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Made available in DSpace on 2013-08-07T19:05:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000422340-Texto+Completo-0.pdf: 14563536 bytes, checksum: b6883cbe3401270733359041afa6d671 (MD5) Previous issue date: 2010 / BACKGROUND: Mononuclear cells (MCs) from bone marrow have been used in various treatments of diseases in an attempt to regenerate tissues. The objective of this study was to evaluate the access and proliferation of mononuclear cells in a critical defect, with the addition of platelet-rich plasma (PRP) and / or TGF-β1 (transforming growth factor beta 1), and then to evaluate bone repair at defective sites on the femurs of rats. METHODS: We created a critical defect on the bilateral femurs of 33 Wistar- Kyoto rats. Mononuclear bone marrow cells, TGF-β and PRP were added to the lesion on the treated side and saline on the contralateral side. We determined the adhesion of mononuclear cells at the critical defect and bone repair. RESULTS: The presence and consequent access of mononuclear cells administered in the treated animals were shown by the PCR technique. Radiographic analysis showed closure of the lesion groups in MCs + TGF-β and MCs + PRP, however, we can not say whether the treatment was administered or by the bone regeneration, when analyzed at 6 and 10 weeks, there is seen not differ substantially between groups. CONCLUSIONS: a) Bone marrow mononuclear cells did not adhere at the critical defect created in the rat femur; b) It was not possible to assess the relative efficiency of the proposed treatments on bone healing, since no significant differences in the evaluation of groups. / INTRODUÇÂO: As células mononucleares (CMs) da medula óssea têm sido utilizadas em diversas patologias na tentativa de regeneração tecidual. O objetivo deste estudo foi avaliar a adesão de células mononucleares sobre um defeito crítico, com a adição do plasma rico em plaquetas (PRP) e/ou TGF-β1 (Fator de crescimento transformador Beta 1) e, por fim, verificar o reparo ósseo dos sítios defeituosos dos fêmures dos ratos. MÉTODOS: Foi criado um defeito crítico bilateral nos fêmures de 33 ratos Wistar-Kyoto. Células mononucleares da medula óssea, TGF-β e PRP foram adicionadas no lado tratado da lesão e soro fisiológico no lado contralateral. Avaliou-se a adesão de células mononucleares sobre o defeito crítico e o reparo ósseo. RESULTADOS: A presença e conseqüente adesão das células mononucleares administradas nos animais tratados não foram evidenciadas através de técnica de PCR. As análises radiográficas evidenciam fechamento da lesão nos grupos CMs +TGF-β e CMs + PRP, porém, não podemos afirmar se foi pelos tratamentos administrados ou pela própria regeneração óssea, quando analisadas em 6 e 10 semanas, haja visto não apresentarem diferenças significativas entre os grupos. CONCLUSÕES: a) as células mononucleares da medula óssea não aderiram ao defeito crítico criado no fêmur do rato; b) Não foi possível avaliar a eficiência relativa dos tratamentos propostos no reparo ósseo, uma vez que não houve diferenças significativas na avaliação dos grupos.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-10-06T13:41:03Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1885900 bytes, checksum: 8726b1095eee8fb9ac9dda8ea8597418 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-06T13:41:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1885900 bytes, checksum: 8726b1095eee8fb9ac9dda8ea8597418 (MD5) Previous issue date: 2005-02-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Foi realizado um experimento com o objetivo de determinar aspectos físicos, químicos e mecânicos das tíbias de frangos de corte. Foram avaliados o peso vivo das aves e peso, comprimento, densidade, porosidade, teores de cinzas e minerais das tíbias. Também foram estudadas a área da seção transversal, momento de inércia, carga máxima na flexão, resistência à flexão, rigidez e tenacidade dos referidos ossos. Os dados foram coletados no período de 21 a 42 dias de idade. Foram utilizados 600 pintos de um dia de idade, machos e fêmeas, oriundos de três cruzamentos, dois da Universidade Federal de Viçosa (UFV) e um comercial, alojados em boxes de piso de cimento cobertos com cepilho de maravalha. Todos receberam as mesmas rações, inicial (1 a 21 dias), crescimento (22 a 35 dias) e final (36 a 42 dias), calculadas para atender as exigências nutricionais das aves em cada período. Foi utilizado delineamento experimental inteiramente casualizado em esquema fatorial 3 x 2 (três cruzamentos e os dois sexos), cinco repetições e 10 aves por unidade experimental (boxe). Semanalmente, aos 21, 28, 35 e 42 dias de idade, foram amostrados aleatoriamente um macho e uma fêmea por boxe, num total de 5 boxes por cruzamento, sendo que a cada idade os boxes amostrados não se repetiam. O cruzamento comercial apresentou taxa de crescimento superior aos cruzamentos da UFV, causando respostas adaptativas das tíbias, que alteraram, principalmente, aspectos relacionados à sua geometria. Apesar do maior peso das aves, a resistência óssea do cruzamento comercial não foi superior à dos demais. Desta forma, a continuidade do processo de melhoramento para ganho de peso pode resultar no aumento da ocorrência de problemas estruturais. Um dos cruzamentos da UFV (C1), além de apresentar pior desempenho no crescimento, apresentou ossos menos densos e menos resistentes aos 42 dias de idade, o que pode aumentar o risco de deformações e fraturas e, em conjunto, o torna menos interessante economicamente. Entre os sexos, as fêmeas, por apresentarem taxa de crescimento inferior aos machos (dimorfismo sexual), tenderam a desenvolver ossos de melhor qualidade, ou seja, mais densos, mais rígidos e mais resistentes, o que explica, em parte, porque a incidência de deformidades ósseas é menor neste sexo. / An experiment was carried out focused in the physical, chemical and mechanical aspects of broilers tibial bones. The main variables involved were: body weight and tibial weight, length, density, porosity, ash and mineral content. Also, cross-sectional area, moment of inertia, maximum load, strength, stiffness and toughness in bending of the bones were studied. The experimental period comprised the broilers growing fase (21 to 42 days). Six hundred day-old broilers, male and female, from three different lines, one comercial and two developed at Federal University of Viçosa (UFV), were reared in wood shaving covered floor. They were fed the starter (1 to 21 days), grower (22 to 35 days) and finisher (36 to 42 days) diets, designed to satisfy their nutritional requirements in each phase. The experiment design was completely randomized, in a factorial arrengement of treatments (three lines and two sexes) with 5 replicates and 10 birds per experimental unit. The comercial line grew at a faster rate than the UFV lines, resulting in bones adaptations by altering their morphological aspects. Although they had higher weights, their bones were not stronger than those from the other lines. Then, the ongoing process of selecting this line for body weight gain may result in a increasing occurrence of leg abnormalities and structural problems. One of the UFV lines presented the lowest growth performance, also developing less dense and less strong bones, rising the risk of deformities and fracture occurrence. Thus, with these features, this line seems to be of little comercial interest. Considering sexual differences, as the females grew at lower rates (sexual dimorfism), they tended to develop bones with better quality, which means denser, stiffer and stronger. These aspects, partially explain why females are less susceptible to bone deformities than males. / Dissertação importada do Alexandria

Made available in DSpace on 2016-04-08T03:06:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000477915-Texto+Completo-0.pdf: 595 bytes, checksum: dc72b670df365af7e40c72ed34834b2e (MD5) Previous issue date: 2016 / With the growing expansion of implant surfaces and the need for greater speed of osseointegration, methods of analysis of bone tissue and implant surface as well as the quality of the bone implant contact (BIC), they are increasingly being explored by researchers. The aim of this study is to show detail and describe a bone preservation protocol for making implants samples with and without implants without any harm or damage, or the bone tissue or the properties of the metal, preserving the BIC. In a second step, the samples prepared by the protocol preservation were compared with those made by histological analysis method for staining for HE, considered the gold standard for living tissue. Eight samples were used for bone tissue with implants in rabbit tibia and more four fragments of jaws without implants of the same rabbits. Samples with and without implants were made by the two protocols, after preparation of the test specimens, analysis by optical microscopy of transmission and reflection through scanned images were made. Each protocol had advantages when the results were analyzed individually in the implants without samples, becoming further analysis. However, for samples with implants, analysis only by histological method cannot bring good results, while the bone preservation method showed excellent results for osseointegration analysis, bone formation and bone implant interface. It follows that the bone preservation protocol is an excellent method for analyzing samples with implants, and can be complementary to histology, in analysis bone samples without implants. The histological method is not sufficient for analysis of bone formation and bone implant interface. / Com a crescente expansão de superfícies de implantes e a necessidade de maior velocidade de osseointegração, métodos de análise do tecido ósseo, análises da superfície de implantes e a qualidade do contato osso-implante (BIC) estão cada vez mais sendo explorados pelos pesquisadores. O objetivo do presente estudo foi descrever detalhadamente um protocolo de preservação óssea para confecção de amostras com e sem implantes, sem causar danos ou avarias nem ao tecido ósseo nem às propriedades do metal, preservando o BIC. Em uma segunda etapa, as amostras confeccionadas pelo protocolo de preservação óssea foram comparadas com as amostras preparadas pelo método de análise histológica por coloração por Hematoxilina-Eosina, considerado padrão ouro para tecidos vivos. Foram utilizadas oito amostras de tecido ósseo com implantes de tíbias de coelhos e, mais quatro fragmentos de mandíbulas sem implantes, dos mesmos coelhos. As amostras com e sem implantes foram confeccionadas pelos dois protocolos e, após a preparação dos corpos de prova, foram feitas as análises por microscopia óptica de transmissão e reflexão através de imagens digitalizadas. Cada protocolo apresentou vantagens quando os resultados foram analisados individualmente nas amostras sem implantes. Porém, para as amostras com implantes, a análise apenas pelo método histológico não conseguiu apresentar bons resultados, enquanto que o método de preservação óssea mostrou excelentes resultados para análise de osseointegração, neoformação óssea e interface osso-implante. Conclui-se que o protocolo de preservação óssea desenvolvido mostrou-se um excelente método para análise de amostras com implantes, e que pode ser complementar à histologia, em análises de tecido ósseo sem implantes. O método histológico não mostrou-se suficiente para análise de neoformação óssea e interface osso-implante.

Made available in DSpace on 2011-12-27T14:14:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 000388585-0.pdf: 2402252 bytes, checksum: 61c5f710d7d456a08638eac157bdc111 (MD5) license.txt: 581 bytes, checksum: 44ea52f0b7567232681c6e3d72285adc (MD5) / The bone marrow besides having a high number of heterogenic cells, like connective, hematopoietics, and neuronal cells, also presents a great number of stem cells. These cells are pluripotent, so can differentiate in any connective cell when a stimulus is given. The aim of this study was to evaluate bone marrow stem cells adhesion, proliferation, and differentiation to osteoblast in vitro, over a collagen membrane and a poli-lactic (glycolic) acid scaffold (PLGA), using either recombinant human bone morphogenetic protein (rhBMP-4) and platelet rich plasma (PRP). Bone marrow cells were aspirated from iliac crest and purify using specifics techniques. These cells were separated in main big groups cultured over collagen membrane and PLGA scaffold. Each culture had 4 distinct treatments: (1) with rhBMP-4; (2) with rhBMP-4 and PRP; (3) with PRP; and (4) control (only standard medium). The groups were evaluated after 6, 9 14 and 21 days. Microscopic analysis of collagen membrane and PLGA scaffold were performed using either Propidium Iodide, and Eosin and Hematoxilin. Real time PCR was performed to identify the expression level of osteopontin and osteocalcin, and standard PCR to osteopontin. The results showed cellular adhesion in both biomaterials, and suggest a higher cell proliferation and differentiation in rhBMP-4 and PRP, and PRP groups. The groups with rhBMP-4 had more differentiate cells that control group. The data obtained here indicate that PRP and/ or rhBMP-4 induce adhesion, proliferation and differentiation of bone marrow stem cells into osteogenic lineage. / O estroma da medula óssea, além de conter uma população heterogênea de células conjuntivas, nervosas e hematopoiéticas, mantém uma quantidade de células com características de células tronco (células mesenquimais indiferenciadas). Estas possuem capacidade de se diferenciarem em qualquer célula de natureza conjuntiva quando estimuladas pelo organismo. Esta pesquisa teve como objetivo avaliar a adesão, a proliferação e a diferenciação de células mesenquimais da medula óssea cultivadas sobre membrana de colágeno bovino e sobre arcabouço de ácido poliglicólico polilático (PLGA) com a adição do gel de plasma rico em plaquetas (PRP) e/ ou da proteína morfogenética óssea recombinante humana (rhBMP-4). As células foram coletadas da medula óssea da crista do osso ilíaco humana e separadas por técnica específica. As células foram cultivadas em dois suportes: membrana de colágeno e arcabouço de PLGA, e receberam 4 tratamentos distintos: (1) com rhBMP-4, (2) com rhBMP-4 e PRP, (3) com PRP e (4) controle (somente meio de cultura). Os subgrupos foram avaliados em 6, 9, 14 e 21 dias. Foram realizadas análises microscópicas das membranas e arcabouços com as colorações de Iodeto de Propídio e de Hematoxilina e Eosina. Foi feito PCR em tempo real a fim de se avaliar a expressão de osteopontina e osteocalcina e PCR convencional para osteopontina. Os resultados mostraram adesão celular tanto na membrana de colágeno como no arcabouço de PLGA. Sugere-se haver uma maior proliferação e diferenciação celular nos grupos que foram adicionados PRP, e rhBMP-4 e PRP juntos. Nos grupos com rhBMP-4 parece haver uma maior diferenciação celular que o grupo controle. Os dados obtidos indicam que o PRP e/ ou a presença de rhBMP-4 induzem adesão, proliferação e diferenciação de células da medula óssea em células de linhagem osteogênica.

Made available in DSpace on 2011-12-27T14:14:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 000386622-0.pdf: 8591467 bytes, checksum: ed9eba44f55cbf4c0707a1758c121da0 (MD5) license.txt: 581 bytes, checksum: 44ea52f0b7567232681c6e3d72285adc (MD5) / Low level laser therapy is used in the therapeutic of the bone tissue and adjacent structures. However, its biological effects depend on the optic properties of the interaction of the radiation with the target tissue, which are correlated to the physical parameters of the biological object and the parameters of the laser light. Therefore, the aim of this work was evaluate the interaction of lasers with the human dry bone, through the determination of the coefficients of attenuation and the penetration of diode lasers in the red visible region and in the infra-red laser light in this tissue. Three bone blocks of the region of the body of different human dry mandibles was cut, with total average thickness of 0,0744 m. The samples had been sliced block-type of average thickness of 0,0402 m and irradiated with red visible laser ( 682-685 nm), continuous, in contact and with irradiance of 8,679 Wm-2, 10. 481 Wm-2 and 14,946 Wm-2; the same was done with infra-red laser light (826-829 nm) with irradiance of 9,854 Wm-2, 18,278 Wm-2 and 28,440 Wm-2. Throughout the experiment the blocks had been being successively removed and the samples irradiated, becoming possible the irradiation under different thicknesses of tissue. The data had been measured by direct spectrorradiometric and analyzed in the program Origin 7. 0® through equations of adjustment to this experimental model. The measured results had demonstrated the following trends:The transmission of lasers in the region of the visible red and the infra-red is proportional to the inverse of the thickness of the tissue irradiated; the coefficient of attenuation of the bone tissues is proportional to the irradiance; the penetration of lasers visible red and infra-red is proportional to the inverse of irradiance and don’t change significantly whit irradiance, but change with wavelength; the laser in the region of the infra-red had a lower coefficient of attenuation and a higher penetration in relation to the visible red. It can be concluded that the values of the attenuation coefficient and the penetration of lasers in the region of wavelength in visible red (682 - 685 nm) and of the infra-red (826 - 829 nm) in the region of mandible body dry human being, mainly are determined by the optic and morphologic characteristics of the tissue, not being possible the determination of an only standard kind laser/tissue interaction, and yes trends. / Lasers em baixas densidades de potência são empregados na terapêutica do tecido ósseo e de estruturas adjacentes. Entretanto, seus efeitos biológicos dependem das propriedades ópticas da interação da radiação com o tecido alvo, as quais são correlacionadas aos parâmetros físicos do meio e da luz laser. Portanto, realizou-se um trabalho com objetivo de avaliar a interação dos lasers com o tecido ósseo humano seco, através da determinação dos coeficientes de atenuação e da penetração dos lasers de diodo na região visível e do infravermelho próximo do espectro eletromagnético nesse tecido. Foram confeccionadas três peças ósseas da região do corpo de mandíbulas humanas secas distintas, com espessura média total de 0,0744 m. As amostras foram fatiadas em blocos de espessura média de 0,0402 m e irradiadas com laser vermelho (I 682-685 nm), contínuo, pontual, em contato e com irradiâncias de 8,679 Wm-2, 10,481 Wm-2 e 14,946 Wm-2; o mesmo foi realizado com o laser infravermelho (I 826-829 nm) com irradiâncias de 9,854 Wm-2, 18,278 Wm-2 e 28,440 Wm-2. Ao longo do experimento os blocos foram sendo sucessivamente retirados e as amostras irradiadas, tornando possível a irradiação sob diferentes espessuras de tecido. Os dados foram obtidos por espectrorradiometria direta e analisados no programa Origin 7. 0® através de equações de ajuste a esse modelo experimental.Os resultados obtidos demonstraram as seguintes tendências: a transmissão dos lasers vermelho e infravermelho possuem relação inversamente proporcional à espessura do tecido irradiado; o coeficiente de atenuação do tecido ósseo aos lasers é inversamente proporcional à irradiância incidente; a penetração dos lasers possuem relação inversamente proporcional à irradiância e não altera-se significativamente em função da irradiância e sim em função do comprimento de onda; o laser na região do infravermelho possui um menor coeficiente de atenuação e uma maior penetração em relação ao vermelho. Pode-se concluir que os valores do coeficiente de atenuação e a penetração dos lasers na região do vermelho de I 682 - 685 nm e do infravermelho de I 826 - 829 nm do espectro eletromagnético na região de corpo de mandíbula humana seca, são principalmente determinados pelas características ópticas e morfológicas do tecido, não sendo possível a determinação de um padrão único de interação laser/tecido, e sim tendências.

Made available in DSpace on 2011-12-27T14:14:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 000425578-0.pdf: 1317181 bytes, checksum: b20aaf08d45d26e52a920073367ead4a (MD5) license.txt: 581 bytes, checksum: 44ea52f0b7567232681c6e3d72285adc (MD5) / The aim of present study was to evaluate the local tissue reaction in the skull of rats using the implantation of disks of poly (lactic L/D-acid) and evaluate its genotoxicity, throught the induction of micronuclei in polychromatic erythrocytes (PCE) in the bone marrow of mice. It used 25 male Wistar rats, with 200 and 300 grams. 20 animals underwent surgical procedures and had the discs implanted, and 5 animals received postoperative medication in the same way, serving as a control group for genotoxicity. With a 4. 1 mm trephine drill, two ostectomies circular were done, one in each parietal bone. On the right drilling a disc of poly (lactic L/D-acid ) was inserted, and on the left one it was filled by blood clot (control group). The animals were killed at the appropriate times (15, 30, 90 and 120 days after surgery), by inhalation of isoflurane. In the 20 operated animals the skull was removed and fixed in formalin 10%. The samples were subjected to decalcification and then to paraffinembedded and subjected to cuts of 6 microns in the transverse direction, at the portion of larger diameter discs. The slides obtained were subjected to histochemical technique of staining EH. To evaluate the genotoxicity, both femurs of each animal were removed and the contents of the bone marrow extracted directly on a slide with a drop of fetal calf serum, and mixed. It was made a smear with this material. The slides were dried, fixed in methanol and stained one section of each femur with Giemsa and the other with Acridine Orange. The results were subjected to statistical evaluation by analysis of variance (ANOVA). In histological evaluation, between 15 and 30 days, the bone defect was made clear in both groups, and it is not observed bone formation and resorption episodes or foreign body reaction. In periods of 90 and 120 days in the control group, it was noticed a new formation at the edges of the defect. In the experimental group, there was new bone formation at the edges of the defect and migrating below the site occupied by the disk and the absence of inflammatory infiltrate. Regarding to the evaluation of genotoxicity it was not detected a significant reduction (p <0. 05) in the frequency of EPC in relation to negative control or significant increase (p <0. 05) in the EPC with micronuclei. It can be concluded that the material used in this study is biocompatible and well tolerated by the tissues studied, and found negative for chromosomal mutagenicity when tested. / O objetivo do presente estudo foi avaliar a reação tecidual local, em calota craniana de ratos, frente à implantação de discos de poli (ácido L/D-láctico) e avaliar a sua toxicidade genética, pela indução de micronúcleos em eritrócitos policromáticos (EPC) na medula óssea de ratos. Foram utilizados 25 ratos Wistar, machos, com 200 e 300 gramas. 20 animais sofreram procedimento cirúrgicos e tiveram os discos implantados, e 5 animais receberam medicação pós-operatória da mesma maneira, servindo como grupo controle para genotoxicidade. Com uma broca trefina 4,1mm foram realizadas duas ostectomias circulares, uma em cada osso parietal. Na perfuração direita foi inserido um disco de poli(ácido L/D-láctico), e a do lado esquerdo foi preenchida por coágulo sanguíneo (grupo controle). Os animais foram eutanasiados nos tempos apropriados (15, 30, 90 e 120 dias após a cirurgia), por inalação de isoflurano. Nos 20 animais operados foi retirada a calota craniana e fixada em formalina tamponada a 10%. As amostras foram submetidas à descalcificação e após emblocados em parafina e submetidos a cortes de 6 μm, no sentido transversal, na porção de maior diâmetro dos discos. As lâminas obtidas foram submetidas à técnica histoquímica de coloração HE. Para avaliação da genotoxicidade, ambos os fêmures de cada animal foram removidos e o conteúdo da medula óssea extraído diretamente sobre uma lâmina com uma gota de soro bovino fetal, e homogeinizada. Com este material foi feito um esfregaço. As lâminas foram secas, fixadas em metanol e coradas uma lâmina de cada fêmur com Giemsa e a outra com Acridine Orange. Os resultados obtidos foram submetidos a avaliação estatística pela Análise de Variância (ANOVA). Na avaliação histológica, no período de 15 e 30 dias, em ambos os grupos o defeito ósseo foi bem evidenciado, não sendo observados neoformação óssea, episódios de reabsorção óssea nem reação de corpo estranho. Nos períodos de 90 e 120 dias, no grupo controle, observou-se neoformação nas bordas do defeito. No grupo experimental, houve neoformação óssea nas bordas do defeito e migrando abaixo do local ocupado pelo disco e ausência de infiltrado inflamatório. Quanto a avaliação de genotoxicidade, não foi detectada redução significativa (p < 0,05) da frequência de EPC em relação ao controle negativo nem aumento significante (p < 0,05) nos EPC com micronúcleos. Pode-se concluir que o material utilizado neste estudo é biocompatível e bem tolerado pelos tecidos estudados, sendo considerado negativo para mutagenicidade cromossômica no ensaio realizado.

Made available in DSpace on 2011-12-27T14:14:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 000413419-0.pdf: 7548238 bytes, checksum: fb7df37e9d8df24acf3390709418323f (MD5) license.txt: 581 bytes, checksum: 44ea52f0b7567232681c6e3d72285adc (MD5) / Tissue engineering has been showing a promising approach on the treatment of patients with trauma or facial deformities that need extensive areas of bone grafts. It involves the association of an appropriate kind of cell and a biocompatible and biodegradable scaffold that imitates functionally and structurally a specific kind of tissue. Calcium Phosphate Cement (CFC) appears as an interesting alternative of biomaterial to be used as a scaffold due to its characteristics as biocompatibility, bioactivity and osteoconductivity. Thus, the aim of the present study was to evaluate the ability of macroporous tridimensional CFC scaffolds, made with brazilian rawmaterial, to allow the adhesion, proliferation and differentiation of mesenchymal stem cells, derived from human bone marrow in cells osteogenic lineage. For that, cells obtained from iliac crest of an adult human donor were routinely processed until experimental conditions and, after that, cultured over CFC discs, macroporous that had as poror generation body, paraffin spheres, with size between 100 and 250μm. For the induction of cells in osteogenic lineage, BMP4 was added to the culture. Culture periods were established in five, ten and fifteen days. After these periods cells were evaluated due to their morphology by Scanning Electron Microscopy. The expression levels of genes BGLA and SSP1, that codify the osteocalcine (OC) and osteopontine (OP) proteins, as well as the Alkaline phosphatase activity (ALP), other important osteoblastic marker , were quantified by the PCR technique in real time QT-PCR) using the fluorophore SYBR GREEN® . The QT-PCR detected the expression of the genes BGLA and SSP1 and the alkaline phosphatase activity in the periods of 10 and 15 days of culture, what permitted them to check that had a cell proliferation and the differentiation of it in osteogenic cells.In the period of five days, it was not observed the expression of any observed genes. From theses results we concluded that the macroporous CFC, with pore size between 100 and 250 μm, created through the utilization of the paraffin microspheres, permits the adhesion, proliferation and differentiation of mesenchymal stem cells and can be used as an scaffold to the bone tissue engineering. / A engenharia tecidual tem se mostrado um campo promissor para a reabilitação de pacientes com traumas ou deformidades faciais que necessitem de áreas extensas de enxerto ósseo. Seu princípio básico envolve a associação de um tipo apropriado de célula e de um arcabouço biocompatível e bioabsorvível que mimetize funcional e estruturalmente determinado tipo de tecido. O Cimento de Fosfato de Cálcio (CFC) aparece como uma alternativa viável de biomaterial a ser utilizado com esta finalidade em virtude de suas características como biocompatibilidade, bioatividade e osteocondutividade. Assim, o objetivo da presente pesquisa foi avaliar a capacidade de suportes tridimensionais macroporosos de CFC, confeccionados com matérias-primas brasileiras, de permitir a adesão, proliferação e diferenciação de células-tronco mesenquimais derivadas da medula óssea humana. Para isso, células obtidas da crista ilíaca de um doador humano adulto foram rotineiramente processadas até as condições experimentais e, a seguir, cultivadas sobre suportes de CFC, macroporosos, que tiveram como corpo gerador de poros, microesferas de parafina, com tamanho entre 100 e 250μm. Para indução das células em linhagem osteogênica foi acrescentada Proteína Morfogênica Óssea (BMP4) ao meio de cultura. Os períodos de cultura estabelecidos foram de cinco, dez e 15 dias. Após estes períodos, o comportamento e a morfologia das células junto ao biomaterial foram avaliados por meio de Microscopia Eletrônica de Varredura.Os níveis de expressão dos genes BGLA e SSP1, que codificam as proteínas osteocalcina (OC) e osteopontina (OP) respectivamente, bem como a atividade da Fosfatase Alcalina (ALP), outro marcador osteoblástico importante, foram quantificados pela técnica de PCR em Tempo Real (QT-PCR) utilizando o fluoróforo SYBR Green®. O QT-PCR detectou a expressão dos genes BGLA e SSP1 e a atividade da fosfatase alcalina nos períodos de 10 e 15 dias de cultura, o que nos permitiu constatar que houve proliferação celular e diferenciação destas em células osteogênicas. No período de cinco dias, não foi observada a expressão de nenhum dos genes investigados. A partir destes resultados concluímos que o CFC, macroporoso, com tamanho de poros entre 100 e 250μm, criados por meio da utilização de microesferas de parafina, permite a adesão, proliferação e diferenciação de células-tronco mesenquimais em células osteogênicas, podendo ser utilizado como arcabouço para engenharia de tecido ósseo.

Made available in DSpace on 2011-12-27T14:14:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 000342765-0.pdf: 7940438 bytes, checksum: a8d36361946c4de2fd70b4c4968e6358 (MD5) license.txt: 581 bytes, checksum: 44ea52f0b7567232681c6e3d72285adc (MD5) / The aims of this study was to evaluate new bone formation and biocompatibility by the utilization of Human Demineralized and Mineralized Freeze- Dried Bone Graft (U. S. Tissue & Cell®) and evaluate if Bovine Bone Cortical Membrane (Gen-derm®) enhances the bone repair through the repair process in osseous cavities containing these materials. For that, 36 albinos rats (Rattus norvegicus) distributed in six groups according to the time of sacrifice (7, 14, 21, 30, 60 and 90 days). With a spherical drill of 2mm in diameter at low rotation three osseous cavities were made in the calvaria of each animal. One cavity had anterior orientation and two posterior one. The left posterior cavity was filled with Human Demineralized Freeze-Dried Bone Graft, the right posterior with Human Mineralized Freeze-Dried Bone Graft, while the anterior cavity did not received any material forming the control group. In three animals of each group the cavities were covered by biological membranes. The animals were sacrificed at intervals of 7, 14, 21, 30, 60 and 90 days. The specimens obtained were processed by the paraffin technique, sectioned in the transversal way and stained by H&E. The microscopic evaluation consisted in histomorphometric analysis by the measurement of the proportion of new bone formation as well the number of giant multinucleated cells in each cavity. The obtained numbers were submitted to statistic usage, using the Anova test and Bonferroni´s pairwise comparisons, considering pS0,05.The obtained results allowed us to concluded that: 1) The Bovine Bone Cortical Membrane enhances the bone repair; 2) Human Demineralized and Mineralized Freeze-Dried Bone Graft showed osteocondute properties; 3) Human Demineralized and Mineralized Freeze-Dried Bone Graft are biocompatible; 4) The animal model are suitable for the research design. / Os objetivos do presente estudo foram: avaliar o potencial de formação óssea frente à utilização de enxerto ósseo humano liofilizado desmineralizado e mineralizado da marca U. S. Tissue & Cell®; avaliar se a utilização da membrana de cortical bovina nacional Gen-derm®, influencia na cicatrização óssea e avaliar a biocompatibilidade dos enxertos ósseos, através do processo de reparo do tecido ósseo em cavidades contendo os referidos materiais. Para a realização do experimento, utilizaram-se 36 ratos albinos (Rattus norvegicus) distribuídos em seis grupos de seis animais cada, conforme a época do sacrifício (7, 14, 21, 30, 60 e 90 dias). Com uma broca esférica de 2 mm de diâmetro em baixa rotação, foram confeccionadas três cavidades, duas na porção mais posterior e uma na anterior da calota craniana de cada animal. A perfuração posterior esquerda foi preenchida com Enxerto Ósseo Humano Desmineralizado Liofilizado, a perfuração posterior direita com Enxerto Ósseo Humano Mineralizado Liofilizado e a perfuração anterior foi preenchida com o coágulo sangüíneo do animal, servindo dessa forma como grupo controle. Em três animais de cada grupo a membrana biológica foi utilizada cobrindo as cavidades preenchidas pelos biomateriais.Os animais foram sacrificados nos intervalos de 7, 14, 21, 30, 60 e 90 dias e os espécimes obtidos, processados pela técnica da parafina, sendo os cortes realizados em sentido transversal e corados por HE. A avaliação microscópica consistiu numa análise histomorfométrica, através da mensuração da área de proporção de tecido ósseo neoformado, bem como do número de células gigantes multinucleadas presentes no campo histológico. Os valores obtidos foram submetidos a avaliação estatística pela Análise de Variância (Anova) e comparações múltiplas pelo método de Bonferroni, considerando pS0,05. Os resultados obtidos permitem concluir que: 1) o uso da membrana de cortical óssea bovina desmineralizada interferiu positivamente na cicatrização óssea; 2) os materiais enxerto ósseo humano liofilizado desmineralizado e mineralizado apresentam propriedades osteocondutoras; 3) os materiais enxerto ósseo humano liofilizado desmineralizado e mineralizado são materiais biocompatíveis; 4) O modelo animal utilizado se mostrou adequado para o design da pesquisa.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:57:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000449407-Texto+Completo-0.pdf: 1162279 bytes, checksum: 9434884510ef61af6e2cf460a487ed03 (MD5) Previous issue date: 2013 / Changes in bone mass occur with aging and are related to lifestyle, such as physical activity and occupational activity professional. OBJECTIVES : Evaluate the variation in bone mass at the lumbar spine and proximal femur of São Lucas Hospital (HSL) doctors of Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul (PUCRS), Brazil related to the study released in 2006.METHODS : Longitudinal and observational study with male doctors. It was applied a questionnaire with data on changing lifestyle habits in relation to physical activity for the 2006 study. This study used the DXA equipment HOLOGIC WI with analysis of the lumbar spine, femoral neck and total femur. For the analysis this study used the Student t test and chi-square. Values were significant of p≤0,05.RESULTS : A total of 22 physicians with an average age of 64,0±4,9 yeras. Regarding to physical activity 14 (63. 6%) perform 2x/week or less and 8 (36. 4%) perform physical activity greater than or equal to 3x/week. There was a gain from 2006 to 2012 in T-score of the lumbar spine of -0. 26 ± 1. 41 to 0. 04 ± 1. 47 (p = 0. 015). There was no change in BMD of the lumbar spine. In the femoral neck BMD was reduced from 0. 79 ± 0. 10 to 0. 74 ± 0. 11 (p <0. 001) and T-score of -1. 75 ± 0. 93 to -1. 33 ± 0, 82 (p <0. 001) and total femur from 0. 96 ± 0. 10 to 0. 92 ± 0. 10 (p <0. 001) and T-score of -0. 90 ± 0. 75 for -0, 64 ± 0. 70 (p <0. 001). There was no difference regarding the variation of BMD and frequency of weekly physical activity (≤ ≥ 2x/week or 3x/week) of the values of BMD at lumbar spine (0. 01 ± 0. 04 vs 0. 03 ± 0. 09; p = 0. 547), femoral neck (-0. 05 ± 0. 05 vs. -0. 06 ± 0. 06, p = 0. 759) and total femur (-0. 04 ± 0. 04 vs. -0. 06 ± 0, 04, p = 0. 256). There was an association between age and variation of total T-score of lumbar spine and proximal femur (r = 0. 500, p = 0. 018).CONCLUSION : Regarding the 2006 study there was a reduction in BMD of the femoral neck and total femur and increased total T-score. There was no variation in BMD in relation to physical activity weekly. / INTRODUÇÃO : Alterações da massa óssea ocorrem com o envelhecimento e estão relacionadas a questões individuais como, estilo de vida, falta de atividade física, envolvendo também, atividade ocupacional profissional. OBJETIVO : Avaliar a variação da massa óssea da coluna lombar e fêmur proximal em um grupo de médicos.MÉTODOS : Estudo longitudinal e observacional com médicos masculinos do Hospital São Lucas (HSL) da Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul, (PUCRS), Brasil em relação ao estudo realizado em 2006. Foi aplicado questionário com dados relativos à mudança de estilo de vida em relação ao hábito de atividade física para o estudo de 2006. Utilizou-se o equipamento DXA HOLOGIC WI com análise da coluna lombar, colo do fêmur e fêmur total. Para a análise foi utilizado o teste t de Student e o teste do Qui-quadrado. Foram significativos os valores de p≤0,05.RESULTADOS : Foram avaliados 22 médicos com idade média de 64,0±4,9 anos. Com relação à atividade física 14 (63,6%) realizam 2x/semana ou menos e 8 (36,4%) realizam atividade física maior ou igual a 3x/semana. Houve um ganho de 2006 para 2012 no T-score da coluna lombar de -0,26±1,41 para 0,04±1,47 (p=0,015). Não houve mudança na BMD da coluna lombar. No colo do fêmur houve redução da BMD de 0,79±0,10 para 0,74±0,11 (p<0,001) e do T-score de -1,75±0,93 para -1,33±0,82 (p<0,001) e no fêmur total de 0,96±0,10 para 0,92±0,10 (p<0,001) e do T-score de -0,90±0,75 para -0,64±0,70 (p<0,001). Não houve diferença em relação à variação da BMD e freqüência de atividade física semanal (≤ 2x/semana ou ≥ 3x/semana) nos valores da BMD da coluna lombar (0,01±0,04 vs 0,03±0,09, p=0,547), colo do fêmur (-0,05±0,05 vs -0,06±0,06, p=0,759) e fêmur total (-0,04±0,04 vs -0,06±0,04, p=0,256). Houve associação entre a idade e variação do T-score total da coluna lombar e fêmur proximal (r=0,500; p=0,018).CONCLUSÃO : Em relação ao estudo de 2006 ocorreu uma redução na BMD do colo e fêmur total e aumento do T-score total. Não houve variação na BMD em relação à atividade física semanal.