca: Carolina Munari Rodrogues / Banca: Douglas Silva Domingues / Banca: Edvaldo Amaral Aparecido da Silva / Resumo: As proteínas desacopladoras (UCPs) são proteínas especializadas no transporte mitocondrial que dissipam o gradiente eletroquímico de prótons gerados na respiração. Essas proteínas desempenham um papel na manutenção da função mitocondrial e sua importância como componente da tolerância celular ao estresse oxidativo tem sido demonstrada em diversos estudos realizados tanto in vitro com em in vivo. No presente estudo, foram realizados dois estudos empregando UCPs de plantas. Numa primeira abordagem foi realizada uma análise do transcriptoma de plantas transgênicas de tabaco que superexpressam o gene AtUCP1 de Arabidopsis thaliana utilizando a técnica de RNA-Seq. Para o RNA-Seq foi gerado de mais de um milhão de reads com 150 pb em média para cada biblioteca testada. A partir desses reads, um conjunto de aproximadamente 34.000 contigs foi obtido. Após as análises foi possível identificar um total de 816 genes diferencialmente expressos entre as linhagens transgênicas e o controle selvagem, sendo 239 genes induzidos (p≤0,001) e 577 reprimidos (p≤0,001). Em paralelo, uma análise de expressão gênica foi empreendida utilizando mutantes de inserção de arabidopsis para os genes AtUCP1-3, dois deles caracterizados no presente estudo (atucp2 e atucp3), com o objetivo de verificar a funcionalidade e redundância entre essas isoformas. Segundo os resultados obtidos, uma possível compensação só foi observada no mutante atucp3 no qual os genes AtUCP1 e AtUCP2 foram induzidos tanto em condições fisiológicas normais como em condições de estresse salino e osmótico / Abstract: Mitochondrial inner membrane uncoupling proteins (UCP) dissipate the proton electrochemical gradient established by the respiratory chain, thus affecting the yield of ATP synthesis. These proteins play a role in maintaining mitochondrial function and their importance as cellular oxidative stress tolerance component has been demonstrated in several studies performed in vitro and in vivo. In this study, the functional role of plant UCPs was investigated. In a first approach, a transcriptomic analysis of tobacco plants overexpressing the AtUCP1 gene of Arabidopsis thaliana was performed using RNA-seq analysis. The RNA-sequencing generated over a million of reads with 150 base pair on average for each library. From these reads, a set of approximately 34,000 contigs was obtained. A total of 816 differentially expressed genes between transgenic lines and wild-type control was identified. Amongst them, 239 were up-regulated (p≤0,001) and 577 were down-regulated (p≤0,001). In parallel, a gene expression analysis was performed using Arabidopsis insertion mutants for the AtUCP1-3 genes, two of them (atucp2 and atucp3) being characterized in this study. The main purpose was to verify the functionality and the existence of redundancy between the target genes. According to the obtained results, a compensatory expression was observed only in the atucp3 background, in which the AtUCP1 and AtUCP2 genes were induced both in normal physiological conditions and under salt and osmotic stresses / Doutor

Orientador: Irma de Godoy / Coorientador: Susana Erico Tanni Minamoto / Coorientador: Camila Renata Corrêa / Banca: José Antonio Baddini Martinez / Banca: Mariana Gobbo Braz / Banca: Oliver Augusto Nascimento / Banca: Ângela Victoriano de Campos Soares / Resumo: Foi realizado estudo transversal para avaliar e comparar a associação entre estresse oxidativo e estado inflamatório e suas relações com a força muscular, a massa muscular sistêmica, a capacidade funcional de exercício e o estado geral de saúde em tabagistas, pacientes com doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC) leve/moderado e controles não tabagistas. Foram avaliados 32 tabagistas ativos (carga tabágica >10 anos/maço) sem DPOC, 32 pacientes com DPOC leve/moderado [tabagistas ativos ou ex-tabagistas (carga tabágica >10 anos/maço)] e 32 indivíduos não tabagistas. Todos os indivíduos foram submetidos à avaliação clínica e do estado tabágico, espirometria pré e pósbroncodilatador, oximetria de pulso e as concentrações de mediadores inflamatórios [proteína C-reativa (PCR), interleucina (IL) 6, receptores do fator de necrose tumoral alfa (TNFR1 e TNFR2)] e indicadores de estresse oxidativo [produtos finais de glicação avançada (AGEs) e receptor solúvel do produto final de glicação (sRAGE)] foram avaliadas no soro. Foi realizada avaliação da composição do corpo por bioimpedância, da força muscular periférica por dinamometria, da capacidade funcional de exercício (distância percorrida em seis minutos) e da avaliação do estado geral de saúde, por meio do Medical Outcomes Study 36-item Short-Form Health Survey (SF-36) e da Escala Hospitalar de Ansiedade e Depressão (HAD). Tabagistas (p<0,001) e pacientes com DPOC (p<0,001) apresentaram valores superiores de AGEs quando comparados aos controles. Não houve diferença estatisticamente significante entre tabagistas e pacientes com DPOC. As concentrações de sRAGE não diferiram entre os grupos (p=0,92). Tabagistas (p=0,01) e pacientes com DPOC (p=0,01) apresentaram valores superiores da PCR em comparação aos controles, sem diferenças nas demais comparações. As concentrações de IL6 (p=0,07) e TNFR1 (p=0,07) não diferiram entre os grupos. Os valores... / Abstract: The aim of this study was to evaluate the association between oxidative stress and inflammatory markers and their relationship with muscle strength, systemic muscle mass, exercise capacity, quality of life in smokers, mild/moderate COPD patients and nonsmokers controls. Were evaluated 32 active smokers (smoking history> 10 pack/years) without COPD, 32 mild/moderate COPD patients [current smokers or former smokers (smoking history> 10 pack/years) and 32 nonsmokers. All individuals underwent to medical and smoking status evaluations, spirometry pre and post-bronchodilator and pulse oximetry. The concentration of inflammatory mediators [C-reactive protein (CRP), interleukin (IL) 6, and tumor necrosis factor-alpha receptors (TNFR1 and TNFR2)] and indicators of oxidative stress [advanced glycation end-products (AGEs) and soluble receptors for advanced glycation end-products (sRAGE)] were measured in serum. We assessed body composition by bioimpedance, peripheral muscle strength by dynamometry, exercise capacity (six minutes walk distance) and the health status through the Medical Outcomes Study 36-Item Short-Form Health Survey (SF-36) and the Hospital Anxiety and Depression Scale (HAD). Smokers (p<0.001) and COPD patients (p<0.001) had higher values of AGEs when compared to controls there was no statistically significant difference between smokers and COPD patients. The sRAGE concentrations did not differ between groups (p=0.92). Smokers (p=0.01) and patients with COPD (p=0.01) showed higher values of CRP compared to controls, there was no statistical significant difference between smokers and COPD groups. The concentrations of IL-6 (p=0.07) and TNFR1 (p=0.07) did not differ between groups. Regarding concentrations of TNFR2, COPD patients showed higher values when compared to smokers (p=0.004) and controls (p=0.004). We identified positive association of smoking (p=0.04), CRP (p=0.03) and IL6 (p=0.03) with the concentrations of AGEs. The ... / Doutor

A obesidade é tida como o principal preditor para o desenvolvimento da apnéia obstrutiva do sono (AOS). Tanto a obesidade, como a AOS estão associadas a maior prevalência de doenças cardiovasculares e alguns fatores comuns às duas doenças são considerados como responsáveis por esta ligação, como o aumento no stress oxidativo, do tônus simpático e da resistência à insulina. Para o tratamento da AOS, o uso do CPAP é a principal escolha, melhorando a qualidade do sono destes indivíduos. No entanto, os efeitos fisiológicos sobre outras variáveis vêm sendo bastante pesquisados nos últimos anos. Dessa forma, o objetivo do presente trabalho foi verificar o efeito do CPAP sobre o stress oxidativo e níveis de adiponectina em pacientes obesos portadores de AOS. Foram estudados pesquisa 29 pacientes, classificados como obesos (IMC = 30kg/m2), do sexo masculino, com idade entre 25-70 anos, divididos em 3 grupos: a) Grupo I: 10 indivíduos sem AOS (índice apnéia-hipopnéia-IAH = 5), que não tiveram AOS diagnosticada após a realização da polissonografia; b) Grupo 2: 10 portadores de AOS de moderada a grave (IAH = 20) que não fizeram o uso do CPAP, por não se adaptarem ao aparelho ou por terem optado pelo tratamento cirúrgico, após o prazo de 2 meses; c) Grupo 3: 9 portadores de AOS de moderada a grave (IAH = 20) que fizeram o uso do CPAP. Foram pacientes com indicação, acesso e adaptação (no mínimo 4h por noite, durante dois meses) ao CPAP. O grupo 3 apresentou diferenças significativas antes e após o uso do CPAP, nas seguintes variáveis: redução na produção de superóxido [13,2 (10,3-19,6) vs. 10,5 (5,8-11,8) nmoles O2- /2x106 PMN] e aumento na síntese de nitritos e nitratos séricos [24,5 (16,7-33,5) vs. 49,5 (39,3-58,1) uM] e nos níveis plasmáticos de adiponectina [4,4 (4,2-5,6) vs. 5,3 (4,4-6,1) ug/mL]. Também foram verificadas correlações positivas entre a produção de superóxido e o índice apnéia-hipopnéia (IAH) (r= 0,726154; p= 0,000431), entre os níveis de nitritos e nitratos séricos e de adiponectina (r= 0,68809886; p= 0,001127), entre a produção de superóxido e o HOMA-IR (r= 0,833409; p= 0,000009), entre o entre o IAH e o HOMA-IR (r= 0,8570778; p= 0,000002). Foram observadas correlações negativas entre o índice IAH e os níveis de nitritos e nitratos séricos (r= -0,867078; p= 0,000002), entre a produção de superóxido e de óxido nítrico (r= -0,92733221; p= 0,000000), entre a produção de superóxido e os níveis de adiponectina (r= -0,77373778; p= 0,000102), entre o IAH e os níveis de adiponectina (r= -0,70782095; p= 0,000698) entre a os níveis de nitritos e nitratos séricos e o HOMA-IR (r= -0,813984; p= 0,000002). De acordo com os resultados do presente trabalho, podemos concluir que: a) Os indivíduos obesos portadores de AOS apresentam aumento na produção de superóxido, redução nos níveis de nitritos e nitratos séricos e adiponectina, e resistência à insulina; b) As alterações na produção de superóxido, nos níveis de nitritos e nitratos séricos e de adiponectina e a resistência à insulina presentes na obesidade, são agravadas pela apnéia obstrutiva do sono e c) O uso do CPAP é capaz de melhorar as elevações na produção de superóxido, as reduções nos níveis de nitritos e nitratos séricos e adiponectina e as alterações metabólicas presentes nos pacientes obesos portadores de AOS. / Obesity is viewed as the main factor for the obstructive sleep apnea (OSA) development. Obesity and the OSA are both associated with the major cardiovascular illnesses prevalence and certain common factors they are considered responsible for, such as the stress oxidative increase, the sympathetic tonus and the resistance to insulin. For the OSA treatment, CPAP usage is the first choice in enhancing these individuals sleeping quality. Meanwhile, the physiological effects on other variables are being actively searched for these last years. Thus, the objective of this paper was to check CPAP effect on oxidative stress and the adiponectin levels in obese patients with OSA. Twenty nine male patients considered obese (BMI = 30kg/m2) and between the ages of 25-70 were analyzed, then divided into 3 groups: a) Group I: 10 OSA free patients (apnea-hipopnea index (AHI) = 5), after a polysomnography diagnostic; b) Group 2: 10 with moderate to serious OSA (AHI = 20) and CPAP free usage for failure to adapt to the machine or, for having chosen surgical treatment after two months; c) Group 3: 9 with OSA from moderate to serious (AHI = 20) using CPAP. They were patients with sign, access and adaptation (in minimum 4 hours/night, during 2 months) to CPAP. Significant differences were observed in group 3, before and after CPAP usage in the following variables: reduction of superoxide production [13,2 (10,3-19,6) vs. 10,5 (5,8-11,8) n moles O2- /2x106 PMN] and increase in serum nitrite/nitrates levels [24,5 (16,7-33,5) vs. 49,5 (39,3-58,1) ug/mL] and the adiponectin plasmatic levels [4,4 (4,2-5,6) vs. 5,3 (4,4-6,1) ug/mL]. Positive correlations between superoxide production and Apnea-Hypopnea Index (AHI) (r= 0,726154; p= 0,000431) were verified, as well as between serum nitrite/nitrates levels and adiponectin levels (r= 0,68809886; p= 0,001127); superoxide production and HOMA(IR) (r= 0,833409; p= 0,000009); AHI and HOMA(IR) (r= 0,8570778; p= 0,000002). Negative correlations were observed between AHI and serum nitrite/nitrates levels (r= -0,867078; p= 0,000002); superoxide and serum nitrite/nitrates levels (r= -0,92733221; p= 0,000000); superoxide production and adiponectin levels (r= -0,77373778; p= 0,000102); AHI and adiponectin levels (r= -0,70782095; p= 0,000698); serum nitrite/nitrates levels and HOMA(IR) (r= -0,813984; p= 0,000002). According to our results we can conclude that: a) obese individuals with OSA have superoxide production, serum nitrite/nitrates levels and adiponectin reduction, and resistance to insulin; b) alterations in superoxide production, serum nitrite/nitrates levels, adiponectin and the resistance to insulin present in obesity, are all worsen by the sleep obstructive apnea; c) CPAP usage can improve rises in superoxide production, reductions serum nitrite/nitrates levels and adiponectin, and the metabolic alterations present in obese patients with OSA.

Orientador: Winston Bonetti Yoshida / Coorientador: Ricardo de Alvarenga Yoshida / Resumo: Contexto: O clampeamento infrarrenal e trauma cirúrgico estão associados a alterações hemodinâmicas e oxidativas que podem comprometer a função renal pós-operatória. Ademais, a colite isquêmica é uma grave complicação da cirurgia da aorta abdominal. É possível que ocorram diferenças na fisiopatologia destas complicações associadas às diferentes modalidades de tratamento do aneurisma de aorta abdominal. Objetivo: Avaliar o estresse oxidativo, os distúrbios hemodinâmicos, lesão renal e as alterações histopatológicas em fragmentos de cólon esquerdo de porcos submetidos a modelo experimental de interrupção aguda de fluxo sanguíneo aórtico, comparando os diferentes acessos cirúrgicos: tradicional, endovascular ou videolaparoscópico. Material e Métodos: 30 porcos, fêmeas, com 15-30kg, foram divididos aleatoriamente em 3 grupos, sendo todos submetidos, sob anestesia geral inalatória, a interrupção de fluxo da aorta abdominal por 60 minutos, por diferentes técnicas: Grupo C (n=10), através de laparotomia transperitoneal; Grupo L (n=10), através da técnica totalmente laparoscópica; Grupo EV(n=10), através da via endovascular por insuflação de balão de oclusão de aorta. Foi feita monitorização intraoperatória de pressão arterial, frequência cardíaca, balanço hídrico e coleta de amostras de sangue antes do procedimento e 60 minutos após a reperfusão. Os desfechos primários estudados foram: volume de sangramento, estresse oxidativo sistêmico (dosagens de Malondialdeido, Glutationa Reduzi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Context: Infrarenal aortic cross-campling and surgical trauma are associated with hemodynamic and oxidative alterations that may impair postoperative renal function. Furthermore, Colonic ischemia is a relatively uncommon but devastating complication of abdominal aortic surgery. Its occurrence and severity is related to operative and anesthetic trauma. Therefore, it is a known complication of all different modalities of treatment of abdominal aortic aneurysm. Objective: To evaluate oxidative stress, hemodynamic disorders, renal injuries and histopathological changes in the left colon fragments of pigs subjected to the experimental model of acute aortic flow interruption, comparing the approaches by laparotomy, endovascular surgery and laparoscopic surgery. Materials and Methods: A total of 30 female pigs weighing 15-30 kg were randomly divided into 3 groups, all of which were subjected, under general ihaling anesthesia, to a 60-minute interruption of abdominal aortic flow by means of different techniques: C Group (n=10), through transperitonial laparotomy; L Group (n=10), through a totally laparoscopic technique; EV Group (n=10), through the endovascular procedures by insufflating the occlusion balloon of the aorta. Blood pressure, heart beat, and water balance intraoperative monitoring was performed and blood samples were collected both before the procedure and 60 minutes after reperfusion. The primary outcomes studied were: bleeding volume, systemic oxidative stress (levels... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor