Orientador: Jose de Assis Fonseca Faria / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-28T14:39:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Soler_RogerMarcel_D.pdf: 4752865 bytes, checksum: 4cb90a52ead94d121aeec9b30d8ac648 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: A tecnologia de micro-recravação consiste numa estrutura similar à da recravação convencional, porém com as dimensões de altura da recravação, profundidade do rebaixo, gancho do corpo, gancho da tampa, e sobreposição, 50% inferiores às recravações conhecidas pelo estado da arte. Essa redução permite que folhas de menor espessura (0,16mm), duplamente reduzidas (ORa) possam ser utilizadas na confeção de tampas e fundos, proporcionando importante economia às embalagens metálicas. Visando avaliar a eficiência, hermeticidade e resistência mecânica da micro-recravação, realizou-se ensaios de avaliação comparativa entre as latas produzidas pelo processo convencional e por micro-recravação. Avaliou-se a eficiência da integridade do fechamento das latas na esterilização, no transporte ( vibração e teste de queda livre), biotestes com Enterobacter aerogenes e com esporos de PA 3679 (Clostridium sporogenes) e os ensaios industriais com extrato de tomate e conserva de ervilha. As metodologias utilizadas encontram-se descritas na literatura, com exceção daquela com esporos de PA 3679 que foi desenvolvida, especificamente, para se avaliar a integridade de embalagens de alimentos submetidas ao processo de esterilização. Não evidenciaram-se diferenças entre as amostras após os ensaios de esterilização e de transporte, os dois tipos de latas permaneceram íntegras, sem que nenhuma ocorrência de vazamento ou estufamento tenha sido observada. Entretanto, como era esperado, as amostras micro-recravadas apresentaram-se mais danificadas que as amostras convencionais, devido a suas menores dimensões. Após a realização do bioteste com Enterobacter aerogenes, e do período de incubação, constatou-se a presença de 2% das amostras micro-recravadas com estufamento. As contaminações somente ocorreram nas amostras com grau de amassamento elevado. O bioteste com esporos de PA 3679, quando aplicado às amostras micro-recravadas com dimensões padrão, não registrou nenhuma ocorrência de estufamento, assim sendo, todas mantiveram-se íntegras após o período de incubação. Entretanto, quando amostras propositadamente defeituosas foram avaliadas, constatou-se a ocorrência de estufamento em 70% delas, confirmando a adequacidade do bioteste e da nova tecnologia de micro-recravação / Abstract: The microseam technology consists of a structure similar to the conventional seam. However, the dimensions of the seam height, countersink, body hook, cover hook and overlap are 50% of the normal specifications used and currently known. The new closure system is possible when using twice reduced materials (0.16mm) for can ends and can bottoms, and was envisioned as a method of optimizing cost savings. In order to evaluate the microseam efficiency in comparison to a conventional double seam, both metal containers were subjected to a two can biotester, one done with Enterobacter aerogenes and the other with P. R. 3679 spores (Clostridium sporogenes) as a method of integrity evaluation for the closure system afier the sterilisation and transport evaluation: vibration test followed by drop test. Ali methodologies used have been published and can be found in the literature, except for the can biotester with P.A. espores which was designed especially for the integrity evaluation of sterilised food packaging. 80th the microseam and conventional seam samples remained sealed afier the sterilisation and transport evaluation, although, as expected, more damage occured to the microseam designo Afier the biotester with Enterobacter aerogenes and incubation, it was observed that 2,0% of the microseam cans evaluated failed the test, having ali the failures occured in samples with high degree of damage. Using the modified can biotester with P.A. spores and the recommended incubation period for standard microseam and conventional seam samples, ali samples passed the test. However, when propositally damaged seam samples were used, 70% of the cans failed. Therefore both the bioteste and the microseam technology were approved / Doutorado / Doutor em Tecnologia de Alimentos

Orientador : Alba Regina Monteiro Souza Brito / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-28T17:01:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_AnaBeatrizAlbinode_M.pdf: 20623748 bytes, checksum: 8b7914190998688d407df885f1838601 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: A úlcera é uma lesão produzida pelo desequilíbrio da secreção ácida e fatores protetores da mucosa gástrica. Esse desequilíbrio é originado por diversos fatores tais como: estilo de vida, tabagismo, presença da Helicobacter pylori e antiinflamatóriosnão-esteroidais. Por ser uma patologia de grande incidência, com tempo de tratamento prolongado e de constante recidiva, muitas vezes promovendo agravações que levam o paciente à cirurgia, novas drogas vem sendo isoladas e sintetizadas, a fim de atenuar e/ou abolir essa afecção. Várias são as fontes naturais fornecedoras de constituintes químicos com função antiulcerogênica, sendo que as plantas, devido a sua diversidade e utilização popular, destacam-se nesse as pecto. o nosso objeto de estudo é a espécie Croton cajucara, conhecida popularmente como sacaca, típica da região Amazônica, com centro de dispersão em Belém-PA. Estudos prévios demonstraram que a trans-desidrocrotonina (DHC), substância isolada das cascas da Croton cajucara, apresenta atividade antiulcerogênica eficaz, acompanhada de alta toxicidade (Souza Brito et al., 1998; Hiruma-Lima et al.' 1999; Jaime and Haun, 1999).A partir desses resultados isolamos a crotonina semi-sintética (4SRC) a partir da DHC, a fim de verificarmos se essa substância apresentava atividade antiulcerogênica similar, com uma diminuição da toxicidade. Não utilizamos a crotonina natural devido ao seu baixo rendimento. Ao avaliar os efeitos da 4SRC (50, 100 e 200 mg/kg) nos modelos de úlcera induzida por etanol, etanol/HCI e estresse, em camundongos Swiss e ratos Wistar machos, foi verificado uma atividade antiulcerogênica significativa, sugerindo uma possível ação antisecretora promovida pela substância. Por essa razão, foi avaliada a ação da 4SRC sobre os receptores colinérgicos e histaminérgicos. Ao observar o efeito da 4SRC sobre os receptores histaminérgicos em átrio direito de cobaio foi observado um deslocamento da curva à direita da curva-padrão (histamina), acompanhada de uma diminuição significativa da resposta máxima, o que sugere um comportamento de droga antagonista não-competitivo. Ao ser analisado a ação da 4SRC sobre os receptores muscarínicos, em fundo de estômago de rato, foi observado um deslocamento da curva à direita da curva-padrão (carbacol) sem diminuição da resposta máxima, sugerindo um comportamento de droga antagonista competitiva. A atividade da 4SRC (50, 100 ou 200 mg/kg) foi também avaliada no modelo de úlcera induzida por indometacina, no qual foi verificado significativa diminuição do índice de lesão ulcerativa nas doses de 100 e 200 mglkg, sugerindo que a 4SRC atue como estimulador da síntese de prostaglandina. Para verificarmos essa hipótese, avaliamos a ação da 4SRC (100 mglkg) sobre a síntese de prostaglandina e sobre a produção de muco livre, entretanto não foi observadas diferença significativaquando comparada ao grupo controle. A citotoxicidade da 4SRC foi avaliada em cultura de células V79 de pulmão de hamster chinês e cultura primária de hepatócitos de ratos Wistar, através dos testes de conteúdo de DNA (NAC), incorporação de vermelho neutro (NRU) e redução do sal tetrazoliumMTT. Ao avaliar a viabilidadede células V79 incubadas com diferentes concentrações de 4SRC foi observado que para os testes de NRU e MTT a substância apresentou uma ICso=500 JlM , e no de teste NAC uma ICso=200 JlM. Ao analisar a viabilidade dos hepatócitos de ratos Wistar após o tratamento com a 4SRC, observamos que a ICso=10-500JlM para os testes de NAC e MTT, e para o NRU uma ICso=120 JlM. Posteriormente as células V79 foram incubadas com o metabólito produzido pelos hepatócitos tratados com diferentes concentrações de 4SRC. Após 4h de incubação observamos uma ICso=500JlM para os testes de MTT e NRU, e umanICso=370JlM para o teste de NAC. Com a obtenção desses resultados é possível sugerir que a 4SRC atua através de um antagonismo em receptor histaminérgico e colinérgico, apresentando características de citotoxicidade menores que a DHC / Abstract: The ulcer is a lesion produced by unbalance of acid secretion and protector factors of gastric mucous. This unbalance is original by various causes as: tobacco, He/icobacter pylori, stress. Just be a pathology of large incidence, with prolonged time of treatment; many times aggravations promoting, witch lead the patient to surgery. New drugs being isolated and synthesized, in order to attenuate and/or to abolish this affection. The natures fountain are furnishers of chemist constituent, in special the plants, due its innumerable diversity and popular utilization. The object of this study is the Croton cajucara, known popularly as sacaca, typical of Amazon region, with dispersion center in Belém - PA. Previousstudies demonstrated that the trans-dehydrocrotonin (DHC), isolated substance of Croton cajucara bark, present efficacious antiulcerogenic activity, accompany of high toxicity (Souza Brito et aI., 1998; Hiruma-Lima et al., 1999; Jaime and Haun, 1999). From these results we isolated the semi-synthetic crotonin (4SRC) obtained of DHC, it to verify if this substance present similar antiulcerogenic activity, with a decrease toxicity. We didn't utilize the natural crotonin, due to its low revenue. To evaluate the 4SRC effects (50, 100 and 200 mg/kg) on ethanol, ethanol/HCl and stress-induced ulcer models, in Swiss and rats Wistar male. We verified a significative antiulcerogenic activity, suggesting a possible antisecretory action promoved by substance. For this reason, the 4SRC action was evaluated on cholinergic and histaminergic receptors. To observe the 4SRC effect on histaminergic receptors, we utilized isolated guinea pig right atria and observed a shift to the right in the concentration response curves to histamine, accompany of significative decrease of maximum response, that suggest that this compound may act as an H2antagonist receptor. The 4SRC activity (50, 100 or 200 mg/kg) was appraised in the ulcer model induced by indomethacin, which we verficated decrease significative of u1cerative ,lesion index in the 100 and 200 mglkg, suggesting that 4SRC action as stimulator of synthesis andlor discharge of prostaglandin. For this reason, we verified the 4SRC action (100 mglkg) on prostaglandin synthesis on free mucus production, however we didn't observe significative difference, when it was compared to control group. The cytotoxic effect of semi-synthetic crotonin, expressed as cell viability, was assessed in a lung fibroblast cellline (V79) derived from Chinese hamsters that is commonly used for cytotoxicity studies (Souza Brito et al., 1998; Rodriguez and haun, 1999); and rat hepatocytes were isolated from male Wistar rats. After treatment, cell viability was determined by tetrazolium reduction (MTT), total acid content (NAC) and neutral red uptake (NRU) assays. To evaluate the V79 cell viability incubated with different 4SRC concentration was observed that to the NRU and MTT tests the substance presented a ICso=500j..tM,and in the NAC a ICso=200J-lM.To analyze the hepatocyte viability of Wistar rats after treatment with the 4SRC, we observed a ICso=10-500J-lMto the NAC and MTT tests and, to NRU, a ICso=120J-lM.Next stage, the V79 cells were incubated with the metabolites produced by hepatocytes treated with different 4SRC concentration. After 4 h incubation, we observed a ICso=500 J-lMto the MTT and NRU tests, and a ICso=370j..tMto NAC test. This results suggest that 4SRC act through of a histaminergic and cholinergic antagonism, presenting characteristics of citotocixity low than DHC / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-10-03T22:40:49Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Oliane Maria Correia Magalhães.pdf: 578908 bytes, checksum: bd57c22da972523afb5d5f5eb9771e5f (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-11-14T15:34:55Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Oliane Maria Correia Magalhães.pdf: 578908 bytes, checksum: bd57c22da972523afb5d5f5eb9771e5f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-14T15:34:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Oliane Maria Correia Magalhães.pdf: 578908 bytes, checksum: bd57c22da972523afb5d5f5eb9771e5f (MD5) Previous issue date: 2007-09-28 / Paracoccidioidomicose (PCM) apresenta múltiplas manifestações clínicas é causada pelo fungo termo-dimórfico Paracoccidioides brasiliensis. PCM é diagnosticada pela detecção microscópica de células leveduriformes multibrotantes em amostras clínicas, pela cultura cotonosa e/ou cerebriforme e testes sorológicos. Os objetivos desta pesquisa foram padronizar antígenos de P. brasiliensis de cultura selvagem e de culturas obtidas na Coleção de Culturas Micoteca URM. As estruturas leveduriformes multibrotantes evidenciadas a partir da termoconversão demonstraram que as referidas culturas depositadas na Micoteca URM são compatíveis às descritas de P. brasiliensis, contudo algumas culturas apresentaram características morfológicas atípicas e perda da habilidade dimórfica. Os critérios adotados para seleção das culturas para obtenção de antígenos foram baseados nos aspectos macroscópicos das colônias e da termoconversão das células de P. brasiliensis, os quais permitiram selecionar as culturas URM 3634, 3635 e a cultura selvagem 5378. Com NGTA os antígenos produzidos foram padronizados pela titulação, concentração de proteínas e identificação de frações protéicas. O título dos antígenos foi 1/4, 1/8 e 1/32 e a concentração de proteínas 541μg/mL, 658μg/mL e 808μg/mL respectivamente das culturas URM 3634, 3635 e 5378. Os exoantígenos apresentaram várias frações protéicas. Com soros adquiridos de bancos de soros, foram realizados testes sorológicos com as técnicas de imunodifusão (ID), contraimunoeletroforese (CIE) e imunobloting (IB). Com o teste de ID, os soros apresentaram 86,0% de sensibilidade, com CIE 98,0%. Com IB 100% de 29 soros testados reconheceram a molécula de 43 KDa, gp43, considerada o principal antígeno usado no imunodiagnóstico da PCM. Todos os testes expressaram 100% de especificidade. / Paracoccidioidomycosis (PCM) presents multiples clinical manifestations being caused by thermally dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis. PCM is diagnosed by detection microscopic of yeast cells that reproduces by multiple budding in clinical samples, by culture cottony and/or cerebriform and by serological tests. The aims of research were to standard antigens of P. brasiliensis wild strain and strain obtained at the Coleção de Culturas - Micoteca URM. Like-yeast structures multiple-budding in thermoconversion ensured that the strains deposited at the Micoteca URM are P. brasiliensis; however some strains showed atypical morphological patterns and loss for dimorphic ability. The adopted criterion from selection of the fungi strains aiming at antigen production were based in observation macroscopic of the colonies and of the cells thermoconvertion from P. brasiliensis, wich it allowed to select the strains URM 3634, 3635 and the wild strain URM5378. The antigens produced with NGTA were standardized by titers, protein content and identifications of proteins fraction. The titers of antigens produced were of 1/4, 1/8 e 1/32 and the protein content was 541μg per ml, 658μg per ml and 808 μg per ml for strains URM3634, 3635 and 5378 respectively; the exoantigens apresented several antigenic fractions. The serological tests immunodiffusion (ID), counterimmunoelectrophoresis (CIE) and Immunobloting (IB) were made with serum samples obtained from a bank of sera. The ID and CIE tests presented 86.0% and 98.0% of sensitivity, respectively. The IB test realized with 29 sera showed that all it (100%) recognized the 43-KDa molecule, gp 43, considered to the main antigen used for immunodiagnostic of PCM. All of the tests expressed 100% specificity.

Orientador: Cicilia Yuko Wada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Matematica, Estatistica e Computação Cientifica / Made available in DSpace on 2018-08-02T17:21:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bereta_EstelaMarisPereira_M.pdf: 3559262 bytes, checksum: b02e47ad288f193e308201bd8f880fdf (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Este trabalho tem como objetivo principal elaborar uma exposição detalhada da teoria de testes de significância repetidos, sob o ponto de vista do nível real de teste, com particular ênfase nos testes não-paramétricos usados na área de análise de sobrevivência. Além disso, pretendese apresentar uma estatística de teste, baseada na integração de uma diferença ponderada dos estimadores de Kaplan-Meier, para comparar funções de sobrevivência em dois grupos com a finalidade de disseminar o seu conhecimento e mostrar sua aplicação em problemas práticos.Inicialmente é feita uma revisão dos conceitos básicos da análise de sobrevivência e dos testes não-paramétricos usados neste contexto. Em seguida, são apresentados os fundamentos da teoria de testes de significância repetidos, desenvolvida a partir dos anos 60 para testes de hipóteses repetidos sobre a média de uma variável Y com distribuição normal (Armitage et al (1969), Pocock (1977), O'Brien & Fleming (1979), Lan & DeMets (1983». Após esta revisão, são apresentadas as modificações propostas para adaptar essas técnicas para o caso de variáveis de resposta não imediatas e/ou censuradas, com distribuição assintótica conjunta normal multivariada. No final, é apresentada uma proposta para realização de um teste de significância repetido, utilizando reamostragem da estatística Weighted Kaplan-Meier (WKM) (Pepe e FIeming, 1989) e Log-rank em cada uma das análises. Um estudo por simulação desse procedimento por reamostragem foi feito / Abstract: The main objective of this work is to elaborate a detailed exposition of the theory of repeated significance tests, with particular emphasis on non parametric tests used in Survival Analysis. A second objective is to study and use in applications the somehow new Weighted Kaplan Meier statistic that was created to compare survival in two populations. This statistics is an integrated weighted difference of Kaplan Meier estimates of survival curves in two groups. In the first chapter, a revision of basic definitions and tests used in Survival Analysis is made. After, the principles of the theory of repeated significance tests, developed around 1969 for comparison of means of a response variables Y with Normal distribution in two populations are presented (Armitage et al (1969), Pocock (1977), O'Brien & Fleming (1979), Lan & DeMets (1983)). Then, at Chapter 3, the results for non immediate or censored response variables with an asymptotic normal distribution are presented. Finally, a resampling procedure for making a repeated significance test using the Weighted Kaplan Meier (Pepe & Fleming, 1989). and log rank statistics at each interim analysis is proposed. A study by simulation of this procedure is presented. / Mestrado / Mestre em Estatística

Orientador : Edi Lucia Sartorato / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-02T16:44:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Braganca_WelbeOliveira_M.pdf: 5963364 bytes, checksum: bfc4d02101133b82c4e26b87ba00ecd6 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Mendel, pelo pioneirismo em oito anos de pesquisa com cruzamentos de ervilhas, é considerado o pai da Genética, porém, quando foi eleito abade, em 1868, encerrou precocemente sua carreira. Seus excepcionais manuscritos permaneceram esquecidos por mais de 30 anos. Quando William Sutton e Theodor Boveri estabeleceram a localização dos genes nos cromossomos, as conclusões póstumas de Mendel receberam a devida relevância científica (HAUSMANN, 2000), derrubando conceitos arcaicos, os quais preconizavam que a transmissão hereditária se dava pela mistura de humores, mais precisamente pelo sangue (MIYAJIMA, 2001). A análise do DNA revolucionou o campo da Biologia da identificação. A necessidade de pequenas quantidades de tecido, a estabilidade do DNA e o alto grau de precisão das análises químicas contribuíram para a evolução da tipagem do DNA. O uso das análises do DNA está alterando rapidamente a maneira como a tipagem genética é conduzida em casos de paternidade, estupro e homicídios, na avaliação de desastres em massa, no estudo de caça, reprodução e população de animais, nas análises médicas e na disputa de patentes (Budowle, 2000). Para serem efetivas, as técnicas desenvolvidas por laboratórios especializados devem ser padronizadas para serem prontamente usadas. A quantidade e a qualidade limitada das amostras biológicas forenses exigem que os métodos de tipagem do DNA sejam sensíveis. Os protocolos tendem a ser poupados de passos desnecessários e otimizados. O tempo e os custos devem ser reduzidos, e a confiabilidade e sensibilidade maximizadas (Budowle, 2000). Este trabalho teve como objetivo desenvolver, otimizar procedimentos e correlacionar técnicas encontradas na literatura que puderam ser adaptadas e se mostraram úteis para tipar amostras referenciais, estando em boas condições para os testes de paternidade, bem como amostras achadas nas cenas dos crimes que foram expostas ao meio ambiente. Devido à demanda por técnicas de análise confiáveis, as práticas e os procedimentos usados nos estudos forenses podem guiar os cientistas em outras disciplinas no desenvolvimento e emprego de metodologias válidas e confiáveis. Buscamos também nesse trabalho, avaliar e comparar os diferentes métodos para verificação de paternidade e sua validade para cada tipo de material biológico estudado, propondo uma metodologia padrão para testes de paternidade em cada tipo específico de tecido, avaliando os diferentes métodos de extração de DNA propostos na literatura, procurando adaptá-los e otimizá-los, além de desenvolver novos métodos, fornecendo importantes ferramentas para a crescente área científica da biologia forense / Abstract: Mendel, for his pioneer work in eight years of research with crossings of peas, is considered the father of Genetic, however, when elected abbot, in 1868, he contained his early career. His exceptional manuscripts were forgotten for more than 30 years. When William Sutton and Theodor Boveri established the location of the genes in the chromosomes, the posthumous conclusions of Mendel received the due scientific relevance, overthrowing archaic concepts, which extolled that the hereditary transmission occurred for the mixture of humors, more precisely for the blood. The analysis of DNA revolutionized the field of Biology of identification. The need of small amounts of biological samples, the stability of DNA and the high degree of precision of the chemical analyses contributed to the evolution of the typing of DNA. The use of the analyses of DNA is altering the way quickly as the genetic typing is driven in cases of paternity, rape and homicides, in the evaluation of disasters in mass, in the hunting studies, reproduction and population of animals, in the medical analyses and in the dispute of patents. To be effective, the techniques developed by specialized laboratories should be standardized to be used. The limited amount and quality of the forensic biological samples demand that the methods of typing of DNA to be sensitive. The protocols tend to be saved of necessary steps and optimized. The time and the costs should be reduced, and the reliability and sensibility maximized. This work had as objective develop, optimize procedures and to correlate techniques found in the literature that could be adapted and were shown useful for typing referential samples, being in good conditions for the tests of paternity, as well as samples found in the scenes of the crimes that were exposed to the environment. Due to the demand for reliable analysis techniques, the practices and the procedures used in the forensic studies can guide the scientists in other disciplines in the development and use of valid and reliable methodologies. We also looked for in this work, to evaluate and to compare the different methods for verification of paternity and its validity for each type of studied biological material, proposing a methodology pattern for tests of paternity in each specific type of fabric, evaluating the different methods of extraction of DNA proposed in the literature, trying to adapt them and to optimize them, besides developing new methods, supplying important tools for to the growing scientific area of the forensic biology / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Fernando Antonio Santos Coelho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-03T15:03:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Camargo_EdicleaCristinaFregonese_M.pdf: 2900828 bytes, checksum: c04a88d1e14fb939f761d0f7c86a37c8 (MD5) Previous issue date: 2003 / Mestrado

Orientador: Maria Luiza Moretti Branchini / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T20:05:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moreira_LucianaSarmento_M.pdf: 615387 bytes, checksum: 42dae5da9ccb25a99c7957261e5866ca (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: O crescente aumento de casos de candidemia nas últimas décadas vem sendo um fato preocupante devido a diversos fatores, e dentre eles destacam-se a mortalidade, o aumento de casos de espécies não-albicans como causadoras de candidemia, e a crescente emergência da resistência de leveduras aos antifúngicos. Para o tratamento da candidemia, temos como drogas mais usadas a anfotericina B (ANF), o itraconazol (ITZ), o fluconazol (FCZ), a 5-fluorocitosina (5-FC), como também as combinações de ANF com FCZ ou 5-FC que visam favorecer a terapia. Porém, atualmente, ainda pouco se sabe a respeito das respostas clínicas dadas por Candida sp. ás terapias utilizadas quando comparadas com testes de suscetibilidade in vitro. Os testes padronizados para estudar a suscetibilidade de Candida sp. in vitro não avaliam as células individualmente, e sim uma população celular. O sistema automatizado Bio-Cell Tracer ® (BCT®), surge como uma nova ferramenta complementar para o estudo da dinâmica da formação de hifas, pseudo-hifas e germinação de conídios e de respostas quanto a suscetibilidade aos antifúngicos. Neste trabalho, utilizamos o BCT® para avaliar o crescimento de cepas de Candida albicans frente aos seguintes antifúngicos: FCZ, 5-FC e ANF, além das combinações 5-FC/ANF e FCZ/ANF em adições com tempos simultâneos e seqüenciais. O sistema BCT® consiste de uma base para placas, microscópio, digitalizador de imagem e computador com programa que permitiu o acompanhamento do crescimento automático das extremidades das pseudo-hifas estudadas. Os resultados para Candida albicans obtidos com o teste de resistência ao FCZ, encontrados no BCT® foram correspondentes àqueles utilizando o teste padrão de microdiluição em caldo (NCCLS A27), sugerindo diferentes classes de taxas de inibição que poderiam ser agrupadas como valores associados a suscetibilidade e resistência. Os estudos com drogas combinadas, em tempos seqüenciais, revelou que a cepa (UN 219) apresentou comportamento de antagonismo para a combinação de FCZ/ANF, dado que diferiu do encontrado na microdiluição em caldo. Neste caso, a possibilidade de monitoramento de hifas, pseudo-hifas pode permitir maior versatilidade e induzir respostas biológicas antes não encontradas nos testes in vitro. Este estudo contribuiu com novas informações a respeito de um sistema automatizado para análise de pseudo-hifas e germinação de conídios, que pode vir a ser utilizado no desenvolvimento de novas estratégias para uma rápida determinação de suscetibilidade antifúngica de C. albicans ou de outros fungos patogênicos / Abstract: Candida species are opportunistic fungal pathogens that are often the causative agents of infections in immunocompromised patients. amphotericin B (AMPH), itraconazole (ITCZ), fluconazole (FLCZ) and 5-flucytosine (5-FC) are the principal drugs used on the treatment of candidemic patients. However, in some cases, the clinical responses of Candida are different from those obtained with the in vitro susceptibility tests. Moreover, the standard methods of monitoring the susceptibility of Candida to antifungal agents are unable to evaluate single cells, true hyphae or pseudohyphae forms. Thus, new techniques developed to measure the growth rate of true hyphae or pseudohyphae forms in vitro could contribute to better understand the dynamics of the formation of these invasive structures and the response of the organism to antifungal agents. Here we describe the application of an automated system (Bio-Cell Tracer® - BCT®) to examine the responses of Candida albicans to AMPH, FLCZ, 5-FC, as well as AMPH/FLCZ and AMPH/5-FC combinations, in simultaneous and distinct addiction times. The BCT® consists of a culture vessel, a microscope and a image analyzer with a computer program system that traces the growth of a hyphal tip automatically. The results obtained using the BCT® system were correspondent to those using the standard MIC (NCCLS A27) assay on the detection of susceptibility and resistance in clinical isolates and reference samples. The combinatory studies show an antagonistic pattern on the UN 219 strain, differently from the MIC studies. The possibility of tracing pseudohyphae structures allows a larger versatility and biological responses not found on the other tests. This work contributed with new information about an automated system for analysis of pseudohyphal structures, that may be used on the development of new strategies for a rapid and reliable assessment of antifungal susceptibility in Candida albicans or other infectious species / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:06:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo7253_1.pdf: 573098 bytes, checksum: b629eacebc3655d6a473531ecdcde631 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2003 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Técnicas clássicas de regressão linear assumem que os erros, que representam a componente aleatória do modelo, têm variância constante, ou seja, assumem homoscedasticidade. Contudo, esta suposição é bastante forte e, em uma relevante parte dos problemas práticos, muito pouco razoável. A presente dissertação considera a estimação consistente da matriz de covariâncias do estimador de mínimos quadrados ordinários em um modelo de regressão linear sob heteroscedasticidade de forma desconhecida. O estimador mais usado é aquele proposto por Halbert White, conhecido como HC0. Consideramos também outros estimadores consistentes, a saber: o estimador HC3, que é uma aproximação do estimador jackknife, e o estimador HC4 proposto por Cribari Neto (2004), que leva em consideração ao o efeito de pontos de alta alavancagem em amostras finitas. Dois estimadores consistentes obtidos a partir de esquemas de reamostragem de bootstrap são também considerados. Nós propomos, com base no estimador HC4, um novo estimador: HC5. Este estimador é o primeiro estimador na classe dos estimadores consistentes da matriz de covariâncias do estimador de mínimos quadrados a incorporar termos de descontos que se ajustam a variações no grau máximo de alavancagem dos dados. Nós apresentamos resultados de simulação de Monte Carlo sobre o desempenho de testes quasi-t cujas estatísticas são baseadas nos diferentes estimadores consistentes. A avaliação é realizada tanto sob homoscedasticidade quanto sob heteroscedasticidade e os resultados revelam que o teste construído a partir do estimador HC5 tipicamente apresenta desempenho superior aos demais testes considerados. No que se refere a inferência via bootstrap, há muito pouco ganho em amostras finitas em se usar o esquema de reamostragem de bootstrap ponderado para realizar testes bootstrap, estimando-se valores p ou valores críticos, ao invés de se utilizar o bootstrap ponderado para estimação de erros-padrão a serem utilizados em estatísticas de teste convencionais. Nossos resultados também revelam que a presença de pontos de alta alavancagem exerce um papel importante no desempenho dos diferentes estimadores consistentes em amostras de tamanho típico. Algumas aplicações empíricas são, por fim, apresentadas

Orientador: Milton Ruiz Alves / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-25T03:55:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Holzchuh_Nilo_D.pdf: 22618534 bytes, checksum: d3f6976da50d6a0325448c884a00600d (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: O objetivo desta presente pesquisa foi avaliar os efeitos do uso tópico da mitomicina C a 0,02%, no epitélio íntegro da córnea de coelhos, sob o ponto de vista clínico, histopatológico e imuno-histoquímico. A mitomicina C (olhos esquerdo) e água destilada (olhos direito, controle) foram instiladas, 4 vezes ao dia, por 14 dias, nos olhos de 28 coelhos, em superfície ocular íntegra. A superfície ocular foi avaliada por exames biomicroscópicos seriados, durante os dias de instilação da droga. Os animais foram sacrificados no 15°, 50° e 100° dia de experimento. O exame histopatológico do epitélio corneano foi complementado por análise morfométrica, que pelo método de contagens de pontos, estudou área do epitélio, número de núcleos, relação núcleo-citoplasma, área da célula epitelial, área do núcleo e área do citoplasma, na região do limbo e central da córnea. O exame imuno-histoquímico do epitélio corneano foi realizado pelo emprego dos anticorpos monoclonais (AE1 e AE5) que reagem com as citoceratinas do epitélio da córnea. O uso de mitomicina C desencadeou discreta hiperemia conjuntival após o terceiro dia de instilação, desaparecendo 7 dias após a suspensão da droga. Não apresentou outro sinal clínico detectável na biomicroscopia. Não desencadeou alterações histopatológicas no epitélio corneano, observando-se a continuidade do epitélio, as células epiteliais se apresentaram dispostas de maneira ordenada, com número de camadas obedecendo a maturação normal e ausência de atipia celular. A análise morfométrica determinou alterações significativas em diferentes estruturas do epitélio, na região do limbo e central da córnea, principalmente nas áreas estimadas do epitélio, do citoplasma e do número de núcleos, verificando-se uma hipertrofia da célula epitelial, redução da relação núcleo-citoplasma e diminuição do número de núcleos. Estes valores voltaram próximos ao nível controle no 100° dia de avaliação. O uso da mitomicina C a 0,02%, não influenciou no padrão de diferenciação da célula epitelial da córnea. Os resultados desta investigação demonstraram baixo potencial tóxico do uso da mitomicina C, em superfície ocular íntegra de coelhos, nessa dosagem e concentração / Abstract: This study was performed to evaluate the effects of mitomycin C eye drops (0,2mg/ml) on the corneal epithelium of rabbits. It was investigated the changes in clinical examination, histopathologic and immunohistochemical analysis. Mitomycin C and distilled water (controls) were instilled 4 times daily for 14 consecutive days in the eyes with intact ocular surface. The ocular surface was evaluated by slit-lamp examination, during the days of the drug instillation. The animals in the 15th, 50th and 100th day of the experiment were sacrificed. The histopathologic analysis of the corneal epithelium was complemented by morphometry. It was studied the epithelium area, number of nuclei, number of round nuclei, nucleus-cytoplasm relation, epithelial cells area (nucleus and cytoplasm). The immunohistochemical studies used monoclonal antibodies to cytokeratins (AE1 and AE5). During the use of mitomycin C eye drops mild conjunctival hyperemia was detected. It disappeared 7 days after the drug suspension. There was no other clinical sign by slit-lamp examination. It didn't detect histopathologic alterations in the corneal epithelium, it was considered the epithelium continuity, maturation and atypical cells presence. The morphometric analysis was performed by point counting under light microscopy. It showed variations characterized by alteration of the epithelium area, the nucleus area and cytoplasm area, increase of the epithelial cell, alteration of the nucleus-cytoplasm relation and decrease of the nuclei number. The use of mitomycin C 0,02%, it didn't influence in the differentiation pattern of the cornea epithelial cell. The results of this investigation, in this study conditions, showed that mitomycin C 0,02%, instilled 4 times daily for 14 consecutive days, it was showed low toxic potential in intact ocular surface / Doutorado / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Nora Marcela Haun Quiros / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T12:27:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Torsoni_AdrianaSouza_M.pdf: 20635048 bytes, checksum: a01b9994fce1e6c4b016aa22794ba653 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: A farmacodinâmica vascular da síntese endógena de NO ficou conhecida devido ao efeito de drogas nitrovasodilatadoras. Esses agentes exógenos, tais como o nitroprussiato de sódio, agem como doadores de NO e exercem efeito hipotensivo in vivo direto promovendo diminuição na resistência vascular sistêmica decorrente de um aumento nos níveis de GMP cíclico. Nosso interesse reside na possibilidade de complexos de rutênio transnitrosilaminados servirem como veículo para a liberação controlada de NO em sistemas biológicos e, assim, produzir efeitos farmacológicos. O objetivo desse trabalho foi investigar o efeito hipotensor e a toxicidade de um novo complexo de rutênio, o t-[Ru(NH3)4P(OEt)3NO](PF6)3 devido a sua habilidade em liberar NO espontaneamente em solução aquosa. Medidas diretas de PA foram realizadas em ratos Wistar machos adultos cronicamente instrumentados. O efeito hipotensor foi determinado em ratos conscientes (n=10) submetidos a injeções endovenosas "in bolus" de trans-[Ru(NH3)4P(OEt)3NO](PF6)3 e nitroprussiato de sódio (NaNP). Concentrações de 0,0025 a 0,08 µmoles/Kg do complexo de rutênio induziram resposta hipotensora imediata (PAM controle 104 ± 4,1 mmHg) em uma faixa de ação de 7 a 27%, similar ao efeito observado para o NaNP (11a 32%). Uma correlação dose-efeito positiva foi observada. A toxicidade foi avaliada em cultura de células (IC50) e pela toxicidade aguda em camundongos (LD50). Estudos da citotoxicidade foram conduzidos em cultura de hepatócitos (células metabolizantes), V79 (células não metabolizantes) e V79 tratada com o complexo biotransformado pelos hepatócitos. Hepatócitos de rato foram isolados pelo método de perfusão com colagenase em duas etapas do fígado inteiro. A viabilidade celular foi avaliada por três ensaios, os quais são indicativos de citotoxicidade: redução do MTT, incorporação do vermelho neutro (VN) e conteúdo de ácidos nuclêicos (DNA). Esses ensaios permitiram a avaliação dos valores de IC50 para o trans-[Ru(NH3)4P(OEt)3NO](PF6)3 em células V79 e hepatócitos. Na cultura de hepatócitos valores de IC50 superiores a 3,0 mM foram obtidos para todos os ensaios realizados, sugerindo uma baixa toxicidade do complexo. Para cultura de células V79, nossos resultados mostraram efeito citotóxico similar para os três ensaios investigados, com valores de IC50 ao redor de 2,0 mM, mostrando ser este composto menos tóxico que o NaNP (IC50 ~ 0,056 mM). O produto da biorransformação foi avaliado e mostrou baixa toxicidade para os ensaios de DNA, MTT e alta toxicidade para o VN, i.e., o composto biotransformado modificou a integridade lisossomal. A toxicidade aguda foi avaliada e um valor de LD50 igual a 216 mg/Kg foi obtido indicando baixa toxicidade do complexo in vivo. / Abstract: The vascular pharmacology of endogenously synthesised NO is largely predicted by the known effects of nitrovasodilator drugs. These exogenous agents, such as sodium nitroprusside, act as NO donors and exert direct hypotensive effects in vivo promoting a decrease in systemic vascular resistance by increasing levels of cyclic GMP. We have been interested in the possibility that trans-nitrosylammine ruthenium complexes, might serve as vehicles for the controlled delivery of NO into a biological system and thus display useful pharmacological effects, promoting hypotensive effect. The aim of this work was to investigate the hypotensor effect and toxicity of a new ruthenium complex t-[Ru(NH3)4P(OEt)3NO](PF6)3 due to their ability to spontaneously NO release in aqueous solution. Direct measurements of blood pressure were performed in chronically instrumented adult male Wistar rats. The hypotensor effect was determined in conscious rats (n=10) submitted to in bolus intravenous doses of the trans-[Ru(NH3)4P(OEt)3NO](PF6)3 and sodium nitroprusside (NaNP). Concentration range of 0.0025 to 0.08 µmols/Kg induced hypotensive response (MAP control: 104 ±4.1 mmHg) immediately in action range of 7 to 27% similar to that observed for NaNP effect (11 to 32%). A positive dose-effect correlation was observed. The toxicity was evaluated on cell culture (IC50) and by acute dose in mice. Cytotoxicity studies were carried out on cultures of rat hepatocytes (metabolizant cells), V79 (non-metabolizant cells) and V79 treated with the supernatant of the biotransformed complex by hepatocytes. Hepatocytes were isolated from adult male Wistar rats by the two-step collagenase liver perfusion. Cell viability was evaluated by three endpoints which are indicative of cytotoxicity: MTT reduction, Neutral Red Uptake (NRU) and Nucleic Acid Content (DNA). These assays permit the evaluation of IC50 values of trans- [Ru(NH3)4P(OEt)3NO](PF6)3 on V79 and rat hepatocyte cells. On hepatocyte culture values higher than 3.0 mM were determined for all tests, suggesting a low toxicity for the complex. For V79 cultures our results showed a similar cytotoxic effects for the three studied endpoints with an IC50 ranging around 2.0 mM, showing be less toxic than NaNP. The biotransformated product was evaluted and showed low toxicity for DNA, MTT assays and high toxicity for NRU, i.e., the compound biotransformed changed the lysosomal integrity. The acute toxicity was carried out and a LD50 value of 216 mg/Kg was obtained indicating a low toxicity in vivo. / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas