Made available in DSpace on 2015-04-01T14:12:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1353353 bytes, checksum: afc13ab544d2b95208eed91554138570 (MD5) Previous issue date: 2012-02-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The search for new protein sources that meet the nutritional needs of consumers, and at the same time have sensory attraction, has increased as a result of the growing population. In meat industry the use of whole carcass at slaughter is inefficient, especially the use of blood, organs and viscera. In fact, when these products are not used by the meat industry, their disposal causes environmental problems and, consequent extra expenses with treatment of sewage from slaughterhouses. An alternative to reduce this problem consists in the use of edible byproducts in the preparation of sausages like chorizo. In this sense, the aim of this research was to study the use by-products blood, viscera, discarded goat meat in the processing of a smoked sausage, and to determine its microbial, chemical, sensorial quality and shelf life when sausages were packaged in a film by vacuum or low density polyethylene (LDPE), and storage at 4±1°C for 90 days. The goat smoked chorizo was characterize as a product rich in proteins of high nutritional value, with high levels of amino acids, essential fatty acids, and iron (26,65 mg/100g). The goat smoked chorizo was evaluated as acceptable by consumers, especially for the attributes of aroma and flavor, which reached more than 80% acceptance by the judges. In the evaluation of shelf life, the vacuum package retained higher microbiological and chemical quality of the goat smoked chorizo, showing a period of 63 days, compared to 41 days for LDPE packaging film. The pH values showed a high decrease with the period of storage in vacuum packaged product, this can be explained by the possibility of a favoring the development of anaerobic microorganisms, such as lactic acid bacteria. The oxidation levels of goat chorizo were more pronounced in the product packed in LDPE film, highlighting the role of oxygen in the oxidative development. The chorizo packed in LDPE film showed a high decreased in moisture levels which lead to increased concentrations of ash, lipids, collagen and shear force with time of storage. Although the time of storage and packaging type might have affected the chemical and microbiological parameters of smoked chorizo, no significant difference was found for the sensory attributes evaluated with the time of storage, showing the sensory stability of smoked goat chorizo. In the same way, it was concluded that the use of edible slaughter by-products (blood and viscera) of goats is a viable alternative for the formulation of blood sausage type chorizo, considering that this is a product of high quality microbiological, nutritional and sensory. Moreover, because it is low cost raw materials, the use of these by-products of slaughter can generate profit for the producers, leveraging the industry's goat. / Com o aumento da população mundial, torna-se cada vez mais frequente a busca por novas fontes proteicas que atendam às necessidades nutricionais dos consumidores e ao mesmo tempo possuam atratividade sensorial. Na indústria cárnea, o aproveitamento integral da carcaça dos animais de abate é ineficiente, especialmente dos componentes não constituintes da carcaça, como sangue, órgãos e vísceras. Quando estes subprodutos do abate não são utilizados pela indústria, o descarte causa problemas ambientais e prejuízos econômicos no tratamento de efluentes dos abatedouros. Uma alternativa para este entrave é a utilização destes subprodutos comestíveis na elaboração de embutidos do tipo chouriço. Neste sentido, objetivou-se com esta pesquisa estudar a viabilidade do processamento de chouriço defumado elaborado a base de sangue, vísceras e carne de retraços de caprinos, através de avaliações microbiológicas, químicas e sensoriais, bem como observar qual o tipo de embalagem mais adequado (a vácuo ou filme de polietileno de baixa densidade) na conservação do produto em armazenamento refrigerado a 4±1°C durante 90 dias. As características iniciais de qualidade do chouriço caprino defumado o enquadram como um produto rico em proteínas de alto valor biológico, com altos níveis de aminoácidos e ácidos graxos essenciais, e com elevado conteúdo de ferro (26,65 mg/100g). O chouriço caprino defumado apresentou qualidade sensorial avaliada como aceitável pelos consumidores, sobretudo para os atributos de aroma e sabor, que alcançaram mais de 80% de aceitação pelos provadores. Na avaliação da vida de prateleira, a embalagem a vácuo conservou as qualidades microbiológicas e químicas do chouriço caprino defumado por um período de tempo maior (63 dias) em relação à embalagem em filme de PEBD (41 dias). Os valores de pH apresentaram maior redução com o tempo de estocagem no produto embalado a vácuo, fato explicado pelo possível favorecimento ao desenvolvimento de microrganismos anaeróbicos, como bactérias acido-láticas. Os níveis de oxidação do chouriço caprino foram mais pronunciados no produto embalado em filme de polietileno, evidenciando o papel fundamental do oxigênio no desenvolvimento oxidativo. O chouriço embalado em filme de PEBD apresentou maior redução nos níveis de umidade com consequente aumento das concentrações de cinzas, lipídeos, colágeno e força de cisalhamento com o tempo de estocagem. Apesar do tempo de estocagem e do tipo de embalagem terem afetado os parâmetros químicos e microbiológicos do chouriço defumado, não foi encontrada diferença significativa para os atributos sensoriais avaliados com o tempo de armazenamento, evidenciando a estabilidade sensorial do chouriço caprino defumado. Deste modo, conclui-se que o uso de subprodutos comestíveis do abate (sangue e vísceras) de caprinos é uma alternativa viável para a formulação de embutidos de sangue do tipo chouriço, considerando que se trata de um produto de alta qualidade microbiológica, nutricional e sensorial. Além disso, por se tratar de matérias primas de baixo custo, o aproveitamento destes subprodutos do abate pode gerar lucro para os produtores, alavancando o setor da caprinocultura.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Atualmente têm-se verificado um aumento acentuado na demanda de mercado em relação a óleos vegetais das mais diversas fontes naturais. Os óleos vegetais são extraídos na sua maioria das sementes de plantas, formados por ésteres de glicerina e uma mistura de ácidos graxos, esteróis, tocoferóis e resíduos minerais. Medições rápidas e não destrutivas dos parâmetros relacionados com a qualidade de alimentos estão avançando devido ao progresso da espectroscopia, pois permitem aos pesquisadores obter informações importantes dos componentes químicos e físicos dos alimentos. Nesse sentido, a quimiometria colabora para a transformação dos sinais analíticos de amostras complexas em informações úteis, o método quimiométrico empregado nos estudos foi a análise multitabelas (ComDim), cujo objetivo foi avaliar tabelas (ou matrizes) de dados adquiridos para as mesmas amostras (isto é, um conjunto de matrizes de dados com o mesmo número de linhas, mas não necessariamente o mesmo número de variáveis). Com a aplicação do método ComDim foram obtidos gráficos informativos que mostraram a relação entre as amostras e suas variáveis, além de permitir avaliar em qual das tabelas analisadas encontra-se a informação predominante. Como resultado da primeira pesquisa, o método ComDim permitiu realizar um reconhecimento de padrão não supervisionado auxiliando na identificação de semelhanças e diferenças entre as amostras de óleos e azeites de oliva. Para os óleos de arroz foi possível correlacionar as regiões espectrais do UV-Vis e NIR, bem como as análises físico químicas inferindo sobre início e estágios mais avançados das reações de degradação. . / We currently have a marked increase in market demand for vegetable oils from a variety of natural sources. Vegetable oils are extracted mostly from plant seeds, consisting of glycerol esters and a mixture of fatty acids, esters, tocopherols and mineral residues. Fast and non-destructive measurements of food quality data are advancing due to the progress of spectroscopy, for research researchers to obtain important data of the chemical and physical components of food. In this sense, chemometrics collaborates to transform the analytical signals of complex samples into useful information, the chemometric method used in the studies was the multi-table analysis (ComDim), whose objective was to evaluate tables (or matrices) of data acquired for the same samples (that is, a set of data arrays with the same number of rows, but not necessarily the same number of rows). With the application of the ComDim method, informative graphs were obtained that showed the relation between the samples and their variables, besides allowing to evaluate in which of the analyzed tables the predominant information is found. As a result of the first research, the ComDim method allowed the realization of an unsupervised pattern recognition, aiding in the identification of similarities and differences between samples of oils and olive oils. For rice oils it was possible correlates UV-Vis and NIR spectral regions, also physical-chemical analysis and attribute the start and advanced stages for degradation reactions.

Fundação Araucária de Apoio ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Paraná / O aumento do volume de subprodutos agrícolas gerados acompanhado do descarte inadequado desses é um problema mundial crescente. O aproveitamento desses subprodutos agrícolas é de extrema importância, já que resulta na redução dos impactos ambientais, preservação da saúde da população, permitindo agregar valor a esses materiais suprindo as necessidades econômicas e globais. Uma das formas de aproveitamento está relacionada à capacidade de alguns desses subprodutos agrícolas na remoção eficiente de micro-contaminantes em sistemas aquosos devido às suas propriedades adsorventes. O processo de adsorção é um método que promove a remoção de micro-contaminantes em soluções aquosas. Este trabalho teve como objetivo investigar o uso dos subprodutos agrícolas: palha de milho (PM), palha de trigo (PT), palha de soja (PS) e casca de soja (CS) para produção de diferentes adsorventes para remover Fe e Mn. Para cada subproduto investigado, foram utilizados dois diferentes adsorventes: natural (celulose/lignina) e um modificado com EDTA (ácido etilenodiaminotetraacético). Após a caracterização dos adsorventes por FTIR (espectroscopia de infravermelho por transformada de Fourier), teor de nitrogênio, procedeu-se com os ensaios de adsorção para avaliar a eficiência e análise elementar desses adsorventes em soluções aquosas de Fe e Mn. A concentração dos micro-contaminantes na solução foi determinada por espectrofotometria de absorção atômica. Em seguida, para os adsorventes natural e modificado mais eficientes, aplicou-se os modelos cinéticos de pseudo-primeira-ordem e pseudo-segunda-ordem para definir a ordem da reação de adsorção. Os resultados obtidos indicaram que o adsorvente modificado obtido da casca de soja (CSE) apresentou os melhores resultados na adsorção de Fe (96%) e Mn (88%) em solução aquosa. O modelo de pseudo-segunda ordem apresentou melhor ajuste da reação de adsorção para ambos os micro-contaminantes investigados. De modo geral, a casca de soja modificada mostrou ser um adsorvente adequado para a remoção do ferro e manganês, pois apresentou alta eficiência, como avaliado neste estudo. / The increased volume of agricultural by-products generated coupled with inadequate disposal of these is a growing worldwide problem. The use of these agricultural by-products is of extreme importance, since it results in the reduction of environmental impacts, preservation of the health of the population, allowing adding value to these materials supplying the economic and global needs. One of the ways of exploitation is related to the ability of some of these agricultural by-products to efficiently remove micro-contaminants in aqueous systems due to their adsorbent properties. The adsorption process is a method that promotes the removal of micro-contaminants in aqueous solutions. This work aimed to investigate the use of agricultural by - products: corn straw (PM), wheat straw (PT), soybean straw (PS) and soybean husk (CS) to produce different adsorbents to remove Fe and Mn. For each by-product investigated, two different adsorbents were used: natural (cellulose / lignin) and one modified with EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid). After the characterization of the adsorbents by FTIR (Fourier transform infrared spectroscopy), nitrogen content, the adsorption tests were carried out to evaluate the efficiency and elemental analysis of these adsorbents in aqueous solutions of Fe and Mn. The concentration of the micro-contaminants in the solution was determined by atomic absorption spectrophotometry. Then, for the most efficient natural and modified adsorbents, the kinetic models of pseudo-first order and pseudo-second order were applied to define the order of the adsorption reaction. The results showed that the modified adsorbent obtained from the soybean hull (CSE) showed the best results in the adsorption of Fe (96%) and Mn (88%) in aqueous solution. The pseudo-second order model showed a better adjustment of the adsorption reaction for both micro-contaminants investigated. In general, the modified soybean hull proved to be an adequate adsorbent for the removal of iron and manganese, since it presented high efficiency, as evaluated in this study.

CAPES; CNPQ / Dada a importância mundial da cultivar soja, é imprescindível a aplicação de metodologias para o monitoramento eficiente dos parâmetros fisíco-químicos que determinam a qualidade dos grãos com agilidade e confiabilidade adequadas. Entretanto, os métodos analíticos empregados para as análises tradicionais envolvem técnicas demoradas, utilizam vários equipamentos e reagentes, além de gerarem resíduos químicos. Desta forma, o desenvolvimento de metodologias alternativas para esta finalidade pode trazer benefícios tanto para as indústrias e órgãos reguladores quanto para os analistas. Este estudo propõe a utilização de Espectroscopia de Infravermelho Próximo (NIR) associada a métodos quimiométricos para a construção de modelos multivariados para previsão do percentual de lipídios totais, índice de acidez, teor de clorofila, proteína bruta e umidade em soja. Na construção dos modelos foram avaliadas 300 amostras de soja Glycine max (L.) Merrill. Os dados espectrais foram processados por meio do método de Mínimos Quadrados Parciais (PLS). Os resultados sugerem que os modelos desenvolvidos podem ser utilizados como uma metodologia alternativa para determinar parâmetros físico-químicos e poderiam ser aplicados no controle de qualidade em indústrias de soja. / Given the worldwide importance of soybean cultivars, it is essential to apply methodologies for the efficient monitoring of the physico-chemical parameters that determine the grain quality with adequate agility and reliability. Nonetheless, the analytical methods used in the traditional analysis involves time-consuming techniques, usage of various equipment and reagents besides generating chemical residues. Considering that, the development of alternative methodologies for this purpose can bring benefits to both industries and regulatory bodies as for the analysts. This study proposes the use of Near Infrared Spectroscopy (NIR) associated with chemometric methods for the construction of multivariate models to predict the percentage of total lipids, acidity index, chlorophyll content, crude protein and moisture in soybean. For this, 300 samples of Glycine max (L.) Merrill soybean were evaluated. The spectral data were processed by the method of Partial Least Squares (PLS). The results suggest that the developed model can be used as an alternative methodology to determine the physical-chemical parameters and could be applied in quality control in the soybean industries.

A produção de bacteriocina por Bactérias Ácido Lácticas tem atraído grande atenção por causa do seu status GRAS (Generally Recognized as Safe), e seu uso potencial como aditivo seguro para a conservação de alimentos. Em função de suas características antimicrobianas, as bacteriocinas têm sido testadas como bioconservadores em diversos produtos, mostrando atividade contra microrganismos patogênicos. Porém, o elevado custo de produção ainda tem sido um fator relevante para ampla utilização deste tipo de conservante. Portanto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a viabilidade da produção de enterocinas, utilizando soro de leite parcialmente desmineralizado e água de maceração de milho (milhocina) como substrato. Foram avaliados 5 isolados de enterococos (Efm20, Efm22, Efm24, Efm25 e Efs27) produtores de enterocina em meio MRS frente a bactéria Listeria innocua CLIP 12612 e Listeria monocytogenes 2032. O meio de cutura MRS foi substituido na concentração de 25% por soro de leite ou milhocina. O ensaio da ação da enterocina foi realizado pelo método de difusão em poços. O caráter proteico da bacteriocina foi confirmado após incubação com enzimas proteolíticas α-quimiotripsina, protease e proteinase-K. A produção de peróxido de hidrogênio e ácido lático foram descartadas pela utilização de catalase e neutralização com NaOH. O sobrenadante livre de células (CFS) obtido em ambos substratos foram tratados a 80 °C e 100 °C, apresentando termoestabilidade. Os CFS obtidos em MRS com milhocina pelo isolado Efm22 (24 horas) atingiu 6400 UA/mL frente às duas bactérias indicadoras. Já os isolados Efm24 (24 horas) e Efm20 (18 horas) chegaram a 6400 UA/mL frente a Listeria innocua CLIP 12612. Em soro de leite, os maiores valores de UA/mL ocorreram pelos isolados Efm20, Efm25 e Efs27 (24 horas). Em conclusão, constatou-se que os substratos testados apresentam potencial para serem aplicados na fabricação de bioconservantes de produtos alimentícios. / The production of bacteriocin by Lactic Acid Bacteria has attracted great attention because of its GRAS (Generally Recognized as Safe) status, and its potential use as a safe additive for food preservation. Due to their antimicrobial characteristics, bacteriocins have been tested as bioconservatives in several products, showing activity against pathogenic microorganisms. However, the high cost of production has still been a relevant factor for the wide use of this type of preservative. Therefore, the objective of this work was to evaluate the viability of enterocin production using partially demineralized whey and corn steep liquor as substrate. Five Enterococcus isolates (Efm20, Efm22, Efm24, Efm25 and Efs27) were tested on MRS medium against Listeria innocua CLIP 12612 bacterium and Listeria monocytogenes 2032. The MRS culture medium was replaced at 25% concentration by whey or corn steep liquor.The assay of the action of enterocin was performed by the well diffusion method. The proteinic character of bacteriocina was confirmed after incubation with proteolytic enzymes α-chymotrypsin, protease and proteinase-K. The production of hydrogen peroxide and lactic acid were discarded by the use of catalase and neutralization with NaOH. The cell free supernatant (CFS) obtained on both substrates were treated at 80 ° C and 100 ° C, exhibiting thermostability. The CFS obtained in MRS with corn steep liquor by the Efm22 isolate (24 hours) reached 6400 AU / mL against the two indicator bacteria. On the other hand, the isolates Efm24 (24 hours) and Efm20 (18 hours) reached 6400 AU / mL compared to Listeria innocua CLIP 12612. In whey, the highest values of UA / mL occurred with the isolates Efm20, Efm25 and Efs27 (24 hours). In conclusion, it was verified that the substrates tested have potential to be applied in the manufacture of food product bioconservants.

A soja é uma leguminosa muito consumida no Brasil e no mundo, sua principal utilização é como fonte de matéria-prima na alimentação animal, devido ao fato de possuir alto teor de proteína e energia em sua composição. Na sua forma integral, a soja apresenta fatores antinutricionais, que podem causar doenças digestivas, além de interferir na absorção e aproveitamento nutricional dos animais que a consomem. Por isso, a soja necessita passar por um tratamento térmico que seja suficiente para inativar estes fatores antinutricionais que nela se fazem presentes. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a aplicação da espectroscopia no infravermelho próximo (NIR) na análise de soja inativada por tratamentos térmicos de tostagem e micro-ondas. Para isto, diferentes tratamentos térmicos de tostagem (T1 a T9: 110 a 120 oC/20 a 40’) e micro-ondas (M1 a M9: 20 a 40W/15 a 25’) foram aplicados em grãos de soja integral, em escala laboratorial, tomando como referência amostras de soja inativadas industrialmente (110 ºC a 0,85 kg.cm-²/ 50’). As amostras foram analisadas quanto ao teor de umidade, lipídios, proteínas e ainda, inibidores de tripsina, atividade ureática e solubilidade proteica. A espectroscopia de infravermelho próximo (NIR) integrada a calibração de regressão por mínimos quadrados parciais (PLS) foi desenvolvida para analisar o teor de umidade, lipídios, proteínas e solubilidade proteica destas amostras de soja. Um total de 219 espectros foram coletados a partir de 73 amostras de soja, sendo 37 amostras utilizadas para calibração (inativadas industrialmente) e as 36 demais utilizadas no conjunto de validação (inativadas por tostagem e micro-ondas, laboratorialmente). Em relação aos parâmetros de inativação da soja por tostagem e micro-ondas, os resultados mais satisfatórios e próximos à escala industrial foram para o tratamento térmico de tostagem o T8 (30' / 130º C) e para o micro-ondas o M5 (20'/ 30W). A análise de umidade, lipídios, proteínas e solubilidade proteica por NIR revelou coeficiente de correlação (R²) de 0,767, 0,845, 0,915 e 0,910, respectivamente. Embora não tenha apresentado uniformidade para amostras submetidas a condições extremas (superaquecida ou subprocessada), a avaliação do método indicou que este pode ser efetivamente aplicado para avaliação da composição bromatológica e solubilidade proteica em amostras processadas industrialmente. / Soybeans are very consumed in Brazil and in the world, its main use is as a source of raw material in animal feed, due to the high content of protein and energy. Raw soybean presents antinutritional factors, that can cause digestive diseases, besides interfering in the absorption and nutritional in animals. Therefore, the soybean needs to be thermally inactivated to reduce these antinutritional factors. The objective of this research was to evaluate the application of near infrared spectroscopy (NIR) in the analysis of soybean inactivated by thermal treatments of roasting and microwave. For this, different thermal treatments of toast (T1 to T9: 110 to 120 oC / 20 to 40') and microwaves (M1 to M9: 20 to 40W / 15 to 25') were applied to raw soybean grains in laboratory scale, and industrially scale, inactivated at 110 ºC, 0,85 kg.cm-² / 50'). The samples were analysed for moisture content, lipids, proteins and trypsin inhibitors, urea activity and protein solubility. Near-infrared spectroscopy (NIR) integrated the partial least square regression (PLS) calibration was developed to analyse the moisture content, lipids, proteins and protein solubility of these soybean samples. A total of 219 spectra were collected from 73 soybean samples, 37 of which were used for calibration (inactivated industrially) and the remaining 36 were used in the validation set (inactivated by toast and microwave, laboratory). In relation to the inactivation parameters of the soybean by toasting and microwave, the most satisfactory and near industrial scale results were for the T8 (30 '/ 130 ° C) toasting heat treatment and for the microwave the M5 (20 '/ 30W). The analysis of moisture, lipids, proteins and protein solubility by NIR revealed a correlation coefficient (R²) of 0.767, 0.845, 0.915 and 0.910, respectively. Although it did not show uniformity for samples subjected to extreme conditions (superheated or subprocessed), the method indicated that it can be effectively applied for evaluation of the bromatological composition and protein solubility in industrially processed samples.

CAPES; CNPQ / Dada a importância mundial da cultivar soja, é imprescindível a aplicação de metodologias para o monitoramento eficiente dos parâmetros fisíco-químicos que determinam a qualidade dos grãos com agilidade e confiabilidade adequadas. Entretanto, os métodos analíticos empregados para as análises tradicionais envolvem técnicas demoradas, utilizam vários equipamentos e reagentes, além de gerarem resíduos químicos. Desta forma, o desenvolvimento de metodologias alternativas para esta finalidade pode trazer benefícios tanto para as indústrias e órgãos reguladores quanto para os analistas. Este estudo propõe a utilização de Espectroscopia de Infravermelho Próximo (NIR) associada a métodos quimiométricos para a construção de modelos multivariados para previsão do percentual de lipídios totais, índice de acidez, teor de clorofila, proteína bruta e umidade em soja. Na construção dos modelos foram avaliadas 300 amostras de soja Glycine max (L.) Merrill. Os dados espectrais foram processados por meio do método de Mínimos Quadrados Parciais (PLS). Os resultados sugerem que os modelos desenvolvidos podem ser utilizados como uma metodologia alternativa para determinar parâmetros físico-químicos e poderiam ser aplicados no controle de qualidade em indústrias de soja. / Given the worldwide importance of soybean cultivars, it is essential to apply methodologies for the efficient monitoring of the physico-chemical parameters that determine the grain quality with adequate agility and reliability. Nonetheless, the analytical methods used in the traditional analysis involves time-consuming techniques, usage of various equipment and reagents besides generating chemical residues. Considering that, the development of alternative methodologies for this purpose can bring benefits to both industries and regulatory bodies as for the analysts. This study proposes the use of Near Infrared Spectroscopy (NIR) associated with chemometric methods for the construction of multivariate models to predict the percentage of total lipids, acidity index, chlorophyll content, crude protein and moisture in soybean. For this, 300 samples of Glycine max (L.) Merrill soybean were evaluated. The spectral data were processed by the method of Partial Least Squares (PLS). The results suggest that the developed model can be used as an alternative methodology to determine the physical-chemical parameters and could be applied in quality control in the soybean industries.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dis_Cinthya M F Fleury.pdf: 340462 bytes, checksum: 8bfbe121280bc66c1b0b439872531e30 (MD5) Previous issue date: 2010-02-08 / The purpose of this work is to contribute to the research in new diagnostic tests for bovine tuberculosis. To this end a study was performed to identify Mycobacterium bovis immunogenic proteins isolated from bovines in the field. Total extracted protein, were initially fractioned by electrophoresis in a poliacrylamide gel and then identified by Western Blotting, using serum from reagent and non-reagent animals to the purified protein derivate (PPD) intradermal diagnostic test. Protein immunogenicity was assessed according to the molecular weight profile of the positive bands. 93 serum samples were tested from PPD positive and PPD negative animals from Goiás, Distrito Federal and Minas Gerais, as well as tuberculosis free regions of the USA. By means of the Western Blotting technique it was possible to identify the 26kDa protein as the most immunogenic among the positive PPD tested animals. / Com o objetivo de contribuir com pesquisas em novos testes de diagnóstico para a tuberculose bovina, foi realizado um estudo baseado na identificação de proteínas imunogênicas de Mycobacterium bovis isolado de bovinos infectados à campo. Para isso, proteínas totais extraídas de M. bovis caracterizado geneticamente por Spoligotyping, foram inicialmente fracionados por eletroforese em gel de poliacrilamida e posteriormente identificados por Western Blot utilizando soro de animais reagentes e não reagentes ao teste de diagnóstico intradérmico com derivado protéico purificado (PPD). A imunogenicidade das proteínas foi avaliada conforme o perfil do peso molecular das bandas expressadas. Foram testadas um total de 93 amostras de soro de animais PPD positivos e negativos provenientes do estado de Goiás, Distrito Federal, Minas Gerais e região livre de tuberculose dos Estados Unidos. Pela técnica de Western Blot pode-se identificar a proteína de 26kDa como a mais imunogênica dentre os animais PPD-positivos testados.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO OSVALDO 2010.pdf: 388813 bytes, checksum: 7524bca9b65d53027197a0e944792085 (MD5) Previous issue date: 2010-02-24 / The visceral leishmaniasis (LV) is a very important disease in public health, including zoonosis caused by members of Leishmania gender, occurring in many regions of the world. Several methods are being used to diagnose these diseases; among these methods are the Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay (ELISA), indirect immunofluorescence reaction (RIFI) and direct examination by microscope. As none of these techniques allows a fast and sensitive diagnostic, methods of molecular diagnosis based on polymerase chain reaction (PCR) were developed. Recently, many groups have shown that PCR is a sensitive and specific method to Leshmania DNA detection in a variety of samples of humans, dogs and other animals. The protocols developed until these days to the parasite diagnose by PCR, although they be effective in the identification of the genomic DNA target, promote some inespecific amplifications or are inconclusive in the distinction of L.chagasi from other species of the gender. This work`s objective was the construction of speciesspecific iniciadores to detection of L.chagasi, and evaluation of protocols described by other authors, aiming LV diagnosis. The primers were selected from the alignment of 18S rRNA gene sequences and also of the LSU rRNA. Were selected six new pairs of species-specific primers for L. chagasi. Besides these new pairs were assessed seven other pairs of primers described in the literature. The results showed that the new primer pairs LCS2/LCS3 LCS1/LCS3 were efficient for the species-specific amplification of DNA fragments of L. chagasi of 259 bp and 820 bp, respectively. In the other hand the two new PCR assays optimized in this study using the primer pairs and LCS1/LCS3 LCS2/LCS3 were effective for species-specific detection of up to 1 pg / mL of DNA from L. chagasi. The pairs of primers MC1/MC2 as well as the pair of primers PIA-94 were effective for the discrimination of species-specific L. chagasi.Other pairs of primers evaluated didn´t showed a satisfactory results regarding the specificity for L. chagasi. / A leishmaniose visceral (LV) é uma doença de grande importância em saúde pública, compreendendo zoonoses causadas por membros do gênero Leishmania, sendo de ocorrência em diversas regiões do mundo. Vários métodos já são utilizados para o diagnóstico dessas enfermidades, entre eles o ensaio imunoenzimático (ELISA), a reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e o exame direto ao microscópio. Como nenhuma destas técnicas permite um diagnóstico sensível e rápido, métodos de diagnóstico molecular baseados na reação em cadeia pela polimerase (PCR) foram desenvolvidos. Recentemente, vários grupos têm mostrado que a PCR é um método sensível e específico para a detecção do DNA da Leishmania em uma variedade de amostras de humanos, cães e outros animais. Os protocolos desenvolvidos até o presente para o diagnóstico deste parasito por PCR, apesar de serem eficazes na identificação do DNA genômico alvo, promovem algumas amplificações inespecíficas ou não são conclusivos na distinção de L. chagasi de outras espécies do gênero. O objetivo deste trabalho foi a construção de iniciadores espécie-específicos para a detecção de L. chagasi, assim como a avaliação de protocolos descritos por outros autores, visando o diagnóstico da LV. Os iniciadores foram selecionados a partir do alinhamento das seqüências do gene 18S rRNA e também do LSU rRNA. Foram selecionados seis novos pares de iniciadores espécie-específicos para L. chagasi. Além desses novos pares, foram avaliados outros sete pares de iniciadores descritos na literatura. Os resultados permitiram concluir que os novos pares de iniciadores LCS1/LCS3 e LCS2/LCS3 foram eficientes para a amplificação espécie específica de fragmentos de DNA de L. chagasi de 259 pb e 820 pb, respectivamente. Já os os dois novos ensaios de PCR otimizados neste estudo, empregando os pares de iniciadores LCS1/LCS3 e LCS2/LCS3, foram efetivos para a detecção espécie-específica de até 1 pg/`L de DNA de L. chagasi. Os pares de iniciadores MC1/MC2 descritos por CORTES et al. (2004) assim como o par de iniciadores publicado por PIARROUX et al., (1994) foram efetivos para a discriminação espécie-específica de L. chagasi. Os outros pares de iniciadores avaliados não apresentaram resultados satisfatórios quanto a especificidade para L. chagasi.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:13:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese Maria Luiza Stringhini.pdf: 1950735 bytes, checksum: 3968be9688ed5eaf09c6664365da77c0 (MD5) Previous issue date: 2008-12-05 / This study was developed in order to study the behavior of Pseudomonas aeruginosa inoculated on shell of washed and unwashed eggs. It was evaluated the socioeconomic and microbiological profiles of hands, nasal cavity and oropharynx of 32 volunteers staff from four commercial poultry farms located in the metropolitan region of Goiânia-GO. It was found that 56% of the workers are males and that the most common age group (47%) is between 18 and 23 years. Approximately 41% (13/32) had 6th to 9th grade of elementary school and 44% had monthly family income between two and three minimum salaries. Most microorganisms isolated and identified among the workers belong to the natural microflora of them. However, Escherichia coli was isolated from the hands of 12.5% individuals before starting day of work indicating contamination of fecal origin. Deteriorated microorganisms for eggs also were identified in the handlers as Pseudomonas spp. and Enterobacter spp. Among the Gram-positive bacteria identified detached Staphylococcus coagulase positive that can pose dangers to health of consumers. After this initial research, it was evaluated the bacteriological quality of 576 washed and 132 unwashed eggs of Dekalb White hens obtained in four commercial poultry farms located in the metropolitan area of Goiânia, collected half in the classification hall, and the other half, in the facilities. Counts of mesophilic and positive Staphylococcus coagulase and Most Probable Number (MPN) of total and fecal coliforms in shells and internal content of eggs and Salmonella spp. research in eggshells were made. It was concluded that washed eggs from commercial egg farms had better eggshell bacteriological quality than unwashed eggs but the washing process adopted must be made appropriate in order to avoid contamination. In the following experiment aimed to verify the quality of commercial unwashed eggs submitted to experimental contamination by Pseudomonas aeruginosa. Were contaminated, by handling, with 3.0 x 102 and 6.0 x 105 colony-forming units (CFUs) of Pseudomonas aeruginosa/mL of solution, 576 unwashed eggs without cracks, classified as large, laying hens with 30 to 40 weeks of age. After contamination, the eggs were stored at 5oC and 28oC for 30 days. Every 10 days were carried out analyses of physical quality of eggs (weight of the egg, specific gravity, shell thickness, percentage of yolk, albumen and shell, Haugh unit, rates of yolk and albumen) and pH and counting of the contaminated bacteria in shell and contents of the eggs. During storage, there was control of bacterial multiplication in the shell of the eggs kept at 5oC (p<0,05). However, in content, the cooling controlled the growth of bacteria only in eggs contaminated with initial higher inoculum. It was concluded that the cooling maintains the internal quality of the eggs, even when contaminated and also retains the hygienic-sanitary characteristics of the product. In the last experiment aimed to check the quality of commercial washed eggs inoculated in the shell with Pseudomonas aeruginosa, stored at 5oC and 25oC. It was used 576 eggs, without cracks, classified as large, from laying hens with 30 to 40 weeks of age, line Dekalb White. The experimental design was completely randomized in a 3 x 2 factorial (contamination and temperature storage) with 12 repetitions for physical quality and pH and four repetitions for microbiological variables. The eggs were contaminated by handling, with 7.8 x 102 and 6.0 x 105 colony-forming units (CFUs) of Pseudomonas aeruginosa/mL of solution and stored at 5oC and 25oC for 30 days. Every ten days it was carried out analyses of physical quality of eggs, similar to the previous experiment, pH and counts of Pseudomonas aeruginosa in shell and contents of the eggs. The eggs stored at 5oC showed better internal quality (p<0,05) and lower bacterial counts in shell and contents of the eggs (p<0,05) regardless of the initial concentration of inoculum. It was concluded that the cooling provides better internal quality, physical, chemical and bacteriological of eggs, during 30 days of storage. / O presente estudo foi desenvolvido com o intuito de estudar o comportamento de Pseudomonas aeruginosa inoculadas na casca de ovos lavados e não lavados. Foram determinados os perfis socioeconômico e microbiológico de mãos, cavidade nasal e orofaringe de 32 funcionários de quatro granjas de postura comercial da região metropolitana de Goiânia-GO. Verificou-se que 56% dos funcionários pertenciam ao gênero masculino e que a faixa etária mais frequente estava entre 18 e 23 anos. Treze dentre 32 indivíduos (41%) possuíam do 6º ao 9º ano do ensino fundamental e 44% tinham renda mensal familiar entre dois e três salários mínimos. A maioria dos microrganismos isolados e identificados entre os operários pertence à microbiota natural do homem. Entretanto, Escherichia coli foi encontrada nas mãos de 12,5% dos funcionários, antes de iniciar jornada de trabalho, indicando contaminação fecal. Também foram isoladas, das mãos dos trabalhadores, bactérias deteriorantes para os ovos como Pseudomonas spp. e Enterobacter spp. Dentre as bactérias Gram-positivas, destacou-se Staphylococcus coagulase positivo, que pode representar perigo à saúde do consumidor. Após essa investigação inicial, foi avaliada a qualidade bacteriológica de 576 ovos lavados e 132 ovos não lavados da linhagem Dekalb White obtidos em quatro granjas de postura comercial da região metropolitana de Goiânia-GO, sendo a metade coletada na sala de classificação e, a outra metade, nos galpões. Foram realizadas contagens de mesófilos e Staphylococcus coagulase positivo e Número Mais Provável de coliformes totais e fecais nas cascas e conteúdos e pesquisa de Salmonella spp. nas cascas. Concluiu-se que ovos lavados possuem melhor qualidade bacteriológica de casca do que ovos não-lavados, entretanto, o procedimento de lavagem deve ser realizado de forma adequada a fim de se evitar contaminação. No experimento seguinte objetivou-se verificar a influência da contaminação experimental na casca de ovos não-lavados com Pseudomonas aeruginosa. Foram contaminados, pelo manuseio, com inóculos de 3 x 102 e 6 x 105 unidades formadoras de colônias (UFCs) de Pseudomonas aeruginosa/mL de solução, 576 ovos grandes, sem trincas de poedeiras leves, com 30 a 40 semanas de idade. Após contaminação, os ovos foram armazenados a 5ºC e a 28ºC por 30 dias. A cada dez dias foram realizadas análises de qualidade física dos ovos (peso, gravidade específica, espessura de casca, porcentagem de gema, albume e casca, unidade Haugh, índices de gema e albume), pH e contagens da bactéria contaminante na casca e conteúdo dos ovos. Durante o armazenamento, houve controle da multiplicação bacteriana nas cascas dos ovos contaminados e mantidos a 5ºC (p<0,05). No entanto, no conteúdo, a refrigeração controlou o crescimento da bactéria apenas de ovos contaminados com maior inóculo. Pode-se concluir que a refrigeração mantém a qualidade interna dos ovos, mesmo quando contaminados e que também conserva as características higiênico-sanitárias do produto. No último experimento, objetivouse verificar a influência da contaminação experimental com Pseudomonas aeruginosa na qualidade física de ovos lavados e armazenados a 5ºC e 25ºC. Foram utilizados 576 ovos, sem trincas, classificados como grandes, de poedeiras leves com 30 a 40 semanas de idade, da linhagem Dekalb White. O delineamento empregado foi inteiramente casualizado em esquema fatorial 3 x 2 (contaminação e temperatura de armazenamento) com 12 repetições para variáveis de qualidade física e pH e quatro repetições para variáveis microbiológicas. Os ovos foram contaminados, pelo manuseio, com 7,8 x 102 e 6 x 105 UFCs de Pseudomonas aeruginosa/mL de solução e armazenados a 5oC e 25oC por 30 dias. A cada dez dias foram realizadas análises de qualidade física dos ovos, semelhantes ao experimento anterior, pH e contagens de Pseudomonas aeruginosa na casca e conteúdo dos ovos. Os ovos armazenados a 5ºC apresentaram melhores valores (p<0,05) de qualidade interna e menor contagem bacteriana na casca e no conteúdo (p<0,05), independentemente da concentração inicial do inóculo. Concluiu-se que a refrigeração proporciona melhor quallidade interna, física, química e bacteriológica de ovos, durante 30 dias de armazenamento.