Neste trabalho o metilpluviatolido (1), o matairesinol (7), a hinoquinina (11), a cubebina (17) e seus respectivos derivados, providos de algumas modificações estruturais foram submetidos a testes in vitro para a determinação da atividade citotoxica e tripanocida. As substâncias não apresentaram atividade citotoxica significativa para a linhagem celular utilizada (LLC-MK2). Nos ensaios tripanocida in vitro o dimetoximorelensin (8) e 11 foram as substâncias que determinaram as maiores atividades tripanocida sobre as varias formas e cepas de T. cruzi utilizadas e juntamente com a cubebina foram submetidas os ensaios in vivo. As substâncias determinaram alterações significativas no curso da infecção chagásica experimental. No entanto apenas a 8 apresentou efeito semelhante ao do benzonidazol para ambas as cepas, sendo a cepa BOL em relação a cepa Y mais resistente as substâncias 11 e 17. Algumas rotas metabólicas foram avaliadas como mecanismo de ação das substâncias. As substâncias não apresentaram atividade inibitória sobre a enzima gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH) de Trypanosoma cruzi, não induziram a produção de H2O2 e outros peróxidos, bem como não induziram a produção de óxido nítrico, tendo algumas inibindo esta produção. No entanto, apresentaram efeito inibitório sobre a respiração celular e efeito inibitório sobre a enzima ferro superóxido dismutase (Fe-SOD) de Trypanosoma cruzi. Adicionalmente foi demonstrado que em sistema livre de células as substâncias não apresentam atividade scavenger de radicais livres e que o tratamento com a substancia 8, avaliado por microscopia eletrônica, provoca alterações nucleares nas formas epimastigotas do parasita, sugerindo que a atividade tripanocida desta substancia envolva a inibição da síntese de DNA e RNA. Dessa forma, podemos concluir que a atividade tripanocida das varias lignano-lactonas avaliadas é promissora e que a produção de H2O2 e outros peróxidos, atividade inibitória sobre a enzima gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH) de Trypanosoma cruzi, bem como a capacidade de indução de óxido nítrico pelos derivados bioativos são mecanismos que parecem não estar envolvidos na atividade tripanocida das substâncias. Além disso, que o efeito inibitório sobre a respiração celular parece contribuir para a atividade tripanocida e pode estar envolvido no mecanismo de citotoxicidade destas substâncias. Ainda, que o efeito inibitório sobre a enzima ferro superóxido dismutase (Fe- SOD) de Trypanosoma cruzi parece ser um dos principais mecanismos envolvidos na atividade tripanocida das substâncias. / In this work the compounds methylpluviatolide (1), matairesinol (7), hinokinin (11), cubebin (17) and its derivatives bearing some structural modifications were submitted to in vitro trypanocidal and citotoxic assays. The compounds do not show significant citotoxicity for the LLC-MK2 cells used. In the in vitro trypanocidal assays, the compounds more active against the different strains and forms of T. cruzi were the dimethoxymorelensin (8) and hinokinin (11). These compounds and cubebin (17) were submitted to in vivo trypanocidal assay. The compounds display significant modifications on the experimental chagasic infection. However, for both strains, Y and BOL, only the 8 displayed similar effect of the benznidazole. The BOL strain was more resistant than Y strain to treatment with 11 and 17. Some metabolic routes were evaluated as compounds action mechanism. The compounds do not showed inhibitory activity under enzyme glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) of Trypanosoma cruzi, they do not induced the production of H2O2 and others peroxides and also do not induced the nitric oxide production, instead some compounds decrease this production. On the other hand, they showed inhibitory effect under the cellular respiration and the enzyme iron superoxide dismutase (Fe-SOD) of Trypanosoma cruzi. In addition, it was demonstrated that on system cells free, the compounds do not showed free radicals scavenger activity and that the treatment with the compound 8, evaluated in electron microscopy, display nuclear alterations on epimastigotes forms, suggesting an inhibitory effect on T. cruzi DNA and RNA biosynthesis. In conclusion, the compounds trypanocidal activity is promising and the production of H2O2 and others peroxides, the activity under enzyme glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) of Trypanosoma cruzi, and the induction of nitric oxide production seem do not be involved in the trypanocidal and citotoxity activity of these group of compounds. The inhibitory effect under cellular respiration seems to be contributing for trypanocidal activity and may be involved on its citotoxic mechanism. Moreover, the inhibitory effect under the enzyme iron superoxide dismutase (Fe-SOD) of Trypanosoma cruzi seems to be the main mechanism involved on trypanocidal activity of these compounds.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A doença de Chagas é endêmica na América Latina sendo considerada uma doença negligenciada com grande impacto socioeconômico. A infecção é causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi que é transmitido pela forma vetorial, entre outros mecanismos. O tratamento consiste basicamente no uso de dois fármacos, o benznidazol e o Nifurtimox que apresentam uma série de efeitos colaterais e atuam muito pouco nas formas amastigotas intracelulares o que faz com que o tratamento atual seja restrito e insatisfatório.Várias atividades farmacológicas foram atribuídas ao lapachol e a pterocarpanos, tais como atividade antitumoral e antiparasitária. Devido a esse potencial foi sintetizado uma molécula híbrida, a pterocarpanoquinona LQB-118, e algumas moléculas derivadas. A LQB-118 mostrou anteriormente atividade antitumoral e anti-Leishmania. O objetivo do presente trabalho foi investigar a atividade in vitro da LQB-118 e suas moléculas derivadas sobre o Trypanosoma cruzi clone Dm28c. Para avaliação inicial do efeito anti-parasitário das moléculas, amastigotas intracelulares, tripomastigotas metacíclicos e epimastigotas foram incubados com 20 M das LQBs 118, 168, 187, 182 e 236. A LQB-118 demonstrou atividade antiparasitária nas três formas evolutivas (90% na forma amastigota, 44% na forma tripomastigota e 70% na forma epimastigota) do parasito, enquanto as moléculas derivadas não mostraram atividade significativa. Sendo assim os estudos foram continuados com a molécula LQB-118. A ação da LQB-118 sobre as amastigotas intracelulares foi dose dependente, com redução do índice de infecção em 81% e 88% nas concentrações de 20 e 30 M respectivamente. Já sobre tripomastigotas, a LQB-118 foi menos ativa reduzindo a mobilidade dessas formas em até 45% a 30 M. Sobre a forma epimastigota a ação foi dose-dependente chegando a inibir 96% o crescimento dos parasitos a 20 M, com alterações da morfologia tais como arrendondamento do corpo celular e perda do flagelo. A dose capaz de inibir 50% foi de 4,2 M para amastigota intracelular e 38,1 M para tripomastigotas. Para macrófagos, a LC50 ficou em 40 M, uma concentração quase dez vezes maior que a IC50 para amastigotas. A capacidade das formas amastigotas intracelulares se diferenciarem em tripomatigotas e lisar os macrófagos foi avaliada após o tratamento com a LQB-118 por 72h. Observou-se um atraso do ciclo intracelular do parasito de modo dose-dependente, onde na concentração de 30 M o surgimento de tripomastigota foi no 9 dia enquanto nos controles foi no 5 dia de cultura. Para delinear o mecanismo de ação, foi avaliado o efeito direto sobre o parasito como a indução da fragmentação de DNA. A análise de indução da fragmentação do DNA feita pela marcação pelo TUNEL mostrou que o tratamento com a LQB-118 induziu seletivamente a fragmentação do núcleo das amastigotas enquanto o núcleo dos macrófagos se mantiveram íntegros. Macrófagos peritoneais pré-tratados com LQB-118 por 24 horas foram capazes de reduzir o número de amastigotas após 72h de cultivo na ausência da molécula, mas sem alteração na produção de óxido nítrico. Esses resultados mostram que a LQB-118 é ativa contra o T. cruzi, principalmente sobre a forma amastigota intracelular, que é a forma presente na fase crônica da infecção. O mecanismo de ação sugere que a LQB-118 é capaz de ser seletivamente tóxica para o parasito e também ativar os mecanismos microbicidas dos macrófagos de modo independente da produção de óxido nítrico. / Chagas disease is endemic in Latin America being considered a neglected disease with high socioeconomic impact. The infection is caused by the protozoan Trypanosoma cruzi, which is transmitted by the vector form, among other mechanisms. The treatment basically consists of using two drugs, benznidazole and nifurtimox which presenting several side effects and acts very little on intracellular amastigotes what makes the current treatment is restricted and unsatisfactory. Several pharmacological activities have been attributed to lapachol and pterocarpans, such as antitumor and antiparasitic activity. Because of this therapeutic potential an hybrid molecule was synthesized, a pterocarpanquinone LQB-118, and some derived molecules. The LQB-118 previously showed antitumor and anti-Leishmania activity. The objective of this study was to investigate the in vitro activity of LQB-118 and its derived molecules on Trypanosoma cruzi Dm28c clone. For initial evaluation of the antiparasitic effect of the molecules, intracellular amastigotes, epimastigotes and metacyclic trypomastigotes were incubated with 20 M of LQBs 118, 168, 187, 182 and 236. The LQB-118 showed antiparasitic activity on the three evolutionary forms (90% on amastigote form, 44% on trypomastigote form and 70% on epimastigote form) of the parasite, while derived molecules showed no significant activity. Thus, studies were continued with the molecule LQB-118. The action of LQB-118 on intracellular amastigotes was dose dependent, with reduction of infection index into 81 and 88% at concentrations of 20 and 30 M respectively. In trypomastigotes, LQB-118 was less active reducing the mobility of these forms up to 45% at 30 M. In epimastigote form, the action was dose dependent reaching 96% to inhibit the growth of parasites at 20 M, with morphological changes such as rounding of the cell body and loss of the flagellum. The dose able to inhibit 50% was 4,2 M to intracellular amastigote and 38,1 M to trypomastigote. To macrophages, LC50 was 40 M, a concentration about ten times higher than the IC50 to amastigotes.The ability of intracellular amastigotes differentiate on trypomastigotes and break macrophages was evaluated after the treatment with LQB-118 for 72 hours. There was a delay on intracellular cycle of the parasite in a dose dependent way, where in the concentration of 30 M the trypomastigote emergence was on the 9th day while in controls was on the 5th day of culture. To delineate the mechanism of action, it was evaluated the direct effect on the parasite such as the induction of DNA fragmentation. Analysis of the induction of DNA fragmentation by TUNEL labeling showed that the treatment with LQB-118 induced selectively fragmentation of amastigotess nuclei while macrophagess nuclei remained without fragmentation. Peritoneal macrophages pretreated with LQB-118 for 24 hours were able to reduce the number of amastigotes after 72 hours of culture in absence of the molecule, but without alteration in nitric oxide production. These results show that LQB-118 is active against T. cruzi, mainly on intracellular amastigote form, which is present in the chronic phase of infection. The mechanism of action suggests that LQB-118 can be selectively toxic to parasite and also activate the microbicidal mechanisms of macrophages independently of nitric oxide production.

O zinco é um elemento de grande importância para o desenvolvimento intra-uterino e é usado durante a gravidez para auxiliar o crescimento fetal. A arginina, um aminoácido dibásico, além de ser necessário para o crescimento, apresenta importantes funções biológicas e fisiológicas. Alguns autores mostraram que a ingestão de arginina melhora a resposta imune. Assim, o objetivo desse trabalho foi investigar o papel da suplementação alimentar de L-arginina e zinco na infecção chagásica experimental de ratas prenhes. Para tal, foram utilizadas ratas Wistar infectadas pela cepa Y de Trypanosoma cruzi, no 3º dia da prenhez e tratadas com L-arginina ou sulfato de zinco. Alguns parâmetros foram avaliados como a dosagem de óxido nítrico, citocinas (IFN-?, TNF-?, IL-2, TGF-?, IL-4, IL-10), corticosterona, número de macrófagos, linfoproliferação de esplenócitos, parasitemia e análise histopatológica do coração, placentas e fetos. A administração de zinco e arginina causou redução do parasitismo sanguíneo e cardíaco, ocasionou um aumento significativo nas concentrações de NO e na proliferação de esplenócitos. Além disso, contribuiu para o melhor desenvolvimento fetal. Dessa forma, podemos sugerir que a suplementação com estes elementos pode ser utilizada como uma substância imunomoduladora alternativa e, juntamente com a terapia anti-parasitária específica, minimizar as agressões ao hospedeiro, evitando a administração por longos períodos da droga tripanocida que sabidamente produz sérios efeitos colaterais e teratogênicos. / Zinc is an important element for the intrauterine development and during pregnancy is used to assist fetal growth. Arginine, a dibasic amino acid, besides its importance in the growth process, has important biological and physiological functions. Some authors have reported that daily intake of arginine improves the immune response. The objective of this study was to investigate the role of dietary supplementation of L-arginine and zinc in experimental Chagas disease in pregnant rats. To this end, we used Wistar rats infected with the Y strain of Trypanosoma cruzi, on the 3rd day of pregnancy and treated with L-arginine or zinc sulfate. Some parameters were evaluated such as nitric oxide, cytokines (IFN-?, TNF-?, IL-2, TGF-?, IL-4, IL-10), corticosterone, number of macrophages, lymphocyte proliferation of splenocytes, parasitemia and histopathology of the heart, placenta and fetus. The administration of arginine and zinc caused a reduction in blood and heart parasitism, with a significant increase in the concentrations of NO and proliferation of splenocytes. Moreover, it contributed to a better fetal development. Therefore, we suggest that supplementation with these elements may be used as an alternative immunomodulating substance and together with the specific anti-parasitic therapy minimize the aggressions against the host, avoiding the administration of trypanocidal drugs over long periods that is known to produce serious side effects and teratogenic effects.

Trypanosoma cruzi expressa um grupo de glicoproteínas de superfície, as Tc85, que pertencem à superfamília gênica das gp85/trans-sialidases. Neste trabalho mostramos um modelo de estrutura para um membro desta família, a proteína Tc85-11, a qual tem propriedades adesivas para laminina e para a superfície da célula. Esta estrutura consiste em um domínio N-terminal com pregamento ß-propeller e um domínio C-terminal ß-sandwich conectados por uma um α-hélice longa. A proteína recombinante que corresponde ao domínio amino terminal (Tc85-N), mas não ao domínio carboxi-terminal (Tc85-C), liga-se a laminina de uma maneira específica. Cinco peptídeos sintéticos, contidos no domínio N-terminal, aderem na superfície das células LLC-MK2 e inibem a infecção pelo T. cruzi. Dois destes peptídeos também podem inibir a interação Tc85-N - laminina de modo específico e poderiam representar o sítio de ligação a laminina. Estes resultados reforçam a hipótese que a Tc85-11 é uma proteína multi-adesiva, já que o domínio C-terminal, liga-se a citoqueratina-18. Por outro lado, o tratamento de células em cultura com Tc85-N aumenta a expressão de laminina, efeito já observado in vivo e quando culturas de células foram incubadas com antígenos liberados pelo parasita. A Tc85-11 pode ter, por tanto, um papel relevante na interação do parasita com o hospedeiro modulando ainda a expressão de componentes da matriz extracelular. / Trypanosoma cruzi expresses the Tc85 proteins, a set of surface glycoproteins belonging to the gp85/trans-sialidase supergene family. In this report we show a structure model for Tc85-11 a member of this family, which has adhesive properties to laminin and to the host cell surfaces. That structure consists in an N-terminus β-propeller and a C-terminus β-sandwich domains connected by a long α-helix. The recombinant protein corresponding to the N-domain (Tc85-N), but not to the C-domain (Tc85-C), was able to bind laminin in a specific manner. Five synthetic 20-mer peptides from the N-domain adhere onto LLC-MK2 cell surface and inhibit the T. cruzi infection. Two of these peptides can also inhibit specifically Tc85-N - laminin interaction and may represent the laminin-binding site. These results reinforce the hypothesis that the Tc85-11 protein is a multi-adhesive protein, since it also binds to citokeratin-18 by C-terminus domain. On the other hand, the treatment of host cells with Tc85-N increases the expression of laminin in the cell culture, as was previously reported for treatment with T. cruzi released antigens. In summary, Tc85-11 protein may play an important role in the host-parasite interaction, including the modulation of ECM expression.

O Trypanosoma cruzi libera para o meio, vesículas contendo material de sua superfície e aparentemente estas vesículas seriam uma maneira de ativar e preparar a célula hospedeira para a invasão, além de induzir um aumento na expressão de alguns componentes da matriz extracelular. Neste trabalho demonstramos que essas vesículas aumentam a expressão de fibronectina na matriz, sendo este aumento dose-dependente e linear ao longo do tempo. Porém, para laminina não conseguimos observar o mesmo comportamento. Nossos resultados também mostram que os constituintes lipídicos das vesículas podem ser os responsáveis pelo aumento da expressão de fibronectina em cultura de células epiteliais. Os dois grandes grupos de glicoproteínas encontradas na superfície do parasita e nas vesículas, mucinas e Tc85 não parecem estar envolvidos no processo. As culturas celulares tratadas com os lipídeos extraídos das vesículas apresentaram um aumento de fibronectina também dose-dependente, porém, com uma resposta linear ao longo do tempo e uma expressão máxima atingida em tempos menores / Trypanosoma cruzi releases to the environment plasma membrane vesicles. Apparently, these vesicles could be a signal released by the parasite to prepare the host cell for the invasion. This study demonstrated that these vesicles induce a dosisdependent expression of fibronectin, linear over time. The same behavior has not been observed for laminin. Our results also show that lipids from the vesicles are involved in the increase of expression of fibronectin by epithelial cells. The two major surface membrane glycoproteins, Tc85 and mucins, also present in the vesicles do not participate in this phenomenon. Cell cultures that have been treated with lipids extracted from T. cruzi membrane vesicles also provoked a dosis-dependent increase in fibronectin and linear over time

A galectina-1 (Gal-1) é uma proteína que reconhece -galactosídeos e participa de vários processos biológicos, incluindo a modulação da resposta imunológica. Vários relatos da literatura reportam o potencial uso terapêutico da Gal-1 para doenças auto-imunes, inflamatórias, degenerativas e infecciosas. Entretanto, são escassos os relatos sobre o envolvimento da Gal-1 na doença causada por Tripanosoma cruzi. O presente trabalho tem como objetivos o estudo da participação da Gal-1 endógena e exógena na evolução da infecção aguda experimental por T. cruzi. Galectina-1 recombinante, camundongos C57BL/6 deficientes (nocaute - Gal-1-/-) ou não (selvagem - Gal-1+/+) do gene da galectina-1 e macrófagos desses animais foram utilizados em experimentos de infecção in vivo e/ou in vitro. Os animais foram infectados com tripomastigotas de T. cruzi da cepa Y, por via intraperitoneal. Os parâmetros analisados na caracterização do processo de infecção foram: parasitemia e sobrevivência; histopatologia do tecido cardíaco; dosagem de óxido nítrico, pelo método de Griess; imunofenotipagem de leucócitos, por citometria de fluxo; dosagem de citocinas por ELISA e taxa de liberação de parasitas em cultura de macrófagos. Os camundongos Gal-1-/- ou Gal-1+/+ tratados com Gal-1 exógena apresentaram as menores taxas de parasitemia. De modo interessante, todos os camundongos Gal-1-/- sobreviveram à infecção, enquanto que os selvagens apresentaram uma drástica redução de sobrevivência após o desafio com T. cruzi. A ausência da Gal-1 endógena ou o tratamento com a Gal-1 exógena provocou no músculo cardíaco de camundongos infectados uma significativa redução infiltrado inflamatório. As dosagens de citocinas séricas indicaram que animais selvagens infectados e tratados com Gal-1 apresentaram uma diminuição de IFN- em relação aos não tratados. Além disso, soros de animais nocautes infectados apresentaram níveis inferiores de diferentes citocinas (TNF-, IFN- , IL-4, IL-10 e IL-12) em comparação com amostras séricas de animais selvagens infectados. As porcentagens de diferentes tipos de células esplênicas (T, B, macrófagos, NKT e NK) foram, geralmente, maiores em camundongos selvagens do que em nocautes após a infecção por T. cruzi. Curiosamente, na cavidade peritoneal de camundongos Gal-1-/- ocorreu um aumento de neutrófilos e macrófagos após 12h ou 24h da infecção, respectivamente. O pico de produção de NO induzido por T. cruzi em macrófagos Gal-1-/- foi mais precoce e intenso do que o obtido por macrófagos Gal-1+/+. Além disso, os macrófagos Gal-1-/- liberaram menos parasitas in vitro em comparação como os macrófagos Gal-1+/+. Com base nesse conjunto de resultados sugerimos que a ausência de Gal-1 endógena ou o tratamento de animais com Gal-1 exógena promoveram perfis imunológicos (resposta inata e adaptativa) favorecedores da resolução da infecção experimental aguda por T. cruzi. / Galectin-1 (Gal-1) is a -galactoside-binding protein and participates in several biological processes, including modulation of immune response. In the literature, there are several reports about the potential therapeutic use of Gal-1 for autoimmune diseases, inflammatory, degenerative and infectious diseases. However, there are few reports on the involvement of Gal-1 in disease caused by Trypanosoma cruzi. Thus, this work was conducted to study the participation of endogenous and exogenous Gal-1 in acute experimental infection by T. cruzi. Recombinant Gal-1, galectin-1-deficient mice (KO - Gal-1-/-) or wild type (WT - Gal-1+/+) mice and macrophages from these animals were used to perform the in vivo and in vitro assays. The animals were infected with trypomastigotes of T. cruzi (strain Y), intraperitoneally. The biological parameters analyzed were parasitemia and survival; histopathology of heart tissue, measurement of nitric oxide by Griess reaction; leukocyte immunophenotyping by flow cytometry; cytokine detection by ELISA and the release rate of parasites in cultured macrophages. Infected-Gal-1-/- mice or infected-Gal-1+/+ mice treated with Gal-1 showed the lowest levels of parasitemia. Interestingly, all infected-KO mice survived after the infection, whereas the infected-WT mice showed a drastic reduction in survival. The absence of endogenous Gal-1 or the exogenous Gal-1 treatment promoted a drastic reduction on inflammatory cells infiltrate in the cardiac muscle of infected mice. The sera of infected-WT mice treated with Gal-1, but not untreated animals, showed high levels of IFN-. Additionally, sera from infected-KO mice showed lower levels of different cytokines (TNF-, IFN-, IL-4, IL-10 and IL-12) compared with serum samples from infected-WT animals. The number of spleen cells (T, B cells, macrophages, NK and NKT) were generally higher in WT mice than in KO mice after infection with T. cruzi. Interestingly, the peritoneal cavity of infected-KO mice presented an increased numbers of neutrophils and macrophages after 12h or 24h of infection, respectively. The peak of NO production induced by T. cruzi in Gal-1-/- macrophages was earlier and more intense than that obtained by Gal-1+/+ macrophage. Furthermore, Gal-1-/- macrophage released fewer parasites in vitro in comparison to Gal-1+/+ macrophages. Taken together, these results suggest that the absence of endogenous Gal-1 or treatment with exogenous Gal-1 promoted immunological profiles (innate and adaptative responses) that cooperate to the resolution of acute experimental infection by T. cruzi

O comportamento do óxido nítrico (NO) em sistemas biológicos vem sendo explorado desde a descoberta de sua importância em processos regulatórios, fisiológicos e em patologias. Atualmente há o grande interesse no desenvolvimento de compostos que possam liberar o NO de forma controlada em locais específicos nas células. Neste contexto, os complexos rutênio-nitrosilos têm se mostrado bastante promissores, visto que podem liberar NO no interior celular por processos redutimétricos, viabilizando sua utilização como agentes antitumorais e/ou tripanocida. Este estudo se baseia na premissa de que a liberação de NO pode ser direcionada para o interior celular através da modulação dos ligantes de forma a obter complexos biocompatíveis. Assim, o presente trabalho visou o delineamento de complexos rutênio-nitrosilos inéditos contendo ligantes polipiridínicos e/ou derivados de aminoácidos e, condução de experimentos a nível biológico. Os novos complexos rutênio-nitrosilos contendo os ligantes 3-etinilpiridina (3-etpy), derivado triazol de lisina e derivado imínico de triptofano foram sintetizados e purificados com êxito. Os ligantes foram caracterizados por RMN de 1H e 13C RMN, HSQC e 1H-1H COSY, espectrometria de massas e espectroscopia no infravermelho. Os complexos foram caracterizados por espectroscopia na região do UV-visível e FTIR, análise elementar, voltametria cíclica e espectrometria de massas. Os complexos foram testados frente a linhagens celulares B16-F10, MCF-7, MDA-MB231 e comparados com os testes em células de mama sadia MCF-10A. Além disso, os complexos foram aplicados a formas amastigotas de Trypanosoma cruzi. Os resultados de viabilidade celular mostraram que os complexos contendo derivado triazol de lisina ocasionam citotoxicidade às células MCF-7, MB-231 e B16-F10. O complexo cis-[Ru(NO)(bpy)2(3-etpy)](PF6)3.2H2O (onde bpy = 2,2\'-bipiridina) apresentou excelente resultado nos testes in vitro e in vivo frente a cepa Tulahuén LacZ e modelo murino, quando da sua associação ao benzonidazol. Os resultados obtidos sugerem possíveis relações existentes entre estrutura-atividade, abrindo novos caminhos para a pesquisa na busca pelo entendimento deste sistema, assim como o desenvolvimento de uma nova classe de compostos. / The behavior of nitric oxide (NO) in biological systems has been explored since the discovery of its importance in regulatory, physiological, and pathological processes. Currently, there is a great interest in the development of compounds that can release NO at specific sites inside cells in a controlled manner. In this context, the ruthenium-nitrosyl complexes have shown to be very promising, since they can release NO inside cells by reduction processes, turning possible its aplications as antitumor and/or trypanocides agents. This study is based on the premise that the release of NO can be directed to inside cells by modulating the ligands in order to obtain biocompatible complexes. In this way, the present work aimed at the design of new ruthenium-nitrosyl complexes containing polypyridine ligands and/or amino acid derivatives, and tests of biological activity. The new ruthenium-nitrosyl complexes containing 3-ethynylpyridine, triazole lysine derivative, and tryptophan imino derivative were synthesized and purified successfully. Ligands were characterized by 1H and 13C NMR, HSQC, and COSY, mass spectrometry and infrared spectroscopy. The complexes were characterized by spectroscopy in the UV-visible region and FTIR, elemental analysis, cyclic voltammetry, and mass spectrometry. The complexes were tested against cell lines B16-F10, MCF-7, MDA-MB231 and the normal breast cell model MCF-10A. In addition, the complexes were tested against amastigote forms of Trypanosoma cruzi. Cell viability results showed that triazole derivative-lysine complexes cause cytotoxicity to MCF-7, MB-231, and B16-F10 cells. The cis-[Ru(NO)(bpy)2(3-etpy)](PF6)3.2H2O (where bpy = 2,2\'-bipyridine) complex presented excellent results in vitro and in vivo tests against the Tulahuén LacZ strain and the murine model, respectively, when it was associated with benzonidazole. The results suggest possible relationships between structure and activity, opening new prospectives in the search for understanding this system, as well as the development of a new class of compounds.

Um estudo caso-controle para investigar possíveis fatores de risco associados à infecção pelo Trypanosoma cruzi foi realizado em crianças de zona rural, dos municípios de Posse, Simolândia e Guarani de Goiás, localizados na região nordeste do Estado de Goiás. Os participantes do estudo foram selecionados entre 1.990 crianças de 7 a 12 anos de 60 escolas rurais, mediante triagem sorológica com coleta de sangue em papel de filtro por 3 técnicas: Imunofluorescência Indireta, Hemaglutinação Indireta e ELISA. Cento e quarenta e nove (149) crianças com presença de anticorpos anti-T. cruzi em pelo menos 2 testes realizados em amostras de sangue venoso e uma amostra aleatória de 298 crianças soronegativas para os 3 testes, pareadas por sexo, freqüência de idade e comunidade foram incluídas no estudo, respectivamente como Casos e Controles. As moradias dos casos e controles foram visitadas para obtenção de informações sobre presença de vetores na unidade domiciliar, características do domicílio, da família e do ambiente peridoméstico. Nessa ocasião foram coletadas amostras de sangue dos pais dos participantes do estudo. Casos e controles foram comparados em relação a fatores de risco relativos ao ambiente doméstico, peridoméstico e sorologia dos pais. Um segundo banco de dados foi construído com apenas um participante por moradia, correspondendo a 89 moradias de casos e 278 de controles. O modelo de regressão logística condicional foi empregado para controlar as principais variáveis de confusão. Sensibilidade de variáveis preditoras da casa da criança infectada foi também calculada. Uma associação estatisticamente significante foi encontrada entre criança soropositiva e evidência de vetor, ou seus vestígios, no domicílio. A presença de exúvia foi o maior preditor de criança infectada (OR=3,5; LC95 por cento 2,1-5,8), enquanto a presença de vetor sem detecção de vestígios não esteve associada à criança infectada. A identificação de triatomíneos pelos moradores apresentou OR=7,7 (LC95 por cento 2,3-25,5). A infecção em crianças esteve significativamente associada ao número de pessoas residentes na moradia atual. Uma maior proporção de pessoas soropositivas foi detectada nas casas dos casos quando comparada às casas do grupo controle sugerindo uma possível agregação familiar da soropositividade. Características peridomésticas foram semelhantes entre casos e controles, não havendo diferenças de OR entre os dois grupos. Detectou-se associação significativa entre mãe soropositiva e filho soropositivo (OR=3,6; LC95 por cento 2, 1-6,5), indicando a possibilidade da transmissão congênita ou um potencial efeito prejudicial exercido pela soropositividade de mães de recém-nascidos não infectados congenitamente. Entretanto, a associação entre pai infectado e filho infectado não foi estatisticamente significante (OR=1,6; LC95 por cento 1,0-2,7). O relato de vetores pelos moradores mostrou uma sensibilidade de 97,5 por cento em predizer moradia de criança soropositiva. Os aspectos relativos à aplicação da metodologia caso-controle no estudo da infecção pelo T. cruzi e possíveis medidas de vigilância e controle para a região de estudo são discutidos. / A population-based case-control study was conducted in a rural endemic area under routine vector surveillance with the objective of investigating the role of environmental characteristics, family and household factors regarding the risk of T. cruzi infection in childhood. One thousand nine hundred and ninety schoolchildren, aged 7-12 years, corresponding to 82 per cent of students enrolled in 60 village primary schools in three contiguous rural counties in Northeast Goiás were screened for T. cruzi infection between March and September, 1991. Blood samples collected on filter paper were tested by indirect haemagglutination (IHA), indirect immunofluorescence (IIF) and enzyme immunosorbent assay (ELISA) and further confrrmed by testing venous blood samples. Cases were 149 children out of the 158 (7.9 per cent ) positive children to anti-T. cruzi antibodies by at Ieast two serological tests. For each case, 2 seronegative controls were selected among classmates, matched by age (+I- 1 year) and sex. Socio-economicál and environmental factors possibly associated with the risk of T. cruzi transmission were recorded by interviewing parents of cases and controls. Domestic and peridomestic entomological evaluation was done by using pyrethrum às a flushing out agent. A venous blood sample was taken from parents of cases and controls to.be tested for anti-T. cruzi antibodies by the same three techniques. Cases and matched controls were compared regarding three groups of variables: parents\' serology, housing characteristics and peridomestic environment. To control for common exposures among household members and to avoid cluster of seropositive, further analyses were also performed considering only one case and one control per household (89 households of case and 278 households of controls). Conditional logistic regression models (CLR) were used to control for confounding variables and the sensitivity in identifying a house with a positive child was also estimated. Triatomine infestation or evidence of triatomine colonization in the houses were found to be statistically associated to children seropositivity. The presence of exuviae was the strongest predictor of infected children (OR=3.5; 95 per cent CL 2.1-5.8). Parents who reported triatomine bugs inside or outside the house in the last 5 years had odds ratio of 7.7 (95 per cent CL 2.3-25.5) of having an infected child. There was an increased risk of seroreactivity among children associated to the number of family members. Higher proportion of seropositive individuais was found in the household of cases when compared to the household of controls, suggesting familial aggregation. Cases and controls shared similar environmental and peridomestic characteristics. A strong association was found between mother\'s serology and child anti-T. cruzi antibodies (OR=3.6; 95 per cent CL 2.1-6.5) but no statistical association was found between seropositivity of father and child serology (OR=l.6; 95 per cent CL 1.0-2.7). Similar results were obtained after excluding cases and controls living in the same household. The possibility oftransplacental T. cruzi transmission and its implication for Chagas disease control was considered. Among the variables used as predictors of a house with a seropositive child the report of vector presence by householders showed a 97.5 per cent sensitivity. The capture of triatomine vectors in the dwelling was not correlated to a seropositive house. The methodological issues regarding case-control approach in T. cruzi infection and public health interventions for the study area were discussed.

O Trypanosoma cruzi libera para o meio, vesículas contendo material de sua superfície e aparentemente estas vesículas seriam uma maneira de ativar e preparar a célula hospedeira para a invasão, além de induzir um aumento na expressão de alguns componentes da matriz extracelular. Neste trabalho demonstramos que essas vesículas aumentam a expressão de fibronectina na matriz, sendo este aumento dose-dependente e linear ao longo do tempo. Porém, para laminina não conseguimos observar o mesmo comportamento. Nossos resultados também mostram que os constituintes lipídicos das vesículas podem ser os responsáveis pelo aumento da expressão de fibronectina em cultura de células epiteliais. Os dois grandes grupos de glicoproteínas encontradas na superfície do parasita e nas vesículas, mucinas e Tc85 não parecem estar envolvidos no processo. As culturas celulares tratadas com os lipídeos extraídos das vesículas apresentaram um aumento de fibronectina também dose-dependente, porém, com uma resposta linear ao longo do tempo e uma expressão máxima atingida em tempos menores / Trypanosoma cruzi releases to the environment plasma membrane vesicles. Apparently, these vesicles could be a signal released by the parasite to prepare the host cell for the invasion. This study demonstrated that these vesicles induce a dosisdependent expression of fibronectin, linear over time. The same behavior has not been observed for laminin. Our results also show that lipids from the vesicles are involved in the increase of expression of fibronectin by epithelial cells. The two major surface membrane glycoproteins, Tc85 and mucins, also present in the vesicles do not participate in this phenomenon. Cell cultures that have been treated with lipids extracted from T. cruzi membrane vesicles also provoked a dosis-dependent increase in fibronectin and linear over time

Neste trabalho o metilpluviatolido (1), o matairesinol (7), a hinoquinina (11), a cubebina (17) e seus respectivos derivados, providos de algumas modificações estruturais foram submetidos a testes in vitro para a determinação da atividade citotoxica e tripanocida. As substâncias não apresentaram atividade citotoxica significativa para a linhagem celular utilizada (LLC-MK2). Nos ensaios tripanocida in vitro o dimetoximorelensin (8) e 11 foram as substâncias que determinaram as maiores atividades tripanocida sobre as varias formas e cepas de T. cruzi utilizadas e juntamente com a cubebina foram submetidas os ensaios in vivo. As substâncias determinaram alterações significativas no curso da infecção chagásica experimental. No entanto apenas a 8 apresentou efeito semelhante ao do benzonidazol para ambas as cepas, sendo a cepa BOL em relação a cepa Y mais resistente as substâncias 11 e 17. Algumas rotas metabólicas foram avaliadas como mecanismo de ação das substâncias. As substâncias não apresentaram atividade inibitória sobre a enzima gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH) de Trypanosoma cruzi, não induziram a produção de H2O2 e outros peróxidos, bem como não induziram a produção de óxido nítrico, tendo algumas inibindo esta produção. No entanto, apresentaram efeito inibitório sobre a respiração celular e efeito inibitório sobre a enzima ferro superóxido dismutase (Fe-SOD) de Trypanosoma cruzi. Adicionalmente foi demonstrado que em sistema livre de células as substâncias não apresentam atividade scavenger de radicais livres e que o tratamento com a substancia 8, avaliado por microscopia eletrônica, provoca alterações nucleares nas formas epimastigotas do parasita, sugerindo que a atividade tripanocida desta substancia envolva a inibição da síntese de DNA e RNA. Dessa forma, podemos concluir que a atividade tripanocida das varias lignano-lactonas avaliadas é promissora e que a produção de H2O2 e outros peróxidos, atividade inibitória sobre a enzima gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH) de Trypanosoma cruzi, bem como a capacidade de indução de óxido nítrico pelos derivados bioativos são mecanismos que parecem não estar envolvidos na atividade tripanocida das substâncias. Além disso, que o efeito inibitório sobre a respiração celular parece contribuir para a atividade tripanocida e pode estar envolvido no mecanismo de citotoxicidade destas substâncias. Ainda, que o efeito inibitório sobre a enzima ferro superóxido dismutase (Fe- SOD) de Trypanosoma cruzi parece ser um dos principais mecanismos envolvidos na atividade tripanocida das substâncias. / In this work the compounds methylpluviatolide (1), matairesinol (7), hinokinin (11), cubebin (17) and its derivatives bearing some structural modifications were submitted to in vitro trypanocidal and citotoxic assays. The compounds do not show significant citotoxicity for the LLC-MK2 cells used. In the in vitro trypanocidal assays, the compounds more active against the different strains and forms of T. cruzi were the dimethoxymorelensin (8) and hinokinin (11). These compounds and cubebin (17) were submitted to in vivo trypanocidal assay. The compounds display significant modifications on the experimental chagasic infection. However, for both strains, Y and BOL, only the 8 displayed similar effect of the benznidazole. The BOL strain was more resistant than Y strain to treatment with 11 and 17. Some metabolic routes were evaluated as compounds action mechanism. The compounds do not showed inhibitory activity under enzyme glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) of Trypanosoma cruzi, they do not induced the production of H2O2 and others peroxides and also do not induced the nitric oxide production, instead some compounds decrease this production. On the other hand, they showed inhibitory effect under the cellular respiration and the enzyme iron superoxide dismutase (Fe-SOD) of Trypanosoma cruzi. In addition, it was demonstrated that on system cells free, the compounds do not showed free radicals scavenger activity and that the treatment with the compound 8, evaluated in electron microscopy, display nuclear alterations on epimastigotes forms, suggesting an inhibitory effect on T. cruzi DNA and RNA biosynthesis. In conclusion, the compounds trypanocidal activity is promising and the production of H2O2 and others peroxides, the activity under enzyme glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) of Trypanosoma cruzi, and the induction of nitric oxide production seem do not be involved in the trypanocidal and citotoxity activity of these group of compounds. The inhibitory effect under cellular respiration seems to be contributing for trypanocidal activity and may be involved on its citotoxic mechanism. Moreover, the inhibitory effect under the enzyme iron superoxide dismutase (Fe-SOD) of Trypanosoma cruzi seems to be the main mechanism involved on trypanocidal activity of these compounds.