Orientador: Helio Langoni / Banca: Italmar Teodorico Navarro / Banca: Vírginia Bodelão Richini / Banca: Simone Bandini Lucheis / Banca: Rodrigo Costa da Silva / Resumo: A toxoplasmose se destaca pela elevada importância médica, veterinária e zootécnica, e seu controle tornou-se um desafio para a saúde pública em todo o mundo, sinalizando a prioridade em buscar na vacinação uma estratégia para conter a infecção. Este estudo foi realizado com o objetivo de avaliar a proteção conferida pela pré-imunização, com vacina constituída de taquizoítos irradiados a 255 Gy, com raios γ, em ratas Wistar, contra desafios orais por diferentes estágios infectantes do Toxoplasma gondii. Nos experimentos foi investigada a proteção vacinal contra formação de cistos cerebrais, cistos na musculatura esquelética, transmissão congênita e eliminação do agente pelo leite. A vacina foi administrada por via oral, com uso de adjuvante, em três doses com intervalos de 15 dias, antes do acasalamento das ratas. Constatada a gestação, realizou-se o desafio oral das ratas com bradizoítos, oocistos e taquizoítos de T. gondii. Foram utilizadas ratas Wistar em idade reprodutiva, que foram distribuídas em dois experimentos, composto por oito grupos cada. No experimento I cada grupo foi formado por seis ratas e, no experimento II, por cinco ratas. Os animais em cada experimento foram distribuídos da seguinte forma: Grupo 1: imunizado e desafiado com bradizoítos (ME-49) de T. gondii; Grupo 2: desafiado com bradizoítos (ME-49) de T. gondii; Grupo 3: imunizado e desafiado com oocistos (ME-49) de T. gondii; Grupo 4: desafiado com oocistos (ME-49) de T. gondii; Grupo 5: imunizado e desafiado com taquizoítos (RH) de T. gondii; Grupo 6: desafiado com taquizoítos (RH) de T. gondii; Grupo 7: apenas imunizado, Grupo 8: não imunizado e não desafiado. Semanalmente, desde a imunização, foram realizadas análises sorológicas e hematológicas. Após a parição (experimento I), as ratas e neonatos foram eutanasiados para determinação da carga parasitária no cérebro e na musculatura esquelética ... / Abstract: Toxoplasmosis has high medical and veterinary importance, their control has become a challenge to public health worldwide, signaling the priority in seeking vaccination strategy to contain the infection.The objective of the present study was to evaluate the efficacy of Toxoplasma gondii (T. gondii) tachyzoites irradiated vaccine, administered in experimentally inoculated Wistar female rats by oral challenges against different infectious stage of Toxoplasma gondii for blocking the production of T. gondii cysts in brain and muscle tissues, congenital transmission and also the elimination of the parasite in milk. Vaccine was administered orally, plus aluminium hidroxy as adjuvant, with three doses of 15 days interval. One week after pregnancy confirmation, challenge was done by gavage with T. gondii cysts, oocysts and tachizoites. Wistar rats in reproductive stage were distributed in two studies, composed by eight groups of six animals each (experiment I) an five animals each (experiment II), as follows: Group 1: immunized and challenge with bradizoites of ME-49 T. gondii strain; Group 2: non- immunized and challenged bradizoites of ME-49 T. gondii strain; Group 3: immunized and challenged with oocysts of ME-49 T. gondii strain; Group 4: non- immunized and challenged with oocysts of ME-49 T. gondii strain; Group 5: immunized and challenged with tachizoites of RH T. gondii strain; Group 6: non- immunized and challenged with tachizoites of RH T. gondii strain; Group 7: only immunized, Group 8: non- immunized and non-challenged. Weekly, after vaccination serological and hematological were performed. After parturition (Experiment I), the rats and newborns were euthanized, tissues and organs were collected for parasite load evaluation by Real Time PCR, intestinal tissue was collected for subsequent histological examinations, immunological involved in immune response against T. gondii. During lactation ... / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-26Bitstream added on 2014-06-13T18:32:17Z : No. of bitstreams: 1 santos_tr_me_jabo_prot.pdf: 615595 bytes, checksum: 5ebde41577462db0b3f3c42f920081d7 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Considerando a grande importância da toxoplasmose animal sobretudo em decorrência dos animais infectados servirem de fonte direta ou indireta de infecção ao homem, avaliou-se a freqüência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii em bovinos leiteiros, complementando o estudo com amostras colhidas de caninos e humanos de convívio rural. Foram colhidas amostras de sangue de 200 fêmeas leiteiras bovinas, 61 cães e 116 humanos, pertencentes a 50 propriedades da região sudoeste do Estado do Mato Grosso. Os soros foram submetidos à reação de imunoflorescência indireta (IgG-RIFI), utilizando-se comomponto de corte as duluições de 1:64, 1:40 e 1:40 para bovinos, cães e humanos, respectivamente. Anticorpos para T. gondii foram encontrados em 71,00% dos bovinos (n=1420); 88,52% dos cães (n=54) e 97,41% dos humanos (n=113). As amostras de humanos também foram avaliadas para IgM, que mostrou 33,62% de soropositividade. Após essa triagem sorológica, as amostras positivas exceto de humanos, foram processadas até obtenção de título final. A associação dos riscos relacionados à toxoplasmose (IgG)como, consumo de leite cru, produção de derivados de origem animal, abate de animais e contato com felinos e/ou ouros animais, não influenciou na distribuição dos sororreagentes (P>=0,05). Contudo, em relação à presença de IgM detectou-se associação entre soropositividade e o abate de animais para o consumo próprio (P<=0,05). Os resultados demonstraram a elevada prevalência da infecção toxoplasmática na população estudada e o alto risco da carne como via de transmissão para o homem, quando manipulada ou ingerida crua ou mal cozida. / To determine the prevalence of anti-Toxoplasma gondii antibodies, 200 samples of blood serum from female dairy cattle belonging to 50 farms in the southwest of the state of Mato Grosso were analyzed by indirect immunofluorescent antibody test (IFAT>=40) for anti-T. Gondii. From these, 1420 (71,00%) of the cattle serum, 54 (88,52%) of the dog serum and 113 (97,41%) of the serum human were positive for the infection, at a diluition of 1:64 or more for cattle, 1:40 or more for dog and 1:40 for human. The samples human were also evaluated for IgM, wich showed 33,62% of seropositivity. No significant differences were observed to infection toxoplasmic (IgG) in terms consuption of raw milk, produce derivaties of animal origin, slaughtering of animals and contact with felines or other animals. However, for IgM was determined association between seropositivity and the slaughter of animals for personal consumption. Infection toxoplasmic has a high prevalence on the studied population. The results suggest that the handle or eat raw/rare cooked meat may be importants ways of transmiting toxoplasmosis to humans in this region.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:10:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 NormaHDM_DISSERT.pdf: 999595 bytes, checksum: c62cdc67318a196202b24c4678092ac5 (MD5) Previous issue date: 2011-03-31 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Toxoplasmosis, provoked by the intracellular parasite Toxoplasma gondii, is one of the most prevalent parasitoses in the world. In humans, transmission occurs by three evolutionary forms of the parasite: oocysts, tissue cysts and tachyzoites. Wild and domestic felines are definitive hosts. The ocular form of toxoplasmosis can be of congenital origin with early or late clinical manifestations, or acquired after birth. T. gondii is considered the main culprit for most cases of infectious uveitis. This study aimed at assessing ocular toxoplasmosis, relating it to factors associated to the patient s lifestyle and describing the epidemic-serological and clinical profile of affected individuals. A cross-sectional study was conducted with a population of 159 patients. Univariate analysis (odds ratio) was used to evaluate the data, with a confidence interval of 95% and p-value < 0.05. A prevalence of 4% of ocular toxoplasmosis was observed in the population of patients treated at an ophthalmological clinic. Of patients directly examined by immunoenzymatic assay (MEIA-AxSYM?- Microparticle Enzyme Immune Assay), considering only uveitis, a frequency of anti-T. gondii of 73%, most of whom exhibited titulation between 40-99 UI IgG/mL. With respect to location of ocular lesions, bilaterality was observed in 57% of patients assessed by the ophthalmoscopy technique. When compared with the results of an active search of medical records, a similarity in ocular toxoplasmosis (74%) and bilateral lesion location (55%) was observed. Type I lesion was the most frequent type observed, with intraocular disposition in the macula. An epidemiological survey revealed that direct contact with cats; consuming raw or poorly cooked meat and direct contact with the soil were significantly associated with greater likelihood of acquiring ocular toxoplasmosis. Sample characterization in relation to age range was significant for patients between 31 and 40 years [??, chi-square test (p = 0.04)], but population traits such as schooling, sanitary district, and monthly income were not significant. Results confirm that ocular toxoplasmosis is widely distributed in the metropolitan area of Natal, Brazil, with significant prevalence of ocular lesions provoked by T.gondii. It is suggested that sanitary authorities exert greater control in order to minimize the risk of toxoplasmic infection, mainly in pregnant women. / A toxoplasmose, provocada pelo parasito intracelular Toxoplasma gondii, ? uma das parasitoses mais prevalentes em todo o mundo. Nos humanos, a transmiss?o ocorre por meio das tr?s formas evolutivas do parasito: oocistos, cistos tissulares e taquizo?tos. Os fel?deos, silvestres ou dom?sticos, s?o os hospedeiros definitivos. A forma ocular da toxoplasmose pode ser de origem cong?nita com manifesta??es cl?nicas precoces ou tardias, ou ainda ser adquirida ap?s o nascimento. O T. gondii ? considerado o principal respons?vel pela maioria dos casos de uve?tes infecciosas. Este estudo avaliou a toxoplasmose ocular, relacionando-a com fatores associados ao modo de vida dos pacientes e descrever um perfil epid?mico-sorol?gico e cl?nico dos indiv?duos acometidos. Foi realizado um estudo seccional, com uma popula??o de 159 pacientes. Para avalia??o dos dados observados foi utilizada a an?lise univariada com c?lculo de Odds Ratio, tendo como ?ndice de confian?a de 95% e o valor de p < 0,05. Foi observada uma preval?ncia de 4% de toxoplasmose ocular na popula??o de pacientes atendidos na cl?nica oftalmol?gica. Dos pacientes examinados diretamente por ensaio imunoenzim?tico (MEIA-AxSYM?- Microparticle Enzyme Imune Assay), considerando apenas as uve?tes, foi verificada uma freq??ncia de anti- T. gondii de 73%, a maioria dos pacientes apresentaram titula??o entre 40-99 UI IgG/mL. Quanto ? localiza??o da les?o ocular foi observada a bilateralidade em 57% dos pacientes avaliados pela t?cnica de oftalmoscopia. Quando comparados com os resultados da busca ativa de prontu?rios se observou uma similaridade na freq??ncia de preval?ncia para toxoplasmose ocular (74%), e 55 % quanto a localiza??o bilateral da les?o. Quanto ao tipo de les?o observada, a mais freq?ente foi a les?o do tipo I, com disposi??o intraocular na m?cula. O inqu?rito epidemiol?gico revelou que os fatores de riscos: o contato direto com gatos, o consumo de carne crua ou mal cozida e o contato direto com o solo foram significativamente associados com as maiores chances de adquirir toxoplasmose ocular. A caracteriza??o da amostra em rela??o ? faixa et?ria foi significativa para pacientes entre 31-40 anos [??, Teste do qui-quadrado (p = 0,04)], por?m caracter?sticas populacionais tais como escolaridade, distrito sanit?rio, renda mensal n?o tiveram signific?ncia segundo esse teste estat?stico. Os resultados confirmam que a toxoplasmose ocular est? amplamente distribu?da na cidade do Natal, com significativa preval?ncia de les?es oculares provocadas pelo T.gondii. ? recomend?vel um maior controle por parte das autoridades sanit?rias, visando minimizar o risco de infec??o toxopl?smica em toda popula??o.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:10:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AndrewDMoura_DISSERT.pdf: 2171367 bytes, checksum: f41e94b4a019b04f63123834b3af9d4c (MD5) Previous issue date: 2013-04-02 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Toxoplasmosis is a zoonosis of worldwide distribution caused by the protozoan Toxoplasma gondii, triggering dangerous complications in immunocompromised patients and pregnant women, as well as having great economic impact for the livestock. So far the control of toxoplasmosis is made primarily by chemotherapy. However, most drugs used routinely have some limitations. In order to control this disease, several research groups, including ours, has been working to develop a medical-veterinary vaccine based on parasite antigens, vectors and protocols of immunization. In this study were implemented and standardized methodologies for amplification and cloning of recombinant immunogens in the system for the development of a prototype vaccine, based on the surface antigens of T. gondii and recombinant adenovirus encoding these antigens. Genes encoding BAG1, GRA2 and SAG1 proteins were amplified. We established a strategy for cloning SAG1, SAG2, SAG3 and TgAMA1- genes in recombinant system. The genes encoding SAG1 and SAG2 were cloned and their sequences showed high similarity with sequences from GenBank. The virtual translation of these proteins showed polymorphisms in the amino acid sequence, which can be correlated with levels of antigenicity. Simultaneously, the adenovirus encoding the SAGs (HAdSAGs) were expanded, purificated and characterizated. Immunization of C57bl/6 mice, using viral supernatant was not enought to elicit immune responses at high levels, being required HAdSAGs titration for future immunizations. Therefore, this study allowed the cloning of the two genes important for the development of a prototype vaccine. Besides, implementations methodologies that permit advancements in the development of a vaccine against toxoplasmosis using adenovirus to express proteins of the parasite / A toxoplasmose ? uma zoonose de distribui??o mundial causada pelo protozo?rio Toxoplasma gondi podendo desencadear graves complica??es em pacientes imunossuprimidos e gestantes; bem como acarretando grande impacto econ?mico para a pecu?ria. At? o momento o controle da toxoplasmose ? feito basicamente pela quimioterapia. Contudo, a maioria das drogas utilizadas na rotina apresentam alguma limita??o. No intuito do controle dessa parasitose, diversos grupos de pesquisas, inclusive o nosso, v?m trabalhando para o desenvolvimento de uma vacina m?dico-veterin?ria com base em ant?genos do parasito, vetores e protocolos para imuniza??o. Nesse estudo foram implantadas e padronizadas metodologias para amplifica??o e clonagem de imun?genos em sistema recombinante visando o desenvolvimento de um prot?tipo vacinal, tendo como base os ant?genos de superf?cie de T. gondii e adenov?rus recombinante codificando esses ant?genos. Os genes que codificam as prote?nas BAG1, GRA2 e SAG1 foram amplificados. Foi estabelecida uma estrat?gia de clonagem dos genes SAG1, SAG2, SAG3 e TgAMA-1 em sistema recombinante. Os genes que codificam SAG1 e SAG2 foram clonados e suas sequ?ncias apresentaram grande similaridade com sequ?ncias depositadas no GenBank. A tradu??o virtual dessas prote?nas apresentou polimorfismos no n?vel de amino?cidos, que poder?o ser correlacionadas com n?veis de antigenicidade. Paralelamente, foi realizada a expans?o, purifica??o e caracteriza??o dos adenov?rus que codificam as SAGs (HAdSAGs). A imuniza??o de camundongos C57BL/6, utilizando o sobrenadante viral, n?o foi suficiente para desencadear respostas imunol?gicas em altos n?veis, sendo necess?ria a titula??o dos HAdSAGs para futuras imuniza??es. Portanto, esse estudo permitiu a clonagem de dois genes importantes para o desenvolvimento de um prot?tipo vacinal, al?m de implementa??es de metodologias que permitir?o avan?os para o desenvolvimento de uma vacina contra a toxoplasmose usando adenov?rus que expressem prote?nas do parasito

Orientador: Antonio Carlos Paes / Banca: Helio Langoni / Banca: Rogério Giuffrida / Resumo: A toxoplasmose e a leptospirose são doenças zoonóticas que acometem animais domésticos e selvagens. Inquéritos soroepidemiológicos em quatis (Nasua nasua) são importantes para conhecimento, vigilância e controle de doenças. O objetivo deste trabalho foi verificar a soroprevalência de anticorpos anti- Leptospira spp. e anti Toxoplasma gondii, em 108 amostras de soro de quatis mantidos em vida livre, provenientes do Parque Ecológico do Tietê, São Paulo, Brasil. Para a pesquisa de anticorpos anti-Toxoplasma gondii foi utilizado o teste de aglutinação modificada (MAT) verificando soroprevalência de 18 animais (16,67%) positivos e 90 animais (83,33%) negativos (IC 95%= 0,09- 0,23). Dos 18 animais positivos a frequência dos títulos apresentados foram: 25 (n=8; 44,44%), 50 (n=3; 16,67%), 100 (n=3; 16,67%), 200 (n=1; 5,56%) e 400 (n=3; 16,67%). Para pesquisa de anticorpos anti- Leptospira spp. foi utilizado o teste de Soroaglutinação Microscópica (SAM), sendo 96 animais negativos (88,89%) e 12 animais positivos, correspondente a soroprevalência de 11,11% (IC 95%= 6,0- 19), e os sorovares reagentes encontrados foram Butembo (n=2; 16,67%); Whitcombi (n=1; 8,33%); Sentot (n=1; 8,33%); Gryppotyphosa (n=1; 8,33%); Panama (n=1; 8,33%); Hardjo bovis (n=1; 8,33%); Hardjo ctg (n=1; 8,33%); Hardjo prajitno (n=4; 33,33%) e a frequência dos títulos apresentados foi: 100 (n=5; 41,67%); 200 (n=5; 41,67%); 400 (n=2; 16,67%). Portanto o presente estudo demonstra a importância da avaliação sorológica anti- Toxoplasma gondii e anti- Leptospira spp. em quatis de vida livre, o que avalia os aspectos epidemiológicos relacionados a estas zoonoses e riscos para a saúde pública, pois mantém contato com humanos / Abstract: The toxoplasmosis and leptospirosis are zoonotic diseases that affect domestic and wild animals. Seroepidemiological surveys in coatis (Nasua nasua) is important for information, surveillance and disease control. The objective of this study was to determine the seroprevalence of antibody against Leptospira spp. and Toxoplasma gondii in 108 samples of coatis serum maintained in the wild, from the Ecological Park of Tietê, São Paulo, Brazil. For research of anti-Toxoplasma gondii antibodies we used the modified agglutination test (MAT) and 18 animals (16.67%) were soropositive and 90 animals (83.33%) negative (95% CI = 0,09- 0.23). Of the 18 positive animals positive the frequency of the antibodies were: 25 (n = 8; 44.44%), 50 (n = 3; 16.67%), 100 (n = 3; 16.67%), 200 (n = 1; 5.56%) and 400 (n = 3; 16.67%). To search the anti-Leptospira spp antibodies. It was used the Microscopic Agglutination Test test (MAT), and 96 were negative 88.89%) and 12 positive (11,11%) (95% CI = 6,0- 19). The serovars reagents Butembo (n = 2; 16.67%); Whitcombi (n = 1; 8.33%); Sentot (n = 1; 8.33%); Gryppotyphosa (n = 1; 8.33%); Panama (n = 1; 8.33%); Hardjo bovis (n = 1; 8.33%); Hardjo ctg (n = 1; 8.33%); Hardjo prajitno (n = 4; 33.33%). The frequency of the presented titles were 100 (n = 5; 41.67%); 200 (n = 5; 41.67%); 400 (n = 2; 16.67%). Therefore, this study demonstrates the importance of evaluating the serological response to anti- Toxoplasma gondii and for anti-Leptospira spp. of captive animals to assess epidemiological aspects related to these zoonoses and risks to public health because it maintains contact with humans / Mestre

Orientador: Hélio Langoni / Banca: Heitor Franco de Andrade Júnior / Banca: Antonio Carlos Paes / Resumo: O Toxoplasma gondii é um protozoário parasita de grande importância no contexto de produção animal e saúde pública, envolvendo alterações fetais e abortos na espécie humana e em animais, sendo ainda importante patógeno oportunista em pacientes imunocomprometidos. A técnica de aglutinação direta modificada (MAT) destaca-se por independer da origem dos anticorpos e permitir diferenciar os estágios da infecção toxoplásmica. Assim, padronizou-se a técnica de sedimentação espontânea, verificando-se que com 60 minutos, a parte líquida da suspensão apresentava predominantemente taquizoítos e raras células pequenas. O antígeno inativado pelo metanol (AM) permitiu a exposição de antígenos de fase aguda somente, enquanto que a formalina (AF) expõe tanto os de fase aguda como crônica. Testou-se o antígeno para três grupos experimentais: G1, ratas infectadas com 104 bradizoítos da cepa BTU10, genótipo I, via oral; G2, ratas infectadas com 104 bradizoítos da cepa BTU10, via oral, e imunodeprimidas com corticóide; G3, grupo controle. A comparação das MATs permitiu a diferenciação dos anticorpos IgG de fase aguda, dos de fase crônica. Gradativamente foi obtida a maturação dos anticorpos, sendo observada pela avidez das mesmas no teste de ELISA. Os anticorpos do grupo experimental se comportaram semelhantemente para as provas sorológicas, até a 13ª semana. A reagudização no G2 foi detectada na bioprova da musculatura antes que no cérebro. Com isso, verificou-se que a MAT-AM e a MAT-AF permitem a diferenciação dos estágios agudo e crônico, e ainda a caracterização da reagudização da infecção em pacientes imunocomprometidos. / Abstract: Toxoplasma gondii is a parasite protozoan with great importance to animal production and public health, involving foetal alterations and abortions in human and animal species, being an important opportunistic pathogen in immunocompromised patients. Modified agglutination test (MAT) has great importance to independ of the origin of antibody, and to allow differentiating the periods of the Toxoplasma infection. Thus, the protocol of spontaneous sedimentation we standardized, verifying that with 60 minutes, the liquid part of the suspension showed predominantly the presence of tachyzoites and rare small cells. The antigen inactivated with methanol (AM) allowed the exposition of antigens of acute phase only, while formalin (AF) as much the acute as chronic phase. Antigen was tested to three experimental groups: G1, rats infected with 104 bradyzoites of BTU10 strain, genotype I, orally; G2, rats infected with 104 bradyzoites of BTU10 strain, orally, and immunodepressed with corticoid; G3, control group. The comparation of MATs allows the differentiation of IgG from acute phase of the ones from chronic phase. A gradual maturation of immunoglobulins was gotten, being observed through the avidity of the same ones, and surveyed for ELISA. The antibodies of the experimental groups showed similar profile for all serological tests, until the 13th week. Reacutization of the infection in G2 was detected earlier in bioassay of musculature than brain. Thus, we verified that MAT-AM and MAT-AF allow the differentiation of the acute and chronic stages, and still the characterization of the reacutization of the infection in immunocompromised patients. / Mestre

Resumo: Caprinos machos em idade reprodutiva, sorologicamente negativos para Toxoplasma gondii, foram selecionados e distribuídos como apresentado a seguir: A - um caprino inoculado, via oral, com 2,0 x 105 oocistos da cepa P; B - um caprino inoculado, via subcutânea, com 1,0 x 106 taquizoítos da cepa RH e C - um caprino não inoculado mantido como controle. Após a inoculação dos machos com T. gondii, 12 cabras reprodutoras, não gestantes, sorologicamente negativas para as principais doenças reprodutivas, sobretudo toxoplasmose, foram sincronizadas. Em seguida, foram expostas à monta natural pelos machos, anteriormente inoculados: cinco cabras submetidas à monta natural pelo macho A (GI); cinco cabras submetidas à monta natural pelo macho B (GII) e duas cabras pelo macho C - controle (GIII). Nos soros das cabras obtidos nos dias -14, -7, -1 (antes da monta natural), e nos dias 3, 6, 9, 11, 14 e semanalmente até o parto, foi pesquisada a presença de anticorpos contra T. gondii pelo ELISA teste. Bioensaio em camundongos e Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) foram realizados em amostras de sêmen e tecidos dos machos, tecidos das fêmeas e de seus respectivos "produtos". Dez das 12 fêmeas utilizadas apresentaram anticorpos específicos contra T. gondii após a monta natural, sendo as cinco cobertas pelo macho inoculado com oocistos (GI) e cinco cobertas pelo caprino inoculado com taquizoítos (GII). Pelo bioensaio e pela PCR foi possível identificar, em várias datas experimentais em que ocorreu a monta natural, a presença do T. gondii nas amostras seminais dos caprinos inoculados. Posteriormente, após eutanásia, foi possível também isolar este parasito em algumas das amostras teciduais dos machos experimentais. Por estas mesmas técnicas de diagnóstico, identificou-se também a presença deste coccídio nas amostras teciduais das fêmeas experimentais, assim como de seus ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Male goats in reproductive age, serologically negative for Toxoplasma gondii, were selected and distributed according to the following arrangement: A - one goat inoculated orally with 2.0 x 105 oocysts of the strain P; B - one goat inoculated subcutaneously with 1.0 x 106 tachyzoites of the strain RH and C - one uninfected goat kept as control. After T. gondii inoculation, 12 nonpregnant female breeder goats serologically negative for the main reproductive diseases, especially toxoplasmosis, were synchronized and then exposed to natural mating by those males previously inoculated, being: five females submitted to natural mating by the male A (GI), five females exposed to natural mating by the male B (GII) and two females submitted to natural mating by the uninfected male (GIII). In sera obtained from all female goats on days -14, -7, -1, (before natural mating) and on days 3, 6, 9, 11, 14 and weekly until partum, the presence of antibodies against T. gondii was investigated by ELISA test. Bioassay in mice and PCR were performed on samples of semen and tissues of males and females and on their products which were stillbirths, fetus and offspring. Ten out of 12 females used showed specific antibodies against T. gondii after natural mating, being five from group GI and five from group GII. On several dates in which natural mating occurred, T. gondii was identified in semen samples of infected males by bioassay and PCR. Subsequently, after euthanasia, it was possible to isolate T. gondii in some of tissue samples from experimentally infected males. Moreover, by PCR and bioassay techniques it was also possible to identify T. gondii in tissue samples from experimentally infected females as well as their products (stillbirths, fetus and offspring). It was not possible to notice any clinical signs of toxoplasmosis Therefore, these results proved, for the first time, the sexual transmission of toxoplasmosis in goat species / Orientador: Alvimar José da Costa / Coorientador: Gilson Pereira de Oliveira / Banca: Odilon Vidotto / Banca: Carlos Noriyuki Kaneto / Banca: Flávio Ruas de Moraes / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Doutor

Orientador: Alvimar Jose da Costa / Banca: Odilon Vidotto / Banca: Carlos Noriyuki Kaneto / Banca: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Resumo: Avaliou-se a transmissão congênita em cabras, infectadas e reinfectadas experimentalmente por T. gondii, em três fases gestacionais. Foram selecionadas 25 fêmeas, negativas para T. gondii e, destas, 20 foram inoculadas (cepa ME 49) e 15 reinoculadas (cepa VEG) com oocistos de T. gondii. As fêmeas foram distribuídas em cinco grupos experimentais (n=5): GI - reinfectadas no 40º dia de gestação (DG), GII - 80º DG, GIII - 120º DG, GIV - infectadas não reinfectadas e GV - não infectadas. Nos dias 0 (antes da inoculação), 3, 6, 9, 15, 21 e a cada sete dias pós-inoculação (DPI) e no 3º e a cada sete dias pós-reinoculação (DPR), foram realizados exames clínicos e sorológicos (RIFI-IgG). Quando as fêmeas apresentaram títulos IgG <1024 iniciou-se o manejo reprodutivo. Após a confirmação da gestação, as ultrassonografias foram realizadas a cada 15 dias até o término do período gestacional. Após as parições, as cabras e suas crias foram eutanasiadas para colheita de tecidos para avaliação de parasitismo por T. gondii (histopatologia, bioprova e PCR). Das crias colheu-se sangue para a realização da RIFI. No 9º DPI registrou-se hipertermia em todas as cabras inoculadas (P<0,05). A soroconversão dos animais primoinfectados ocorreu no 21º DPI, com títulos (IgG) entre 1024 e 16384. No 119º DPI ocorreu a estabilização da fase crônica da toxoplasmose (IgG <1024), em todas as fêmeas infectadas. Após as reinfecções as cabras permaneceram assintomáticas. Aumentos significativos de títulos IgG (≥1024) ocorreram no 28º, 7º e 3º DPR, nos grupos I, II, III, respectivamente (P<0,05). Severos distúrbios reprodutivos foram observados apenas em cabras reinfectadas, assim como determinadas lesões histológicas (renais e hepáticas) em suas respectivas crias. Títulos de anticorpos IgG foram registrados em todas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: We evaluated the congenital transmission in goats experimentally infected and re-infected with T. gondii in three stages of pregnancy. We selected 25 females negative for T. gondii and of these, 20 were inoculated (ME 49 strain) and re-inoculated 15 (VEG strain) with oocysts of T. gondii. The females were distributed into five experimental groups (n = 5): GI - re-infected after 40th days of gestation (DG), GII - 80th DG, GIII - 120 th DG, GIV - infected and not re-infected and GV - uninfected. On days 0 (before inoculation), three, six, nine, 15, 21 and seven days post-inoculation (DPI) and the 3rd and every seven days after reinoculation (DPR), we performed clinical and serological (IFAT -IgG). When the females had titers IgG <1024 began the reproductive management. After confirmation of pregnancy, the ultrasounds were performed every 15 days until the end of pregnancy. After parturition, the goats and their offspring were euthanized to collect tissue for assessment of parasitism by T. gondii (histopathology, bioassay and PCR). Blood's newborn was collected to perform the IFAT. In the 9th DPI was recorded hyperthermia in all inoculated goats (P <0.05). Seroconversion occurred in animal primoinfectados 21st DPI, with titers (IgG) between 1024 and 16384. At 119th DPI and then leveled off in the chronic phase of toxoplasmosis (IgG <1024) in all infected females. After the goats remained asymptomatic re-infections. Significant increases in securities IgG (≥ 1024) occurred in 28th, 7th and 3rd DPR, in groups I, II, III, respectively (P <0.05). Severe reproductive disorders were observed only in re-infected goats, as well as certain histological lesions (kidney and liver) in their offspring. IgG antibody titers were recorded in all offspring of goats re-infected. Tissue parasitism by T. gondii was diagnosed in both infected and re-infected goats... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Luiz Carlos de Souza / Banca: Helio Langoni / Banca: Paulo Francisco Domingues / Banca: Alexandre W. Biondo / Banca: Aristeu Vieira da Silva / Resumo: As zoonoses são "doenças e infecções naturalmente transmissíveis entre os hospedeiros vertebrados e o homem". Dentre estas enfermidades está à toxoplasmose, zoonose de distribuição mundial que em diversos inquéritos soroepidemiológicos observa-se uma infecção de 70 a 90% das populações. E à leptospirose, atualmente estão disponíveis dados que sugerem que é a enfermidade mais comum dos animais domésticos. O presente estudo verificou hábitos alimentares e de costumes com as zoonoses por meio de levantamento soro-epidemiológico e da ocorrência de infecção na população acadêmica de medicina veterinária de duas universidades localizadas no oeste do estado do Paraná. Foi observado uma porcentagem de 25,5% (73/286) e de 3,8% (11/286) de positividade para a toxoplasmose e leptospirose, respectivamente. Os dados epidemiológicos referentes aos questionários aplicados aos alunos foram analisados, isoladamente para ambas as enfermidades. A associação entre os resultados sorológicos e as variáveis epidemiológicas foi verificada pelos testes de Qui-quadrado ou Exato de Fischer, adotando-se um nível de significância (a) de 5%. Observou-se diferença estatística entre as variáveis conviver com animais dentro de casa, deixar a ração exposta, beber leite cru, área onde a família mora urbana ou rural, ingerir carne crua para a toxoplasmose e somente a variável conviver com animais dentro de casa para a leptospirose. Concluiu-se que a ingestão de alimentos crus, continua sendo um dos principais fatores de risco de infecção pelo Toxoplasma gondii entre a população adulta e que a convivência destes acadêmicos com as várias espécies animais, foi o fator de risco principal na população estudada em relação à leptospirose. / Abstract: The zoonoses are diseases and infections naturally transmissible between the vertebrate hosts and humans. Toxoplasmosis is a worldwide distribution zoonosis, that in many seroepidemiologic inquires had infections rates of 70% to 90% of the population. Actual data shows that leptospirosis is the most common disease of the domestic animals. This project correlated behavioral aspects of the veterinary academic population on the west region of Paraná state with the incidence and/or prevalence of toxoplasmosis and leptospirosis using a seroepidemiologic approach. There were total of 25.5% (73/286) and 3.8% (11/286) positive cases for toxoplasmosis and leptospirosis respectively. The epidemiologic data from the students' behavior inquiry were analyzed separately. The association between the serologic results and the epidemiologic data were verified by Chi-square and Fisher exact test, using a significance level (a) of 5%. There were statistical significance between the inquiry variables "live with indoor animals"; "the pet's food is exposed"; "drink raw milk"; "the family lives in urban or country areas"; "ingestion of raw meat" and toxoplasmosis. Living with indoors pets was the only variable with statistical significance for leptospirosis infections. In conclusion, ingestion of raw food continues to be one of the most important risk factors for Toxoplasma gondii infections in adult population; and living with various animal species is the main risk factor for leptospirosis. / Doutor

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:07:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000347388-Texto+Completo-0.pdf: 1857979 bytes, checksum: 98875a0d9c6f342bef2d9bc65c57b825 (MD5) Previous issue date: 2006 / Objectives – The first aim of this study was to determine the prevalence of congenital toxoplasmosis in infants treated by the public health system in Porto Alegre, a city of about 1,500,000 inhabitants in Southern Brazil, through neonatal screening for Toxoplasma gondii-specific IgM. The second aim was to investigate whether the cases of congenital toxoplasmosis detected by this approach would have been identified by the prenatal screening program for toxoplasmosis that had already been implemented for the same population. Methods – A fluorimetric assay was used to analyze Toxoplasma gondii-specific IgM in the same dried blood filter paper specimens obtained from all newborns for routine metabolic diseases screening. When the screening was positive, serum samples from the infant and the mother were requested for confirmatory Toxoplasma gondii serology, and the infant underwent complete clinical investigation. Results – Throughout 2002, 14,398 out of ~20,000 liveborn infants were screened for metabolic diseases in the public health system in Porto Alegre, and 10,000 cards from consecutive infants were examined for Toxoplasma gondii-specific IgM. Seven infants tested positive in filter paper, and congenital toxoplasmosis was confirmed in six of them. Three cases had already been identified at birth, because the mothers were tested at the time of delivery, and one case had already been identified in the maternity ward, before birth. Two cases have been identified solely by the neonatal screening. Conclusions – The prevalence of congenital toxoplasmosis was 6/10,000 (95% CI 2/10,000, 13/10,000). Neonatal screening identified cases of congenital toxoplasmosis undetected by prenatal screening, when maternal serology had not been done at delivery. If not complemented by additional testing at delivery or in the post-delivery period, prenatal screening may be inefficient in detecting toxoplasmosis acquired and transmitted in late pregnancy. Additionally, neonatal screening and maternal serology at delivery were useful in identifying congenital toxoplasmosis when the mother did not receive prenatal care. / Objetivos – O primeiro objetivo deste estudo foi avaliar a prevalência de toxoplasmose congênita em recém-nascidos atendidos na rede pública de saúde de Porto Alegre, cidade de cerca de 1. 500. 000 habitantes, localizada no sul do Brasil, através da triagem neonatal para IgM anti-T. gondii. O segundo objetivo foi verificar se os casos de toxoplasmose congênita identificados por esta metodologia teriam sido detectados pelo programa de triagem pré-natal já implantado na mesma população. Métodos – Foi utilizado um teste fluorimétrico para pesquisar a IgM anti- Toxoplasma gondii em amostras de sangue absorvidas em papel filtro, aproveitando as mesmas amostras rotineiramente obtidas de todos os recém-nascidos para triagem de doenças metabólicas. Quando a triagem era positiva para IgM anti-Toxoplasma gondii, eram solicitadas amostras séricas do lactente e da mãe para sorologia confirmatória, e o lactente era submetido a uma completa investigação clínica. Resultados – Durante o ano de 2002 o teste para IgM foi realizado em 10. 000 recém-nascidos consecutivos. Em sete pacientes o teste foi positivo, e em seis foi confirmada a toxoplasmose congênita. Três casos já haviam sido identificados ao nascimento, pois suas mães haviam sido testadas para toxoplasmose no momento do parto, e um caso havia sido identificado na maternidade, um pouco antes do nascimento. Dois casos de toxoplasmose congênita foram identificados somente pela triagem neonatal. Conclusões – A prevalência de toxoplasmose congênita foi de 6/10. 000 (IC 95%: 2/10. 000-13/10. 000). A triagem neonatal identificou casos de toxoplasmose congênita não detectados pela triagem pré-natal, quando a sorologia materna não havia sido feita no momento do parto. Se não complementada por um teste na hora do parto ou logo após o mesmo, a triagem pré-natal pode ser ineficiente em detectar a toxoplasmose adquirida e transmitida nas últimas semanas da gestação. Adicionalmente, a triagem neonatal e a sorologia materna no momento do parto identificaram casos de toxoplasmose congênita em que a mãe não havia realizado acompanhamento pré-natal.