Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-01-30T13:57:56Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertaca_ValidacaoAtividadeAntifungica.pdf: 2825671 bytes, checksum: 6f18d342d49cb45885df6f1717b7c911 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-02-01T12:05:57Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertaca_ValidacaoAtividadeAntifungica.pdf: 2825671 bytes, checksum: 6f18d342d49cb45885df6f1717b7c911 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-01T12:05:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertaca_ValidacaoAtividadeAntifungica.pdf: 2825671 bytes, checksum: 6f18d342d49cb45885df6f1717b7c911 (MD5) Previous issue date: 2014-09-29 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os nitrocompostos foram empregados na terapêutica a partir da década de 40, quando foram amplamente sintetizados e testados frente a diversas doenças assim como a descoberta de seus efeitos citotóxicos. Deste modo foram estudados diversos grupos, derivados e análogos que pudessem se mostrar mais seguros e eficazes. Alguns estudos mostraram que os nitroestirenos, a exemplo do nitrofenileteno possuem diversas atividades biológicas como: antifúngica, antibacteriana, anti-inflamatória, antinoceptiva, etc. Associado a isto, atualmente, há um crescente interesse em novos agentes antifúngicos. Dentre os fungos do gênero Aspergillus o mais comuns é o Aspergillus fumigatus o qual é transmitido através do ar causando infecções denominadas de aspergiloses. Outros fungos com relevância na clínica são os dermatófitos que causam diversas doenças de pele e seus anexos, sendo o Trichophyton mentagrophytes bastante prevalente. O objetivo deste trabalho foi validar a estrutura química de nitroestirenos sintetizados em nível de bancada e testá-los como antifúngicos em duas espécies de fungos, entre eles um filamentoso oportunista e um dermatófito, assim como testar os efeitos sinérgicos entre os nitroestirenos obtidos com anfotericina B. Os resultados mostraram que espectros de Infravermelho e Ressonância Magnética Nuclear 1H dos análogos nitroestirenos correspondem com a estrutura proposta. O teste in vitro de microdiluição demonstrou atividade antifúngica dos nitroestirenos, pois foi obtida a CIM do composto 4’-metil-1-nitro-2-fenileteno (7B) na concentração de 0,05 mg/mL frente ao A. fumigatus. Já para a espécie T. mentagrophytes o composto com melhor atividade foi 4’-metoxi-1-nitro-2-fenileteno (7C) com a CIM de 0,22 mg/mL. Com relação à análise da combinação entre AB e os nitroestirenos, in vitro, pelo teste do checkerboard se mostrou antagonista para o composto 7A e 7C e indiferente para o composto 7B frente à cepa padrão de A. fumigatus. / Nitro compounds have been used in therapy from the 40s, when they were widely synthesized and tested against various diseases as well as the discovery of their cytotoxic effects. Thus different groups, derivatives and analogs which could prove safer and more effective were studied. Some studies have shown that nitrostyrenes, like the nitrofenileteno possess diverse biological activities such as antifungal, antibacterial, anti-inflammatory, antinoceptive, etc. Additonally, there is currently a growing interest in new antifungal agents. Among the fungi of the genus Aspergillus is the most common Aspergillus fumigatus which is transmitted through the air causing aspergillosis. Dermatophytes are clinically relevant and cause various skin diseases, Trichophyton mentagrophytes being quite prevalent. The objective of this study was to validate the chemical structure of synthesized nitrostyrenes and evaluate its antifungal activity in two species of fungi, including a filamentous dermatophytes and opportunistic as well as evaluation of the synergistic effects among nitrostyrenes and amphotericin B (AB). The results confirm the infrared spectral and nuclear magnetic resonance of 1H nitrostyrenes analogues as correspond with the proposed structure. Test microdilution demonstrated in vitro antifungal activity of nitrostyrenes with MIC values for 4'-methyl-1-nitro-2- phenylethene (7B) of 0,05 mg/ml against A. fumigatus. For T. mentagrophytes the most active compound was 4'-methoxy-1-nitro-2-phenylethene (7C) with MIC of 0,22 mg/mL. Regarding the analysis of the combination of AB and nitrostyrenes in vitro by the checkerboard test showed antagonist compound 7A and 7C. The 7B compound was indifferent against the standard strain of A. Fumigatus.

Orientador: James Venturini / Resumo: Dermatofitoses são infecções fúngicas causadas por fungos dermatofíticos que geralmente afetam a camada córnea da pele, cabelos e unhas, mas sob certas condições podem apresentar envolvimento invasivo. A espécie Trichophyton rubrum é o dermatófito mais frequentemente isolado em espécimes clínicos. Além disso, pacientes com diabetes mellitus tipo II (DM-II) são mais suscetíveis a esta infecção fúngica e a relação dermatófito-hospedeiro é pouco compreendida. Contudo, o perfil pró-inflamatório observado em pacientes com hiperglicemia é uma condição complicadora nessa relação. Os receptores de reconhecimento padrão (PRRs) presentes nos fagócitos, como os receptores de manose (MR), dectina-1, toll-like (TLR) -2 e -4, reconhecem estruturas fúngicas e são responsáveis por desencadear mecanismos de ativação e regulação celular durante o processo inflamatório. Assim, o presente estudo tem como objetivo determinar o papel desses receptores na ativação de monócitos de pacientes com DM-II e dermatofitoses por T. rubrum. Exoantígenos de T. rubrum foram obtidos de pacientes com diabetes e indivíduos normoglicêmicos. Os PRRs foram bloqueados em monócitos e monócitos THP-1 de pacientes com DM-II e indivíduos normoglicêmicos desafiados com Exo_Tr_NG e Exo_Tr_DM. Posteriormente, o TNF e MIP-1α e IL-1β foram dosados. A expressão desses receptores foi avaliada por citometria de fluxo. Nenhuma diferença estatística foi observada no ensaio de inibição de monócitos de pacientes diabéticos e indivíd... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Dermatophytoses are fungal infections caused by dermatophytic fungi that usually affect the cornea layer of the skin, hair and nails, but under certain conditions may present invasive involvement. The species Trichophyton rubrum is the dermatophyte most often isolated in clinical specimens. In addition patients with type II diabetes mellitus (DM-II) are more susceptible to this fungal infection. The dermatophyte-host relationship is poorly understood; However, the pro-inflammatory profile observed in patients with hyperglycemia is a complicating condition in this relationship. The pattern recognition receptors (PRRs) present in phagocytes, such as the mannose (MR), dectin-1, toll-like (TLR) -2 and -4 receptor, recognize fungal structures and are responsible for triggering mechanisms of cellular activation and regulation during the inflammatory process, as well as influence on the polarization of the adaptive immune response. Thus, any interference in this process may impair the host to effectively and pathogenically eliminate pathogens. Thus, the present study aims to determine the role of these receptors in the activation of monocytes of patients with DM-II. Exoantigens of T. rubrum were obtained from patients with diabetes and normoglycemic individuals. PRRs were blocked in THP-1 monocytes and monocytes from DM-II patients and normoglycemic individuals challenged with Exo_Tr_NG and Exo_Tr_DM. Subsequently, TNF and MIP-1α and IL-1β were dosed. The expression of these recepto... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-11-24Bitstream added on 2014-06-13T20:00:40Z : No. of bitstreams: 1 baeza_lc_dr_arafcf.pdf: 2250737 bytes, checksum: 666c7d374ebfa4ff8507fbfbe951a4b8 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / As dermatofitoses são processos infecciosos de pele, pêlo e unhas muito comuns no mundo inteiro. Trichophyton rubrum é o dermatófito mais freqüentemente isolado em lesões superficiais de pele e unha. Estudos envolvendo este patógeno são cada vez mais importantes devido ao aparecimento de linhagens resistentes aos medicamentos antifúngicos disponíveis no mercado e ao comportamento invasivo deste agente em pacientes com o sistema imune comprometido. Estes fatos e poucos estudos levam à necessidade de se ampliar o conhecimento sobre a biologia deste agente. Visando colaborar nesse sentido, o presente trabalho teve dois objetivos centrais: 1) Realizar a tipagem molecular de isolados clínicos de T. rubrum com e sem relação epidemiológica por RAPD (Amplificação Randômica de DNA Polimórfico) com duas seqüências randômicas diferentes (denominadas de 1 e 6), bem como a análise dos elementos repetitivos (TRS-1 e TRS-2) do espaço não transcrito (NTS) do DNA ribossomal (DNAr) e 2) Identificar transcritos envolvidos na interação deste patógeno com fonte humana de queratina, através do RDA (Análise de Diferença Representacional). A aplicação do RDA permitiu pela primeira vez a identificação de alguns transcritos expressos, provavelmente relacionados à patogênese deste microrganismo. / Dermatophytosis is common infection process which occurs in skin, hair and nails and Trichophyton rubrum is the most frequently isolated dermatophyte. Studies on this pathogen are becoming increasingly important because of frequent reports on resistant strains to antifungal drugs commercially available and the invasive behavior of these agents in immunocompromised patients. These facts, associated with few studies with this agent, indicate the need to expand the information about the fungal biology. As a contribution to this goal, the present study had two central objectives: 1) To compare different methodologies for molecular typing of clinical isolates of T. rubrum epidemiologically related and unrelated for RAPD (Randomly Amplified Polymorphic DNA) with two different random primers (denominated of 1 and 6); as well as the analysis of the repetitive elements (TRS-1 and TRS-2) of the space non-transcribed (NTS) of the ribosomal DNA (DNAr) and 2) To identify transcripts involved in the interaction of this pathogen with human keratin by RDA (Representational Difference Analysis). The application of the RDA allowed for the first time the identification of expressed transcripts during the microorganism proliferation that could be related to the T. rubrum virulence.

Orientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Clarice Queico Fujimura Leite / Banca: Celia Maria de Almeida Soares / Banca: Paulo Inácio da Costa / Banca: Mário Hiroyuki Hirata / Resumo: As dermatofitoses são processos infecciosos de pele, pêlo e unhas muito comuns no mundo inteiro. Trichophyton rubrum é o dermatófito mais freqüentemente isolado em lesões superficiais de pele e unha. Estudos envolvendo este patógeno são cada vez mais importantes devido ao aparecimento de linhagens resistentes aos medicamentos antifúngicos disponíveis no mercado e ao comportamento invasivo deste agente em pacientes com o sistema imune comprometido. Estes fatos e poucos estudos levam à necessidade de se ampliar o conhecimento sobre a biologia deste agente. Visando colaborar nesse sentido, o presente trabalho teve dois objetivos centrais: 1) Realizar a tipagem molecular de isolados clínicos de T. rubrum com e sem relação epidemiológica por RAPD (Amplificação Randômica de DNA Polimórfico) com duas seqüências randômicas diferentes (denominadas de 1 e 6), bem como a análise dos elementos repetitivos (TRS-1 e TRS-2) do espaço não transcrito (NTS) do DNA ribossomal (DNAr) e 2) Identificar transcritos envolvidos na interação deste patógeno com fonte humana de queratina, através do RDA (Análise de Diferença Representacional). A aplicação do RDA permitiu pela primeira vez a identificação de alguns transcritos expressos, provavelmente relacionados à patogênese deste microrganismo. / Abstract: Dermatophytosis is common infection process which occurs in skin, hair and nails and Trichophyton rubrum is the most frequently isolated dermatophyte. Studies on this pathogen are becoming increasingly important because of frequent reports on resistant strains to antifungal drugs commercially available and the invasive behavior of these agents in immunocompromised patients. These facts, associated with few studies with this agent, indicate the need to expand the information about the fungal biology. As a contribution to this goal, the present study had two central objectives: 1) To compare different methodologies for molecular typing of clinical isolates of T. rubrum epidemiologically related and unrelated for RAPD (Randomly Amplified Polymorphic DNA) with two different random primers (denominated of 1 and 6); as well as the analysis of the repetitive elements (TRS-1 and TRS-2) of the space non-transcribed (NTS) of the ribosomal DNA (DNAr) and 2) To identify transcripts involved in the interaction of this pathogen with human keratin by RDA (Representational Difference Analysis). The application of the RDA allowed for the first time the identification of expressed transcripts during the microorganism proliferation that could be related to the T. rubrum virulence. / Doutor

Introdução: os dermatófitos afetam 40% da população mundial, e no sul do Brasil encontrase o maior número de portadores de HIV/habitante do país, sendo necessário, portanto, um controle epidemiológico desses fungos. Objetivo: determinar a prevalência dos dermatófitos na região metropolitana de Porto Alegre, Brasil, e comparar as espécies a partir dos dados dos pacientes. Métodos: foi realizado um estudo transversal com dados de pacientes atendidos em hospital de referência, no período de 1996-2011, sendo que as análises estatísticas utilizadas para cada objetivo específico do trabalho foram: regressão linear simples (determinar o comportamento da prevalência ao longo dos anos); Qui-quadrado (comparar a prevalência dos fungos entre o gênero masculino e feminino); Mann-Whitney U (comparar a idade dos pacientes entre os gêneros); Kruskal-Wallis (comparar a idade dos pacientes entre as espécies de dermatófitos); Qui-quadrado corrigido por Bonferroni (comparar a proporção étnica dos casos acometidos por cada espécie com a proporção amostral) e teste exato de Fisher/análise de resíduos (determinar as diferenças entre os locais anatômicos afetados pelos fungos). Em todas as análises, foi considerado =0,05. Resultados: foram obtidos 14.214 casos positivos no exame micológico cultural, sendo que 9.048 foram positivos para dermatófitos, o que torna este o maior estudo epidemiológico sobre dermatofitoses do país. Trichophyton rubrum ocorreu em 59,6% dos casos, seguido de T. interdigitale (34%), Microsporum canis (2,6%), Epidermophyton floccosum (1,5%), M. gypseum (1,3%), T. tonsurans (0,9%) e T. violaceum (1 caso). Para T. interdigitale, E. floccosum, T. rubrum e M. canis, os coeficientes angulares das regressões lineares foram +1,119, +0,211, -0,826 e -0,324% ao ano, respectivamente. No gênero masculino verificou-se maior prevalência de infecção (79,3% versus 54,9%), porém as mulheres acometidas apresentaram idade superior aos homens. T. interdigitale e M. canis foram mais frequentes em pacientes caucasianos, enquanto T. rubrum acometeu menos pacientes pardos do que o esperado. Tinea unguium foi a dermatofitose mais prevalente (48,5%), sendo as unhas dos pés mais acometidas do que as unhas das mãos (94,4% versus 4,1%), seguida de tinea pedis (33,1%), corporis (6,8%), cruris (5,9%), manuum (2,4%), capitis e facie (1,5% cada) e barbae (0,07%). T. rubrum foi o fungo predominante em todas as regiões do corpo, exceto no couro cabeludo, em que M. canis foi responsável por 75% dos casos. As maiores associações positivas para cada espécie foram: T. rubrum (região inguinal); T. interdigitale e E. floccosum (pele dos pés); M. canis e T. tonsurans (couro cabeludo); M. gypseum (face). Conclusão: este estudo corrobora os demais estudos da região quanto à distribuição dos dermatófitos, sendo T. rubrum a espécie mais comum. T. tonsurans apresenta baixíssima prevalência, diferentemente de outros estados brasileiros, onde esse fungo está entre os primeiros do ranking. Porém, este estudo mostrou diferença entre homens e mulheres quanto à idade e à prevalência na infecção por dermatófitos. Além disso, observamos uma diminuição na prevalência de T. rubrum e M. canis, acompanhada de um aumento de T. interdigilate e E. floccosum. Nesse sentido, é preciso haver mais estudos epidemiológicos na região para o devido acompanhamento e controle da evolução das dermatofitoses. / Background: dermatophytes affect 40% of the world population. In Brazil, largest number of patients with HIV/inhabitant occurs in the south, requiring epidemiological control of these fungi. Objective: to determine the prevalence of dermatophytes in the metropolitan area of Porto Alegre, Brazil, and to compare species based on patient data. Methods: we conducted a cross-sectional study with data of patients from a highly respected hospital 1996-2011. The statistical analyses performed for each specific objective were: Simple linear regression (to determine the prevalence of behavior over the years), Chi-square (to compare prevalence of fungi between the genders), Mann-Whitney U (to compare patients' age between the genders), Kruskal-Wallis (to compare the ages of pacients among species of dermatophytes); Chi-square corrected by Bonferroni (to compare ethnic proportion of cases affected by each species with the sample proportion), Fisher's Exact Test / Analysis waste (to determine differences between anatomical sites affected by fungi). In all analyses, = 0.05 was considered. Results: were obtained 14,214 cases mycological culture-positive, being 9,048 cases positive for dermatophytes, making this work the largest epidemiological study of dermatophytosis in the country. Trichophyton rubrum occurred in 59.6% of cases, followed by T. interdigitale (34%), Microsporum canis (2.6%), Epidermophyton floccosum (1.5%), M. gypseum (1.3%), T. tonsurans (0.9%) and T. violaceum (1 case). The slopes of the linear regressions, for T. interdigitale, E. floccosum, T. rubrum and M. canis, were +1.119, +0.211, -0.826 and -0.324% per year, respectively. Males presented higher prevalence of infection (79.3% versus 54.9%), but women were older than men. T. interdigitale and M. canis were most prevalent in Caucasians and T. rubrum was less prevalent in brown people than expected. Tinea unguium was more prevalent of the dermatophytosis (48.5%) being toenails more affected than fingernails (94.4% vs. 4.1%), followed by tinea pedis (33.1%), corporis (6.8%), cruris (5.9%) manuum (2.4%), facie and capitis (1.5% each one) and barbae (0.07%). T. rubrum was the predominant fungus in all regions of the body except in the scalp where M. canis was the responsible for 75% of the cases. The species with the highest positive associations were: T. rubrum (groin); T. interdigitale and E. floccosum (skin of the feet); M. canis and T. tonsurans (scalp); M. gypseum (face). Conclusion: this study corroborates other similar studies in the region related to the distribution of dermatophytes, being T. rubrum the most common species followed by T. interdigitale, and being T. tonsurans the one that presents a very low prevalence, unlike other States. However, this study showed gender differences in relation to age and prevalence of the infection by dermatophytes. Moreover, we observed a decrease in the prevalence of T. rubrum and M. canis and an increase of T. interdigilate and E. floccosum. In this sense, the continuation of epidemiological studies in the region is necessary for monitoring and controlling the evolution of dermatophytosis.

Introdução: os dermatófitos afetam 40% da população mundial, e no sul do Brasil encontrase o maior número de portadores de HIV/habitante do país, sendo necessário, portanto, um controle epidemiológico desses fungos. Objetivo: determinar a prevalência dos dermatófitos na região metropolitana de Porto Alegre, Brasil, e comparar as espécies a partir dos dados dos pacientes. Métodos: foi realizado um estudo transversal com dados de pacientes atendidos em hospital de referência, no período de 1996-2011, sendo que as análises estatísticas utilizadas para cada objetivo específico do trabalho foram: regressão linear simples (determinar o comportamento da prevalência ao longo dos anos); Qui-quadrado (comparar a prevalência dos fungos entre o gênero masculino e feminino); Mann-Whitney U (comparar a idade dos pacientes entre os gêneros); Kruskal-Wallis (comparar a idade dos pacientes entre as espécies de dermatófitos); Qui-quadrado corrigido por Bonferroni (comparar a proporção étnica dos casos acometidos por cada espécie com a proporção amostral) e teste exato de Fisher/análise de resíduos (determinar as diferenças entre os locais anatômicos afetados pelos fungos). Em todas as análises, foi considerado =0,05. Resultados: foram obtidos 14.214 casos positivos no exame micológico cultural, sendo que 9.048 foram positivos para dermatófitos, o que torna este o maior estudo epidemiológico sobre dermatofitoses do país. Trichophyton rubrum ocorreu em 59,6% dos casos, seguido de T. interdigitale (34%), Microsporum canis (2,6%), Epidermophyton floccosum (1,5%), M. gypseum (1,3%), T. tonsurans (0,9%) e T. violaceum (1 caso). Para T. interdigitale, E. floccosum, T. rubrum e M. canis, os coeficientes angulares das regressões lineares foram +1,119, +0,211, -0,826 e -0,324% ao ano, respectivamente. No gênero masculino verificou-se maior prevalência de infecção (79,3% versus 54,9%), porém as mulheres acometidas apresentaram idade superior aos homens. T. interdigitale e M. canis foram mais frequentes em pacientes caucasianos, enquanto T. rubrum acometeu menos pacientes pardos do que o esperado. Tinea unguium foi a dermatofitose mais prevalente (48,5%), sendo as unhas dos pés mais acometidas do que as unhas das mãos (94,4% versus 4,1%), seguida de tinea pedis (33,1%), corporis (6,8%), cruris (5,9%), manuum (2,4%), capitis e facie (1,5% cada) e barbae (0,07%). T. rubrum foi o fungo predominante em todas as regiões do corpo, exceto no couro cabeludo, em que M. canis foi responsável por 75% dos casos. As maiores associações positivas para cada espécie foram: T. rubrum (região inguinal); T. interdigitale e E. floccosum (pele dos pés); M. canis e T. tonsurans (couro cabeludo); M. gypseum (face). Conclusão: este estudo corrobora os demais estudos da região quanto à distribuição dos dermatófitos, sendo T. rubrum a espécie mais comum. T. tonsurans apresenta baixíssima prevalência, diferentemente de outros estados brasileiros, onde esse fungo está entre os primeiros do ranking. Porém, este estudo mostrou diferença entre homens e mulheres quanto à idade e à prevalência na infecção por dermatófitos. Além disso, observamos uma diminuição na prevalência de T. rubrum e M. canis, acompanhada de um aumento de T. interdigilate e E. floccosum. Nesse sentido, é preciso haver mais estudos epidemiológicos na região para o devido acompanhamento e controle da evolução das dermatofitoses. / Background: dermatophytes affect 40% of the world population. In Brazil, largest number of patients with HIV/inhabitant occurs in the south, requiring epidemiological control of these fungi. Objective: to determine the prevalence of dermatophytes in the metropolitan area of Porto Alegre, Brazil, and to compare species based on patient data. Methods: we conducted a cross-sectional study with data of patients from a highly respected hospital 1996-2011. The statistical analyses performed for each specific objective were: Simple linear regression (to determine the prevalence of behavior over the years), Chi-square (to compare prevalence of fungi between the genders), Mann-Whitney U (to compare patients' age between the genders), Kruskal-Wallis (to compare the ages of pacients among species of dermatophytes); Chi-square corrected by Bonferroni (to compare ethnic proportion of cases affected by each species with the sample proportion), Fisher's Exact Test / Analysis waste (to determine differences between anatomical sites affected by fungi). In all analyses, = 0.05 was considered. Results: were obtained 14,214 cases mycological culture-positive, being 9,048 cases positive for dermatophytes, making this work the largest epidemiological study of dermatophytosis in the country. Trichophyton rubrum occurred in 59.6% of cases, followed by T. interdigitale (34%), Microsporum canis (2.6%), Epidermophyton floccosum (1.5%), M. gypseum (1.3%), T. tonsurans (0.9%) and T. violaceum (1 case). The slopes of the linear regressions, for T. interdigitale, E. floccosum, T. rubrum and M. canis, were +1.119, +0.211, -0.826 and -0.324% per year, respectively. Males presented higher prevalence of infection (79.3% versus 54.9%), but women were older than men. T. interdigitale and M. canis were most prevalent in Caucasians and T. rubrum was less prevalent in brown people than expected. Tinea unguium was more prevalent of the dermatophytosis (48.5%) being toenails more affected than fingernails (94.4% vs. 4.1%), followed by tinea pedis (33.1%), corporis (6.8%), cruris (5.9%) manuum (2.4%), facie and capitis (1.5% each one) and barbae (0.07%). T. rubrum was the predominant fungus in all regions of the body except in the scalp where M. canis was the responsible for 75% of the cases. The species with the highest positive associations were: T. rubrum (groin); T. interdigitale and E. floccosum (skin of the feet); M. canis and T. tonsurans (scalp); M. gypseum (face). Conclusion: this study corroborates other similar studies in the region related to the distribution of dermatophytes, being T. rubrum the most common species followed by T. interdigitale, and being T. tonsurans the one that presents a very low prevalence, unlike other States. However, this study showed gender differences in relation to age and prevalence of the infection by dermatophytes. Moreover, we observed a decrease in the prevalence of T. rubrum and M. canis and an increase of T. interdigilate and E. floccosum. In this sense, the continuation of epidemiological studies in the region is necessary for monitoring and controlling the evolution of dermatophytosis.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-06-18T14:44:33Z No. of bitstreams: 1 Carlos Adriano de Santana Leal.pdf: 1268535 bytes, checksum: 8c99ca6fceca2937628813239c097e09 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-18T14:44:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carlos Adriano de Santana Leal.pdf: 1268535 bytes, checksum: 8c99ca6fceca2937628813239c097e09 (MD5) Previous issue date: 2017-02-16 / The aim of this study was to standardize a multiplex PCR (mPCR) reaction to detect Microsporum canis, Microsporum gypseum and the Trichophyton mentagrophytes complex in fur and/or crusts samples of dogs and cats. 250 samples were analyzed by direct examination and culture; The DNA from these samples was extracted using the DNeasy Blood & Tissue extraction kit (QIAGEN®, Hilden-Germany). For the PCR, primers were designed for the M. canis, M. gypseum and T. mentagrophytes species and the DNA extracted from colonies of M. canis (URM 6273), M. gypseum (URM 6921) and T. mentagrophytes (URM 6211) from the Collection of Cultures of the Micoteca of the Mycology Department of the Biological Sciences Center of the Federal University of Pernambuco, were utilized as positive controls. A PCR for the detection of M. canis and an mPCR for the detection of M. canis, M. gypseum and the T. mentagrophytes complex was standardized. The protocols standardized in this study, from drawn primers, showed good sensitivity and high specificity in the detection of M. canis, M. gypseum and T. mentagrophytes directly from samples of fur and/or crusts of dogs and cats, making possible a faster and specificity in the results, can be used in the laboratory routine as methods capable of speeding the detection of the agents in question. / Objetivou-se neste estudo padronizar uma reação do tipo multiplex PCR (mPCR) para detectar Microsporum canis, Microsporum gypseum e o complexo Trichophyton mentagrophytes em amostras de pelos e/ou crostas de cães e gatos. Foram analisadas 250 amostras por meio de exame direto e cultura; o DNA destas mesmas amostras foi extraído utilizando-se o kit de extração DNeasy Blood & Tissue (QIAGEN®, Hilden - Germany). Para a PCR foram desenhados primers para as espécies M. canis, M. gypseum e T. mentagrophytes e como controle positivo da reação utilizou-se o DNA extraído de colônias de M. canis (URM 6273), M. gypseum (URM 6921) e T. mentagrophytes (URM 6211), provenientes da Coleção de Culturas da Micoteca do Departamento de Micologia do Centro de Ciências Biológicas da Universidade Federal de Pernambuco. Padronizou-se uma PCR para detecção de M. canis e uma mPCR para detecção de M. canis, M. gypseum e o complexo T. mentagrophytes. Os protocolos padronizados neste estudo, a partir de primers desenhados, apresentaram boa sensibilidade e alta especificidade na detecção de M. canis, M. gypseum e T. mentagrophytes diretamente de amostras de pelos e/ou crostas de cães e gatos, viabilizando um diagnóstico mais rápido e específico, podendo ser empregados na rotina laboratorial como métodos para agilizar a detecção dos agentes estudados.

Orientador: Cristiane Angélica Ottoni / Resumo: A utilização de nanopartículas de prata (AgNP) biológicas nos dias atuais é uma alternativa promissora frente as obtidas por via sintética (VS), uma vez que, não geram resíduos em seu processo de síntese e possuem superfície revestida por proteínas que viabilizam sua incorporação em diversos compostos comerciais, sendo os fármacos os de maior destaque. O efeito do descarte de AgNP sintéticas no meio ambiente é atualmente fonte de investigação de diversos grupos de pesquisa, entretanto, são restritas as informações associadas as AgNP biológicas. Diante deste contexto, o presente estudo utilizou a AgNP IBCLP20 biossintetizada pelo fungo Aspergillus niger para avaliar a sua ação antimicrobiana e efeito tóxico em ambiente aquático dulcícula utilizando organismos pertencentes a diferentes níveis tróficos. Nos ensaios antimicrobianos a AgNP IBCLP20 apresentou excelente ação antibacteriana em uma faixa de concentração de 5 a 100 µg/mL e ação antifúngica na faixa de concentração de 20 a 100 µg/mL. A densidade celular da microalga Chrorella vulgaris, quando exposta a AgNP IBCLP20 e ao sal precursor AgNO3, na maior concentração analisada (100 uM/mL) e após 96 horas de incubação, apresentou uma taxa de redução de 34,4% e 85,71%, respectivamente. Nas mesmas condições supracitadas, só foi detectada viabilidade celular da microalga quando exposta a AgNP biológica (65,38%). A letalidade média em D. silimis causada pelas AgNP IBCLP20 foi estimada a uma concentração de 4,06 μg/L (2,29 -6,42).... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The use of biological silver nanoparticles (AgNP) today is a promising alternative compared to those obtained synthetically (VS), since they do not generate residues in their synthesis process and have a surface coated with proteins that enable their incorporation in several commercial compounds, with drugs being the most prominent. The effect of discarding synthetic AgNP in the environment is currently a source of investigation for several research groups, however, information associated with biological AgNP is restricted. In this context, the present study used the AgNP IBCLP20 biosynthesized by the fungus Aspergillus niger to evaluate its antimicrobial action and toxic effect in aquatic dulcicle environment using organisms belonging to different trophic levels. In antimicrobial tests, AgNP IBCLP20 showed excellent antibacterial action in a concentration range of 5 to 100 µg / mL and antifungal action in the concentration range of 20 to 100 µg / mL. The cell density of the microalgae Chrorella vulgaris, when exposed to AgNP IBCLP20 and the precursor salt AgNO3, in the highest concentration analyzed (100 uM / mL) and after 96 hours of incubation, showed a reduction rate of 34.4% and 85.71 %, respectively. Under the same conditions mentioned above, cell viability of the microalgae was only detected when exposed to biological AgNP (65.38%). The average lethality in D. silimis caused by AgNP IBCLP20 was estimated at a concentration of 4.06μg/L (2.29 -6.42). , The physiological ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

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Os fungos dermatófitos são caracterizados pela capacidade de invadir os tecidos queratinizados, usando queratina como principal fonte de nutrientes. Ao invadirem os tecidos hospedeiros eles causam um tipo de micose chamada de dermatofitose. Dentre os dermatófitos, a espécie Trichophyton rubrum é o causador mais comum de tinea pedis, tinea unguium, tinea cruris e tinea corporis, sendo considerado um fungo antropofílico e cosmopolita. Entretanto, o conhecimento da interação deste patógeno com o hospedeiro é escasso. Devido à importância clínica de T. rubrum, este trabalho analisou a composição de aminoácidos de proteínas queratinas oriundas de Homo sapiens e Bos taurus e a expressão de genes envolvidos na degradação de queratina, metabolismo e controle do ciclo celular. O perfil de expressão dos genes sub3 e sub5 que codificam para queratinases, mad2 e mad2B que codificam proteínas envolvidas no controle da mitose, e os genes idh1 (subunidade regulatória da isocitrato desidrogenase - NAD+), idh2 (subunidade catalítica da isocitrato desidrogenase - NAD+), idhp (isocitrato desidrogenase - NADP+), icl (isocitrato liase) e meicl (metilisocitrato liase), que codificam proteínas envolvidas em vias metabólicas, foi analisado após o cultivo de T. rubrum em meios contendo glicose, glicina, glicose com glicina, ou queratina. A atividade queratinolítica foi avaliada após o cultivo de T. rubrum nesses meios e também em unha humana. Além disto, o efeito do antifúngico terbinafina na atividade queratinolítica e na expressão dos genes sub3 e sub5 foi analisado em meios contendo unha humana ou queratina. Após o cultivo de T. rubrum a atividade das enzimas IDH e IDHP componentes do ciclo de Krebs, ICL do ciclo do glioxilato e MeICL do ciclo do metilcitrato também foram avaliadas. Essas análises revelaram que a variação da fonte nutricional, do pH do meio de cultivo, e a presença/ausência do fator de transcrição PacC, proporcionam às diferentes linhagens de T. rubrum utilizadas neste trabalho (CBS, H6 e pacC-1) uma modulação diferenciada do acúmulo de transcritos dos genes, bem como da atividade queratinolítica e atividade das enzimas IDH, IDHP, ICL e MeICL. Outro fenômeno verificado foi que o antifúngico terbinafina afeta o acúmulo de transcritos dos genes sub3 e sub5, e a atividade queratinolítica de acordo com a fonte nutricional e a linhagem de T. rubrum. Além disso, em condições de estresse por pH alcalino a enzima IDHP é preferencialmente requisitada para manutenção do ciclo de Krebs, sendo que a linhagem mutante pacC-1 requisita em maior proporção as vias anapleróticas do que a linhagem selvagem H6. É importante enfatizar que a enzima ICL de T. rubrum possui atividade enzimática regulada por fosforilação, sendo sua atividade reduzida por esta modificação pós traducional. A identificação deste mecanismo de regulação da ICL por fosforilação e as análises dos transcritos de icl sugerem que em T. rubrum a regulação do fluxo de carbono no ciclo do glioxilato ocorra tanto em nível transcricional como pós-traducional. Os resultados obtidos possibilitaram ainda propor o primeiro modelo para T. rubrum que relaciona vias metabólicas, amparado por dados experimentais obtidos após o cultivo deste dermatófito em queratina. / Dermatophytes are fungi characterized by the ability to invade keratinized tissues using keratin as a major source of nutrients. When they invade host tissues they cause a type of ringworm called dermatophytosis. Among the dermatophytes, the species Trichophyton rubrum is the most common cause of tinea pedis, tinea unguium, tinea cruris, and tinea corporis, being considered an anthropophilic and cosmopolitan fungus. However, the knowledge of the interaction of this pathogen with the host is scarce. Due to the clinical importance of T. rubrum, this study analyzed the amino acid composition of keratin proteins derived from Homo sapiens and Bos taurus, and the expression of genes involved in keratin degradation, metabolism, and cell cycle control. The expression profile of the sub3 and sub5 genes, encoding keratinases, mad2 and mad2B, encoding proteins involved in the control of mitosis, and the genes idh1 (regulatory subunit of NAD+ -isocitrate dehydrogenase), idh2 (catalytic subunit of NAD+ -isocitrate dehydrogenase), idhp (NADP+ - isocitrate dehydrogenase), icl (isocitrate lyase), and meicl (metilisocitrate lyase), which encode proteins involved in metabolic pathways, was analyzed after cultivation of T. rubrum in media containing glucose, glycine, glucose and glycine, or keratin. The keratinolytic activity was evaluated after cultivation of T. rubrum in these media and also in human nail. Furthermore, the effect of the antifungal agent terbinafine in keratinase activity and sub3 and sub5 gene expression was analyzed in media containing human nail or keratin. After culturing T. rubrum the enzyme activity of IDH and IDHP, components of the Krebs cycle, ICL of the glyoxylate cycle, and MeICL of the metilcitrato cycle were also evaluated. These analyses revealed that the variation in the nutritional source, the pH of the medium, and the presence/absence of the transcription factor PacC, provide to the different T. rubrum strains used in this study (CBS, H6 and pacC-1) differential modulation of transcripts accumulation of the genes, as well as keratinolytic activity and enzymatic activities of IDH, IDHP, ICL and MeICL. Another phenomenon observed was that the antifungal terbinafine affects the accumulation of transcripts of the genes sub3, sub5, and the keratinolytic activity according to nutritional source and T. rubrum strain. In addition, in stress conditions by alkaline pH the IDHP enzyme is preferably required for maintenance of the Krebs cycle, and the mutant pacC-1 requests the anaplerotic pathways in greater proportion than the wild type strain H6. It is important to emphasize that T. rubrum ICL enzyme has its enzymatic activity regulated by phosphorylation, being reduced by this post translational modification. The identification of this regulation mechanism by phosphorylation of ICL and icl transcripts analysis suggest that in T. rubrum the carbon flux regulation in the glyoxylate cycle occurs at both transcriptional and post-translational levels. The results also made possible the proposition of the first model for T. rubrum correlating metabolic pathways, supported by experimental data obtained after cultivation of this dermatophyte in keratin.